CN108610392B - 氟维司群正相色谱纯化方法 - Google Patents

氟维司群正相色谱纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及氟维司群正相色谱纯化方法，具体涉及一种氟维司群的正相高效液相色谱纯化方法，能高纯度制备氟维司群，包括以下步骤：a、将氟维司群粗品吸附在色谱柱填料上；b、用第一流动相和第二流动相梯度洗脱；c、收集正组份得到氟维司群纯品。该方法提高了氟维司群纯化效率，降低了生产成本，适合于大规模生产。

Description

氟维司群正相色谱纯化方法
技术领域
本发明涉及医药化学领域，具体涉及氟维司群正相色谱纯化方法。
背景技术
2002年，氟维司群获美国FDA批准由阿斯利康上市，商品名为Faslodex，主要用于抗雌激素疗法治疗无效、雌激素受体呈阳性的绝经后晚期乳腺癌的治疗。
氟维司群(Fulvestrant)，化学名为7α-[9-(4,4,5,5,5-五氟戊亚磺酰基)壬基]雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇，分子式为C32H47F5O3S。
Figure BDA0001177405820000011
氟维司群分子是由甾族骨架和7位长侧链两部分组成，合成难度大。从已经公开的多种合成路线中可知，氟维司群粗品需要经过反复的重结晶或柱层析才能得到合格的成品，纯化效率普遍偏低。
发明内容
本发明提供了一种高效氟维司群正相色谱纯化的方法，包括以下步骤：
a、将纯化前的氟维司群粗品吸附在填充在色谱柱中的色谱柱填料上；
b、用第一流动相和第二流动相梯度洗脱；
c、收集正组份得到氟维司群。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，更加详细的操作步骤包括：
溶解步骤：将氟维司群粗品溶解于有机溶剂中，经微孔滤膜过滤，收集滤液；
上样步骤：将上步所得滤液，用进样泵匀速泵入色谱柱，使其吸附在色谱柱填料上；
洗脱步骤：按设定好的洗脱梯度，将样品逐渐洗脱，并按收集参数收集合格组分；
将收集的含有氟维司群的合格组分，按照如下步骤处理：
洗涤步骤：将上步所得合格组分减压浓缩至干，剩余油状物溶解于乙酸乙酯，纯化水洗涤两次，收集有机层并减压浓缩至干；
析晶步骤：将上步所得油状物溶解于乙酸乙酯，低温析晶得氟维司群成品。
所述溶解步骤中，溶解纯化前氟维司群粗品的溶剂选自乙醇、甲醇、乙腈、异丙醇、正己烷、正庚烷或石油醚中的一种或几种，例如甲醇和正己烷的混合溶液，乙醇和正己烷的混合溶液。
所述溶解步骤中，粗品溶液的浓度为50～150mg/ml，优选浓度80～120mg/ml，最优浓度90～100mg/ml。
所述溶解步骤中，滤膜选用0.45μm的有机微孔滤膜。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，色谱柱填料可以选用硅胶填充微粒、多孔聚合物填充微粒、氧化铝基质填料等硅胶填料和非硅胶填料。
色谱柱填料选用硅胶填充微粒，可以选用球形硅胶填料，填料粒径范围为10～30μm，优选20μm；填料孔道大小为
Figure BDA0001177405820000021
优选
Figure BDA0001177405820000022
以色谱柱填料为正相硅胶填料为例，本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法中色谱柱的装填方法为：将所需质量M克的正相硅胶填料用乙醇或氯仿等有机溶剂充分匀浆后，用装柱系统自动装填为内径为D厘米、长为L厘米的色谱柱，其中M＝3.14×(D/2)2×L×0.6。例如，4710g的正相硅胶填料装填250mm×200ID动态轴向压缩柱；295g的正相硅胶填料装填250mm×50ID动态轴向压缩柱。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，每克色谱柱填料吸附的氟维司群粗品小于25mg，优选每克色谱柱填料吸附氟维司群粗品9mg～18mg。本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，洗脱步骤采用的第一流动相和第二流动相均为极性有机溶剂和非极性有机溶剂的混合溶液，其中极性有机溶剂选自乙醇、甲醇、乙腈或异丙醇，非极性有机溶剂选自正己烷或正庚烷。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，洗脱步骤采用的第一流动相和第二流动相均为甲醇和正己烷混合溶液。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，第一流动相为体积比5％～11％甲醇和正己烷混合溶液，例如9％甲醇和正己烷混合溶液。第二流动相为体积比12％～18％甲醇和正己烷混合溶液，例如11％甲醇和正己烷混合溶液。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，采用紫外检测器，检测波长为225nm。在梯度洗脱步骤中的合格组分收集参数为：紫外吸收峰值升高至50mAU～500mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％～100％停止收集。收集合格组分参数还可以是：紫外吸收峰值升高至100mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。
本发明提供的氟维司群正相色谱纯化方法，洗脱梯度为：0～10分钟，100％第一流动相；10～12分钟，100％第二流动相；12～60分钟，100％第二流动相。
所述析晶步骤中，析晶温度为10～20℃，析晶时间为150min～160min。
本发明采用正相色谱技术，不但减少了反复萃取洗涤、多次析晶的操作，而且纯化效率很好，大大简化了精制的操作，节省大量的人力物力，降低了生产成本，适合于大规模生产。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明的实施方案进行详细描述。下面实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例1
将无水乙醇和正己烷按体积比1:2配置成混合溶液，待用。将氟维司群粗品溶解于上述溶剂中，搅拌至溶清(浓度约为100mg/ml)。将氟维司群粗品溶液过滤，滤膜孔径为0.45μm。收集滤液，冷藏保存。
实施例2
量取1L过滤后的氟维司群粗品溶液，由上样泵上样至200mm制备柱系统(色谱柱尺寸250×200mmID.)，上样流速为1000ml/min，上样压力≤10mPa。上样结束后，用50ml无水乙醇/正己烷(1:2)溶液冲洗上样泵。
实施例3
将50g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000031
250×200mmID.)，用13％甲醇/正己烷的流动相等度洗脱60分钟，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的90％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度95.40％，最大单杂0.61％。
实施例4
将50g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000032
250×200mmID.)，用两种流动相(流动相A：5％甲醇/正己烷；流动相B：12％甲醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％流动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的90％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.88％，最大单杂0.04％。
实施例5
将72g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径10μm，孔径
Figure BDA0001177405820000033
250×200mmID.)，用两种流动相(流动相A：11％甲醇/正己烷；流动相B：18％甲醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％流动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的90％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.85％，最大单杂0.05％。
实施例6
将50g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000041
250×200mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％甲醇/正己烷；流动相B：15％甲醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％流动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的90％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.80％，最大单杂0.06％。
实施例7
将72g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000042
250×200mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％乙腈/正己烷；流动相B：13％乙腈/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％流动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.81％，最大单杂0.08％。
实施例8
将45g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000043
250×50mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％异丙醇/正庚烷；流动相B：12％乙腈/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％流动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速75ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.78％，最大单杂0.07％。
实施例9
将45g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径10μm，孔径
Figure BDA0001177405820000044
250×50mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％乙醇/正己烷；流动相B：13％乙醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速75ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.73％，最大单杂0.08％。
实施例10
将45g氟维司群粗品溶液上样至多孔聚合物填充色谱柱(粒径30μm，孔径
Figure BDA0001177405820000051
250×50mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％甲醇/正己烷；流动相B：13％甲醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速75ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.38％，最大单杂0.09％。
实施例11
将45g氟维司群粗品溶液上样至氧化铝基质色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000052
250×50mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％乙醇/正庚烷；流动相B：13％乙醇/正庚烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速75ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.72％，最大单杂0.06％。
实施例12
将45g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000053
250×50mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％异丙醇/正庚烷；流动相B：13％异丙醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速75ml/min，当紫外吸收峰值升高至300mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.59％，最大单杂0.08％。
实施例13
将72g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000054
250×200mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％甲醇/正己烷；流动相B：13％甲醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％流动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至150mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果为：主峰纯度99.81％，最大单杂0.05％。
实施例14
将72g氟维司群粗品溶液上样至球型硅胶色谱柱(粒径20μm，孔径
Figure BDA0001177405820000055
250×200mmID.)，用两种流动相(流动相A：9％甲醇/正己烷；流动相B：13％甲醇/正己烷)分布洗脱(即：0～10分钟，100％流动相A；10～12分钟，100％动相B；12～60分钟，100％流动相B)，检测波长225nm，流速1200ml/min，当紫外吸收峰值升高至100mAU开始收集，到紫外吸收峰值达到最高后，继续收集至达到紫外吸收峰最高值的80％停止收集。按以下纯化工艺参数完成洗脱。收集组分，RP-HPLC分析结果如下：主峰纯度99.82％，最大单杂0.03％。
实施例15
将收集的合格组分分批吸入至200L反应釜中，保持温度40～60℃，减压浓缩至20～40L后放入物料桶中，转入20L旋转蒸发器中，保持水浴温度40～60℃，减压浓缩至干；将残留油状物用100L乙酸乙酯转移至300L反应釜中，加热至40～50℃，搅拌1～1.5小时，乙酸乙酯相用纯化水保温洗涤两次(50L×2)；有机相用5Kg无水硫酸钠干燥20～30分钟，过滤，滤液减压浓缩(水浴温度40～50℃)至干。
实施例16
将实施例15中减压浓缩的残留物用16L乙酸乙酯转移至20L玻璃反应釜，开启搅拌，加热至60～70℃，搅拌0.5～1小时；再冷清至10～20℃，搅拌150～160分钟，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤饼真空干燥11～12小时，干燥温度40～50℃，得氟维司群成品。

Claims (1)

1.一种氟维司群的纯化方法，包括以下步骤：
a、将氟维司群粗品吸附在粒径20μm，孔径
Figure FDA0003369811540000011
的色谱柱填料上；
b、用第一流动相和第二流动相梯度洗脱，其中第一流动相为体积比9％甲醇和正己烷混合溶液，第二流动相为体积比13％甲醇和正己烷混合溶液，所述梯度为：0～10分钟100％第一流动相，10～12分钟100％第二流动相，12～60分钟100％第二流动相；
c、收集正组份得到氟维司群纯品。
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