CN103954714A - 一种黄曲霉毒素的测定方法 - Google Patents
一种黄曲霉毒素的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103954714A CN103954714A CN201410001661.6A CN201410001661A CN103954714A CN 103954714 A CN103954714 A CN 103954714A CN 201410001661 A CN201410001661 A CN 201410001661A CN 103954714 A CN103954714 A CN 103954714A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- aflatoxin
- acetonitrile
- water
- standard
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种黄曲霉毒素的测定方法,其创新点在于:包括以下步骤:1)称取样品,加入乙腈-水的提取液搅拌30分钟,其中乙腈和水的体积比为84:16,然后用定性滤纸过滤;2)样品测定:色谱条件为:液相色谱柱AgilentSBC-18(25cm×4.6mm);流动相:体积百分比为85%的乙腈和15%的水;柱温:30℃,进样量:25mL;流速:1.0mL/min;取8mL提取过滤液至多功能净化柱,净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中,60℃下氮吹后,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下干燥后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,测定。本发明的检测方法操作简单,快速,结果精确可靠;污染少,安全性高,减少对操作人员和环境的污染;检测成本较低,易于推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄曲霉毒素的测定方法,属于食品安全检验技术领域。
背景技术
黄曲霉毒素(Aflatoxins,简写AF)主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物。黄曲霉毒素主要存在于土壤,动植物,各种坚果,特别是花生和核桃中。在大豆,稻谷,玉米,通心粉,调味品,牛奶,奶制品,食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。目前已分离鉴定出12种,包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。
黄曲霉毒素的分析方法主要有以薄层层析法、高效液相色谱法和酶联免疫吸附法三种。薄层层析法由于设备简单,易于普及,所以国内外仍在使用,但由于该法样品前处理繁琐,且提取和净化效果不够理想,提取液中杂质较多,因而在展开时影响斑点的荧光强度,双向展开法虽避免了杂质干扰,但增加了操作步骤和时间。目前最能被大家认可的分析方法还是液相色谱分析法,它具有自动化程度高,定量定性准确,检测种类多元的特点,一直是世界各国官方检测方法。但是,目前针对黄曲霉毒素的高效液相色谱分析法均采用免疫亲和柱来富集毒素,酶联免疫分析法提及的抗体的缺点仍然无法避免,因此研究一种新的黄曲霉毒素富集方法以摆脱抗体的缺点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单,结果可靠的黄曲霉毒素的测定方法。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:
一种黄曲霉毒素的测定方法,包括样品提取、标准溶液测定和样品测定步骤,其创新点在于:所述样品提取步骤采用乙腈-水的提取液提取,其中乙腈和水的体积比为84:16;所述标准溶液测定步骤中取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液用乙腈定容,制备标准系列溶液,处理后利用液相色谱仪进行测定;所述样品检测采用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素,具体检测步骤为:
(1)样品提取:称取样品10g(精确至0.0001g),加入乙腈-水的提取液搅拌30分钟,其中乙腈和水的体积比为84:16,然后用定性滤纸过滤;
(2)标准溶液测定:取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液10μg/mL,用乙腈定容至5mL,混匀,2~8℃保存三个月;使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液,吸取标准系列溶液各200μL,在60℃水浴下氮气吹干,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下放入干燥器中1min后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,利用液相色谱仪进行测定;
(3)样品测定:用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素
色谱条件:色谱柱:AgilentSB C-18(25cm×4.6mm);流动相:体积百分比为85%的乙腈和15%的水;柱温:30℃,进样量:25mL;流速:1.0mL/min。
取8mL提取过滤液至多功能净化柱,净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中,60℃下氮吹后,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下干燥1min后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,上液相色谱仪测定。
(4)黄曲霉毒素的含量计算:黄曲霉毒素按照G1、B1 的顺序出峰,以标准系列的峰面积对浓度分别绘制每种黄曲霉毒素的标准曲线,标准曲线的相关系数r大于0.995,试样通过与标准色谱图保留时间的比较确定每一种黄曲霉毒素的峰,根据每种黄曲霉毒素的标准曲线及试样中的峰面积计算试样中各种黄曲霉毒素含量:
其中:X——试样中每种黄曲霉毒素含量,单位为μg/kg;
A——试样按外标法在标准曲线中对应的浓度,单位为μg/mL;
V——试样提取过程中提取液的体积,单位为mL;
m——试样的取样量,单位为g;
f——浓缩倍数。
进一步的,所述步骤(1)中多功能净化柱为MycosepTM228多功能净化柱。
本发明的有益效果:本发明的检测方法操作简单,快速,结果精确可靠;污染少,安全性高,减少对操作人员和环境的污染;检测成本较低,易于推广。
附图说明
图1为本发明实施例1的样品色谱图;
图2为本发明实施例1的黄曲霉毒素B1曲线图;
图3为本发明实施例1的黄曲霉毒素G1曲线图;
图4为本发明实施例2的样品色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作详细说明。
实施例1
(1)样品提取:称取10.0346g食用植物油,加入乙腈-水的提取液搅拌30分钟,其中乙腈和水的体积比为84:16,然后用定性滤纸过滤。
(2)标准溶液测定:取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液10μg/mL,用乙腈定容至5mL,混匀,2~8℃保存三个月;使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液,吸取标准系列溶液各200μL,在60℃水浴下氮气吹干,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下放入干燥器中1min后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,利用液相色谱仪进行测定,黄曲霉毒素B1曲线图如图2,黄曲霉毒素G1曲线图如图3。
(3)样品测定:用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素
色谱条件:色谱柱:Agilent SB C-18(25cm×4.6mm);流动相:体积百分比为85%的乙腈和15%的水;柱温:30℃,进样量:25mL;流速:1.0mL/min。
取8mL提取过滤液至MycosepTM228多功能净化柱,净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中,60℃下氮吹后,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下干燥1min后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,液相色谱仪测定,测定的食用油样品色谱如图1所示。
根据标准曲线得出试样浓度为:2.22(μg/mL)
根据公式
黄曲霉毒素B1(μg/kg)= (试样中对应浓度×提取液体积×1000)/(试样质量×浓缩倍数)
=2.22×8×1000/10.0346×10
=176.98
实施例2
(1)样品提取:称取10.1679g玉米粉,加入乙腈-水的提取液搅拌30分钟,其中乙腈和水的体积比为84:16,然后用定性滤纸过滤。
(2)样品测定:用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素
色谱条件:色谱柱:Agilent SB C-18(25cm×4.6mm);流动相:体积百分比为85%的乙腈和15%的水;柱温:30℃,进样量:25mL;流速:1.0mL/min。
取8mL提取过滤液至MycosepTM228多功能净化柱,净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中,60℃下氮吹后,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下干燥1min后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,液相色谱仪测定,测定结果如图4所示。
根据标准曲线得出试样浓度为:50.95(μg/mL)
根据公式
黄曲霉毒素G1(μg/kg)= (试样中对应浓度×提取液体积×1000)/(试样质量×浓缩倍数)
=50.95×8×1000/10.1679×10
=4008.7。
Claims (6)
1.一种黄曲霉毒素的测定方法,包括样品提取、标准溶液测定和样品测定步骤,其特征在于:所述样品提取步骤采用乙腈-水的提取液提取,其中乙腈和水的体积比为84:16;所述标准溶液测定步骤中取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液用乙腈定容,制备标准系列溶液,处理后利用液相色谱仪进行测定;所述样品检测采用高效液相色谱法,利用多功能净化柱检测样品中的黄曲霉毒素。
2.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素的测定方法,其特征在于:所述样品提取步骤具体为称取样品10g,精确至0.0001g,加入乙腈-水的提取液搅拌30分钟,其中乙腈和水的体积比为84:16,然后用定性滤纸过滤。
3.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素的测定方法,其特征在于:所述标准溶液测定步骤具体为取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液10μg/mL,用乙腈定容至5mL,混匀,2~8℃保存三个月;使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液,吸取标准系列溶液各200μL,在60℃水浴下氮气吹干,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下放入干燥器中1min后以200uL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,利用液相色谱仪进行测定。
4.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素的测定方法,其特征在于:所述样品测定步骤采用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素;
色谱条件:色谱柱:Agilent SB C-18(25cm×4.6mm);流动相:体积百分比为85%的乙腈和15%的水;柱温:30℃,进样量:25μL;流速:1.0mL/min,荧光检测器:激发波长:360nm,发射波长:440nm;
取8mL提取过滤液至MycosepTM228多功能净化柱,净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中,60℃下氮吹后,加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀,30s后于40℃烘箱衍生15min,室温下放入干燥器中1min后以200μL水-乙腈溶解,混匀后全部进自动进样瓶中,利用液相色谱仪进行测定。
5.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素的测定方法,其特征在于:黄曲霉毒素的含量通过如下方法计算:黄曲霉毒素按照G1、B1 的顺序出峰,以标准系列的峰面积对浓度分别绘制每种黄曲霉毒素的标准曲线,标准曲线的相关系数r大于0.995,试样通过与标准色谱图保留时间的比较确定每一种黄曲霉毒素的峰,根据每种黄曲霉毒素的标准曲线及试样中的峰面积计算试样中各种黄曲霉毒素含量:
其中:X——试样中每种黄曲霉毒素含量,单位为μg/kg;
A——试样按外标法在标准曲线中对应的浓度,单位为μg/mL;
V——试样提取过程中提取液的体积,单位为mL;
m——试样的取样量,单位为g;
f——浓缩倍数。
6.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素的测定方法,其特征在于:所述步骤(1)中多功能净化柱为MycosepTM228多功能净化柱。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410001661.6A CN103954714B (zh) | 2014-01-03 | 2014-01-03 | 一种黄曲霉毒素的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410001661.6A CN103954714B (zh) | 2014-01-03 | 2014-01-03 | 一种黄曲霉毒素的测定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103954714A true CN103954714A (zh) | 2014-07-30 |
CN103954714B CN103954714B (zh) | 2016-03-30 |
Family
ID=51332014
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410001661.6A Active CN103954714B (zh) | 2014-01-03 | 2014-01-03 | 一种黄曲霉毒素的测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103954714B (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105067804A (zh) * | 2015-07-21 | 2015-11-18 | 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 | 检测谷物食品中黄曲霉毒素b1的方法 |
CN106562177A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-04-19 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 蒸汽爆破技术降低秸秆中呕吐毒素含量的方法及应用 |
CN106872619A (zh) * | 2017-04-24 | 2017-06-20 | 南通博泰美术图案设计有限公司 | 黄曲霉毒素的测定方法 |
CN108101971A (zh) * | 2017-12-04 | 2018-06-01 | 佛山科学技术学院 | 一种水鬼蕉叶斑病致病毒素的提取及活性测定方法 |
CN108535376A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-09-14 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种植物蛋白饮料中黄曲霉毒素的检测方法 |
CN108732260A (zh) * | 2018-02-28 | 2018-11-02 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种植物油中黄曲霉毒素b1的提取净化方法 |
CN110108811A (zh) * | 2019-05-20 | 2019-08-09 | 青岛贞正分析仪器有限公司 | 一种酿造调味料中黄曲霉毒素样品净化检测方法及其净化枪头 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4181853A (en) * | 1976-12-10 | 1980-01-01 | Varian Associates, Inc. | Liquid chromatography system with packed flow cell for improved fluorescence detection |
NL8103931A (nl) * | 1981-08-24 | 1983-03-16 | Gardner James W Ets | Werkwijze voor het analyseren van aflatoxinen in aardnoten door middel van hoge-druk-vloeistofchromatografie. |
CN102654490A (zh) * | 2011-03-02 | 2012-09-05 | 上海市食品药品检验所 | 液相色谱-串连质谱法测定五加科植物中真菌毒素含量的方法 |
CN102692469A (zh) * | 2011-03-21 | 2012-09-26 | 上海市食品药品检验所 | 液相色谱-串连质谱法测定人参中真菌毒素含量的方法 |
-
2014
- 2014-01-03 CN CN201410001661.6A patent/CN103954714B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4181853A (en) * | 1976-12-10 | 1980-01-01 | Varian Associates, Inc. | Liquid chromatography system with packed flow cell for improved fluorescence detection |
NL8103931A (nl) * | 1981-08-24 | 1983-03-16 | Gardner James W Ets | Werkwijze voor het analyseren van aflatoxinen in aardnoten door middel van hoge-druk-vloeistofchromatografie. |
CN102654490A (zh) * | 2011-03-02 | 2012-09-05 | 上海市食品药品检验所 | 液相色谱-串连质谱法测定五加科植物中真菌毒素含量的方法 |
CN102692469A (zh) * | 2011-03-21 | 2012-09-26 | 上海市食品药品检验所 | 液相色谱-串连质谱法测定人参中真菌毒素含量的方法 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
L.AFSAH-HEJRI 等: "Optimization of HPLC conditions for quantitative analysis of aflatoxins in contaminated peanut", 《FOOD CONTROL》, vol. 22, no. 34, 30 April 2011 (2011-04-30), pages 381 - 388 * |
O.G.ROCH 等: "The Development and Validation of a Solid Phase Extraction/HPLC Method for the Determination of Aflatoxins in Groundnut Meal", 《CHROMATOGRAPHI》, vol. 33, no. 56, 31 March 1992 (1992-03-31), pages 208 - 212 * |
彭志兵 等: "液液萃取-高效液相色谱法测定粮食中黄曲霉毒素的研究", 《粮食科技与经济》, vol. 38, no. 1, 28 February 2013 (2013-02-28), pages 26 - 29 * |
徐杨玉 等: "黄曲霉毒素分离提取及检测研究进展", 《广东农业科学》, no. 1, 31 December 2011 (2011-12-31), pages 42 - 46 * |
林裕: "高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素", 《中国热带医学》, vol. 6, no. 4, 30 April 2006 (2006-04-30), pages 677 - 678 * |
邱宏 等: "高效液相色谱法同时测定食品中四种黄曲霉毒素的方法探讨", 《现代预防医学》, vol. 33, no. 5, 31 May 2006 (2006-05-31), pages 790 - 791 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105067804A (zh) * | 2015-07-21 | 2015-11-18 | 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 | 检测谷物食品中黄曲霉毒素b1的方法 |
CN106562177A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-04-19 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 蒸汽爆破技术降低秸秆中呕吐毒素含量的方法及应用 |
CN106872619A (zh) * | 2017-04-24 | 2017-06-20 | 南通博泰美术图案设计有限公司 | 黄曲霉毒素的测定方法 |
CN108101971A (zh) * | 2017-12-04 | 2018-06-01 | 佛山科学技术学院 | 一种水鬼蕉叶斑病致病毒素的提取及活性测定方法 |
CN108732260A (zh) * | 2018-02-28 | 2018-11-02 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种植物油中黄曲霉毒素b1的提取净化方法 |
CN108535376A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-09-14 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种植物蛋白饮料中黄曲霉毒素的检测方法 |
CN110108811A (zh) * | 2019-05-20 | 2019-08-09 | 青岛贞正分析仪器有限公司 | 一种酿造调味料中黄曲霉毒素样品净化检测方法及其净化枪头 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103954714B (zh) | 2016-03-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103954714B (zh) | 一种黄曲霉毒素的测定方法 | |
Li et al. | Determination of patulin in apple juice by single-drop liquid-liquid-liquid microextraction coupled with liquid chromatography-mass spectrometry | |
Jafari et al. | A new method based on electrospray ionisation ion mobility spectrometry (ESI-IMS) for simultaneous determination of caffeine and theophylline | |
CN102636581A (zh) | 同时检测谷物中黄曲霉毒素b1、赭曲霉毒素a、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法 | |
CN107219313B (zh) | 一种基于分子印迹固相萃取-气/质谱联用技术的检测食用油中24种多环芳烃的方法 | |
CN103616467B (zh) | 一种用于检测肉制品中多种镇定剂残留的方法 | |
CN104749266A (zh) | 一种同时测定9种水溶性维生素的检测方法 | |
CN103472170A (zh) | 一种食用油中苯并芘的检测方法 | |
CN101865898B (zh) | 一种测定土壤中酞酸酯的方法 | |
CN107202836A (zh) | 一种茶叶鲜样中茶氨酸含量的快速分析方法 | |
CN104280503A (zh) | 同时测定烟草中黄曲霉毒素b1、b2、g1和g2的hplc-fld柱前衍生法 | |
CN102432754A (zh) | 乐果分子印迹聚合物的制备方法和使用方法 | |
CN104251893A (zh) | 一种烟用包装材料中着色剂的测定方法 | |
CN105974018B (zh) | 基于多功能净化柱-高效液相色谱法检测食品中毒黄素的方法 | |
CN106053631A (zh) | 一种全自动分散液‑液微萃取系统及其应用 | |
CN102507808B (zh) | 一种微量多氯联苯富集分离方法 | |
CN105424829A (zh) | 水体的沉积物中多种酸性药物的检测方法 | |
CN105181868B (zh) | 同时测定水基胶中13种苯系物和邻苯二甲酸酯类化合物的方法和应用 | |
CN104833736A (zh) | 一种二十五味珊瑚丸的一测多评快速定性与定量检测方法 | |
Gao et al. | Trace analysis of three antihistamines in human urine by on-line single drop liquid–liquid–liquid microextraction coupled to sweeping micellar electrokinetic chromatography and its application to pharmacokinetic study | |
CN107192784A (zh) | 一种红曲发酵液中桔霉素毒素的检测方法 | |
CN104174390A (zh) | 乙氧酰胺苯甲酯分子印迹固相萃取小柱的制备方法及应用 | |
CN106872619A (zh) | 黄曲霉毒素的测定方法 | |
CN103163264A (zh) | 一种烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法 | |
CN102680635B (zh) | 食品中多种水溶性碱性色素的快速筛选及确证方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |