CN103787863A - 制备型高效液相色谱法制备epa的方法 - Google Patents

制备型高效液相色谱法制备epa的方法 Download PDF

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张大兵
张宁
罗军侠
刘玉明
李胜迎
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    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
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Abstract

本发明公开了一种制备型高效液相色谱法提纯EPA的方法。该方法采用反相硅胶作为DAC制备柱填料，甲醇和水的混合溶剂为流动相的方法分离纯化了EPA，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，适用于大规模的工业化生产。

Description

制备型高效液相色谱法制备EPA的方法
技术领域
  本发明涉及的是动态轴向压缩柱分离纯化EPA的方法，具体是采用动态轴向压缩制备柱进行分离纯化EPA的方法。 
背景技术
   二十碳五烯酸（EPA），化学名称为5、8、11、14、17-全顺-二十碳五烯酸，属于ω-3 系列不饱和脂肪酸，是人体重要不饱和脂肪酸，具有重要的生理活性功能，在治疗和防治心脑血管疾病、炎症、抑制肿瘤以及预防老年痴呆等方面具有良好的疗效。二十碳五烯酸的开发应用已受到世界各国科学家的关注与重视。传统的分离方法有有机溶剂萃取、高效液相层析等，最近又有尿素包合法、真空蒸馏法、分子蒸馏法、低温结晶法以及超临界流体分离法，这些方法中大多存在着产品纯度低、成本高、工艺复杂等缺点。 
    随着制药、生物化工等行业的迅速发展，制备型液相色谱分离技术得到越来越广泛的开发和应用，已成为分离和纯化复杂混合物的重要方法，尤其适用于天然产物的分离。动态轴向压缩(DAC)法具有多方面的优越性，因而得到了更为深入的研究和发展。动态轴向压缩柱的核心技术是通过活塞的上下运动来装柱、维持柱压和卸柱，简化了大直径色谱柱的填卸过程，填装的色谱柱性能稳定、效率高。DAC柱柱效高，重复性好，填装所用的时间短，可以采用粒径更小的填料，减小柱长，增加柱径，从而减小管壁效应，得到几乎接近分析柱的柱效。 
    本发明采用反相动态轴向压缩柱制备色谱法分离纯化了EPA，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，适用于大规模的工业化生产。 
发明内容
本发明的目的是提供一种用动态轴向压缩柱分离纯化EPA的生产方法，包括样品溶解、动态轴向压缩柱分离、重结晶以及成品的纯度检测。 
本发明为实现上述发明目的采用如下步骤： 
    a、样品的溶解：EPA粗品用甲醇溶解，过滤，备用；    
b、流动相的配制：流动相采用甲醇与水的混合溶剂，甲醇的浓度为80-95%之间；
    c、DAC柱分离：用进样泵向填装好填料的动态轴向压缩柱中泵入上述溶解的样品溶液，再用步骤b配制好的流动相洗脱，收集目标成分，取样HPLC检测；
    d、浓缩：将c步骤中收集到的目标组分进行浓缩处理，得到EPA纯品；
 e、成品的纯度检测：泵：NewstyleNP7000型泵；色谱柱(ODS填料4.6*250mm，5μm)；检测器：汉邦紫外检测器NewstyleNU3000，检测波长：210nm，检测温度：室温；流动相：甲醇:水=90:10，流速：1.0mL/min
具体实施方式
实施方案一 
1、样品的溶解：EPA粗品用甲醇溶解，浓度为200g/mL，过滤，备用；   
2、流动相的配制：流动相为甲醇：水=87:13； 
3、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为60mL/min，用流动相洗脱，流速为100mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；
4、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到EPA纯品，经HPLC检测纯度为98.8%。
  
实施方案二
1、样品的溶解：EPA粗品用甲醇溶解，浓度400g/mL，过滤，备用；   
2、流动相的配制：流动相为甲醇：水=88:12； 
3、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为60mL/min，用流动相洗脱，流速为100mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；
4、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到EPA纯品，经HPLC检测纯度为98.5%。
  
实施方案三
1、样品的溶解：EPA粗品用甲醇溶解，浓度为500g/mL，过滤，备用；   
2、流动相的配制：流动相为甲醇：水=88:12； 
3、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为60mL/min，用流动相洗脱，流速为80mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；
4、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到EPA纯品，经HPLC检测纯度为98.6%。
  
上述实施实例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。
  

Claims (7)

1.一种分离纯化EPA的方法，包括：
a、样品的溶解：将EPA粗品用甲醇溶解，过滤，备用；
b、流动相的配制：流动相采用甲醇与水的混合溶剂，甲醇的浓度为80-95%之间；
c、上柱洗脱：用进样泵向装好填料的动态轴向压缩制备柱中泵入步骤a溶解好的样品，再用步骤b配制好的流动相洗脱，收集目标成分，取样用HPLC检测纯度；
d、浓缩：对收集到的目标组分进行浓缩处理，得EPA纯品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于a步骤样品的浓度在0-500mg/mL之间。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于c步骤中采用单针上柱吸附、解析并进行分段收集；或采用多针分批连续方式上柱、解析的连续进样方式，且对每批解析液进行分段收集。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用的动态轴向压缩柱为50-1000mm各系列不同直径的制备柱，所述填料为C18或C8，填料粒径为20-40um。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于c步骤样品溶液的上样流速为0.02BV/min~0.10BV/min，洗脱流速为0.10 BV/min~0.20BV/min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于d步骤浓缩时的温度不能高于40℃。
7.根据权利要求1~6任一项所述的方法，其特征在于重复进行c步骤，直到所得EPA用HPLC检测含量达到98%以上。
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PB01 Publication
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
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