CN107064401B - 一种快速同时检测饮料中非法添加十种色素的方法 - Google Patents

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Abstract

一种快速同时检测饮料中非法添加十种色素的方法。本发明涉及分析检测领域，具体是采用薄层色谱与表面增强拉曼光谱联用法，通过大量、反复的实验，摸索出了可快速同时将饮料中十种非法添加色素分离的色谱条件以及表面增强拉曼光谱的检测条件，使得本发明提供的薄层色谱与表面增强拉曼联用的条件适用于饮料中非法添加的检测，并适用于这十种成分单个掺伪或多个同时非法添加的情况，避免了现有技术同时检测多个非法添加成分时，需要分别对各个成分进行条件摸索的麻烦，且该方法操作简单，适用于现场直接检测，同时，本发明提供的分离及检测条件具有简便快捷、灵敏度高、专属性强的优点。

Description

一种快速同时检测饮料中非法添加十种色素的方法
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，具体地说，是一种简便、快速、同时检测饮料中非法添加的十种色素的方法。
背景技术
食品掺假问题屡有发生，目前食品掺假问题是仅次于微生物污染的第二大食品问题。目前食品市场使用的调色剂多是人工合成色素，因其具有价格低廉、着色力强、稳定性好等特点，常被替代天然色素用于食品调色。在饮料加工中，合成色素的使用十分普遍，违法使用非食用色素的现象也是屡见不鲜。一些不法商贩为了牟取暴利、降低成本，私自添加人工合成色素。大量的研究报告指出，几乎所有的合成色素都不能向人体提供营养物质，某些合成色素甚至会危害人体健康，导致生育力下降、畸胎、致癌等。
针对上述饮料中人工色素添加的现象，目前常用检测方法主要有：(1)高效液相色谱法(HPLC)及其相应联用技术、(2)高效毛细管电泳法(HPEC)、(3)分光光度法等。综合比较这些方法，HPLC法精密准确，但前处理过程复杂，分析周期长，检测成本较高，难以实现现场普及；HPEC法简便、快速、高效、试剂消耗少，但重现性差，所建方法难以在实际应用中普及；分光光度法仪器简单，费用低，易于推广，但多种色素共存时难以同时检测，而且数据处理方法十分复杂，业内接受程度低。
纵观上述传统方法，并结合现场快检的实际需求，用于饮料中人工合成色素非法添加快速检测的方法应当具备专属性强、灵敏度高、简便、快速、能同时检测多种非法添加色素等优点。近年来，表面增强拉曼光谱法(SERS)因其快速、灵敏等优势已在分析检测领域得到越来越多的应用，邵勇等采用SERS法实现了饮料中碱性嫩黄O的检测(邵勇，陈勇，郑艳，齐小花，邹明强，张孝芳，杨玲辉.表面增强拉曼散射法快速检测饮料中碱性嫩黄O*.食品与发酵工业，2015.41(10)：160-176)。然而由于该技术只具有特征检测功能，对饮料中多种色素的同时检测存在较大难度。薄层色谱-表面增强拉曼光谱法(TLC-SERS)将TLC法与SERS法联用，先通过TLC实现饮料复杂体系的简单分离，再利用SERS实现待检成分的定性鉴别，两种方法互相补充，经济、快速、简便、灵敏度高、专属性强，具备了复杂体系快速分析的良好潜质。
目前尚无利用TLC同时分离饮料中常见非法添加的多种色素的检测方法，更没有将TLC法与SERS法联用检测色素的方法。利用此法进行饮料中非法添加色素的检测时，受薄层色谱展开条件的限制，一般仅能同时对饮料中的少数几种色素进行分离，当添加色素的种类未知或种类较多时，一般的薄层色谱条件无法将其很好地分离开，也就无法对其进行进一步的SERS检测，导致色素漏检、误检的情况发生，在某种程度上限制了该技术在饮料非法添加色素检测领域中的推广。
发明内容
本发明的目的在于解决上述问题，提供一种可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，用于饮料非法添加的分析及现场检测。
本发明的第一方面，提供一种可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，包括以下步骤：
A、制备十种色素的标准品溶液、待检饮料样品溶液、以及纳米增强基底溶液，所述的纳米增强基底溶液包括有机相银溶胶和水相银溶胶；
B、将标准品溶液和待检饮料样品溶液分别点于薄层板上，以展开剂进行展开，展开剂中乙酸乙酯：正丁醇：乙醇：氨水：水的体积比为3±0.5：3±0.5：2±0.5：2.5：1，展开时间在30-35min，展开后，取出挥干，放置于日光灯或紫外灯(254nm/365nm)下检视，标记样品色谱条带中与对照标准品溶液Rf值相同的位置，滴加银溶胶5μL；
C、用便携式拉曼光谱仪对滴加银溶胶的位置直接进行检测，积分时间5～15s(优选10s)，激光功率为100～300mW(优选100mW)，将所得图谱与对照标准品溶液的SERS谱进行对比分析，得出结果。
若待检饮料样品中与某种色素对应斑点处的表面增强拉曼光谱与对照标准品的表面增强拉曼光谱的主要特征峰一致，初步可以判定该待检饮料样品中含有此种色素。
步骤A中所述的标准品溶液的制备：取酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明对照品适量，加水-乙醇(1:1)溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用；取日落黄、柠檬黄、亮蓝对照品适量，加水溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用。
步骤A中所述的待检饮料样品的前处理：称取饮料样品400mL置于500mL的烧杯中，对碳酸饮料加热超声除去二氧化碳。加入0.2g/mL的柠檬酸调节PH至6，加热至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分搅匀，以G3垂融玻璃漏斗抽滤，以60℃的pH为4的去离子水洗涤三次(100mL/每次)，然后再用甲醇-甲酸(3:2)洗涤三次(100mL/每次)再用水洗涤三次。用无水乙醇-氨水-水(7:2:1)溶解吸收3-5次(100mL/每次)。收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干过程中每隔30min取样一次，直至蒸干，将获取的浓缩液进行薄层展开，确定出适宜检测的最佳浓度。
步骤A中所述的有机相银溶胶的制备：精密称取8.5mg PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、17mg的硝酸银，溶于5mL水中，得质量比为2:1的AgNO3/PVP混合溶液。量取50mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)至250mL的三颈瓶中，加热至微沸腾。迅速加入上述的AgNO3/PVP溶液并持续沸腾一段时间，自然冷却至室温后置于棕色瓶中避光低温保存。
步骤A中所述的水相银溶胶的制备：称取36mg硝酸银溶于5mL去离子水中，称取100mg二水合柠檬酸钠溶于10mL去离子水。将5mL硝酸银溶液置于三颈瓶中加水190mL加热至微沸后加入4mL柠檬酸钠溶液，继续加热50-60min即可。
优选的，步骤B中所述的薄层板选取的是默克薄层硅胶铝板。
优选的，步骤B中所述的展开剂中乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水的体积比为3:3:2:2.5:1，饱和时间为30min，展开时间为33min，日光灯或紫外灯(254nm/365nm)。
采用便携式拉曼光谱仪进行检测时，其积分时间和激光功率根据不同物质需有所不同，针对本发明的饮料中色素的检测，可采用的积分时间为5～15s，激光功率为100～300mW。拉曼光谱预处理方法包括谱段选取(300cm-1-1700cm-1)、基线校正(airPLS法)、平滑(Sgolay法)。
步骤C所述的便携式拉曼光谱仪的型号为BWS415-785H(美国必达泰克公司)，激发波长785nm，激光功率0～300mw。
本发明优点在于：
本发明采用薄层色谱与表面增强拉曼光谱联用法，通过大量、反复的实验，摸索出了可快速同时将饮料中十种非法添加色素分离的色谱条件以及表面增强拉曼光谱的检测条件，使得本发明提供的薄层色谱与表面增强拉曼联用的条件适用于饮料中非法添加的检测，并适用于这十种成分单个掺伪或多个同时非法添加的情况，避免了现有技术同时检测多个非法添加成分时，需要分别对各个成分进行条件摸索的麻烦，且该方法操作简单，适用于现场直接检测，同时，本发明提供的分离及检测条件具有简便快捷、灵敏度高、专属性强的优点。
附图说明
图1为不同比例流动相(乙酸乙酯：正丁醇：乙醇：氨水：水)的薄层色谱图，其中A为4:3:1:1:1，B为3:3:3:2:2，C为1:3:3:1:1，D为1:4:3:1:1，E为1:2:3:1:1，F为0.5:3:3:1:1，G为3:3:2:2.5:1，以上均在紫外灯254nm下检视结果，H为3:3:2:2.5:1在日光灯下检视结果。从左到右依次为：酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明、亮蓝、日落黄、柠檬黄)。
图2为模拟阳性样品中各色谱斑点及相应对照品的SERS检测结果图，其中1为日落黄标准品，2为柠檬黄标准品，3为胭脂红标准品，5-a、5-b、5-c分别为模拟阳性样品中对应斑点。
图3为模拟阳性饮料样品的薄层色谱图，其中1为日落黄标准品，2为柠檬黄标准品，3为胭脂红标准品，4为阴性对照，5为模拟阳性饮料样品。
图4为模拟阳性样品在的薄层色谱图(左边)及相应SERS检测结果图(右)，其中1为日落黄标准品，2为柠檬黄标准品，3为胭脂红标准品，4为阴性对照，5为模拟阳性饮料样品。
图5为最优流动相条件下模拟阳性样品在紫外灯(254nm)下的薄层色谱图。
图6为模拟样品(1)与真实样品(2)中各斑点SERS检测结果图。
图7不同比例展开剂下的TLC结果：(A)4:3:1:1:1；(B)3:3:3:2:2；(C)1:3:3:1:1；(D)1:4:3:1:1；(E)1:2:3:1:1；(F)0.5:3:3:1:1；(G)3:3:2:2.5:1，以上均在日光灯下检视；(H)3:3:2:2.5:1紫外灯254nm下检视。
图8模拟阳性样品中十种色素的SERS图谱。
图9乐虎饮料的TLC(A)及SERS(B)结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
实验方法：
1.溶液的制备
标准品溶液的制备：取酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明对照品适量，加水-乙醇(1：1)溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用；取日落黄、柠檬黄、亮蓝对照品适量，加水溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用。
模拟阳性样品溶液制备：取各种饮料溶液样品(不含色素添加)适量，精密量取适量易添加色素标准品加入至饮料样品中，作为模拟阳性样品溶液备用。
纳米银胶溶液的制备
有机相银溶胶的制备：精密称取8.5mgPVP(聚乙烯吡咯烷酮)、17mg的硝酸银，溶于5mL水中，得质量比为2:1的AgNO3/PVP混合溶液。量取50mLDMF(N,N-二甲基甲酰胺)至250mL的三颈瓶中，加热至微沸腾。迅速加入上述的AgNO3/PVP溶液并持续沸腾一段时间，自然冷却至室温后置于棕色瓶中避光低温保存。
水相银溶胶的制备：称取36mg硝酸银溶于5mL去离子水中，称取100mg二水合柠檬酸钠溶于10mL去离子水。将5mL硝酸银溶液置于三颈瓶中加水190mL加热至微沸后加入4mL柠檬酸钠溶液，继续加热50-60min即可。
单个非法添加成分标准品溶液的制备：精密称量对照品色素溶于50％乙醇或水中，得到浓度分别为1mg/mL的十种色素的标准品溶液。
模拟阳性样品溶液的制备：将十种掺伪成分的标准品混合后溶解于不含色素的饮料的基质溶液中。
真实待检饮料样品的制备(前处理)：称取饮料样品400mL置于500mL的烧杯中，对碳酸饮料加热超声除去二氧化碳。加入0.2g/mL的柠檬酸调节PH至6，加热至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分搅匀，以G3垂融玻璃漏斗抽滤，以60℃的pH为4的去离子水洗涤三次(100mL/每次)，然后再用甲醇-甲酸(3:2)洗涤三次(100mL/每次)再用水洗涤三次。用无水乙醇-氨水-水(7：2：1)溶解吸收3-5次(100mL/每次)。收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干过程中每隔30min取样一次，直至蒸干，将获取的浓缩液进行薄层展开，确定出适宜检测的最佳浓度的真实样品。
2.确定十种非法添加成分的薄层板展开条件
利用色素标准品溶液对十种色素的薄层展开条件进行详细的摸索，本实验对薄层展开的三个体系进行优化和各个体系的各种展开比例也进行了优化。对二氯甲烷-甲醇-氨水体系和正丁醇-乙醇-氨水体系的各个展开比例进行薄层考察。但在这两种展开体系的各个比例下的分离效果始终不甚理想。而对乙酸乙醇-正丁醇-乙醇-氨水-水这个体系进行探究时发现经过对不同的比例进行优化之后十种色素完全分离，各个比例的展开效果如图1所示：
3.确定模拟阳性样品溶液中十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱图谱
将纳米银胶溶液滴加于上述薄层板的斑点处，依次利用便携式拉曼光谱仪对各个斑点进行检测，激发波长785nm，激光功率300mW，得到模拟阳性样品中十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱。
4.模拟阳性饮料样品中非法添加成分的确定
将模拟阳性样品溶液以及优化出的真实饮料样品溶液分别滴加于薄层板上，对薄层板上模拟阳性样品中的非法添加成分的标准品以及饮料中与标准品比移值相同的点进行定位，定位位置记为待检位点，并采集真实饮料样品的表面增强拉曼光谱图，和标准品的表面增强拉曼光谱进行对比后，确定饮料中的非法添加成分，结果表明十种非法添加成分别为：①胭脂红；②诱惑红；③酸性红；④赤藓红；⑤新红；⑥罗丹明；⑦苋菜红；⑧日落黄；⑨柠檬黄；⑩亮蓝。
将模拟阳性样品溶液中十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱图谱和十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱的图谱库进行比对的步骤对于建立十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱图谱库，是将十种非法添加成分的标准品溶液分别点于薄层板上，得到各自的斑点，更具优化出的最佳采集条件采集所述斑点处的拉曼光谱，分别得到十种标准品的表面增强拉曼光谱，建立十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱的图谱库。将模拟阳性样品中十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱和十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱图谱库进行比对，确定模拟阳性样品溶液中十种非法添加成分的表面增强拉曼光谱图谱。
实验中薄层板选取的是默克薄层硅胶铝板；展开剂中乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)，饱和时间为30min，展开时间为30-35min，紫外灯波长为365nm。
便携式拉曼光谱仪检测时积分时间和激光强度为不同物质不同。拉曼光谱预处理方法包括谱段选取(300cm-1-1700cm-1)、基线校正(airPLS法)、平滑(Sgolay法)。
所采用的便携式拉曼光谱仪的型号为BWS415-785H(美国必达泰克公司)，激发波长785nm。
假设饮料非法添加中含有日落黄、胭脂红、柠檬黄，具体解释快速同时饮料中非法添加色素的方法，步骤如下：
步骤一：配制基质溶液、对照品溶液(日落黄、胭脂红、柠檬黄的标准品溶液)及一般黄色饮料的模拟阳性样品溶液，按照上述方法进行制备；
步骤二，日落黄、胭脂红、柠檬黄标准品表面增强拉曼光谱图谱的确定。将1mg/mL的日落黄、胭脂红、柠檬黄标准品溶液点于薄层板上，得到斑点，再将5uL纳米银胶溶液滴加于斑点上，利用便携式拉曼光谱仪对薄层板上的斑点进行检测，日落黄、胭脂红、柠檬黄的激光功率是300mW，积分时间10s，得到该对照品的表面增强拉曼光谱，具体如图2所示。
步骤三：确定模拟阳性样品溶液的薄层板展开条件
将基质溶液、对照品溶液(日落黄、胭脂红、柠檬黄标准品溶液)及模拟阳性样品溶液，分别点于默克薄层硅胶铝板上，根据展开剂：乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)(体积比)进行展开，展开后，取出挥干，放置于紫外灯下检视定位，具体如图3所示。由图可知，基质溶液并未在薄层板上出现斑点，说明该饮料中的成分不会对非法添加的色素检测产生影响。同时，在最优的展开剂下，模拟阳性样品中的十种掺非法添加色素可以完全分开，且模拟阳性样品溶液中的日落黄、胭脂红、柠檬黄斑点恰好和日落黄、胭脂红、柠檬黄标准品的斑点一一对应。
步骤四：表面增强拉曼光谱比对
用移液枪分别吸取纳米银胶溶液5μL滴加在薄层板上对照品日落黄、胭脂红、柠檬黄斑点及模拟阳性样品色谱条带中与之相对应的斑点处，依次利用便携式拉曼光谱仪对各个斑点进行检测，激发波长785nm，激光功率300mw，积分时间10s，得到日落黄、胭脂红、柠檬黄对照品与模拟阳性样品中与日落黄、胭脂红、柠檬黄对应斑点处的表面增强拉曼光谱图谱，具体如图4所示。
两者图谱进行对比，可以看出模拟阳性样品中与日落黄、胭脂红、柠檬黄对应斑点处的表面增强拉曼光谱与对照品的表面增强拉曼光谱的主要特征峰一致，可以判定该方法的专属性良好。
通过大量、反复的实验，摸索出了最优的色谱条件：以乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)的混合溶液为展开剂，采用默克薄层硅胶铝板，展开时间33min，可分离饮料中非法添加的十种色素；探索出表面增强拉曼光谱的检测条件：激光功率和积分时间根据不同物质有所不同，可对饮料中的十种非法添加色素进行定性鉴别。
实验中确定了最优的色谱条件和表面增强拉曼光谱的检测条件，发明人通过实验还发现只要乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水＝3±0.5:3±0.5:2±0.5:2.5:1的范围内，展开时间在30-35min的范围内，就可以实现10种掺伪成分的分离，但分离效果不如最优色谱条件。
以检测真实样品为例，具体解释快速同时检饮料中十种非法添加色素的方法，包括以下步骤：
步骤一，制备待检样品溶液、模拟阳性样品溶液以及纳米银胶溶液，依据前述方法进行制备。
步骤二：确定薄层板展开条件
将待检样品溶液、模拟阳性样品溶液分别点于默克薄层硅胶铝板上，根据展开剂：乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)进行展开，展开后，取出挥干，放置于紫外灯下检视定位，结果如图5所示
步骤三：薄层色谱与表面增强拉曼光谱联用法的检测；
用移液枪分别吸取纳米银胶溶液5μL滴加在薄层板上模拟阳性样品溶液中胭脂红、日落黄、柠檬黄斑点处及真实饮料样品色谱条带中与胭脂红、日落黄、柠檬黄对应斑点处，依次利用便携式拉曼光谱仪对各个斑点进行检测，激光功率300mW，积分时间10s，得到模拟阳性样品溶液中色素与真实样品中与色素对应斑点处的表面增强拉曼光谱图谱，具体如图6所示。
两者图谱进行对比，可以看出真实样品中与胭脂红、日落黄、柠檬黄对应斑点处的表面增强拉曼光谱与对照品的表面增强拉曼光谱的主要特征峰一致，初步可以判定该真是饮料样品中含有胭脂红、日落黄、柠檬黄。
实施例2
一、实验方法
1.溶液的制备
标准品溶液的制备：取酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明对照品适量，加水-乙醇(1:1)溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用；取日落黄、柠檬黄、亮蓝对照品适量，加水溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用。
模拟阳性样品溶液制备：取各种饮料溶液样品(不含色素添加)适量，精密量取适量易添加色素标准品加入至饮料样品中，作为模拟阳性样品溶液备用。
真实饮料样品的制备(前处理)：称取饮料样品400mL置于500mL的烧杯中，对碳酸饮料加热超声除去二氧化碳。加入0.2g/mL的柠檬酸调节PH至6，加热至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分搅匀，以G3垂融玻璃漏斗抽滤，以60℃的pH为4的去离子水洗涤三次(100mL/每次)，然后再用甲醇-甲酸(3:2)洗涤三次(100mL/每次)再用水洗涤三次。用无水乙醇-氨水-水(7:2:1)溶解吸收3-5次(100mL/每次)。收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干过程中每隔30min取样一次，直至蒸干，将获取的浓缩液进行薄层展开，确定出适宜检测的最佳浓度的真实样品。
2.纳米增强基底的制备
有机相银溶胶的制备：精密称取8.5mg PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、17mg的硝酸银，溶于5mL水中，得质量比为2:1的AgNO3/PVP混合溶液。量取50mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)至250mL的三颈瓶中，加热至微沸腾。迅速加入上述的AgNO3/PVP溶液并持续沸腾一段时间，自然冷却至室温后置于棕色瓶中避光低温保存。
水相银溶胶的制备：称取36mg硝酸银溶于5mL去离子水中，称取100mg二水合柠檬酸钠溶于10mL去离子水。将5mL硝酸银溶液置于三颈瓶中加水190mL加热至微沸后加入4mL柠檬酸钠溶液，继续加热50-60min即可。
3.检测方法
取标准品溶液和样品溶液各1μL，点于同一硅胶板上，以适当的展开剂展开后取出，晾干，置于日光灯或紫外灯(254nm/365nm)下检视，标记样品色谱条带中与对照品Rf值相同的位置，滴加银溶胶5μL，用便携式拉曼光谱仪对滴加银胶的位置直接进行检测，积分时间10s，激光功率100mW，将所得图谱与对照品的SERS谱进行对比分析，得出结果。
4.数据预处理方法
采用Matlab 7.6软件对所得光谱进行适当预处理，如谱段选取(300-1700cm-1)、平滑(Sgolay法)、基线校正(airPLS法)和归一化(Min-MaxNormalization法)；作图软件使用Origin 8.0版。
二、实验结果
1.薄层色谱条件的优化
实验中尝试了多种不同极性的展开系统(如二氯甲烷-甲醇-氨水和正丁醇-乙醇-氨水)对十种色素的分离效果，均不理想。最终摸索出了乙酸乙醇-正丁醇-乙醇-氨水-水这一体系，并开展了一系列展开比例的优化，最终确定了3:3:2:2.5:1为最佳比例，此时，各色素Rf值分布较均匀。不同比列的展开效果如图7所示(从左到右点样顺序依次为：酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明、亮蓝、日落黄、柠檬黄)。
2.模拟阳性样品的TLC-SERS检测
采用选定的色谱条件对模拟阳性样品进行薄层展开，得到如图7G类似的Rf值结果，在各对照品相应位置滴加纳米银溶胶，并进行SERS检测，得到结果如图8。十种色素的信号均较丰富，且模拟样品中测得的图谱与相应对照品SERS谱的相似度均在0.99以上，说明所建立的色谱条件具有较好的分离效果，能排除饮料基质的影响，可用于饮料样品的检测。
3.真实饮料样品的TLC-SERS检测
采用建立的TLC-SERS方法对功能性饮料乐虎进行了检测，所得结果如下图9所示。由结果可知，乐虎饮料中含有柠檬黄和日落黄。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (5)

1.一种可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、制备十种色素的标准品溶液、待检饮料样品溶液、以及纳米增强基底溶液，所述的纳米增强基底溶液包括有机相银溶胶和水相银溶胶；所述的十种色素分别为酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明、日落黄、柠檬黄、亮蓝；
B、将标准品溶液和待检饮料样品溶液分别点于薄层板上，以展开剂进行展开，展开剂中乙酸乙酯：正丁醇：乙醇：氨水：水的体积比为3±0.5：3±0.5：2±0.5：2.5：1，展开时间在30-35min，展开后，取出挥干，放置于日光灯或紫外灯下检视，标记样品色谱条带中与对照标准品溶液Rf值相同的位置，滴加银溶胶5μL；所述的薄层板是默克薄层硅胶铝板；
C、用便携式拉曼光谱仪对滴加银溶胶的位置直接进行检测，积分时间5～15s，激光功率为100～300mW，激发波长785nm，将所得图谱与对照标准品溶液的SERS谱进行对比分析，得出结果。
2.根据权利要求1所述的可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，其特征在于，步骤A中所述的标准品溶液的制备：取酸性红、诱惑红、赤藓红、胭脂红、苋菜红、新红、罗丹明对照品适量，加体积比1:1的水-乙醇溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用；取日落黄、柠檬黄、亮蓝对照品适量，加水溶解，分别制成每1mg/mL的溶液，作为标准品溶液备用。
3.根据权利要求1所述的可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，其特征在于，步骤A中所述的待检饮料样品的前处理：称取饮料样品400mL置于500mL的烧杯中，对碳酸饮料加热超声除去二氧化碳；加入0.2g/mL的柠檬酸调节PH至6，加热至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分搅匀，以G3垂融玻璃漏斗抽滤，以60℃的pH为4的去离子水洗涤三次，100mL/每次，然后再用体积比3:2甲醇-甲酸洗涤三次，100mL/每次，再用水洗涤三次；用体积比7:2:1无水乙醇-氨水-水溶解吸收3-5次，100mL/每次；收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干过程中每隔30min取样一次，直至蒸干，将获取的浓缩液进行薄层展开，确定出适宜检测的最佳浓度。
4.根据权利要求1所述的可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，其特征在于，步骤B中所述的展开剂中乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水的体积比为3:3:2:2.5:1，饱和时间为30min，展开时间为33min。
5.根据权利要求1所述的可快速同时检测饮料非法添加十种色素的方法，其特征在于，步骤B中所述的紫外灯波长为365nm或254nm。
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