CN1609200A - 一种复杂组织器官前体的制备方法 - Google Patents
一种复杂组织器官前体的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1609200A CN1609200A CNA2004100915524A CN200410091552A CN1609200A CN 1609200 A CN1609200 A CN 1609200A CN A2004100915524 A CNA2004100915524 A CN A2004100915524A CN 200410091552 A CN200410091552 A CN 200410091552A CN 1609200 A CN1609200 A CN 1609200A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gelatin
- substrate material
- collagen
- cell
- chitosan
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 title claims abstract description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 62
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 98
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 98
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 98
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 98
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 98
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 76
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 67
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 57
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 57
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 57
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 57
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 29
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims description 25
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims description 25
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims description 25
- -1 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 21
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 20
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims description 18
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims description 18
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 17
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 13
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 claims description 13
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 claims description 13
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 claims description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 13
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 13
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 13
- 229910000406 trisodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 13
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 12
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 10
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 10
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 10
- 238000012946 outsourcing Methods 0.000 claims description 10
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N EtOH Substances CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920001273 Polyhydroxy acid Polymers 0.000 claims description 9
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 9
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- HPMGFDVTYHWBAG-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyhexanoic acid Chemical compound CCCC(O)CC(O)=O HPMGFDVTYHWBAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims description 8
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 8
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 claims description 8
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 8
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 8
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 238000005253 cladding Methods 0.000 claims description 6
- 238000009434 installation Methods 0.000 claims description 6
- BHTJEPVNHUUIPV-UHFFFAOYSA-N pentanedial;hydrate Chemical compound O.O=CCCCC=O BHTJEPVNHUUIPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- JHUUPUMBZGWODW-UHFFFAOYSA-N 3,6-dihydro-1,2-dioxine Chemical compound C1OOCC=C1 JHUUPUMBZGWODW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 claims description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 abstract description 8
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 50
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 14
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 14
- 210000003725 endotheliocyte Anatomy 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 9
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 4
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical class OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 4
- 210000003360 nephrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 4
- PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethylazanium;chloride Chemical compound Cl.NCCO PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 3
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 3
- 229920006264 polyurethane film Polymers 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 2
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 2
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 2
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N methylamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 238000006068 polycondensation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 241000243321 Cnidaria Species 0.000 description 1
- 241000555268 Dendroides Species 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000003328 fibroblastic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000001564 haversian system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940048102 triphosphoric acid Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一种复杂组织器官前体的制备方法，属于生物组织工程技术领域。本发明利用种子细胞或基因与基质材料制备成微胶珠或多管道三维结构，并利用计算机辅助快速成型法、涂覆法、一次性灌注成形等技术实现细胞和支架材料在空间的准确定位，克服了组织工程目前存在的在三维支架中诱导培养细胞需要时间长、细胞在支架中分布不均匀、细胞很难渗入到深层结构中等缺点。利用零部件组合的原理可以达到复杂器官中不同部位不同细胞类型及结构类型的要求，实现复杂组织器官的重建，从而达到修复再生的目的。
Description
技术领域
本发明涉及一种复杂组织器官前体的制备方法，属于生物组织工程技术领域。
背景技术
世界上每年患有组织缺损或器官衰竭的病人数逾千万，仅美国每年以外科手术治疗此类病人约800万。然而，活体供体器官有限，现有的机械装置不具备器官的所以功能，不能防止患者的病情进一步恶化。据此，以提高此类疾患治疗水平为宗旨的组织工程(TissueEngineering)技术应运而生。组织工程是一门由生物学、医学、材料学、工程学等多学科交叉产生的高新技术学科。其含义是应用生命科学与工程学的原理与技术，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物[Merem RM.Med & Biol Eng&Comput.1992；30：8-12]。近十年来，科学家们运用组织工程技术，利用人体残余器官的少量正常细胞进行体外繁殖，获得患者所需的、具有相同功能的器官，又不存在排斥反应，已取可喜的成果，不少新近成立的生物技术公司正准备正在投入巨资实现商品化。在美国，已形成价值40亿美元的产业，并以每年25％的速度递增。如Pro Osteon珊瑚骨移植材料产值超过1000万美元[Miller M，Biotech Bioeng，1996；50：4347-4348]。但现存的组织工程技术面临许多困难和限制，组织工程应用研究所取得的成功均是在那些结构与生理功能较为简单的组织器官如骨骼、软骨、皮肤。传统的支架制备技术不能准确地控制孔的大小、结构、空间分布及贯通的通道，营养供应和血管长入都受到很大的限制。传统组织工程方法一般先制备结构支架，在进行细胞培养过程中由于上层细胞消耗大部分的氧气和营养，限制了这些组分向底层扩散，从而限制了细胞向支架深层的迁移等。这种先制备支架，再培养细胞的方法，耗时又费力，细胞在向支架内迁移的过程中很可能就已经变型、老化，达不到及时治疗临床病人的要求。同时传统的组织工程技术不能满足将不同的细胞在空间准确定位与定点放置，构建复杂组织器官的功能梯度结构的需求。本发明在综合前人工作的基础上，利用各种先进技术，实现细胞和支架材料在空间的准确定位，利用零部件组合的原理实现复杂组织器官的重建，从而达到修复再生的目的，具有广泛的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种复杂组织器官前体的制备方法，旨在前人工作的基础上，利用计算机辅助的快速成型技术、涂覆法或一次性灌注成形技术，实现细胞和支架材料在空间的准确定位，利用零部件组合的原理实现复杂组织器官的重建，从而达到修复再生的目的
本发明的技术方案如下：
一种复杂组织器官前体的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)种子细胞或基因与基质材料微胶珠的制备
a.分离或诱导所需的种子细胞或基因，将所得的不同种类的种子细胞或基因的悬浮液离心分离后分别与含有1～40％的基质材料的溶液均匀混合，制成细胞或基因与基质材料的混合物；所述的基质材料为明胶、胶原、明胶/胶原、明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠，其中所述的明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠的混合溶液中明胶与壳聚糖或明胶与海藻酸钠的质量比0.5～100∶1，所述种子细胞或基因占所述基质材料混合溶液的0.01～10％；所述的基质材料的溶液为水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液；
b.用静电微囊发生器或微滴注入技术将细胞或基因与明胶/壳聚糖基质材料喷入1～20％三磷酸钠水溶液交联；对于明胶/海藻酸钠基质材料喷或注入浓度为1～20％乳酸钙或氯化钙水溶液交联，形成微球；然后将三磷酸钠水溶液或乳酸钙、氯化钙水溶液吸出；将微球与浓度为0.1～1％的戊二醛溶液进一步反应1～180秒钟，形成微胶珠；对于细胞或基因与明胶、胶原或明胶/胶原混合物直接喷或注入浓度为0.1～1％的戊二醛溶液反应1～180秒钟，形成微胶珠；对于细胞或基因与明胶/壳聚糖、明胶/海藻酸钠基质材料形成的微胶珠再与浓度为0.1～10％柠檬酸钠缓冲溶液反应10分钟～2小时，形成液化微胶珠；
2)制备网管状结构：将生物可降解高分子材料或其与肝素的复合物溶液，利用计算机辅助的快速成型技术、涂覆法或一次性灌注成形技术，经冷冻干燥，制成网管状组织器官不同零件的三维结构支架；所述的生物可降解高分子材料为聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯、胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物，其中聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯采用浓度为1～10％的1，4-二氧六环溶液；其中胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物采用浓度为1～40％的的水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液，成形后用浓度为0.1～1％的交联剂戊二醛或浓度1～10％的三磷酸钠平衡溶液交联；
3)组装：利用微囊注射技术将步骤1)b中的微胶珠注射到所述的三维结构支架相应的位置上，体外培养或进行体内植入；
上述步骤1)a中所述的细胞或基因与基质材料的混合物利用凝胶注射技术直接注射到步骤2)中的三维结构支架中，再用浓度为0.1～1％的戊二醛溶液、1～20％乳酸钙、氯化钙或三磷酸钠水溶液交联。所述的基质材料中复合有细胞生长因子。
本发明提供的另一种复杂组织器官前体的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)种子细胞或基因与基质材料管道状三维结构的制备
a.分离或诱导所需的种子细胞或基因，将所得的不同种类的种子细胞或基因的悬浮液离心分离后分别与含有1～40％的基质材料的溶液均匀混合，制成细胞或基因与基质材料的混合物；所述的基质材料为明胶、胶原、明胶/胶原、明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠，其中所述的明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠的混合溶液中明胶与壳聚糖或明胶与海藻酸钠的质量比0.5～100∶1，所述种子细胞或基因占所述基质材料混合溶液的0.01～10％；所述的基质材料的溶液为水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液；
b.在0～30℃的环境下根据预先设计的结构和定义规划的路径，将上述细胞与基质材料的混合物通过微滴喷射、数字挤压技术利用细胞组装机在成形室中逐层堆积得到细胞与基质材料的多管道三维立体结构；对于基质材料为明胶/壳聚糖形成的管道状三维结构，用1～20％三磷酸钠水溶液交联；对于基质材料为明胶/海藻酸钠形成的管道状三维结构，用浓度为1～20％乳酸钙或氯化钙水溶液交联；然后将交联剂吸出，再与浓度为0.1～1％的戊二醛水或生理盐水溶液反应1～180秒钟；对于基质材料为明胶/壳聚糖、明胶/海藻酸钠基质材料形成的管道状三维结构再与浓度为0.1～10％柠檬酸钠缓冲溶液反应10分钟～2小时，形成内部液化的管道状三维结构；对于基质材料为明胶、胶原或明胶/胶原形成的管道状三维结构，直接用浓度为0.1～1％的戊二醛溶液交联1～180秒钟；
2)制备网管状结构：将生物可降解高分子材料或其与肝素的复合物溶液，利用计算机辅助的快速成型技术、涂覆法或一次性灌注成形技术，经冷冻干燥，制成网管状组织器官不同零件的三维结构支架；所述的生物可降解高分子材料为聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯、胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物，其中聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯采用浓度为1～10％的1，4-二氧六环溶液；其中胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物采用浓度为1～40％的的水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液，成形后用浓度为0.1～1％的交联剂戊二醛或浓度1～10％的三磷酸钠平衡溶液交联；
3)组装：将步骤2)制备的网管状结构插入步骤1)制备的管道状三维结构中，外包一层可降解的、降解速度在1～6个月的组织相容性的高分子膜。
本发明可以实现不同细胞和基质材料在空间的准确定位，克服了组织工程目前存在的在三维支架中诱导培养细胞需要时间长，细胞在支架中分布不均匀，细胞很难渗入到深层结构中等缺点。利用零部件组合的原理可以达到复杂器官中不同部位不同细胞类型及结构类型的要求，实现复杂组织器官的重建，从而达到修复再生的目的。
具体实施方式
下面举出的几个实施例以进一步理解本发明
实施例1：人工复合肝前体的制备
1)采购已有的细胞系如HepG2肝细胞、内皮细胞，将两种类细胞悬液离心后分别与重量比1％明胶/海藻酸钠(100∶1w/w)0.09M NaCI溶液、细胞生长因子混合均匀。用静电微囊发生器喷入重量比5％乳酸钙溶液中，以形成微球。吸出乳酸钙溶液，加入浓度为0.1％的戊二醛溶液反应1秒钟，形成微胶珠；将微胶珠与重量比0.1％柠檬酸钠(也叫枸橼酸钠)缓冲溶液反应数分钟，以液化微珠芯，形成液化微胶囊。
2)制备网管状结构：将生物浓度为1％的可降解高分子材料聚氨酯(PU)1，4-二氧六环溶液利用计算机辅助的快速成型技术，制成网管状组织器官不同零件的三维结构支架；
3)组装：利用微囊注射技术将步骤1)制备的液化微胶囊注射到三维结构支架相应的位置上，体外培养，备用。
实施例2：人工复合肝前体的制备
1)采购已有的细胞系如HepG2肝细胞、内皮细胞。将两种细胞悬液离心后分别与重量比20％明胶/海藻酸钠(1∶1w/w)0.09M NaCI溶液、内皮细胞生长因子混合均匀。
2)制备网管状结构：将生物浓度为1％的可降解高分子材料聚氨酯(PU)1，4-二氧六环溶液利用计算机辅助的快速成型技术，制成网管状组织器官不同零件的三维结构支架；
3)组装：利用微滴注射技术将步骤1)制备的两种细胞与基质的复合物注射到三维结构支架相应的位置上，用重量比5％乳酸钙溶液交联。吸出乳酸钙溶液，加入浓度为0.1％的戊二醛溶液反应180秒钟；将微胶珠与重量比0.1％柠檬酸钠(也叫枸橼酸钠)缓冲溶液反应数分钟，体外培养或进行体内植入。
实施例3：人工复合肝前体的制备
分离病人的肝细胞、内皮细胞、星状细胞，体外培养、扩增。将三种细胞悬液离心后分别或混合与10％明胶/壳聚糖(1∶100w/w)的0.09M NaCI溶液、肝细胞生长因子和内皮细胞长因子，由细胞组装机制备由内皮细胞和肝细胞与星状细胞层组成的多管道三维立体结构。用浓度为1％的戊二醛溶液反应1秒钟，生理盐水冲洗。此结构可直接种植于肠膜或与肝损伤部位，也可与内附内皮细胞的管网状聚氨酯复合后再植入。
实施例4：人工复合肝前体的制备
分离病人的肝细胞、肺内皮细胞、星状细胞等，体外培养、扩增。将不同种类细胞悬液离心后分别或混合与40％明胶的0.09M的氯化钠·三(羟甲基)氨基甲烷盐酸溶液混合均匀，由细胞组装机制备由内皮细胞和肝细胞(与星状细胞)层组成的多管道三维立体结构。用浓度为3％的三磷酸哪水溶液交联5分钟，再用1％的戊二醛溶液反应1秒钟，生理盐水冲洗。此结构可直接种植于肠膜或与肝损伤部位，也可与内附内皮细胞的管网状聚氨酯复合后再植入。
实施例5：人工复合肝前体的制备
分离肝的干细胞、肝细胞基因等，体外诱导、培养、扩增。将不同种类细胞悬液离心后分别与1％的胶原0.09M NaCI溶液、内皮细胞生长因子混合均匀由细胞组装机制备由内皮细胞和肝细胞层组成的多管道三维立体结构，外包一层肝素处理聚己内酯(PCL)膜种植于肠膜或与肝损伤部位。
附：肝素处理的PCL膜的制备：将丙酮与1wt％肝素钠水溶液按1∶1(v/v)混合，再将由PCL膜薄膜浸入其中浸泡8h。然后在浓度依次递减的丙酮水溶液中缩聚，使外套具备抗凝血性。
实施例6：人工复合肝前体的制备
分离肝的干细胞、肝细胞基因等，体外诱导、培养、扩增。将不同种类细胞悬液离心后分别与20％明胶/壳聚糖(100∶1w/w)的0.09M的氯化钠·三(羟甲基)氨基甲烷盐酸溶液混合均匀，由细胞组装机制备干细胞、肝细胞基因与明胶/壳聚糖基质组成的多管道三维立体结构，用0.1％的戊二醛生理盐水交联10秒钟，外包一层肝素处理聚己内酯(PCL)膜种植于肠膜或与肝损伤部位。
附：肝素处理的PCL膜的制备：将丙酮与1wt％肝素钠水溶液按1∶1(v/v)混合，再将由PCL膜薄膜浸入其中浸泡8h。然后在浓度依次递减的丙酮水溶液中缩聚，使外套具备抗凝血性。
实施例7：复合皮肤的制备
用快速成形技术制备网格状成纤维细胞与20％明胶水溶液层(10×10×0.5mm3，贯通孔径50μm)，更换针头或喷头，在原网格层上加一层上皮细胞与明胶基质材料(10×10×0.5mm3，贯通孔径50μm)。制成厚度为1mm的双层膜。膜上还可上覆一层无细胞壳聚糖膜或病人真皮，防止水份流失。
实施例8：复合皮肤的制备
用冻干技术将胶原/壳聚糖(10∶1，0.5％w/w)制成厚0.5mm厚的海绵层，将含成纤维生长因子细胞、成纤维细胞的明胶/壳聚糖微球(直径：50μm)用针头注射在底层，再在上层注射含上皮细胞的明胶/海壳聚糖微球(直径：50μm)，上盖一层硅胶膜防止水份流失。
实施例9：乳房前体的制备
分离脂肪细胞，体外培养、扩增。将脂肪细胞悬液离心后分别与1％明胶/硫酸软骨素(100∶1w/w)0.09M NaCI、细胞生长因子混合均匀制备直径50μm的微球。将微球注射到由冻干技术形成的伞房形由0.25％戊二醛水溶液交联的胶原或胶原/壳聚糖海绵体内。外覆一层聚氨酯肝素膜，此复合体可直接植于乳房损伤处或经体外培养后再植入。
实施例10：乳房前体的制备
分离脂肪干细胞，体外培养、扩增。将脂肪干细胞悬液离心后分别与1％胶原(100∶1w/w)0.09M NaCI溶液(pH≈7.4)、脂肪细胞生长因子混合均匀按乳房的形状由快速成形技术制备多管道细胞与胶原/明胶基质的三维结构，将两个乳房状的管网结构，通过钻孔等技术并列插入到有一定形状的快速成形技术制备的细胞与基质材料的三维结构中。将三维结构进行修剪，外包(缝合，将材料保护起来外涂)一层经3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物膜。管口处与内层管网结构相吻合，但液体不泄漏。可直接种植于体内或体外培养一段时间再植入体内。
实施例11：肾脏前体的制备
分离肾细胞基因，体外培养、扩增。将肾细胞基因(DNA)与1％明胶/海藻酸钠(100∶1w/w)水溶液、细胞生长因子混合均匀，制备直径0.5μm的微球。用灌注成形技术、冻干技术制备肾形三维结构，用0.3％戊二醛水溶液交联。此复合体可直接植于肾损伤处或经体外培养后再植入。
实施例12：肾脏前体的制备
分离肾细胞，体外培养、扩增。将肾细胞悬液离心后分别与重量比10％明胶/胶原(10∶1w/w)0.09M NaCI溶液(pH：6)混合均匀由快速成形技术制备多管道肾形三维结构，用0.3％戊二醛水溶液交联2秒钟，外涂一层经PLGA膜。管口处与内层管网结构相吻合，但液体不泄漏。可直接种植于体内或体外培养一段时间再植入体内。
实施例13：胰腺前体的制备
分离胰岛细胞，体外培养、扩增。将胰岛细胞悬液离心后分别与重量比20％明胶水溶液、细胞生长因子混合均匀，制备直径100μm的微球。将微球注射到快速成形技术制备的网管状由0.3戊二醛水溶液交联的胶原或胶原/壳聚糖海绵体内。此复合体可直接植于胰腺、肝脏等部位。
实施例14：胰腺前体的制备
分离胰岛细胞基因，体外培养、扩增。将胰岛细胞基因与重量比20％明胶/海藻酸钠(1∶2w/w)0.09M NaCI溶液pH：8、细胞生长因子混合由快速成形技术制备多管道细胞与明胶/海藻酸钠基质的三维结构，5％乳酸钙溶液交联，用放在有一定形状的快速成形技术制备聚氨酯网管三维结构中。外包(缝合，将材料保护起来外涂)一层聚氨酯膜。管口处与内层管网结构相吻合，但液体不泄漏。可直接种植于体内或体外培养一段时间再植入体内。
实施例15：胰腺前体的制备
分离胰岛基因，体外培养、扩增。将胰岛基因与重量比1％明胶/壳聚糖(100∶1w/w)0.09M NaCI NaCI·三(羟甲基)氨基甲烷盐酸溶液(pH≈7.4)、混合均匀，由快速成形技术制备多管道细胞与基质的三维结构，0.1％戊二醛生理盐水溶液交联20秒，外包一层聚羟基酸膜。管口处与内层管网结构相吻合，但液体不泄漏。可直接种植于体内或体外培养一段时间再植入体内。
实施例16：肺前体的制备
分离肺上皮细胞、肺细胞，体外培养、扩增。将分离细胞悬液离心后分别与重量比1％明胶/海藻酸钠(1∶1w/w)0.09M NaCI NaCI·三(羟甲基)氨基甲烷盐酸溶液(pH≈7.4)、细胞生长因子混合均匀，制备直径0.5μm的微球。将微球注射到树枝状由戊二醛交联的胶原或胶原/壳聚糖海绵体内，再包一层聚己内酯膜(PCL)膜。此复合体可直接植于肺损伤处或经体外培养后再植入。
实施例17：肺前体的制备
分离肺上皮细胞、肺细胞。将肺上皮细胞、肺细胞悬液离心后分别与重量比10％明胶/壳聚糖(1∶2w/w)0.09M NaCI溶液(pH：7.4)、细胞生长因子混合均匀，由快速成形技术制备扁园形多管道细胞与基质的三维结构，5％三磷酸钠交联后再用0.1％戊二醛生理盐水溶液交联20秒，将三维结构外包一层丙酮：肝素/水(1∶1)溶液处理的聚氨酯膜。肺管与内层管网结构相吻合，但液体不泄漏。可直接种植于体内或体外培养一段时间再植入体内。
实施例18：脾前体的制备
分离脾细胞、内皮细胞，体外培养、扩增。将脾细胞、内皮细胞悬液离心后分别与20％的明胶/壳聚糖(pH：7.4)溶液混合备用；注射到胶原或胶原/壳聚糖海绵体内后，由0.2％戊二醛生理盐水溶液交联后。此复合体可直接植于脾损伤处或经体外培养后再植入。
实施例19：胰腺前体的制备
分离脾细胞岛基因，体外培养、扩增。将脾细胞岛基因与重量比1％明胶/海藻酸钠(3∶2w/w)0.09M NaCI溶液pH：7、细胞生长因子混合均匀按扁园形的形状由快速成形技术制备多管道细胞与基质的三维结构，0.5％戊二醛生理盐水溶液交联10秒，外包一层乳酸与乙醇酸共聚物(PLGA)膜。管口处与内层管网结构相吻合，但液体不泄漏。可直接种植于体内或体外培养一段时间再植入体内。
实施例20：神经修复导管的制备
用细胞装配机制备圆柱状多管道雪旺氏细胞(干细胞)与重量比20％明胶/胶原(1∶100w/w)0.09M NaCI溶液pH：7.4基质材料三维结构(圆柱外径4mm，贯通孔径50μm)。外套一层相当大小的胶原膜，1％戊二醛生理盐水溶液交联5秒，防止周围组织长入。
实施例21：神经修复导管的制备
用细胞装配机制备圆柱状多管道干细胞、生长因子、基因(DNA)与重量比20％明胶/胶原(10∶1w/w)0.09M NaCI·三(羟甲基)氨基甲烷盐酸溶液(pH：7.4)基质材料三维结构(直径4mm，贯通孔径900μm)。0.5％戊二醛生理盐水溶液交联30秒，外套一层相当大小的胶原/壳聚糖膜(10∶1w/w，由1％胶原/壳聚糖溶液反复涂覆，用1％戊二醛交联而得)，防止周围组织长入。
实施例22：骨与软骨前体的制备
用快速成形技术将成骨细胞、骨形成蛋白(BMP)、软骨细胞与明胶/壳聚糖(20∶1w/w)基质材料三维结构(直径：3mm，贯通孔径：300μm，长：10mm)，体外培养。
实施例23：心脏前体的制备
分别制备心肌细胞、血管内皮细胞与20％明胶基质，设计心血管和心包膜模型，利用双喷头快速成形技术将心肌细胞、血管内皮细胞与基质组装成多管道心包状结构(内皮细胞在外层，心肌细胞在内层)。用涂覆法制备管网状多管道心血管系统，并插入到心包状细胞/基质三维结构中，外包一层聚氨酯膜，管道可与提内心血管系统相连，液体不渗漏。
Claims (5)
1.一种复杂组织器官前体的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)种子细胞或基因与基质材料微胶珠的制备
a.分离或诱导所需的种子细胞或基因，将所得的不同种类的种子细胞或基因的悬浮液离心分离后分别与含有1～40％的基质材料的溶液均匀混合，制成细胞或基因与基质材料的混合物；所述的基质材料为明胶、胶原、明胶/胶原、明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠，其中所述的明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠的混合溶液中明胶与壳聚糖或明胶与海藻酸钠的质量比0.5～100∶1，所述种子细胞或基因占所述基质材料混合溶液的0.01～10％；所述的基质材料的溶液为水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液；
b.用静电微囊发生器或微滴注入技术将细胞或基因与明胶/壳聚糖基质材料喷入1～20％三磷酸钠水溶液交联；对于明胶/海藻酸钠基质材料喷或注入浓度为1～20％乳酸钙或氯化钙水溶液交联，形成微球；然后将三磷酸钠水溶液或乳酸钙、氯化钙水溶液吸出；将微球与浓度为0.1～1％的戊二醛溶液进一步反应1～180秒钟，形成微胶珠；对于细胞或基因与明胶、胶原或明胶/胶原混合物直接喷或注入浓度为0.1～1％的戊二醛溶液反应1～180秒钟，形成微胶珠；对于细胞或基因与明胶/壳聚糖、明胶/海藻酸钠基质材料形成的微胶珠再与浓度为0.1～10％柠檬酸钠缓冲溶液反应10分钟～2小时，形成液化微胶珠；
2)制备网管状结构：将生物可降解高分子材料或其与肝素的复合物溶液，利用计算机辅助的快速成型技术、涂覆法或一次性灌注成形技术，经冷冻干燥，制成网管状组织器官不同零件的三维结构支架；所述的生物可降解高分子材料为聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯、胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物，其中聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯采用浓度为1～10％的1，4-二氧六环或氯仿溶液；其中胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物采用浓度为1～40％的的水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液，成形后用浓度为0.1～1％的交联剂戊二醛或浓度1～10％的三磷酸钠平衡溶液交联；
3)组装：利用微囊注射技术将步骤1)b中的微胶珠注射到所述的三维结构支架相应的位置上，体外培养或体内植入；
2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)a中所述的细胞或基因与基质材料的混合物利用凝胶注射技术直接注射到步骤2)中的三维结构支架中，再用浓度为0.1～1％的戊二醛溶液、1～20％乳酸钙、氯化钙或三磷酸钠水溶液交联。
3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的基质材料中复合有细胞生长因子。
4.一种复杂组织器官前体的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)种子细胞或基因与基质材料管道状三维结构的制备
a.分离或诱导所需的种子细胞或基因，将所得的不同种类的种子细胞或基因的悬浮液离心分离后分别与含有1-40％的基质材料的溶液均匀混合，制成细胞或基因与基质材料的混合物；所述的基质材料为明胶、胶原、明胶/胶原、明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠，其中所述的明胶/壳聚糖或明胶/海藻酸钠的混合溶液中明胶与壳聚糖或明胶与海藻酸钠的质量比0.5～100∶1，所述种子细胞或基因占所述基质材料混合溶液的0.01～10％；所述的基质材料的溶液为水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液；
b.在0～30℃的环境下根据预先设计的结构和定义规划的路径，将上述细胞与基质材料的混合物通过微滴喷射、数字挤压技术利用细胞组装机在成形室中逐层堆积得到细胞与基质材料的多管道三维立体结构；对于基质材料为明胶/壳聚糖形成的管道状三维结构，用1～20％三磷酸钠水溶液交联；对于基质材料为明胶/海藻酸钠形成的管道状三维结构，用浓度为1～20％乳酸钙或氯化钙水溶液交联；然后将交联剂吸出，再与浓度为0.1～1％的戊二醛水或生理盐水溶液反应1～180秒钟；对于基质材料为明胶/壳聚糖、明胶/海藻酸钠基质材料形成的管道状三维结构再与浓度为0.1～10％柠檬酸钠缓冲溶液反应10分钟～2小时，形成内部液化的管道状三维结构；对于基质材料为明胶、胶原或明胶/胶原形成的管道状三维结构，直接用浓度为0.1～1％的戊二醛溶液交联1～180秒钟；
2)制备网管状结构：将生物可降解高分子材料或其与肝素的复合物溶液，利用计算机辅助的快速成型技术、涂覆法或一次性灌注成形技术，经冷冻干燥，制成网管状组织器官不同零件的三维结构支架；所述的生物可降解高分子材料为聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯、胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物，其中聚氨酯、聚乳酸、乳酸与乙醇酸共聚物、聚羟基酸、3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚物、聚己内酯采用浓度为1～10％的1，4-二氧六环溶液；其中胶原、明胶、纤维蛋白、纤维粘连蛋白、胶原/壳聚糖、胶原/硫酸软骨素、明胶/壳聚糖或其中两种复合物采用浓度为1～40％的的水溶液或pH＝6～8的0.09M的氯化钠或0.09M的氯化钠和3-羟甲基氨基甲烷盐酸溶液，成形后用浓度为0.1～1％的交联剂戊二醛或浓度1～10％的三磷酸钠平衡溶液交联；
3)组装：将步骤2)制备的网管状结构插入步骤1)制备的管道状三维结构中，外包一层可降解的、降解速度在1～6个月的组织相容性的高分子膜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2004100915524A CN1609200A (zh) | 2004-11-19 | 2004-11-19 | 一种复杂组织器官前体的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2004100915524A CN1609200A (zh) | 2004-11-19 | 2004-11-19 | 一种复杂组织器官前体的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1609200A true CN1609200A (zh) | 2005-04-27 |
Family
ID=34766298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2004100915524A Pending CN1609200A (zh) | 2004-11-19 | 2004-11-19 | 一种复杂组织器官前体的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1609200A (zh) |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100355468C (zh) * | 2005-06-14 | 2007-12-19 | 福建师范大学 | 基因重组蛛丝蛋白－高聚物组织工程多孔支架材料 |
| WO2008049281A1 (fr) * | 2006-10-27 | 2008-05-02 | Beijing Institute Of Transfusion Medicine | Procédé de construction d'une construction de génie tissulaire hépatique et construction de génie tissulaire hépatique |
| CN101703804A (zh) * | 2009-11-25 | 2010-05-12 | 复旦大学附属中山医院 | 一种多孔骨替代材料及其制备方法 |
| WO2011011962A1 (zh) * | 2009-07-31 | 2011-02-03 | 清华大学 | 一种多层结构的复杂组织器官前体的制备方法 |
| CN101032430B (zh) * | 2007-04-13 | 2011-03-16 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 一种制备含功能界面的组织工程骨软骨仿生一体化支架的方法 |
| CN101275121B (zh) * | 2007-03-26 | 2011-05-11 | 芦银雪 | 体外培养扩增的人肝脏祖先细胞及其制备方法 |
| CN101701208B (zh) * | 2009-10-16 | 2012-05-30 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种组织工程化肺脏组织及其构建方法 |
| CN102505184A (zh) * | 2011-10-20 | 2012-06-20 | 清华大学 | 一种组织工程纤维束结构体及其制备方法 |
| CN102512261A (zh) * | 2011-12-28 | 2012-06-27 | 清华大学 | 一种基于组合模具的复杂器官前体的制备方法 |
| CN102871771A (zh) * | 2012-09-04 | 2013-01-16 | 清华大学 | 利用旋转组合模具制备纺锤状复杂器官前体的方法 |
| CN101773682B (zh) * | 2009-11-20 | 2013-01-16 | 湖北工业大学 | 一种制备聚合物三维多孔支架的方法 |
| CN102886070A (zh) * | 2012-09-14 | 2013-01-23 | 上海大学 | 海藻酸钠-壳聚糖皮肤组织工程支架材料及其制备方法 |
| CN101448527B (zh) * | 2006-05-19 | 2013-12-18 | 香港大学 | 细胞-基质微球，制备方法和应用 |
| CN104490491A (zh) * | 2014-12-26 | 2015-04-08 | 清华大学 | 一种生物相容的人工耳及其体外快速构建方法 |
| CN106039414A (zh) * | 2015-04-07 | 2016-10-26 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 生物砖的制备方法及由此制备的生物砖 |
| CN108379661A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-08-10 | 中国人民解放军总医院 | 利用离心种植构建组织工程膀胱的方法 |
| CN108525021A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-14 | 山西医科大学 | 基于3d打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤及其制备方法 |
| CN109913401A (zh) * | 2016-09-14 | 2019-06-21 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 人工组织前体及制备其的方法 |
| CN111467576A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-31 | 上海市东方医院（同济大学附属东方医院） | 仿真胆囊壁合成材料及其制备方法和应用以及仿真胆囊壁 |
| US11439731B2 (en) | 2016-09-14 | 2022-09-13 | Revotek Co., Ltd. | Artificial tissue progenitor and method for preparing the same |
-
2004
- 2004-11-19 CN CNA2004100915524A patent/CN1609200A/zh active Pending
Cited By (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100355468C (zh) * | 2005-06-14 | 2007-12-19 | 福建师范大学 | 基因重组蛛丝蛋白－高聚物组织工程多孔支架材料 |
| CN101448527B (zh) * | 2006-05-19 | 2013-12-18 | 香港大学 | 细胞-基质微球，制备方法和应用 |
| WO2008049281A1 (fr) * | 2006-10-27 | 2008-05-02 | Beijing Institute Of Transfusion Medicine | Procédé de construction d'une construction de génie tissulaire hépatique et construction de génie tissulaire hépatique |
| CN101275121B (zh) * | 2007-03-26 | 2011-05-11 | 芦银雪 | 体外培养扩增的人肝脏祖先细胞及其制备方法 |
| CN101032430B (zh) * | 2007-04-13 | 2011-03-16 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 一种制备含功能界面的组织工程骨软骨仿生一体化支架的方法 |
| WO2011011962A1 (zh) * | 2009-07-31 | 2011-02-03 | 清华大学 | 一种多层结构的复杂组织器官前体的制备方法 |
| CN101701208B (zh) * | 2009-10-16 | 2012-05-30 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种组织工程化肺脏组织及其构建方法 |
| CN101773682B (zh) * | 2009-11-20 | 2013-01-16 | 湖北工业大学 | 一种制备聚合物三维多孔支架的方法 |
| CN101703804A (zh) * | 2009-11-25 | 2010-05-12 | 复旦大学附属中山医院 | 一种多孔骨替代材料及其制备方法 |
| CN101703804B (zh) * | 2009-11-25 | 2013-03-13 | 复旦大学附属中山医院 | 一种抗生素可控释放的多孔复合骨替代材料及其制备方法 |
| CN102505184B (zh) * | 2011-10-20 | 2014-04-09 | 清华大学 | 一种组织工程纤维束结构体及其制备方法 |
| CN102505184A (zh) * | 2011-10-20 | 2012-06-20 | 清华大学 | 一种组织工程纤维束结构体及其制备方法 |
| CN102512261A (zh) * | 2011-12-28 | 2012-06-27 | 清华大学 | 一种基于组合模具的复杂器官前体的制备方法 |
| CN102871771A (zh) * | 2012-09-04 | 2013-01-16 | 清华大学 | 利用旋转组合模具制备纺锤状复杂器官前体的方法 |
| CN102871771B (zh) * | 2012-09-04 | 2015-02-18 | 清华大学 | 利用旋转组合模具制备纺锤状复杂器官前体的方法 |
| CN102886070A (zh) * | 2012-09-14 | 2013-01-23 | 上海大学 | 海藻酸钠-壳聚糖皮肤组织工程支架材料及其制备方法 |
| CN104490491A (zh) * | 2014-12-26 | 2015-04-08 | 清华大学 | 一种生物相容的人工耳及其体外快速构建方法 |
| CN104490491B (zh) * | 2014-12-26 | 2017-01-04 | 清华大学 | 一种生物相容的人工耳及其体外快速构建方法 |
| CN106039414A (zh) * | 2015-04-07 | 2016-10-26 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 生物砖的制备方法及由此制备的生物砖 |
| CN106039414B (zh) * | 2015-04-07 | 2020-07-07 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 生物砖的制备方法及由此制备的生物砖 |
| CN109943519A (zh) * | 2016-09-14 | 2019-06-28 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 人工组织前体及制备其的方法 |
| CN109913401A (zh) * | 2016-09-14 | 2019-06-21 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 人工组织前体及制备其的方法 |
| CN109943518A (zh) * | 2016-09-14 | 2019-06-28 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 人工组织前体及制备其的方法 |
| CN110093304A (zh) * | 2016-09-14 | 2019-08-06 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 人工组织前体及制备其的方法 |
| US11439731B2 (en) | 2016-09-14 | 2022-09-13 | Revotek Co., Ltd. | Artificial tissue progenitor and method for preparing the same |
| CN108525021A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-14 | 山西医科大学 | 基于3d打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤及其制备方法 |
| CN108525021B (zh) * | 2018-04-17 | 2021-05-18 | 山西医科大学 | 基于3d打印的含血管及毛囊结构组织工程皮肤及其制备方法 |
| CN108379661A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-08-10 | 中国人民解放军总医院 | 利用离心种植构建组织工程膀胱的方法 |
| CN108379661B (zh) * | 2018-05-25 | 2024-01-23 | 中国人民解放军总医院 | 利用离心种植构建组织工程膀胱的方法 |
| CN111467576A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-31 | 上海市东方医院（同济大学附属东方医院） | 仿真胆囊壁合成材料及其制备方法和应用以及仿真胆囊壁 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1609200A (zh) | 一种复杂组织器官前体的制备方法 | |
| Gao et al. | Recent strategies in extrusion-based three-dimensional cell printing toward organ biofabrication | |
| Krishani et al. | Development of scaffolds from bio-based natural materials for tissue regeneration applications: a review | |
| US20050209687A1 (en) | Artificial vessel scaffold and artifical organs therefrom | |
| CN1806774A (zh) | 人工血管支架和人工器官 | |
| CN108543116B (zh) | 海藻酸钠与明胶复合水凝胶3d胰岛支架及其制备方法 | |
| WO2011011962A1 (zh) | 一种多层结构的复杂组织器官前体的制备方法 | |
| JP2002527191A (ja) | 移植用心臓血管部品及びその製造方法 | |
| CN110772669A (zh) | 一种用于3d打印人工皮肤的生物墨水 | |
| CN105034369A (zh) | 三维角膜基质支架材料及三维角膜基质支架的构建方法 | |
| CN108310463B (zh) | 一种3d打印生物墨水及其制备方法 | |
| CN1927416A (zh) | 一种复合多孔磷酸钙骨水泥及其制备方法 | |
| Hassan et al. | Biomaterials for on-chip organ systems | |
| CN1304566C (zh) | 带有培养装置的类复杂器官前体及其构建和培养方法 | |
| Forgacs et al. | Biofabrication: micro-and nano-fabrication, printing, patterning and assemblies | |
| Tamay et al. | Bioinks—materials used in printing cells in designed 3D forms | |
| CN101716382A (zh) | 一种质粒dna/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制备方法 | |
| Aziz et al. | A Review on the Applications of Natural Biodegradable Nano Polymers in Cardiac Tissue Engineering | |
| Sun et al. | Three-dimensional bioprinting in cardiovascular disease: current status and future directions | |
| CN102631710A (zh) | 多通道多层细胞结构的复合组织器官前体的制备方法 | |
| Bülow et al. | Three-Dimensional Bioprinting in Soft Tissue Engineering for Plastic and Reconstructive Surgery | |
| Thangadurai et al. | Emerging perspectives on 3D printed bioreactors for clinical translation of engineered and bioprinted tissue constructs | |
| Zhu et al. | 3D bioprinting for vascular grafts and microvasculature | |
| CN105688279B (zh) | 一种肺替代物及其三维打印与注射成形制造方法 | |
| Visconti et al. | Cardiovascular tissue engineering I. Perfusion bioreactors: a review |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |