CN103203122B

CN103203122B - 用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法

Info

Publication number: CN103203122B
Application number: CN201210381024.7A
Authority: CN
Inventors: 殷美芳
Original assignee: Individual
Current assignee: Yin Meifang
Priority date: 2012-10-09
Filing date: 2012-10-09
Publication date: 2015-09-09
Anticipated expiration: 2032-10-09
Also published as: CN103203122A

Abstract

本发明涉及一种用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，包括以下步骤：1）将所述动植物粗品加入到流动相溶剂一中，充分溶解，得到待分离提纯的溶液，2）将固定相正相、反相填料加入到液相色谱层析柱中，进行加压至稳定后，再保压，然后将待分离提纯的溶液加入到所述液相色谱层析柱中，至所述待分离提纯的溶液通过所述固定相正相、反相填料；然后再将流动相溶剂二加入到所述液相色谱层析柱中，进行洗脱，得到流出液，3）将流出液进行蒸馏脱溶，即得到所述高纯天然生物。液相色谱仪能够分析的物质都可以使用本技术进行分离、提纯，这也是本技术应用的广泛性，总收率在95%以上。

Description

用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法

技术领域

本发明涉及一种用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，具体涉及一种用高、中、低压正、反液相色谱柱从动植物中分离、提纯高纯天然生物的方法。

背景技术

由于天然提取物组分比较复杂，一些组分和一些组分的异构体之间结构差异较小，因此在分离提取的时候往往是纯度偏低的混合物，然后再用这些组分物理结构上的差异，使用特殊的分离，提取工艺来处理。目前处理的方法主要有：溶剂萃取法、化学反应法、分子蒸馏法、树脂吸附法、层析法和超临界萃取法等。

CN101220018A公开了一种采用四区八柱的模拟移动床系统（Simulatedmoving bed chromatography,SMBC），以正己烷等为流动相，硅胶等为固定相的方法模拟维生素E在固定相和流动相间多次反复吸附、分离的方式分离得到维生素E的各种单体。由于此种方法在各区间阀门切换时间上不易操控，溶剂的选择和回收上存在一定困难，尤其是这种设备成本很高，效率低，国内尚未有工业化分离维生素E的报道。

CN101323067A公开了一种以从脱臭馏出物为原料，通过酯化醇解，冷却结晶分离植物甾醇，以及短程蒸馏回收的方法，制得生育酚浓缩液，然后将生育酚浓缩液上硅胶层析柱分离，再经过不同有机溶剂洗涤分别得到脂肪酸酯、高含量混合生育酚和植物甾醇，但是这种方法得到的只是混合型生育酚，不能得到生育酚的各种单体，分离和生产效率低。

CN1234703C公开了一种以脱臭馏出物为原料经过水解酸化、甲醇酯化、皂化、酯化、冷却，最后经过蒸馏分离出脂肪酸甲酯，再通过吸附分离的方法制备混合生育酚，虽然这种方法制得的生育酚的纯度在95%以上，但是也只是各种生育酚单体的混合物，无法得到纯度较高的各种生育酚的单体，分离效率低，操作流程冗长，生产效率也低。

CN102432584A公开了一种从混合生育酚在流动性一中溶解常压下直接加入到反相层析柱中，然后用流动相溶剂二加入到反相层析柱中，分段收集后经处理得到生育酚单体，其纯度在90%以上。但是这种方法分离生产效率低，工业化适用性不够。

CN1616479A公开了从植物甾醇中提取豆甾醇的方法，其特征是反应步骤如下：第一步，在植物甾醇中加溶剂无水乙醇、正丙醇或正丁醇，升温溶解，然后缓慢降温结晶，过滤，所得的结晶物重复上述浓缩步骤0～1次，之后进行离心分离、真空干燥；第二步，往第一步得到的植物甾醇浓缩物中加分离溶剂，升温溶解，然后缓慢降温结晶，过滤，所得的结晶物重复上述分离步骤1～3次，可得到高纯单体豆甾醇，但是采用这种方法在制备的环节中过程控制难度大，而且总收率低，生产效率也较低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种总收率高，生产效率也高，适合工业化生产的用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，包括以下步骤：

1）将所述动植物粗品加入到流动相溶剂一中，充分溶解，得到待分离提纯的溶液，

其中，所述动、植物粗品与所述流动相溶剂一的质量比为1:1～40；

2）将固定相正相、反相填料加入到液相色谱层析柱中，进行加压至稳定后，再保压，然后将步骤1）中得到的待分离提纯的溶液加入到所述液相色谱层析柱中，至所述待分离提纯的溶液通过所述固定相正相、反相填料；然后再将流动相溶剂二加入到所述液相色谱层析柱中，进行洗脱，得到流出液，

其中，所述待分离提纯的溶液与所述流动相溶剂二的质量比为1:20～800；

3）将步骤2）中得到的流出液进行蒸馏脱溶，即得到所述高纯天然生物。

本发明的有益效果是：本发明的方法是以液相色谱仪能够分析含量的物质（即液相色谱仪能够检测的物质），以高、中、低压正、反液相色谱柱粗品提纯或单体分离、提纯的方法。

采用本发明的方法，在高、中、低压下能够实现原料一次上柱分离、提纯得到高纯的混合物或高纯的单体。色谱层析柱内的填料能够再生，使用的溶剂可以回收。不仅大大降低生产成本，操作也很方便，采用带压运行又大大提高了生产效率，更加适合工业化生产，更加提高了本技术的适用性，液相色谱仪能够分析的物质都可以使用本技术进行分离、提纯，这也是本技术应用的广泛性。总收率在95%以上。

所述高纯天然生物产品包括维生素E，亚麻酸，DHA，天然维生素E的异构体，d-α-生育酚，d-(β+γ)-生育酚，d-δ-生育酚，植物甾醇，植物甾醇的单体：β-谷甾醇，豆甾醇，菜油甾醇，紫杉醇、五味子、青蒿素、γ-亚麻酸、α-亚麻酸、角鲨烯等等。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述流动相溶剂一包括乙醇、乙酸乙酯、甲醇、石油醚、戊烷、己烷、庚烷、甲苯、丙酮、正庚烷、正己烷或水等中的任意一种或几种的混合。

进一步，所述固定相正相、反相填料包括聚合物涂敷硅胶、硅胶和有机聚合物结合型复合硅胶、甲基丙烯酸乙二醇双酯为交联剂共聚制备涂敷型硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶、异丙基硅烷键合硅胶或异丁基硅烷键合硅胶等中的任意一种。

进一步，所述流动相溶剂二包括乙醇、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、戊烷、戊烷、己烷、庚烷、甲苯、丙酮、磷酸、丙酮、异丙醇、正庚烷、正己烷、水或氢氧化钠中的任意一种或几种的混合。

进一步，在步骤1）中，所述充分溶解是在10～60度的温度下进行溶解。

进一步，在步骤2）中，所述进行加压后的压力为1～20Mpa。

进一步，所述高纯天然生物的纯度90%～99.9%。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

图1为维生素E里面分出的一个单体：d-α-生育酚的百分含量图。

取100克低纯度的混合维生素E（生育酚），（维生素E的总含量：50.36%：其中d-α-生育酚：13.66%、d-(β+γ)-生育酚：28.58%、d-δ-生育酚：8.12%、甾醇:8.76%、其他：40.55%，比旋光度为+21.6°）。在500～1000毫升的正己烷或石油醚加入1～10毫升的乙酸乙酯在20～60度的温度下充分混合溶解，对硅胶层析柱填料进行加压1～15MPa，待压力稳定后保压，将混合的溶液进入正相硅胶层析柱（∮150mm*300mm）进行层析分离，然后用100～300倍的正己烷或石油醚加入1～10倍的乙酸乙酯进行解析，根据需要由系统UV-在线检测器判断适时收集，将收集的溶液进入各自的脱溶系统得到：d-α-生育酚：12.88克，纯度：96.87%，收率：91.36%、d-(β+γ)-生育酚：28.87克，纯度：91.39%，收率：92.33%、d-δ-生育酚：8.14克，纯度：90.89%，收率：91.11%。（如图1所示）

根据图1的分析结果表1如下：

分析结果表

实施例2

取100克低纯度的混合维生素E（生育酚），（维生素E的总含量：50.40%：其中d-α-生育酚：4.9%、d-(β+γ)-生育酚：30.90%、d-δ-生育酚：14.60%、甾醇:8.51%、其他：41.09%，比旋光度为+24.1°）和400毫升体积质量浓度为98%的乙醇水溶液在20～60度的温度下充分混合溶解，对十八烷基硅烷键合硅胶层析柱填料进行加压1～15MPa，待压力稳定后保压，将混合的溶液进入反相硅胶层析柱（∮150mm*300mm）进行层析分离，然后用100～300倍的体积质量浓度为98%的乙醇水溶液，进行解析，根据需要由系统UV-在线检测器判断适时收集，将收集的溶液进入各自的脱溶系统得到：d-α-生育酚：12.88克，纯度：96.87%，收率：91.36%、d-(β+γ)-生育酚：28.87克，纯度：91.39%，收率：92.33%、d-δ-生育酚：8.14克，纯度：90.89%，收率：91.11%。

实施例3

图2为紫杉醇的纯品图；

10克紫杉醇粗品（紫杉醇浸膏），其中紫杉醇：14.6%其他：85.4%。在20-60度时加入50-100毫升的甲醇、水、醋酸的混合溶液中充分溶解，对十八烷基硅烷键合硅胶层析柱填料进行加压1-15MPa，待压力稳定后保压，将混合的溶液进入反相硅胶层析柱（∮50mm*300mm）进行层析分离，然后用100-300倍的甲醇、水、醋酸的混合溶液进行解析，根据需要由系统UV-在线检测器判断适时（根据标样确定）收集，将收集的溶液进入脱溶系统脱溶后得到：紫杉醇浓度为99.46%1.308克收率为：90.08%（如图2所示）。

紫杉醇的纯品分析数据表2如下：

实施例4

图3为深海鱼油的粗品图，图4为ω3多不饱和脂肪酸EPA的纯品图；

取100克低纯度的混合深海鱼油粗品（如图3所示），其中：ω3多不饱和脂肪酸EPA的含量20.66%和400毫升体积质量浓度为95%的溶剂一在20-60度的温度下充分混合溶解，对硅胶层析柱填料进行加压1-15MPa，待压力稳定后保压，将混合的溶液进入反相硅胶层析柱（∮150mm*300mm）进行层析分离，然后用100-300倍的体积质量浓度为95%的溶剂一配合醋酸，混合溶剂的PH在6.3至6.6进行洗脱，根据需要由系统UV-在线检测器判断适时收集，将收集的溶液进入各自的脱溶系统得到：EPA19.15克纯度：99.93%，收率：92.76%（如图4所示）。

ω3多不饱和脂肪酸EPA的纯品的分析数据表3如下：

组分表

实施例5

图5为五味子的粗品图，图6为木酚素的纯品图；

取100克低纯度的五味子粗品（如图5所示），其中木酚素的含量11.86%和400毫升体积质量浓度为97%的溶剂一在20-60度的温度下充分混合溶解，过滤待用。硅胶层析柱填料进行加压1-15MPa，待压力稳定后保压，将混合的溶液进入反相硅胶层析柱（∮150mm*300mm）进行层析分离，然后用100-300倍的体积质量浓度为97%的溶剂一，进行洗脱，根据需要由系统UV-在线检测器判断适时进行收集，将收集的溶液进入脱溶系统得到：木酚素11.06克，纯度：99.78%，收率：93.46%（如图6所示）。

木酚素的纯品的分析数据表4如下：

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将所述动植物粗品加入到流动相溶剂一中，充分溶解，得到待分离提纯的溶液，

所述流动相溶剂一包括乙醇、乙酸乙酯、正庚烷、甲醇、石油醚、戊烷、己烷、庚烷、甲苯、丙酮、正己烷或水中的任意一种或几种的混合；

2)将固定相正相、反相填料加入到液相色谱层析柱中，进行加压至稳定后，再保压，然后将步骤1)中得到的待分离提纯的溶液加入到所述液相色谱层析柱中，至所述待分离提纯的溶液通过所述固定相正相、反相填料；然后再将流动相溶剂二加入到所述液相色谱层析柱中，进行洗脱，得到流出液，

所述固定相正相、反相填料包括聚合物涂敷硅胶、硅胶和有机聚合物结合型复合硅胶、甲基丙烯酸乙二醇双酯为交联剂共聚制备涂敷型硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶、异丙基硅烷键合硅胶或异丁基硅烷键合硅胶中的任意一种；

所述流动相溶剂二包括乙醇、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、正庚烷、甲醇、戊烷、戊烷、己烷、庚烷、甲苯、丙酮、磷酸、正己烷、水或氢氧化钠中的任意一种或几种的混合；

3)将步骤2)中得到的流出液进行蒸馏脱溶，即得到所述高纯天然生物。

2.根据权利要求1或2所述的用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，其特征在于：在步骤1)中，所述充分溶解是在10～60度的温度下进行溶解。

3.根据权利要求1或2所述的用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，其特征在于：在步骤2)中，所述进行加压后的压力为1～20Mpa。

4.根据权利要求1或2所述的用液相色谱柱从动植物中分离提纯高纯天然生物的方法，其特征在于：所述高纯天然生物的纯度90％～99.9％。