CN109867663A

CN109867663A - 一种用制备色谱分离金黄霉素a和金黄霉素b的方法

Info

Publication number: CN109867663A
Application number: CN201811631577.7A
Authority: CN
Inventors: 余炜; 方明山; 生英涛; 孙俊杰; 储消和; 柳鹏福; 徐顺清; 沈建; 陈万河; 程跃
Original assignee: Zhejiang Lyuchuang Biotechnology Co ltd; Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang Lyuchuang Biotechnology Co ltd; Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2018-12-29
Filing date: 2018-12-29
Publication date: 2019-06-11

Abstract

本发明涉及一种金黄霉素A和金黄霉素B的分离纯化方法。现有方法中有机溶剂回收条件要求高，上样量小，收率低，成本高。本发明的技术方案如下：[1]将金黄霉素A、B发酵液板框过滤，得到湿菌渣。[2]用有机溶剂萃取湿菌渣，过滤得到提取液。[3]将提取液真空浓缩，加入非水溶性有机溶剂溶解。[4]静止分层，收集非水溶性有机溶剂层。[5]加活性炭、无水硫酸钠脱色后抽滤，滤液真空浓缩。[6]加有机溶剂溶解。[7]上制备色谱分离。本发明分离纯化金黄霉素A、B的方法操作简单，有机溶剂用量少，避免了因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂。

Description

一种用制备色谱分离金黄霉素A和金黄霉素B的方法

技术领域

本发明涉及一种金黄霉素A和金黄霉素B的分离纯化方法，具体是一种用制备色谱分离金黄霉素A和金黄霉素B的方法与应用，属于分离提取领域。

背景技术

金黄霉素(Chrysomycin)是由海洋链霉菌Streptomyces sp.MS085分离自南中国海海泥，可以产生大量的金黄霉素类化合物，该类化合物具有很好的抗耐药金黄色葡萄球菌活性。经发酵过程生产，其A、B结构式为：

目前国内外对金黄霉素A、B的分离纯化主要采用大孔树脂吸附、一次性硅胶分离和有机溶剂结晶等三种方法。其中大孔树脂吸附和一次性硅胶分离两种方法：树脂和硅胶的前期预处理要消耗大量的酸碱溶液；在洗脱过程中有机溶剂使用量大，有机溶剂回收条件要求高，上样量小，收率低，成本高。有机溶剂结晶方法：有机溶剂使用量大，并且是多种有机溶剂混合使用，有机溶剂回收困难，成本高。

发明内容

本发明的目的是提供一种用制备色谱分离金黄霉素A、B的方法与应用，避免了在金黄霉素A、B分离纯化过程中因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂，开辟了一种全新的金黄霉素A、B分离纯化的方法。

本发明的技术方案如下：

[1]将金黄霉素A、B发酵液板框过滤，得到湿菌渣。

[2]用有机溶剂萃取湿菌渣，过滤得到提取液。

[3]将提取液真空浓缩，加入非水溶性有机溶剂溶解。

[4]静止分层，收集非水溶性有机溶剂层。

[5]加活性炭、无水硫酸钠脱色后抽滤，滤液真空浓缩。

[6]加有机溶剂溶解。

[7]上制备色谱分离。

上述步骤[2]中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。

上述步骤[3]中，非水溶性有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中的一种或几种混合物。

上述步骤[6]中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。

上述步骤[7]中，制备色谱的填料为C18，粒径为10um，制备柱直径为10cm，高度为30cm，填料装量为1.2kg。上样量为填料重量的1.6％，流动相为甲醇：水＝65:35，检测波长为254nm，保留时间为120min，泵流速为240ml/min。

本发明分离纯化金黄霉素A、B的方法操作简单，有机溶剂用量少，避免了因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂。金黄霉素A、B收率达到90％以上，获得的金黄霉素A、B含量在95％以上，纯度在98％以上，更适合规模化生产，成本低，效益高。

具体实施案例：

[1]取湿菌渣100g，加甲醇200ml，搅拌5h，过滤得甲醇提取液200ml(含金黄霉素A0.5％、B0.2％)；甲醇提取液浓缩回收甲醇，浓干后用二氯甲烷50ml萃取两次，得到二氯甲烷萃取液100ml，加5g活性炭和2g无水硫酸钠脱色1h，过滤得脱色液，浓缩回收二氯甲烷，浓干后加甲醇配成100ml溶液(含金黄霉素A1.0％、B0.4％)；取20ml甲醇溶液上制备色谱分离，流动相为65％甲醇/水，分别收集得到四种流分第1段(金黄霉素B纯度70～90％)，第2段(金黄霉素B纯度95～99％)，第3段(金黄霉素A纯度70～90％)，第四段(金黄霉素A纯度95～99％)。第1段和第3段浓干后甲醇溶解分别继续上柱分离，第2段浓干后过滤，滤饼烘干得0.4g金黄霉素B(含量95～99％)。第4段浓干后过滤，滤饼烘干得1.2g金黄霉素A(含量95～99％)。

[2]取湿菌渣100g，加乙醇200ml，搅拌5h，过滤得乙醇提取液200ml(含金黄霉素A0.5％、B0.2％)；乙醇提取液浓缩回收乙醇，浓干后用二氯甲烷50ml萃取两次，得到二氯甲烷萃取液100ml，加5g活性炭和2g无水硫酸钠脱色1h，过滤得脱色液，浓缩回收二氯甲烷，浓干后加甲醇配成100ml溶液(含金黄霉素A1.0％、B0.4％)；取20ml甲醇溶液上制备色谱分离，流动相为65％甲醇/水，分别收集得到四种流分第1段(金黄霉素B纯度70～90％)，第2段(金黄霉素B纯度95～99％)，第3段(金黄霉素A纯度70～90％)，第四段(金黄霉素A纯度95～99％)。第1段和第3段浓干后甲醇溶解分别继续上柱分离，第2段浓干后过滤，滤饼烘干得0.4g金黄霉素B(含量95～99％)。第4段浓干后过滤，滤饼烘干得1.2g金黄霉素A(含量95～99％)。

[3]取湿菌渣100g，加丙酮200ml，搅拌5h，过滤得丙酮提取液200ml(含金黄霉素A0.5％、B0.2％)；丙酮提取液浓缩回收丙酮，浓干后用二氯甲烷50ml萃取两次，得到二氯甲烷萃取液100ml，加5g活性炭和2g无水硫酸钠脱色1h，过滤得脱色液，浓缩回收二氯甲烷，浓干后加甲醇配成100ml溶液(含金黄霉素A1.0％、B0.4％)；取20ml甲醇溶液上制备色谱分离，流动相为65％甲醇/水，分别收集得到四种流分第1段(金黄霉素B纯度70～90％)，第2段(金黄霉素B纯度95～99％)，第3段(金黄霉素A纯度70～90％)，第四段(金黄霉素A纯度95～99％)。第1段和第3段浓干后甲醇溶解分别继续上柱分离，第2段浓干后过滤，滤饼烘干得0.4g金黄霉素B(含量95～99％)。第4段浓干后过滤，滤饼烘干得1.2g金黄霉素A(含量95～99％)。

Claims

1.一种用制备色谱分离金黄霉素A和金黄霉素B的方法，其特征在于

[1]将金黄霉素A和金黄霉素B的发酵液板框过滤，得到湿菌渣；

[2]用有机溶剂萃取湿菌渣，过滤得到提取液；

[3]将提取液真空浓缩，加入非水溶性有机溶剂溶解；

[4]静止分层，收集非水溶性有机溶剂层；

[5]加活性炭、无水硫酸钠脱色后抽滤，滤液真空浓缩；

[6]加有机溶剂溶解；

[7]上制备色谱分离。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤[2]的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤[3]的非水溶性有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中的一种或几种混合物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤[2]的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述制备色谱的填料为C18，粒径为10um，制备柱直径为10cm，高度为30cm，填料装量为1.2kg，上样量为填料重量的1.6％，流动相为甲醇：水＝65:35，检测波长为254nm，保留时间为120min，泵流速为240ml/min。