CN101024662A - 一种雷莫拉宁的纯化方法 - Google Patents

一种雷莫拉宁的纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101024662A
CN101024662A CN 200610024153 CN200610024153A CN101024662A CN 101024662 A CN101024662 A CN 101024662A CN 200610024153 CN200610024153 CN 200610024153 CN 200610024153 A CN200610024153 A CN 200610024153A CN 101024662 A CN101024662 A CN 101024662A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ramoplanin
purification process
methyl alcohol
acid
crude extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN 200610024153
Other languages
English (en)
Other versions
CN100522981C (zh
Inventor
李继安
徐斌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Original Assignee
Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry filed Critical Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Priority to CNB2006100241535A priority Critical patent/CN100522981C/zh
Publication of CN101024662A publication Critical patent/CN101024662A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100522981C publication Critical patent/CN100522981C/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Seasonings (AREA)

Abstract

本发明公开了一种雷莫拉宁的纯化方法，其包括将雷莫拉宁的粗提液浓缩物与部分硅胶混合，挥干溶剂，再将得到的固体混合物置于以硅胶为填充物的柱子上端进行柱层析，其中依次用丙酮、甲醇水溶液、以及甲醇与酸水的混合物作为流动相。本发明的提纯方法步骤简单，有机溶剂使用量明显减少，并具有较高的收率和纯度。

Description

一种雷莫拉宁的纯化方法
技术领域
本发明涉及抗生素雷莫拉宁的制备，特别涉及一种雷莫拉宁的纯化方法。
背景技术
雷莫拉宁(Ramoplanin，A/16686)提纯的传统方法是通过常规前处理步骤用盐酸将产生雷莫拉宁菌株，如Actinoplanes sp.ATCC 33076的发酵产物调pH至3.5，分离得到菌丝体和发酵液。其中菌丝体用有机溶剂，如甲醇等低级醇或氯仿等提取，得到含有目的物的粗提液，真空浓缩得到浆状物，即雷莫拉宁的粗提液浓缩物，再用正丁醇萃取多次，合并萃取液后，再反复用石油醚析出沉淀并分离其，真空干燥得到粗品；而发酵液也用正丁醇萃取，然后用同样方法制得粗品。该粗品反复用混合溶剂氯仿∶乙醇∶水(体积比4∶7∶2)处理，得到油状物，加水结晶并固液分离，得到的固体和液体还需不同溶剂多步处理后，得到较纯的粗品再湿法上硅胶柱纯化；例如上述的固体用不同的有机溶剂(如甲醇、正丁醇、乙醚等)反复处理，得到较纯的粗品后再溶于乙腈与水的混合物，然后湿法上硅胶柱，用不同溶剂(乙腈与水混合物，以及乙腈与0.1N盐酸混合物)作为流动相洗柱子，用薄层色谱法检测，收集目的洗脱液(USP 4328316)。可见其过程复杂，有机溶剂使用量很大，污染严重，且由于萃取次数多，造成损失而收率低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术中的缺陷，提供一种步骤简化、明显减少有机溶剂使用量的雷莫拉宁的纯化方法。
本发明通过下列技术方案来解决上述技术问题。一种雷莫拉宁的纯化方法，其包括将雷莫拉宁的粗提液浓缩物先与部分硅胶混合，挥干溶剂，再将得到的固体混合物置于以硅胶为填充物的柱子上端进行柱层析，其中依次用丙酮、甲醇水溶液、以及甲醇与酸水的混合物作为流动相。
其中，该甲醇与酸水的体积比较佳地为1∶4～4∶1。甲醇含量太高或者太低的话，雷莫拉宁和其他的杂质分离效果不明显。所说的酸水选自盐酸，硫酸、醋酸和磷酸等；通常选用其稀溶液，其浓度优选为0.01mol/l～1mol/l。
而该甲醇水溶液中甲醇与水的体积比优选1∶4～4∶1。甲醇比例太低的话，有些杂质洗脱速度慢；反之，甲醇比例太高，有些杂质也不容易洗脱下来。
更佳地，该硅胶柱中粗提液浓缩物(未挥发溶剂前)占其与硅胶总重量的百分比不超过10％，超过以后，多余量的产物无法被吸附，从而会被开始的丙酮溶剂洗脱下来，无法达到分离的目的。该百分比更佳地为3～8％(根据实施例改的)。而粗提液浓缩物先与部分硅胶混合时，“部分硅胶”的用量是指能够将粗提液浓缩物完全混合吸附后便于上柱的量，大约是和粗提液浓缩物等量就可以了，一般不会超过3倍。
而本发明所说的雷莫拉宁的粗提液浓缩物可根据现有技术制备，如参照上述专利文献所公开的有关内容。本发明选用下列具体步骤制得：将产生雷莫拉宁菌株，如ATCC33076的发酵产物用酸调pH至3.5，离心得到菌丝体和发酵液；其中菌丝体再用极性有机溶剂浸泡半小时以上，然后离心得到上清液，浓缩至浆状物即得该雷莫拉宁的粗提液浓缩物。
当然，根据上述专利文献所知，本发明的雷莫拉宁的粗提液浓缩物也可将发酵液直接浓缩至浆状物制得。
其中，所述的酸优选草酸，所述的极性有机溶剂为甲醇或乙醇。
利用上述本发明的干法硅胶柱纯化方法，可分部收集上述不同流动相的流出液，HPLC跟踪检测，收集目的物含量达到85％以上的流出液，浓缩至干得到雷莫拉宁。则纯度达到85％以上，而收率达到90％以上。可见，本发明纯化方法步骤简单，有机溶剂使用量明显减少，并具有较高的收率和纯度。
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。
下面实施例中所用的雷莫拉宁的粗提液浓缩物选用下列步骤制得：参照现有技术，如上述美国专利文献的例1发酵培养ATCC 33076菌株，然后发酵产物用草酸调pH至3.5，离心得到菌丝体，再用极性有机溶剂甲醇或乙醇(1L/kg菌丝体)浸泡菌丝体半小时以上，然后离心得到上清液，浓缩至浆状物(通常体积为上清液的1/10～1/20)即得该雷莫拉宁的粗提液浓缩物。
其中下列实施例中的收率由纯化得到的雷莫拉宁/上述上清液(w/w)计算得到。
实施例1
取雷莫拉宁的粗提液浓缩物5g，与5g硅胶搅拌混合，挥干溶剂，再将得到的固体混合物置于以50g硅胶为填充物的柱子的上端(柱高×直径：20cm×3cm)，分别用丙酮，甲醇与水(v/v，1∶4)的混合物，以及甲醇与0.1mol/l的盐酸水溶液(v/v，1∶4)混合物作为流动相，流速1ml/min，分部收集流出液，采用常规HPLC跟踪检测(方法同现有技术USP 4427656)，收集目的物含量达到85％以上的流出液，浓缩至干得到纯化的雷莫拉宁。收率为93％，纯度达到85％。
实施例2
取雷莫拉宁的粗提液浓缩物5g，与7.5g硅胶搅拌混合，流动相中甲醇与水体积比为4∶5，甲醇与酸水(0.5mol/l的硫酸)的体积比为4∶5，余同实施例1。制得雷莫拉宁收率为94％，纯度达到89％。
实施例3
取雷莫拉宁的粗提液浓缩物3g，与5g硅胶搅拌混合，流动相中甲醇与水体积比为4∶1，甲醇与酸水(1mol/l的醋酸)的体积比为4∶1，余同实施例1。制得雷莫拉宁收率为93％，纯度达到87％。
实施例4
取雷莫拉宁的粗提液浓缩物2g，与4g硅胶搅拌混合，流动相中甲醇与水体积比为2∶1，甲醇与酸水(0.01mol/l的磷酸)的体积比为2∶1，余同实施例1。制得雷莫拉宁收率为92％，纯度达到86％。
上述实施例中柱层析用硅胶(200～300目)，青岛海洋化工厂产品，余试剂均为常规市售产品。

Claims (8)

1、一种雷莫拉宁的纯化方法，其包括将雷莫拉宁的粗提液浓缩物与部分硅胶混合，挥干溶剂，再将得到的固体混合物置于以硅胶为填充物的柱子上端进行柱层析，其中依次用丙酮、甲醇水溶液、以及甲醇与酸水的混合物作为流动相。
2、如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于该甲醇与酸水的体积比为1∶4～4∶1。
3、如权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于所说的酸水选自盐酸，硫酸、醋酸和磷酸。
4、如权利要求3所述的纯化方法，其特征在于该酸水浓度为0.01mol/l～1mol/l。
5、如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于该甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为1∶4～4∶1。
6、如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于该硅胶柱中粗提液浓缩物占其与硅胶总重量的百分比不超过10％。
7、如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于该雷莫拉宁的粗提液浓缩物可由下列步骤制得：将产生雷莫拉宁菌株的发酵产物用酸调pH至3.5，离心得到菌丝体和发酵液；其中菌丝体再用极性有机溶剂浸泡半小时以上，然后离心得到上清液，浓缩至浆状物；或者将发酵液直接浓缩至浆状物即得该雷莫拉宁的粗提液浓缩物。
8、如权利要求7所述的纯化方法，其特征在于所述的酸为草酸，所述的极性有机溶剂选自甲醇和乙醇。
CNB2006100241535A 2006-02-24 2006-02-24 一种雷莫拉宁的纯化方法 Expired - Fee Related CN100522981C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100241535A CN100522981C (zh) 2006-02-24 2006-02-24 一种雷莫拉宁的纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100241535A CN100522981C (zh) 2006-02-24 2006-02-24 一种雷莫拉宁的纯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101024662A true CN101024662A (zh) 2007-08-29
CN100522981C CN100522981C (zh) 2009-08-05

Family

ID=38743348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2006100241535A Expired - Fee Related CN100522981C (zh) 2006-02-24 2006-02-24 一种雷莫拉宁的纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN100522981C (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102010462A (zh) * 2009-09-04 2011-04-13 四川金稞生物科技有限公司 应用纳滤浓缩纯化技术从发酵液中制取雷莫拉宁
CN101838316B (zh) * 2009-03-17 2012-11-28 上海医药工业研究院 雷莫拉宁发酵液预处理的方法
CN102838662A (zh) * 2011-12-02 2012-12-26 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 一种高纯度雷莫拉宁单组份的制备方法
CN105111286A (zh) * 2015-08-31 2015-12-02 南京工业大学 一种高效制备纽莫康定b0的方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103360470A (zh) * 2013-07-26 2013-10-23 成都摩尔生物医药有限公司 一种雷莫拉宁发酵液的纯化方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101838316B (zh) * 2009-03-17 2012-11-28 上海医药工业研究院 雷莫拉宁发酵液预处理的方法
CN102010462A (zh) * 2009-09-04 2011-04-13 四川金稞生物科技有限公司 应用纳滤浓缩纯化技术从发酵液中制取雷莫拉宁
CN102838662A (zh) * 2011-12-02 2012-12-26 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 一种高纯度雷莫拉宁单组份的制备方法
CN102838662B (zh) * 2011-12-02 2014-05-14 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 一种高纯度雷莫拉宁单组份的制备方法
CN105111286A (zh) * 2015-08-31 2015-12-02 南京工业大学 一种高效制备纽莫康定b0的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN100522981C (zh) 2009-08-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100522981C (zh) 一种雷莫拉宁的纯化方法
CN109867663A (zh) 一种用制备色谱分离金黄霉素a和金黄霉素b的方法
CN103772458A (zh) 一种尼莫克汀的提纯方法
CN101735187A (zh) 一种从柳叶腊梅中提取香豆素类化合物的方法
CN102311419A (zh) 一种高含量egcg的精制提纯方法
CN102321135B (zh) 一种利用高速逆流色谱分离纯化法生产虫草素标准品的方法
CN101168537A (zh) 同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法
EP3168225A1 (en) Fidaxomicin purification method
CN103420953A (zh) 一种提纯奥利司他中间体的方法
CN101838300B (zh) 一种提取残留阿维菌素的方法
CN102993134B (zh) 一种利普司他汀的提纯方法
CN110041184A (zh) 一种维生素甲萘醌-7的提纯方法
CN102010387A (zh) 一种提纯奥利司他的方法
CN101869581B (zh) 一种从中草药中提取有效成份的工艺方法
CN103664610B (zh) 一种从红薯叶中提取绿原酸的方法
CN100341845C (zh) 一种从葵花粕中提取纯化绿原酸的方法
CN104356105A (zh) 一种高含量egcg的制备方法
CN105732663A (zh) 6-氨基青霉烷酸的制备方法
CN102908371A (zh) 一种从当归中制备高纯度阿魏酸的方法
CN101967505A (zh) 一种二氢槲皮素的制备方法
CN108802246A (zh) 一种神经酸分离提纯方法
CN105567778A (zh) 一种6-氨基青霉烷酸的制备方法
CN106399417A (zh) 一种食品级高含量茶黄素类物质的制备方法
CN105085443A (zh) 一种以曼地亚红豆杉枝叶为原料制备高纯度10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法
CN106008553B (zh) 子囊霉素的纯化方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20090805

Termination date: 20150224

EXPY Termination of patent right or utility model