CN103604759A - 果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒及其使用方法。本发明要解决的技术问题是提供一种快速检测果汁饮料中合成色素的检测方法。本发明的技术方案是果汁饮料中合成色素的检测试剂盒，包括非极性有机溶剂。本发明还提供了所述试剂盒的使用方法。本发明的试剂盒操作简便、费用低廉、结果可靠、能够现场操作且适合大量样本的快速筛查，用于检测果汁饮料中是否含有合成色素。

Description

果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒及其使用方法

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒及其使用方法。

背景技术

果汁饮料是以水果为原料经过物理方法如压榨、离心、萃取等得到的汁液产品。常见的果汁饮料有橙汁、橘汁、苹果汁、芒果汁、梨汁、西瓜汁、葡萄汁、椰子汁、番茄汁、柠檬汁等。各种果汁饮料因饮用方便，富含维生素等营养素，深受消费者喜爱。

天然果汁大多具有鲜艳的颜色，给人以好的感官感受，并由此引发消费者的食用欲望。天然的颜色也是一种果汁饮料具有良好品质的重要标志之一。

天然果汁具有好的品质，但同时也具有较高的价格。为了降低果汁生产制作成本，获取更多利益，一些果汁生产加工者在生产制作果汁时掺杂使假，既损害消了费者的权益，也扰乱了正常的市场秩序。目前果汁掺假常见的方式主要有两种，一种是完全配制型，即以甜味剂、糖类、色素和水等调配而成；一种是稀释掺假型，即稀稀果汁中掺入其它廉价果汁或糖类、有机酸类等。不管是哪种掺假类型，果汁饮料中掺入合成色素已成为果汁掺假的常见手段。因此，检测果汁饮料中是否含有合成色素通常是识别果汁掺假的重要手段之一。

合成色素的种类较多，食品加工制作中最常用的合成色素为食用合成着色剂，主要是一类具有水溶性的合成着色剂，常见的有柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红、苋菜红、亮蓝、靛蓝、酸性红、新红、喹啉黄等，其中果汁饮料中常见的合成色素有柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红、苋菜红和亮蓝等，主要为一些水溶性合成色素。

目前，对果汁饮料中合成色素的检测已有较为成熟的检测方法，如国家标准《食品中合成着色剂的测定》（GB/T5009.35-2003）中规定了食品中合成着色剂的检测方法，该方法采用了高效液相色谱（HPLC）法、薄层色谱法和极谱法。目前各级食品检验机构对食品中常见合成色素的检测一般采用HPLC法，对一些非食用合成色素除了采用HPLC法外，还采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）法进行检测，采用HPLC或LC-MS法除了可对样品中的色素进行准确定性定量分析外，还可对合成色素进行高通量分析。但HPLC或LC-MS法需要专门的仪器设备及专业检测人员操作才能获得分析结果，而且检测成本高，所需时间长，不能满足基层食品监管机构和广大消费者对开展快速及低成本检测的需求。

目前，有关食品中合成色素的快速检测方法有较多报道，常见的有酶联免疫吸附法（ELISA）、红外光谱法、纸色谱法、薄层色素、微柱法、极谱法、快速检测仪法等，但这些方法有的仍然需要借助仪器设备如红外光谱法、极谱法及快速检测仪法，有的操作仍然较为繁琐，如ELISA法、微柱法、薄层色谱法，有的筛查效果需要进一步确认。对于果汁饮料中合成色素的快速检测，有学者报道了一种试剂盒法快速检测果汁饮料中合成色素的方法，该方法利用不同类型的着色剂在不同pH环境、不同极性溶剂中与纤维着色一脱色能力强弱差异的原理,实现样品中合成色素的快速检测，但未见该方法技术细节的报道。

到目前为止，尚未见非常简便的对果汁饮料中合成色素进行快速筛查的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种快速检测果汁饮料中合成色素的方法。

本发明的技术方案是果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒，包括非极性有机溶剂。

优选的，所述的非极性有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷或甲基叔丁基醚中的至少一种。

进一步的，所述试剂盒还含有透明离心管或试管，吸管。

本发明还提供了上述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

a、吸取0.5～3mL的果汁饮料置于透明离心管或试管中；

b、向离心管或试管中加入样品体积0.6～2.0倍的非极性有机溶剂，加盖后充分混匀；

c、将样品管静置，待管中液体分层；

d、肉眼观察有机相和水相的颜色变化，若水相呈现肉眼可见的颜色，提示样品中含有合成色素。

进一步的，上述方法还包括步骤e，即通过本发明试剂盒的初步检测，对步骤d筛查出含有合成色素的样品，采用HPLC或LC-MS进行定量分析。具体的操作步骤可参照食品中合成着色剂标准检测方法或自建方法进行。

本发明中步骤c中可借助离心机加速液体分层。

本发明的有益效果：本发明中的试剂盒可对果汁饮料中的合成色素进行快速筛查，初步判断样品中是否含有合成色素。该筛查方法操作简单，准确度高，检测成本低，能在短时间内筛查大批量样品。对于可疑的含合成色素的样品，进一步采用HPLC或LC-MS分析确认，大大提高仪器分析的针对性。该试剂盒的应用，将在果汁饮料中合成色素的检测中发挥重要作用。

具体实施方式

本发明的技术方案是果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒，包括非极性有机溶剂。

优选的，所述的非极性有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷或甲基叔丁基醚中的至少一种。

进一步的，所述试剂盒还含有透明离心管或试管，吸管。

本发明还提供了上述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

a、吸取0.5～3mL的果汁饮料置于透明离心管或试管中；

b、向离心管或试管中加入样品体积0.6～2.0倍的非极性有机溶剂，加盖后充分混匀；

c、将样品管静置，待管中液体分层；

d、肉眼观察有机相和水相的颜色变化，若水相呈现肉眼可见的颜色，提示样品中含有合成色素。

进一步的，上述方法还包括步骤e，即通过本发明试剂盒的初步检测，对步骤d筛查出含有合成色素的样品，采用HPLC或LC-MS进行定量分析。具体的操作步骤可参照食品中合成着色剂标准检测方法或自建方法进行。

本发明中步骤c中可借助离心机加速液体分层。

本发明的检测原理为：

果汁饮料中的天然色素与水溶性合成色素在水溶液和非极性有机溶剂中的分配系数不同，向果汁饮料中加入非极性有机溶剂，充分混匀后，静置分层，由于果汁饮料中的天然色素大多为脂溶性，转移到有机相中，而水溶性合成色素停留在水相中。通过肉眼观察有机层和水层中色素的分布，初步判断样品中是否含有合成色素。

实施例1试剂盒的组成

试剂盒由以下部分组成，其制备方法如下：

1.透明带盖（或塞）离心管（或试管）

选择带盖（或塞）的透明离心管（或试管），可为玻璃或塑料材质，体积1～10mL。

2.带吸头的吸管

吸管为带吸头的玻璃或塑料吸管，可有刻度或无刻度。

3.试剂A（即非极性有机试剂）

试剂A可为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷或甲基叔丁基醚中的任意一种，或者其任意比例的混合溶液等，将其置于密闭的塑料或玻璃瓶中。

实施例2果汁饮料中合成色素快速筛查试剂盒的组建

组建苏丹染料快速筛查试剂盒，使其包含下述组分：

（1）透明带盖（或塞）离心管（或试管）

（2）带吸头的吸管

（3）试剂A

实施例3果汁饮料中合成色素的快速筛查

1.取样操作

（1）吸取果汁饮料置于内径为1cm的的塑料离心管中，使其液面高度约为1cm；

（2）向离心管中加入与样品等体积的非极性有机试剂（例如乙酸乙酯），加盖后手动振摇1～2min，充分混匀；

（3）将样品管静置，待管中液体分层后观察结果。

2.筛查结果分析

肉眼观察有机相和水相的颜色变化，若水相呈现肉眼可见的颜色，提示样品中含有合成色素；

3.筛查结果的确认分析

检测结果的确认分析：对筛查出含有合成色素的样品，采用HPLC法分析确认。操作方法如下：

样品处理方法：取5mL果汁饮料于离心管中，加入等体积的无水乙醇，充分混匀，以3000rpm离心5min,取上清用0.45μm微孔滤膜过滤后供HPLC分析。

推荐的HPLC分析条件：

（1）仪器条件

VenusilMPC18柱（4.6×250mm，5μm）；柱温：30℃；流动相：A为甲醇乙腈（1∶1），B为0.02mol/L乙酸铵溶液；流速：1.0mL/min；梯度洗脱程序：0～12.0min，5％A；12.0～30.0min，5％～35％A；30.0～35.0min，35％～98％A；35.0～35.1min，98％～5％A；35.1～55min；5％A。检测器：二极管阵列检测器，扫描范围：200～800nm；进样量：10μL。选择4种波长同时检测，4种波长分别为254nm、400nm、500nm和600nm。

（2）标准曲线

将18种色素配制成质量浓度均为100mg/L的混合标准储备液（选择的合成色素对照品包括柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、罗丹明B、喹啉黄、皂黄、碱性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、诱惑红、偶氮玉红、赤藓红、酸性橙Ⅱ、碱性橙21、碱性橙22、亮蓝、专利蓝），储存于4℃冰箱。将混合标准储备液用20%甲醇依次稀释成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg/L的标准系列溶液（现用现配），绘制标准曲线。

（3）定性及定量分析

依据保留时间及对照品光谱图对待检目标化合物定性，外标法定量。

实施例4样品筛查结果的重复性

分别对含合成色素和不含合成色素的果汁样品按实施例3所述方法进行多次重复分析，用乙酸乙酯为试剂，观察结果见表1。由表1可见，同一样品多次重复分析结果一致，重复性好。

表1对含合成色素和不含合成色素的果汁饮料的多次重复筛查结果

注：表1中“-”表示未检出合成色素；“+”表示检出合成色素。

实施例5采用不同试剂的筛查试验

对实施例4中所涉及的样品，分别采用乙酸乙酯、乙酸丙酯、丁酸乙酯、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯/环己烷（1︰1，v/v）作为试剂，按实施例3所述方法进行筛查分析，筛查结果见表2。由表2可见，采用上述9种试剂，获得的结果一致。

表2采用不同试剂A对含合成色素和不含合成色素的果汁饮料的筛查结果

注：表2中“-”表示未检出合成色素；“+”表示检出合成色素。

实施例6试剂盒检测合成色素的灵敏度

向不同天然果汁饮料中加入不同浓度合成色素（以柠檬黄、胭脂红、苋菜红为代表），按实施例3中所述的筛查方法对样品进行筛查，以乙酸乙酯为试剂，结果见表3。由表3可见，该试剂盒对果汁饮料中合成色素筛查的灵敏度可达2mg/kg。

表3试剂盒对样品中合成色素筛查的灵敏度分析结果

注：表3中“-”代表未检出合成色素；“+”代表检出合成色素。

实施例7对实际样品进行筛查的准确性

采用实施例3中的操作步骤，用试剂盒对从农贸市场、超市、冷饮店中购得的35个果汁饮料样品进行筛查，分别以乙酸乙酯和甲基叔丁基醚为试剂，同时采用HPLC法对样品进行检测，结果见表4。由表4可见，35个样品中，采用本发明筛查出合成色素阳性样品21个，合成色素阴性样品14个，采用HPLC法检出合成色素样品18个（其中4个样品为定性检测，未做定量分析），有3个样品未经HPLC分析，但样品标签标识含合成色素。所有经本发明筛查出含合成色素的样品，经HPLC法均检出合成色素，这些色素包括柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红等，其浓度最高为62.7mg/kg（合并计），最低为2.13mg/kg（合并计）；而采用HPLC法未检出合成色素的样品，采用本发明均未筛查出合成色素。

表4对35个果汁饮料样品采用本试剂盒筛查和HPLC法检测结果的比较

注：表4中“-”代表未检出合成色素；*：以乙酸乙酯为试剂；**：以甲基叔丁基醚为试剂。

Claims (5)

1.果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒，其特征在于：包括非极性有机溶剂。

2.如权利要求1所述的果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒，其特征在于：所述的非极性有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷或甲基叔丁基醚中的至少一种。

3.如权利要求1或2所述果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有透明离心管或试管，吸管。

4.果汁饮料中合成色素的快速筛查试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、吸取0.5～3mL的果汁饮料置于透明离心管或试管中；

b、向离心管或试管中加入样品体积0.6～2.0倍的非极性有机溶剂，加盖后充分混匀；

c、将样品管静置，待管中水相和有机相液体分层；

d、肉眼观察有机相和水相的颜色变化，若水相呈现肉眼可见的颜色，说明样品中含有合成色素。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：还包括步骤e、对步骤d中筛查出含有合成色素的样品，采用HPLC或LC-MS进行定量分析。