CN108519447A

CN108519447A - 基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法

Info

Publication number: CN108519447A
Application number: CN201810282999.1A
Authority: CN
Inventors: 刘俊; 杨忠; 向丽; 刘建; 王翀; 殷新; 陈斌武; 王梁; 孙涛; 雷勇辉
Original assignee: XINJIANG ENTRY-EXIT INSPECTION QUARANTINE BUREAU INSPECTION QUARANTINE TECHNOLOGY CENTER
Current assignee: XINJIANG ENTRY-EXIT INSPECTION QUARANTINE BUREAU INSPECTION QUARANTINE TECHNOLOGY CENTER
Priority date: 2018-04-02
Filing date: 2018-04-02
Publication date: 2018-09-11

Abstract

本发明公开了一种基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，包括以下步骤，标准储备液和标准工作液的配制；干果样品预处理；固相萃取处理；配置超高效液相色谱仪的色谱条件；通过超高效液相色谱对测定溶液内11种酸性染料进行色谱分析，得到干果内11种酸性染料的检出量。本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，能够通过超高效液相色谱法测定干果中的11种禁用酸性染料，具有处理简单，重复性好等特点，采用超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，提取时间短，提取效率高，方法简便、快速，适合各类干果中11种禁用酸性染料的同时测定，具有良好的应用方法。

Description

基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法

技术领域

本发明涉及一种基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，属于食品安全测量技术领域。

背景技术

近年来，干果的需求量伴随着人们生活水平的提高而逐年增长，从而使干果的制作规模不断扩大。在促进了干果产业的迅速发展的同时，不法商贩常以价格便宜、着色稳定、不易褪色的酸性染料非法添加在干果中，以次充好，从中谋取暴利，此行为对国内消费及国际出口大宗特色干果制品造成严重的影响。

研究证实工业酸性染料具有较强的致毒、致癌作用。因此，在GB 2760-2014《食品添加剂使用标准》中禁止酸性染料作为食品添加剂使用，但是，目前尚无出台相关一次性检测干果中多种酸性染料的国家标准方法，现行SB/T 10920-2012《食品中禁用物质酸性橙染料的检测高效液相色谱法》仅针对单一种类酸性橙染料进行检测，而对多种类掺杂的酸性染料的检测存在较大的局限性；又由于干果的基质较为复杂，并且干果中存在多种(10种以上)被滥用的酸性染料的同时测定方法未见报道。因此，如何加强干果中酸性染料的检测研究，对非法添加工业染料的监测以及保证食品安全具有重要意义，也是当前继续解决的问题。

发明内容

本发明目的是为了克服现有技术中没有对干果中存在多种(10种以上)被滥用的酸性染料的同时测定方法的问题。本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，能够通过超高效液相色谱法测定干果中的11种禁用酸性染料，具有处理简单，重复性好等特点，采用超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，提取时间短，提取效率高，方法简便、快速，适合各类干果中11种禁用酸性染料的同时测定，具有良好的应用方法。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，包括以下步骤，

步骤(A)，标准储备液和标准工作液的配制

(A1)，选择标准试剂品，包括乙腈、乙酸铵；

(A2)，分别称取0.025g的各种标准试剂品，用水溶解并定容于25mL的棕色容量瓶中，且均配制成质量浓度为1000μg/mL的标准储备液；

(A3)，将配置的各种标准储备液，在4℃下保存；

((A4)，取各种标准储备液，用水混合稀释，制得所需浓度的标准工作液，乙腈标准工作液的质量浓度为850μg/mL，乙酸铵标准工作液的质量浓度为为550μg/mL；

(A5)，将标准工作液密封，并于在4℃下保存，以供使用；

步骤(B)，干果样品预处理

(B1)，将干果样品粉碎，混合均匀后称取5.0g样品，加入到20mL的乙腈标准工作液；

(B2)，通过超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，得到清液；

步骤(C)，固相萃取处理

(C1)，取离心过的清液5mL加入活化过的免疫亲和柱，即依次通过1％吐温-20的1％吐温-20的PBS 4mL和PBS 3mL淋洗，用10mL的试管盛接淋洗液；

(C2)，将盛接淋洗液的试管用氮吹仪吹干，用1mL的乙腈标准工作液溶解定容，过膜处理后得到测定溶液，进行超高效液相色谱测定；

步骤(D)，配置超高效液相色谱仪的色谱条件

色谱柱为symmtery shield RP18柱250×4.6mm，5μm；柱温为30℃；检测波长为500nm；流动相为1mL的乙腈标准工作液和20mmoL乙酸铵标准工作液；流速为1.0mL/min；检测器为紫外检测器；进样体积为10μL；

步骤(E)，通过超高效液相色谱对测定溶液内11种酸性染料进行色谱分析，得到干果内11种酸性染料的检出量，所述11种酸性染料，包括酸性橙10、酸性红1、酸性红14、媒介红3、酸性黑1、橙黄2、酸性黄73、酸性蓝62、酸性黄116、酸性黑24、酸性棕282。

前述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，(A2)，分别称取0.025g的各种标准试剂品，称重精确度为0.0001g。

前述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，所述20mmoL乙酸铵标准工作液的pH＝4.5。

前述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，(B2)，通过超声波清洗器提取20min，并通过高速离心机8000r/min，离心5min，得到清液。

本发明的有益效果是：本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，能够通过超高效液相色谱法测定干果中的11种禁用酸性染料，具有处理简单，重复性好等特点，采用超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，提取时间短，提取效率高，方法简便、快速，适合各类干果中11种禁用酸性染料的同时测定，具有良好的应用方法。

附图说明

图1是本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法的流程图；

图2是本发明的11种酸性染料的色谱分离图。

具体实施方式

下面将结合说明书附图，对本发明做进一步说明。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，如图1所示，包括以下步骤，

步骤(A)，标准储备液和标准工作液的配制

(A1)，选择标准试剂品，包括乙腈、乙酸铵；

(A2)，分别称取0.025g的各种标准试剂品，这里的称重精度为0.0001g，用水溶解并定容于25mL的棕色容量瓶中，且均配制成质量浓度为1000μg/mL的标准储备液；

(A3)，将配置的各种标准储备液，在4℃下保存；

(A4)，取各种标准储备液，用水混合稀释，制得所需浓度的标准工作液，乙腈标准工作液的质量浓度为850μg/mL，乙酸铵标准工作液的质量浓度为为550μg/mL；

(A5)，将标准工作液密封，并于在4℃下保存，以供使用；

步骤(B)，干果样品预处理

(B2)，通过超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，得到清液，优选的超声波清洗器提取20min，并通过高速离心机8000r/min，离心5min，得到清液；

步骤(C)，固相萃取处理

步骤(D)，配置超高效液相色谱仪的色谱条件

根据本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，介绍一具体实施例，

将葡萄干、枸杞两类样品粉碎，混合均匀后称取5.0g样品，加入到20mL的乙腈标准工作液；

超声波清洗器提取20min，并通过高速离心机8000r/min，离心5min，得到清液；

本发明采用RP18柱symmtery shield 250×4.6mm，5μm色谱柱可获得更高的分离度、样品通量和灵敏度，分别考察了不同色谱柱对11种酸性染料的分离效果，C8(直链烷烃)，HILIC(硅胶基质)、HSST3(三键C18烷基键合)，做对比结果表明symmtery shield RP18柱分离效果最好，因此选择该色谱柱进行分析。

流动相的选择，分别选用超纯水，甲醇和乙腈等不同的流动相，试验表明，以乙腈增加20mmoL乙酸铵作为流动相时分离度和色谱峰达到最佳效果。进一步比较了乙腈-20mmoL乙酸铵和乙腈-10mmoL乙酸铵的结果对比，发现20mmoL乙酸铵为最佳添加剂量，通过优化流动相达到了11种酸性染料在干果中的有效分离，分离色谱图见图2，因此，流动相为1mL的乙腈标准工作液和20mmoL乙酸铵标准工作液。

依据本发明的方法，对市面销售的4种葡萄干和1种枸杞中的酸性染料进行测定，分别检出了葡萄干中酸性红1、酸性红14、酸性黄73和酸性黄116的最高检出量为0.11％、0.15％、0.17％和0.09％，枸杞中的酸性红1的最高检出量为0.12％，其他均未检出，实验结果表明，本发明的超高效液相色谱法测定干果中的11种禁用酸性染料，具有前处理简单，重复性好等特点，采用超声提取时间短，提取效率高，方法简便、快速，适合干果中11种禁用酸性染料的检测。

下面验证一下，本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法的可靠性，

将0.05，0.1，0.2μg/mL的酸性橙10、酸性红1、酸性红14、媒介红3、酸性黑1、橙黄2、酸性黄73、酸性蓝62、酸性黄116、酸性黑24、酸性棕282的混合标准溶液添加到葡萄干和枸杞两种空白样品中，按试验方法测定，平行测定6次，结果见表1。结果表明，平均回收率85.2％～102.8％，相对标准偏差(RSD)为0.36％～4.89％，说明本发明测定是准确可靠的。

表1平行测定6次

综上所述，本发明的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，能够通过超高效液相色谱法测定干果中的11种禁用酸性染料，具有处理简单，重复性好等特点，采用超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，提取时间短，提取效率高，方法简便、快速，适合各类干果中11种禁用酸性染料的同时测定，具有良好的应用方法。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims

1.基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：包括以下步骤，

步骤（A），标准储备液和标准工作液的配制

（A1），选择标准试剂品，包括乙腈、乙酸铵；

（A2），分别称取0.025 g的各种标准试剂品，用水溶解并定容于25 mL的棕色容量瓶中，且均配制成质量浓度为1000 μg/mL的标准储备液；

（A3），将配置的各种标准储备液，在4 ℃下保存；

（A4），取各种标准储备液，用水混合稀释，制得所需浓度的标准工作液，乙腈标准工作液的质量浓度为850μg/mL，乙酸铵标准工作液的质量浓度为为550μg/mL；

（A5），将标准工作液密封，并于在4 ℃下保存，以供使用；

步骤（B），干果样品预处理

（B1），将干果样品粉碎，混合均匀后称取5.0 g样品，加入到20 mL的乙腈标准工作液；

（B2），通过超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，得到清液；

步骤（C），固相萃取处理

（C1），取离心过的清液5 mL加入活化过的免疫亲和柱，即依次通过1%吐温-20的1%吐温-20的PBS 4 mL和PBS 3 mL淋洗，用10 mL的试管盛接淋洗液；

（C2），将盛接淋洗液的试管用氮吹仪吹干，用1 mL的乙腈标准工作液溶解定容，过膜处理后得到测定溶液，进行超高效液相色谱测定；

步骤（D），配置超高效液相色谱仪的色谱条件

色谱柱为symmtery shield RP18柱250×4.6 mm，5 μm；柱温为30 ℃；检测波长为500nm；流动相为1 mL的乙腈标准工作液和20 mmoL乙酸铵标准工作液；流速为1.0 mL/min；检测器为紫外检测器；进样体积为10 μL；

步骤（E），通过超高效液相色谱对测定溶液内11种酸性染料进行色谱分析，得到干果内11种酸性染料的检出量，所述11种酸性染料，包括酸性橙10、酸性红1、酸性红14、媒介红3、酸性黑1、橙黄2、酸性黄73、酸性蓝62、酸性黄116、酸性黑24、酸性棕282。

2.根据权利要求1所述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：（A2），分别称取0.025 g的各种标准试剂品，称重精确度为0.0001 g。

3.根据权利要求1所述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：所述20 mmoL乙酸铵标准工作液的pH=4.5。

4.根据权利要求1所述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：（B2），通过超声波清洗器提取20 min，并通过高速离心机8000 r/min，离心5min，得到清液。