CN108079010B - 具有抗癌作用的板栗多糖药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有抗癌作用的板栗多糖药物组合物及其制备方法,涉及制药领域。该药物组合物包括:板栗多糖、以及药学上可接受的载体或辅料。该药物组合物的制备方法包括:采用溶剂提取法对板栗原料进行提取,得到板栗粗提液;将板栗粗提液进行脱蛋白处理和脱色处理后,用透析袋进行透析,得到板栗透析液;再将板栗透析液用凝胶柱层析,以水为洗脱剂,收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖;以及将板栗多糖与药用辅料混合。该药物组合物以板栗多糖为主要活性成分,对癌细胞的抑制作用显著,且几乎没有副作用、抗癌作用显著。
Description
技术领域
本发明涉及制药领域,具体而言,涉及一种具有抗癌作用的药物组合物及其制备方法。
背景技术
板栗,是一种具有较高的食用及药用价值的坚果类食品。板栗是民间常用的中草药,它具有补肾强筋、养胃健脾、活血止血等功效,并且,可以治疗腰脚软弱、折伤肿痛、反胃、泄泻、凛痈等常见症状。此外,最近几年的研究表明,板栗还具多种生理功能,如:提高免疫力、抗疲劳、抗衰老、降血压和降血糖等。
世界上的栗属(Castanea Mill.)植物约有十余种,不同栗属的板栗,其所含的化学成分有很大的差异,因此其表现出不同的生理活性。鉴于此,本发明提出一种以板栗多糖为活性成分的药物组合物。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种具有抗癌作用的药物组合物,该药物组合物以板栗多糖为主要活性成分,对癌细胞的抑制作用显著,且几乎没有副作用。
本发明的第二目的在于提供一种上述药物组合物的制备方法,采用这种方法,以板栗为原料,板栗多糖的提取率高、且所含的杂质低,抗癌作用显著。
为了实现本发明的上述目的,特采用以下技术方案:
一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖、以及药学上可接受的载体或辅料。
一种上述药物组合物的制备方法,其包括:
采用溶剂提取法对板栗原料进行提取,得到板栗粗提液;将板栗粗提液进行脱蛋白处理和脱色处理后,用透析袋进行透析,得到板栗透析液;再将板栗透析液用凝胶柱层析,以水为洗脱剂,收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖;以及将板栗多糖与药用辅料混合。
与现有技术相比,本发明的有益效果例如包括:
发明人研究发现,板栗多糖对多种癌症的癌变细胞系均表现出较强的抑制活性,能够有效抑制其相关癌变细胞的增殖。因此,可将这种板栗多糖作为广谱的抗癌活性物质,用来制备治疗癌症的药物。同时,板栗多糖是以板栗为原料,经分离纯化得到的。板栗为药食同源的食物,因此该以板栗多糖为主要活性成分的药物组合物,副作用小。本发明提供的药物组合物的制备方法中,板栗多糖的提取率高、且所含的杂质低,抗癌作用显著。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1实验例1中燕山奎栗板栗多糖的红外光谱图;
图2实验例1中燕山短枝板栗多糖的红外光谱图;
图3实验例1中遵玉板栗多糖的红外光谱图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本实施方式提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖、以及药学上可接受的载体或辅料。
其中,板栗多糖是以板栗为原料经提取、纯化制得,板栗多糖的重均分子量为5×102~1×107Da。
板栗具有多个品种,例如:燕山奎栗、燕山短枝、遵玉、燕山早丰、大板红、燕王、迁西早红、迁西晚红、紫珀、大峰、辽栗十号、油榛以及黑油榛等栗属植物。本发明以上述品种的板栗为研究对象,研究了从各不同种系的板栗中制得的板栗多糖的抗癌活性。
进一步地,制备板栗多糖的原料包括为栗属植物的种仁,该栗属植物包括燕山奎栗、燕山短枝或遵玉板栗。
进一步地,板栗多糖是由五碳糖和六碳糖等单糖组成的杂多糖,其中单糖组成包括葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、核糖、鼠李糖、木糖和甘露糖中的至少一种。研究发现,从燕山奎栗中提取制得的板栗多糖,其对肝癌、胃癌和肺癌均有较好的抗癌活性,具体表现在,对肝癌的HepG2和BEL-7402细胞、以及对胃癌的BGC-823细胞均有较强的抑制作用。
从燕山短枝中提取制得的板栗多糖,其对肝癌有较好的抗癌活性,具体表现在,其能够抑制HepG2肝癌细胞增殖。
从遵玉板栗中提取制得的板栗多糖,其对肝癌、肺癌均具有较好的抗癌活性,具体表现在,其能够抑制HepG2肝癌细胞、A-549肺癌细胞增殖。
由此,从燕山奎栗、燕山短枝和遵玉板栗等栗属植物种仁中提取的板栗多糖,具有较为广谱的抗癌活性,尤其对肝癌的抗癌活性最为显著。
进一步的,该药物组合物还包括:白术内酯、槐定碱和吴茱萸碱。
其中,白术内酯为从白术中纯化得到的内酯类化合物,主要包括白术内酯I、白术内酯II和白术内酯III。白术内酯具有一定的抗癌活性,试验表明,将白术内酯与板栗多糖混合使用,白术内酯能够协同性地增强板栗多糖的抗癌活性。
槐定碱,是从豆科槐属植物苦豆子中提取的单体生物碱,其能够抑制肿瘤细胞的DNA合成,使细胞增殖阻断在G2期,将槐定碱与板栗多糖和白术内酯共同使用,槐定碱能够逆转肿瘤细胞的多药耐药性,板栗多糖和白术内酯对具有耐药性的癌细胞也具有较强的协同抗癌活性。
吴茱萸碱,是从芸香科植物吴茱萸的果实中提取的单体生物碱,现有技术中表明吴茱萸碱具有健胃、镇痛、止呕等功效。发明人研究发现,虽然吴茱萸碱单独使用时没有表现出较佳的抗癌活性,但吴茱萸碱与板栗多糖、白术内酯和槐定碱共同使用时,能够增加癌细胞对上述三种药物的敏感性,能够显著提高上述三者混合使用时的药效。
进一步的,按重量份数计,板栗多糖为20~30份、白术内酯为5~10份、槐定碱为3~7份、吴茱萸碱为1~5份。
可选的,按重量份数计,板栗多糖为22~28份、白术内酯为6~9份、槐定碱为4~7份、吴茱萸碱为1~4份。
可选的,按重量份数计,板栗多糖为24~26份、白术内酯为7~8份、槐定碱为5~6份、吴茱萸碱为2~4份。
可选的,按重量份数计,板栗多糖为25份、白术内酯为7份、槐定碱为5份、吴茱萸碱为3份。
本实施方式还提供一种上述药物组合物的制备方法,其特征在于,其包括:
步骤S1:采用溶剂提取法对板栗原料进行提取,得到板栗粗提液;将板栗粗提液进行脱蛋白处理和脱色处理后,用透析袋进行透析,得到板栗透析液;再将板栗透析液用凝胶柱层析,以水为洗脱剂,收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖;
其中,板栗多糖的提取方法包括:索氏提取法、热水提取法、酸碱提取法、加压溶剂萃取法、酶辅助提取法、微波提取法、超声提取法、超临界萃取法等。通过上述提取方法从板栗中得到板栗提取液。
较为优选的,溶剂提取法为加压溶剂萃取法,加压溶剂萃取法包括:将粉末状的板栗原料与硅藻土混合并置于萃取容器中,以水为萃取溶剂,在50~70℃、3~15MPa下萃取4~20min。
进一步的,脱色处理包括:将脱蛋白后的板栗粗提液与15~25%的H2O2混合,在40~55℃下脱色1.5~2.5h,调节板栗粗提液的pH值为6~7。
步骤S2:将板栗多糖与药用辅料混合。
进一步的,当该药物组合物还包括白术内酯、槐定碱和吴茱萸碱时,且按重量份数计,板栗多糖为20~30份、白术内酯为5~10份、槐定碱为3~7份、吴茱萸碱为1~5份。步骤S2还包括:按重量份数将板栗多糖、白术内酯、槐定碱和吴茱萸碱混合后,再与药用辅料混合。
为了使该药物组合物快速、连续并在很长一段时间里释放活性成分,本发明的药物组合物在制剂过程中可以根据公开在那些本技术领域中的常规方法制造。本发明的药物组合物的给药途径为口服、鼻吸入、或肠胃外给药。该药物组合物的制剂可以是粉末、颗粒、片剂、乳剂、糖浆、气雾剂、软胶囊、硬胶囊、灭菌注射剂和灭菌粉等。
此处,术语“药学上可接受的”指当化合物给人类施用时该化合物是生理上可接受的,且不会发生胃肠道紊乱、头晕等过敏反应或者类似这些过敏反应的全身过敏反应。
在本发明中,“药学上可接受的载体”包括但不限于:粘合剂(如微晶纤维素、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮)、填充剂(如淀粉、蔗糖、葡萄糖和无水乳酸)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、和低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(硬脂酸镁、硬脂酸铝、滑石、聚乙二醇、苯甲酸钠)、润湿剂(如甘油)、表面活性剂(如十六烷醇)以及吸收促进剂、矫味剂、甜味剂、稀释剂、包衣剂等。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述:
实施例1
本实施例提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖。
其中,板栗多糖制备方法包括:
a.采用加压溶剂萃取法,将粉末状的板栗原料与硅藻土混合并置于萃取池中,以水为萃取溶剂,在70℃、11MPa下萃取5min,得到板栗粗提液。
b.在板栗粗提液中加入等体积的Sevage试剂(三氯甲烷/正丁醇=4:1,V/V),混合物剧烈震荡30min,去掉沉淀蛋白质,重复以上步骤7次,得到脱蛋白液。
c.将脱蛋白液与20%的H2O2混合,在40℃下脱色2h,调节所述板栗粗提液的pH值为6.5。
d.将脱蛋白、脱色后的板栗提取液,转至透析袋中,用去离子水透析,每隔3h换水一次,透析24h,以除去残留的小分子和离子,得板栗透析液。
e.将所述板栗透析液用Sephadex G-100凝胶柱层析,以水为洗脱剂,控制洗脱速度为20ml/h,分部收集,每管8mL,隔管取少量洗脱液,用苯酚硫酸法检测多糖含量,直至无糖检出为止。收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖。
实施例2
本实施例提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖。
其中,板栗多糖制备方法包括:
a.采用加压溶剂萃取法,将粉末状的板栗原料与硅藻土混合并置于萃取池中,以水为萃取溶剂,在50℃、15MPa下萃取15min,得到板栗粗提液。
b.在板栗粗提液中加入等体积的Sevage试剂(三氯甲烷/正丁醇=4:1,V/V),混合物剧烈震荡50min,去掉沉淀蛋白质,重复以上步骤4次,得到脱蛋白液。
c.将脱蛋白液与25%的H2O2混合,在55℃下脱色1.5h,调节所述板栗粗提液的pH值为7。
d.将脱蛋白、脱色后的板栗提取液,转至透析袋中,用去离子水透析,每隔3h换水一次,透析24h,以除去残留的小分子和离子,得板栗透析液。
e.将所述板栗透析液用Sephadex G-100凝胶柱层析,以水为洗脱剂,控制洗脱速度为25ml/h,分部收集,每管10mL,隔管取少量洗脱液,用苯酚硫酸法检测多糖含量,直至无糖检出为止。收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖。
实施例3
本实施例提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖。
其中,板栗多糖制备方法包括:
a.采用加压溶剂萃取法,将粉末状的板栗原料与硅藻土混合并置于萃取池中,以水为萃取溶剂,在70℃、6MPa下萃取7min,得到板栗粗提液。
b.在板栗粗提液中加入等体积的Sevage试剂(三氯甲烷/正丁醇=4:1,V/V),混合物剧烈震荡40min,去掉沉淀蛋白质,重复以上步骤3次,得到脱蛋白液。
c.将脱蛋白液与15%的H2O2混合,在55℃下脱色2.5h,调节所述板栗粗提液的pH值为6。
d.将脱蛋白、脱色后的板栗提取液,转至透析袋中,用去离子水透析,每隔6h换水一次,透析48h,以除去残留的小分子和离子,得板栗透析液。
e.将所述板栗透析液用Sephadex G-100凝胶柱层析,以水为洗脱剂,控制洗脱速度为15ml/h,分部收集,每管10mL,隔管取少量洗脱液,用苯酚硫酸法检测多糖含量,直至无糖检出为止。收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖。
实施例4
本实施例提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖25g、白术内酯7g、槐定碱5g、吴茱萸碱3g。其制备方法包括:
将上述组分混合,加入辅料淀粉和硬脂酸镁,充分研磨。
实施例5
本实施例提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖30g、白术内酯10g、槐定碱7g、吴茱萸碱1g。其制备方法与实施例4一致。
实施例6
本实施例提供一种具有抗癌作用的药物组合物,其包括:板栗多糖20g、白术内酯5g、槐定碱3g、吴茱萸碱5g。其制备方法与实施例4一致。
实验例1
不用种系中板栗多糖的单糖组成及含量:
表1.不用品种(系)板栗中板栗多糖的单糖组成及百分含量
品种(系) | 核糖 | 鼠李糖 | 阿拉伯糖 | 木糖 | 甘露糖 | 葡萄糖 | 半乳糖 |
燕山短枝 | 2.48 | 0.21 | 3.72 | 0.22 | 10.58 | 76.64 | 6.51 |
大板红 | 12.93 | 2.51 | 12.94 | 8.85 | 6.84 | 14.26 | 41.67 |
燕王 | 19.91 | 3.85 | 10.76 | 4.89 | 6.94 | 9.04 | 44.61 |
迁西早红 | 6.53 | 3.31 | 12.38 | 0.84 | 7.36 | 45.94 | 23.63 |
迁西晚红 | 4.89 | 5.50 | 17.52 | 1.21 | 10.11 | 42.17 | 18.60 |
按照实施例1~3中描述的提取条件,从不同品种(系)板栗中提取板栗多糖,并将其水解,利用GC-MS检测样品的单糖组成。表1结果显示各板栗多糖至少由核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖以及半乳糖等单糖组成,其相对百分含量差别很大,与板栗品种(系)密切相关。
由图1~3显示的红外光谱图可知,燕山奎栗、燕山短枝和遵玉板栗中提取的板栗多糖在四个典型区域出现了特征吸收峰,即:1000~1300cm-1;1300~1500cm-1;2800~3000cm-1;3200~3600cm-1。由图可知,燕山短枝板栗多糖为以β-型糖苷键结合的糖链。燕山奎栗和遵玉板栗多糖为以α-型糖苷键结合的糖链。
实验例2
本实验例采用MTT法对所得板栗多糖的抗癌活性进行检测:
一、检测方法:
将癌细胞接种于96孔内,每孔100mL(含1000个癌细胞),置于饱和湿度、37℃和5%CO2温箱内培养24h后加药,受试样品设5个浓度(分别为1000,100,10,1,0.1μg/mL),每浓度3个平行孔,置温箱内培养4天。弃去培养液,每孔加入MTT溶液(0.4mg/mL,RPMI1640配制)100ml,37℃孵育4h。弃上清液,每孔加入DMSO 150mL,溶解Fomazan颗粒,轻度振荡后,用酶标仪在检测波长540nm,参考波长405nm下测定OD值。(阳性对照药为紫杉醇)。
结果计算:以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线,从中求出半数抑制浓度(IC50)。
二、试验结果:
以人结肠癌细胞HCT-116、肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、肺癌细胞NCI-H1650、卵巢癌细胞A2780、肝癌细胞BEL-7402、肺癌细胞A-549为试验细胞,测试所提取板栗多糖对多种癌细胞的抑制作用,结果如表2所示。
表2.所提取板栗多糖对多种癌细胞的抑制结果
表2显示,燕山奎栗板栗多糖具有很强的抑制BEL-7402人肝癌细胞增殖活性,且活性优于阳性药紫杉醇。此外,燕山奎栗板栗多糖对HepG2人肝癌细胞、NCI-H1650肺癌细胞和BGC-823胃癌细胞也有较强的抑制活性。遵玉和燕山短枝板栗多糖具有很强的抑制HepG2人肝癌细胞增殖活性,活性优于紫杉醇,并且遵玉板栗多糖对人结肠癌细胞HCT-116和肺癌细胞A-549也有一定的抑制作用。大峰板栗多糖对人结肠癌细胞HCT-116和卵巢癌细胞A2780具有较强的抑制作用,而黑油榛板栗多糖则对卵巢癌细胞A2780具有较强的抑制作用。
实验例3
本实施例采用MTT法对实施例4~6中提供的药物组合物的抗癌活性进行检测:
一、试验方法:
检测方法与实验例2一致,其中板栗多糖为燕山奎栗、燕山短枝和遵玉板栗多糖按照质量比1:1:1混合所得的混合物,对比阳性药物为紫杉醇。同时设置3个对照组,其受试样品的组成及配比为:
对照1组:板栗多糖24g、白术内酯7g。
对照2组:板栗多糖24g、白术内酯7g、槐定碱5g。
对照3组:板栗多糖24g、白术内酯7g、吴茱萸碱3g。
结果计算:以药物的不同浓度对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线,从中求出半数抑制浓度(IC50)。
二、实验结果:
以人胃癌细胞BGC-823、以及肺癌细胞A-549为测试细胞,测试结果如表3所示。
表3.药物组合物对癌细胞的抑制结果
结果表明,实施例4~6提供的药物组合物,对肝癌细胞HepG2和BEL-7402的抑制作用,与紫杉醇类似或强于紫杉醇的抑制作用。而对照1~3组对上述癌细胞的抑制作用均有所下降,其中对照1组的作用最弱,其次是对照3组,最后是对照2组,由此说明:槐定碱和吴茱萸碱能够增加癌细胞对板栗多糖和白术内酯的敏感性,进而显著提高二者混合使用时的药效。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明,然而应意识到,在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此,这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (7)
1.一种具有抗癌作用的药物组合物,其特征在于,按重量份数计,由板栗多糖为20~30份、白术内酯为5~10份、槐定碱为3~7份、吴茱萸碱为1~5份以及药学上可接受的载体或辅料组成。
2.根据权利要求1所述的具有抗癌作用的药物组合物,其特征在于,所述板栗多糖是以板栗为原料经提取、纯化制得,所述板栗多糖的重均分子量为5×102~1×107Da。
3.根据权利要求2所述的具有抗癌作用的药物组合物,其特征在于,制备所述板栗多糖的原料为栗属植物的种仁。
4.根据权利要求3所述的具有抗癌作用的药物组合物,其特征在于,所述板栗多糖是由五碳糖和六碳糖组成的杂多糖,所述五碳糖和六碳糖包括葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、核糖、鼠李糖、木糖和甘露糖。
5.一种根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,其包括:
采用溶剂提取法对板栗原料进行提取,得到板栗粗提液;将所述板栗粗提液进行脱蛋白处理和脱色处理后,用透析袋进行透析,得到板栗透析液;再将所述板栗透析液用凝胶柱层析,以水为洗脱剂,收集含多糖成分的洗脱液,得到板栗多糖。
6.根据权利要求5所述的药物组合物,其特征在于,所述脱色处理包括:将脱蛋白后的所述板栗粗提液与15~25%的H2O2混合,在40~55℃下脱色1.5~2.5h,调节所述板栗粗提液的pH值为6~7。
7.根据权利要求6所述的药物组合物,其特征在于,所述溶剂提取法为加压溶剂萃取法,所述加压溶剂萃取法包括:将粉末状的所述板栗原料与硅藻土混合并置于萃取容器中,以水为萃取溶剂,在50~70℃、3~15MPa下萃取4~20min。
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白术内酯Ⅰ抑制卵巢癌SK-OV-3与OVCAR-3细胞增殖作用机制的研究;龙方懿 等;《局解手术学杂志》;20170228;第26卷(第2期);89-93 * |
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