CN103664848B

CN103664848B - 一种霉酚酸的提取方法

Info

Publication number: CN103664848B
Application number: CN201210339759.3A
Authority: CN
Inventors: 罗敏; 徐红; 张洪兰
Original assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICALS Co Ltd OF PKU INTERNATIONAL HEALTHCARE GROUP; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU International Healthcare Group Co Ltd
Current assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICAL CO LTD; New Founder Holdings Development Co ltd; Peking University Medical Management Co ltd; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU Healthcare Industry Group
Priority date: 2012-09-13
Filing date: 2012-09-13
Publication date: 2016-03-23
Anticipated expiration: 2032-09-13
Also published as: CN103664848A

Abstract

本发明涉及一种霉酚酸的提取方法。该方法包括：1）提供霉酚酸发酵液；2）将所述霉酚酸发酵液调至pH10-12，过滤；3）将步骤2）所得滤液与氯化钙混合，调至pH3.0-3.5，过滤，得到不溶物；4）将步骤3）所得不溶物溶解在有机溶剂中，过滤，得到滤液；5）将步骤4）所得滤液进行结晶，得到霉酚酸粗品。本发明的方法有效提高了霉酚酸的收率和纯度，并且简单，运行成本低，适于工业化生产。

Description

一种霉酚酸的提取方法

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及一种霉酚酸的提取方法。

背景技术

霉酚酸（也称麦考酚酸，英文名称MPA）是霉酚酸酯（Mycophenolatemofetil）的前体，其化学名称为E-4-甲基-6-(1,3-二氢-7-甲基-4-羟基-6-甲氧基-3-氧代-5-异苯并呋喃基)-4-己烯酸，分子式为C₁₇H₂₀O₆，分子量为320.34，CAS号为24280-93-1，其结构式为：

霉酚酸在体内可高效、选择性、非竞争性、可逆性地抑制次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶（IMPDH），从而阻断鸟嘌呤核苷酸的起始合成途径，使鸟嘌呤核苷酸耗竭，进而阻断DNA的合成。MPA选择性地作用于T、B淋巴细胞，抑制其增殖。在动物肾移植实验及临床肾移植中已证实吗替麦考酚酯在肾移植后排斥反应的预防和难治性排斥的治疗中起着重要作用。

利用微生物生物发酵来生产霉酚酸的工艺流程主要包括以下步骤：对微生物发酵液直接进行超声破碎，从而破碎细胞，用有机溶剂进行提取，之后将抽提液浓缩，从而得到粗晶体，然后经过色谱纯化得到最终产品。

现在有文献报道，霉酚酸可用乙醇作为萃取剂进行萃取，将萃取液浓缩，再用乙酸乙酯进行第二次萃取。上述工艺中有如下缺点：例如，用乙醇提取霉酚酸损失较大，使其废渣中还残留有较多的霉酚酸，因此收率低，易产生副产物；乙醇和乙酸乙酯挥发性较强，沸点低，危险，不易于回收，从而增大生产难度和增加生产成本。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种霉酚酸的提取方法以及由该方法得到的霉酚酸。

具体而言，本发明提供了：

（1）一种霉酚酸的提取方法，该方法包括：

1）提供霉酚酸发酵液；

2）将所述霉酚酸发酵液调至pH10-12，过滤；

3）将步骤2）所得滤液与氯化钙混合，调至pH3.0-3.5，过滤，得到不溶物；

4）将步骤3）所得不溶物溶解在有机溶剂中，过滤，得到滤液；

5）将步骤4）所得滤液进行结晶，得到霉酚酸粗品。

（2）根据（1）所述的方法，其中步骤3）中所述氯化钙的量为所述滤液体积的1%(w/v)至3%(w/v)。

（3）根据（1）所述的方法，其中在步骤3）中，在所述的调至pH3.0-3.5之后，通过将所述混合溶液与助滤剂混合来进行所述过滤。

（4）根据（1）所述的方法，其中步骤4）中所述有机溶剂选自挥发性弱的有机溶剂。

（5）根据（4）所述的方法，其中所述有机溶剂选自醋酸丁酯、醋酸丙酯或它们的混合物，其中优选为醋酸丁酯。

（6）根据（1）所述的方法，其中步骤4）中所述有机溶剂与所述不溶物的体积重量比为(2~3):1；优选为3:1。

（7）根据（1）所述的方法，其中步骤4）中所述溶解为热溶解；优选地，所述热溶解的温度为45℃至50℃。

（8）根据（1）所述的方法，其中在步骤5）中，先将步骤4）所得滤液进行脱色，然后进行结晶。

（9）根据（8）所述的方法，其中在所述脱色之前，在65℃至75℃的温度下，对步骤4）所得滤液进行浓缩，然后对所得浓缩液进行脱色。

（10）根据（8）或（9）所述的方法，其中，将由所述脱色得到的溶液在50℃至75℃的温度下进行浓缩，在0℃至5℃的温度下进行结晶，从而得到霉酚酸粗品。

（11）根据（1）-（10）中任意一项所述的方法，该方法还包括：6）对所得霉酚酸粗品进行重结晶。

本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

1.与通常采用的在碱性条件下过滤之后利用有机溶剂进行萃取不同，本发明在碱性条件下过滤之后，加入特定的盐，再进行过滤，大大增加了霉酚酸成分的沉降速度，提高了滤饼中霉酚酸的含量和收率，并且减少了后续精制步骤中所用有机溶剂的量和精制步骤，有效提高了最终产品的收率和纯度。

2.本发明进一步选用低挥发性的有机溶剂对含霉酚酸的滤饼进行萃取，克服了现有技术中的如下缺点：霉酚酸收率低、易产生副产物；所用有机溶剂沸点低、燃点低、危险、不易于回收；生产困难、成本高等。该有机溶剂进一步为中等极性的有机溶剂，使副产物进一步减少，提高了霉酚酸的纯化效果。

3.本发明通过进一步合理控制对含霉酚酸滤饼进行萃取的温度，使得萃取效率提高，同时保证了最终产物的纯度。

4.本发明通过控制提取过程中的pH范围、过滤条件、结晶条件等，使得能够更加成功地从发酵液中提取霉酚酸。

5.本发明的方法简单，运行成本低，适于工业化生产。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

本文所述的发酵液是指生产霉酚酸的发酵液，其可通过（例如）下述科技文献中所述的方法进行发酵得到：“秦祥田，许永锋，程赵兵等人的“麦考酚酸产生菌的诱变育种及发酵的研究”《中国抗生素杂志》005年7月第30卷第7期”。发酵所用菌株可以为短密青霉菌，短密青霉菌是本领域已知的，可商购得到，例如可为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心的菌种编号40653的短密青霉菌。

霉酚酸为孢内产物，其发酵液是一种浓稠、菌浓高的油水性液体，并且无明显固型物，发酵液不便于固液分离。在目前的工艺中，通常在对发酵液调碱后采用有机溶剂，特别是用乙醇作为萃取剂对滤液进行萃取。然而，有些有机溶剂（例如乙醇）的溶解性强，能溶解的物质广泛，对溶解物的选择性差，萃取液中的杂质过多，对后面的纯化工艺带来了一定的难度。此外，有些有机溶剂（例如乙醇）的沸点和燃点都很低，因此危险且不易回收。

本发明人通过大量的理论研究和试验摸索，发现在对发酵液调碱并过滤后，将氯化钙与所得滤液混合并调至特定的酸性pH值，然后进行过滤，由此替代现有技术中利用有机溶剂所进行的萃取，这样能够大大增加霉酚酸成分的沉降速度，提高不溶物中霉酚酸成分的含量和收率，减少后续萃取步骤中所用有机溶剂的量和萃取次数，并且能够有效提高最终产品的收率和纯度。认为获得这些效果的原因是：氯化钙有助于经调碱过滤后所得滤液中的霉酚酸成分沉积到不溶物中。此外，本发明人还发现将提取过程中的pH控制在特定范围内，能够更加成功地从发酵液中提取霉酚酸。

本发明人在上述发现的基础上，进一步对从霉酚酸发酵液中提取霉酚酸的各个步骤的条件进行了摸索和优化，从而完成了本发明。

具体而言，本发明的目的是提供一种霉酚酸的提取方法，该方法包括以下步骤：

1）提供霉酚酸发酵液；

2）将所述霉酚酸发酵液调至pH10-12，过滤；

5）将步骤4）所得滤液进行结晶，得到霉酚酸粗品。

在本发明的步骤2）中，优选在调节pH之后，加入纯化水稀释过滤，再加入助滤剂过滤。其中所述助滤剂优选为硅藻土、珍珠岩或它们的混合物，其中优选为珍珠岩。

此外，在本发明的步骤2）中，利用碱将步骤1）所述霉酚酸发酵液的pH调至10-12。如果pH过高，则会影响霉酚酸与碱结合，从而降低收率；如果pH过低则会生成副产物。所述碱可以选自氢氧化钠、KOH、Ba(OH)₂中的一种或多种。

在本发明的步骤3）中，所述氯化钙的量优选为所述滤液体积的1%(w/v)至3%(w/v)，例如，每百升（或每百毫升）滤液采用1-3千克（或克）的氯化钙。如果加入过多则不利于在后续步骤中将其去除，如果加入过少则达不到上述的有益效果，例如增加沉降速度、提高收率等。

此外，在本发明的步骤3）中，利用酸将pH调至3.0-3.5。霉酚酸在此条件下可以很好地被析出，如果pH过低，酸性太强，会破坏霉酚酸，并且会损伤设备；如果pH过高，则霉酚酸析出不完全。所述酸可以选自盐酸、醋酸中的一种或多种。优选地，在调酸后，静置沉降30~60分钟。

优选的是，在本发明的步骤3）中，在所述的调至pH3.0-3.5之后或静置沉降后，将所述混合溶液与助滤剂混合来进行所述过滤，所述助滤剂选自硅藻土、珍珠岩或它们的混合物，其中优选为珍珠岩。

对于萃取剂，现有技术中所使用的有机溶剂通常为乙酸乙酯、甲苯等。然而，乙酸乙酯等的挥发性较强，沸点和燃点都很低，甲苯易燃，并且属于二类有机溶剂，容易对动物和人产生致癌性，因此它们在工业化生产过程中较危险，且不易回收，应该避免大规模使用。因此，本发明在步骤4）中优选使用挥发性弱的有机溶剂对所得含霉酚酸的不溶物（可为滤饼形式）进行萃取。在本发明中，术语“挥发性弱”是指所述有机溶剂的沸点超过100℃，从而使得该有机溶剂的挥发性较其它有机溶剂的弱。

所述挥发性弱的有机溶剂优选选自醋酸丁酯、醋酸丙酯或它们的混合物。其中，由于醋酸丁酯为中等极性的有机溶剂，因此其对萃取液中的有机杂质的溶解性较差，这样能够进一步提高霉酚酸的纯化效果，并且可以大大提高产品质量和收率，降低副产物，因此醋酸丁酯是更加优选的。

此外，在本发明的步骤4）中，所述有机溶剂与所述不溶物的体积重量比为可以为(2~3):1，优选为3:1，单位为（例如）L/kg或ml/g。如上文所述，本发明在步骤2）中使用氯化钙代替有机溶剂，提高了所述不溶物中霉酚酸成分的含量和收率，还可以增加其沉降速度，提高最终霉酚酸的提取收率和纯度，因此减少了步骤4）中所使用的有机溶剂的量。已知现有技术在相应的步骤中，通常使用与在之前的步骤中得到的霉酚酸成分的体积重量比为至少5:1的有机溶剂。

已知霉酚酸是一种比较稳定的乙烯酸，但高温对其有一定的影响，例如，萃取温度对于提取霉酚酸有一定的影响。当萃取温度过低时，萃取不完全，造成浪费；随着萃取温度的升高，萃取效率也随之提高，但温度过高会使霉酚酸发生降解从而增加产品中的杂质。

因此，优选的是，在本发明的步骤4）中，将步骤3）所得不溶物热溶解在有机溶剂中。所述热溶解的温度优选为45℃至50℃。本发明的步骤4）可进行1-3次。

在本发明的步骤5）中，优选先将步骤4）所得滤液进行脱色，然后进行结晶。此外，优选的是，在所述脱色之前，在65℃至75℃的温度下，对步骤4）所得滤液进行浓缩（例如薄膜浓缩），优选浓缩至原体积的30%-50%左右；然后对所得浓缩液进行脱色。可以按照浓缩液体积的2%-5%(w/v)加入活性炭进行所述脱色，例如，每升浓缩液加入20-50g的活性炭，并且所述活性炭可以是针用活性炭。

此外，优选的是，在本发明的步骤5）中，将所述脱色得到的溶液进行浓缩，优选浓缩至约为原体积的30%-40%；浓缩可以是本领域已知的任何常规浓缩方法，例如减压浓缩；减压浓缩可以在50℃至75℃的温度下进行以减少损失，但该温度不能超过75℃，因为当超过75℃时，霉酚酸的质量有可能有所改变。浓缩之后进行结晶，结晶可以在低温下进行，例如在0℃至5℃的温度下进行结晶，从而得到霉酚酸粗品。

如有需要，还可对通过上述方法获得的霉酚酸粗品进行重结晶，从而得到霉酚酸纯品。

在本发明的另一个具体的实施方式中，本发明的方法包括以下步骤：

i）提供霉酚酸发酵液；

ii）将发酵液用NaOH调节至pH10-12，压滤，得到滤液；

iii）开启搅拌，加入所得滤液体积1-3%(w/v)的CaCl₂，用HCl溶液调pH至3.0-3.5，静置沉降，加入珍珠岩助滤剂，搅拌均匀。进行压滤，弃去滤液，使其充分吸附在珍珠岩内，然后抽滤得到滤饼；

iv）将所得滤饼在40～45℃下烘干，将烘干的滤饼粉碎后投入萃取桶中，加入醋酸丁酯，在45～50℃下搅拌萃取1~2小时后，用抽滤槽抽干物料，得到滤液，按上述条件重复萃取2～3次；

v）使所得滤液进入薄膜浓缩器进行浓缩，物料温度为65℃-75℃，真空度≤-0.08Mpa，使浓缩液体积为滤液体积的0.4-0.6倍，之后加入浓缩液体积2%-5%（w/v）的活性炭，在40℃-50℃下保温搅拌脱色30～40分钟，加入脱色后物料体积20%-60%的纯化水搅拌洗涤5~10分钟后静置分层，共洗涤2次，洗涤之后，排去重液，将上轻液过滤后，先用薄膜浓缩器进行初步浓缩后再用减压浓缩罐浓缩，料温为50℃-75℃，真空度≤-0.08Mpa，一但有晶体析出，停止浓缩；

vi）将所得浓缩液降温至5℃或以下，搅拌结晶，结晶时间＞12小时，将所得物料放入离心机分离，基本无液体后得到结晶粥，用结晶粥3-4倍体积的纯化水洗涤，之后甩干，再用所得结晶粥体积5-10%的乙醇洗涤并甩干，得到潮晶；

vii）将所得潮晶烘干，得到霉酚酸粗晶体。

本发明还提供了利用本发明的上述方法纯化得到的霉酚酸。

以下通过例子的方式进一步解释或说明本发明的内容，但这些例子不应被理解为对本发明的保护范围的限制。

例子

在以下例子中，按照以下方法测定霉酚酸的含量：精密称取约0.4g供试品，加冰醋酸50ml，按照电位滴定法（中国药典2005年版附录ⅦA），用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并用空白试验校正滴定所得结果。

以下例子中所用的试剂均可购自重庆川东化工有限公司。

霉酚酸发酵液可得自重庆大新药业股份有限公司。

实施例1

用15%(w/v)NaOH将10L霉酚酸发酵液（发酵单位是4978μg/ml）调至pH10，压滤。开启搅拌，向滤液中加入滤液体积1%(w/v)的CaCl₂，用5mol/LHCl溶液调pH至3.0，静置沉降，沉降时间为30分钟，加入20g珍珠岩助滤剂，搅拌均匀，过滤，得到滤饼。

将滤饼在40℃下烘干，将烘干的1000g滤饼粉碎后，投入萃取桶中，加入3L醋酸丁酯，在45℃下，搅拌萃取1小时左右，之后用抽滤槽抽干物料，得到滤液。按上述条件再重复萃取2次。之后利用薄膜浓缩器对所得滤液进行浓缩，物料温度65℃，真空度为-0.08Mpa，得到3.1L浓缩液。加入浓缩液体积2%(w/v)的活性炭，在40℃下保温搅拌脱色30分钟。加入脱色后物料体积30%的纯化水搅拌洗涤5分钟后静置分层，共洗涤2次。洗涤好后，排去重液，将上轻液过滤后进行以下第二次浓缩：滤液应澄清，上轻液先用薄膜浓缩器进行初步浓缩后再用减压浓缩罐浓缩，料温65℃，真空度：-0.08Mpa，得到1.2L浓缩液。

将所得浓缩液降温至5℃左右，搅拌结晶，结晶时间为12小时。将所得物料放入离心机分离，基本无液体后得到结晶粥，用结晶粥3倍体积的纯化水洗涤后甩干，再用结晶粥体积10%的乙醇洗涤并甩干，得到潮晶。称重，按理论值计算所得潮晶的收率为80%，纯度为95%。

再将所得潮晶烘干，加入潮晶重量3倍的乙醇，再加入潮晶重量1%的活性碳，在60-70℃下保温溶解，过滤，滤液进行结晶，降温至20℃，结晶24小时后进行分离，得到霉酚酸晶体，再在真空度≤-0.08Mpa、箱内温度40-45℃的条件下干燥，取出晶体装袋。得到晶体的色谱纯度达到102.5%，提取总收率78%。

实施例2

用15%(w/v)NaOH将10L霉酚酸发酵液（发酵单位是4898μg/ml）调至pH11，压滤。开启搅拌，向滤液中加入滤液体积2%(w/v)的CaCl₂，用5mol/LHCl溶液调pH至3.2，静置沉降，沉降时间为40分钟，加入20g珍珠岩助滤剂，搅拌均匀，过滤，得到滤饼。

将滤饼在42℃下烘干，将烘干的1000g滤饼粉碎后，投入萃取桶中，加入3L醋酸丁酯，在48℃下，搅拌萃取1.5小时，之后用抽滤槽抽干物料，得到滤液。按上述条件再重复萃取2次。之后利用薄膜浓缩器对所得滤液进行浓缩，物料温度70℃，真空度为-0.08Mpa，得到3.0L浓缩液。加入浓缩液体积4%的活性炭，在45℃下保温搅拌脱色40分钟。加入脱色后物料体积40%的纯化水搅拌洗涤10分钟后静置分层，共洗涤2次。洗涤好后，排去重液，将上轻液过滤后进行以下第二次浓缩：滤液应澄清，上轻液先用薄膜浓缩器进行初步浓缩后再用减压浓缩罐浓缩，料温70℃，真空度：-0.08Mpa，得到1.2L浓缩液。

将所得浓缩液降温至5℃，搅拌结晶，结晶时间为12小时。将所得物料放入离心机分离，基本无液体后得到结晶粥，用结晶粥4倍体积的纯化水洗涤后甩干，再用结晶粥体积10%的乙醇洗涤并甩干，得到潮晶。称重，按理论值计算所得潮晶的收率为81.5%，纯度为94.5%。

将所得潮晶烘干，加入潮晶重量4倍的乙醇，再加入潮晶重量1%的活性碳，在60℃下保温溶解，过滤，滤液进行结晶，降温至20℃，结晶24小时后进行分离，得到霉酚酸晶体，再在真空度≤-0.08Mpa、箱内温度40℃的条件下干燥，取出晶体装袋。得到晶体的色谱纯度达到101.5%，提取总收率80%。

实施例3

用16%(w/v)NaOH将10L霉酚酸发酵液（发酵单位是7050μg/mL）调至pH12，压滤。开启搅拌，向滤液中加入滤液体积2%(w/v)的CaCl₂，用5mol/lHCl溶液调pH至3.5，静置沉降，沉降时间为50分钟，加入20g珍珠岩助滤剂，搅拌均匀，过滤，得到滤饼。

将滤饼在45℃下烘干，将烘干的1000g滤饼粉碎后，投入萃取桶中，加入3L醋酸丁酯，在50℃下，搅拌萃取2小时，之后用抽滤槽抽干物料，得到滤液。按上述条件再重复萃取2次。之后利用薄膜浓缩器对所得滤液进行浓缩，物料温度75℃，真空度为-0.08Mpa，得到3.5L浓缩液。加入浓缩液体积5%（w/v）的活性炭，在45℃下保温搅拌脱色40分钟。加入脱色后物料体积60%的纯化水搅拌洗涤10分钟后静置分层，共洗涤2次。洗涤好后，排去重液，将上轻液过滤后进行以下第二次浓缩：滤液应澄清，上轻液先用薄膜浓缩器进行初步浓缩后再用减压浓缩罐浓缩，料温70℃，真空度：-0.08Mpa，得到1.3L浓缩液。

将所得浓缩液降温至5℃，搅拌结晶，结晶时间为12小时。将所得物料放入离心机分离，基本无液体后得到结晶粥，用结晶粥4倍体积的纯化水洗涤后甩干，再用结晶粥体积10%的乙醇洗涤并甩干，得到潮晶。称重，按理论值计算所得潮晶的收率为83.5%，纯度为96%。

将所得潮晶烘干，加入潮晶重量5倍的乙醇，再加入潮晶重量1%的活性碳，在60℃下保温溶解，过滤，滤液进行结晶，降温至20℃，结晶24小时后进行分离，得到霉酚酸晶体，再在真空度≤-0.08Mpa、箱内温度40℃的条件下干燥，取出晶体装袋。得到晶体的色谱纯度达到101.5%，提取总收率80%。

试验例

试验A：

在20L发酵液（发酵单位：4978μg/ml）中加入20L的饮用水稀释发酵液。用15%(w/v)的NaOH溶液调pH至10，过滤收集滤渣，加入20L的饮用水进行二次压滤，pH与一次压滤一致，合并滤液进入离析。压滤收率≥90%。

滤液进入离析，开启搅拌，加入滤液体积1%(w/v)的CaCl₂，用HCl溶液调pH至3.0，静置沉降，沉降时间为30分钟，加入珍珠岩助滤剂，搅拌均匀。进行压滤，弃去滤液，得到滤饼，滤液单位98.4μg/ml。计算所得霉酚酸的收率为90%。

试验B：

在20L发酵液（发酵单位：4978μg/ml）中加入1kg硅藻土，过滤，滤液单位（237.5μg/ml），体积15L，得到滤饼，再加入10L乙醇搅拌萃取，温度控制在45-50℃，然后过滤，再这样重复萃取两次，将得到的滤液混合，计算滤液的单位3052μg/ml，体积26L。此步损失霉酚酸2g，计算所得霉酚酸的收率为81%。

比较试验A与试验B可以得知，在试验A中，通过调节溶液pH，再加入CaCl₂进行离析，计算所得废液的单位仅为98.4μg/ml，此步霉酚酸的提取收率较对比例明显提高。此外，比较实施例1-4与试验B可以发现，各实施例中所使用的有机溶剂的量减少，因此减少了有机溶剂的残留。

试验C：

在20L发酵液（发酵单位：4978μg/ml）中加入20L的饮用水稀释发酵液。用15%(w/v)的NaOH溶液调pH至10，过滤收集滤渣，加入发酵液体积20L的饮用水进行二次压滤，pH与一次压滤一致，合并滤液进入离析。离析后用盐酸调pH3.0，静置沉降，沉降时间为5个小时，加入珍珠岩助滤剂，搅拌进行压滤，得到滤饼。测得滤液单位214μg/ml，计算所得霉酚酸的收率83%。

比较试验C与试验A可以得知，试验A中加入氯化钙可以加快沉降速度，从而减少沉降过滤时间，并且可以大大提高霉酚酸的提取收率。

由以上实施例和试验例的结果可以看出，利用本发明的方法可以得到高纯度的霉酚酸粗品，将该粗品重结晶后获得了更高纯度的产品。此外，本发明的方法提高了产品质量和收率，大大减少了霉酚酸成分的沉降过滤时间，缩短了生产周期，所使用的有机溶剂易于回收利用，并且低毒，大大降低了生产成本。

Claims

1.一种霉酚酸的提取方法，该方法包括：

1)提供霉酚酸发酵液；

2)将所述霉酚酸发酵液调至pH10-12，过滤；

3)将步骤2)所得滤液与氯化钙混合，调至pH3.0-3.5，过滤，得到不溶物；

4)将步骤3)所得不溶物溶解在有机溶剂中，过滤，得到滤液；

5)将步骤4)所得滤液进行结晶，得到霉酚酸粗品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)中所述氯化钙与所述滤液的重量体积比为1％至3％。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤3)中，在所述的调至pH3.0-3.5之后，通过将所述混合溶液与助滤剂混合来进行所述过滤。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)中所述有机溶剂选自挥发性弱的有机溶剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述有机溶剂选自醋酸丁酯、醋酸丙酯或它们的混合物。

6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)中所述有机溶剂与所述不溶物的体积重量比为(2～3):1。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)中所述溶解为热溶解。

8.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤5)中，先将步骤4)所得滤液进行脱色，然后进行结晶。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在所述脱色之前，在65℃至75℃的温度下，对步骤4)所得滤液进行浓缩，然后对所得浓缩液进行脱色。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，将由所述脱色得到的溶液在50℃至75℃的温度下进行浓缩，在0℃至5℃的温度下进行结晶，从而得到霉酚酸粗品。

11.根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，该方法还包括：6)对所得霉酚酸粗品进行重结晶。

12.根据权利要求4所述的方法，其中所述有机溶剂为醋酸丁酯。

13.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)中所述有机溶剂与所述不溶物的体积重量比为3:1。

14.根据权利要求7所述的方法，其中所述热溶解的温度为45℃至50℃。