CN103570655B

CN103570655B - 一种提取霉酚酸的方法

Info

Publication number: CN103570655B
Application number: CN201210270317.8A
Authority: CN
Inventors: 彭平; 郭萍; 王先文; 张洪兰
Original assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICALS Co Ltd OF PKU INTERNATIONAL HEALTHCARE GROUP; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU International Healthcare Group Co Ltd
Current assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICAL CO LTD; New Founder Holdings Development Co ltd; Peking University Medical Management Co ltd; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU Healthcare Industry Group
Priority date: 2012-07-31
Filing date: 2012-07-31
Publication date: 2015-08-05
Anticipated expiration: 2032-07-31
Also published as: CN103570655A

Abstract

本发明涉及一种提取霉酚酸的方法。所述方法包括从霉酚酸发酵液中提取霉酚酸，其中采用硫化物来抑制霉酚酸发生氧化和/或络合。利用本发明的方法，可以提高霉酚酸产品的质量和产品的品相。

Description

一种提取霉酚酸的方法

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种提取霉酚酸的方法。

背景技术

霉酚酸（也称麦考酚酸，英文名称：mycophenolic acid），其化学名称为E-4-甲基-6-(1,3-二氢-7-甲基-4-羟基-6-甲氧基-3-氧代-5-异苯并呋喃基)-4-己烯酸，分子式为C₁₇H₂₀O₆，分子量为320.34，CAS号为24280-93-1，其结构式为：

霉酚酸为白色或类白色结晶性粉末，溶于甲醇和乙醇，微溶于醚和氯仿，难溶于苯和甲苯，几乎不溶于冷水。

霉酚酸于1893年在青霉菌代谢物中被发现并分离，其衍生物霉酚酸钠、霉酚酸酯具有抗肿瘤特性。

霉酚酸酯作为主要的免疫抑制剂已在国内外被广泛应用于预防、治疗移植器官急性排异反应。

霉酚酸酯是一种低分子量的生物活性化合物，其对革兰氏阳性细菌、皮肤真菌和病毒具有生物活性，并具有选择性免疫抑制作用。这种机制与霉酚酸对核苷酸合成的选择性抑制有关。霉酚酸酯能在体内通过抑制次黄嘌呤核苷酸脱氢酶的作用而阻断嘌呤核苷酸的合成。霉酚酸酯阻止T细胞，淋巴细胞的分裂及B细胞中抗体的形成，从而作为一种免疫抑制因子。霉酚酸酯在分子生物学中被用于筛选含大肠杆菌黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的细胞。

专利文献US20110166347阐述了一种纯化霉酚酸的方法，该方法用盐酸调霉酚酸发酵液的pH至2.5，过滤，用甲苯萃取滤饼，浓缩，降温结晶，分离干燥得霉酚酸，液相色谱纯度为90%；将霉酚酸溶于碳酸钠的水溶液中，加入盐酸结晶，分离干燥得霉酚酸，液相色谱纯度为99%。

专利文献US2008/0293110A1阐述了一种纯化霉酚酸的方法，该方法将霉酚酸发酵液调至碱性，过滤，将滤液调成酸性后，加入甲苯萃取，浓缩，结晶分离的粗品，将该粗品溶解在热甲苯中，过滤除去不溶物，降温结晶、分离干燥得霉酚酸，液相色谱纯度99.2%，收率87.7%。

专利文献EP1624070A1阐述了一种纯化霉酚酸的方法，该方法将霉酚酸发酵液的pH调至7.0，使用离心、过滤除去杂质，树脂吸附后用有机溶剂如甲醇洗脱，调pH值2.0，沉淀，分离，干燥得白色粉末样品，霉酚酸含量98%。

专利文献US2009240069阐述了将霉酚酸发酵液的pH值调至8.0-11.0，过滤、超滤，将滤液的pH值调至2.0-5.9，沉淀，过滤，将过滤沉淀投入水中形成物悬浮物，或将酸性滤液经过纳滤直接得到悬浮液，调悬浮液的pH值调至pH值8.0-11.0，用乙酸乙酯萃取；分层后水相调至酸性，再用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，冷却、结晶，干燥，用乙酸乙酯热溶解，活性炭脱色，冷却、结晶，干燥，色谱纯度达99.8%，含量99.6%。

专利文献CN102391224A阐述了将霉酚酸发酵液经过超滤、纳滤、浓缩、沉降、离心分离、干燥来获得霉酚酸粗品的方法。CN102399205A阐述了使用甲醇溶解霉酚酸粗品，用活性炭脱色，经薄膜浓缩后，降温结晶，提高工效的方法。

专利文献TW2011038971A1阐述了酯化后，水解提纯霉酚酸粗品的方法。

上述提取、精制霉酚酸的方法，在使用过程中，很容易得到的呈紫色的霉酚酸，而霉酚酸一旦带有颜色，则很难被除色。

为此，专利文献TW2011038971A1将其所得霉酚酸粗品溶于丙酮，加2%的对-甲苯磺酸回流除色后，结晶过滤，干燥得到白色霉酚酸的方法，除色收率80%。该方法降低了提取霉酚酸的总收率，增加了提取成本。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种提取霉酚酸的方法以及由该方法得到的霉酚酸。

具体而言，本发明提供了：

（1）一种提取霉酚酸的方法，所述方法包括从霉酚酸发酵液中提取霉酚酸，其中采用硫化物来抑制霉酚酸发生氧化和/或络合。

（2）根据（1）所述的方法，其中以所述霉酚酸发酵液的体积计，所述硫化物的量为0.005-0.5mol/L。

（3）根据（1）所述的方法，其中所述硫化物选自硫化金属盐、其复盐或其一氢盐、硫化氢、硫化胺、多硫化物，其中所述硫化金属盐优选为硫化钠、硫化钾、硫化铵、硫化铷、硫氢化钠。

（4）根据（1）至（3）中任意一项所述的方法，其包括以下步骤：

1）将霉酚酸发酵液与硫化物混合；

2）将步骤1）所得混合物调至pH 7.5-12，过滤；

3）将步骤2）所得滤液与第一有机溶剂混合，调至pH 1-6，分层，取有机相；

4）将步骤3）所得有机相进行结晶，得到霉酚酸粗品。

（5）根据（4）所述的方法，其中在所述步骤3）中，所述第一有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯或它们的混合物。

（6）根据（4）所述的方法，其中在所述步骤3）中，所述第一有机溶剂与所述滤液的体积比为1：(0.2-20)。

（7）根据（4）所述的方法，其中所述步骤4）包括：将所述步骤3）所得有机相浓缩，冷却后结晶，分离，得霉酚酸粗品。

（8）根据（7）所述的方法，其中在所述步骤4）中，所述结晶在5℃至90℃下进行。

（9）根据（4）所述的方法，其中所述方法还包括：

5）将所得霉酚酸粗品进行重结晶，由此得到霉酚酸纯品。

（10）根据（9）所述的方法，其中所述步骤5）包括：将所述步骤4）所得粗品热溶解在第二有机溶剂中，利用活性炭脱色，然后降温重结晶，分离，干燥，得到霉酚酸纯品。

（11）根据（10）所述的方法，其中所述重结晶在-5℃至80℃下进行。

（12）根据（10）所述的方法，其中所述第二有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、丁酮中的一种或多种。

（13）根据（1）至（12）中任意一项所述的方法提取得到的霉酚酸。

本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

1.本发明在已有的提取工艺中，通过加入具有抗氧化作用和抑制形成霉酚酸络合物的硫化物试剂，提高了产品的质量和产品的品相。

2.本发明能有效地控制纯化过程中所产生的硫化氢的量，降低对工作人员的危害和环境污染。

3.通过进一步选择合适的有机试剂，本发明的方法能够进一步提高产品的收率。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

霉酚酸在制备过程中容易被氧化，并且容易与发酵液中的高价金属离子形成络合物，从而带有紫色，这将影响产品的质量和品相。本发明人通过大量的理论研究和试验摸索，发现加入硫化物能够成功地克服上述问题，从而提高产品的质量和产品的品相。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了一种提取霉酚酸的方法，所述方法包括从霉酚酸发酵液中提取霉酚酸，其中采用硫化物来抑制霉酚酸发生氧化和/或络合。

其中的霉酚酸发酵液可采用本领域已知的方法制备得到。例如，可利用短密青霉菌发酵制得（例如，采用文献“《麦考酚酸产生菌液体发酵条件的优化》，中国医药工业杂志，2007年38卷第04期”中公开的方法进行发酵），所用短密青霉菌是本领域已知的，可商购得到，例如可为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心的菌种编号40653的短密青霉菌。

当本发明的方法用于采用膜技术分离、大孔吸附树脂提取等方法时，在溶液处于碱性或中性时加入硫化物。

在利用本发明的方法提取霉酚酸的过程中，所使用的硫化物会形成硫化氢，而硫化氢是酸性气体，具有刺激性气味，对工作人员和环境均会造成一定的危害。本发明人通过反复摸索，进一步成功确定了合适的硫化物用量，使得既能够获得优异的防止霉酚酸变色的效果，又能够有效地控制硫化氢的逸出。

具体而言，在本发明中，以所述霉酚酸发酵液的体积计，所述硫化物的量优选为0.005-0.5mol/L，更优选为0.005-0.05mol/L当硫化物的量小于0.005mol/L时，产品的颜色较深；当硫化物的量超过0.5mol/L时，产品成本将增加，空气中有明显的臭味。

优选地，所述硫化物可以选自硫化金属盐、其复盐或其一氢盐、硫化氢、硫化胺、多硫化物，其中所述硫化金属盐优选为硫化钠、硫化钾、硫化铵、硫化铷、硫氢化钠。

在本发明的一个具体的实施方案中，本发明的方法包括以下步骤：1）将霉酚酸发酵液与硫化物混合；2）将步骤1）所得溶液调至pH 7.5-12，过滤；3）将步骤2）所得滤液与有机溶剂混合，调至pH1-6，分层，取有机相；4）将步骤3）所得有机相进行结晶，得到霉酚酸粗品。

优选地，在上述步骤2）中，利用碱将步骤1）所得溶液的pH调至7.5-12，所述碱可以选自氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸氢钠、二乙胺、三乙胺中的一种或多种。

在上述步骤3）中，所述有机溶剂可以选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯等低级酯，或它们的混合物；进一步优选为乙酸丁酯。使用乙酸丁酯的话，收率可进一步得到提高，同时，乙酸丁酯在使用时更安全、环保。

在上述步骤3）中，可以用有机溶剂萃取1-3次，由此达到更好的提取效果。优选的是，每次萃取的所述有机溶剂与所述滤液的体积比为1：(0.2-20)。

此外，在上述步骤3）中，利用酸将所述萃取时的溶液的pH调至1-6，所述酸可以选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、氢硫酸、硫酸、磷酸、醋酸和草酸、甲酸、硫酸一氢盐、磷酸二氢盐中的一种或多种。

在上述步骤4）中，所述结晶法分离优选在5℃至90℃下进行。

优选的是，本发明的方法还可包括5）将所得霉酚酸粗品进行重结晶的步骤，由此得到霉酚酸纯品。

在上述步骤5）中，所述重结晶优选在-5℃至80℃下进行。

优选的是，在上述步骤5）中，将所得霉酚酸粗品热溶解在有机溶剂中，并且利用活性炭脱色（可进一步去除霉酚酸粗品中的单质硫），然后进行重结晶。

优选的是，上述热溶解的温度为30℃至120℃，所述有机溶剂可以选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、丁酮中的一种或多种；进一步优选为乙醇。乙醇在使用时较为安全、环保。

在本发明的另一个具体的实施方式中，本发明的方法包括以下步骤：1）向霉酚酸发酵液中加入硫化物；2）将步骤1）所得霉酚酸发酵液用碱调至pH 7.5-12，过滤弃滤渣；3）将步骤2）所得霉酚酸滤液相加入有机溶剂中，用酸调至pH 1-6，分层，取有机相；4）将步骤3）所得有机相浓缩，冷却后结晶，分离，得粗品；5）将步骤4）所得粗品热溶解在有机溶剂中，利用活性炭脱色，然后降温重结晶，分离，干燥，得到霉酚酸纯品。

本发明还提供了利用本发明的上述方法纯化得到的霉酚酸。

以下通过例子的方式进一步解释或说明本发明的内容，但这些例子不应被理解为对本发明的保护范围的限制。

例子

霉酚酸发酵液可得自重庆大新药业股份有限公司。

高效液相色谱仪可得自Agilent公司，型号为Agilent 1100。

实施例1

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4563.2ug/ml）中加入硫化钠3.12g（0.01mol/L），用3N氢氧化钠调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，向滤液中加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品13.83g，HPLC纯度99.67%，计算含量为99.02%，计算收率为75.03%。

实施例2

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4623.7ug/ml）中加入硫化钠1.56g（0.005mol/L），用3N氢氧化钠调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，向滤液中加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品13.96g，HPLC纯度为99.56%，计算含量为99.13%，计算收率为74.82%。

实施例3

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4587.9ug/ml）中加入硫化钠15.6g（0.05mol/L），用3N氢氧化钠调至pH9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品13.78g，HPLC纯度为99.54%，计算含量为99.08%，计算收率为74.40%。

实施例4

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4563.2ug/ml）中加入硫化钾4.41g（0.01mol/L），用3N氢氧化钠调至pH9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品13.78g，HPLC纯度为99.58%，计算含量为99.05%，收率74.78%。

实施例5

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4623.7ug/ml）中加入硫氢化钠2.24g（0.01mol/L），用3N氢氧化钠调至pH9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品13.88g，HPLC纯度为99.62%，计算含量为99.14%，收率74.40%。

实施例6

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4587.9ug/ml）中加入硫化钠187.2g（0.6mol/L），用3N氢氧化钠调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品13.69g，HPLC纯度为99.56%，计算含量为99.04%，收率73.88%。

实施例7

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4587.9ug/ml）中加入硫化钠0.78g（0.0025mol/L），用3N氢氧化钠调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得类白色霉酚酸产品13.66g，HPLC纯度为99.52%，计算含量为99.15%，收率73.80%。

实施例8

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4587.9ug/ml）中通入硫化氢0.04mol，用3N氢氧化钠调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸乙酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸乙酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml丙酮热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品8.98g，HPLC纯度为99.61%，计算含量为99.31%，收率48.59%。

实施例9

在搅拌下，向4L霉酚酸发酵液（单位4587.9ug/ml）中加入多硫化合物Na₂S_n(n=2.5-4)6.0g（约0.01mol/L），用3N氢氧化钠调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，滤液加入乙酸乙酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸乙酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml丙酮热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得白色霉酚酸产品9.02g，HPLC纯度为99.65%，计算含量为99.29%，收率48.80%。

比较例1

在搅拌下，用3N氢氧化钠将4L霉酚酸发酵液（单位4563.2ug/ml）调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，向滤液中加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得类白色霉酚酸产品13.61g，HPLC纯度为99.37%，计算含量为99.23%，计算收率为73.99%。

比较例2

在搅拌下，用3N氢氧化钠将4L霉酚酸发酵液（单位4623.7ug/ml）调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，向滤液中加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置，冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得类白色霉酚酸产品13.85g，HPLC纯度为99.46%，计算含量为99.17%，计算收率为74.27%。

比较例3

在搅拌下，用3N氢氧化钠将4L霉酚酸发酵液（单位4563.2ug/ml）调至pH 9.0，过滤，弃滤渣，向滤液中加入乙酸丁酯800ml，用3N盐酸调至pH 4.5，进行萃取；水相用300ml乙酸丁酯萃取第二次，合并有机相，浓缩，定容至200ml，静置、冷却至7℃进行结晶，保温4小时，分离结晶，得到粗品。粗品用150ml乙醇热溶解，加入活性炭1.0g进行脱色处理，热过滤，定容至150ml，降温至3℃进行重结晶，保温4小时，分离结晶，真空干燥晶体得类白色霉酚酸产品13.64g，HPLC纯度为99.51%，计算含量为99.27%，计算收率为73.78%。

试验例

按照中国药典2000版对实施例1-9和比较例1-3的各霉酚酸产品进行颜色检查。

按中国药典2000版，配制橙红色的色号标准比色液，分别称取0.5g实施例1-9和比较例1-3的各产品作为实验样品，将其分别溶解在10ml乙醇中，与标准液进行比色，样品检测结果如下表1所示：

表1

根据上述结果，可以得知将适量的硫化物加入到发酵液中，对霉酚酸的提纯是极其有益的，其使得霉酚酸纯品的颜色更白，纯度更高，并且收率有所增加。当加入较少的（0.0025mol/L）硫化物时，霉酚酸纯品的颜色得到一定程度的改善；当加入过多的（0.6mol/L）硫化物时，也能获得颜色、纯度、收率均得到改善的霉酚酸纯品，但提取过程中会放出过多的有刺激性气味的硫化氢，对环境造成一定污染。

此外，根据上述结果可知，在萃取时，使用乙酸丁酯的话，收率较高，同时，乙酸丁酯在使用时更安全、环保；在重结晶中使用乙醇的话，收率较高，同时，乙醇在使用时更安全、环保。

Claims

1.一种提取霉酚酸的方法，所述方法包括从霉酚酸发酵液中提取霉酚酸，其中采用硫化物来抑制霉酚酸发生氧化和/或络合；其中以所述霉酚酸发酵液的体积计，所述硫化物的量为0.005-0.5mol/L；其中所述硫化物选自硫化金属盐、其复盐或其一氢盐、硫化氢、硫化胺、多硫化物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述硫化金属盐为硫化钠、硫化钾、硫化铵、硫化铷、硫氢化钠。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其包括以下步骤：

1)将霉酚酸发酵液与硫化物混合；

2)将步骤1)所得混合物调至pH 7.5-12，过滤；

3)将步骤2)所得滤液与第一有机溶剂混合，调至pH 1-6，分层，取有机相；

4)将步骤3)所得有机相进行结晶，得到霉酚酸粗品。

4.根据权利要求3所述的方法，其中在所述步骤3)中，所述第一有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯或它们的混合物。

5.根据权利要求3所述的方法，其中在所述步骤3)中，所述第一有机溶剂与所述滤液的体积比为1：(0.2-20)。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述步骤4)包括：将所述步骤3)所得有机相浓缩，冷却后结晶，分离，得霉酚酸粗品。

7.根据权利要求6所述的方法，其中在所述步骤4)中，所述结晶在5℃至90℃下进行。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法还包括：

5)将所得霉酚酸粗品进行重结晶，由此得到霉酚酸纯品。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述步骤5)包括：将所述步骤4)所得粗品热溶解在第二有机溶剂中，利用活性炭脱色，然后降温重结晶，分离，干燥，得到霉酚酸纯品。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述重结晶在-5℃至80℃下进行。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述第二有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、丁酮中的一种或多种。