CN109851631B - 一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，使用大豆卵磷脂原料，采用色谱分离的方法进行分离纯化，其中，色谱分离采用动态轴向加压色谱仪，且以硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂的混合溶剂为洗脱剂，分离纯化后获得的磷脂酰胆碱含量在80%以上，该方法有效解决了传统纯化方法选择性不足的问题，同时载样量大，易于实现工业化生产，重复性好，操作简单可控，易实现自动化，过程稳定。

Description

一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法

技术领域

本发明涉及一种磷脂酰胆碱的分离纯化方法，特别涉及一种以大豆磷脂为原料的高纯度磷脂酰胆碱分离纯化方法。

背景技术

大豆磷脂是大豆油脂加工过程中的副产物，其为天然的两性表面活性物质，除了具有生理活性外，还具有乳化、分散、润湿、脱模、分离等作用，其卵磷脂含量高、生理活性和乳化性等都比较好，作为药用原料和辅料广泛应用于医药、化妆品等行业。

卵磷脂实际上是指包含多种不同化学构造的磷脂质，一般包括磷脂酰胆碱(Phosphotidyl choline，PC)，磷脂酰乙醇胺 (Phosphotidyl ethanolamine，PE)，磷脂酰肌醇(Phosphotidyl inostol，PI)，磷脂酰丝氨酸(Phosphotidyl serine，PS)，磷脂酸(Phosphotidyl acid，PA)等。

国内外对从大豆磷脂分离纯化磷脂酰胆碱进行了很多研究，主要有溶剂萃取法、超临界流体萃取法、柱层析法、超滤法及酶催化精制法、高效液相色谱、超临界流体色谱等，二十世纪九十年代，溶剂法趋于成熟，超临界流体萃取技术登上磷脂研究的舞台，尤其近些年来，采用超临界流体萃取技术提取磷脂的研究较多，但超临界技术因装置昂贵、生产成本高。另外，现有技术所分离纯化的卵磷脂为多种磷脂化合物的混合物，不仅工艺复杂，而且其中的重要组分磷脂酰胆碱纯度不够高。

因此，通过可行的工艺方法从磷脂中将磷脂酰胆碱分离出来，得到纯度尽可能高的磷脂酰胆碱产品，在制药、制备生化制剂等领域中具有很实际的意义。

发明内容

本发明涉及一种高纯度磷脂酰胆碱的高效分离纯化方法，原理是依靠固定相表面吸附作用，混合物中的组分随着流动相移动的迁移速度不同，按一定的次序由固定相中流出，根据色谱图收集目标馏分即可得到目标组分。

一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，所述的分离纯化方法包括采用色谱分离的步骤，其中，所述的色谱分离采用动态轴向加压色谱仪，且以硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂的混合溶剂为洗脱剂，用于从大豆卵磷脂原料中分离纯化制备高纯度磷脂酰胆碱。

其中，硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料包括硅胶表面修饰的极性基团，所述的硅胶表面修饰的极性基团包括：羟基，羧基，氨基，酰氨基，氰基等中的一种或多种。

其中，硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料的粒径为3~100 μm ，孔径为6~30 nm，比表面积为50~800 m²/g。

其中，所述的非极性溶剂为正庚烷，己烷，正己烷，二氯甲烷，氯仿，二氯乙烷，环己烷，甲苯中的至少一种；所述的极性溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇，四氢呋喃，乙酸乙酯、醋酸丁酯或水中至少一种。

其中，所述的非极性溶剂与极性溶剂体积比为100:1-1:100。

其中，所述洗脱液流速为0.1 -0.6 bv/min。

其中，在色谱分离步骤之前还包括将大豆卵磷脂原料用初始流动相溶解配制成样品溶液的步骤，其中，样品溶液的浓度为10-1000 mg/mL，所述的初始流动相与洗脱液相同。

其中，在色谱分离中上样量为0.1%-20%。

其中，所述的大豆磷脂原料中磷脂酰胆碱的含量为20-50%，所述的高纯度磷脂酰胆碱中磷酯酰胆碱含量为80%-98%。

有益效果：本发明公开了一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，使用大豆卵磷脂原料，采用色谱分离的方法进行分离纯化，其中，色谱分离采用动态轴向加压色谱仪，且以硅胶或硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂的混合溶剂为洗脱剂，分离纯化后获得的磷脂酰胆碱含量在80%以上，该方法有效解决了传统纯化方法选择性不足的问题，同时载样量大，易于实现工业化生产，重复性好，操作简单可控，易实现自动化，过程稳定。

具体实施方式

本发明提供一种磷脂酰胆碱的分离纯化方法，更具体的，是以大豆磷脂为原料的磷脂酰胆碱分离纯化方法。

现结合实例，对本发明做进一步说明。实例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。

实施例1：

上样溶液制备：取大豆磷脂100 g，将样品溶解于1000 ml由正乙烷和乙醇组成的混合溶剂中，正乙烷和乙醇的比例为95：5，对样品溶液用0.22μm微孔滤膜过滤。

分离纯化：对样品溶液采用柱系统进行分离纯化，样品溶液全部进样，其中所述的柱系统中使用酰胺硅胶填料，柱规格100×650 mm，粒径10μm，孔径10 nm，填料质量1000 g，流速0.1bv/min；溶剂为正乙烷和乙醇，检测波长210 nm，从目标峰出峰开始接馏分到峰回到基线停止，馏分接取过程中每3 min接取一次馏分，通过液相馏分分析，并将馏分合并，对合并的馏分进行浓缩、干燥得到磷脂酰胆碱产品纯度大于等于98%。

实施例2：

上样溶液制备：取大豆磷脂80 g，溶于1000 ml由正庚烷：乙酸乙酯的混合溶剂进行溶解，正庚烷：乙酸乙酯的体积比为80：20，对样品溶液用0.22μm微孔滤膜过滤。

分离纯化：对上样溶液采用柱系统分离纯化，上样溶液全部进样，其中所述的柱层析法中使用氨基硅胶柱，柱规格50×650 mm，粒径20 μm，孔径10 nm，填料质量400 g，溶剂为流速0.5 bv/min；检测波长210 nm，从目标峰出峰开始接馏分到峰回到基线停止，馏分接取过程中每4 min接取一次馏分，通过液相馏分分析结果合并馏分，对合并的馏分进行浓缩、干燥得到磷脂酰胆碱产品纯度大于等于90%。

另外，本领域技术人员还可以在本发明精神内做其它变化，当然，这些依据发明精神所做的变化，都应包含在本发明所要求保护的范围之内。

Claims (6)

1.一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，其特征在于，所述的分离纯化方法包括采用色谱分离的步骤，其中，所述的色谱分离采用动态轴向加压色谱仪，且以硅胶表面极性修饰的键合材料为固定相，以非极性溶剂和极性溶剂的混合溶剂为洗脱剂，用于从大豆磷脂原料中分离纯化制备高纯度磷脂酰胆碱；

硅胶表面极性修饰的键合材料包括硅胶表面修饰的极性基团，所述的硅胶表面修饰的极性基团为氨基或酰氨基中的一种或两种；

硅胶表面极性修饰的键合材料的粒径为3~100μm，孔径为6~30 nm，比表面积为50~800m²/g；

所述的非极性溶剂为正庚烷、正己烷中的至少一种；所述的极性溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇，四氢呋喃，乙酸乙酯、醋酸丁酯或水中至少一种。

2.如权利要求1所述高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，其特征在于，所述的非极性溶剂与极性溶剂体积比为100:1-1:100。

3.如权利要求1所述高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，其特征在于，所述洗脱剂流速为0.1 -0.6 bv/min。

4.如权利要求1所述高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，其特征在于，在色谱分离步骤之前还包括将大豆磷脂原料用初始流动相溶解配制成样品溶液的步骤，其中，样品溶液的浓度为10-1000 mg/mL，所述的初始流动相与洗脱剂相同。

5.如权利要求1所述高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，其特征在于，在色谱分离中上样量为0.1%-20%。

6.如权利要求1所述高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法，其特征在于，所述的大豆磷脂原料中磷脂酰胆碱的含量为20-50%，所述的高纯度磷脂酰胆碱中磷酯酰胆碱含量为80%-98%。