CN101272792A - 氟维司群的分离 - Google Patents

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Abstract

本发明包括分离氟维司群异构体的方法，其包括将氟维司群样品置于使用反相柱或手性柱的HPLC上；使用具有第一流动相和第二流动相的洗脱液洗脱样品；以及从柱上收集氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B的纯化馏分。该方法提供了通过HPLC测定纯度为99.5％的氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B。

Description

氟维司群的分离
相关申请
本申请要求享受2005年10月5日登记的美国临时申请号号60/724,059的权益。
发明领域
本发明包括使用反相和手性HPLC系统分离氟维司群(fulvestrant)非对映异构体的方法，以及通过该方法制备的非对映异构体纯的氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B。
发明背景
许多乳腺癌都具有雌激素受体(ER)，并且这些肿瘤的生长可能受雌激素的刺激。氟维司群是一种雌激素受体拮抗剂，其以竞争的方式与雌激素受体结合，亲合力与雌二醇相当。氟维司群向下调节人体乳腺癌细胞中的EP蛋白。氟维司群的化学名称是7-α-[9-(4，4，5，5，5-五氟代戊烷亚磺酰基)壬基]雌-1，3，5-(1 0)-三烯-3，17-β-二醇，它具有如下化学结构：
Figure A20068003552500051
市售的氟维司群名称为FASLODEX
Figure A20068003552500052
。在一项临床研究中，在外科治疗以前的15-22天用单剂FASLODEX
Figure A20068003552500053
治疗患有原发性乳腺癌的绝经后妇女，有证据显示当增加计量时对ER向下的调节作用也会增加。这与孕酮受体表达的降低有关，所述表达的降低是和剂量相关的，并且该孕酮受体是一种雌激素调节蛋白。这些对ER通道的作用还与Ki67标记指数，一种细胞增殖的信号，有关。
氟维司群以两种非对映异构体混合物的形式存在，所述的两种非对映异构体是在侧链的硫原子上差向异构的。这两种非对映异构体被称为氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B。
在文献中或者在所提出的方法中，都没有描述用于合成一种纯非对映异构体的合成路线。本发明计划通过提供一种有效地分离氟维司群非对映异构体的方法解决此问题。
发明简述
本发明的一个实施方式包括一种检测氟维司群非对映异构体的方法，其包括将氟维司群样品置于使用反相系统的HPLC上；用两种流动相使用具有第一流动相和第二流动相的非线性梯度洗脱样品；以及通过HPLC检测所分离的异构体，其中第一流动相是水或含水缓冲液，并且第二流动相是乙腈、四氢呋喃或甲醇。氟维司群样品可以是氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B的混合物，例如外消旋混合物或者富集了氟维司群亚砜A或者富集了氟维司群亚砜B的混合物。反相柱的填充材料可以是C8(辛基)、C18(十八烷基)、苯基、五氟代苯基或苯己基，优选C8(辛基)或C18(十八烷基)。在方法中，第一流动相的起始量为约40％到约70％体积，第二流动相的起始量为约30％到约60％体积。优选地，第一流动相的最终量为约40％到约0％体积，第二流动相的最终量为约100％到约50％体积。
本发明的另一个实施方式包括一种分离氟维司群非对映异构体的方法，其包括将氟维司群样品置于具有手性柱系统的HPLC上；用两种流动相使用具有第一流动相和第二流动相的等度溶剂系统洗脱样品；以及从柱上收集氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B的纯化馏分，其中第一流动相为至少一种C5-C10的烷烃，并且第二流动相是C3的醇。
手性柱的填充材料可以是直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、β环糊精、纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase)、选择剂R-(-)-N-(3，5-二硝基苯甲酰基)-苯基甘氨酸或者纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)，优选地，手性柱的填充材料是直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。所述柱可以具有大小为约3μm到约10μm的包封颗粒，优选地，所述柱具有大小为约5μm的包封颗粒。优选地，当使用手性柱系统时，第一流动相为正己烷，并且第二流动相为异丙醇。第一流动相可以以约75％到约95％体积的量存在，并且第二流动相以约5％到约25％体积的量存在。优选地，第一流动相可以以约85％体积的量存在，并且第二流动相以约15％体积的量存在。
使用手性柱的氟维司群非对映异构体的分离方法可以进一步包括从纯化的馏分中结晶氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B的步骤，其是通过将氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B溶解在有机溶剂中形成混合物，并且从该混合物中沉淀氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B而完成的。一般地，所述有机溶剂是乙酸乙酯或甲苯。所述混合物可以被加热到回流，然后冷却到约0℃到约25℃的温度，优选将混合物冷却到约4℃的温度。
本发明的又一个实施方式包括通过HPLC测定为99.5％异构体纯的氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B。
附图简述
图1表示在实施例1中获得的氟维司群的HPLC色谱图。
图2表示在实施例2中获得的氟维司群的HPLC色谱图。
图3表示在实施例3中获得的亚砜A的HPLC色谱图。
图4表示在实施例3中获得的亚砜B的HPLC色谱图。
图5表示使用实施例1的HPLC方法获得并通过实施例3的方法分离的亚砜A的HPLC色谱图。
图6表示使用实施例1的HPLC方法获得并通过实施例3的方法分离的亚砜B的HPLC色谱图。
发明详述
本发明包括检测和/或分离氟维司群异构体的方法。所述方法可以被用于富集或完全分离一种氟维司群异构体。该方法可以在小或大规模上使用，包括制备规模或工业规模的异构体的分离。氟维司群亚砜异构体的分离方法可以被用于制备氟维司群亚砜标准品，其中所述亚砜标准品具有一种氟维司群亚砜异构体。该标准品可以因此被用于定性或定量地检测氟维司群亚砜A和/或氟维司群亚砜B的存在。
本发明包含分离氟维司群非对映异构体的方法，其是通过将氟维司群样品置于使用反相系统或手性系统具有一个柱和两种流动相的HPLC系统上而进行的。如以下更详细地描述的，流动相的选择是由所使用的柱系统确定的。本发明的一个实施方式包括检测氟维司群非对映异构体的方法，其包括将氟维司群样品置于使用反相系统的HPLC上；用两种流动相使用具有第一流动相和第二流动相的非线性梯度洗脱样品；以及通过HPLC检测所分离的异构体，其中第一流动相是水或含水缓冲液，并且第二流动相是乙腈、四氢呋喃或甲醇。本发明的另一个实施方式包括一种分离氟维司群非对映异构体的方法，其包括将氟维司群样品置于具有手性柱系统的HPLC上；用两种流动相使用具有第一流动相和第二流动相的等度溶剂系统洗脱样品；以及从柱上收集纯化的异构体馏分，其中第一流动相为至少一种C5-C10的烷烃，并且第二流动相是C3的醇。
一般地，在所述方法中用作起始原料的氟维司群样品是氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B的混合物。该混合物可以是外消旋混合物或者是富集了两种异构体中的一种的混合物，例如异构体45∶55的混合物。因此，氟维司群样品可以是粗氟维司群，从而对该粗氟维司群进行纯化并且对异构体进行分离。代替地，氟维司群样品可以是纯化的氟维司群，例如，结晶以后获得的，从而通过使用上述方法对异构体进行分离。在分离中用作起始原料的氟维司群可以使用现有技术中所公开的方法进行制备，例如美国专利号4,659,516，其因此被引入作为参考。
HPLC中的柱决定了在分离期间所使用的流动相。在一个实施方式中，本发明包括使用具有固相载体颗粒的反相柱检测氟维司群非对映异构体。一般地，固相载体颗粒是二氧化硅衍生物。适当的二氧化硅衍生物包括，但不限于，C8(辛基)、C18(十八烷基)、苯基、五氟代苯基或苯己基。优选地，二氧化硅衍生物是C8(辛基)或C18(十八烷基)，例如市售来自Alltech的Alltima C18。
代替地，所述柱可以是手性柱。一般的手性柱包括，但不限于，直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、β环糊精、纤维二糖水解酶、选择剂R-(-)-N-(3，5-二硝基苯甲酰基)-苯基甘氨酸或者纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。优选地，手性柱是直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。市售的手性柱包括，但不限于，ChiraDex(Merck KGaA，德国)、Chiracell
Figure A20068003552500081
OD(Daicel Chemical Industries，Ltd.，日本)、Chiral-CBH(ChromTech，Ltd.，英国)、Bakerbond
Figure A20068003552500082
DNBPG(共价的)(J.T.Baker，美国)以及Chiralpak
Figure A20068003552500083
AD-H(Daicel Chemical Industries，Ltd.，日本)。手性柱具有如下化学式的固定填充材料：
Figure A20068003552500091
其中“n”指示聚合物。聚合物的长度可以变化，只要可以被包括在上述举例的市售手性柱中。
柱包封颗粒一般具有约3μm到约10μm的尺寸。优选地，柱包封颗粒具有约5μm的尺寸。柱长度一般为约100mm到约250mm并且直径为约4.0mm到约20mm。
非对映异构体分离的条件将取决于方法使用反相柱还是使用手性柱。相应地，各自分别讨论如下。
当使用反相柱时，洗脱系统是非线性梯度的。换句话说，两种流动相中每种的量都随着时间而改变。一般地，流动相是包含第一流动相和第二流动相的双相系统。一般地，第一流动相是水或缓冲水溶液。优选地，第一流动相是水。适于该系统的缓冲水溶液包括，但不限于，0.1％的H3PO4水溶液(Sol.85％)；0.1％或0.01％的三氟乙酸水溶液；0.1％的蚁酸水溶液；pH为3.2的磷酸盐缓冲液(例如，7.2g NaH2PO4的1800mL水溶液，加入200mL含有2.5g/mL H3PO4的水溶液，如果需要，调节pH值并通过0.2μm的膜过滤)；或者离子对缓冲液(例如，2.9g十二烷基硫酸钠和2.3g H3PO4的1000mL水溶液(Sol.85％))。
一般地，第二流动相是乙腈、四氢呋喃或甲醇。优选地，第二流动相是乙腈。第一流动相可以从约40％到约70％体积的初始量变化，优选从约50％到60％的初始量变化。第一流动相可以变化到约40％到约0％体积的最终量，优选地，变化到30％体积的最终量。第二流动相可以从约30％到约60％体积的初始量变化，优选地，从约40％到约50％体积的初始量变化。第二流动相可以变化到约100％到约50％体积的最终量，优选地，变化到约100％到约70％溶剂混合物体积的最终量。更优选地，初始的洗脱液是50％体积的第一流动相和50％体积的第二流动相，其洗脱60分钟。之后，在接下来的40分钟内，将洗脱液线性变化到30％体积的第一流动相和70％的第二流动相混合物。
一般地，反相柱的温度为约10℃到约40℃，优选从约15℃到约20℃。一般地，流速为约0.5到约1.5ml/min，优选地，为约0.5ml/min到约1.0ml/min。
当使用手性柱时，洗脱液系统是一个等度系统。换句话说，流动相包含至少两种不随时间变化的固定量的溶剂。溶剂的组合可以呈现为一种溶剂混合物或者呈现为以固定比例混合的两种流动相，第一流动相和第二流动相。当溶剂系统是流动相的组合时，则第一流动相是C5-C10的烷烃，并且第二流动相是C3的醇，例如1-丙醇或2-丙醇。优选地，第一流动相是正己烷和/或庚烷，并且第二流动相是异丙醇。在溶剂系统是两种流动相的组合的情况下，则两相以约75％到约95％第一流动相和约5％到约25％第二流动相的体积量混合。优选地，当组合的溶剂系统是约85％第一流动相和约15％第二流动相体积时。洗脱时间一般为约45分钟。
一般地，手性柱的温度为约10℃到约40℃，并且优选柱温为约30℃到约35℃。一般地，流速为约0.2ml/min到约5ml/min。优选地，流速为约0.6到约1.3ml/min，更优选地为约0.75ml/min到约0.9ml/min。
系统的检测器可以是市售的任意UV系统。一般地，将检测器设置在220nm和/或240nm。
本发明还包括对每种氟维司群非对映异构体进行结晶。一旦非对映异构体各自从外消旋混合物中得到分离，并且在洗脱相蒸发以后得到油状剩余物，则非对映异构体各自可以从有机溶剂中沉淀或结晶。适当的有机溶剂包括，但不限于，乙酸乙酯或甲苯。一般地，将溶剂加入到剩余物中并加热到回流然后冷却。优选地，加热的溶剂被冷却到约0℃到约25℃，更优选地，加热的溶剂被冷却到4℃。结晶的非对映异构体可以通过本领域技术人员已知的常规方式，例如过滤进行收集。由此，该方法产生了色谱纯的固体氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B。
上述方法可以产生至少一种HPLC纯度大于或等于约99.5％的非对映异构体。
因此，本发明的另一个实施方式包括基本上异构体纯的氟维司群亚砜A或基本上异构体纯的氟维司群亚砜B。如在这里所使用的，除非另有定义，“基本上异构体纯的”意思是根据HPLC面积测定氟维司群具有超过70％的一种亚砜异构体。优选地，“基本上异构体纯的”意思是根据HPLC面积测定氟维司群具有超过80％的一种亚砜异构体；更优选地，超过90％；甚至更优选超过95％。最优选地，术语“基本上异构体纯的”意思是通过HPLC面积测定氟维司群具有超过99％的一种异构体。
本发明还包括药物组合物，其包含基本上异构体纯的氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B和药学上可接受的赋形剂。
此外，上述方法可以应用在使用模拟移动床系统的工业规模上。这是适于等度制备纯化的设备。例如，它可以被用于使用手性系统纯化具有亚砜A和亚砜B混合物的氟维司群。
已经参照某些优选实施方式对本发明进行了描述，在考虑了说明书以后，其它实施方式对于本领域技术人员来说也是显而易见的。本发明进一步通过参考以下实施例而被进一步定义，这些实施例详细地描述了本发明的方法。本领域技术人员还可以预见，在不脱离本发明范围的情况下，对原料和方法的多种改进都是可以实现的。
实施例
实施例1：梯度反相HPLC方法
分离是在Agilent Technologies Mod.1100液相色谱上进行的，其装有具有5μm粒径的C18手性柱(250mm×4.6mm)(Alltima C18，Alltech)。在HPLC装置中使用两种流动相。第一流动相是水并且第二流动相是乙腈。将洗脱液的流速设置为0.5ml/分钟，将柱温设置为15℃。测试样品含有1.0mg/ml的氟维司群，其溶解在乙腈/甲醇体积比为50∶50的溶液中。进样体积为2μl。
开始时，将50％第一流动相和50％第二流动相泵入系统60分钟(即，从时间0到时间60分钟)。而后，在60分之后到时间100分钟，洗脱液的组成以线性形式从50％第一流动相和50％第二流动相改变到30％第一流动相和70％第二流动相。HPLC装有DAD检测器，其中λ＝220nm，bw＝10nm；基准信号＝450nm，bw＝80nm。氟维司群亚砜A的保留时间为62.4min，而氟维司群亚砜B的保留时间为63.1min。图1显示了此分离的HPLC色谱图。从图上可以看出，此分离具有两个没有完全分开的峰，一个峰出现在62.38分钟(亚砜A)的保留时间处，第二个峰出现在63.12分钟(亚砜B)处。此方法对于确定异构体的比例来说是足够精确的，但是不足以在制备规模上分离亚砜A和亚砜B。
实施例2：手性HPLC方法
分离是在Agilent Technologies Mod.1100液相色谱上进行的，其装有具有5μm粒径的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷的硅胶手性柱(250mm×4.6mm)(CHIRALPAK AD-H，CHIRAL)。使用两种流动相：第一流动相是正己烷并且第二流动相是1-丙醇。将洗脱液的流速设置为0.9ml/分钟，将柱温设置为30℃。测试样品含有用50ml体积比为85∶15的正己烷/1-丙醇混合物稀释的50mg氟维司群。进样体积为10μl。
将85％第一流动相和15％第二流动相的混合物泵入等度系统45分钟(即，从时间0到时间45分钟)。HPLC装有DAD检测器，其中λ＝220nm。图2表示了使用手性柱的分离。氟维司群亚砜A的保留时间为17.97min；而氟维司群亚砜B的保留时间为21.58min。
实施例3：手性制备HPLC方法
分离是在Agilent Technologies Mod.1100液相色谱上进行的，其装有具有5μm粒径的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷的硅胶手性柱(250mm×4.6mm)(CHIRALPAK AD-H，CHIRAL)。使用两种流动相：第一流动相是正己烷并且第二流动相是1-丙醇。将洗脱液的流速设置为0.75ml/分钟，将柱温设置为35℃。测试样品含有用正己烷/1-丙醇85∶15(v/v)混合物稀释的5mg/ml氟维司群。进样体积为600μl。
将85％第一流动相和15％第二流动相的混合物泵入等度系统30分钟(即，从时间0到时间30分钟)。HPLC装有DAD检测器，其中λ＝220nm和240nm。氟维司群亚砜A的保留时间为17.9min；而氟维司群亚砜B的保留时间为21.2min。用自动装置每0.5分钟收集为一个馏分。
收集含有氟维司群亚砜A的馏分，使用旋转蒸发器通过蒸发除去溶剂，从而获得剩余的油。收集含有氟维司群亚砜B的馏分，使用旋转蒸发器通过蒸发除去溶剂，从而获得剩余的油。通过用于对氟维司群API进行纯度控制的RP HPLC分析方法对两个油进行分析，显示两种异构体的HPLC纯度都＞99.9％。在本实施例中，如图3和4显示的每个异构体的HPLC色谱图那样完成分离。图3显示了亚砜A的HPLC色谱图而图4显示了亚砜B的色谱图。分析方法在下表中给出：
装置：Agilent Technologies Mod.1100液相色谱或等价物
柱和填充：Zorbax SB-C8，3.5μm，150×4.6mm
          (Agilent Technologies，部件号863953-906)或等价
          物
流动相A：0.05％的H3PO4水溶液
流动相B：乙腈
梯度    ：时间(min)    流动相A(％)    流动相B(％)
             0               47             53
             5               47             53
             30              40             60
             60               0             100
             80               0             100
运行时间：80分钟
后时间  ：10分钟
流速    ：1.0mL/min
检测器  ：λ＝220nm
柱温    ：40℃
进样体积：10μL
洗脱液  ：甲醇/乙腈50∶50(v/v)
使用根据实施例1的条件，获得了每个异构体的HPLC色谱图。如果存在，实施例1的HPLC条件可以举例说明第二异构体的存在；但是，该色谱图仅包括一种异构体。图5表示了亚砜A和色谱图，而图6表示了亚砜B的色谱图。
实施例4：对非对映异构体纯的氟维司群亚砜A进行的结晶
两种非对映异构体剩余物分别用有机溶剂，例如乙酸乙酯或甲苯进行结晶或沉淀，并且通过过滤收集两种固体非对映异构体。
将两种油状剩余物可代替地用乙酸乙酯(0.4g剩余物用4ml)进行处理。所述处理包括将混合物加热到回流温度直到溶解，接着冷却到4℃保持24小时。通过过滤收集固体。代替地，用甲苯(0.4g剩余物用4ml)在室温下处理固体，产生直接的沉淀，在4℃下经过24小时完成。通过NMR和XDR对固体氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B进行分析，从而确定晶体结构和绝对构型。
实施例5：手性HPLC方法
分离是在Waters 600 E液相色谱上进行的，其装有具有10μm粒径的纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷的硅胶手性柱(250mm×4.6mm)(CHIRALPAK OD，CHIRAL)。使用两种流动相：第一流动相具有正己烷并且第二流动相具有2-丙醇。将洗脱液的流速设置为1.0ml/分钟，柱温设置为25℃。
测试样品含有用50ml体积比为85∶15的正己烷/2-丙醇混合物稀释的67mg氟维司群。进样体积为5μl。将85％第一流动相和15％第二流动相的混合物泵入等度系统20分钟(即，从时间0到时间20分钟)。HPLC装有DAD检测器，其中λ＝210nm。
当样品通过HPLC之后，异构体各自被分开。氟维司群亚砜A的保留时间为10.1min；而氟维司群亚砜B的保留时间为11.7min。

Claims (28)

1、一种检测氟维司群非对映异构体的方法，其包括
将氟维司群样品置于使用反相系统的HPLC上；
用两种流动相使用具有第一流动相和第二流动相的非线性梯度洗脱样品；以及
通过HPLC检测所分离的异构体，
其中第一流动相是水或含水缓冲液，并且第二流动相是乙腈、四氢呋喃或甲醇。
2、根据权利要求1的方法，其中反相柱的填充材料是C8(辛基)、C18(十八烷基)、苯基、五氟代苯基或苯己基。
3、根据权利要求1的方法，其中反相柱的填充材料是C8(辛基)或C18(十八烷基)。
4、根据前述任意一项权利要求的方法，其中第一流动相的起始量为约40％到约70％体积，并且第二流动相的起始量为约30％到约60％体积。
5、根据前述任意一项权利要求的方法，其中第一流动相的最终量为约40％到约0％体积，并且第二流动相的最终量为约100％到约50％体积。
6、根据前述任意一项权利要求的方法，其中氟维司群样品是氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B的混合物。
7、根据前述任意一项权利要求的方法，其中氟维司群样品是外消旋混合物或者是富集了氟维司群亚砜A和氟维司群亚砜B中任意一种的混合物。
8、根据前述任意一项权利要求的方法，其中柱温为约10℃到约40℃。
9、一种分离氟维司群非对映异构体的方法，其包括
将氟维司群样品置于具有手性柱系统的HPLC上；
用两种流动相使用具有第一流动相和第二流动相的等度溶剂系统洗脱样品；以及
从柱上收集氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B的纯化馏分，
其中第一流动相为至少一种C5-C10的烷烃，并且第二流动相是C3的醇。
10、根据权利要求9的方法，其中手性柱的填充材料是直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、β环糊精、纤维二糖水解酶、选择剂R-(-)-N-(3，5-二硝基苯甲酰基)-苯基甘氨酸或者纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。
11、根据权利要求8到9中任意一项的方法，其中手性柱的填充材料是直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。
12、根据权利要求8到11中任意一项的方法，其中所述柱具有大小为约3μm到约10μm的包封颗粒。
13、根据权利要求8到12中任意一项的方法，其中所述柱具有大小为约5μm的包封颗粒。
14、根据权利要求8到13中任意一项的方法，其中第一流动相为正己烷，并且第二流动相为异丙醇。
15、根据权利要求8到14中任意一项的方法，其中第一流动相以约75％到约95％体积的量存在，并且第二流动相以约5％到约25％体积的量存在。
16、根据权利要求8到15中任意一项的方法，其中第一流动相以约85％体积的量存在，并且第二流动相以约15％体积的量存在。
17、根据权利要求8到16中任意一项的方法，其中填充材料具有如下化学式：
Figure A20068003552500031
其中“n”指示聚合物。
18、根据权利要求8到17中任意一项的方法，其进一步包含从纯化的馏分中结晶氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B的步骤，这是通过将氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B溶解在有机溶剂中形成混合物，并且从该混合物中沉淀氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B而完成的。
19、根据权利要求18的方法，其中所述有机溶剂是乙酸乙酯或甲苯。
20、根据权利要求18到19中任意一项的方法，其中所述混合物被加热到回流，然后冷却到约0℃到约25℃的温度。
21、根据权利要求18到20中任意一项的方法，其中混合物被冷却到约4℃的温度。
22、根据权利要求18到21中任意一项的方法，其中通过HPLC测定的氟维司群亚砜A或氟维司群亚砜B的纯度为99.5％。
23、氟维司群亚砜A，根据HPLC测定其具有40％或更少，优选20％或更少，更优选10％或更少的氟维司群亚砜B。
24、根据权利要求23的氟维司群亚砜A，根据HPLC测定其具有5％或更少，优选1％或更少，更优选0.5％或更少，最优选0.2％或更少的氟维司群亚砜B。
25、氟维司群亚砜B，根据HPLC测定其具有40％或更少，优选20％或更少，更优选10％或更少的氟维司群亚砜A。
26、根据权利要求25的氟维司群亚砜B，根据HPLC测定其具有5％或更少，优选1％或更少，更优选0.5％或更少，最优选0.2％或更少的氟维司群亚砜A。
27、一种药物组合物，其包含根据权利要求23或24的氟维司群亚砜A和药学上可接受的赋形剂。
28、一种药物组合物，其包含根据权利要求25或26的氟维司群亚砜B和药学上可接受的赋形剂。
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