CN108525021A - 基于3d打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤及其制备方法，所述组织工程皮肤由表皮层、脱细胞真皮支架和真皮层构成，表皮层以表皮干细胞作为种子细胞，与载体水凝胶复合后，通过3D打印机打印在脱细胞真皮支架的上表面，分化形成正常表皮结构，真皮层以骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞、毛乳头细胞和脂肪干细胞作为种子细胞，与载体水凝胶复合，通过3D打印机在脱细胞真皮支架的下表面打印复合有细胞因子的明胶缓释微球，同时将种子细胞的水凝胶复合物打印在明胶缓释微球中，形成具有三维立体空间结构的真皮结构。

Description

基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤及其制备方法
技术领域
本发明属于再生医学工程技术领域，涉及利用组织工程方法构建的人体皮肤器官，特别是涉及通过3D打印构建的含有血管及毛囊结构的组织工程皮肤。
背景技术
皮肤是覆盖于人体表面用以保护人体的重要器官。然而，各类疾病如大面积烧伤、手术、外伤、皮肤溃疡等均可造成皮肤损伤。对于一些面积大、程度严重的皮肤缺损，现在一般是采用自体移植方法进行治疗。但这种方法不仅会对供皮区造成新的损伤，而且经常受到自体皮肤来源有限的影响。同时，移植物还经常与移植部位存在着色泽、质地、甚至功能上的差异。
组织工程是以工程学与生命科学相结合，研究开发用于组织和器官修复、改善及功能维持的生物替代物。
传统的组织工程中，对受损器官的修复主要是将细胞在体外培养扩增后，附着在预先设计好的生物支架材料上，构成“细胞+支架”复合体，植入机体中相应的病损部位。随着细胞的生长繁殖，支架材料逐渐降解，最后形成具有生理功能和结构的组织或器官，从而达到组织器官修复或再生的目的。
传统组织工程的局限性主要包括：(1)人体的组织和器官是由多种细胞和细胞外基质构成的，很难将这些成份同时植入到固体支架中；(2)难以在三维支架结构中精确沉积不同种类的细胞和细胞外基质；(3)受支架技术空间分辨率的限制，细胞渗透到支架材料内部的速度较慢；(4)所形成的组织或器官内无血管，氧气和养料供应不足，容易引起组织或器官坏死；(5)细胞作为构成人类器官的基本单元，其尺寸在几微米到几十微米的范围内，调控细胞分布的分辨率需控制在10μm以下，采用传统组织工程技术难以实现如此小的分辨率。
因此，如何在三维尺度上精确控制不同种类细胞及细胞外基质的分布，并形成与人体组织或器官相似的三维构造体，是传统组织工程所面临的一大难题。
组织工程皮肤是所有组织工程器官中发展速度最快，也是目前技术最为成熟的组织工程产品。组织工程皮肤是通过体外培养扩增大量功能细胞，复合到支架材料上，通过细胞与支架的相互作用，诱导、生长形成三维的有活性的皮肤替代物。然而，目前技术制备的组织工程皮肤距理想的永久性皮肤替代物有一定差距，尚不能在组织工程皮肤中构建出皮肤的附属器结构，如皮脂腺、汗腺等，以及组织工程能够长期存活所需要的血管。
近年来，3D打印技术在制造工程领域异军突起，并开始向生物医学领域延伸。生物医学领域内的3D打印技术称作3D生物打印技术。在3D生物打印过程中，细胞(或细胞聚集体)与溶胶(水凝胶的前驱体)被同时置于打印机喷头中，由计算机控制含细胞液滴的沉积位置，在指定位置逐点打印，打印完一层继续打印另一层，层层叠加形成三维多细胞/凝胶体系，自组装形成组织或器官。3D生物打印技术保证了不同种类细胞的位置和分布的准确性，为解决传统组织工程皮肤制备问题带来了新的解决方案。
细胞打印的优势主要体现在：(1)能同时构建出具有生物活性的二维或三维“多细胞/材料”体系；(2)能在时间和空间上准确沉积不同种类的细胞；(3)能构建出细胞所需的三维微环境。
组织工程面临的挑战之一就是如何将细胞组装成具有血管化的组织或器官。目前虽然已经制备了一些3D打印的皮肤材料，但仍未能在皮肤材料中构建出完整的血管和毛囊等附属器官。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤，以及该组织工程皮肤的制备方法。以本发明方法构建组织工程皮肤不仅能极大的缩短制备时间，而且制备的工程皮肤再生能力强，移植后能长期存活，排斥反应小。
本发明所述基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤自上而下由表皮层、脱细胞真皮支架和真皮层构成。
其中，所述的脱细胞真皮支架是将异体或异种皮经一系列处理后，脱去细胞成分，保留原有的胶原纤维成分及基本组织而得到的薄膜。以其为支架构建组织工程皮肤，其保留的基底膜结构有利于表皮分化和基膜形成，疏松的胶原结构有利于血管的长入。
优选地，本发明所述的脱细胞真皮支架采用羊脱细胞真皮基质支架。
所述表皮层是以表皮干细胞作为种子细胞，与载体水凝胶复合后，通过3D打印机打印在所述脱细胞真皮支架的上表面侧，分化形成的正常表皮结构。
所述真皮层是以骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞、毛乳头细胞和脂肪干细胞作为种子细胞，与载体水凝胶复合，通过3D打印机在所述脱细胞真皮支架的下表面侧打印复合有细胞因子的明胶缓释微球的同时，将所述种子细胞的水凝胶复合物打印在所述明胶缓释微球中，使种子细胞按人工设置的空间位置分布，均匀分布在明胶缓释微球内，形成具有理想三维立体空间结构的真皮结构。
进一步地，本发明在所述明胶缓释微球中复合的细胞因子是促进血管生成和骨髓间充质干细胞分化的相关因子，包括血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β(TGFβ)和肝细胞生长因子(HGF)。
本发明中，所述作为载体的水凝胶是Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶复合物或Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶复合物，其微观下呈蜂窝多孔结构，结构较为均一。
更具体地，本发明是在真皮层结构中采用Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶复合物作为载体与所述种子细胞复合，其孔径在80～150μm范围内。在表皮层结构中则采用Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶复合物作为载体与所述种子细胞复合，其孔径在10～20μm范围内。由Ⅰ型胶原-纤维蛋白组成的小孔径凝胶结构致密于真皮层水凝胶，这种不对称性能阻止真皮层个头较大的成纤维细胞向表皮层迁移，也可以防止表皮层的角质形成细胞落入成纤维细胞层面。
进而，本发明所述的种子细胞中，表皮干细胞、毛乳头细胞、脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞均取自自体细胞，血管内皮细胞取自于异体的脐带血管内皮。
本发明将所述细胞因子复合在明胶缓释微球控释系统中，可以使细胞因子在一定时间内缓慢平稳的释放。
以下给出了本发明所述基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤的具体制备方法。
取表皮干细胞加入Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶中，再加入凝血酶和4×Herps缓冲碱，搅拌均匀，形成含表皮干细胞的Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶，作为表皮打印用水凝胶。
将血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β和肝细胞生长因子分别加入FAD培养液中，加入明胶微球混合交联后，以等质量比混合，得到含细胞因子的明胶缓释微球。
取骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞加入Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶中，再与含细胞因子的明胶缓释微球以10∶1的质量比混合，制备得到细胞-水凝胶-明胶缓释微球溶液。
将毛乳头细胞用培养基稀释成1×106个/mL，制成毛乳头细胞溶液。
分别将表皮打印用水凝胶、细胞-水凝胶-明胶微球溶液、毛乳头细胞溶液、含细胞因子的明胶缓释微球装入3D打印机墨盒中，制备得到各自使用的打印墨盒。
在打印架上铺好脱细胞真皮支架，先使用细胞-水凝胶-明胶微球墨盒在脱细胞真皮支架上打印两层，再按照设定好的皮肤形状，同时使用细胞-水凝胶-明胶微球墨盒、毛乳头细胞墨盒、含细胞因子的明胶缓释微球墨盒进行逐层打印，形成三维多细胞/凝胶体系。真皮层打印完毕后，再铺上一层脱细胞真皮支架，将表皮打印用水凝胶逐层打印到脱细胞真皮支架上。
其中，所述真皮层的平均打印厚度1.6～4mm，表皮层打印平均厚度0.2～0.4mm。
本发明设置所述3D打印机的打印速度为1200mm/s，打印分辨率5mm。
进一步地，所述Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶是用DMEM培养基分别配制8mg/mL的纤维蛋白原-DMEM溶液和0.5%Ⅰ型胶原-DMEM溶液，按纤维蛋白原与Ⅰ型胶原的质量比1∶4将两种溶液混合，充分搅拌形成Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶。
所述表皮打印用水凝胶中，表皮干细胞的细胞浓度为1×105～1×107个/mL。
所述Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶是用0.5mol/mL乙酸溶液分别配制浓度0.5%的Ⅰ型胶原溶液和壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液滴入胶原溶液中，调整pH值为7.0，室温下搅拌得到Ⅰ型胶原-壳聚糖混合溶液。
所述细胞-水凝胶混合液中，所述骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞的浓度为1×105个/mL。
其中，所述的毛乳头细胞要成团状打印，使毛乳头细胞成团状分布在一起，细胞团的密度根据正常皮肤毛囊分布情况而定，平均3～10个细胞团/cm3皮肤。
本发明构建的组织工程皮肤不仅具有良好的三维立体网状结构和弹性，而且皮肤中具有血管、毛囊等皮肤附属结构，使组织工程皮肤移植后能够长期存活，再生能力强，排斥反应小。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明技术方案进行进一步的说明。本发明所述实施例仅用于解释本发明，而不应理解为对本发明范围的限制。在不背离本发明技术方案的前提下，对本发明所作出的本领域技术人员容易实现的任何改动，都应认为是本发明的内容。
实施例1：人表皮干细胞的分离培养。
用眼科镊子将消化后的皮肤小心地分离开表皮和真皮，取表皮浸没在0.25%胰蛋白酶中，37℃消化30min，使其成为细胞悬液。加入含10% FBS的DMEM终止消化，离心半径15cm，1000r/min离心5min，弃上清液。
取离心后的细胞悬液置于60mm培养皿中，加入2～5mL培养液(含DMEM、10ng/mLEGF、5μg/mL胰岛素、100μg/mL庆大霉素)，置入37℃、5%CO2及饱和湿度的培养箱内培养，24h后换液，以后每隔2天换液1次。培养至第19天，表皮干细胞连成片状，达80%汇合时，行传代培养。
用吸管吸净培养皿中剩余的培养液，加入0.25%胰蛋白酶1～2mL(以消化液能覆盖整个培养皿底为准)，静置2min，吸去胰蛋白酶液，加入DMEM培养液终止消化。以离心半径15cm，1000r/min离心5min，弃上清，按1∶3进行传代培养。
实施例2：毛乳头细胞的分离培养。
在Williams E无血清培养基中加入终浓度为2mmol/L的谷氨酰胺、2mmol/L Hepes(羟乙基哌嗪乙磺酸)、10μg/L氢化可的松、10mg/L转铁蛋白、10μg/L亚硒酸钠、105U/L青霉素、100mg/L链霉素，配制成毛囊培养基，使用前加入牛胰岛素10mg/L。
将头皮用PBS冲洗3遍，75%乙醇纱布擦洗消毒，移至另一无菌培养皿中，再次PBS冲洗。手术刀片逐次切取分离头皮至单个毛囊单位。
肉眼选取毛乳头饱满、外形光滑圆润、颜色较黑的毛囊，置于镜下再次挑选出毛乳头完整、内外根鞘无分离的完整毛囊单位，置于24孔板中(1根/孔)，加入配制好的WilliamsE培养基，每孔0.5mL，0.5%CO2培养箱37℃培养，每3天换液1次。
实施例3：骨髓间充质干细胞的分离培养。
无菌条件下骨髓穿刺取骨髓，PBS轻轻吹打并悬浮骨髓，1500r/min离心10min，弃上清及脂肪层，加入PBS吹打成单细胞悬液。沿管壁缓慢加入相对密度1.073的Percoll分离液，以1500r/min离心20min，得到乳白色云雾状的单核细胞层。
将单核细胞以PBS洗涤3次，离心收集细胞，重悬于含100mL/L胎牛血清的DMEM/F12培养液中进行培养，隔日换液，弃去未贴壁的细胞。
待贴壁细胞达80～90%融合后，进行纯化和扩增。倒掉旧培养液，加入胰酶，培养箱内放置2～3min，倒置显微镜下观察细胞间缝隙增大或有少量细胞浮起，加入含血清的培养基终止胰酶作用。轻轻吹打使细胞完全悬浮，转入离心管中，800r/min离心7min，弃上清，收集细胞沉淀，加入培养液悬浮细胞，按1∶3传代重新接种到3个培养瓶中，置于孵箱中培养，留取第4～6代。
实施例4：人血管内皮细胞的分离培养。
将新生儿脐带置于无菌不锈钢盒中，PBS冲洗血液。以止血钳钳住脐带一端，用10mL粗吸管吸入PBS冲洗脐带静脉内腔残留血细胞5次，再用10mL粗吸管吸入1.25%胶原酶灌入脐带静脉，直至脐带充盈，用止血钳钳住脐带另一端口。
钳好的脐带放入不锈钢盒中，盖好盒盖，移至37℃孵箱中消化20min。消化好的脐带移至超净工作台，松开两端止血钳，用10mL粗吸管吸入PBS冲洗脐带静脉5次。
冲洗液收集至10mL离心管，800r/min离心8min。弃上清液，加入10mL内皮细胞培养液，吹打均匀后，移至75cm2培养瓶，放入细胞培养箱中，37℃、5%CO2原代培养。24h后第一次更换培养液，以后隔天换液。
实施例5：人脂肪干细胞的分离培养。
脂肪抽吸术获取人体腹部皮下脂肪组织抽提液(术前检查己排除内分泌疾病及传染病)800g，离心，用PBS缓冲液冲洗，浸泡，再800g×4min洗涤3次。
将脂肪组织放入50mL离心管，加入2倍体积的0.2%胶原酶、1倍体积的1%BSA和双抗，混匀，封口，放入摇床中37℃消化45min，至糊状为止。将消化成糊状的脂肪组织先用80目筛网过滤，再用200目筛网过滤一遍，余下的脂肪组织加入胶原酶继续消化重复上述动作。
过滤液1200rpm离心10min，吸出上清，加入少许含血清培养基，吸管轻轻吹打，使成悬液。加入5mL红细胞裂解液，室温静置10min，1200rpm离心5min，PBS洗1遍，用完全培养基重悬细胞团，以5×105单核细胞/mL接种于25cm2培养瓶中，37℃、5%CO2饱和湿度培养。48h后换液，加入脂肪干细胞完全培养基继续培养细胞。待培养至80%融合时，采用0.25%胰蛋白酶/0.02%EDTA消化传代。
取培养扩增3代的脂肪干细胞，吸掉培养液，0.25%胰蛋白酶/0.02%EDTA消化，1%BSA洗涤后，制成2400μL含有8×106个脂肪干细胞的单细胞悬液。
实施例6：羊脱细胞真皮基质支架的制备。
选用健康成年白羊羊皮，除去皮下组织，保留表皮与真皮部分，并去除皮肤中的毛发成分，制成0.4mm厚的皮片。
将皮片裁剪成3cm×3cm大小的方块状，取小方块浸入1mmol/L NaCl溶液中，37℃恒温振荡24h脱去表皮，以PBS缓冲液反复冲洗干净。
再加入到0.1% NP-40中，常温下摇床持续震摇24h，脱去残余的细胞及碎片，以PBS缓冲液反复冲洗干净。
再浸入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液中20min，用PBS缓冲液反复冲洗干净，得到羊脱细胞真皮基质支架。
得到的羊脱细胞真皮基质支架储存于无菌PBS缓冲液中，密封，4℃保存，或置于-80℃超低温冰箱中保存。
实施例7：表皮打印用水凝胶的制备。
用DMEM培养基分别配制8mg/mL纤维蛋白原-DMEM溶液和0.5%Ⅰ型胶原-DMEM溶液，按纤维蛋白原与Ⅰ型胶原比值1∶4将两种溶液混合，充分搅拌形成Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶。
取培养至第三代的表皮干细胞，加入上述制备的Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶中，调整细胞浓度至1×105～1×107/mL，加入凝血酶使其浓度为60U/mL，再加入10mL 4×Herps缓冲碱，搅拌均匀，形成含表皮干细胞的Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶，作为表皮打印用水凝胶。
实施例8：明胶缓释微球的制备。
在三口瓶中加入含有1% span-80的液体石蜡30mL，水浴锅中预热至55℃，搅拌下缓慢逐滴加入同样温度的20%明胶水溶液4mL，再以600rpm匀速搅拌10min，形成油包水乳剂。
在水浴锅中加入冰块，将形成的油包水乳剂快速降至0℃，搅拌10min。再加入25%戊二醛溶液0.1mL，搅拌下固化1h，置入4℃冰箱中，静止固化24h。
用适量丙酮充分洗脱掉固化物中的液体石蜡，用双蒸水冲洗2min，放入5%甘氨酸溶液中脱醛处理12min，双蒸水充分漂洗，真空冷冻干燥，得到淡黄色粉末状明胶微球。
无菌条件下，取2μg细胞因子加入1mL FAD培养液中，加入1mL明胶微球混合，使细胞因子与明胶微球交联20min，制成包含有细胞因子的明胶缓释微球颗粒。颗粒呈表面光滑的球体状，直径30～60μm。
按照上述方法，分别制备出血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β (TGFβ)、肝细胞生长因子(HGF)的明胶缓释微球。
将上述含各种细胞因子的明胶缓释微球以1∶1∶1∶1的质量比混合，得到含细胞因子的明胶缓释微球。
实施例9：真皮打印用明胶缓释微球的制备。
用0.5mol/mL乙酸溶液分别配制浓度0.5%的Ⅰ型胶原溶液和壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液滴入胶原溶液中，调整pH值为7.0，室温下搅拌1h，得到孔径80～150μm的Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶。
将骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞按1∶1∶1的比例混合后，以1×105/mL的浓度与上述制备的Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶充分混合，使骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞均匀分布在水凝胶中，制成细胞-水凝胶混合液。
将实施例8制备的含细胞因子的明胶缓释微球与上述制备的细胞-水凝胶混合液按1∶10的质量比混合均匀，制备得到细胞-水凝胶-明胶缓释微球溶液。
实施例10：复合组织工程皮肤的构建。
分别将前述实施例制备得到的表皮打印用水凝胶、细胞-水凝胶-明胶微球溶液、毛乳头细胞溶液、含细胞因子的明胶缓释微球装入3D打印机墨盒中，制备得到各自使用的打印墨盒。
设置3D打印机的打印速度为1200mm/s，打印分辨率5mm。在打印架上铺好羊脱细胞真皮基质支架，先使用细胞-水凝胶-明胶微球墨盒在基质支架上打印两层，再按照设定好的皮肤形状，使用细胞-水凝胶-明胶微球墨盒、毛乳头细胞墨盒、含细胞因子的明胶缓释微球墨盒，三种墨盒和喷头一起使用进行逐层打印，打印厚度1.6～4mm。在打印过程中，各组墨盒的喷头由计算机独立控制液滴的沉积位置，在指定位置逐点打印，打印完一层的基础上继续打印另一层，层层叠加，形成三维多细胞/凝胶体系。其中，毛乳头细胞要成团状打印，使毛乳头细胞成团状分布在一起，明胶缓释微球喷头按设计的血管走行方向打印含细胞因子的明胶缓释微球。
真皮层打印完毕后，再铺上一层羊脱细胞真皮基质支架，继续打印表皮层部分。使用表皮打印用水凝胶墨盒，按照设定好的形状，以1200mm/s的打印速度和5mm的打印分辨率，通过喷嘴将表皮打印用水凝胶逐层打印到羊脱细胞真皮基质支架上，平均厚度0.2～0.4mm。
按照常规组织工程皮肤培养方法，对上述打印构建成的组织工程皮肤进行培养，以得到具有医疗价值的组织工程皮肤。

Claims (10)

1.基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤，自上而下由表皮层、脱细胞真皮支架和真皮层构成，其中，
所述的脱细胞真皮支架是将异体或异种皮脱去细胞成分，保留原有胶原纤维成分及基本组织得到的薄膜；
所述表皮层是以表皮干细胞作为种子细胞，与载体水凝胶复合后，通过3D打印机打印在所述脱细胞真皮支架的上表面侧，分化形成的正常表皮结构；
所述真皮层是以骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞、毛乳头细胞和脂肪干细胞作为种子细胞，与载体水凝胶复合，通过3D打印机在所述脱细胞真皮支架的下表面侧打印复合有细胞因子的明胶缓释微球的同时，将所述种子细胞的水凝胶复合物打印在所述明胶缓释微球中，形成具有三维立体空间结构的真皮结构。
2.根据权利要求1所述的基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤，其特征是所述的脱细胞真皮支架采用羊脱细胞真皮基质支架。
3.根据权利要求1所述的基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤，其特征是所述的细胞因子为促进血管生成和分化的相关因子，包括血管内皮生长因子，碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β和肝细胞生长因子。
4.根据权利要求1所述的基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤，其特征是所述的水凝胶是Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶复合物或Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶复合物。
5.根据权利要求4所述的基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤，其特征是在真皮层结构中采用Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶复合物作为载体与所述种子细胞复合，在表皮层结构中则采用Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶复合物作为载体与所述种子细胞复合。
6.权利要求1所述基于3D打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤的制备方法，按照下述步骤制备：
取表皮干细胞加入Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶中，再加入凝血酶和4×Herps缓冲碱，搅拌均匀，形成含表皮干细胞的Ⅰ型胶原-纤维蛋白凝胶，作为表皮打印用水凝胶；
将血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β和肝细胞生长因子分别加入FAD培养液中，加入明胶微球混合交联后，以等质量比混合，得到含细胞因子的明胶缓释微球；
取骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞加入Ⅰ型胶原-壳聚糖凝胶中，再与含细胞因子的明胶缓释微球以10∶1的质量比混合，制备得到细胞-水凝胶-明胶缓释微球溶液；
将毛乳头细胞用培养基稀释成1×106个/mL，制成毛乳头细胞溶液；
分别将表皮打印用水凝胶、细胞-水凝胶-明胶微球溶液、毛乳头细胞溶液、含细胞因子的明胶缓释微球装入3D打印机墨盒中，制备得到各自使用的打印墨盒；
在打印架上铺好脱细胞真皮支架，先使用细胞-水凝胶-明胶微球墨盒在脱细胞真皮支架上打印两层，再按照设定好的皮肤形状，同时使用细胞-水凝胶-明胶微球墨盒、毛乳头细胞墨盒、含细胞因子的明胶缓释微球墨盒进行逐层打印，形成三维多细胞/凝胶体系，真皮层打印完毕后，再铺上一层脱细胞真皮支架，将表皮打印用水凝胶逐层打印到脱细胞真皮支架上。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是所述真皮层的平均打印厚度1.6～4mm，表皮层打印平均厚度0.2～0.4mm。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是所述表皮打印用水凝胶中，表皮干细胞的细胞浓度为1×105～1×107个/mL。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是所述细胞-水凝胶混合液中，所述骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞和脂肪干细胞的总浓度为1×105个/mL。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是将所述毛乳头细胞打印成团状，平均3～10个细胞团/cm3皮肤。
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Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110179760A (zh) * 2019-06-06 2019-08-30 中山大学 一种负载rADSCs的明胶微球及其制备方法和应用
CN110772669A (zh) * 2019-11-04 2020-02-11 中南大学湘雅三医院 一种用于3d打印人工皮肤的生物墨水
CN111265723A (zh) * 2020-01-21 2020-06-12 南京师范大学 一种3d打印的皮肤及其制备方法
CN111378149A (zh) * 2018-12-30 2020-07-07 中国科学院沈阳自动化研究所 一种用于3d打印或原位注射的因子缓释中性凝胶系统及其制备方法
CN112206074A (zh) * 2019-06-24 2021-01-12 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 管状类组织结构体及其构建方法
CN112294849A (zh) * 2020-11-04 2021-02-02 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 用于生发的脱细胞基质-细胞复合颗粒及制备方法
CN113201481A (zh) * 2021-04-19 2021-08-03 清华大学深圳国际研究生院 皮肤微球及其制备方法和应用
CN113274556A (zh) * 2021-05-21 2021-08-20 国家纳米科学中心 一种水凝胶人工血管及其制备方法和应用
CN113416690A (zh) * 2021-07-13 2021-09-21 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 一种快速血管化的组织工程皮肤及其构建方法
CN113577398A (zh) * 2021-07-08 2021-11-02 湖北中部医疗科技有限公司 一种3d打印人工皮肤及其制备方法
CN113604421A (zh) * 2021-08-06 2021-11-05 苏州瑞华骨科医院有限公司 基于3d打印的血管化双层工程皮肤及其制备方法
CN113677700A (zh) * 2019-04-01 2021-11-19 凸版印刷株式会社 细胞结构体及细胞结构体的制造方法
WO2022237003A1 (zh) * 2021-05-14 2022-11-17 清华大学 一种构建复杂异质组织/器官的多级悬浮打印方法
CN115501394A (zh) * 2021-11-18 2022-12-23 南京工业大学 一种颗粒凝胶复合支架及其制备方法和应用
CN115591022A (zh) * 2022-10-27 2023-01-13 中国人民解放军总医院第一医学中心（Cn） 一种人工上皮装置及其制备方法
CN116077737A (zh) * 2023-04-07 2023-05-09 云南云科特色植物提取实验室有限公司 一种含血管结构的人工皮肤及其制备方法

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1609200A (zh) * 2004-11-19 2005-04-27 清华大学 一种复杂组织器官前体的制备方法
WO2007124023A2 (en) * 2006-04-21 2007-11-01 Wake Forest University Health Sciences Ink-jet printing of tissues
CN101257933A (zh) * 2005-09-09 2008-09-03 郡是株式会社 组织再生用基材
CN101829361A (zh) * 2009-03-10 2010-09-15 广州迈普再生医学科技有限公司 一种用于组织修复的纳米仿生材料及其制备方法
US20130209427A1 (en) * 2010-06-18 2013-08-15 Rajesh Thangapazham Hair follicle neogenesis
CN103623001A (zh) * 2013-11-27 2014-03-12 绍兴振德医用敷料有限公司 表皮细胞的富集应用
CN204521701U (zh) * 2015-03-30 2015-08-05 朱家源 通过3d打印而成的组织工程皮肤
CN105131315A (zh) * 2014-11-27 2015-12-09 华东理工大学 非自由基光化学交联水凝胶材料制备方法、其产品及应用
CN105816915A (zh) * 2016-06-06 2016-08-03 中国人民解放军总医院 间充质干细胞组织工程支架及其制备方法和应用
CN106421916A (zh) * 2016-10-24 2017-02-22 广州润虹医药科技有限公司 组织工程皮肤及其制备方法
WO2017037295A1 (en) * 2015-09-03 2017-03-09 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Three dimensional hydrogels for culturing organoids
CN106620855A (zh) * 2016-12-26 2017-05-10 山西医科大学 一种复合组织工程皮肤的构建方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1609200A (zh) * 2004-11-19 2005-04-27 清华大学 一种复杂组织器官前体的制备方法
CN101257933A (zh) * 2005-09-09 2008-09-03 郡是株式会社 组织再生用基材
WO2007124023A2 (en) * 2006-04-21 2007-11-01 Wake Forest University Health Sciences Ink-jet printing of tissues
CN101829361A (zh) * 2009-03-10 2010-09-15 广州迈普再生医学科技有限公司 一种用于组织修复的纳米仿生材料及其制备方法
US20130209427A1 (en) * 2010-06-18 2013-08-15 Rajesh Thangapazham Hair follicle neogenesis
CN103623001A (zh) * 2013-11-27 2014-03-12 绍兴振德医用敷料有限公司 表皮细胞的富集应用
CN105131315A (zh) * 2014-11-27 2015-12-09 华东理工大学 非自由基光化学交联水凝胶材料制备方法、其产品及应用
CN204521701U (zh) * 2015-03-30 2015-08-05 朱家源 通过3d打印而成的组织工程皮肤
WO2017037295A1 (en) * 2015-09-03 2017-03-09 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Three dimensional hydrogels for culturing organoids
CN105816915A (zh) * 2016-06-06 2016-08-03 中国人民解放军总医院 间充质干细胞组织工程支架及其制备方法和应用
CN106421916A (zh) * 2016-10-24 2017-02-22 广州润虹医药科技有限公司 组织工程皮肤及其制备方法
CN106620855A (zh) * 2016-12-26 2017-05-10 山西医科大学 一种复合组织工程皮肤的构建方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANCAN XU ET AL.: "Highly Elastic Biodegradable Single-Network Hydrogel for Cell Printing", 《ACS APPL. MATER. INTERFACES》 *
CHIN SIANG ONG ET AL.: "3D bioprinting using stem cells", 《PEDIATRIC RESEARCH》 *
ROSTISLAV V. SHEVCHENKO ET AL.: "A review of tissue-engineered skin bioconstructs available for skin reconstruction", 《J. R. SOC. INTERFACE》 *
YONG FANG LI ET AL.: "HSVtk/GCV system on hepatoma carcinoma cells: Construction of the plasmid pcDNA3.1 pAFP TK and targeted killing effect", 《MOLECULAR MEDICINE REPORTS》 *
伍津津: "毛囊干细胞与组织工程研究进展", 《中国医学文摘·皮肤科学》 *
周晓等: "《肿瘤整形外科学》", 31 December 2012, 浙江科学技术出版社 *

Cited By (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111378149A (zh) * 2018-12-30 2020-07-07 中国科学院沈阳自动化研究所 一种用于3d打印或原位注射的因子缓释中性凝胶系统及其制备方法
CN113677700A (zh) * 2019-04-01 2021-11-19 凸版印刷株式会社 细胞结构体及细胞结构体的制造方法
CN110179760A (zh) * 2019-06-06 2019-08-30 中山大学 一种负载rADSCs的明胶微球及其制备方法和应用
CN110179760B (zh) * 2019-06-06 2021-08-13 中山大学 一种负载rADSCs的明胶微球及其制备方法和应用
CN112206074A (zh) * 2019-06-24 2021-01-12 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 管状类组织结构体及其构建方法
CN112206074B (zh) * 2019-06-24 2024-01-02 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 管状类血管结构体及其构建方法
CN110772669A (zh) * 2019-11-04 2020-02-11 中南大学湘雅三医院 一种用于3d打印人工皮肤的生物墨水
CN111265723A (zh) * 2020-01-21 2020-06-12 南京师范大学 一种3d打印的皮肤及其制备方法
CN112294849B (zh) * 2020-11-04 2024-05-03 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 用于生发的脱细胞基质-细胞复合颗粒及制备方法
CN112294849A (zh) * 2020-11-04 2021-02-02 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 用于生发的脱细胞基质-细胞复合颗粒及制备方法
CN113201481B (zh) * 2021-04-19 2023-10-13 清华大学深圳国际研究生院 皮肤微球及其制备方法和应用
CN113201481A (zh) * 2021-04-19 2021-08-03 清华大学深圳国际研究生院 皮肤微球及其制备方法和应用
WO2022237003A1 (zh) * 2021-05-14 2022-11-17 清华大学 一种构建复杂异质组织/器官的多级悬浮打印方法
CN113274556A (zh) * 2021-05-21 2021-08-20 国家纳米科学中心 一种水凝胶人工血管及其制备方法和应用
CN113577398A (zh) * 2021-07-08 2021-11-02 湖北中部医疗科技有限公司 一种3d打印人工皮肤及其制备方法
CN113416690B (zh) * 2021-07-13 2023-12-22 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 一种快速血管化的组织工程皮肤及其构建方法
CN113416690A (zh) * 2021-07-13 2021-09-21 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 一种快速血管化的组织工程皮肤及其构建方法
CN113604421B (zh) * 2021-08-06 2023-09-19 苏州瑞华骨科医院有限公司 基于3d打印的血管化双层工程皮肤及其制备方法
CN113604421A (zh) * 2021-08-06 2021-11-05 苏州瑞华骨科医院有限公司 基于3d打印的血管化双层工程皮肤及其制备方法
CN115501394B (zh) * 2021-11-18 2023-08-04 南京工业大学 一种颗粒凝胶复合支架及其制备方法和应用
CN115501394A (zh) * 2021-11-18 2022-12-23 南京工业大学 一种颗粒凝胶复合支架及其制备方法和应用
CN115591022A (zh) * 2022-10-27 2023-01-13 中国人民解放军总医院第一医学中心（Cn） 一种人工上皮装置及其制备方法
CN116077737A (zh) * 2023-04-07 2023-05-09 云南云科特色植物提取实验室有限公司 一种含血管结构的人工皮肤及其制备方法

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