CN103788155A - 一种柚皮苷的制备方法 - Google Patents

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张大兵
张宁
罗军侠
刘玉明
王亚辉
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Abstract

本发明涉及一种天然产物的提纯方法，具体来说，本发明涉及一种制备高纯度柚皮苷的方法及其工艺。采用乙醇为溶剂加热回流，反相硅胶作为DAC制备柱填料，甲醇和水的混合溶剂为流动相的方法分离纯化了柚皮苷，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，为进一步工业化制备型液相色谱分离纯化柚皮苷提供了基础。

Description

一种柚皮苷的制备方法
技术领域
本发明涉及的是动态轴向压缩柱分离纯化柚皮苷的方法，具体是采用乙醇加热回流提取、动态轴向压缩制备柱进行分离纯化的方法。 
背景技术
    柚皮苷为柚子中主要的黄酮成分。现代药理学研究发现柚皮苷具有多种生物活性和药理作用(如消炎，降低血液粘度，减少血脂和血栓的形成等)，在医药、食品及化妆品等领域具有广泛的应用。目前在对柚子研究中往往将柚皮苷作为影响果胶色泽的色素加以去除，而对柚子中柚皮苷同时加以分离提取以及纯化的研究较少。 
    随着制药、生物化工等行业的迅速发展，制备型液相色谱分离技术得到越来越广泛的开发和应用，已成为分离和纯化复杂混合物的重要方法，尤其适用于天然产物的分离。动态轴向压缩(DAC)法具有多方面的优越性，因而得到了更为深入的研究和发展。动态轴向压缩柱的核心技术是通过活塞的上下运动来装柱、维持柱压和卸柱，简化了大直径色谱柱的填卸过程，填装的色谱柱性能稳定、效率高。DAC柱柱效高，重复性好，填装所用的时间短，可以采用粒径更小的填料，减小柱长，增加柱径，从而减小管壁效应，得到几乎接近分析柱的柱效。 
    本发明采用乙醇加热回流提取，反相动态轴向压缩柱制备色谱法分离纯化了柚皮苷，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，为进一步工业化制备型液相色谱分离纯化柚皮苷提供了基础。 
发明内容
本发明的目的是提供一种从柚皮中提取并用动态轴向压缩柱分离纯化柚皮苷的生产方法，属于天然产物的提取分离纯化领域，包括醇提取、动态轴向压缩柱分离、浓缩结晶以及成品的纯度检测。 
本发明为实现上述发明目的采用如下步骤： 
a、提取：将新鲜柚皮切成粒径1cm左右小块，在真空干燥箱中干燥24h(80℃)，粉碎成约20-30目的粉末后，置于提取器中，先加入石油醚，80℃水浴回流2.5h，弃去石油醚，样品待石油醚挥干后加入50-70%乙醇，60-90℃水浴回流2h，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
b、样品的溶解：a步骤的浓缩物用甲醇与水的混合溶剂溶解，过滤，备用；    c、流动相的配制：流动相采用步骤b的甲醇与水的混合溶剂，甲醇的浓度为35-60%之间；
    d、DAC柱分离：用进样泵向填装好填料的动态轴向压缩柱中泵入上述溶解的样品溶液，再用步骤c配制好的流动相洗脱，收集目标组份，取样HPLC检测；
    e、浓缩：将d步骤中收集到的目标组分进行浓缩处理，得到柚皮苷纯品；
 f、成品的纯度检测：泵：NewstyleNP7000型泵；色谱柱(ODS填料4.6*250mm，5μm)；检测器：汉邦紫外检测器NewstyleNU3000，检测波长：283nm，检测温度：室温；流动相：甲醇:水=40:60，流速：1.0mL/min。
  
具体实施方式
实施方案一 
1、提取：将新鲜柚皮切成粒径1cm左右小块，在真空干燥箱中干燥24h(80℃)，粉碎成约20-30目的粉末后，称取1kg置于提取器中，先加入石油醚，80℃水浴回流2.5h，弃去石油醚，样品待石油醚挥干后加入20倍量的50%乙醇，60℃水浴回流2h，提取2次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
2、样品的溶解：浓缩物用甲醇:水=40:60溶解，浓度为10g/mL，过滤，备用；   
3、流动相的配制：流动相为甲醇：水=40:60； 
4、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为60mL/min，用流动相洗脱，流速为100mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；
5、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到柚皮苷纯品，经HPLC检测纯度为98.6%。
  
实施方案二
1、提取：将新鲜柚皮切成粒径1cm左右小块，在真空干燥箱中干燥24h(80℃)，粉碎成约20-30目的粉末后，称取1.2kg置于提取器中，先加入石油醚，80℃水浴回流2.5h，弃去石油醚，样品待石油醚挥干后加入20倍量的50%乙醇，80℃水浴回流2h，提取2次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
2、样品的溶解：浓缩物用甲醇:水=45:55溶解，浓度为12g/mL，过滤，备用；   
3、流动相的配制：流动相为甲醇：水=45:55； 
4、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为80mL/min，用流动相洗脱，流速为120mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；
5、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到柚皮苷纯品，经HPLC检测纯度为99.03%。
  
实施方案三
1、提取：将新鲜柚皮切成粒径1cm左右小块，在真空干燥箱中干燥24h(80℃)，粉碎成约20-30目的粉末后，称取1.5kg置于提取器中，先加入石油醚，80℃水浴回流2.5h，弃去石油醚，样品待石油醚挥干后加入25倍量的70%乙醇，80℃水浴回流2h，提取3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
2、样品的溶解：浓缩物用甲醇:水=43:57溶解，浓度为20g/mL，过滤，备用；   
3、流动相的配制：流动相为甲醇：水=43:57； 
4、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为30um填料的动态轴向压缩柱(100*700mm)中泵入样品溶液，进样流速为150mL/min，用流动相洗脱，流速为200mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；
5、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到柚皮苷纯品，经HPLC检测纯度为99.24%。
  
上述实施实例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。
  

Claims (7)

1.一种制备柚皮苷的方法，包括：
a、柚皮苷粗品的制备：将新鲜柚皮切成粒径1cm左右小块，在真空干燥箱中干燥24h(80℃)，粉碎成约20-30目的粉末后，置于提取器中，先加入石油醚，80℃水浴回流2.5h，弃去石油醚，样品待石油醚挥干后加入50-70%乙醇，60-90℃水浴回流2h，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
b、样品的溶解：将柚皮苷粗品用甲醇与水的混合溶剂溶解，过滤，备用；
c、流动相的配制：流动相采用步骤b的甲醇与水的混合溶剂，甲醇的浓度为35-60%之间；
d、上柱洗脱：用进样泵向装好填料的动态轴向压缩制备柱中泵入步骤b溶解好的样品，再用步骤c配制好的流动相洗脱，收集柚皮苷，取样用HPLC检测纯度；
e、浓缩：对收集到的目标组分进行浓缩处理，得柚皮苷纯品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是a步骤中每次回流所用50-70%乙醇的用量为柚子皮粉末的15~25倍量。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于b步骤样品的浓度在5-50g/L之间。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于d步骤中采用单针上柱吸附、解析并进行分段收集；或采用多针分批连续方式上柱、解析的连续进样方式，且对每批解析液进行分段收集。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用的动态轴向压缩柱为50-1000mm各系列不同直径的制备柱，所述填料为C18或C8，填料粒径为20-40um。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于d步骤样品溶液的上样流速为0.02BV/min~0.10BV/min，洗脱流速为0.10 BV/min~0.20BV/min。
7.根据权利要求1~6任一项所述的方法，其特征在于重复进行d步骤，直到所得柚皮苷HPLC检测含量达到97%以上。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104817602A (zh) * 2015-04-02 2015-08-05 湖南中烟工业有限责任公司 一种柚皮苷的提取方法及其应用方法
CN106905383A (zh) * 2017-03-31 2017-06-30 林婷 一种降血糖用甙类提取物及其制造方法
CN113121623A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 江西青峰药业有限公司 一种利用工业色谱技术同时制备两种二氢黄酮苷类单体化合物的方法

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