CN105669604B - 一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法 - Google Patents
一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105669604B CN105669604B CN201610147782.0A CN201610147782A CN105669604B CN 105669604 B CN105669604 B CN 105669604B CN 201610147782 A CN201610147782 A CN 201610147782A CN 105669604 B CN105669604 B CN 105669604B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- taxol
- phase
- mushroom
- high pressure
- ultra high
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D305/14—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生榛蘑里提取纯化紫杉醇的方法，特别是涉及一种利用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法。本发明优点：1、超高压提取在常温进行，营养成分破坏少，提取迅速。2、生物酶解温度低，且采用等离子液体做为溶剂，紫杉醇有效成分含量大为提高，高达99.7％。3、采用高速逆流色谱技术纯化，克服了常规技术获得紫杉醇时间较长、得率较低的缺点。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生榛蘑里提取纯化紫杉醇的方法，特别是涉及一种利用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法。
背景技术：
国内均从红豆杉科植物短叶红豆杉和中间红豆杉的针叶和树皮及云南红豆杉等植物中提取紫杉醇，原料资源单一，价格昂贵，
国内提取紫杉醇工艺主要是采用甲醇、丙酮、乙酸乙酯等作为提取溶剂，采用液液萃取、固液萃取法，提取时间16-48小时，近年也有采用超声波、微波提取技术的，用柱色谱纯化，其纯化效果远远不如运用超高压提取、生物酶解、色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的效果。
发明内容：
本发明方法采用超高压提取技术、生物酶解、高速逆流色谱技术，紫杉醇有效成分含量较高，高达99.7％。本发明优点：超高压提取在常温进行，营养成分破坏少；生物酶解温度低，且采用离子液体做为溶剂，紫杉醇有效成分提取率大大加强；同时采用高速逆流色谱技术纯化，克服了常规技术获得紫杉醇时间较长、得率较低的缺点。
本发明的目的在于克服常规技术提取时间较长、产品纯度低等缺点，提供一种利用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法，其步骤如下：
(1)超高压提取：干燥野生榛蘑粉碎至20-40目，加入适量倍数的提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在一定超高压力下处理3-5分钟，回收溶剂；
(2)生物酶解：称重提取液，加入提取液质量5-8倍数的离子液体及适量复合酶，在45-50℃下酶解2-4h；
(3)收集：回收液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；
(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；
(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22°Bé，并喷成粉；
(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于有机溶剂，加适量柱填料搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；
(7)洗脱：以2-4BV/h流速，先用水，再用不同体积浓度溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(8)真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；
(9)分相：称取一定克数紫杉醇，选择适当的HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；
(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.5％以上的成品。
具体实施方式：
实施例1：一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法，生产步骤如下：
(1)超高压提取：5000g干燥野生榛蘑粉碎至20目，加入5倍的乙酸乙酯、二氯甲烷(4∶1)提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在200MPA超高压力下处理3分钟，回收溶剂；
(2)生物酶解：称重提取液，加入6倍提取液的离子液体1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸盐，纤维素酶、果胶酶添加量为离子液体的0.2‰，在45℃酶解2h；
(3)收集：回收离子液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；
(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；
(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22.1°Bé，喷成粉734.7mg；
(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于丙酮溶液，加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；
(7)洗脱：以2BV/h流速，先用水，再用50％、60％、70％、80％体积浓度的甲醇溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(8)真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在-10℃预冻，干燥压力25Pa，升华温度50℃，解析温度60℃条件下冷冻干燥；
(9)分相：称取1.0克数紫杉醇，选择乙酸乙酯-甲醇-水3∶5∶2为HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；
(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整螺旋管转速800r/min，以2mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.7％的紫杉醇724.7mg。
实施例2：一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法，生产步骤如下：
(1)超高压提取：2000g干燥野生榛蘑粉碎至30目，加入6倍的乙酸乙酯、二氯甲烷(1∶1)提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在300MPA超高压力下处理4分钟，回收溶剂；
(2)生物酶解：称重提取液，加入7倍1-烷基-3甲基咪唑四氟硼酸盐离子液体。纤维素酶、木聚糖酶添加量为离子液体的0.25‰，在47℃酶解3h；
(3)收集：回收离子液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；
(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；
(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22°Bé，喷成粉292.1mg；
(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于二氯乙烷，加适量氧化铝搅拌，烘干过70目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；
(7)洗脱：以3BV/h流速，先用去离子水，再用50％、60％、70％、80％体积浓度的乙醇溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(8)真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在-15℃预冻，干燥压力30Pa，升华温度52℃，解析温度63℃条件下冷冻干燥；
(9)分相：称取1.0克数紫杉醇，选择正丁醇-丙酮-水4∶2∶5为HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；
(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整螺旋管转速900r/min，以2.5mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.6％的紫杉醇289.16mg。
实施例3：一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法，生产步骤如下：
(1)超高压提取：1000g干燥野生榛蘑粉碎至40目，加入7倍的乙酸乙酯、二氯甲烷(1∶1)提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在400MPA超高压力下处理5分钟，回收溶剂；
(2)生物酶解：称重提取液，加入8倍1-烷基-3甲基咪唑四氟硼酸盐离子液体。纤维素酶、葡聚糖酶添加量为离子液体的0.23‰，在50℃酶解4h；
(3)收集：回收离子液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；
(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；
(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22°Bé，喷成粉146.8mg；
(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于乙酸乙酯，加适量CIS反相硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；
(7)洗脱：以4BV/h流速，先用去离子水，再用50％、60％、70％、80％体积浓度的正丁醇溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(8)真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在-20℃预冻，干燥压力35Pa，升华温度55℃，解析温度65℃条件下冷冻干燥；
(9)分相：称取1.0克数紫杉醇，选择氯仿-乙醇-水5∶4∶3为HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；
(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整螺旋管转速1000r/min，以3mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.5％的紫杉醇143.9mg。
Claims (1)
1.一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法，其步骤如下：
(1)超高压提取：干燥野生榛蘑粉碎至20-40目，加入适量倍数的提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在一定超高压力下处理3-5分钟，回收溶剂，其中，所述的提取溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷，超高压力为200-400MPA；
(2)生物酶解：称重提取液，加入提取液质量5-8倍数的离子液体及适量复合酶，在45-50℃下酶解2-4h；其中，所述的复合酶为纤维素酶、果胶酶、葡聚糖酶、木聚糖酶中的两种或两种以上，加量为离子液体重量的0.2-0.3‰，离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐或1-烷基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐；
(3)收集：回收液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；
(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；
(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22°Bé，并喷成粉；
(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于有机溶剂，加适量柱填料搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；其中，所述的有机溶剂为丙酮、二氯乙烷、乙酸乙酯中的任意一种，柱填料为硅胶、氧化铝、CIS反相硅胶中的任意两种或两种以上；
(7)洗脱：以2-4BV/h流速，先用去离子水，再用50％、60％、70％、80％体积浓度的甲醇溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；
(8)干燥：真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；
(9)分相：称取一定克数紫杉醇，选择适当的HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；其中，所述的HSCCC溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水3:5:2、正丁醇-丙酮-水4:2:5、氯仿-乙醇-水5:4:3中的任意一种；
(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为800-1000r/min，以2-3mL/min的流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.5％以上的成品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610147782.0A CN105669604B (zh) | 2016-03-09 | 2016-03-09 | 一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610147782.0A CN105669604B (zh) | 2016-03-09 | 2016-03-09 | 一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105669604A CN105669604A (zh) | 2016-06-15 |
| CN105669604B true CN105669604B (zh) | 2018-12-25 |
Family
ID=56310458
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610147782.0A Active CN105669604B (zh) | 2016-03-09 | 2016-03-09 | 一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105669604B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106418124A (zh) * | 2016-09-07 | 2017-02-22 | 华南师范大学 | 酵母提取物的去味方法及对酵母味成分的鉴定方法 |
| CN112972354A (zh) * | 2021-02-26 | 2021-06-18 | 广东梵蜜琳生物科技有限公司 | 一种护肤组合物及其在化妆品中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1420115A (zh) * | 2001-11-16 | 2003-05-28 | 四川哥伦泰克生物工程有限公司 | 榛科植物提取紫杉醇的技术 |
| CN105017182A (zh) * | 2015-07-06 | 2015-11-04 | 贵州玉福临科技开发有限公司 | 一种从红豆杉中高效提取紫杉醇的方法 |
-
2016
- 2016-03-09 CN CN201610147782.0A patent/CN105669604B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1420115A (zh) * | 2001-11-16 | 2003-05-28 | 四川哥伦泰克生物工程有限公司 | 榛科植物提取紫杉醇的技术 |
| CN105017182A (zh) * | 2015-07-06 | 2015-11-04 | 贵州玉福临科技开发有限公司 | 一种从红豆杉中高效提取紫杉醇的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 曼地亚红豆杉枝条中紫杉醇的提取纯化研究;乔亮杰;《中南大学硕士学位论文》;20091211;第21-59页 * |
| 超高压提取技术在中药提取中的应用;赵鹏，等;《中国医药生物技术》;20080831;第3卷(第4期);第301-302页 * |
| 酶在离子液体中的催化反应研究综述;马歌丽，等;《郑州轻工业学院学报（自然科学版）》;20111031;第26卷(第5期);摘要、第71页左栏第1段 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105669604A (zh) | 2016-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102976909B (zh) | 一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法 | |
| CN103467438B (zh) | 五味子中木脂素单体的提取分离制备方法 | |
| CN104892687A (zh) | 高速逆流色谱分离纯化十大功劳叶中单体化合物的方法 | |
| CN105669604B (zh) | 一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法 | |
| CN102070589B (zh) | 一种从南方红豆杉叶中提取金松双黄酮的方法 | |
| CN110437059B (zh) | 一种从茯苓皮中提取制备茯苓酸a和茯苓酸b的方法 | |
| CN104230858B (zh) | 一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法 | |
| CN106967136A (zh) | 一种分离高纯度橄榄苦苷的方法 | |
| CN104829656B (zh) | 一种从麻花艽中制备龙胆苦苷化学对照品的方法 | |
| CN103183654B (zh) | 芹菜籽活性单体的分离纯化制备工艺 | |
| CN102617674B (zh) | 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法 | |
| CN103694213A (zh) | 一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法 | |
| CN100427501C (zh) | 逆流色谱法从柿叶中分离制备熊果酸及其衍生物的方法 | |
| CN104788527B (zh) | 一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法 | |
| CN106543003A (zh) | 一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法 | |
| CN103570647A (zh) | 从红豆杉细胞培养液中制备高纯度紫杉醇的方法 | |
| CN108101923B (zh) | 一种光甘草定单体的分离提纯方法 | |
| CN102351825B (zh) | 一种银杏双黄酮的提取分离方法 | |
| CN103242414B (zh) | 一种从南蛇藤药材分离纯化雷公藤红素的方法 | |
| CN111892503B (zh) | 一种从平卧菊三七花中快速制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN105418572B (zh) | 利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法 | |
| CN103788155A (zh) | 一种柚皮苷的制备方法 | |
| CN111388608A (zh) | 一种凤尾竹提取物及其制备方法和应用 | |
| CN103288898B (zh) | 新芒果苷对照品提取纯化分离方法 | |
| CN107353296B (zh) | 一种从东革阿里中提取活性蛋白和宽缨酮的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |