KR20180054857A - 얼리엘라 스카브로사 세포 배양 추출물을 사용하여 피부를 라이트닝하는 방법 및 조성물 - Google Patents

Abstract

얼리엘라 스카브로사(Earliella scabrosa)의 세포 배양 추출물을 포함하는 피부 케어 조성물을 도포하는 단계를 포함하는, 피부를 라이트닝(lightening)하는 조성물 및 방법. 유도제(inducer), 선택된 탄수화물 및 최적의 처리 조건을 사용하는 것을 포함하는 얼리엘라 스카브로사를 배양하는 방법은 세포 배양 추출물의 피부 라이트닝 특성을 증가시킨다.

Description

얼리엘라 스카브로사 세포 배양 추출물을 사용하여 피부를 라이트닝하는 방법 및 조성물

관련 출원과의 상호 참조

본 출원은 2015년 9월 29일자로 출원된 미국 가출원 제62/234,232호; 2015년 9월 29일자로 출원된 미국 가출원 제62/234,239호; 및 2015년 9월 29일자로 출원된 미국 가출원 제62/234,247호의 이득을 주장한다. 전술한 관련 미국 특허 출원들의 완전한 개시 내용이 모든 목적을 위해 본 명세서에 참고로 포함된다.

기술분야

본 발명은 유효량의 얼리엘라 스카브로사(Earliella scabrosa)의 세포 배양 추출물을 사용하여 피부의 라이트닝(lightening)을 포함하는 피부의 외관을 개선하는 국소 조성물에 관한 것이다.

특히 UV 노출 후에, 50%를 초과하는 멜라닌이 피부의 외측 층에 위치하기 때문에, 피부 표면 멜라닌을 변경하는 것이 중요하다. 멜라닌세포에 의해 만들어지는 멜라닌은 멜라닌세포로부터 케라틴세포로 전달되고 표면으로부터 감지되는 피부색에 기여한다. 피부 표면 멜라닌의 광학 특성을 변경함으로써, 피부색의 외관을 변경할 수 있고, 피부톤의 더 신속한 라이트닝을 제공할 수 있고, 피부톤의 편차를 고르게 할 수 있다.

진균 및 세균은 (갈탄(brown coal) 또는 아탄(lignite)으로도 알려진) 저급 석탄(low rank coal)을 공격하여 액화시킬 수 있는 것으로 알려져 있다. 이들 미생물은 석탄을 그들의 탄소원으로 사용할 때 석탄을 그들의 성장 기질로 이용할 수 있으며, 이는 퍼옥시다아제와 같은 효소, 대사산물 및 석탄 구조로부터 착물-형성 금속 이온을 제거하는 천연 킬레이트제의 분비를 통한 석탄의 분해로 이어진다. 석탄 조성물의 일부는, 나무에 강도 및 강성(rigidity)을 부여하는 데 도움이 되는 식물의 세포벽을 구성하는 복합 중합체인 리그닌을 주로 함유하는 식물의 화석화된 잔해이다.

얼리엘라는 폴리포라세아에(Polyporaceae) 과의 나무 분해 거대진균(macrofungi)의 속이다. 이는 단일종 얼리엘라 스카브로사를 포함하는 단형(monotypic) 속이다. 이것은 열대 및 아열대 지방에서 상당히 흔하며, 다양한 속씨식물의 죽은 나무에서 자란다. 이 종은 특성이 다양하므로 몇몇 동의어를 포함한다 (문헌[Sheng-Hua Wu, "Cultural Studies of Four Polypores (Basidiomycotina) Collected in Taiwan", Bulletine of National Museum of Natural Science, No. 8, pp. 65-72, 1996])

미국 특허 제8,956,624호는 트라메테스 베리스콜라(Trametes veriscolor)로부터의 추출물로 피부를 치료하는 조성물 및 방법을 개시한다. 미국 특허 제8,691,194호는 파네로카에테 크리소스포리움(Phanerochaete chrysosporium)으로부터 유도되는 리그닌 퍼옥시다아제의 제조 방법 및 피부 및 모발 라이트닝에서의 그의 용도를 개시한다. 미국 특허 제7,291,340호는 엑소피알라 몬소니(Exophiala monsonii)로부터 유도되는 멜라닌 분해 추출물을 개시한다. 미국 특허 제6,514,506호는 아스페르길루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus)로부터의 효소를 함유하는 미백(whitening) 조성물을 교시한다. 미국 특허 제5,578,296호는 바시디오마이세테스(Basidiomycetes)의 배양물을 사용하는 멜라닌의 분해를 개시한다.

반점을 교정하기 위해 미국에서 판매되어 온 몇몇 구매가능한 화장품이 있는데, 이들은 진균 또는 효모 추출물을 포함한다. 이러한 제품에는 라콤 블랑 엑스퍼트 멜라노라이저 III™ 인테그랄 화이트니스 스팟 이레이저(Lacome Blanc Expert Melanolyser III™ Integral Whiteness Spot Eraser), 클리니크 더마 화이트 클리니칼 브라이트닝 에센스(Clinique Derma White Clinical Brightening Essence) 및 에스티 로더 사이버화이트 이엑스 어드밴스드 퍼포먼스 브라이트닝 에센스(Estee Lauder Cyberwhite EX Advanced Performance Brightening Essence)가 포함된다.

본 발명은 백색 부후균(white rot fungi)의 부류인 얼리엘라 스카브로사가 멜라닌분해 효소(melanolytic enzyme)를 분비할 수 있다는 발견과 관련이 있다. 이러한 효소는 피부 라이트닝에 사용되는 피부 케어 조성물 내에 혼입될 수 있다. 추가적으로, 본 발명은 배양물의 피부 라이트닝 특성을 최대화하도록 진균을 배양하는 방법에 관한 것이다.

더 간결한 설명을 제공하기 위해서, 본 명세서에 주어진 정량적인 표현들 중 일부는 용어 "약"으로 수식되지 않는다. 용어 "약"이 명시적으로 사용되든 아니든, 본 명세서에서 주어진 모든 양은 실제 주어진 값을 지칭하고자 하는 것이며, 또한 그러한 주어진 값에 대한 실험 및/또는 측정 조건으로 인한 근사치를 포함하는, 본 기술 분야의 통상의 기술에 기반하여 합리적으로 추정될 그러한 주어진 값에 대한 근사치를 지칭하고자 하는 것임이 이해된다.

더 간결한 설명을 제공하기 위하여, 본 명세서에서의 정량적 표현들 중 일부는 대략 X의 양 내지 대략 Y의 양의 범위로서 언급된다. 범위가 언급되는 경우, 그 범위는 언급된 상한치 및 하한치에 제한되지 않으며, 오히려 대략 X의 양 내지 대략 Y의 양의 전체 범위, 또는 그 범위 내의 임의의 양 또는 범위를 포함하는 것으로 이해된다.

달리 기술되지 않는 한, 본 명세서에 열거된 모든 백분율은 조성물의 총 중량을 기준으로 한 중량 백분율이다.

본 발명은, 라이트닝을 필요로 하는 인간 피부에, 화장용으로 허용가능한 담체 및 피부 라이트닝 유효량의 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 조성물을 도포함으로써 피부를 라이트닝하는 방법에 관한 것이다. 피부 라이트닝을 필요로 하는 인간 피부에는 UV에 의해 다크닝된(darkened) 피부, 고르지 않은 피부톤을 갖는 피부, 하나 이상의 색소반(pigmented spot), 멜라닌 반점(melanin spot), 검버섯(age spot), 일광 반점(sun spot), 노인성 흑자(senile lentigo), 주근깨, 단순 흑자, 색소성 일광 각화증(pigmented solar keratosis), 지루성 각화증, 기미, 여드름 자국, 및 이들의 조합을 갖는 피부가 포함될 수 있다. 본 방법에 사용되는 조성물은 약 0.0001 중량% 내지 약 40 중량% 또는 0.01 중량% 내지 약 25 중량% 또는 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%의 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함할 수 있다. 본 방법에 사용되는 조성물은 용액, 현탁액, 로션, 크림, 세럼, 젤, 스틱, 스프레이, 연고, 액상 워시(liquid wash), 비누 바(soap bar), 샴푸, 헤어 컨디셔너, 페이스트, 폼(foam), 파우더(powder), 무스, 면도 크림, 하이드로젤 또는 필름-형성 제품의 형태일 수 있다.

조성물을 피부에 도포하는 단계는 조성물을 기재(substrate)로부터 피부로 전달하는 것을 포함할 수 있다. 기재는 와이프(wipe) 또는 페이셜 마스크(facial mask)일 수 있다. 본 방법에 사용되는 조성물은 부가적인 피부 라이트닝 활성제를 포함할 수 있다. 조성물을 피부에 도포하는 방법은 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 갖는 조성물을 1일 1회 또는 2회 도포하는 단계를 포함할 수 있다. 사용되는 조성물은 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 둘 이상의 상이한 조성물일 수 있다. 둘 이상의 상이한 조성물은 독립적으로 로션, 클렌저, 마스크, 에센스, 와이프, 크림, 세럼, 및 젤일 수 있다.

본 방법에 사용되는 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 500 내지 약 2000 U/ml 또는 약 600 내지 약 1800 U/ml 또는 약 1000 내지 약 1800 U/ml일 수 있다.

본 발명의 다른 태양은, 수성 액체 배양 배지 중에서 얼리엘라 스카브로사를 배양하는 방법을 포함하며, 이 방법은 액체 배양 배지를 얼리엘라 스카브로사로 접종하는 단계, 및 액체 배양 배지를 약 10 g/ml 내지 약 2000 g/ml의 양의 유도제(inducer)와 혼합하는 단계를 포함한다. 유도제는 합성 멜라닌, 세피아 멜라닌(sepia melanin), 3,4-다이메톡시벤질 알코올, 리그닌, 벤질 알코올, 신남산, 구아이아콜(guaiacol), 메틸 살리실레이트, 벤젠다이올, 벤조퀴논, 갈산, 살리실산, 유제놀, 카페산, 자일레놀 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 유도제는 약 30 mg/ml 내지 약 1000 mg/ml, 또는 약 200 mg/ml 내지 약 400 mg/ml 또는 약 245 mg/ml 내지 약 350 mg/ml의 양으로 사용될 수 있다.

배양 방법은, 액체 배양 배지의 pH를 약 5 내지 약 6으로 유지하는 단계를 또한 포함할 수 있다. 추가적으로, 배양 방법은 액체 배양 배지에 질소원을 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 질소원은 쌀겨, 밀겨, 질산암모늄, 효모 추출물 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 질소원은 배양 배지에 약 0.1 g/L 내지 약 25 g/L 또는 약 0.2 g/l 내지 약 20 g/L 또는 약 5 g/L 내지 약 20 g/L의 양으로 첨가된다.

배양 방법은 액체 배양 배지를 인큐베이터 진탕기로 약 100 rpm의 속도에서 교반하는 단계를 또한 포함할 수 있다. 본 방법은 액체 배양 배지에 탄소원을 첨가하는 단계를 또한 포함할 수 있다. 탄소원은 글루코스, 덱스트로스 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 액체 배양 배지에 첨가되는 탄소원의 양은 약 2.0 g/L 내지 약 20 g/L 또는 약 5.0 g/L 내지 약 15 g/L 또는 약 5 g/L 내지 약 10 g/L이다. 배양 방법은 액체 배양 배지를 메시 스크린(mesh screen)으로 여과하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 태양은 화장용으로 허용가능한 담체 및 인간 피부를 라이트닝하기에 효과적인 양의 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 피부 케어 조성물이다. 이 조성물은 약 0.0001 중량% 내지 약 40 중량% 또는 약 0.01 중량% 내지 약 25 또는 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%의 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함할 수 있다. 피부 케어 조성물은 제2 피부 라이트닝제를 포함할 수 있다.

도 1은 멜라닌 탈색 효과를 나타내는 얼리엘라 스카브로사의 MY993 균주와 함께 배양된 일련의 멜라닌 한천 플레이트의 사진이다.
도 2는 멜라닌을 탈색시키지 않은 백색 부후균 균주와 함께 배양된 일련의 멜라닌 한천 플레이트의 사진이다.
도 3은 얼리엘라 스카브로사 배양 추출물 (MY993)이 색소침착을 감소시켰음을 나타내는 멜라노덤(Melanoderm) 3D 피부 등가 모델의 사진이다.

세포 배양 추출물

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "세포 배양 추출물"은 세포 배양 과정 후에 미생물의 세포 배양물로부터 생성되는 물질을 의미한다. 추출물은 원심분리된 액체 배지로부터 제조될 수 있다. 이어서 상청액을 여과한다. 필터를 통과한 물질이 세포 배양 추출물이다. 이것은 세포 배양 여액(cell culture filtrate)으로도 알려져 있다.

본 발명은 진균을 배양하여 생성되는 세포 배양 추출물에 관한 것이다. 더욱 특히, 세포 배양 추출물은 얼리엘라 스카브로사의 배양물로부터 제조된다. 더욱 더 특히, 세포 배양 추출물은 얼리엘라 스카브로사 MY993 또는 MY261의 배양물로부터 제조된다. 진균 균주 MY993 및 MY261은 태국에서 발견되었으며, 2006년에 국립 유전공학 및 생명공학 센터(national center for genetic engineering and biotechnology; BIOTEC)의 연구자에 의해 처음 단리되었다. 그 결과로, 두 진균은 형태학-기반 방법에 의해 얼리엘라 스카브로사로 확인되었고, 후속하여 태국 12120 파툼타니 클롱루앙 클롱 1 파홀리오틴 로드 타일랜드 사이언스 파크 소재의 태국 생물자원 연구 센터(Thailand Bioresource Research Center; TBRC)에 각각 지정 TBRC 번호 2014 및 2015로 수탁되었다. 진균 균주 MY993 (TRBC 2014) 및 MY261 (TBRC 2015)은 부다페스트 조약에 따라 2016년 8월 18일자로 독일 소재의 도이치 잠룽 폰 미크로오가니즈멘 운트 젤쿨투렌 게엠베하(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ)에 수탁되었고, 각각 번호 DSM 32358 및 DSM 32359가 주어졌다.

본 발명에 따른 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 500 내지 약 2000 U/ml, 더욱 특히 약 600 내지 약 1800 U/ml, 더욱 더 특히 약 1000 내지 약 1750 U/ml이다. U/ml은 실시예 3에 상세하게 설명된 멜라닌 분해 분석에 기재된 바와 같이 추출물 1 ml당 멜라닌 분해 효소의 유닛(unit)을 의미한다.

피부 라이트닝 방법

본 발명은 라이트닝을 필요로 하는 피부에 소정 진균의 세포 배양 추출물을 포함하는 조성물을 도포함으로써 피부를 라이트닝하는 방법에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명은 라이트닝을 필요로 하는 피부에 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 조성물을 도포함으로써 피부를 라이트닝하는 방법에 관한 것이다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "피부 라이트닝"은 일반적으로 피부톤, 피부색, 및/또는 피부 음영을 라이트닝하고/하거나, 환하게 하고/하거나(brightening), 미백하고/하거나, 고르게 하고/하거나, 누르스름함(sallowness)을 감소시키고/시키거나, 색소반, 멜라닌 반점, 검버섯, 일광 반점, 노인성 흑자, 주근깨, 단순 흑자, 색소성 일광 각화증, 지루성 각화증, 기미, 여드름 자국, 염증후 과색소침착, 흑자, 모반, 이들의 둘 이상의 조합 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 과색소침착된 자국 및/또는 병변을 라이트닝하고/하거나 페이딩(fading)하는 것을 말한다. 소정 실시 형태에서, "피부 라이트닝"은 또한 피부 광채(radiance), 홍조(glow), 반투명성 및/또는 발광(luminescence)의 증가, 및/또는 더욱 광채가 나거나, 홍조를 띄거나, 반투명하거나 빛이 나는 피부톤 외관 또는 덜 노랗거나 누르스름한 피부톤을 얻는 것을 말한다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, "피부 라이트닝"은 피부톤을 라이트닝하고 고르게 하고, 피부 광채를 증가시키고/증가시키거나 검버섯을 라이트닝하는 것을 말한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "피부 라이트닝 치료를 필요로 하는 피부"는 일반적으로 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 특성을 나타내는 피부를 말한다: 본 명세서에 참고로 포함되고 하기에 추가로 기재된, 2007년에 출간된 문헌[the Colipa Guideline: Guideline For The Colorimetric Determination Of Skin Colour Typing And Prediction Of The Minimal Erythemal Dose (Med) Without Uv Exposure]에 따라 결정되는 바와 같이, 41 미만의 측정된 개인 타이폴로지 앵글(Individual Typology Angle; ITA) 값을 갖는 피부, UV에 의해 다크닝된 피부를 포함하는 다크닝되고/되거나 누르스름한 피부, 고르지 않은 피부톤을 갖는 피부, 또는 색소반, 멜라닌 반점, 검버섯, 일광 반점, 노인성 흑자, 주근깨, 단순 흑자, 색소성 일광 각화증, 지루성 각화증, 기미, 여드름 자국, 염증후 과색소침착, 흑자, 모반, 이들의 둘 이상의 조합을 포함하지만 이로 한정되지 않는 하나 이상의 과색소침착된 자국 및/또는 병변을 갖는 피부 등. COLIPA 가이드라인에서, 피부색은 하기와 같이 ITA 값의 함수로서 정의된다: 매우 밝은 피부: 55 초과; 밝은 피부: 41 내지 55, 중간: 28 내지 41, 및 황갈색 피부: 28 미만. 소정의 바람직한 실시 형태에서, "피부 라이트닝을 필요로 하는 피부"는 ITA 값이 41 미만, 예를 들어 약 40 이하, 약 35 이하, 약 30 이하이거나, 더욱 바람직하게는 약 28 이하인 피부를 가진 개인을 말한다. 소정의 다른 바람직한 실시 형태에서, 본 발명은 누르스름한 피부 및/또는 다크닝된 피부로부터 선택되는 피부 라이트닝 치료를 필요로 하는 피부에 사용하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 소정의 다른 바람직한 실시 형태에서, 본 발명은 검버섯, 주근깨, 여드름 후에 남겨지는 자국, 및 이들의 둘 이상의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 피부 라이트닝 치료를 필요로 하는 피부에 사용하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "노화 징후의 개선을 필요로 하는 피부"는 처진 피부, 느슨해진 피부, 이완된 피부, 거친 피부, 주름진 피부, 얇아진 피부 및 고르지 않은 피부이지만 이에 한정되지 않는 피부를 의미한다. 노화 징후의 개선은 피부 견고성(firmness)의 개선, 피부 결의 개선, 피부에서의 주름살 출현의 개선, 피부톤 개선, 또는 피부에서의 외부 공격(external aggression)의 치료를 의미한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "피부톤의 개선"은 피부 외관의 라이트닝 (예를 들어, 색소침착된 자국 또는 병변의 라이트닝, 피부의 누르스름함의 감소, 및/또는 피부색을 고르게 함)을 의미한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "화장용으로/피부학적으로 허용가능한"은 과도한 독성, 불상용성, 불안정성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 조직 (예를 들어, 피부 또는 모발)과 접촉하여 사용하기에 적합함을 의미한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "안전하고 유효한 양"은 원하는 효과를 유발하기에 충분하지만 세포독성 등을 포함하는 심각한 부작용을 피하기에 충분히 낮은 추출물의 양 또는 조성물의 양을 의미한다. 화합물, 추출물, 또는 조성물의 안전하고 유효한 양은, 예를 들어 최종 사용자의 연령, 건강 및 환경적인 노출, 치료의 지속시간 및 유형, 사용되는 특정 추출물, 성분 또는 조성물, 이용되는 특정한 약학적으로 허용가능한 담체, 및 유사한 요인에 따라 달라질 것이다.

화합물, 추출물, 또는 조성물의 안전하고 유효한 양은, 예를 들어 최종 사용자의 연령, 건강 및 환경적인 노출, 치료의 지속시간 및 유형, 사용되는 특정 추출물, 성분 또는 조성물, 이용되는 특정한 약학적으로 허용가능한 담체, 및 유사한 요인에 따라 달라질 것이다.

조성물의 피부 라이트닝 용도를 포함하는 실시 형태에 있어서, "피부 라이트닝 유효량"은 하기에 기재된 바와 같은 피부 라이트닝 시험 (ΔL)으로서 피부 표피 등가물 모델(Skin Epidermal Equivalents Model)에 있어서 0보다 큰 ΔL 값을 성취하기에 효과적인 추출물의 양을 의미한다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 피부 라이트닝 유효량은 약 1 이상의 ΔL 값을 성취하기에 효과적인 양이다.

피부를 라이트닝하는 방법에 사용되는 피부 케어 조성물 내의 세포 배양 추출물의 양은 피부 케어 조성물의 약 0.001 내지 약 40 중량%로 다양할 것이다. 더욱 특히, 그 양은 피부 케어 조성물의 약 0.01 내지 약 25 중량%일 것이다. 더욱 더 특히, 그 양은 피부 케어 조성물의 약 0.1 내지 약 10 중량%일 것이다.

피부 케어 조성물

본 발명은 얼리엘라 스카브로사 세포 배양 추출물 및 담체를 함유하는 피부 케어 조성물에 관한 것이다. 얼리엘라 스카브로사 세포 배양 추출물은 피부를 라이트닝하기에 충분한 양으로 피부 케어 조성물에 존재한다. 임의의 적합한 담체가 본 발명에 따른 피부 케어 조성물에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 담체는 화장용으로 허용가능한 담체이다. 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 화장용으로 허용가능한 담체는 과도한 독성, 불상용성, 불안정성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 신체, 특히 피부와 접촉하여 사용하기에 적합한 담체를 포함한다. 담체의 안전하고 유효한 양은 조성물의 중량을 기준으로 약 50% 내지 약 99.999%, 바람직하게는 약 80% 내지 약 99.9%, 더욱 바람직하게는 약 99.9% 내지 약 95%, 가장 바람직하게는 약 98% 내지 약 99.8%이다.

담체는 매우 다양한 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, 수중유, 유중수, 수중유중수 및 실리콘중수중유 에멀전을 포함하지만 이로 한정되지 않는 에멀전 형태의 담체가 본 발명에서 유용하다. 이러한 에멀전은, 예를 들어 약 100 cP 내지 약 200,000 cP의 넓은 점도 범위를 포함할 수 있다.

적합한 화장용으로 허용가능한 담체의 예에는 화장용 용액, 현탁액, 로션, 크림, 세럼, 에센스, 젤, 토너, 스틱, 스프레이, 연고, 액상 워시 및 비누 바, 샴푸, 헤어 컨디셔너, 페이스트, 폼, 무스, 파우더, 면도 크림, 와이프, 패치, 스트립, 전동 패치(powered patch), 미세바늘 패치(micro-needle patch), 붕대, 하이드로젤, 필름-형성 제품, 페이셜 및 스킨 마스크, 메이크업, 점적액(liquid drop), 화장용 필름 등을 위한 화장용으로 허용가능한 용매 및 물질이 포함된다. 이들 제품 유형은 용액, 현탁액, 에멀전, 예를 들어 마이크로에멀전 및 나노에멀전, 젤, 고체, 리포좀, 다른 캡슐화 기술 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 몇몇 유형의 화장용으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.

하기는 담체의 비제한적인 예이다. 다른 담체가 당업자에 의해 제형화될 수 있다. 일 실시 형태에서, 담체는 물을 함유한다. 추가 실시 형태에서, 담체는 또한 하나 이상의 수성 용매 또는 유기 용매를 함유할 수 있다. 유기 용매의 예에는 다이메틸 아이소소르바이드; 아이소프로필미리스테이트; 양이온성, 음이온성 및 비이온성 성질의 계면활성제; 식물유; 광유; 왁스; 검; 합성 및 천연 젤화제; 알칸올; 글리콜; 및 폴리올이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 글리콜의 예에는 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 펜탈렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 다이에틸렌 글리콜, 트라이에틸렌 글리콜, 카프릴 글리콜, 글리세롤, 부탄다이올 및 헥산트라이올, 및 이들의 공중합체 또는 혼합물이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 알칸올의 예에는 약 2개의 탄소 원자 내지 약 12개의 탄소 원자 (예를 들어, 약 2개의 탄소 원자 내지 약 4개의 탄소 원자)를 갖는 것들, 예를 들어 아이소프로판올 및 에탄올이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 폴리올의 예에는 약 2개의 탄소 원자 내지 약 15개의 탄소 원자 (예를 들어, 약 2개의 탄소 원자 내지 약 10개의 탄소 원자)를 갖는 것들, 예를 들어 프로필렌 글리콜이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 유기 용매는 담체의 총 중량을 기준으로 약 1% 내지 약 99.99% (예를 들어, 약 20% 내지 약 50%)의 양으로 담체에 존재할 수 있다. 물은 담체의 총 중량을 기준으로 약 5% 내지 약 95% (예를 들어, 약 50% 내지 약 90%)의 양으로 (사용 전에) 담체에 존재할 수 있다. 용액은 약 40 내지 약 99.99%를 포함하는 임의의 적합한 양의 용매를 함유할 수 있다. 소정의 바람직한 용액은 약 50 내지 약 99.9%, 약 60 내지 약 99%, 약 70 내지 약 99%, 약 80 내지 약 99%, 또는 약 90 내지 99%의 용매를 함유한다.

그러한 용액으로부터 로션이 제조될 수 있다. 로션은 전형적으로 용매 이외에 하나 이상의 연화제를 함유한다. 로션은 약 1% 내지 약 20% (예를 들어, 약 5% 내지 약 10%)의 연화제(들) 및 약 50% 내지 약 90% (예를 들어, 약 60% 내지 약 80%)의 물을 포함할 수 있다.

용액으로부터 제형화될 수 있는 다른 유형의 제품은 크림이다. 크림은 전형적으로 약 5% 내지 약 50% (예를 들어, 약 10% 내지 약 20%)의 연화제(들) 및 약 45% 내지 약 85% (예를 들어, 약 50% 내지 약 75%)의 물을 함유한다.

용액으로부터 제형화될 수 있는 또 다른 유형의 제품은 연고이다. 연고는 동물유, 식물유, 합성유 또는 반고체 10 탄화수소의 단순 베이스(simple base)를 함유할 수 있다. 연고는 약 2% 내지 약 10%의 연화제(들) + 약 0.1% 내지 약 2%의 증점제(들)를 함유할 수 있다.

본 발명에 유용한 조성물은 또한 에멀전으로 제형화될 수 있다. 담체가 에멀전일 경우, 담체의 약 1% 내지 약 10% (예를 들어, 약 2% 내지 약 5%)가 유화제(들)를 함유한다. 유화제는 비이온성, 음이온성 또는 양이온성일 수 있다.

로션 및 크림은 에멀전으로서 제형화될 수 있다. 전형적으로, 그러한 로션은 0.5% 내지 약 5%의 유화제(들)를 함유하는 반면, 그러한 크림은 전형적으로 약 1% 내지 약 20% (예를 들어, 약 5% 내지 약 10%)의 연화제(들); 약 20% 내지 약 80% (예를 들어, 30% 내지 약 70%)의 물; 및 약 1% 내지 약 10% (예를 들어, 약 2% 내지 약 5%)의 유화제(들)를 함유할 것이다.

단일 에멀전 피부 케어 제제, 예를 들어 수중유 유형 및 유중수 유형의 로션 및 크림은 당업계에 잘 알려져 있으며, 본 발명에 유용하다. 다상(multiphase) 에멀전 조성물, 예를 들어 수중유중수 유형 또는 유중수중유 유형이 또한 본 발명에 유용하다. 일반적으로, 그러한 단일 또는 다상 에멀전은 물, 연화제 및 유화제를 필수 성분으로서 함유한다.

본 발명의 조성물은 또한 젤로서 (예를 들어, 적합한 젤화제(들)를 사용하여 수성, 알코올, 알코올/물 또는 오일 젤로서) 제형화될 수 있다. 수성 및/또는 알코올성 젤에 적합한 젤화제에는 천연 검, 아크릴산 및 아크릴레이트 중합체 및 공중합체, 및 셀룰로오스 유도체 (예를 들어, 하이드록시메틸 셀룰로오스 및 하이드록시프로필 셀룰로오스)가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 오일 (예를 들어, 광유)용으로 적합한 젤화제에는 수소화 부틸렌/에틸렌/스티렌 공중합체 및 수소화 에틸렌/프로필렌/스티렌 공중합체가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 그러한 젤은 전형적으로 약 0.1 중량% 내지 5 중량%의 그러한 젤화제를 함유한다.

본 발명의 조성물은 또한 고체 제형 (예를 들어, 왁스-기재 스틱, 비누 바 조성물, 파우더, 또는 와이프)으로 제형화될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 고체, 반고체, 또는 용해성 기재 (예를 들어, 와이프, 마스크, 패드, 글러브(glove), 또는 스트립)와 조합될 수 있다.

본 발명의 조성물은 임의의 다양한 부가적인 화장용 활성제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 부가적인 활성제의 예에는 피부 라이트닝제, 다크닝제, 부가적인 노화방지제, 트로포엘라스틴 촉진제, 콜라겐 촉진제, 항여드름제, 광택 제어제(shine control agent), 항미생물제, 예를 들어 항효모제, 항진균제, 및 항균제, 항염증제, 항기생충제, 외용 진통제, 썬스크린, 광차단제, 항산화제, 각질용해제, 세제/계면활성제, 보습제, 영양제, 비타민, 에너지 증강제, 발한방지제, 수렴제, 탈취제, 제모제, 모발 성장 증강제, 모발 성장 지연제, 퍼밍제(firming agent), 수화 증진제(hydration booster), 효능 증진제, 굳은살 방지제(anti-callous agent), 피부 컨디셔닝제, 항셀룰라이트제, 냄새 제어제, 예를 들어 냄새 차폐제 또는 pH 변경제 등이 포함된다.

다양한 적합한 부가적인 화장용으로 허용가능한 활성제의 예에는 하이드록시산; 벤조일 퍼옥사이드; D-판테놀; 아보벤존 (파르솔(Parsol) 1789), 비스다이설리졸 다이소듐 (네오 헬리오판(Neo Heliopan) AP), 다이에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트 (우비눌(Uvinul) A 플러스), 에캄술 (멕소릴(Mexoryl) SX), 메틸 안트라닐레이트, 4-아미노벤조산 (PABA), 시녹세이트, 에틸헥실 트라이아존 (우비눌 T 150), 호모살레이트, 4-메틸벤질리덴 캠퍼 (파르솔 5000), 옥틸 메톡시신나메이트 (옥티녹세이트(Octinoxate)), 옥틸 살리실레이트 (옥티살레이트(Octisalate)), 파디메이트 O (에스칼롤(Escalol) 507), 페닐벤즈이미다졸 설폰산 (엔설리졸(Ensulizole)), 폴리실리콘-15 (파르솔 SLX), 트롤라민 살리실레이트, 베모트라이지놀 (티노소르브(Tinosorb) S), 벤조페논 1―12, 다이옥시벤존, 드로메트라이졸 트라이실록산 (멕소릴 XL), 이스코트라이지놀 (우바소르브(Uvasorb) HEB), 옥토크릴렌, 옥시벤존 (에우솔렉스(Eusolex) 4360), 설리소벤존, 비소크트라이졸 (티노소르브 M), 이산화티타늄, 산화아연과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 UV 필터; 카로티노이드; 자유 라디칼 제거제; 스핀 트랩(spin trap); 레티노이드 및 레티노이드 전구체, 예를 들어 30 레티놀, 레티노산 및 레티닐 팔미테이트; 세라마이드; 다중불포화 지방산; 필수 지방산; 효소; 효소 억제제; 효소 매개체, 예를 들어 2,2-아지노비스 (3-에틸벤조티아졸린-6-설포네이트) 다이암모늄 염 (ABTS) 및 바닐린; 미네랄; 호르몬, 예를 들어 에스트로겐; 스테로이드, 예를 들어 하이드로코르티손; 2-다이메틸아미노에탄올; 구리 염, 예를 들어 염화구리; 구리 함유 펩타이드, 예를 들어, Cu:Gly-His-Lys, 코엔자임 Q10; 아미노산, 예를 들어 프롤린; 비타민; 락토비온산; 아세틸-코엔자임 A; 나이아신; 리보플라빈; 티아민; 리보스; 전자 수송물질(electron transporter), 예를 들어 NADH 및 FADH2; 및 다른 식물성 추출물, 예를 들어, 귀리, 알로에 베라, 피버퓨(Feverfew), 대두, 표고 버섯 추출물, 및 이들의 유도체 및 혼합물이 포함된다.

소정의 바람직한 실시 형태에서, 피부 케어 조성물은 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물 및 하나 이상의 부가적인 피부 보습 활성제를 포함한다. 부가적인 피부 보습제의 예에는 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 펜탈렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 다이에틸렌 글리콜, 트라이에틸렌 글리콜, 카프릴 글리콜, 글리세롤, 부탄다이올 및 헥산트라이올, 또는 이들의 혼합물이 포함된다.

소정의 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물 및 노화 징후를 개선하는 하나 이상의 부가적인 제제를 포함하는 피부 케어 조성물이다. 노화 징후를 개선하는 적합한 부가적인 제제의 예에는 트로포엘라스틴 촉진제, 콜라겐 촉진제, 레티노이드, 하이알루론산, 다이메틸아미노에탄올, N,N,N',N'-테트라키스(2-하이드록시프로필)에틸렌다이아민, 알파 하이드록스산, 폴리하이드록시산, 및 이들의 둘 이상의 조합이 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "트로포엘라스틴 촉진제"는 트로포엘라스틴의 생성을 향상시키는 생물학적 활성을 보유한 화합물 부류를 말한다. 본 발명에 따른 트로포엘라스틴 촉진제는 인체에서 트로포엘라스틴의 생성을 향상시킬 수 있는 모든 천연 또는 합성 화합물을 포함한다.

적합한 트로포엘라스틴 촉진제의 예에는 블랙베리 추출물, 코티너스(cotinus) 추출물, 피버퓨 추출물, 필란투스 니루리(Phyllanthus niruri) 추출물, 및 구리 및/또는 아연 구성성분을 갖는 2금속 착물이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 구리 및/또는 아연 구성성분을 갖는 2금속 착물은, 예를 들어 구리-아연 시트레이트, 구리-아연 옥살레이트, 구리-아연 타르타레이트, 구리-아연 말레이트, 구리-아연 석시네이트, 구리-아연 말로네이트, 구리-아연 말레에이트, 구리-아연 아스파르테이트, 구리-아연 글루타메이트, 구리-아연 글루타레이트, 구리-아연 푸마레이트, 구리-아연 글루카레이트, 구리-아연 폴리아크릴산, 구리-아연 아디페이트, 구리-아연 피멜레이트, 구리-아연 수베레이트, 구리-아연 아질레이트, 구리-아연 세바케이트, 구리-아연 도데카노에이트, 또는 이들의 조합일 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 트로포엘라스틴 촉진제는 블랙베리 추출물, 코티너스 추출물, 피버퓨 추출물, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 특히 바람직한 실시 형태에서, 트로포엘라스틴 촉진제는 블랙베리 추출물, 피버퓨 추출물, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

"코티너스 추출물"은 "코티너스 코기그리아(Cotinus coggygria)"의 잎의 추출물, 예를 들어, 불가리아 소피아 소재의 빌코쿠프(Bilkokoop)로부터 입수가능한 이의 물 추출물을 의미한다.

"블랙베리 추출물"은 루부스(Rubus) 속의 식물, 바람직하게는 루부스 프루티코수스(Rubus fruticosus)로부터 단리된 화합물들의 블렌드를 의미한다. 일 실시 형태에서, 화합물은 식물의 꽃으로부터 단리된다. 추가 실시 형태에서, 화합물은 식물의 건조된 꽃으로부터 단리된다. 그러한 화합물은 식물의 하나 이상의 부분 (예를 들어, 전체 식물, 식물의 꽃, 종자, 뿌리, 근경, 줄기, 열매 및/또는 잎)으로부터 단리될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 블랙베리 추출물은 블랙베리 잎 추출물이다. 하나의 특히 적합한 블랙베리 추출물은 루부스 프루티코수스의 잎을 물과 에탄올의 혼합물로 추출하여 제조되며, 말토덱스트린 매트릭스와 약 5% 내지 약 10%의 활성으로 배합되고, 미국 뉴저지주 테테르보로 소재의 심라이즈 인크.(Symrise Inc.)로부터 구매가능하며, 명칭 "심매트릭스"(SymMatrix)로 판매된다.

"필란투스 니루리"의 추출물은 전체 식물로서 수확 및 사용될 수 있거나, 또는 선택적으로 식물의 하나 이상의 부분 (예를 들어, 식물의 꽃, 종자, 뿌리, 근경, 줄기, 열매 및/또는 잎)이 사용될 수 있다. 필란투스 니루리 식물 또는 이의 부분은, 예를 들어 분쇄 또는 밀링(milling)에 의해 분말로 미분될 수 있다. 적합한 밀링된 형태의 필란투스 니루리는 미국 네바다주 카슨 시티 소재의 레인트리 뉴트리션, 인크.(Raintree Nutrition, Inc.)로부터 구매가능하다. 바람직하게는, 필란투스 니루리의 저분자량 분획(fraction), 예를 들어 분자량이 약 100,000 달톤을 초과하는 분자종이 실질적으로 없는 필란투스 니루리의 분획이 사용된다. 바람직하게는, 이러한 저분자량 분획은 필란투스 니루리 식물로부터 물 추출가능하다.

본 발명의 조성물은 상기에 기재된 것들과 같은 하나 이상의 트로포엘라스틴 촉진제를 화장용으로 유효한 양으로 포함할 수 있다. 본 조성물은 바람직하게는, 활성제 기준으로, 약 0.1% 내지 약 10%의 트로포엘라스틴 촉진제, 더욱 바람직하게는 약 0.5% 내지 약 5%의 트로포엘라스틴 촉진제, 그리고 가장 바람직하게는 약 0.5% 내지 약 2%의 트로포엘라스틴 촉진제를 포함한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "콜라겐 촉진제"는 콜라겐의 생성을 향상시키는 생물학적 활성을 보유한 화합물을 말한다. 본 발명에 따른 "비-레티노이드 콜라겐 촉진제"는, 레티노이드가 아니거나 또는 레티노이드로부터 유래되지 않으며 인체에서 콜라겐의 생성을 향상시킬 수 있는 모든 천연 또는 합성 화합물을 포함한다.

적합한 콜라겐 촉진제의 예에는 하기가 포함되지만 이에 한정되지 않는다: 레티놀, 레틴알데하이드, 및 레티노산을 포함하는 레티노이드, 피버퓨 (타나세툼 파르테늄(Tanacetum parthenium))의 추출물, 센텔라 아시아티카(Centella asiatica)의 추출물, 및 시에게스벡키아 오리엔탈리스(Siegesbeckia orientalis)의 추출물; 대두의 추출물; 콜라겐-촉진 펩타이드; 우르솔산; 및 아시아티코사이드.

리유니온 섬(Reunion Island)에서는 바이올렛 마로네(Violette marronne), 인도에서는 고투 콜라(Gotu Kola) 또는 인디언 페니워트(Indian pennywort), 북미에서는 센텔라 레판다(Centella repanda), 그리고 마다가스카에서는 탈라페트라카(Talapetraka)라고도 알려져 있는 센텔라 아시아티카는 다형태 허브(polymorphous herb)이며 움벨리페라에(Umbelliferae) (아피아세아에(Apiaceae)) 과에 속하고, 특히 하이드로코틸레(Hydrocotyle) 아과에 속한다. 이것은 열대지방 전반에 걸쳐 야생에서 자라며, 해발 고도 약 600 내지 1200 미터의 습하고 그늘진 지역을 선호한다. 센텔라 아시아티카는 3가지 변종, 즉 타이피카(Typica), 아비시니카(Abyssinica) 및 플로리다나(Floridana)를 갖는다. 이 허브는 그의 치유, 진정, 진통, 항우울, 항바이러스 및 항미생물 성질에 대해 알려져 있으며 이를 위해 사용된다. 이 허브의 생물학적 활성은 허브 내에 트라이테르펜 분자가 존재하기 때문인 것으로 여겨진다. 센텔라 아시아티카의 적합한 추출물은 스위스 바젤 소재의 바이엘 컨슈머 헬스케어(Bayer Consumer HealthCare)로부터 TECA로 입수가능하다.

"시에게스벡키아 오리엔탈리스의 추출물"은 세더마(Sederma)(미국 뉴저지주 에디슨 소재의 크로다 인터내셔널 그룹(Croda International Group))로부터 입수가능한 다루토사이드(Darutoside)를 포함하는, 식물 시에게스벡키아 오리엔탈리스의 임의의 다양한 추출물을 의미한다.

적합한 콜라겐-촉진 펩타이드에는 하기가 포함된다: 세더마 (미국 뉴저지주 에디슨 소재의 크로다 인터내셔널 그룹)로부터 매트릭실(MATRIXYL)로 입수가능한, 팔미토일 펜타펩타이드, 특히 Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH를 포함하는 마트리킨(matrikine) 펩타이드 (즉, 세포외 기질 단백질 - 콜라겐, 엘라스틴, 또는 프로테오글리칸 - 의 분해로부터 유도된 펩타이드); 미국 펜실베이니아주 몽고메리빌 소재의 포토메덱스(Photomedex)로부터 프로사이트(PROCYTE)로 입수가능한 GHK 구리 펩타이드; 세더마 (미국 뉴저지주 에디슨 소재의 크로다 인터내셔널 그룹)로부터 바이오포엡티드(Biopoeptide) CL로 구매가능한 팔미토일 GHK 펩타이드; 바이오미메틱 테트라펩타이드, 예를 들어 캐나다 퀘백주 소재의 유니펙스(Unipex)로부터 크로놀린 트라이 펩타이드(Chronoline Tri Peptide)로 입수가능한 것들; 및 스위스 바젤 소재의 디에스엠(DSM)으로부터 신-콜(Syn-Coll)로 입수가능한 팔미토일 트라이-펩타이드.

우르솔산은 펜타사이클릭 트라이테르펜산, 프루놀(Prunol), 말롤(Malol), 우르손(Urson), 베타우르솔산 및 3-베타-하이드록시-우르스-12-엔-28-오익 산으로도 알려져 있다. 이것은, 예를 들어 미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터 구매가능하다.

화학적으로 [6-[[3,4-다이하이드록시-6-(하이드록시메틸)-5-(3,4,5-트라이하이드록시-6-메틸옥산-2-일)옥시옥산-2-일]옥시메틸]-3,4,5-트라이하이드록시옥산-2-일] 10,11-다이하이드록시-9-(하이드록시메틸)-1,2,6a,6b,9,12a-헥사메틸-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-테트라데카하이드로-1H-피센-4a-카르복실레이트)로도 알려져 있는 아시아티코사이드는, 예를 들어 프랑스 쌩-오엔 93400 불러바드 빅토르 휴고 69 소재의 바이엘 상테 파밀리에 디비젼 세덱스(

)로부터 구매가능하다.

본 발명의 조성물은 화장용으로 유효한 양의 하나 이상의 콜라겐 촉진제를 포함할 수 있다. 본 조성물은 바람직하게는, 활성제 기준으로, 약 0.1% 내지 약 10%의 콜라겐 촉진제, 더욱 바람직하게는 약 0.5% 내지 약 5%의 콜라겐 촉진제, 그리고 가장 바람직하게는 약 0.5% 내지 약 2%의 콜라겐 촉진제를 포함한다.

본 발명의 조성물은 적어도 부가적인 피부 라이트닝 활성제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 피부 라이트닝 활성제의 예에는 타이로시나아제 억제제, 멜라닌 분해제, PAR-2 길항제를 포함하는 멜라노좀 이동 억제제, 박피제(exfoliant), 썬스크린, 레티노이드, 항산화제, 트라넥삼산, 트라넥삼산 세틸 에스테르 하이드로클로라이드, 피부 표백제(skin bleaching agent), 리놀레산, 아데노신 모노포스페이트 다이소듐 염, 카모밀라(Chamomilla) 추출물, 알란토인, 불투명화제, 활석 및 실리카, 아연 염 등, 및 문헌[Solano et al. Pigment Cell Res. 19 (550-571)] 및 문헌[Ando et al. Int J Mol Sci 11 (2566-2575)]에 기재된 바와 같은 다른 제제가 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

적합한 타이로시나아제 억제제의 예에는 비타민 C 및 그의 유도체, 비타민 E 및 그의 유도체, 코직산, 아르뷰틴, 레소르시놀, 하이드로퀴논, 플라본, 예를 들어 감초(Licorice) 플라보노이드, 감초 뿌리 추출물, 뽕나무(Mulberry) 뿌리 추출물, 디오스코레아 코포시타(Dioscorea Coposita) 뿌리 추출물, 삭시프라가(Saxifraga) 추출물 등, 엘라그산, 살리실레이트 및 유도체, 글루코사민 및 유도체, 풀러렌, 히노키티올, 다이오익산, 아세틸 글루코사민, 5,5'-다이프로필-바이페닐-2,2'-다이올 (마그노리그난(Magnolignan)), 4-(4-하이드록시페닐)-2-부탄올 (4-HPB), 이들의 둘 이상의 조합 등이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 비타민 C 유도체의 예에는 아스코르브산 및 염, 아스코르브산-2-글루코사이드, 소듐 아스코르빌 포스페이트, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트, 및 비타민 C가 풍부한 천연 추출물이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 비타민 E 유도체의 예에는 알파-토코페롤, 베타, 토코페롤, 감마-토코페롤, 델타-토코페롤, 알파-토코트라이엔올, 베타-토코트라이엔올, 감마-토코트라이엔올, 델타-토코트라이엔올 및 이들의 혼합물, 토코페롤 아세테이트, 토코페롤 포스페이트 및 비타민 E 유도체가 풍부한 천연 추출물이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 레소르시놀 유도체의 예에는 레소르시놀, 4-치환된 레소르시놀, 예를 들어 4-알킬레소르시놀, 예컨대 4-부티레소르시놀 (루시놀), 4-헥실레소르시놀 (시노베아(Synovea) HR, 시테온(Sytheon)), 페닐에틸 레소르시놀 (심화이트(Symwhite), 심라이즈), 1-(2,4-다이하이드록시페닐)-3-(2,4-다이메톡시-3-메틸페닐)-프로판 (니비톨, 우니겐(Unigen)) 등 및 레소르시놀이 풍부한 천연 추출물이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 살리실레이트의 예에는 4-메톡시 포타슘 살리실레이트, 살리실산, 아세틸살리실산, 4-메톡시살리실산 및 이들의 염이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 타이로시나아제 억제제에는 4-치환된 레소르시놀, 비타민 C 유도체, 또는 비타민 E 유도체가 포함된다. 더욱 바람직한 실시 형태에서, 타이로시나아제 억제제에는 페닐에틸 레소르시놀, 4-헥실 레소르시놀, 또는 아스코르빌-2-글루코사이드가 포함된다.

적합한 멜라닌 분해제의 예에는 과산화물 및 효소, 예를 들어 퍼옥시다아제 및 리그니나아제가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 멜라닌 억제제에는 과산화물 또는 리그니나아제가 포함된다.

적합한 멜라노좀 이동 억제제의 예에는 PAR-2 길항제, 예를 들어 대두 트립신 억제제 또는 바우만-버크(Bowman-Birk) 억제제, 비타민 B3 및 유도체, 예를 들어 나이아신아미드, 에센셜 소이(essential soy), 홀 소이(whole soy), 대두 추출물이 포함된다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 멜라노좀 이동 억제제에는 대두 추출물 또는 나이아신아미드가 포함된다.

박피제의 예에는 알파-하이드록시산, 예를 들어 락트산, 글리콜산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 또는 임의의 전술한 것들의 임의의 조합, 베타-하이드록시산, 예를 들어 살리실산, 폴리하이드록시산, 예를 들어 락토비온산 및 글루콘산, 및 기계적 박피, 예를 들어 미세박피(microdermabrasion)가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 박피제에는 글리콜산 또는 살리실산이 포함된다.

썬스크린의 예에는 아보벤존 (파르솔 1789), 비스다이설리졸 다이소듐 (네오 헬리오판 AP), 다이에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트 (우비눌 A 플러스), 에캄술 (멕소릴 SX), 메틸 안트라닐레이트, 4-아미노벤조산 (PABA), 시녹세이트, 에틸헥실 트라이아존 (우비눌 T 150), 호모살레이트, 4-메틸벤질리덴 캠퍼 (파르솔 5000), 옥틸 메톡시신나메이트 (옥티녹세이트), 옥틸 살리실레이트 (옥티살레이트), 파디메이트 O (에스칼롤 507), 페닐벤즈이미다졸 설폰산 (엔설리졸), 폴리실리콘-15 (파르솔 SLX), 트롤라민 살리실레이트, 베모트라이지놀 (티노소르브 S), 벤조페논 1―12, 다이옥시벤존, 드로메트라이졸 트라이실록산 (멕소릴 XL), 이스코트라이지놀 (우바소르브 HEB), 옥토크릴렌, 옥시벤존 (에우솔렉스 4360), 설리소벤존, 비소크트라이졸 (티노소르브 M), 이산화티타늄, 산화아연 등이 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

레티노이드의 예에는 레티놀 (비타민 A 알코올), 레티날 (비타민 A 알데하이드), 레티닐 아세테이트, 레티닐 프로피오네이트, 레티닐 리놀레에이트, 레티노산, 레티닐 팔미테이트, 아이소트레티노인, 타자로텐, 벡사로텐, 아다팔렌(Adapalene), 이들의 둘 이상의 조합 등이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 레티노이드는 레티놀, 레티날, 레티닐 아세테이트, 레티닐 프로피오네이트, 레티닐 리놀레에이트, 및 이들의 둘 이상의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 더욱 바람직한 실시 형태에서, 레티노이드는 레티놀이다.

항산화제의 예에는 수용성 항산화제, 예를 들어 설프하이드릴 화합물 및 이의 유도체 (예를 들어, 소듐 메타바이설파이트 및 N-아세틸-시스테인, 글루타티온), 리포산 및 다이하이드로리포산, 스틸베노이드, 예를 들어 레스베라트롤 및 유도체, 락토페린, 철 및 구리 킬레이트제 및 아스코르브산 및 아스코르브산 유도체 (예를 들어, 아스코빌-2-글루코사이드, 아스코르빌 팔미테이트 및 아스코르빌 폴리펩타이드)가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 조성물에 사용하기에 적합한 유용성 항산화제에는 부틸화 하이드록시톨루엔, 레티노이드 (예를 들어, 레티놀 및 레티닐 팔미테이트), 토코페롤 (예를 들어, 토코페롤 아세테이트), 토코트라이에놀 및 유비퀴논이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 조성물에 사용하기에 적합한 항산화제를 함유하는 천연 추출물에는 플라보노이드 및 아이소플라보노이드 및 이들의 유도체 (예를 들어, 제니스테인 및 다이아드제인)를 함유하는 추출물, 레스베라트롤을 함유하는 추출물 등이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 그러한 천연 추출물의 예에는 포도씨, 녹차, 홍차, 백차, 소나무 껍질, 피버퓨, 파르테놀라이드(parthenolide)-무함유 피버퓨, 귀리 추출물, 블랙베리 추출물, 코티너스 추출물, 대두 추출물, 포멜로(pomelo) 추출물, 맥아 추출물, 헤스페레딘(Hesperedin), 포도 추출물, 쇠비름속(Portulaca) 추출물, 리코칼콘, 칼콘, 2,2'-다이하이드록시 칼콘, 프리물라(Primula) 추출물, 프로폴리스 등이 포함된다.

부가적인 화장용 활성제는 조성물 중에 임의의 적합한 양으로, 예를 들어 이 조성물의 약 0.0001 중량% 내지 약 20 중량%, 예를 들어 약 0.001 중량% 내지 약 10 중량%, 예를 들어 약 0.01 중량% 내지 약 5 중량%의 양으로 존재할 수 있다. 소정의 바람직한 실시 형태에서 0.1% 내지 5%, 다른 바람직한 실시 형태에서 1% 내지 2%의 양으로 존재할 수 있다.

본 발명의 조성물은 화장용으로 유효한 양의 하나 이상의 항염증성 화합물을 포함할 수 있다. 적합한 항염증제의 예에는 치환된 레소르시놀, (E)-3-(4-메틸페닐설포닐)-2-프로펜니트릴(예를 들어, "베이(Bay) 11-7082", 미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리치로부터 구매가능함), 테트라하이드로커큐미노이드(예를 들어, 테트라하이드로커큐미노이드 CG, 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 사빈사 코포레이션(Sabinsa Corporation)으로부터 입수가능함), 및 하기로부터 유래된 추출물 및 물질이 포함된다: 펠로덴드론 아무렌세 피층 추출물(Phellodendron amurense Cortex Extract; PCE), 비변성 대두 (글라이신 맥스(Glycine max)), 피버퓨 (타나세툼 파르테늄), 생강 (징기베르 오피시날레(Zingiber officinale)), 은행 (징코 빌로바(Ginkgo biloba)), 마데카소사이드 (센텔라 아시아티카 추출 성분), 코티너스 (코티너스 코기그리아(Cotinus coggygria)), 머위(Butterbur) 추출물 (페타시테스 하이브리두스(Petasites hybridus)), 구기자(Goji Berry) (라이시움 바르바룸(Lycium barbarum)), 밀크 시슬(Milk Thistle) 추출물 (실리붐 마리아눔(Silybum marianum)), 인동덩굴(Honeysuckle) (로니세라 자포니카(Lonicera japonica)), 페루 발삼(Basalm of Peru) (마이록실론 페레이라에(Myroxylon pereirae)), 세이지(Sage) (살비아 오피시날리스(Salvia officinalis)), 크랜베리(Cranberry) 추출물 (바시니움 옥시코코스(Vaccinium oxycoccos)), 아마란스유(Amaranth Oil) (아마란투스 크루엔투스(Amaranthus cruentus)), 석류(Pomegranate) (푸니카 그라나툼(Punica granatum)), 예바 마테(Yerbe Mate) (일렉스 파라구아리엔시스(Ilex paraguariensis) 잎 추출물), 하얀 백합(White Lily) 꽃 추출물 (릴리움 칸디둠(Lilium candidum)), 올리브 잎 추출물 (올레아 유로파에아(Olea europaea)), 플로레틴(Phloretin) (사과 추출물), 귀리 가루 (아비나 사티바(Aveena sativa)), 리페놀(Lifenol) (홉(Hop): 후물루스 루풀루스(Humulus lupulus)) 추출물, 부그란(Bugrane) P (오노니스 스피노사(Ononis spinosa)), 리코칼콘 (감초: 글리시리자 인플라테(Glycyrrhiza inflate) 추출물 성분), 심릴리프(Symrelief) (비사볼롤, 그리고 생강 추출물), 이들의 둘 이상의 조합 등.

일 실시 형태에서, 항염증제는 레소르시놀이다. 특히 적합한 치환된 레소르시놀에는 4-헥실 레소르시놀 및 4-옥틸레소르시놀, 특히 4-헥실 레소르시놀이 포함된다. 4-헥실 레소르시놀은 미국 뉴저지주 링컨 파크 소재의 시테온으로부터 "시노베아 HR"로 구매가능하다. 4-옥틸레소르시놀은 미국 코네티컷주 웨스트 헤이븐 소재의 씨티 케미칼 엘엘씨(City Chemical LLC)로부터 구매가능하다.

"피버퓨 추출물"이란, 발명의 명칭이 "피버퓨 (타나세툼 파르테늄)로부터의 파르테놀라이드-무함유 생물활성 성분 및 이의 제조 방법"(PARTHENOLIDE FREE BIOACTIVE INGREDIENTS FROM FEVERFEW (TANACETUM PARTHENIUM) AND PROCESSES FOR THEIR PRODUCTION)인 미국 특허 출원 공개 제2007/0196523호에 기술된 상세 내용에 따라 제조될 수 있는 것과 같은 식물 "타나세툼 파르테늄"의 추출물을 의미한다. (이들은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함됨). 한 가지 특히 적합한 피버퓨 추출물은 미국 뉴욕주 오시닝 소재의 인티그레이티드 보태니컬 테크놀로지스(Integrated Botanical Technologies)로부터 약 20% 활성 피버퓨로서 구매가능하다.

본 발명의 조성물은 파울로우니아(Paulownia) 속의 소정 종으로부터의 식물성 추출물을 또한 포함할 수 있다. 이러한 추출물, 및 인간 피부를 라이트닝하는 조성물을 포함하는 피부 조성물에서의 그의 사용은 미국 특허 출원 공개 제20120045490호, 제20120045491호 및 제20120045530호 (이들은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함됨)에 개시되어 있다.

다양한 다른 물질이 또한 본 발명의 조성물에 존재할 수 있다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 본 조성물은 계면활성제, 킬레이팅제, 연화제, 습윤제, 컨디셔너, 방부제, 불투명화제, 방향제 등으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 국소 성분을 포함한다.

연화제란, (예를 들어, 윤활제로 작용하도록 피부 표면 상에 또는 각질층 내에 남아 있음으로써) 부드럽고 매끄럽고 유연한 피부 외관을 유지하도록 돕는 화합물을 의미한다. 적합한 연화제의 예에는 문헌[Chapter 35, pages 399-415 (Skin Feel Agents, by G Zocchi), in Handbook of Cosmetic Science and Technology (edited by A. Barel, M. Paye and H. Maibach, Published in 2001 by Marcel Dekker, Inc New York, NY)]에 나타나 있는 것들이 포함되며, 바셀린, 헥실데실 스테아레이트, 및 식물 오일, 견과유, 및 식물유, 예를 들어 마카다미아 너트유, 미강유, 포도씨유, 팜유, 프림로즈유(prim rose oil), 수소화 땅콩유, 및 아보카도유가 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

습윤제란, 피부의 상부 층의 수분 함량을 증가시키도록 의도된 화합물 (예를 들어, 흡습성 화합물)을 의미한다. 적합한 습윤제의 예에는 문헌[Chapter 35, pages 399-415 (Skin Feel Agents, by G Zocchi), in Handbook of Cosmetic Science and Technology (edited by A. Barel, M. Paye and H. Maibach, Published in 2001 by Marcel Dekker, Inc New York, NY)]에 나타나 있는 것들이 포함되며, 글리세린, 소르비톨 또는 트레할로스 (예를 들어, α,α- 트레할로스, β,β-트레할로스, α,β-트레할로스) 또는 이의 염 또는 에스테르 (예를 들어, 트레할로스 6-포스페이트)가 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

계면활성제란, 클렌징하도록 또는 유화시키도록 의도된 표면 활성제를 의미한다. 적합한 계면활성제의 예에는 문헌[Chapter 37, pages 431-450 (Classification of surfactants, by L. Oldenhove de Guertechin) in Handbook of Cosmetic Science and Technology (edited by A. Barel, M. Paye and H. Maibach, Published in 2001 by Marcel Dekker, Inc., New York, NY)]에 나타나 있는 것들이 포함되며, 음이온성 계면활성제, 예를 들어 황산염, 양이온성 계면활성제, 예를 들어 베타인, 양쪽성 계면활성제, 예를 들어 소듐 코코 글리시네이트, 비이온성 계면활성제, 예를 들어 알킬 폴리글루코사이드가 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

적합한 킬레이팅제의 예에는 본 발명의 조성물을 보호 및 보존할 수 있는 것들이 포함된다. 바람직하게는, 킬레이팅제는 에틸렌다이아민 테트라아세트산 ("EDTA")이며, 더욱 바람직하게는 미국 미시간주 미들랜드 소재의 다우 케미칼 컴퍼니(Dow Chemical Company)로부터 상표명 "베르센(Versene) 100XL"로 구매가능한 테트라소듐 EDTA이다.

적합한 방부제에는, 예를 들어 파라벤, 4차 암모늄 화학종, 페녹시에탄올, 벤조에이트, DMDM 하이단토인, 유기산이 포함되며, 이는 본 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0 내지 약 1% 또는 약 0.05% 내지 약 0.5%의 양으로 본 조성물에 존재한다.

임의의 다양한 구매가능한 진주광택제 또는 불투명화제가 본 조성물에 사용하기에 적합하다. 적합한 진주 광택제 또는 불투명화제의 예에는 (a) 약 16개 내지 약 22개의 탄소 원자를 갖는 지방산과 (b) 에틸렌 또는 프로필렌 글리콜 중 어느 하나의 모노 또는 다이에스테르; (a) 약 16개 내지 약 22개의 탄소 원자를 갖는 지방산과 (b) 화학식: HO-(JO)_a-H (여기서, J는 약 2 내지 약 3개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌 기이고; a는 2 또는 3임)의 폴리알킬렌 글리콜의 모노 또는 다이에스테르; 약 16 내지 약 22개의 탄소 원자를 함유하는 지방 알코올; 화학식: KCOOCH₂L (여기서, K 및 L은 독립적으로 약 15 내지 약 21개의 탄소 원자를 함유함)의 지방 에스테르; 샴푸 조성물에 불용성인 무기 고형물; 및 이들의 혼합물이 포함되지만 이에 한정되지 않는다.

피부 상에 사용하기에 적합한 임의의 방향제 조성물이 본 발명에 따른 조성물에 사용될 수 있다.

소정의 바람직한 실시 형태에서, 본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하는 기재의 형태일 수 있다. 임의의 적합한 기재가 사용될 수 있다. 적합한 기재 및 기재 물질의 예는, 예를 들어 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된 미국 특허 제7452547호 및 미국 특허 출원 공개 제2009/0241242호에 개시되어 있다.

소정의 바람직한 실시 형태에서, 기재는 와이프, 글러브, 또는 페이셜 마스크이다. 바람직하게는, 그러한 실시 형태는 상기에 인용된 참고 문헌에 정의되어 있는 바와 같은 수불용성 기재를 포함한다. 소정의 실시 형태의 경우, 수불용성 기재는, 수불용성 기재를 마스크 기재로서 사용자의 얼굴 주위에 놓기에 용이하도록, 인간 사용자의 얼굴을 덮는 크기 및 형상을 가질 수 있다. 예를 들어, 수불용성 마스크 기재는 사용자의 입, 코, 및/또는 눈을 위한 개방부를 가질 수 있다. 대안적으로, 수불용성 기재는 그러한 개방부를 갖지 않을 수 있다. 개방부가 없는 그러한 구성은, 수불용성 기재를 얼굴이 아닌 피부 영역 위에 씌우고자 하는 본 발명의 실시 형태에 대해 또는 수불용성 기재를 와이프로서 사용하고자 하는 경우에 유용할 수 있다. 수불용성 기재는 다양한 형상, 예를 들어 각진 형상(예를 들어, 직사각형) 또는 아치형 형상, 예를 들어 원형 또는 타원형일 수 있다. 소정의 실시 형태에서, 기재는 전체적으로 본 명세서에 포함된 미국 특허 출원 공개 제2006/0141014호에 기재된 것과 같은 글러브이다. 본 발명의 일 실시 형태에서, 제품은 상이한 형상의 복수의 수불용성 기재를 포함한다.

필요로 하는 피부에 본 조성물을 도포하는 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 조성물은 필요로 하는 피부에 패키지로부터 직접 도포될 수 있거나, 필요로 하는 피부에 손으로 도포될 수 있거나, 또는 와이프 또는 마스크와 같은 기재로부터 전달될 수 있거나, 또는 이들의 둘 이상의 조합으로 도포될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 본 조성물은 점적기, 튜브, 롤러, 스프레이, 및 패치를 통해 도포될 수 있거나, 또는 욕액(bath)에 또는 달리 피부에 도포될 물 등에 첨가될 수 있다. 본 조성물은, 제한 없이, 잔류형(leave-on) 크림, 마스크, 및/또는 세럼을 포함하는 다양한 방식 또는 형태로 도포될 수 있다.

추가의 부가적인 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 둘 이상의 상이한 조성물 또는 제품을 피부에 도포하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 본 방법은 피부 장벽 기능의 개선 및 피부 수화 및 보습의 개선을 필요로 하는 피부에 얼리엘라 스카브로사의 추출물을 포함하는 제1 조성물을 도포하는 단계와, 이어서 치료를 필요로 하는 피부에, 제1 조성물과는 상이한, 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 제2 조성물을 도포하는 단계를 포함할 수 있다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 독립적으로 로션, 클렌저, 마스크, 와이프, 크림, 세럼, 젤 등으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 제1 조성물 및 제2 조성물 중 적어도 하나는 클렌저, 로션, 크림, 화장용 필름, 에센스, 또는 세럼이고, 다른 것은 페이셜 마스크 또는 와이프이다. 소정의 다른 바람직한 실시 형태에서, 제1 조성물 및 제2 조성물 중 적어도 하나는 클렌저이고, 다른 것은 로션 또는 크림이다.

배양 방법

본 발명의 다른 태양은 진균의 배양을 최적화하는 방법이다. 출원인은 예상외로 개선된 피부 라이트닝 특성을 갖는 세포 배양 추출물을 생성하기 위해 배양 배지, pH 및 교반을 변경하여 일련의 실험을 수행하였다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이 "배양 배지 변경'은 배양에 사용되는 성분들의 유형 및 양을 변화시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 세포 배양에 사용되는 암모니아의 공급원은 질산암모늄, 쌀겨, 밀겨, 효모 추출물 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 유기 질소원, 예를 들어 쇠고기 추출물, 트립톤, 펩톤, 소이톤, 밀짚 및 무기 질소원, 예를 들어 타르타르산암모늄, 황산암모늄, 염화암모늄 또는 이들의 혼합물이 세포 배양 과정에서 암모니아 공급원으로서 또한 사용될 수 있다. 배양 배지 내의 질소원의 양은 약 0.1 g/L 내지 약 25 g/L 또는 약 0.2 내지 약 20 g/L 또는 약 5 g/L 내지 약 20 g/L일 수 있다. 배지 내의 탄소원의 양은 또한 변경될 수 있다. 탄소의 양은 약 2 내지 약 20 g/L 또는 약 5 내지 약 15 g/l 또는 약 5 내지 약 10 g/L의 범위일 수 있다. 탄소원은 글루코스 또는 덱스트로스 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

배양 배지의 pH는 완충 시스템을 첨가함으로써 변경될 수 있다. 한 시스템은 수산화나트륨과 염산의 조합이다. 당업계에 공지된 다른 완충 시스템이 pH를 변경하는 데 사용될 수 있다.

배지를 배양하는 방법은 교반을 변화시킴으로써 변경될 수 있다. 당업자에게 공지된 인큐베이터 진탕기가 배양 동안 배지를 교반하는 데 사용될 수 있다. 진탕기는 약 100 내지 약 200 rpm의 범위로 설정될 수 있다.

배양 배지를 변경하는 부가적인 방식은 유도제를 첨가하는 것이다. 유도제는 배양되는 진균의 멜라닌 분해 효소 생성을 향상시키는 물질이다. 유도제의 예에는 합성 멜라닌, 세피아 멜라닌, 베라트릴 알코올, 리그닌, 하나 이상의 벤젠 또는 등가의 헤테로사이클릭 고리를 함유하는 유기 화합물, 벤질 알코올, 신남산, 구아이아콜, 메틸 살리실레이트, 벤젠다이올, 벤조퀴논, 갈산, 살리실산, 유제놀, 카페산, 자일레놀

또는 이들의 혼합물이 포함된다. 배지 조성물에 첨가되는 유도제의 양은 약 10 mg/L 내지 약 2000 mg/L 또는 약 30 mg/L 내지 약 1000 mg/L 또는 약 200 mg/L 내지 약 400 mg/L 또는 약 245 mg/L 내지 약 350 mg/L의 범위일 수 있다.

전술한 상세한 설명 및 도면이 본 발명의 예시적인 실시 형태를 나타내고 있지만, 본 발명의 사상 및 범주를 벗어남이 없이 본 발명의 예시적인 실시 형태에서 다양한 추가, 변경 및 대체가 이루어질 수 있다는 것을 이해할 것이다. 특히, 본 발명의 사상 또는 본질적인 특징으로부터 벗어남이 없이, 본 발명이 다른 특정 형태, 구조, 배열, 비율로 그리고 다른 요소, 물질, 및 구성요소로 구현될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명이 구조, 배열, 비율, 물질, 및 구성요소의 많은 변경을 갖고서 사용될 수 있고, 다르게는 본 발명의 원리로부터 벗어남이 없이 특정 환경 및 작동 요건에 맞추어 특별히 개조된 본 발명의 실시에 사용될 수 있음을 당업자는 인식할 것이다. 따라서, 현재 개시된 실시 형태는 모든 측면에서 예시적이고 비제한적인 것으로 간주되어야 하고, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위에 의해 나타내어지며 전술한 설명에 한정되지 않는다. 청구범위에서, 용어 "포함한다/포함하는"은 다른 요소 또는 단계의 존재를 배제하지 않음이 이해될 것이다. 또한, 단수형 언급은 복수형을 배제하지 않는다. 용어 부정관사("a", "an"), "제1", "제2" 등은 복수형을 배제하지 않는다.

실시예

이. 스카브로사(E. scabrosa) 스톡 배양물을 성장시키고 감자 덱스트로스 한천(Potato Dextrose Agar; PDA), pH 6.0에서 유지하였다. 스톡 배양물로부터, 직경이 0.7 cm인 코르크 보러(cork borer)를 사용하여 진균 균사체를 함유하는 한천의 작은 블록을 절단하고, 이어서 후속 연구를 위해 고체 한천에서 계대배양하였다. 모든 배양판을 진균 성장이 관찰될 때까지 3 내지 5일 동안 30℃에서 인큐베이팅하였다. 액체 배지 브로스(broth)에서 계대배양하기 위해, 진균 균사체를 함유하는 스톡 배양물 한천을 먼저 1.5 cm × 3.0 cm로 절단하고 이어서 더 작은 조각으로 추가로 절단한 후에, 50 ml의 액체 배지 브로스에 접종하고 30℃에서 7 내지 9일 동안 인큐베이팅하였다. 이하 실시예에 기재된 후속 연구를 위해, 배양된 배지 브로스로부터 이. 스카브로사 배양 여액을 얻었다.

실시예 1: 멜라닌 한천 스크리닝

얼리엘라 스카브로사 MY993을 멜라닌 한천 플레이트에서 배양하고 9일 동안 인큐베이팅하였다. 사용된 멜라닌 한천 조성물이 표 1에 열거되어 있다.

[표 1]

표 1에 열거된 조성물로부터 멜라닌 한천 배지를 제조하였다. 모든 성분을 1 L의 물에 첨가하고 121℃에서 15분 동안 오토클레이빙하였다. 오토클레이브 후에, 한천 배지를 페트리 접시에 분배하고 (플레이트당 20 ml), 응고되게 두었다.

진균 스톡 배양물로부터, 직경이 0.7 cm인 코르크 보러를 사용하여 진균 균사체를 함유하는 한천의 작은 블록을 절단하고, 이어서 진균 블록을 신규의 한천 플레이트의 중심에 놓고 30℃에서 9일 동안 인큐베이팅하여 계대배양하였다.

균주 번호 MY993 (얼리엘라 스카브로사)은 9일에 걸쳐 한천 내의 멜라닌을 탈색시키는 것으로 관찰되었고, 5일에 약간의 탈색이 나타났으며 7일 및 9일에는 탈색이 증가하였다. 3일차, 5일차, 7일차 및 9일차의 한천 플레이트의 사진이 도 1에 나타나 있다.

대조적으로, 가노더마 종(Ganoderma sp.) (TDR 0003), 렌티누스 종(Lentinus sp.) (TDR 0008) 및 아마우로더마 종(Amauroderma sp.) (TRD 0023)과 같은 다른 백색 부후균 균주를 동일한 배지에서 배양하였고, 이들은 9일에 걸쳐 멜라닌의 어떠한 탈색의 징후도 나타내지 않았다. 3일차, 5일차, 7일차 및 9일차의 대조군용 한천 플레이트가 도 2에 나타나 있다.

실시예 2: 컨디셔닝된 브로스 배지에서의 얼리엘라 스카브로사의 활성

표 2에 열거된 조성물을 갖는 1 리터의 물을 사용하여 액체 배지 브로스에서 얼리엘라 스카브로사를 배양하였다.

[표 2]

이. 스카브로사 스톡 배양물로부터, 진균 균사체를 함유하는 한천의 작은 블록을 먼저 1.5 cm × 3.0 cm 섹션으로 절단하고 이어서 더 작은 조각으로 추가로 절단한 후에, 50 ml의 배지 브로스에 접종하고 100 rpm의 교반 속도로 인큐베이터 진탕기를 사용하여 30℃에서 9일 동안 인큐베이팅하였다. 원심분리 후에, 이어서 상청액을 0.22 um 필터를 통해 여과한 후에, 멜라닌-분해 활성 분석에서 시험하였다. 이. 스카브로사 배양 여액을 3일차, 5일차, 7일차 및 9일차에 12,396 g에서 5분 동안 원심분리하여 수확하였다.

실시예 3: 멜라닌 분해 분석

각각의 반응 혼합물 (총 부피 250 μL)이 90 μL의 합성 멜라닌 (250 mg/L, pH 6.0), 110 μL의 증류수 및 50 μL의 이. 스카브로사 배양 여액으로 구성된 96-웰 플레이트에서 멜라닌 분해 분석을 수행하였다. 이어서 반응 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이팅하고 분광광도계로 540 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 1 유닛의 멜라닌 (U/ml) 분해 효소 활성은 540 nm에서의 흡광도를 37℃에서 1시간 동안 0.001만큼 감소시키는 효소의 양으로서 정의되었다.

이. 스카브로사의 선택된 균주는, 표 3에 나타난 바와 같이, 3일차, 5일차, 7일차 및 9일차 배양 여액으로부터 높은 멜라닌-분해 활성을 나타내었고, 7일차에 활성이 최고였다.

[표 3]

실시예 4: 라카아제(Laccase) 효소에 대한 멜라닌 분해 활성의 비교

백색 부후균은 라카아제 효소를 분비하는 것으로 알려져 있다. 이. 스카브로사의 선택된 균주의 라카아제 활성을 측정하였다. 라카아제 활성은 2,2_-아지노-비스-(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산) (ABTS) 분석을 사용하여 측정하고 하기 식을 사용하여 계산하였다:

활성 = (ΔE × DF × Vt) / (Δt × Vs × d × ε420)

150 μL의 80 mM 아세트산나트륨 완충제, pH 5.5로 50 μL 이. 스카브로사 배양 여액 (Vs)의 pH를 5.5로 조정하였다. 모든 샘플을 적절한 희석 (희석 인자 = DF)으로 희석하였다. 50 μL의 5 mM ABTS 용액의 첨가 후에, 흡광도의 변화 (ΔE)를 420 nm 및 37℃에서 5분 (Δt) 동안 측정하였다. 흡광 계수 ε₄₂₀ = 0.04321 L μmol^―1 cm^―1, 층 높이 d = 0.63 cm 및 총 액체 부피 Vt = 250 μL을 사용하여 라카아제 활성을 계산하였다. 분석은 분광광도계에서 행하였다. 라카아제 효소 활성 (U)은 37 ℃ 및 pH 5.5에서 분당 1 μmol ABTS의 산화를 촉매하는 효소의 양으로서 정의된다.

표 4에 나타난 바와 같이, 라카아제 활성은 멜라닌-분해 활성과 관련되지 않는 것으로 밝혀졌다 이는 라카아제가 얼리엘라 스카브로사 의 멜라닌 분해 활성에 대한 주된 동인이 아님을 시사한다.

[표 4]

실시예 5 및 실시예 5A: 성장 조건의 최적화

2가지 크기의 세포 배양물을 비교하여 배양물의 몇몇 성분을 변화시키는 효과를 검사하였다. 최적화 전/후의 2가지 1 리터 액체 브로스 배양물의 성분이 표 5에 나타나 있다. 이어서, 2회의 개별적인 전/후 실험을 행하여 전/후 브로스 조성물의 멜라닌 분해 활성을 시험하였다. 실시예 5는 50 ml의 세포 배양물이고, 실시예 5A는 5 리터의 세포 배양물이다. 실시예 5 및 실시예 5A 둘 모두는 최적화 전/후 둘 모두에 동일한 성분을 동일한 비율로 사용하였다. 최적화 제형은 효모 추출물의 제거, 밀겨 및 베라트릴 알코올의 첨가 및 pH를 6으로 증가시키고 발효 통기 속도를 0.6 vvm 내지1.0 vvm으로 설정하는 것을 포함하였다. 각각의 배양물을 사용하여 이. 스카브로사 MY993을 성장시켰다. 원심분리 후에, 이어서 상청액을 0.22 μm 필터를 통해 여과한 후에, 실시예 3에 사용된 멜라닌-분해 활성 분석에서 시험하였다.

표 6에 나타난 바와 같이 최적화된 배지의 5 리터 배치(batch) 후에 50 mL 및 778%의 실험실 규모에서 성장 조건의 최적화 후에 이. 스카브로사 추출물의 멜라닌-분해 활성이 23%만큼 증가한 것으로 나타났다.

[표 5]

[표 6]

실시예 6: 성장 조건의 최적화 ― 유도제

유도제를 포함함으로써 액체 브로스 배지를 변경하였다. 이. 스카브로사로부터의 멜라닌-분해 효소 생성을 향상시키기 위해 유도제를 고역가 촉진제의 브로스 배지에 첨가한다.

액체 배지에 사용된 성분이 표 7에 열거되어 있다.

[표 7]

1 리터의 물을 사용하여 표 7의 제형을 사용하여 개별 브로스를 제조하였고, 표 8에 나타난 바와 같이 하기 유도제를 첨가하였다.

[표 8]

이. 스카브로사 MY993을, 표 8에 나타나 있는 다양한 농도의 상이한 유도제로 보충된 배지에서 성장시키고 100 rpm의 교반 속도로 인큐베이터 진탕기를 사용하여 30℃에서 인큐베이팅하였다.

이. 스카브로사 MY993 스톡 배양물로부터, 진균 균사체를 함유하는 한천의 작은 블록을 먼저 1.5 cm × 3.0 cm으로 절단하고 이어서 더 작은 조각으로 추가로 절단한 후에, 표에 나타나 있는 다양한 농도의 상이한 유도제로 보충된 50 ml의 배지 브로스에 접종하고 100 rpm의 교반 속도로 30℃에서 인큐베이팅하고 100 rpm의 교반 속도로 인큐베이터 진탕기를 사용하여 30℃에서 9일 동안 인큐베이팅하였다. 이. 스카브로사 배양 여액을 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차에 12,396 g에서 5분 동안 원심분리하여 수확하였다. 원심분리 후에, 상청액을 0.22 μm필터를 통해 여과한 후에, 실시예 3에 사용된 멜라닌-분해 활성 분석에서 시험하였다.

결과가 표 9에 요약되어 있다. 245 mg/L의 베라트릴 알코올이 7일차 배양 여액에서 이. 스카브로사 MY993 추출물의 멜라닌-분해 효소 생성을 향상시키는 데 최상의 유도제인 것으로 나타났다.

표 9 (이. 스카브로사 MY993 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차 배양 여액의 멜라닌-분해 활성.

[표 9]

실시예 7: 질소원 및 pH의 최적화

1 리터의 액체 브로스 배양물을 제조하여 세포 배양 추출물의 멜라닌 분해 활성에 대한 질소원 및 pH의 영향을 시험하였다. 사용된 브로스는 표 10에 열거되어 있다.

[표 10]

질소원은 표 11에 열거되어 있다.

[표 11]

이. 스카브로사 MY993을, 질소원으로 보충되고 4 내지 7의 상이한 pH인 개별 배지에서 성장시키고 100 rpm의 교반 속도로 인큐베이션 진탕기를 사용하여 30℃에서 인큐베이팅하였다. 상이한 조건으로부터의 이. 스카브로사 MY993 배양 여액을 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차에 수확하였다. 이어서 배양 여액을 0.22μm 필터를 통해 여과한 후에 실시예 3에 기재된 멜라닌-분해 활성 분석에서 시험하였다.

쌀겨 및 밀겨가 질산암모늄보다 더 우수한 증강제인 것으로 나타났다. 밀겨가 멜라닌-분해 효소 생성을 향상시키기 위한 효모 추출물 (표 12)을 대체하는 최상의 후보 물질이다. 쌀겨 및 밀겨를 사용한 배양물을 4, 5, 5.5, 6 및 7의 pH에서 제조하였다. 수산화나트륨 및 염산을 사용하여 pH 조정을 수행하였다. 결과가 표 13에 나타나 있다. 7일차에, 쌀겨 및 밀겨 둘 모두가 pH 5 내지 6에서 상승된 멜라닌 분해 활성을 생성하였다.

표 12: 상이한 질소원으로 보충된 배지 (pH 5.5)로부터 수확된 이. 스카브로사 MY993 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차 배양 여액의 멜라닌-분해 활성

[표 12]

표 13: 상이한 pH에서 쌀겨 및 밀겨로 보충된 배지로부터 수확된 이. 스카브로사 MY993 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차 배양 여액의 멜라닌-분해 활성

[표 13]

실시예 8: 배양물의 교반 속도의 최적화

이. 스카브로사 MY993을 pH 6.0에서 밀겨로 보충된 배지에서 성장시키고 30℃에서 인큐베이터 진탕기로 100 rpm, 200 rpm의 교반 속도에서 그리고 정적 조건에서 인큐베이팅하였다.

상이한 조건으로부터의 이. 스카브로사 MY993 배양 여액을 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차에 수확하였다. 이어서 배양 여액을 0.22 um 필터를 통해 여과한 후에 상기 실시예 2에 기재된 분석을 사용하여 멜라닌-분해 활성 분석에서 시험하였다.

100 rpm의 교반 속도가 이. 스카브로사로부터 멜라닌-분해 효소 생성을 향상시키기 위한 최적의 조건인 것으로 관찰되었다 (표 14).

표 14: 상이한 교반 조건으로부터 수확된 이. 스카브로사 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차 배양 여액의 멜라닌-분해 활성.

[표 14]

실시예 9: 글루코스 및 밀겨 농도의 최적화

이. 스카브로사 MY993을 0.2, 1, 2, 5, 10 및 20 g/L의 상이한 밀겨 농도 및 2.5, 5 및 10 g/L의 상이한 글루코스 농도로 보충된 배지에서 성장시켰다. 배양물을 인큐베이터 진탕기로 100 rpm의 교반 속도로 30℃에서 인큐베이팅하였다. 상이한 조건으로부터의 이. 스카브로사 배양 여액을 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차에 수확하였다. 이어서 배양 여액을 0.22 um 필터를 통해 여과한 후에 상기한 멜라닌-분해 활성 분석에서 시험하였다.

10 g/L 글루코스가 이. 스카브로사 MY993으로부터 멜라닌-분해 효소 생성을 향상시키기 위한 최적의 조건인 것으로 나타났다 (표 15).

20 g/L 밀겨가 이. 스카브로사 MY993으로부터 멜라닌-분해 효소 생성을 향상시키기 위한 최적의 조건인 것으로 나타났다 (표 15). 20 g/L 농도에서는, 배양물이 과성장하는 경향이 있으므로 스케일 업 발효(scale up fermentation)에 사용하기에는 적합하지 않으며, 대신에 10 g/L 밀겨를 대규모 (5 L) 생성을 위한 최종 농도로 선택하였다.

표 15: 상이한 글루코스 농도로 보충된 배지로부터 수확된 이. 스카브로사 MY993 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차 배양 여액의 멜라닌-분해 활성

[표 15]

표 16: 상이한 밀겨 농도로 보충된 배지로부터 수확된 이. 스카브로사 MY993 1일차, 3일차, 5일차 및 7일차 배양 여액의 멜라닌-분해 활성

[표 16]

실시예 10: 멜라노덤 시험

구매가능한 색소침착된 표피 등가 조직 또는 매트테크 코포레이션(MatTek Corp.)으로부터의 멜라노덤™ 모델을 하기 시험에 사용하였다. 멜라노덤™ 모델은 정상의 인간-유래 표피 케라틴세포 (NHEK) 및 멜라닌세포 (NHM)로 구성되며, 이는 배양되어 다층의 고도로 분화된 인간 표피 모델을 형성한다. 구체적으로, 직경이 각각 9 mm인 MEL-300-B 조직을 하기 시험에서 사용하였다. 이. 스카브로사 배양 여액을 멜라노덤™ 모델에 매일 국소 도포하였고 실험을 8일 동안 지속하였다. 9일차에 측정을 수행하였다. 디지털 카메라로 사진을 찍어서, 거시적 및 미시적 시각으로 조직 다크닝 종점을 측정하였다. 분광광도계 (코니카 미놀타(Konica Minolta) CM-2600d)를 사용하여, 각각의 조직에 대한 라이트닝 정도 (L- 값)를 측정하였다. 각각의 시험 샘플에 대한 ΔL (대조군과 비교한 라이트닝 정도)을 하기 수학식에 따라 계산한다: ΔL = (처리된 샘플의 L-값) ― (대조군 샘플의 L-값).

4개의 샘플을 시험하였다 ― 미처리 (아무것도 첨가하지 않은 피부 모델), 블랭크 배지 (진균이 없는 세포 배양 배지), MY993 (1x - 희석하지 않음) 및 MY993 (0.5x ― 세포 배양 배지로 1/2 강도로 희석함). 결과가 표 17에 나타나 있으며, 배지 한천 플레이트 및 멜로덤 모델의 사진이 도 3에 나타나 있다. ΔL 및 멜로덤 모델 둘 모두는, 본 발명에 따른 추출물이 색소침착을 감소시켰음을 나타낸다. 그러므로, 이. 스카브로사의 세포 배양 추출물은 피부에 도포될 때 피부 라이트닝 효과를 제공할 것으로 기대될 것이다.

[표 17]

실시예 11:

본 발명에 따른 피부 케어 조성물을 표 18에 나타낸 성분을 사용하여 제조한다.

[표 18]

표 18에 나타낸 조성물을 하기와 같이 제조한다: 물을 공정 용기에 첨가한다. 혼합을 시작하고, 하이드록시에틸셀룰로오스를 첨가하고, 하이드록시에틸셀룰로오스가 용해될 때까지 혼합을 계속한다. 온도가 85℃에 도달할 때까지 열을 가하고 혼합을 계속한다. 혼합을 계속하고 온도를 85℃에서 유지하면서, 글리세린을 첨가한다. 제나민 BTLF 및 테고 아미드 S18을 첨가하고, 브리즈 721 및 라네트 C18 98-100 MY, 사보놀 82, 및 다우 코닝 AP 8087도 첨가한다. 조성물을 85℃에서 추가로 10 내지 15분 동안 혼합한다. 이어서, 조성물을 열로부터 치우고, 계속하여 혼합하고, 40℃에서 냉각한다.

Claims (48)

1. 라이트닝(lightening)을 필요로 하는 인간 피부에, 화장용으로 허용가능한 담체 및 피부 라이트닝 유효량의 얼리엘라 스카브로사(Earliella scabrosa)의 세포 배양 추출물을 포함하는 조성물을 도포하는 단계를 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 피부 라이트닝을 필요로 하는 상기 인간 피부는 UV에 의해 다크닝된(darkened) 피부, 고르지 않은 피부톤을 갖는 피부, 하나 이상의 색소반(pigmented spot), 멜라닌 반점(melanin spot), 검버섯(age spot), 일광 반점(sun spot), 노인성 흑자(senile lentigo), 주근깨, 단순 흑자, 색소성 일광 각화증(pigmented solar keratosis), 지루성 각화증, 기미, 여드름 자국, 및 이들의 둘 이상의 조합을 갖는 피부로 이루어진 군으로부터 선택되는, 피부를 라이트닝하는 방법.
3. 제2항에 있어서, 피부 라이트닝 치료를 필요로 하는 상기 인간 피부는 하나 이상의 색소반, 멜라닌 반점, 검버섯, 일광 반점, 주근깨, 여드름 자국, 및 이들의 둘 이상의 조합을 갖는 피부로 이루어진 군으로부터 선택되는, 피부를 라이트닝하는 방법.
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.0001 중량% 내지 약 40 중량%의 상기 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.01 중량% 내지 약 25 중량%의 상기 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%의 상기 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 로션, 크림, 세럼, 젤, 스틱, 스프레이, 연고, 액상 워시(liquid wash), 비누 바(soap bar), 샴푸, 헤어 컨디셔너, 페이스트, 폼(foam), 파우더(powder), 무스, 면도 크림, 하이드로젤 또는 필름-형성 제품의 형태인, 피부를 라이트닝하는 방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 도포 단계는 상기 조성물을 기재(substrate)로부터 상기 피부로 전달하는 것을 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
9. 제8항에 있어서, 상기 기재는 와이프(wipe) 또는 페이셜 마스크(facial mask)를 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
10. 제1항에 있어서, 상기 도포 단계는 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물 및 부가적인 피부 라이트닝 활성제를 포함하는 조성물을 상기 피부에 도포하는 것을 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 도포 단계는 상기 조성물을 기재로부터 상기 피부로 전달하는 것을 추가로 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
12. 제11항에 있어서, 상기 기재는 와이프 또는 페이셜 마스크를 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
13. 제1항에 있어서, 피부 라이트닝을 필요로 하는 피부에 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 조성물을 1일 1회 또는 2회 도포하는 단계를 추가로 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
14. 제1항에 있어서, 상기 방법은 피부 라이트닝을 필요로 하는 상기 피부에 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 둘 이상의 상이한 조성물을 도포하는 단계를 포함하는, 피부를 라이트닝하는 방법.
15. 제14항에 있어서, 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는 상기 둘 이상의 상이한 조성물은 독립적으로 로션, 클렌저, 마스크, 에센스, 와이프, 크림, 세럼, 및 젤로 이루어진 군으로부터 선택되는, 피부를 라이트닝하는 방법.
16. 제15항에 있어서, 상기 둘 이상의 상이한 조성물 중 하나는 클렌저이고, 상기 둘 이상의 상이한 조성물 중 다른 하나는 로션 또는 크림인, 피부를 라이트닝하는 방법.
17. 제1항에 있어서, 상기 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 500 내지 약 2000 U/ml인, 피부를 라이트닝하는 방법.
18. 제17항에 있어서, 상기 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 600 내지 약 1800 U/ml인, 피부를 라이트닝하는 방법.
19. 제18항에 있어서, 상기 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 1000 내지 약 1800 U/ml인, 피부를 라이트닝하는 방법.
20. 화장용으로 허용가능한 담체 및 인간 피부를 라이트닝하기에 효과적인 양의 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부 케어 조성물.
21. 제20항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.0001 중량% 내지 약 40 중량%의 상기 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부 케어 조성물.
22. 제21항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.01 중량% 내지 약 25 중량%의 상기 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부 케어 조성물.
23. 제22항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%의 상기 얼리엘라 스카브로사의 세포 배양 추출물을 포함하는, 피부 케어 조성물.
24. 제20항에 있어서, 제2 피부 라이트닝제를 추가로 포함하는, 피부 케어 조성물.
25. 제20항에 있어서, 상기 피부 케어 조성물은 용액, 현탁액, 로션, 크림, 세럼, 에센스, 젤, 토너, 스틱, 스프레이, 연고, 액상 워시, 페이스트, 폼, 무스, 파우더, 면도 크림, 와이프, 패치, 스트립, 하이드로젤, 필름-형성 제품, 페이셜 마스크 및 피부 마스크로 이루어진 군으로부터 선택되는 형태인, 피부 케어 조성물.
26. 제20항에 있어서, 상기 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 500 내지 약 2000 U/ml인, 피부 케어 조성물.
27. 제26항에 있어서, 상기 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 600 내지 약 1800 U/ml인, 피부 케어 조성물.
28. 제27항에 있어서, 상기 세포 배양 추출물은 멜라닌 분해 활성이 약 1000 내지 약 1800 U/ml인, 피부 케어 조성물.
29. 제24항에 있어서, 상기 제2 피부 라이트닝제는 타이로시나아제 억제제, 멜라닌 분해제, PAR-2 길항제, 박피제(exfoliant), 썬스크린, 레티노이드, 항산화제, 트라넥삼산, 트라넥삼산 세틸 에스테르 하이드로클로라이드, 피부 표백제(skin bleaching agent), 리놀레산, 아데노신 모노포스페이트 다이소듐 염, 카모밀라(Chamomilla) 추출물, 알란토인, 불투명화제, 활석, 실리카, 아연 염 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 피부 케어 조성물.
30. 수성 액체 배양 배지 중에서 얼리엘라 스카브로사를 배양하는 방법으로서, (a) 액체 배양 배지를 얼리엘라 스카브로사로 접종하는 단계, 및 (b) 상기 액체 배양 배지를 약 10 g/ml 내지 약 2000 g/ml의 양의 유도제(inducer)와 혼합하는 단계를 포함하는, 방법.
31. 제30항에 있어서, 상기 유도제는 합성 멜라닌, 세피아 멜라닌(sepia melanin), 3,4-다이메톡시벤질 알코올, 리그닌, 벤질 알코올, 신남산, 구아이아콜(guaiacol), 메틸 살리실레이트, 벤젠다이올, 벤조퀴논, 갈산, 살리실산, 유제놀, 카페산, 자일레놀 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
32. 제30항에 있어서, 상기 유도제는 3,4-다이메톡시벤질 알코올인, 방법.
33. 제30항에 있어서, 상기 유도제는 그 양이 약 30 mg/ml 내지 약 1000 mg/ml인, 방법.
34. 제33항에 있어서, 상기 유도제는 그 양이 약 200 mg/ml 내지 약 400 mg/ml인, 방법.
35. 제34항에 있어서, 상기 유도제는 그 양이 약 245 mg/ml 내지 약 350 mg/ml인, 방법.
36. 제30항에 있어서, 상기 액체 배양 배지의 pH를 약 5 내지 약 6으로 유지하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
37. 제30항에 있어서, 상기 액체 배양 배지에 질소원을 첨가하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
38. 제37항에 있어서, 상기 질소원은 쌀겨, 밀겨, 질산암모늄, 효모 추출물 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
39. 제38항에 있어서, 상기 질소원은 상기 배양 배지에 약 0.1 g/L 내지 약 25 g/L의 양으로 첨가되는, 방법.
40. 제39항에 있어서, 상기 질소원은 상기 배양 배지에 약 0.2 g/l 내지 약 20 g/L의 양으로 첨가되는, 방법.
41. 제40항에 있어서, 상기 질소원은 상기 배양 배지에 약 5 g/L 내지 약 20 g/L의 양으로 첨가되는, 방법.
42. 제30항에 있어서, 상기 액체 배양 배지를 인큐베이터 진탕기로 약 100 rpm 내지 약 200 rpm의 속도에서 교반하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
43. 제30항에 있어서, 상기 액체 배양 배지에 탄소원을 첨가하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
44. 제43항에 있어서, 상기 탄소원은 글루코스, 덱스트로스 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
45. 제44항에 있어서, 상기 탄소원은 상기 액체 배양 배지에 약 2.0 g/L 내지 약 20 g/L의 양으로 첨가되는, 방법.
46. 제45항에 있어서, 상기 탄소원은 상기 액체 배양 배지에 약 5.0 g/l 내지 약 15 g/L의 양으로 첨가되는, 방법.
47. 제46항에 있어서, 상기 탄소원은 상기 배양 배지에 약 5 g/L 내지 약 10 g/L의 양으로 첨가되는, 방법.
48. 제30항에 있어서, 상기 액체 배양 배지를 메시 스크린(mesh screen)으로 여과하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.

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