DK166364B - Fremgangsmaade til isolering af ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin fra en vegetabilsk lipidblanding - Google Patents
Fremgangsmaade til isolering af ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin fra en vegetabilsk lipidblanding Download PDFInfo
- Publication number
- DK166364B DK166364B DK584185A DK584185A DK166364B DK 166364 B DK166364 B DK 166364B DK 584185 A DK584185 A DK 584185A DK 584185 A DK584185 A DK 584185A DK 166364 B DK166364 B DK 166364B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- phosphatidylcholine
- lipid mixture
- silica gel
- free
- volume
- Prior art date
Links
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 title claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 title claims abstract description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title abstract 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 20
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims abstract description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims abstract description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 claims description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims 1
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 23
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 16
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 14
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 14
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 11
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 8
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 7
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 6
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 3
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 3
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 2
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 2
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 2
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 235000021184 main course Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J7/00—Phosphatide compositions for foodstuffs, e.g. lecithin
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Organic Insulating Materials (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
i
DK 166364B
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til isolering af højrent l,2-diacyl-glycero-3-phosphocholin (phosphatidylcholin), som er frit for ledsagephospholipider, ved chromatografi af en li-pidopløsning på silicagel.
5 Inden for farmacien anvendes vegetabilsk phosphatidylcholin som ak tivt stof og som hjælpestof.
Til anvendelsen som aktivt stof kræves phospholipider med højt phosphatidylcholinindhold (oral applikation) eller næsten lysophosphati-dylcholi nfrit phosphatidylcholin med høj renhed (intravenøs applika-10 tion).
Til anvendelsen som hjælpestof, for eksempel som emulgator ved fremstilling af fedtemulsioner til parenteral applikation eller ved dannelsen af liposomer eller blandingsmiceller, må phosphatidylcholinet være frit for hæmolytisk virkende lysophosphatidylcholin.
15 Som udgangsmateriale for udvindingen af vegetabilsk phosphatidylcholin anvendes det ved sojaolie- eller spiseoliefremstillingen opståede såkaldte råsphosphatid, der også betegnes rålecithin, handelssojaleci-thin eller handelslecithin.
(Kirk-Othmer, Encycl. Chem. Technol. Vol. 14, side 250-269/P.H.
20 List, Pharm. Verfahrenstechn. heute 1 (7) 1-8 (1980)).
Sojalecithin (sojaråphosphatid) indeholder: 60 - 70 % polære 1ipider (phospholipider/glykolipider) 27 - 37 % sojaolie 25 1,5 - 2 % vand 0,5 - 2 % forskellige ledsagestoffer.
De polære 1ipider, der også betegnes som renlecithin, og som opnås ved fjernelse af olie fra rålecithinet eller sojalecithinet, har følgen-30 de sammensætning (cirkaværdier): 35
DK 166364B
2 30 % phosphatidylcholin (PC) 2 % lysophosphatidylcholin (LPC) 22 % phosphatidylethanolamin (PE) 2 % ' lysophosphatidylethanolamin (LPE) 5 3 % phosphatidyl serin (PS) 15 % phosphatidylinosit (PI) 1 % lysophosphatidylinosid (LPI) 13 % phytoglykolipider (PGL) 8 % phosphatidsyre (PA) 10 4 % ledsagel ipider
Et sojalecithin (sojaråphosphatid) af dårlig kvalitet kan indeholde indtil 5% lysophosphatidylcholin.
Der kendes en række fremgangsmåder til fremstilling af berigede 15 phosphatidylcholi nfraktioner. Således opnås ved fjernelse af olie fra sojaråphosphatid med acetone (US patentskrift nr. 3.268.335) en blanding af polære lipider (renlecithin). Ved alkoholisk ekstraktion af sojar.å-phosphatid (DE patentskrift nr. 1.492.952) opnås en olieholdig blanding af phosphatidylcholinberigede polære lipider.
20 I den seneste tid er der beskrevet nye teknologier til udvinding af polære lipider for eksempel i DE offentliggørelsesskrift nr. 3.011.185, hvor olie fjernes fra sojaråphosphatid ved ekstraktion med overkritisk CO2, eller i europapatentansøgning nr. 0049914, hvor der ved hjælp af ultrafiltrering opnås phosphatidylcholinberigede fraktioner fra opløs-25 ninger af phospholipider i hexan/2-propanol (75/25). Hvis der ved denne fremgangsmåde anvendes olieholdige phospholipidblåndinger såsom sojaråphosphatid, er hverken oliefjernelse med acetone eller anvendelse af en opløsningsmiddelgradient nødvendig.
Udvindingen af et ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin forud-30 sætter en chromatografisk adskillelse af phospholipiderne. Derved får kombinationen af adsorptionsmidlet og elueringsmidlet og elueringstempe-raturen en udslaggivende betydning.
Således opnår man, ved at gå ud fra sojaråphosphatid, ved en flertrinsproces et 3 - 4% lysophosphatidylcholinholdigt rent phosphatidyl-35 cholin ved chromatografi på aluminiumoxid med ethanol som elueringsmid-del (US patentskrift nr. 3.031.478). Aluminiumoxidet opfyldes med phospholipider såsom phosphatidylethanolamin, phosphatidylinosit, phosphatidsyre og glykolipider. Da det ikke kan regenereres, må det.kasseres.
DK 166364 B
3
Silicagel anvendes hyppigt som adsorptionsmiddel til adskillelse af phospholipider. DE offentliggørelsesskrift nr. 2.915.614 beskriver en fremgangsmåde til adskillelse af olie og steroler fra sojaråphosphatider med det formål, at udvinde renlecithin ved chromatografi af en petro-5 leumsetheropløsning på silicagel. Herved bliver olie og steroler på si-licagelen, og de må elueres med polære opløsningsmidler i en anden høst.
Ud fra alkoholiske opløsninger tilbageholdes phospholipider af silicagel ved stuetemperatur (H. Richter et al. Pharmazie 1977, 32, 164). Adskillelsen eller den selektive desorption af phosphatiderne sker enten med 10 al kohol/ammoniak (Japan Kokai 49093400) eller med blandinger af chloro-form/methanol eller chloroform/methanol/vand (DDR patentskrift nr. 79 916). Principielt er det muligt at udvinde et lysophosphatidylcholinfrit phosphatidylcholin ved chromatografi på silicagel under anvendelse af en elueringsmiddelgradient af chloroform/methanol eller chloroform/metha-15 nol/vand. Genvindingen og fjernelsen af sådanne opløsningsmiddel bl åndinger fra slutproduktet er meget bekostelig, specielt når der er tale om en gradienteluering (til dels azeotrope blandinger).
Den i DE offentliggørelsesskrift nr. 3.047.048 beskrevne fremgangmåde til isolering af phosphatidylcholin fra alkoholiske phospholipidop-20 løsninger ved hjælp af silicagelsøjlechromatografi ved forhøjet temperatur består af to trin: 1. ekstraktion fra sojaråphosphatid phosphatidylcholinudbytte: ca. 60% 25 2. søjlechromatografisk rensning phosphatidylcholi nudbytte: ca. 73%
Over begge trin foreligger et phosphatidylcholinudbytte på ca. 44% 30 af det teoretiske beregnet ud fra sojaråphosphatid. Denne virkningsgrad er utilfredsstillende. Phosphatidylcholinet indeholder desuden spor af phosphatidyl ethanolamin og lysophosphatidylcholin. Da lysophosphatidyl-cholinet på grund af fremgangsmåden ikke kan fraskilles, er kun et sojaråphosphatid af bedste kvalitet med et lysophosphatidylcholi nindhold på 35 0,5% egnet som udgangsmateriale.
Alle hidtil beskrevne fremgangsmåder til isolering af ledsagephos-phatidfrit phosphatidylcholin fra sojaråphosphatid er mere eller mindre behæftet med mangler såsom:
DK 166364 B
4 fremgangsmåder i flere trin ringe phosphatidylcholinudbytter anvendelse af kun vanskeligt regenererbare 5 opløsningsmiddelblandinger til den søjlechromatografiske adskillelse, til dels med elueringsmiddelgradienter anvendelse af toxiske opløsningsmidler selektivt valg af udgangsmaterialer med hensyn til lysophos-phatidylcholin 10 - ikke regenererbare adsorptionsmidler tilstedeværelse af ledsagephospholipider såsom phosphatidyl-ethanolamin og lysophosphatidylcholin i slutproduktet lavere phosphatidylcholinindhold 15 Disse ulemper indvirker nødvendigvis på fremstillingsomkostningerne eller fører ikke til det ønskede ledsagephospholipidfrie phosphatidyl-cholin.
Den foreliggende opfindelse har som formål at tilvejebringe en simpel fremgangsmåde til isolering af et ledsagephospholipidfrit, navnlig 20 lysophosphatidylcholinfrit phosphatidylcholin fra råphosphatider (soja, raps, solsikke).
Det har nu overraskende vist sig, at man ved en et-trins proces opnår et ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin ud fra en råphospha-tidopløsning ved hjælp af silicagelsøjlechromatografi.
25 Den foreliggende opfindelse angår i overensstemmelse hermed en sær lig fremgangsmåde til isolering af ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin fra en vegetabilsk lipidblanding, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man opløser lipidblandingen med en opløsningsmiddel-blanding af en 1averekogende petroleumsetherfraktion (40-80°C), en Cj-C^ 30 lavere al kano! og vand, kommer opløsningen på en med silicagel fyldt søjle ved en temperatur i området fra 20-50'C, ved denne temperatur elu-erer med samme opløsningsmiddel bl ånding og derved opnår et ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin i hovedløbet. Der anvendes fortrinsvis en opløsningsmiddel bl ånding af 1 volumendel letbenzin (65-730C), 1 volu-35 mendel 2-propanol og 0,175 volumendele vand.
I for- og efterløbet fraskilles de i råphosphatidet forekommende lipider. Det har overraskende vist sig, at det ud fra en sådan blanding . af mange stoffer er muligt ved en et-trins proces at isolere højrent
DK 166364 B
5 phosphatidylcholin (hovedløb), som kun fortsat er forurenet med spor af glykolipider.
Glykolipiderne kan fjernes på kendt måde for eksempel ved ekstraktion af phosphatidylcholin med ethanol (glykolipider er uopløselige i 5 ethanol). Man opnår således et ledsagestof-, navnlig lysophosphatidyl-cholinfrit phosphatidylcholin i høj renhed.
Phosphatidylcholinvirkningsgraden udgør for eksempel ved rent soja-phosphatidylcholin 88% af det teoretiske eller ved phosphatidylcholin af høj renhed 86% af det teoretiske beregnet ud fra det anvendte sojarå-10 phosphatid og ligger dermed i en ikke tidligere opnået størrelsesorden.
Ud over den simple fremgangsmåde frembyder den nye fremgangsmåde også den fordel, at også mindreværdige råphosphatider kan anvendes. Dette gælder også for de ud fra mindreværdige råphosphatider ved kendte måder fremstillede phosphatidylcholiner, som er forurenet med lysophospha-15 tidylcholin.
Som silicagel kan anvendes sædvanlige produkter til chromatografi af forskellig kornstørrelse eller presset silicagel, som kan være aktiveret eller desaktiveret. Der anvendes fortrinsvis neutral silicagel.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen udføres ved en temperatur i områ-20 det fra 20-50°C og kan udføres ved normaltryk eller ved overtryk.
En ganske speciel fordel ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen består i, at man efter udført chromatografi igen kan anvende sil i cage!en. Samtlige forureninger opfanges i forløbet eller i efter!øbet. Der kan desuden ses bort fra efterløbet, da de i søjlen værende forureninger ved 25 fornyet belastning af denne bliver elueret med det næste forløb.
En yderligere fordel ligger i anvendelsen af en let destillerbar opløsningsmiddelbl ånding.
Sammenligningen med kendte fremgangsmåder viser de omkostningsmæssige fordele ved den nye et-trinsfremgangsmåde. Sojaphosphatidylcholinet 30 udvindes for eksempel fra sojaphosphatid med en virkningsgrad på 88%.
Ved en søjlechromatografisk adskillelse adskilles 110 g sojaråphosphatid over 200 g silicagel, hvortil der kun kræves 4,4 1 samlet el uat. Fremgangsmåden har snarere karakter af en filtrering end af en søjlechromatografisk rensning i sædvanlig forstand.
35 Opfindelsen belyses nærmere i de efterfølgende eksempler nr. 1, 2, 4 og 5. Eksempel 3 er et sammenligningseksempel.
DK 166364 B
6
Analysemetode
Phospholipiderne analyseredes ved hjælp af tyndt!agschromatografi. Olieindholdet blev sat lig med den dialyserbare del. Vandet bestemtes efter Karl Fischer, og restopløsningsmiddel indholdet bestemtes gaschro-5 matografisk.
Opløsnings- og elueringsmiddelbl ånding
Der anvendtes en blanding af 1 volumendel letbenzin (65-73°C), 1 volumendel 2-propanol og 0,175 volumendele vand.
10 Søjlechromatografi
Der anvendtes en dobbeltkappechromatografisøjle (indvendig diameter 4,5 cm, højde 37 cm). En varmeveksler var indskudt før søjlen. Søjlen fyldtes med en opslæmning af 200 g silicagel.(Woelm) i den angive opløs-15 ningsmiddelbl ånding. Efter udført chromatografi kan silicagelen benyttes igen.
Udgangsmateriale
Der anvendtes råphosphatider med følgende sammensætning: 20
Soja Raps Solsikke phosphatidylcholin (PC) 16% 18% 22% phosphatidyl ethanol amin (PE) 17% = 13% 13% 25 lysophosphatidylcholin (LPC) 2,5% 2,6% 1,0% phosphatidylinosit (PI) 9% 12% 13% N-acyl-phosphatidyl - ethanolamin (N-acyl-PE) 2% 1% 1% phosphatidsyre (PA) 8% 7% 5% 30 olie 35% 36% 30%
Rest: andre lipi der
Eksempel 1 450 ml af en opløsning af 110 g sojaråphosphatid (med 16% PC og 35 2,5% LPC) i den angivne opløsningsmiddelblanding sættes til en med silicagel (200 g) fyldt chromatografisøjle og elueres med samme opløsningsmiddelblanding ved stuetemperatur. Det samlede el uat inddeles i tre fraktioner. Fraktionerne inddampes, og remanensen analyseres.
DK 166364 B
7 1. fraktion 0 - 1,6 1 Remanens: 89,5 g
indeholder neutrallipider, glykolipider og phospholipider såsom PE, N-acyl-PE, PA, PI
5 og spor af PC
2. fraktion 1,8 - 4,4 1 Remanens: 18 g (rent phos- phatidylcholin) PC-indhold: 86% 10 olieindhold: 0,5%
Tyndtlagschromatografisk undersøgelse viser ud over PC kun glykolipider som forurening. PC-virkningsgrad: 88% af det teoretiske beregnet i forhold til sojaråphosphatid.
15 3. fraktion 4,4 1 - 5,0 1 Remanens: 2 g indeholder PC, LPC og spor af glykolipider
En ringe PC-mængde bliver tilbage i silicagelen.
20 18 g af fraktion 2 med 86% phosphatidylcholin røres sammen med 200 ml 95%-ig ethanol ved stuetemperatur i en time. De uopløselige glykolipider frafiltreres over 1 g aluminiumoxid som filterhjælpemiddel. Filtratet inddampes og remanensen analyseres.
25 Remanens: 15,8 g (phosphatidylcholin med høj renhed) PC-indhold: 96 % vand: 1,6 % olie: 0,5 % ethanol: 0,8 % 30 PC-virkningsgrad: 86 % af det teoretiske beregnet i forhold til sojaphosphatid renhed (TLC): der påvistes ingen yderligere forureninger.
Eksempel 2 35 Et forsøg svarende til eksempel 1 gennemførtes med en søjletemperatur på 50*C. Der foretoges samme fraktionsopdelinger med uforandret samlet eluatvolumen. Den anden fraktion indeholdt 16,5 g faststof med 87% PC (rent phosphatidylcholin). Renheden ved tyndtlagschromatografi svare-
DK 166364 B
8 de til produktet i eksempel 1.
Eksempel 3 (sammenligningseksempel, fremgangsmåde ifølge DE offentliggørelseskrift 5 nr. 3.047.048) 344 g sojaråphosphatid (16,5% PC og 2,5% LPC) røres sammen med 1032 ml 96 %-ig ethanol ved 75°C i 5 minutter. Sedimentet fraskilles ved stuetemperatur, og den overstående ethanol fase inddampes.
10 Remanens: 110 g PC-indhold: 30% PC-virkningsgrad: 60% af det teoretiske beregnet i forhold til sojaphosphatid 15 110 g remanens opløses i 350 ml 95%-ig ethanol og adskilles i hen hold til DE offentliggørelsesskrift nr. 3.047.048 (eksempel 1) ved hjælp af søjlechromatografi over silicagel ved 70°C under anvendelse af 96%-ig ethanol som elueringsmiddel. Hovedløbet inddampes, og remanensen analyseres.
20
Remanens: 27,7 g PC-indhold: 87 % LPC-indhold: 5 % PC-virkningsgrad: 73 % 25 30 g af remanensen fra hovedløbet med phosphatidylcholinet med 87% PC og 5% LPC opløses i 150 ml af en blanding af 1 volumendel letbenzin (65-73T), 1 volumendel 2-propanol og 0,175 volumendele vand, kommes på en med silicagel (200 g) fyldt chromatografisøjle og elueres med samme 30 opløsningsmiddel bl ånding ved stuetemperatur. Efter 400 ml forløb opfanges 3,5 1 hovedløb.
Hovedløbet inddampes, og remanensen analyseres.
35 9
DK 166364 B
Remanens: 22 g PC-indhold: 95% olieindhold: < 0,5% LPC-indhold: < 0,2% (påvisningsgrænse) 5 PC-virkningsgrad: 80% af det teoretiske beregnet i forhold til det anvendte materiale vand: 1,5%
Eksempel 4 10 500 ml af en opløsning af 125 g solsikkeråphosphatid med 22% PC og 1,0% LPC i den angivne opløsningsmiddelblanding sættes til en med si 1 i -cagel (200 g) fyldt chromatografisøjle og elueres med samme opløsningsmiddelblanding ved stuetemperatur. Det samlede eluat inddeles i to fraktioner. Fraktionerne inddampes, og remanensen analyseres.
15 1. fraktion 0 - 1,0 1 Remanens: 97 g indeholder neutrallipider, glykolipider og phospholipider såsom PE, N-acyl-PE, PA, PI og spor af PC.
20 2. fraktion 1,0 - 4,0 1 Remanens: 26 g PC-indhold: 87 % olieindhold: 0,7% 25 Undersøgelse ved tyndtlagschromatografi viser, at der ud over PC kun er glykolipider som forurening. PC-virkningsgrad: 83% af det teoretiske beregnet ud fra solsikkeråphosphatid.
Der bliver en lille smule PC tilbage i silicagelen.
26 g af 2. fraktion med 87% phosphatidylcholin røres sammen med 200 30 ml 95%-ig ethanol ved stuetemperatur i en time. De uopløselige glykolipider filtreres over 1 g aluminiumoxid som filterhjælpemiddel. Filtratet inddampes, og remanensen analyseres.
35
DK 166364 B
10
Remanens: 23,2 g (phosphatidylcholin i høj renhed) PC-indhold: 97 % olieindhold: 0,7 % tørstoftab: 1,5 % 5 PC-virkningsgrad: 82 % af det teoretiske beregnet i forhold til solsikkephosphatid renhed (TLC): der påvistes ingen yderligere forureninger
Eksempel 5 10 500 ml af en opløsning af 160 g rapsråphosphatid (18% PC, 2,6% LPC) i den angivne opløsningsmiddel bl ånding behandledes som i eksempel 4.
Remanens: 20,7 g (phosphatidylcholin i høj renhed) PC-indhold: 96 % 15 olieindhold: 1,3 % tørstoftab: 2,0 % PC-virkningsgrad: 69 % af det teoretiske beregnet i forhold til solsikkephosphatid renhed (TLC): der påvistes ingen yderligere forureninger
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til isolering af ledsagephospholipidfrit phos-phatidylcholin fra en vegetabilsk lipidblanding, KENDETEGNET ved, AT man 5 opløser lipidblandingen med en opløsningsmiddel bl ånding af en laverekog-ende petroleumsetherfraktion (40-80°C), en Cj-C^ lavere alkanol og vand, kommer opløsningen på en med silicagel fyldt søjle ved en temperatur i området fra 20-50eC, ved denne temperatur eluerer med samme opløsningsmiddelblanding og derved opnår et ledsagephospholipidfrit phosphatidyl- 10 cholin i hovedløbet.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, AT man anvender en opløsningsmiddel bl ånding af 1 volumendel af en petroleumsetherfraktion (65-73°C), 1 volumendel 2-propanol og 0,175 volumendele vand. 15
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, KENDETEGNET ved, AT lipidblandingen kan være sammensat af polære og upolære vegetabilske lipi-der, således som de forekommer i råphosphatider (rålecithiner).
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, KENDETEGNET ved, AT lipidblandingen består af phosphatidylcholinholdige phospholipider. 25 30
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843445949 DE3445949A1 (de) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Verfahren zur isolierung eines begleitphospholipid-freien phosphatidylcholins |
| DE3445949 | 1984-12-17 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK584185D0 DK584185D0 (da) | 1985-12-16 |
| DK584185A DK584185A (da) | 1986-06-18 |
| DK166364B true DK166364B (da) | 1993-04-13 |
| DK166364C DK166364C (da) | 1993-09-06 |
Family
ID=6252974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK584185A DK166364C (da) | 1984-12-17 | 1985-12-16 | Fremgangsmaade til isolering af ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin fra en vegetabilsk lipidblanding |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4983327A (da) |
| EP (1) | EP0187931B1 (da) |
| JP (1) | JPS61145190A (da) |
| AT (1) | ATE57818T1 (da) |
| DE (2) | DE3445949A1 (da) |
| DK (1) | DK166364C (da) |
| ES (1) | ES8701768A1 (da) |
| GR (1) | GR853025B (da) |
| IE (1) | IE58367B1 (da) |
| PT (1) | PT81683B (da) |
| ZA (1) | ZA859569B (da) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3100783B2 (ja) * | 1992-10-15 | 2000-10-23 | キユーピー株式会社 | ホスファチジルコリンおよびその製造方法 |
| SE501697C2 (sv) * | 1993-02-11 | 1995-04-24 | Svenska Mejeriernas Riksforeni | Förfarande för utvinning av sfingomyelin |
| HUT77514A (hu) * | 1994-11-30 | 1998-05-28 | Amur Research Corp. | Gyógyszerhatóanyagok foszfokolinszármazékai |
| GB9828013D0 (en) * | 1998-12-18 | 1999-02-10 | Lovesgrove Res Ltd | Specific phospholipid-lipid mixtures for inclusion in animal feed |
| CA2355301A1 (en) | 1998-12-18 | 2000-06-29 | Lovesgrove Research Limited | An animal feed supplement comprising specific phospholipid compositions |
| UA82981C2 (ru) * | 2000-12-21 | 2008-06-10 | Юнилевер Н.В. | Пищевая композиция, пригодная для поверхностного обжаривания, которая содержит подсолнечный лецитин |
| US20050170063A1 (en) * | 2004-01-29 | 2005-08-04 | Lalit Chordia | Production of powder and viscous material |
| US9353137B2 (en) * | 2014-02-07 | 2016-05-31 | Ghassem Amoabediny | Method for separation and purification of phosphatidylcholine employing magnetic nanoparticles and compositions so produced |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4221731A (en) * | 1978-04-19 | 1980-09-09 | A. E. Staley Manufacturing Company | Process for recovery of high-grade lecithin and solvents from ternary solvent system containing crude vegetable oil |
| DE2915614A1 (de) * | 1979-04-18 | 1980-10-30 | Guenter Dr Heidemann | Verfahren zur gewinnung von reinen phosphatiden |
| DE3047048A1 (de) * | 1980-12-13 | 1982-07-29 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Verfahren zur abtrennung von oel und/oder phosphatidylethanolamin aus diese enthaltenden alkoholloeslichen phosphatidylcholin-produkten |
| DE3047012A1 (de) * | 1980-12-13 | 1982-07-22 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Verfahren zur abtrennung von acylierten phospholipiden aus diese enthaltenden phosphatidylcholin-produkten |
| DE3047011A1 (de) * | 1980-12-13 | 1982-07-22 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Verfahren zur abtrennung von oel und/oder phosphatidylethanolamin aus diese enthaltenden alkoholloeslichen phosphatidylcholin-produkten |
| DE3445950A1 (de) * | 1984-12-17 | 1986-06-19 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Verfahren zur isolierung von lysophosphatidylcholin-freiem phosphatidylcholin aus ei-pulver |
-
1984
- 1984-12-17 DE DE19843445949 patent/DE3445949A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-11-29 EP EP85115148A patent/EP0187931B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-29 AT AT85115148T patent/ATE57818T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-11-29 DE DE8585115148T patent/DE3580347D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-13 ZA ZA859569A patent/ZA859569B/xx unknown
- 1985-12-16 PT PT81683A patent/PT81683B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-12-16 JP JP60281252A patent/JPS61145190A/ja active Granted
- 1985-12-16 ES ES549962A patent/ES8701768A1/es not_active Expired
- 1985-12-16 DK DK584185A patent/DK166364C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-12-16 IE IE318285A patent/IE58367B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-12-16 GR GR853025A patent/GR853025B/el not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-06-30 US US07/214,844 patent/US4983327A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE853182L (en) | 1986-06-17 |
| ES549962A0 (es) | 1986-12-01 |
| EP0187931A3 (en) | 1988-02-10 |
| DE3580347D1 (de) | 1990-12-06 |
| PT81683B (pt) | 1987-10-20 |
| GR853025B (da) | 1986-04-08 |
| ZA859569B (en) | 1986-08-27 |
| EP0187931B1 (de) | 1990-10-31 |
| IE58367B1 (en) | 1993-09-08 |
| ES8701768A1 (es) | 1986-12-01 |
| US4983327A (en) | 1991-01-08 |
| DK584185A (da) | 1986-06-18 |
| JPH0584320B2 (da) | 1993-12-01 |
| DK584185D0 (da) | 1985-12-16 |
| EP0187931A2 (de) | 1986-07-23 |
| DE3445949A1 (de) | 1986-06-19 |
| PT81683A (en) | 1986-01-01 |
| ATE57818T1 (de) | 1990-11-15 |
| JPS61145190A (ja) | 1986-07-02 |
| DK166364C (da) | 1993-09-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI68160B (fi) | Foerfarande foer avskiljning av olja och/eller fosfatidyletanolamin fraon alkoholloesliga fosfatidylkolinprodukter innehaollande dessa | |
| FI68158C (fi) | Foerfarande foer avskiljning av olja och/eller fosfatidyletanolamin fraon alkoholloesliga fosfatidylkolinprodukter innehaollande dessa | |
| DK166363B (da) | Fremgangsmaade til isolering af lysophospholipidfrit phosphatidylcholin fra aeggepulver | |
| DK166364B (da) | Fremgangsmaade til isolering af ledsagephospholipidfrit phosphatidylcholin fra en vegetabilsk lipidblanding | |
| FI68159C (fi) | Foerfarande foer avskiljning av acylerade fosfolipider fraon fosfatidylkolinprodukter innehaollande dessa | |
| Hanras et al. | Gram‐scale preparative HPLC of phospholipids from soybean lecithins | |
| HK1206974A1 (en) | Powdery or solid composition containing acylated sterol glycosides and method for producing same | |
| CN109851631A (zh) | 一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法 | |
| US10392410B2 (en) | Processes for fractionating phospholipids | |
| CN101838285B (zh) | 一种分离纯化油料中磷脂的方法 | |
| CN109851630B (zh) | 一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法 | |
| KR830000794B1 (ko) | 유(油)함유 고순도 포스파티딜콜린의 제조방법 | |
| CN109534979A (zh) | 一种6-姜酚的分离纯化方法以及生产方法 | |
| CN111039976A (zh) | 梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法 | |
| CN108752376A (zh) | 一种高pc含量的大豆磷脂制备方法 | |
| CN119504690A (zh) | 一种维生素e的纯化方法 | |
| JPS617286A (ja) | 単離サポニン製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |