CN109851630B

CN109851630B - 一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法

Info

Publication number: CN109851630B
Application number: CN201711238853.9A
Authority: CN
Inventors: 邓紫新; 李敏强; 张海燕
Original assignee: Jiangsu Manshi Biological Technologies Co ltd
Current assignee: Jiangsu Manshi Biological Technologies Co ltd
Priority date: 2017-11-30
Filing date: 2017-11-30
Publication date: 2021-11-30
Anticipated expiration: 2037-11-30
Also published as: CN109851630A

Abstract

区别于现有技术，本发明的高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法，采用溶剂浸提、低温沉淀、色谱分离相结合的方法，实现对原料中磷脂酰乙醇胺的纯化，获得的磷脂酰乙醇胺含量在80%以上。该方法有效解决了现有技术上载量小、溶剂难回收、产品磷脂酰乙醇胺含量不高等问题，易于实现工业化生产、重复性好、操作简单可控、过程稳定。

Description

一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法

技术领域

本发明涉及一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法。

背景技术

磷脂酰乙醇胺（PE）是磷脂质的一种，亦称脑磷脂，在自然界中，其含量仅次于磷脂酰胆碱（PC），是大脑和神经发育的基础物质，能增强脑细胞活化程度及智力水平，磷脂酰乙醇胺在提高人体记忆力与增强大脑功能方面优于磷脂酰胆碱。

目前，PE 的制备方法有溶剂分提法、柱层析法、超临界流体萃取法、金属离子沉淀法、膜分离法等。由于超临界流体萃取法存在设备成本高，金属离子沉淀法会造成重金属离子残留，膜分离法存在膜清洗困难等问题，因此，目前PE的制备方法主要采用溶剂分提法和柱层析法上，但是现有技术中的溶剂分提法和柱层析法所制备的 PE 纯度不高，一般情况下，PE含量不高于80%，同时常含有磷脂酰肌醇( PI)、磷脂酸( PA) 等物质。另外，采用溶剂分提法与柱层析法相结合虽然可以提高 PE 的纯度，但溶剂消耗大、得率低，工业化规模生产受限，因此有必要提供一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法，特别是能达到80%以上含量的磷脂酰乙醇胺制备方法。

发明内容

因此，有必要提供一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法以解决上述技术问题。

一种高含量磷脂酰乙醇胺制备方法，包括下述步骤：

a.溶剂浸提：将磷脂溶于溶剂，获取残留物及萃取液，其中，所述的磷脂为大豆磷脂；

b.低温沉淀：将萃取溶液进行低温沉淀，获取第一上清液，对第一上清液浓缩、干燥，获取初级产品；

c.色谱分离：将初级产品通过色谱分离法进行色谱分离，并获取馏分；

d.收集馏分，并获取最终产品。

进一步的，其特征在于，所述的溶剂为低碳醇和氨水的混合溶液。

进一步的，所述的溶剂浸提包括两次浸提，即第一次浸提及第二次浸提，第一次浸提获取第一次萃取溶液，第二次浸提获取第二次萃取溶液，将第一次萃取溶液与第二次萃取溶液合并获取混合萃取溶液，所述的萃取液为混合萃取溶液。

进一步的，在第一次浸提时，在萃取30-90min后，还进行自然沉降0.5-2小时，以获取第一次残留物及第一次萃取溶液，且第一次萃取溶液为自然沉降后的上清溶液。

进一步的，所述的色谱分离法，包括采用动态轴向加压色谱仪，以硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂为洗脱剂分段洗脱。

进一步的，所述的硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料包括硅胶表面修饰的极性基团，所述的硅胶表面修饰的极性基团包括羟基、羧基、氨基、酰氨基、氰基等中的一种或多种，所述的硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料粒径3~100 μm 、孔径6~30 nm，比表面积50~800 m²/g。

进一步的，所述的非极性溶剂为正庚烷，己烷，正己烷，二氯甲烷，氯仿，二氯乙烷，环己烷，甲苯中的一种；所述的极性溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇，四氢呋喃，乙酸乙酯、醋酸丁酯中的一种。

进一步的，所述的大豆磷脂为大豆粉末磷脂，所述的大豆粉末磷脂中磷脂酰乙醇胺的含量为10-20%，所述的初级产品中磷脂酰乙醇胺含量为50%-60%，所述最终产品中磷脂酰乙醇胺含量80-95%。

有益效果：区别于现有技术，本发明的高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法，采用溶剂浸提、低温沉淀、色谱分离相结合的方法，实现对原料中磷脂酰乙醇胺的纯化，获得的磷脂酰乙醇胺含量在80%以上。该方法有效解决了现有技术上载量小、溶剂难回收、产品磷脂酰乙醇胺含量不高等问题，易于实现工业化生产、重复性好、操作简单可控、过程稳定。

具体实施方式

本发明提供一种高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，特别通过磷脂制备高纯度磷脂酰乙醇胺，所述的磷脂包括植物来源的磷脂，如大豆磷脂、玉米磷脂、葵花籽磷脂等，当然动物来源的磷脂如鸡蛋黄磷脂，也是可行的，在本实施例中采用大豆磷脂制备高纯度磷脂酰乙醇胺。

所述的大豆磷脂是从生产大豆油时产生的副产物—油脚中提取的产物。大豆磷脂主要含有磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷酯酰丝氨酸、磷脂酸及其他磷脂。优选的，所述的大豆磷脂为大豆粉末磷脂。

本实施例的高纯度磷脂酰乙醇胺制备方法通过从大豆磷脂制备高纯度磷脂酰乙醇胺。

所述的高纯度磷脂酰乙醇胺制备方法，包括下述步骤：

a.溶剂浸提，将磷脂溶于溶剂，获取残留物及萃取液，其中，所述的磷脂为大豆磷脂。

其中，所述的溶剂为低碳醇和氨水的混合溶液，所述的低碳醇包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等，所述的低碳醇与氨水的体积比为100:0.1-100:20。

优选的，所述的大豆磷脂为大豆粉末磷脂，所述的大豆粉末磷脂中磷脂酰乙醇胺的含量为10-20%。

优选的，所述的溶剂浸提包括两次浸提，即第一次浸提及第二次浸提，第一次浸提获取第一次萃取溶液，第二次浸提获取第二次萃取溶液，将第一次萃取溶液与第二次萃取溶液合并获取混合萃取溶液，所述的萃取液为混合萃取溶液。

其中，所述的第一次浸提，包括：

将磷脂溶于溶剂，随后，

在温度30-55℃下萃取30-90min，获取第一次残留物及第一次萃取溶液。

其中，磷脂与溶剂重量体积比为以g/ml计为1:5～1:30。

所述的第二次浸提，包括：

在第一次残留物中加入溶剂，随后，

在温度30-55℃下萃取30-90min，获取第二次萃取溶液。

将第一次萃取溶液与第二次萃取溶液合并获取混合萃取溶液，所述的萃取液为混合萃取溶液。

其中，在第一次浸提时，在萃取30-90min后，还进行自然沉降0.5-2小时，获取第一次残留物及第一次萃取溶液，且第一次萃取溶液为自然沉降后的上清溶液。

其中，第二次浸提时，在残留物中加入的溶剂与第一次浸提使用的溶剂相同，可以理解的，所述的相同是指溶剂的种类和数量均相同。

其中，第一次浸提与第二次浸提中的萃取为剪切萃取，所述的剪切萃取可以为搅拌萃取或离心萃取。

b.低温沉淀：将萃取液进行低温沉淀，获取第一上清液，对第一上清液浓缩和/或干燥，获取初级产品；

优选的，对第一上清液的浓缩为低温真空浓缩，所述的干燥采用真空干燥。

优选的，所述的初级产品中磷脂酰乙醇胺含量为50%-60%，

c. 色谱分离：将初级产品通过色谱分离法进行色谱分离，并获取馏分；

其中，所述的色谱分离法，包括采用动态轴向加压色谱仪，以硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂为洗脱剂分段洗脱。

其中，所述的硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料包括硅胶表面修饰的极性基团，所述的硅胶表面修饰的极性基团包括羟基、羧基、氨基、酰氨基、氰基等中的一种或多种，所述的硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料粒径3~100 μm 、孔径6~30 nm，比表面积50~800 m²/g。

其中，所述的非极性溶剂为正庚烷，己烷，正己烷，二氯甲烷，氯仿，二氯乙烷，环己烷，甲苯中的一种；所述的极性溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇，四氢呋喃，乙酸乙酯、醋酸丁酯中的一种。

d.收集馏分，获取最终产品。

从目标峰出峰开始接馏分到峰回到基线停止，每3 min-10min取一次馏分，通过液相馏分分析，并将馏分合并，对合并的馏分进行浓缩、干燥得到最终产品。

进一步的，在对馏分浓缩、干燥之前还可以包括活性炭脱色及过滤步骤，所述的浓缩为真空浓缩，所述的干燥为真空低温干燥。

所述的最终产品中磷脂酰乙醇胺含量大于等于80%，优选的所述的所述的最终产品中磷脂酰乙醇胺含量为80-95%。

本发明采用溶剂分提法与柱层析法相结合，同时在溶剂分提时，采用通过两次浸提，色谱柱层析时进一步采用硅胶表面极性基团键和相填料，不仅获取到的磷脂酰乙醇胺含量大于等于80%，而且制备工艺简单、易操作，易规模化，同时减少溶剂用量、缩短产品制备周期、降低能耗。

下面通过具体实施例进一步说明本发明：

实施例1：

（1）称取大豆粉末磷脂200g，加入4000mL溶剂，所述溶剂为低碳醇和氨水的混合溶液，在30-55℃温度下萃取30-90min，停止后自然沉降0.5-2hrs，向残留物中继续加入溶剂4000mL，在30-55℃温度下萃取30-90min，将两次获取的萃取溶液合并成混合溶液。将混合溶液低温下沉淀，直至溶液澄清，将获取的上清溶液进行低温真空浓缩，干燥得初级产品约50-72g，在该初级产品中PE含量为50-60%。

（2）将70g初级产品用10倍质量体积比的溶剂溶解，经过动态轴向加压色谱仪进行色谱分离，其中，固定相为氨基硅胶，另外，柱规格100×650 mm，色谱柱中填料粒径10μm，孔径10 nm，填料质量2000 g，进样流速0.1bv/min情况下进行分离，先用正己烷进行洗脱，待PE出峰完，然后再改用甲醇洗脱。紫外检测器，检测波长210nm，从目标峰出峰开始接馏分，馏分收集过程中每3 min收集一次馏分，通过液相馏分分析结果合并馏分，将PE色谱纯大于等于85%的馏分合并，经过活性炭脱色、过滤、真空浓缩脱溶、真空低温干燥，得磷脂酰乙醇胺最终产品约40g，所述最终产品中磷脂酰乙醇胺含量大于80%。

另外，本领域技术人员还可以在本发明精神内做其它变化，当然，这些依据本发明精神所做的变化，都应包含在本发明所要求保护的范围之内。

Claims

1.一种高含量磷脂酰乙醇胺制备方法，包括下述步骤：

所述的色谱分离法，采用动态轴向加压色谱仪，以硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂为洗脱剂分段洗脱；

所述的硅胶表面极性修饰的键合材料包括硅胶表面修饰的极性基团，所述的硅胶表面修饰的极性基团为氨基、酰氨基中的一种或两种，所述的硅胶表面极性修饰的键合材料粒径3~100 μm、孔径6~30nm，比表面积50~800 m²/g；

所述的非极性溶剂为正庚烷，正己烷中的一种；所述的极性溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇，四氢呋喃，乙酸乙酯、醋酸丁酯中的一种；

d.收集馏分，并获取最终产品。

2.如权利要求1所述的高含量磷脂酰乙醇胺制备方法，其特征在于，所述步骤a的溶剂为低碳醇和氨水的混合溶液。

3.如权利要求1所述的高含量磷脂酰乙醇胺制备方法，其特征在于，所述的溶剂浸提包括两次浸提，即第一次浸提及第二次浸提，第一次浸提获取第一次萃取溶液，第二次浸提获取第二次萃取溶液，将第一次萃取溶液与第二次萃取溶液合并获取混合萃取溶液，所述的萃取液为混合萃取溶液。

4.如权利要求3所述的高含量磷脂酰乙醇胺制备方法，其特征在于，在第一次浸提时，在萃取30-90min后，还进行自然沉降0.5-2小时，以获取第一次残留物及第一次萃取溶液，且第一次萃取溶液为自然沉降后的上清溶液。

5.如权利要求1所述的高含量磷脂酰乙醇胺制备方法，其特征在于，所述的大豆磷脂为大豆粉末磷脂，所述的大豆粉末磷脂中磷脂酰乙醇胺的含量为10-20%，所述的初级产品中磷脂酰乙醇胺含量为50%-60%，所述最终产品中磷脂酰乙醇胺含量80-95%。