CN108117562A - 一种用制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，步骤如下(1)过滤：将尼莫克汀发酵液板框过滤，得到湿菌渣；(2)萃取：将湿菌渣中加入有机溶剂，过滤得到尼莫克汀提取液；(3)真空浓缩：将提取液浓缩至固含量35％‑45％，加入非水溶性有机溶剂溶解；(4)静止分层：在室温环境静置，收集非水溶性有机溶剂层；(5)脱色：加入活性炭、无水硫酸钠进行脱色处理；(6)抽滤、真空浓缩：利用真空泵进行抽滤，将抽滤后的提取液放在真空度下进一步浓缩至固含量为30‑40％；(7)溶解：将浓缩后的提取液于有机溶剂按比例混合，搅拌溶解；(8)制备色谱分离。本发明分离纯化尼莫克汀的方法操作简单，有机溶剂用量少，无环境污染，所得到的尼莫克汀纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种尼莫克汀的分离纯化方法，具体是一种用制备色谱分离尼莫克汀的方法，属于分离提取领域。
背景技术
尼莫克汀(Nemadectin)是一种十六元大环内酯类抗生素，由蓝灰链霉菌Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus经发酵过程生产，其结构式为：
作为米尔贝霉素族的一员，表现出很好的抗寄生虫活性。作为抗寄生虫抗生素，尼莫克汀具有杀虫谱广，易降解，低残留，无抗药性，对人畜安全，尼莫克汀主要用于合成活性更强的农药兽药莫西克汀(Moxidectin)。
上世纪70年代，日本Sankyo公司最早发现了米尔贝霉素类化合物。二十世纪80年代中期，以尼莫克汀为底物合成的莫西菌素开始作为兽用驱虫药使用，目前在日本已经商品化。
目前国内外对尼莫克汀的分离纯化主要采用大孔树脂吸附、一次性硅胶分离和有机溶剂结晶等三种方法。其中大孔树脂吸附和一次性硅胶分离两种方法：树脂和硅胶的前期预处理要消耗大量的酸碱溶液；在洗脱过程中有机溶剂使用量大，有机溶剂回收条件要求高，上样量小，收率低，成本高。有机溶剂结晶方法：有机溶剂使用量大，并且是多种有机溶剂混合使用，有机溶剂回收困难，成本高。本发明采用的利用制备色谱分离尼莫克汀的方法，使用的有机溶剂少，操作简单，不产生环境污染，所得到的尼莫克汀纯度高，开辟了一种全新的尼莫克汀分离纯化的方法。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种用制备色谱分离尼莫克汀的方法。解决现有技术中尼莫克汀分离纯化过程中因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂，污染环境，上样量小，收率低，成本高的问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种用制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，所述方法步骤如下：
1、过滤：将尼莫克汀发酵液板框过滤，得到湿菌渣。
2、萃取：将湿菌渣中加入有机溶剂，过滤得到尼莫克汀提取液。
3、真空浓缩：将提取液放在真空度温度60-80℃、真空度-0.075-0.095mpa下浓缩至固含量35％-45％，加入非水溶性有机溶剂溶解。
4、静止分层：将步骤3的溶液放在室温环境，静置4小时，收集非水溶性有机溶剂层。
5、脱色：加入活性炭、无水硫酸钠进行脱色处理。
6、抽滤、真空浓缩：利用真空泵进行抽滤，将抽滤后的提取液放在真空度温度60-80℃、真空度-0.085-0.095mpa下进一步浓缩至固含量为30-40％。
7、溶解：将浓缩后的提取液于有机溶剂按1∶3的比例混合，并不断搅拌，直至溶解。
8、制备色谱分离
上述步骤[2]中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。
上述步骤[3]、[4]中所述的非水溶性有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、氯仿中的一种或几种混合物。
上述上述步骤[7]中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。
上述步骤[8]中所述的制备色谱分离的填料为C18，粒径为10um，制备柱直径为10cm，高度为30cm，填料装量为1.2kg。上样量为填料重量的1.6％，流动相为甲醇∶水＝79∶21，检测波长为254nm，保留时间为120min，泵流速为240ml/min。
本发明的有益效果是：
本发明分离纯化尼莫克汀的方法操作简单，有机溶剂用量少，避免了因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂。尼莫克汀收率达到90％以上，获得的尼莫克汀含量在95％以上，纯度在97％以上，更适合规模化生产，成本低，效益高。
附图说明
图1实施例1制备的尼莫克汀的质谱图；
图2实施例2制备的尼莫克汀的质谱图；
图3实施例3制备的尼莫克汀的质谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
实施例1：
1、过滤：将尼莫克汀发酵液板框过滤，得到湿菌渣；
2、萃取：将100g湿菌渣中加入200ml的甲醇溶剂，过滤得到甲醇提取液200ml(含尼莫克汀1％)；
3、真空浓缩：将提取液放在真空度温度60℃、真空度-0.075mpa下进一步浓缩至固含量为35％。；
4、静止分层：将步骤3的溶液加入50ml二氯甲烷萃取两次，得到二氯甲烷萃取液100ml，放在室温环境，静置4小时，收集非水溶性有机溶剂层。
5、脱色：加入5g活性炭和2g无水硫酸钠脱色1h；
6、抽滤、真空浓缩：利用真空泵进行抽滤，得到脱色液，将抽滤后的二氯甲烷提取液放在真空度温度60℃、真空度-0.085mpa下进一步浓缩至固含量为30％。
7、溶解：将步骤7得到的浓干后的二氯甲烷加甲醇配成20ml溶液(含尼莫克汀10％)，并不断搅拌，直至溶解。
8、制备色谱分离：20ml甲醇溶液上制备色谱分离，流动相为79％甲醇/水，分别收集得到三种流分第1段(尼莫克汀纯度50～60％)，第2段(尼莫克汀纯度70～90％)，第3段(尼莫克汀纯度95～99％)，第1段和第2段浓干后甲醇溶解继续上柱分离，第3段浓干后过滤，滤饼烘干得1.3g尼莫克汀。液相检测，含量为96.5％，纯度为98％。
实施例2
1、过滤：将尼莫克汀发酵液板框过滤，得到湿菌渣；
2、萃取：将100g湿菌渣中加入200ml的乙醇溶剂，搅拌5h，过滤得到乙醇萃取液200ml(含尼莫克汀1％)；
3、真空浓缩：将提取液放在真空度温度60℃、真空度0.015mpa下进一步浓缩至固含量为40％；
4、静止分层：将步骤3得到的产物，加入50ml三氯甲烷萃取两次，得到三氯甲烷萃取液100ml，放在室温环境，静置4小时，收集非水溶性有机溶剂层；
5、脱色：加5g活性炭和2g无水硫酸钠脱色1h；
6、抽滤、真空浓缩：利用真空泵进行抽滤，得到脱色液，将抽滤后的三氯甲烷提取液放在真空度温度70℃、真空度0.025mpa下进一步浓缩至固含量为30％；
7、溶解：将步骤7得到的浓干后的三氯甲烷加甲醇配成20ml溶液(含尼莫克汀10％)，并不断搅拌，直至溶解；
8、制备色谱分离：20ml甲醇溶液上制备色谱分离，流动相为79％甲醇/水，分别收集得到三种流分第1段(尼莫克汀纯度50～60％)，第2段(尼莫克汀纯度70～90％)，第3段(尼莫克汀纯度95～99％)，第1段和第2段浓干后甲醇溶解继续上柱分离，第3段浓干后过滤，滤饼烘干得1.3g尼莫克汀。液相检测，含量为95.6％，纯度为97％。
实施例3
1、过滤：将尼莫克汀发酵液板框过滤，得到湿菌渣；
2、萃取：将100g湿菌渣中加入200ml的丙酮溶剂，搅拌5h，过滤得到丙酮提取液200ml(含尼莫克汀1％)；
3、真空浓缩：将提取液放在真空度温度60℃、真空度0.095mpa下进一步浓缩至固含量为45％；
4、静止分层：将步骤3得到的产物，加入50ml氯仿萃取两次，得到氯仿萃取液100ml，放在室温环境，静置4小时，收集非水溶性有机溶剂层；
5、脱色：加5g活性炭和2g无水硫酸钠脱色1h；
6、抽滤、真空浓缩：利用真空泵进行抽滤，得到脱色液，将抽滤后的三氯甲烷提取液放在真空度温度70℃、真空度0.095mpa下进一步浓缩至固含量为30％；
7、溶解：将步骤7得到的浓干后的三氯甲烷加加乙醇配成20ml溶液(含尼莫克汀10％)，并不断搅拌，直至溶解；
8、制备色谱分离：20ml乙醇溶液上制备色谱分离，流动相为79％甲醇/水，分别收集得到三种流分第1段(尼莫克汀纯度50～60％)，第2段(尼莫克汀纯度70～90％)，第3段(尼莫克汀纯度95～99％)，第1段和第2段浓干后乙醇溶解继续上柱分离，第3段浓干后过滤，滤饼烘干得1.3g尼莫克汀。液相检测，含量为96％，纯度为97.5％。
性能检测：
尼莫克汀液相检测方法
流动相：甲醇∶水＝85∶15
色谱柱：C18
柱温：30℃
检测波长：240nm
保留时间：30min
进样量：10ul
实施例1-3制备的尼莫克汀的质谱图分别见附图1、2和3，经液相检测：实施例1得到的尼莫克汀中尼莫克汀的含量为96.5％，纯度为98％；实施例2得到的尼莫克汀中尼莫克汀的含量为95.6％，纯度为97％；实施例1得到的尼莫克汀中尼莫克汀的含量为96％，纯度为97.5％。
本发明结合它的专门的实施例已做了详细的描述，对本技术领域熟悉的人来说，在不脱离上述专利范围与精神的条件下能做出各种各样的变化和改进。凡依据本发明的技术实质所做的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明的技术方案范畴和保护范围。
Claims (4)
1.一种用制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：
S1：过滤：将尼莫克汀发酵液板框过滤，得到湿菌渣；
S2：萃取：将湿菌渣中加入有机溶剂，过滤得到尼莫克汀提取液；
S3：真空浓缩：将提取液放在温度60-80℃、真空度-0.075-0.095mpa下浓缩至固含量35％-45％，加入非水溶性有机溶剂溶解；
S4：静止分层：将步骤3的溶液放在室温环境，静置4小时，收集非水溶性有机溶剂层；
S5：脱色：加入活性炭、无水硫酸钠进行脱色处理；
S6：抽滤、真空浓缩：利用真空泵进行抽滤，将抽滤后的提取液放在温度60-80℃、真空度-0.085-0.095mpa下进一步浓缩至固含量为30-40％；
S7：溶解：将浓缩后的提取液于有机溶剂按质量g与体积比ml为1∶3的比例混合，并不断搅拌，直至溶解；
S8：制备色谱分离；
所述制备色谱的填料为C18，粒径为10um，柱直径为10cm，高度为30cm，填料装量为1.2kg，上样量为填料重量的1.6％，流动相为甲醇：水体积比＝79∶21，检测波长为254nm，保留时间为120min，泵流速为240ml/min。
2.如权利要求1所述的一种用制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇和丙酮中的一种或几种的混合物。
3.如权利要求1所述的一种用制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的非水溶性有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷和氯仿中的一种或几种的混合物。
4.如权利要求1所述的一种用制备色谱分离纯化尼莫克汀的方法，其特征在于：步骤(7)中有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合物。
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