CN102579293B - 含有西伯利亚百合提取物的组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含西伯利亚百合提取物和载体的组合物。本发明还提供了增亮皮肤的方法，所述方法包括向需要进行皮肤增亮处理的皮肤施用西伯利亚百合提取物的步骤。

Description

含有西伯利亚百合提取物的组合物及其用途
技术领域
本发明涉及包含皮肤用植物提取物的组合物。更具体地讲，本发明涉及用于增亮皮肤的含有西伯利亚百合(Lilium siberia)提取物的组合物。
背景技术
本领域已知有多种增亮皮肤的产品。具体地讲，已知的是这样的产品，它们旨在增亮皮肤，减少不均匀皮肤色素沉着和色素斑(例如老年斑、雀斑等)外观和/或另外地处理诸如色素沉着过度、变色、黄褐斑、发黄等状况。然而，许多此类产品是不利的，这是因为它们在使用中往往具有低功效和/或表现出不可取的毒性或刺激性。因此，需要新的皮肤增亮材料。
西伯利亚百合是百合科百合属的成员。百合属包含广布于世界范围内的约110种植物。西伯利亚百合归类为百合杂交系栽培品种。根据中国文献[Zhao，Q；Li Q；Din，L&Lü，J；Studies on tissue culture and clonal propagation of Siberia，J.GansuSciences，(2003)，15(4)，p 52-55(Zhao，Q、LiQ、Din，L和Lü，J，西伯利亚百合的组织培养及无性繁殖研究，《甘肃科学学报》，2003年，第15卷第4期，第52-55页)]所述，西伯利亚百合源自天香百合和鹿子百合。除了对西伯利亚百合油的挥发性组分进行了某些研究，本领域对其化学多样性仍然知之甚少，参见例如Zhang，J；Ma，J；Yao，J；Yang，Y；Zhao，X；Shang，B；Tao，M；Studies on the composition of the volatile oil from the flowers ofLilium x Siberia，Xibei Zhiwu Xuebao(2003)，23(12)，2184-2187(Zhang，J、Ma，J、Yao，J、Yang，Y、Zhao，X、Shang，B、Tao，M，西伯利亚百合花挥发油化学成分的研究，《西北植物学报》，2003年，第23卷第12期，第2184-2187页)。最近，已对西伯利亚百合开展了无性繁殖，并且据描述其具有杂交优势、高耐寒性和高度的抗病性等期望特性，参见美国植物专利No.09,459。
本发明涉及这样的意外发现，即西伯利亚百合(东方百合)植物提取物对抑制皮肤表皮组织中黑素合成以及增亮皮肤具有出乎意料的有益效果。
发明内容
申请人已意外发现西伯利亚百合提取物可用于组合物(优选护肤组合物)中，以及用于皮肤增亮的方法中。
具体地讲，申请人已测试了各种西伯利亚百合提取物并且已发现此类提取物具有显著的和意想不到的皮肤增亮性质。更具体地讲，如本文实例中所详细描述的，申请人已测定了与西伯利亚百合提取物相关的、对UVB诱导的黑素生成的抑制活性并发现此类提取物对UVB诱导的黑素生成表现出显著的抑制活性(本领域已知这与皮肤增亮相关)。此外，申请人还测定了本发明提取物对皮肤等同材料的增亮性质(ΔL)，如实例中所示，提取物具有显著的增亮皮肤的有益效果。
因此，在一个方面，本发明涉及含有西伯利亚百合提取物和载体的组合物。
在另一方面，本发明涉及通过向需要此处理的皮肤局部施用含有有效量西伯利亚百合提取物的组合物来增亮皮肤的方法。
具体实施方式
如本文所用，术语“增亮皮肤”通常指使肤色、皮肤颜色和/或皮肤色度变淡、变亮、变白和/或均匀，和/或指祛黄，和/或指色素斑痕和/或病损(包括但不限于色素斑、黑色素斑、老年斑、日晒斑、衰老性着色班、雀斑(freckles)、单纯性雀斑痣、色素性日光性角化病、脂溢性角化病、黑斑病、痤疮斑痕、发炎后色素沉着过度、着色斑、雀斑(ephelides)、它们中两种或更多种的组合等等)的淡化和/或褪色。在某些实施例中，“增亮皮肤”还指增加的皮肤光亮度、光泽度、半透明度和/或发光和/或获得更光亮、光泽、半透明的或发光的肤色外观或较低的黄色或萎黄色肤色。在某些优选的实施例中，“增亮皮肤”指使肤色增亮和均匀，增加皮肤光亮度和/或淡化老年斑。
如本文所用，术语“需要进行皮肤增亮处理的皮肤”一般指表现出一种或多种选自如下特性的皮肤：具有低于41的个体类型角(Individual Typology Angle，ITA)测量值(根据2007年公布的COLIPA GUIDELINE：GUIDELINE FOR THE COLORIMETRIC DETERMINATIONOF SKIN COLOUR TYPING AND PREDICTION OF THE MINIMAL ERYTHEMAL DOSE(MED)WITHOUT UV EXPOSURE测定，将该文献以引用的方式并入本文，并且其在下文中进一步描述)的皮肤，发暗和/或萎黄的皮肤，包括UV暗化的皮肤，具有不均匀肤色的皮肤，或具有一处或多处色素斑痕和/或病损(包括但不限于色斑、黑色素斑、老年斑、日晒斑、衰老性着色班、雀斑(freckles)、单纯性雀斑痣、色素性日光性角化病、脂溢性角化病、黑斑病、痤疮斑痕、发炎后色素沉着过度、着色斑、雀斑(ephelides)、它们中两种或更多种的组合等等)的皮肤。在COLIPA指南中，皮肤颜色根据ITA值定义为：非常浅色的皮肤＞55；浅色皮肤41-55，中等色皮肤28-41，棕褐色皮肤＜28。在某些优选的实施例中，“需要进行皮肤增亮的皮肤”指皮肤的ITA值低于41，例如约40或更低，约35或更低，约30或更低，或更优选约28或更低的个体。在某些优选的实施例中，本发明涉及用于选自萎黄和/或暗化皮肤的需要进行皮肤增亮处理的皮肤上的组合物和方法。在某些其他优选的实施例中，本发明涉及用于需要进行选自老年斑、雀斑、痤疮后留下的斑痕以及它们中两种或更多种的组合的皮肤增亮处理的组合物和方法。
如本文所用，除非另外指明，否则组合物中所有的成分百分比均为活性/固体成分的重量百分比(按组合物的总重量计)。
如本文所用，“基本上不含”某一成分的组合物是指含有约2重量％或更少的该成分的组合物(按该组合物的总重量计)。优选地，基本上不含某一成分的组合物含有约1重量％或更少，更优选约0.5重量％或更少，更优选约0.1重量％或更少，更优选约0.05重量％或更少，更优选约0.01重量％或更少的该成分(按该组合物的总重量计)。在某些更优选的实施例中，基本上不含某一成分的组合物不含该成分，也就是说组合物中完全不含该成分。
如本文所用，“美容上/皮肤病学可接受的”是指该术语描述的成分适于与组织(如皮肤或毛发)接触使用而不会引起不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性反应等。
如本文所用，术语“安全有效量”意指多至足以产生预期效果但少至足以避免严重副作用的提取物或组合物的量。化合物、提取物或组合物的安全有效量将随着例如最终使用者的年龄、健康和环境暴露状况，治疗的持续时间和性质，采用的特定提取物、成分或组合物，以及所用的具体可药用载体等因素而变化。
西伯利亚百合的整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的任何合适提取物均可根据本发明使用。合适的提取物可来自活体植株或干燥植株、小插条或它们的其他部分等。
西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的合适提取物可用常规的方法获得，包括但不限于：通过研磨、浸渍、压榨、挤压、捣碎、离心，和/或诸如冷渗漉、搅拌/蒸馏、微波辅助萃取、使用或不使用极性修饰剂的超临界/亚临界CO2压缩气体提取、加压溶剂提取、加速溶剂提取、加压或常压热水提取、表面活性剂辅助的加压热水提取、油提取、膜提取、索氏提取、例如在授予Integrated Botanical Technologies，LLC的美国专利No.7442391、7473435和7537791(以引用的方式并入本文)中公开的金手指蒸馏/提取(goldfinger distillation/extraction)和/或工艺等等之类的工艺，或通过诸如溶剂萃取等之类的其他方法从生物质直接提取物质。包括极性溶剂、非极性溶剂或它们中的两种或更多种的组合在内的多种溶剂中的任一种可用于包括溶剂萃取的方法中。合适的极性溶剂包括：极性无机溶剂如水等等，极性有机溶剂如一元醇和相应的有机酸(例如包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等等在内的C1-C8醇和包括乙酸、甲酸、丙酸等等在内的有机酸)、多元醇和二醇(包括C1-C8多元醇/二醇等等)以及它们两种或更多种的组合。合适的非极性溶剂包括非极性有机溶剂如烷烃(包括C1-C8烷烃)、环烷烃(包括C1-C8烷烃)、烷基醚(包括C1-C8烷基醚)、石油醚、酮(包括C1-C8酮)、二氯甲烷、乙酸乙酯、二甲苯、甲苯、氯仿、植物油、矿物油等等。在另一个实施例中，可通过上述非极性溶剂或者使用或不使用极性调节剂如(C1-C8醇、水、C1-C8多元醇/二醇或C1-C8有机酸)的超临界流体提取而获得提取物。
在某些优选的实施例中，该提取物包含使用非极性溶剂从新鲜冷冻干燥的花朵中提取制备的非极性提取物，该非极性溶剂包含一种或多种C1-C8烷烃、C1-C8环烷烃、C1-C8烷基醚和/或氯仿，更优选地包含一种或多种C1-C8烷烃和/或氯仿。在某些更优选的实施例中，使用己烷、氯仿或它们的混合物从西伯利亚百合花朵中提取非极性提取物。在甚至更优选的实施例中，使用己烷从西伯利亚百合花朵中提取非极性提取物。在甚至更优选的实施例中，使用氯仿从西伯利亚百合花朵中提取非极性提取物。
在某些优选的实施例中，本发明的提取物包含使用极性溶剂从新鲜冷冻干燥的花朵中提取制备的极性提取物，该极性溶剂包含水、C1-C8醇、C1-C8多元醇、C1-C8二醇以及它们中两种或更多种的组合。在某些更优选的实施例中，极性提取物为使用水从西伯利亚百合花朵中提取的含水提取物。
在某些其他优选的实施例中，本发明的提取物包含从西伯利亚百合花朵中提取的极性和非极性提取物的组合。
在某些优选的实施例中，提取物包含通过使用非极性溶剂从西伯利亚百合球茎中提取制备的非极性提取物，该非极性溶剂包含一种或多种C1-C8烷烃、C1-C8环烷烃、C1-C8烷基醚和/或氯仿，更优选包含一种或多种C1-C8烷烃和/或氯仿。在某些更优选的实施例中，非极性提取物是使用己烷、氯仿或它们的混合物从西伯利亚百合球茎中提取的。在甚至更优选的实施例中，非极性提取物是使用己烷从西伯利亚百合球茎中提取的。在甚至更优选的实施例中，非极性提取物是使用氯仿从西伯利亚百合球茎中提取的。
在某些优选的实施例中，本发明的提取物包含通过使用极性溶剂从西伯利亚百合球茎中提取制备的极性提取物，该极性溶剂包括水、C1-C8醇、C1-C8多元醇、C1-C8二醇以及它们中两种或更多种的组合。在某些更优选的实施例中，极性提取物是使用水从西伯利亚百合球茎中提取的含水提取物。
在某些其他优选的实施例中，本发明的提取物包含从西伯利亚百合球茎中提取的极性和非极性提取物的组合。
在某些优选的实施例中，提取物包含通过使用非极性溶剂从西伯利亚百合茎秆中提取制备的非极性提取物，该非极性溶剂包含一种或多种C1-C8烷烃、C1-C8环烷烃、C1-C8烷基醚和/或氯仿，更优选包含一种或多种C1-C8烷烃和/或氯仿。在某些更优选的实施例中，非极性提取物是使用己烷、氯仿或它们的混合物从西伯利亚百合茎秆中提取的。在甚至更优选的实施例中，非极性提取物是使用己烷从西伯利亚百合茎秆中提取的。在甚至更优选的实施例中，非极性提取物是使用氯仿从西伯利亚百合茎秆中提取的。
在某些优选的实施例中，本发明的提取物包含通过使用极性溶剂从西伯利亚百合茎秆中提取制备的极性提取物，该极性溶剂包含水、C1-C8醇、C1-C8多元醇、C1-C8二醇以及它们中两种或更多种的组合。在某些更优选的实施例中，极性提取物是使用水从西伯利亚百合茎秆中提取的含水提取物。
在某些其他优选的实施例中，本发明的提取物包含从西伯利亚百合茎秆中提取的极性和非极性提取物的组合。
在某些优选的实施例中，提取物包含通过使用非极性溶剂从西伯利亚百合叶子中提取制备的非极性提取物，该非极性溶剂包含一种或多种C1-C8烷烃、C1-C8环烷烃、C1-C8烷基醚和/或氯仿，更优选一种或多种C1-C8烷烃和/或氯仿。在某些更优选的实施例中，非极性提取物是使用己烷、氯仿或它们的混合物从西伯利亚百合叶子中提取的。在甚至更优选的实施例中，非极性提取物是使用己烷从西伯利亚百合叶子中提取的。在甚至更优选的实施例中，非极性提取物是使用氯仿从西伯利亚百合叶子中提取的。
在某些优选的实施例中，本发明的提取物包含通过使用极性溶剂从西伯利亚百合叶子中提取制备的极性提取物，该极性溶剂包含水、C1-C8醇、C1-C8多元醇、C1-C8二醇以及它们中两种或更多种的组合。在某些更优选的实施例中，极性提取物是使用水从西伯利亚百合叶子中提取的含水提取物。
在某些其他优选的实施例中，本发明的提取物包含从西伯利亚百合叶子中提取的极性和非极性提取物的组合。
申请人已认识到，对于某些实施例，优选的西伯利亚百合提取物包含一种或多种多不饱和脂肪酸，该脂肪酸具有由下式I表示的结构：
R-COOH(I)
其中R为-(CH2)z-(CH＝CH-CH2)n-(CH2)m-CH3，其中n为1至6，m为0至6，z为2至7。在某些优选的实施例中，R选自：-(CH2)7-CH＝CH-CH2-(CH2)6-CH3、-(CH2)7-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3、-(CH2)7-(CH＝CH-CH2)3-CH3以及它们中两种或更多种的组合。在某些更优选的实施例中，多不饱和脂肪酸为ω-3、ω-6或ω-9脂肪酸或它们中两种或更多种的组合。ω-3脂肪酸的例子包括但不限于α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、全顺式-6，9，12，15-十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十二碳五烯酸、二十四碳六烯酸等。ω-6脂肪酸的例子包括但不限于亚油酸、γ-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳二烯酸、二十二碳二烯酸、二十二碳四烯酸、十八碳三烯酸等等。ω-9脂肪酸的例子包括但不限于油酸、芥酸、二十碳烯酸、二十碳三烯酸等等。
根据某些优选的实施例，西伯利亚百合的整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的提取物包含至少约0.005重量％(wt.％)的具有上式I结构的一种或多种多不饱和脂肪酸。在某些实施例中，提取物包含约0.0051至约100重量％的具有式I结构的多不饱和脂肪酸，更优选约1至约90重量％的具有式I结构的多不饱和脂肪酸，并且甚至更优选约40至约80重量％的具有式I结构的多不饱和脂肪酸。如本文所述和受权利要求书保护的，西伯利亚百合提取物中多不饱和脂肪酸的重量％的计算方法为：将提取物中式I表示的所有多不饱和脂肪酸的总固体含量的重量除以提取物的总固体含量的重量，再乘以100而得到百分比。
根据某些优选的实施例，西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的提取物包含一种或多种亲水性物质，所述亲水性物质选自多糖、低聚糖、二糖以及它们中两种或更多种的组合。多糖的例子包括但不限于直链淀粉、支链淀粉、β-葡聚糖、多聚糖、木聚糖、阿拉伯木聚糖、葡甘露聚糖以及它们中两种或更多种的组合等等。低聚糖的例子包括但不限于三糖，例如棉子糖、松三糖、麦芽三糖；四糖，例如阿卡波糖、水苏糖；五糖；以及它们中两种或更多种的组合等等。二糖的例子包括但不限于麦芽糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、松二糖、纤维二糖以及它们中两种或更多种的组合等等。
根据某些优选的实施例，西伯利亚百合的整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的提取物包含至少约0.005重量％的一种或多种多糖、低聚糖、二糖以及它们中两种或更多种的组合。在某些实施例中，提取物包含约0.01重量％至约80重量％的多糖、低聚糖、二糖以及它们中两种或更多种的组合，更优选约1至约重量％，甚至更优选约10至约20重量％的多糖、低聚糖、二糖以及它们中两种或更多种的组合。
在某些实施例中，西伯利亚百合的整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎包含一种或多种亲水性物质，所述亲水性物质选自氨基酸、吡咯啉衍生物、丁二酸及其酯以及它们中两种或更多种的组合。氨基酸的例子包括但不限于苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、丝氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、γ-氨基丁酸、羊毛硫氨酸、异亮氨酸、β-丙氨酸、甘氨酸、鸟氨酸、羟赖氨酸以及它们中两种或更多种的组合。在某些优选的实施例中，西伯利亚百合花朵提取物包含酪氨酸这种氨基酸。丁二酸类及其酯的例子包括但不限于苹果酸、衣酒石酸、琥珀酸、衣康酸、羟基仲康酸类、它们的烷基酯，以及它们中两种或更多种的组合。吡咯啉衍生物的例子包括但不限于乙基假白榄胺、假白榄胺及其葡糖苷、甲顺丁烯二酰胺、吡咯啉-2-酮及其衍生物(包括葡糖苷)、丽来灵、3-甲基-1-(2-氧代吡咯烷--5-基)-2，5-二羟基吡咯-2-酮及其类似物。
根据某些优选的实施例，西伯利亚百合的整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的提取物包含至少约0.001重量％的一种或多种氨基酸、吡咯啉衍生物、丁二酸及其酯以及它们中两种或更多种的组合。在某些实施例中，该提取物包含约0.0011重量％至约60重量％的氨基酸、吡咯啉衍生物、丁二酸类及其酯，以及它们中两种或更多种的组合，更优选包含约0.01重量％至约40重量％，并且甚至更优选包含约1重量％至约20重量％的氨基酸、吡咯啉衍生物、丁二酸类及其酯，以及它们中两种或更多种的组合。
根据本发明的某些实施例，西伯利亚百合提取物优选具有约100∶0至约10∶90的亲脂性物质与亲水性物质的固体重量比。如本文所用，“亲脂性物质”通常是指22℃下介电常数为约1至约15，优选为约2至15的物质(亲脂性物质的例子包括但不限于(多)饱和的和不饱和的脂肪醇/酸/酯等)，而“亲水性物质”是指22℃下介电常数大于15至约90，优选大于15至约80，在某些更优选的实施例中，为约35至约80的物质(亲水性物质的例子包括但不限于多糖、低聚糖、二糖、氨基酸、吡咯啉衍生物、丁二酸类及其酯等)。在某些更优选的实施例中，本发明的提取物包含约90∶10至约20∶80、更优选约80∶20至约40∶60固体重量比的亲脂性物质与亲水性物质。在某些尤其优选的实施例中，该提取物包含约80∶20固体重量比的亲脂性物质与亲水性物质。
在某些实施例中，制得的西伯利亚百合提取物和/或组合物。在某些优选的实施例中，该提取物基本上不含、更优选不含一种或多种饱和脂肪酸。此外，在某些优选的实施例中，总体组合物基本上不含、更优选不含一种或多种饱和脂肪酸。
在某些优选的实施例中，该提取物含有约3∶1或更大重量比的式I表示的总多不饱和脂肪酸与总饱和脂肪酸(总多不饱和脂肪酸固体重量：总饱和脂肪酸固体重量)。更优选地，提取物中式I表示的总多不饱和脂肪酸与总饱和脂肪酸的重量比为约4∶1至约9∶1或更大。在某些更优选的实施例中，式I表示的总多不饱和脂肪酸与总饱和脂肪酸的重量比为约99∶1或更大。
在某些实施例中，本发明的提取物和/或组合物可基本上不含某些其他物质。在一个实施例中，该提取物基本上不含一种或多种类黄酮、皂苷和/或类黄酮或皂苷的葡糖苷。在某些实施例中，该提取物和所得的组合物基本上不含类黄酮、皂苷及它们的葡糖苷。例如，在本发明的某些实施例中，可利用例如甲醇对极性或非极性提取物进一步提取，以基本上除去所有的类黄酮、皂苷和/或类黄酮或皂苷的葡糖苷，和/或可借助于色谱法或其他方法来除去此类物质。类黄酮、皂苷和/或它们的葡糖苷的例子包括但不限于：木犀草素、芹黄素、皂苷元、芸香糖苷、柑橘黄酮、槲皮素、山柰酚、8-(3-甲基琥珀酰基)山柰酚、杨梅酮、非瑟酮、异鼠李素、藿香黄酮醇、甲基鼠李黄酮、橙皮素、柚皮素、圣草酚、Etioline、高圣草酚、花旗松素(或二氢槲皮素)、二氢山萘酚、染料木素、大豆苷原、黄豆黄素、表儿茶素、2-苯乙基棕榈酸酯、丽来灵、原花青素、3，6’-二阿魏酰蔗糖、Helonioside A、异鼠李素-3-芸香糖苷、山柰酚-3-O-[b-D-木吡喃糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖苷]、山柰酚-3-O-[b-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-b-D-吡喃半乳糖苷]等等。
任何合适量的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物均可用于本发明组合物中。优选地，组合物包含安全有效量的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物。在某些优选的实施例中，组合物包含大于零至约20％的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物。在某些其他优选的实施例中，组合物包含约0.0001至约20％、约0.001至约10％、约0.01至约5％、约0.1至约5％、或约0.2至约2％的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物。在某些其他优选的实施例中，组合物包含大于零至约1％、约0.0001至约1％、约0.001至约1％、或约0.01至约1％的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物。在某些其他优选的实施例中，组合物包含约1至约5％、优选约2至约5％的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物。如本文所用，除非另外指明，否则组合物中所有的成分百分比均为活性/固体成分的重量百分比(按组合物的总重量计)。
在某些优选的实施例中，本发明的组合物包含总重量百分比为0.001至20重量％(按所有组合物的总重量中多不饱和脂肪酸的总重量计)的具有式I(以上所述)结构的多不饱和脂肪酸。可将式I表示的多不饱和脂肪酸作为西伯利亚百合提取物的部分引入组合物中和/或可将其独立于西伯利亚百合提取物引入组合物中。在优选的实施例中，组合物中的西伯利亚百合提取物包含组合物中的式I表示的多不饱和脂肪酸的至少一部分。在更优选的实施例中，本发明的组合物包含总重量百分比为0.01至10重量％、更优选0.1至5重量％、并且甚至更优选0.1至3重量％、或0.5至5重量％的式I表示的多不饱和脂肪酸。
任何合适的载体均可用于本发明的组合物。优选地，对于护肤组合物，该载体为美容上可接受的载体。正如本领域的技术人员将会认识到，美容上可接受的载体包括适于与身体尤其是皮肤接触以美白皮肤而无不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性反应等性质的载体。安全有效量的载体占组合物的约50％至约99.999％、优选约80％至约99.9％、更优选约99.9％至约95％、最优选约99.8％至约98％。载体可以各种形式存在。例如，包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅氧烷包水包油乳状液的乳状液载体均可用于本文。这些乳状液可涵盖一系列的粘度，例如从约100厘泊至约200,000厘泊。合适的美容上可接受的载体的例子包括美容上可接受的适于化妆品溶液、悬浮液、乳液、霜膏、精华素、精华液、凝胶、调色剂、棒状物、喷剂、油膏剂、洗液和条皂、洗发剂、护发剂、糊剂、泡沫、摩丝、粉末、剃须膏、擦拭物、贴片、带、强力贴片、微针贴片、绷带、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤贴膜、粉底、液滴等的溶剂和物质。这些产品类型可包含多种美容上可接受的载体，包括但不限于溶液、悬浮液、乳状液如微乳和纳米乳、凝胶、固体、脂质体、其他包封技术等。以下是此类载体的非限制性例子。其他的载体可由本领域普通技术人员配制。
在一个实施例中，载体包含水。在进一步的实施例中，载体还可包含一种或多种含水溶剂或有机溶剂。有机溶剂的例子包括但不限于：异山梨醇二甲基醚；豆蔻酸异丙酯；阳离子、阴离子和非离子性质的表面活性剂；植物油；矿物油；蜡；树胶；合成和天然的胶凝剂；链烷醇；二元醇和多元醇。二元醇的例子包括但不限于甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二甘醇、三甘醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己三醇以及它们的共聚物或混合物。链烷醇的例子包括但不限于那些具有约2个碳原子至约12个碳原子(例如，约2个碳原子至约4个碳原子)的链烷醇，如异丙醇和乙醇。多元醇的例子包括但不限于那些具有约2个碳原子至约15个碳原子(例如，约2个碳原子至约10个碳原子)的多元醇，如丙二醇。按载体的总重量计，载体中有机溶剂的含量可为约1％至约99.99％(例如，约20％至约50％)。按载体的总重量计，载体(使用前)中水的含量可为约5％至约95％(例如，约50％至约90％)。溶液可包含任意适量的溶剂，包括从约40至约99.99％。某些优选的溶液包含约50至约99.9％、约60至约99％、约70至约99％、约80至约99％或约90至99％。
洗剂可以由此类溶液制成。除了溶剂外，乳液通常含有至少一种润肤剂。乳液可包含约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的一种或多种润肤剂和约50％至约90％(例如，约60％至约80％)的水。
可由溶液配制的另一种产品是霜剂。霜剂通常包含约5％至约50％(例如，约10％至约20％)的一种或多种润肤剂和约45％至约85％(例如，约50％至约75％)的水分。
还可以由溶液配制的另一种产品是油膏剂。油膏剂可含有动物油、植物油或合成油或半固态烃的简单基料。膏剂可包含约2％至约10％的一种或多种润肤剂和约0.1％至约2％的一种或多种增稠剂。
可用于本发明的组合物还能配制成乳状液。如果载体是乳状液，则约1％至约10％(例如，约2％至约5％)的载体含有乳化剂。乳化剂可以为非离子型、阴离子型或阳离子型。
洗剂和软膏可配制成乳状液。此类乳液通常含有0.5％至约5％的一种或多种乳化剂，而此类霜膏通常含有约1％至约20％(如约5％至约10％)的一种或多种润肤剂、约20％至约80％(如30％至约70％)的水以及约1％至约10％(如约2％至约5％)的一种或多种乳化剂。
水包油型和油包水型单相乳状液护肤制剂(例如乳液和霜膏)是本领域所熟知的，并且可用于本主题发明。多相乳状液组合物(例如水包油包水型或油包水包油型)也可用于本主题发明。通常，此类单相乳状液或多相乳状液含有水分、润肤剂和乳化剂作为其基本成分。
本发明的组合物还可配制成凝胶(例如，使用合适的一种或多种胶凝剂制成的含水醇、醇/水或油凝胶)。用于水性凝胶和/或醇类凝胶的适当胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。用于油(例如矿物油)的适当胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。此类凝胶通常包含介于约0.1重量％和5重量％之间的此类胶凝剂。
本发明的组合物也可配制成固体制剂(如，蜡基棒剂、条皂组合物、粉剂或擦拭物)。本发明的组合物还可与固体、半固体或可溶解的基材(如，擦拭物、面膜、垫、手套或带)结合。
本发明的组合物还可包含多种附加的美容活性剂的任何一种。合适的附加活性剂的例子包括：附加的亮肤剂、深色剂、抗痤疮剂、控油光剂、抗微生物剂如抗酵母剂、抗真菌剂和抗菌剂、抗炎剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光照保护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、洗涤剂/表面活性剂、保湿剂、营养物质、维生素、能量增强剂、止汗剂、收敛剂、除臭剂、脱毛剂、毛发生长促进剂、毛发生长延缓剂、固化剂、补水剂、增效剂、抗硬结剂、皮肤调理剂、抗蜂窝炎剂、氟化物、牙齿美白剂、抗牙斑剂，以及牙斑助溶剂、气味控制剂(如气味遮盖剂)或pH调节剂等。各种合适的美容上可接受的附加活性物质的例子包括羟基酸、过氧化苯甲酰、D-泛醇、紫外线过滤剂(例如但不限于阿伏苯宗(Parsol 1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙基氨基羟基苯甲酰苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依茨舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol 5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(恩索利唑)、聚硅氧烷-15(Parsol SLX)、水杨酸三乙醇胺、双-乙基己氧基苯酚甲氧基苯基三嗪(TinosorbS)、二苯甲酮1-12、二羟苯宗、甲酚曲唑三硅氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、氰双苯丙烯酸辛酯、羟甲氧二苯酮(Eusolex 4360)、磺异苯酮、亚甲基二苯并三唑4-叔辛基苯酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌)、类胡萝卜素、自由基清除剂、自旋捕捉剂、类视色素和类视色素前体(如视黄醇、视黄酸和棕榈酸视黄酯)、神经酰胺、多不饱和脂肪酸、必需脂肪酸、酶、酶抑制剂、矿物质、激素(如雌激素)、类固醇(如氢化可的松、2-二甲基氨基乙醇)、铜盐(如氯化亚铜)、含有铜的肽(如Cu：Gly-His-Lys)、辅酶Q10、氨基酸(如脯氨酸)、维生素、乳糖酸、乙酰辅酶A、烟酸、核黄素、硫胺、核糖、电子传递体(如NADH和FADH2)和其他植物提取物(如燕麦、芦荟、小白菊、大豆、香菇提取物)以及它们的衍生物和混合物。
在某些优选的实施例中，本发明的组合物为包含西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物以及至少一种附加的皮肤增亮活性剂的护肤组合物。合适的附加皮肤增亮活性剂的例子包括但不限于酪氨酸酶抑制剂、黑素抑制剂、黑素转移抑制剂(包括PAR-2拮抗剂)、剥脱剂、防晒剂、类视色素、抗氧化剂、氨甲环酸、皮肤漂白剂、尿囊素、遮光剂、滑石和二氧化硅、锌盐等以及Solano等人的Pigment Cell Res.19(550-571)(Solano等人，《色素细胞研究》，第19期第550-571页)中所述的其他试剂。
合适的酪氨酸酶抑制剂的例子包括但不限于维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物、曲酸、熊果苷、间苯二酚、对苯二酚、黄酮(如甘草总黄酮、甘草根提取物、桑树根提取物、菊叶薯蓣根提取物、虎耳草提取物等)、鞣花酸、水杨酸盐和衍生物、葡糖胺和衍生物、富勒烯、扁柏酚、脂羟基酸(Dioic acid)、乙酰氨基葡萄糖、厚朴木脂体，以及它们中两种或更多种的组合等。维生素C衍生物的例子包括但不限于抗坏血酸和盐、抗坏血酸-2-葡糖苷、维生素C磷酸酯钠、维生素C磷酸酯镁，以及富含维生素C的天然提取物。维生素E衍生物的例子包括但不限于α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚以及它们的混合物、生育酚乙酸酯、生育酚磷酸酯以及富含维生素E衍生物的天然提取物。间苯二酚衍生物的例子包括但不限于间苯二酚、4-取代的间苯二酚如4-烷基间苯二酚(例如4-正丁基间苯二酚(rucinol)、4-己基间苯二酚)、苯乙基间苯二酚、1-(2，4-二羟基苯基)-3-(2，4-二甲氧基-3-甲基苯基)-丙烷等，以及富含间苯二酚的天然提取物。水杨酸盐的例子包括但不限于水杨酸、乙酰水杨酸、4-甲氧基水杨酸以及它们的盐。在某些优选的实施例中，酪氨酸酶抑制剂包括4-取代的间苯二酚、维生素C衍生物或维生素E衍生物。在更优选的实施例中，酪氨酸酶抑制剂包括苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚或抗坏血酸-2-葡糖苷。
合适的黑素降解剂的例子包括但不限于过氧化物和酶，如过氧化物酶和木素酶。在某些优选的实施例中，黑素抑制剂包括过氧化物或木素酶。
合适的黑素体转移抑制剂的例子包括PAR-2拮抗剂如大豆胰蛋白酶抑制剂或Bowman-Birk抑制剂、维生素B3和衍生物如烟酰胺、大豆精华、全大豆、大豆提取物。在某些优选的实施例中，黑素体转移抑制剂包括大豆提取物或烟酰胺。
剥离素的例子包括但不限于α-羟基酸(如乳酸、乙醇酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或上述物质的任意组合)、β-羟基酸(如水杨酸)、多羟基酸(如乳糖酸和葡萄糖酸)，以及机械剥离(如微晶换肤术)。在某些优选的实施例中，剥离素包括乙醇酸或水杨酸。
防晒剂的例子包括但不限于阿伏苯宗(Parsol 1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(UvinulA Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、聚硅氧烷-15(ParsolSLX)、水杨酸三乙醇胺、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(TinosorbS)、二苯酮1-12、二羟苯宗、甲酚曲唑三烷氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、奥克立林、氧苯酮(Eusolex 4360)、舒利苯酮、亚甲基二苯并三唑四甲基丁酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌等等。
类视色素的例子包括但不限于视黄醇、视黄醛、视黄酸、视黄基棕榈酸酯、异维A酸、他佐罗汀、贝沙罗汀和阿达帕林。在某些优选的实施例中，类视色素为视黄醇。
抗氧化剂的例子包括但不限于水溶性抗氧化剂如巯基化合物和它们的衍生物(如焦亚硫酸钠和N-乙酰基半胱氨酸、谷胱甘肽)、硫辛酸和二氢硫辛酸、茋类化合物如白藜芦醇和衍生物、乳铁蛋白、抗坏血酸和抗坏血酸衍生物(如抗坏血酸-2-葡糖苷、抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽)。适用于本发明的组合物中的油溶性抗氧化剂包括但不限于丁基化羟基甲苯、类视色素(如，视黄醇和视黄基棕榈酸酯)、生育酚类(如，生育酚乙酯)、生育三烯酚类和泛醌。包含适用于本发明的组合物中的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：包含黄酮类和异黄酮类以及它们的衍生物(如，染料木黄酮和二联玉米蛋白)的提取物、包含白藜芦醇的提取物等。此类天然提取物的例子包括葡萄籽、绿茶、松树皮、小白菊、不含小白菊素的小白菊、燕麦提取物、柚子提取物、麦芽提取物、Hysperedin、葡萄提取物、马齿苋提取物、甘草查耳酮、查耳酮、2，2’-二羟基查耳酮、报春花提取物、蜂胶等。
组合物中可存在任意适量的附加美容活性剂，例如含量为约组合物的0.0001重量％至约20重量％，如约0.001重量％至约10重量％(如约0.01重量％至约5重量％)。在某些优选的实施例中，该含量为0.1重量％至5重量％，而在其他优选实施例中，该含量为1重量％至2重量％。
许多其他物质也可存在于本发明的组合物中。这些物质包括例如螯合剂、湿润剂、遮光剂、调理剂、防腐剂、芳香剂等。组合物可包含表面活性剂，例如选自阴离子、非离子、两性离子、阳离子型表面活性剂的那些或它们中两种或更多种的组合。
在某些优选的实施例中，本发明的形式为包含本发明组合物的基材。任何合适的基材均可用于本发明。例如在已公布的美国专利申请No.2005/0226834和2009/0241242中公开了合适的基材和基材材质的例子，该专利全文以引用方式并入本文。
在某些优选的实施例中，基材为擦拭物或面膜。优选地，此类实施例包含水不溶性基材，此类基材如上文引用的文献中所定义。对于某些实施例，水不溶性基材可具有一定的尺寸和形状，以便能够覆盖个人使用者的面部，从而有利于将水不溶性基材作为面膜基材放在使用者的脸上。例如，水不溶性面膜基材可具有为使用者的嘴、鼻和/或眼配置的开口。作为另外一种选择，水不溶性基材可不具此类开口。这种无开口的构造可用于本发明的一些实施例，其中水不溶性基材旨在用于覆盖非面部的大片皮肤或水不溶性基材旨在用作擦拭物。水不溶性基材可具有各种形状，如有角形状(如矩形)或弓形，例如圆形或椭圆形。
在本发明的一个实施例中，产品包括多个具有不同形状的水不溶性基材。在本发明的一个实施例中，产品包括第一种水不溶性基材和第二种水不溶性基材。第一种水不溶性基材被成形为施用于前额上，而第二种水不溶性基材则被成形为施用于嘴部附近，如唇的上方区域和/或下方区域、下巴和/或面颊。在本发明的一个实施例中，第一种水不溶性基材还可施用于面部的鼻区。第一种水不溶性基材的表面积可为约100cm2至约200cm2，如约120cm2至约160cm2，而第二水不溶性基材的表面积为约100cm2至约300cm2，如约150cm2至约250cm2。在本发明的一个实施例中，水不溶性基材的硬度较低，使得可以例如轻易地覆盖或服贴于使用者的面部或其他身体部位。
本发明还包括增亮皮肤的方法，该方法通过向需要进行皮肤增亮处理的皮肤施用西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的提取物来进行，此类提取物及其实施例如上文所述。在某些实施例中，该方法包括向需要进行皮肤增亮处理的皮肤施用含有西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎的提取物的本发明组合物，此类组合物如上文多个实施例所述。
本发明可包括向身体上任何需要处理的皮肤施用。例如，可在面部、颈部、胸部、背部、臂部、腋部、手部和/或腿部的任何一处或多处皮肤上进行施用。
优选地，本发明的方法包括向皮肤施用安全且皮肤增亮有效量的西伯利亚百合整棵植株、花朵、茎秆、叶子和/或球茎提取物。在某些优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用大于零至约20％的西伯利亚百合提取物。在某些其他优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用约0.0001至约20％、约0.001至约10％、约0.01至约5％、约0.1至约5％、或约0.2至约2％的西伯利亚百合提取物。在某些其他优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用大于零至约1％、约0.0001至约1％、约0.001至约1％或约0.01至约1％的西伯利亚百合提取物。在某些其他优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用约1至约5％、优选约2至约5％的西伯利亚百合提取物。
可根据本发明使用任何适于将提取物施用于有需要的皮肤的方法。例如，可将提取物直接从包装中施用于有需要的皮肤上，用手施用于有需要的皮肤上，或可通过基材(如擦拭物或面膜)来转移，或它们中两种或更多种的组合。在其他实施例中，可通过点滴器、管、辊、喷剂、贴片来施用提取物，或将提取物加入浴盆中或换句话讲加入水中以施用于皮肤上等等。
在某些实施例中，本发明的方法还包括使西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物与皮肤接触一段时间的步骤。例如，在某些优选的实施例中，施用后，可让提取物与皮肤接触大约15分钟或更长的时间。在某些更优选的实施例中，让提取物与皮肤接触约20分钟或更长的时间，更优选约1小时或更长的时间。
在某些实施例中，本发明的方法包括在选定的时间段内多次向皮肤施用西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物的方案。例如，在某些实施例中，本发明提供了皮肤增亮方法，该方法包括向需要进行皮肤增亮的皮肤施用含有西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物的组合物至少12周，每天一次或两次，优选至少8周，更优选至少2周。
在某些优选的实施例中，本发明的方法包括向皮肤施用含有西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物的至少两种不同的组合物或产品。例如，该方法可包括向需要进行皮肤增亮的皮肤施用含有西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物的第一组合物，接着向需要进行皮肤增亮的皮肤施用含有西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物但不同于第一组合物的第二组合物。在某些优选实施例中，第一种和第二种组合物可独立地选自乳液、清洁剂、面膜、擦拭物、霜膏、精华素、凝胶等等。在某些优选的实施例中，第一种和第二种组合物中的至少一种为清洁剂、乳液、霜膏、精华液或精华素，而另一种为面膜或擦拭物。在某些其他优选实施例中，第一种和第二种组合物中的至少一种为清洁剂，而另一种为乳液或霜膏。
在某些其他优选的实施例中，该方法包括向需要进行皮肤增亮的皮肤施用含有西伯利亚百合整棵植株、花朵和/或球茎提取物的至少三种产品。优选地，这三种产品选自清洁剂、乳液、霜膏、精华液和面膜。
实例
实例中采用了以下测试方法：
黑素合成抑制测试
如下所示制备B16(F10)鼠黑素瘤细胞的对照样品并收获，但不添加任何测试样品，也不暴露于UVB(未处理的对照)。如下所示制备其他对照样品并收获，其中不添加测试样品，但如下所述将其暴露于UVB(处理的对照)。制备一个或多个B16(F10)细胞样品，都用测试样品(如E1)进行预处理，然后如下所述将其暴露于UVB。处理后，UVB刺激了细胞中黑素的生成，然后根据测试化合物抑制或降低黑素生成速率的能力来评价该测试化合物。裂解细胞以在595nm处进行蛋白测量，在470nm处进行黑素含量测量。通过将测试化合物获得的抑制百分比与处理的对照进行比较，以确定测试化合物的效力。
测试过程：
第一天，以约1百万个细胞/平板的密度将鼠黑素瘤B16(F10)细胞接种于60mm平板中，并在37℃、5％CO2的条件下温育48小时。第2天，利用预定浓度(如25μg/mL)的测试化合物处理汇合率为90-100％的细胞两小时(仅限测试化合物样品)，然后将其暴露于20mJ/cm2的UVB中(用于测试样品和处理的对照)。在第三天(对测试样品和处理的对照进行UVB照射后24小时)收获细胞，将其在蛋白裂解缓冲液(50mM Tris，pH8，2mM EDTA，150mM NaCl，和1％Triton×100-购自BioRad目录号161-0407的非离子表面活性剂)中裂解，然后离心。将所得的上清液与蛋白染料定量分析试剂(Bio-rad蛋白定量分析试剂)充分混合，然后使用分光光度计(Molecular Devices VERSAmax)在595nm处测定样品的光密度(蛋白定量分析OD)。将除去上清液后剩下的细胞沉淀溶于碱性DMSO缓冲液中，然后将所得的溶液用于470nm处的黑素吸光度测定，从而确定黑素定量分析OD。
未处理对照、处理对照和测试样品各制备3个样品，然后测量各样品的黑素和蛋白OD值。通过以下公式计算各未处理对照(3个样品)、处理对照(3个样品)和测试样品(每种测试化合物3个样品)的归一化黑素：
归一化黑素＝黑素定量分析OD/蛋白定量分析OD。
计算未处理对照的平均归一化黑素(三个计算值之和除以3)，然后用同样方法计算处理对照的平均归一化黑素。
通过以下公式计算对照的诱导值：
对照的诱导值＝处理对照的平均归一化黑素-未处理对照的平均归一化黑素。
然后通过以下公式计算各个测试样品的诱导值：
测试样品的诱导值＝测试样品的归一化黑素-未处理对照的平均归一化黑素。
然后通过以下公式计算各个测试样品的抑制百分比：
100×[(对照的诱导值-测试样品的诱导值)/对照的诱导值]。平均抑制百分比的计算方法为：各个测试样品的三个所得抑制百分比值的总和除以3。
通过理论实例解释抑制百分比的计算顺序，参见下表。
用作皮肤增亮测试(ΔL)的皮肤表皮等效模型
皮肤表皮等效组织可从MatTek的MelanoDermTMSystem商购获得并用于以下测试。MatTek的MelanoDermTMSystem由正常的人源性表皮角质细胞(NHEK)和黑素细胞(NHM)组成，这些细胞已经过培养形成了多层、高度分化的人表皮模型。具体地讲，在以下测试中采用了MEL-300-B组织，每个的直径均为9mm。
每天将这些采用适当载体并以测试浓度制备的测试材料局部施用于皮肤模型上，实验持续8天。在第9天进行测量。
通过用数码相机拍照，测出宏观和微观视觉组织颜色变深终点。使用分光光度计(Konica Minolta CM-2600d)测出各组织的明亮度(L值)。按照以下公式计算每个测试样品的ΔL(相比于对照的明亮度)：
ΔL＝处理样品的L值-对照样品的L值。
根据某些优选的实施例，本发明的组合物可有效获得大于0的根据本测试的ΔL值。更优选本发明的组合物能有效达到约0.15或更大、更优选约0.5或更大、更优选约1或更大、更优选约1.5或更大、并且更优选约2或更大的ΔL。
细胞活力测试
使用如下所述的MTT测定法来评估实验期间组织的细胞活力。MTT组织活力测定是一种比色测定系统，它测量活细胞线粒体将黄色噻唑兰(MTT)还原为紫色不溶性产物的能力。
将之前用来测定各测试材料和未处理组织的明亮度的皮肤表皮组织用于测定实验结束时剩余的活细胞的百分比。在增亮程度测试之后将皮肤表皮组织与MTT试剂共同温育3h。温育结束后，加入提取缓冲液以裂解细胞并放置过夜。利用酶标仪在570nm的波长处读取样品，然后与未处理的对照进行比较，以相对于对照的细胞存活百分比表示。相对对照物的细胞存活率降低≥30％可视为显著标志着测试材料引起了细胞毒性。产生的紫色的量与活细胞数成正比。
实例1：西伯利亚百合花朵提取物(E1-E4和E2′-E3′)的制备：
按照如下方法制备提取物：将西伯利亚百合花朵的干燥粉末(得自Layn NaturalIngredients)以适当的1∶10的比率(原料/溶剂)悬浮于溶剂(如表1中所示)中。将该悬浮液在室温下搅拌12h。然后通过过滤除去上清液。在30-40℃下，在蒸发仪中减压蒸发溶剂。
表1：得自西伯利亚百合花朵干燥粉末的E1-E4提取物。
花朵提取物 溶剂
E1 己烷
E2 水
E3 甲醇
E4 氯仿
E1和E4的HPLC分析显示它们主要由脂质(至少50％或更多)、特别是不饱和ω脂肪酸和它们的酯组成。在E1&E4中鉴定的许多ω脂肪酸和饱和脂肪酸包括亚油酸、亚麻酸、甘油三酯和棕榈酸。提取物E2和E3主要由极性组分组成，其不含有或含有非常少量的脂质。
按照如下方法制备提取物E2′-E3′：将西伯利亚百合花朵干燥粉末用己烷提取并移出，得到“脱脂”花朵材料。然后将该脱脂花朵材料用水或甲醇(如表2所示)在室温下提取12h。通过过滤去除上清液，再经活性炭处理去除过量的有色材料，将其过滤并干燥。HPLC分析显示，E2′和E3′分别与E2和E3相比，它们的组成没有显著的差异。
表2：西伯利亚百合花朵提取物
花朵提取物 溶剂
E2′ 水
E3′ 甲醇
实例2：西伯利亚百合球茎提取物(E5-E8)的制备：
按照如下方法制备提取物：将西伯利亚百合球茎的干燥粉末(得自Layn NaturalIngredients)以适当的1∶10的比率(原料/溶剂)悬浮于溶剂(如表3中所示)中。将该悬浮液在室温下搅拌12h。然后通过过滤除去上清液。在30-40℃下，在蒸发仪中减压蒸发溶剂。
表3：得自西伯利亚百合球茎干燥粉末的E5-E8提取物。
球茎提取物 溶剂
E5 己烷
E6 水
E7 甲醇
E8 氯仿
E5和E8的HPLC分析显示它们主要由脂质(至少50％或更多)、特别是不饱和ω脂肪酸和它们的酯组成。提取物E8主要由一种未鉴定的主要组分组成，该组分在大多数其他ω脂肪酸之后洗脱。在E5&E8中鉴定了许多ω脂肪酸和饱和脂肪酸，例如亚油酸、亚麻酸、甘油三酯和棕榈酸。提取物E6和E7主要由极性组分组成，其不含有或含有非常少量的脂质。
实例3：西伯利亚百合球茎或花朵浆液提取物的制备：
在另一个实例中，植物浆液提取物由整个球茎或整朵花的细胞汁制备。详细的提取方法公布于专利文献US 7442391B2中。该方法通过选择性地将所需的生物活性剂浓缩在一种提取物中从而提供了最大化抑制黑素生成的独特机会。
实例4：测定黑素合成的抑制活性：
根据黑素合成的抑制测试，在B16细胞中测试提取物E1-E8对UVB诱导的黑素合成的抑制作用。提取物E1-E8的生物活性数据IC50值列于表4中。
表4：对UVB诱导的黑素合成的抑制数据
还测得提取物E1-E8对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用达0.1％，但任何提取物均未发现有显著活性。
实例5：测定皮肤表皮等同物模型中黑素合成的抑制活性：
根据皮肤表皮等同物模型的皮肤增亮测试(ΔL)，测定了E4(在表5中列出的浓度下)的皮肤增亮功效。测定结果证实了E4的增亮功效，数据记录于表5中。
表5：增亮程度
实例6：组合物的制备
使用如下表6中的成分制备具有来自西伯利亚百合的皮肤增亮活性物质的霜剂的典型产品配方。
表6
按照标准程序混合各成分。此处描述了简要的一般程序以供参考。
预混物A：将西伯利亚百合花朵提取物溶解于丁二醇和水中
预混物B：将甘油与黄原胶180混合至得到均匀的混合物。
预混物C：将SP 500分散在丁二醇中
水相：
○将水加入容器中，开始搅拌，加入EDTA BD混合至均匀
○洒入Pemulen TR-1和Carbopol Ultrez 20并混合至得到半透明混合物
○加入Prodew 300、丁二醇和黄原胶预混物B至混合均匀
○开始加热至80-83℃
○在70-75℃时，加入对羟基苯甲酸甲酯并混合至均匀
○在80℃时，加入氢氧化钠以中和水相，并在调整相态前保持温度不变
油相：
混合Miglyol 815、Finsolve TN、Lanette 22、Edenor ST1 MY、Brij721、CetiolSB45、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯并加热至80℃，确认达到透明的熔融状态后混合20分钟。在80℃时，加入Amphisol K并混合至均匀分散。调整相态前，将温度保持在80-83℃。
调整相态：
○在均化条件下将油相加入水相
○加入Simulgel EG并混合至均匀。直至观察到增稠效果后才继续操作。
○开始冷却至60-65℃
○在60-65℃时，缓慢加入预混物A。
○在55-60℃时，加入DC 200 50cst、DC 345和DC 1403并混合至均匀
○在45℃时，加入预混物C
○在低于35℃时，加入Hydrolite 5、葡萄糖酸氯己定并混合至均匀，然后将该批物料匀化5分钟。

Claims (23)

1.一种组合物，所述组合物包含提取物、载体和材料，所述提取物选自西伯利亚百合干燥花朵提取物、西伯利亚百合球茎提取物以及它们的组合，其中所述提取物包含40-80重量％具有式I所示结构的多不饱和脂肪酸：R-COOH(I)，其中R为-(CH2)z(CH＝CH-CH2)n(CH2)mCH3，其中n为1至6，m为0至6，z为2至7；所述材料选自表面活性剂、螯合剂、润肤剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂以及它们中两种或更多种的组合；其中所述提取物包含非极性提取物，所述非极性提取物是使用一种或多种溶剂提取的，所述溶剂选自C1-C8烷烃和氯仿，且其中所述非极性提取物不含类黄酮、皂苷及其葡萄糖苷。
2.根据权利要求1所述的组合物，所述材料是湿润剂。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述提取物是西伯利亚百合球茎提取物。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含大于0至20％的西伯利亚百合提取物。
5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含0.1％至5％的西伯利亚百合提取物。
6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物为如下形式：溶液、悬浮液、乳液、霜膏、精华素、凝胶、棒剂、喷雾剂、油膏剂、洗液、条皂、洗发剂、护发剂、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须膏或成膜产品。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述组合物为水凝胶的形式。
8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含其它皮肤增亮活性剂。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述其它亮肤剂选自苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚、α-熊果苷、曲酸、1-(2,4-二羟苯基)-3-(2,4-二甲氧基-3-甲基苯基)丙烷、抗坏血酸-2-葡糖苷、大豆提取物、烟酰胺以及它们中两种或更多种的组合。
10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述载体包括乳状液。
11.根据权利要求1所述的组合物，所述提取物是用己烷、氯仿或它们的混合物提取的。
12.一种面膜，所述面膜包含面膜基材和根据权利要求1所述的组合物。
13.一种组合物，其包含：西伯利亚百合干燥花朵的提取物，所述提取物通过将西伯利亚百合干燥花朵悬浮在溶剂中并在30-40℃减压条件下蒸发所述溶剂制得，其中所述溶剂选自下组：C1-C8烷烃和氯仿，其中所述提取物包含40-80重量％具有式I所示结构的多不饱和脂肪酸：R-COOH(I)，其中R为-(CH2)z(CH＝CH-CH2)n(CH2)mCH3，其中n为1至6，m为0至6，z为2至7；载体；和选自下组的材料：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂以及它们中两种或更多种的组合。
14.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述材料是湿润剂。
15.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述提取物是用西伯利亚百合花朵的干粉制得的。
16.如权利要求15所述的组合物，其特征在于，所述提取物是将西伯利亚百合花朵的干粉以1：10的原料溶剂比悬浮在溶剂中制备的。
17.如权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述提取物是在室温搅拌悬浮液12小时制备的。
18.如权利要求17所述的组合物，其特征在于，所述提取物是通过过滤去除上清液制备的。
19.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述提取物是通过过滤去除上清液制备的。
20.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述溶剂选自下组：己烷和氯仿。
21.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述西伯利亚百合干燥花朵提取物是冷冻干燥花朵提取物。
22.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述西伯利亚百合球茎提取物获自西伯利亚百合干燥球茎粉末。
23.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述提取物来自干燥植株。
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