CN115368419B - 板栗种仁寡糖提取物及其提取纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，公开了板栗种仁寡糖提取物及其提取纯化方法。板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，包括：将栗仁粉与水混合充分浸提后进行固液分离得到提取液；将提取液进行微滤、超滤、纳滤以收集提取液中300～3000Da的物质得到截留液；将截留液与碳酸二乙酯和浓度为0.05～0.08g/mL的柠檬酸钠溶液充分混合进行三相纯化，分层后取下层溶液得纯化液；将纯化液以超纯水进行透析去除纯化液中的柠檬酸钠得到超纯液。板栗种仁寡糖提取物，采用上述方法提取得到，该提取物中糖含量大于95％。

Description

板栗种仁寡糖提取物及其提取纯化方法

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及板栗种仁寡糖提取物及其提取纯化方法。

背景技术

寡糖(低聚糖)作为一种热量低、甜度小、对人体无毒的小分子物质，因其具有抗氧化、降血糖、调节肠道菌群、增强免疫力等多种生理功能，已逐渐在营养保健食品的研发与生产中成为一类重要的功能性食品基料。自然界中仅有少数植物含有天然寡糖，现有寡糖产品大多通过天然高聚糖的控制性水解或利用酶的糖基转移反应获得，或者采用人工化学合成的方法进行制备。由于天然存在的活性物质往往具有更低的毒性、更高的稳定性和更好的生物相容性，当前，从自然界动植物和微生物中分离筛选功能性寡糖一直是天然产物领域研究的热点之一。

板栗是我国的生态经济型树种之一，素有“木本粮食”和“铁秆庄稼”之称。板栗种仁富含多种营养和活性物质，不仅有着很高的营养价值，还是制作食疗药膳的上等原料，可有效预防和治疗高血压、冠心病、动脉硬化等心血管疾病，是抗衰老、延年益寿的滋补佳品。目前，栗仁中营养活性成分的相关研究聚焦于板栗淀粉、蛋白质、多酚、膳食纤维、矿质元素及维生素等，而针对板栗中寡糖成分的相关提取纯化和活性研究迄今尚未见报道。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供板栗种仁寡糖提取物及其提取纯化方法。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，包括：

将栗仁粉与水混合充分浸提后进行固液分离得到提取液；

将提取液进行过滤以收集提取液中300～3000Da的物质得到过滤截留液；

将过滤截留液与碳酸二乙酯和浓度为0.05～0.08g/mL的柠檬酸钠溶液充分混合进行三相纯化，分层后取下层溶液得纯化液；

将纯化液以超纯水进行透析去除纯化液中的柠檬酸钠得到超纯液。

在可选的实施方式中，得到超纯液后还包括将其进行减压浓缩、冷冻干燥得到板栗种仁寡糖提取物。

在可选的实施方式中，透析过程用到的透析膜为300Da的透析膜。

在可选的实施方式中，栗仁粉是将板栗仁于60～80℃下充分干燥后粉碎过60目筛得到。

在可选的实施方式中，将栗仁粉与水混合充分浸提是将栗仁粉置于温度为60～70℃的水中进行浸提；

优选地，浸提过程不断搅拌，浸提时间为2～3h；

优选地，浸提过程的料液比为1:10～20；

优选地，固液分离的方式为固液离心分离；

优选地，固液离心分离时，转速为6000～8000rpm，离心时间为5～10min。

在可选的实施方式中，将提取液进行过滤的方式包括：

采用微孔滤膜对提取液进行过滤，收集渗透液得到微滤液；

采用3000Da的超滤膜对微滤液进行过滤，收集渗透液得到超滤液；

采用300Da的纳滤膜对超滤液进行过滤，收集截留液得到过滤截留液；

优选地，微孔滤膜为膜孔径0.05～0.15μm的微孔滤膜；

优选地，采用微孔滤膜进行过滤时，压力设置为8～12bar；

优选地，采用超滤膜进行过滤时，压力设置为8～12bar；

优选地，采用纳滤膜进行过滤时，压力设置为10～14bar。

在可选的实施方式中，过滤截留液、碳酸二乙酯和柠檬酸钠溶液的体积比为1:0.8～1.2:0.8～1.2；

优选地，将过滤截留液、碳酸二乙酯和柠檬酸钠溶液充分混合的方式为：

将过滤截留液、碳酸二乙酯和柠檬酸钠溶液混合后的混合液震荡0.5～1h。

在可选的实施方式中，栗仁粉由以下至少一个品种的板栗制得，板栗品种为：燕囍板栗、燕凤板栗和兴隆6号板栗。

第二方面，本发明提供一种板栗仁寡糖提取物，采用如前述实施方式任一项的提取纯化方法制得。

在可选的实施方式中，板栗仁寡糖提取物中糖纯度>95％，糖为聚合度为3～8的单一聚合度寡糖或聚合度3～8的寡糖混合物，分子量在504～1452Da；

优选地，板栗仁寡糖提取物的单糖组成包括Glc、Gal、Fru、Ara、Man和Xyl中的一种或多种。

本发明具有以下有益效果：

本申请提供的提取纯化方法，板栗种仁中可溶于水的活性成分提取出来后，利用过滤的方式收集与寡糖分子量对应的物质，然后再采用碳酸二乙酯和柠檬酸钠对过滤后的过滤截留液进行三相纯化以去除过滤截留液中的小分子寡肽，最后再利用透析除去纯化液中的柠檬酸钠和其他小分子盐后可得到高纯度提取物，该高纯度提取物的糖纯度高于95％。

最常用于多糖纯化的三相纯化试剂为正丁醇-硫酸铵体系，过滤截留液中的杂质成分多为板栗寡肽，经采用多种纯化体系进行对比，发明人发现采用正丁醇-硫酸铵体系进行纯化无法达到较好的纯化效果，而采用碳酸二乙酯-柠檬酸钠体系能够实现最佳的寡肽去除效果，使最终提取物的糖纯度高于95％。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1实施例1得到的提取物的GPC-RI-MALS分子量测试；

图2实施例2得到的提取物的GPC-RI-MALS分子量测试；

图3实施例3得到的提取物的GPC-RI-MALS分子量测试；

图4实施例1得到的提取物的单糖组成测试；

图5实施例2得到的提取物的单糖组成测试；

图6实施例3得到的提取物的单糖组成测试。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本申请提供的板栗寡糖提取物及其提取纯化方法进行具体说明。

本申请提供的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，包括：

将栗仁粉与水混合充分浸提后进行固液分离得到提取液；

将提取液进行过滤以收集提取液中300～3000Da的物质得到过滤截留液；

将过滤截留液与碳酸二乙酯和浓度为0.05～0.08g/mL的柠檬酸钠溶液充分混合进行三相纯化，分层后取下层溶液得纯化液；

将纯化液以超纯水进行透析去除纯化液中的柠檬酸钠得到超纯液。

本申请提供的提取纯化方法，板栗种仁中可溶于水的活性成分提取出来后，利用过滤的方式收集与寡糖分子量对应的物质，然后再采用碳酸二乙酯和柠檬酸钠对过滤后的过滤截留液进行三相纯化以去除过滤截留液中的小分子寡肽，最后再利用透析除去纯化液中的柠檬酸钠和其他小分子盐后可得到高纯度提取物，该高纯度提取物的糖纯度高于95％。

最常用于多糖纯化的三相纯化试剂为正丁醇-硫酸铵体系，过滤截留液中的杂质成分多为板栗寡肽，经采用多种纯化体系进行对比，发明人发现采用正丁醇-硫酸铵体系进行纯化无法达到较好的纯化效果，而采用碳酸二乙酯-柠檬酸钠体系能够实现最佳的寡肽去除效果，使最终提取物的糖纯度高于95％。

因此，本申请提供的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，利用水浸提-膜分离-三相纯化-透析四步连用相结合对板栗进行提取纯化，可得到糖纯度高的提取物。

优选地，得到超纯液后还包括将其进行减压浓缩、冷冻干燥得到固体的板栗种仁寡糖提取物。固体的板栗种仁寡糖提取物中糖纯度高于95％。

具体地，板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法制备步骤包括：

S1、栗仁粉的制作

将板栗脱除外壳和内皮，置于60～80℃干燥过夜，粉碎后过60目筛收集筛下物得到栗仁粉。

优选地，选择板栗品种为：燕囍板栗、燕凤板栗和兴隆6号板栗。这几种板栗为比较具有代表性的品种，需要说明的是，在本申请实施方案中，板栗仁品种的选择不是必要，除了以上几个品种以外，其他任何品种也都能实现本申请技术方案。只不过品种不同最终提取得到的板栗仁寡糖提取物中的糖组成和含量不同。

S2、浸提

将栗仁粉与水混合充分浸提后进行固液分离得到提取液。

具体地，为了保证板栗仁中溶于水的活性成分能充分溶于水中，在本步骤中，是按照料液比1:10～20将板板栗仁粉置于温度为60～70℃的热水中，在不断搅拌下进行浸提，浸提时间为2～3h。

浸提完后进行固液分离收集提取液。

优选地，为保证提取效率，固液分离的方式为固液离心分离。进一步地，为保证固液充分分离，固液离心分离的转速为6000～8000rpm，离心时间为5～10min。

优选地，为更进一步保证板栗仁中溶于水的物质提取充分，固液分离后，可将得到的固体作为原料再次进行浸提，浸提后将提取液与前述提取液合并得到用于过滤的起始料液。

S3、过滤

将提取液(用于过滤的起始料液)进行过滤以收集提取液中300～3000Da的物质得到过滤截留液。

具体地，实现收集提取液中300～3000Da的物质的方式之一可以为：

先采用微孔滤膜对提取液进行过滤，收集渗透液得到微滤液；

然后采用3000Da的超滤膜对微滤液进行过滤，收集渗透液得到超滤液；

最后采用300Da的纳滤膜对超滤液进行过滤，收集截留液得到过滤截留液。

优选地，为保证过滤效率以及过滤效果：微孔滤膜为膜孔径0.05～0.15μm(例如0.05μm、0.1μm或0.15μm)的微孔滤膜；采用微孔滤膜进行过滤时，压力设置为8～12bar(例如8bar、10bar或12bar)采用超滤膜进行过滤时，压力设置为8～12bar(例如8bar、10bar或12bar)；采用纳滤膜进行过滤时，压力设置为10～14bar(例如10bar、12bar或14bar)。

进一步地，以上每一个过滤步骤中，在过滤进行到后阶段时，为保证充分过滤，可在料液桶内添加超纯水进行过滤，而添加超纯水过滤后由于料液量大，不可能做到完全使料液中理论上能够过膜的物质全部过膜，因此只需根据经验判断渗透液量或者截留液量达到某一值时停止过滤，为保证后续三相纯化更易进行，纳滤后的过滤截留液可进行减压浓缩至合适量后再继续下一步骤。

S4、三相纯化

将过滤截留液与碳酸二乙酯和浓度为0.05～0.08g/mL(例如0.05g/mL、0.07g/mL或0.08g/mL)的柠檬酸钠溶液在20～40℃(例如20℃、30℃或40℃)下按照体积比1:0.8～1.2:0.8～1.2(例如1:0.8:1.2、1:1.2:0.8或1:1:1)充分混合，分层后取下层溶液得纯化液。

本步骤中，充分混合的方式为：将过滤截留液、碳酸二乙酯和柠檬酸钠溶液混合后的混合液震荡0.5～1h(例如0.5h、0.8h或1h)使之混合充分。

S5、透析

将纯化液以超纯水进行透析去除纯化液中的柠檬酸钠和小分子盐得到超纯液。

优选地，为实现透析除去纯化液中的柠檬酸钠和小分子盐，本步骤的实现方式之一为采用截留分子量为300Da的透析膜进行透析。需要说明的是，本步骤中，只要能实现去除纯化液中的柠檬酸钠和可能存在的一些小分子盐，选择其他规格的透析膜也能实现本申请技术方案。

S6、减压浓缩、冷冻干燥

透析得到的超纯液中溶质几乎全为糖类，本步骤中将超纯液进行减压浓缩冷冻干燥得到固体的板栗仁寡糖提取物，板栗仁寡糖提取物含糖量大于95％。

本申请实施例提供的板栗仁寡糖提取物，采用本申请实施例提供的提取纯化方法制得。

该板栗仁寡糖提取物中糖纯度>95％，糖为聚合度为3～8的单一聚合度寡糖或聚合度3～8的寡糖混合物，分子量在504～1452Da；

优选地，按照板栗品种的不同，板栗仁寡糖提取物中单糖组成包括Glc、Gal、Fru、Ara、Man和Xyl中的一种或多种。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

将燕囍板栗脱除外壳和内皮，置于60℃烘箱内干燥过夜，用自动粉碎机粉碎后过60目筛得到板栗仁粉。

称取50g板栗仁粉，以料液比1:10加入热水，控制加热温度60℃，利用机械搅拌器搅拌3h。混合液用离心机在8000rpm下离心5min，倒出上层澄清提取液。将剩余部分过滤，得到的滤渣重复浸提1次，离心、过滤后合并两次浸提液，得到共约1100mL溶液作为膜分离起始料液。

在高压平板膜上装载0.1μm微孔滤膜，料液桶内倒入浸提液，压力设置为10bar进行微滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入500mL超纯水，直至渗透液为1600mL，收集合并渗透液。在高压平板膜上装载3000Da超滤膜，料液桶内倒入微滤渗透液，压力设置为10bar进行超滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入300mL超纯水，直至渗透液为2000mL，收集合并超滤渗透液。在高压平板膜上装载300Da纳滤膜，料液桶内倒入超滤渗透液，压力设置为12bar进行纳滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入500mL超纯水，直至渗透液为3500mL，收集合并截留液，减压浓缩至100mL得到浓缩后的过滤截留液。

向浓缩后的过滤截留液中加入100mL碳酸二乙酯以及100mL 0.05g/mL的柠檬酸钠溶液，在20℃下混合振荡1h。分离下层溶液，装入截留分子量为300Da的透析袋，以超纯水透析24h，期间每隔4h换水一次。袋内溶液减压浓缩至20mL，冻干后得到燕囍板栗种仁寡糖。

实施例2

将燕凤板栗脱除外壳和内皮，置于80℃烘箱内干燥过夜，用自动粉碎机粉碎后过60目筛板栗仁粉。

称取50g板栗仁粉，以料液比1:15加入热水，控制加热温度70℃，利用机械搅拌器搅拌2h。混合液用离心机在7000rpm下离心8min，倒出上层澄清提取液。将剩余部分过滤，得到的滤渣重复浸提1次，离心、过滤后合并两次浸提液，得到共约1100mL溶液作为膜分离起始料液。

在高压平板膜上装载0.1μm微孔滤膜，料液桶内倒入浸提液，压力设置为10bar进行微滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入400mL超纯水，直至渗透液为1600mL，收集合并渗透液。在高压平板膜上装载3000Da超滤膜，料液桶内倒入微滤渗透液，压力设置为10bar进行超滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入400mL超纯水，直至渗透液为2000mL，收集合并超滤渗透液。在高压平板膜上装载300Da纳滤膜，料液桶内倒入超滤渗透液，压力设置为12bar进行纳滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入600mL超纯水，直至渗透液为3500mL，收集合并截留液，减压浓缩至100mL得到浓缩后的过滤截留液。

向得到浓缩后的过滤截留液中加入100mL碳酸二乙酯以及100mL0.05g/mL的柠檬酸钠溶液，在30℃下混合振荡0.5h。分离下层溶液，装入截留分子量为300Da的透析袋，以超纯水透析24h，期间每隔4h换水一次。袋内溶液减压浓缩至20mL，冻干后得到燕凤板栗种仁寡糖。

实施例3

将兴隆6号板栗脱除外壳和内皮，置于60℃烘箱内干燥过夜，用自动粉碎机粉碎后过60目筛得到板栗仁粉。

称取50g板栗仁粉，以料液比1:20加入热水，控制加热温度80℃，利用机械搅拌器搅拌2h。混合液用离心机在6000rpm下离心10min，倒出上层澄清提取液。将剩余部分过滤，得到的滤渣重复浸提1次，离心、过滤后合并两次浸提液，得到共约1100mL溶液作为膜分离起始料液。

在高压平板膜上装载0.1μm微孔滤膜，料液桶内倒入浸提液，压力设置为10bar进行微滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入600mL超纯水，直至渗透液为1600mL，收集合并渗透液。在高压平板膜上装载3000Da超滤膜，料液桶内倒入微滤渗透液，压力设置为10bar进行超滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入200mL超纯水，直至渗透液为2000mL，收集合并超滤渗透液。在高压平板膜上装载300Da纳滤膜，料液桶内倒入超滤渗透液，压力设置为12bar进行纳滤，待截留液为500mL时向料液桶中加入400mL超纯水，直至渗透液为3500mL，收集合并截留液，减压浓缩至100mL得到浓缩后的过滤截留液。

向得到浓缩后的过滤截留液中加入100mL碳酸二乙酯以及100mL0.05g/mL的柠檬酸钠溶液，在40℃下混合振荡0.5h。分离下层溶液，装入截留分子量为300Da的透析袋，以超纯水透析24h，期间每隔4h换水一次。袋内溶液减压浓缩至20mL，冻干后得到兴隆6号板栗种仁寡糖。

对比例1

本对比例与实施例1基本相同，不同之处仅在于：取消三相纯化步骤。

对比例2

本对比例与实施例2基本相同，不同之处仅在于：取消三相纯化步骤。

对比例3

本对比例与实施例3基本相同，不同之处仅在于：取消三相纯化步骤。

对比例4

本对比例与实施例1基本相同，不同之处仅在于：将碳酸二乙酯替换为等量碳酸二甲酯。

对比例5

本对比例与实施例1基本相同，不同之处仅在于：将碳酸二乙酯-柠檬酸钠溶液体系替换为正丁醇(100mL)-硫酸铵溶液(40％wt)体系。

实验例1

观察实施例1-3、对比例1-5得到的提取物物理状态，计算提取率，测试提取物中糖含量以及寡肽含量。将结果记录至表1中。

提取率指最终制得的固体物质与栗仁粉质量之比；

糖含量的测定方法为苯酚硫酸法；

寡肽含量的测定方法为Lowry法。

表1

通过上表结果可看出，提取纯化过程若不采用三相纯化，则得到的产品中寡肽含量较高；而采用三相纯化后得到的提取物中几乎不含寡肽，糖含量高于95％，纯化得到的寡糖均为白色粉末。将实施例1和对比例5对比，实施例1寡肽含量更低，说明与正丁醇-硫酸铵体系相比，碳酸二乙酯-柠檬酸钠体系的纯化效果更好，将实施例1与对比例4对比，发现将碳酸二乙酯替换为同类的碳酸二甲酯无法达到较好的纯化效果。

实验例2

测试实施例1～3得到的提取物分子量。结果如图1～3和表2所示。

表2

图1～3分别为借助GPC-RI-MALS测试实施例1～3所得寡糖的分子量。由于采用光散射技术和凝胶渗透色谱分离技术相结合的分子量测定方式，不需标准样品作参考即可给出样品的绝对分子量。从表2的结果可看出，实施例1提取产物为单一聚合度寡糖，聚合度为4，重均分子量670Da；实施例2提取产物为单一聚合度寡糖，聚合度为3，重均分子量507Da；实施例3提取产物为两种聚合度不同的寡糖混合物，聚合度分别为8和4，重均分子量分别为1452Da和675Da。实施例1～3所提取产物的分子量分布均小于1.1。

实验例3

测试实施例1～3所提取寡糖的单糖组成。其结果如图4～6所示。实施例1所提取寡糖主要由同种单糖Glc组成，实施例2所提取寡糖主要由3种单糖Gal、Glc和Fru组成，实施例3所提取寡糖主要由5种单糖Ara、Gal、Glc、Xyl和Man组成。从图中可看出不同品种板栗所提取得到寡糖的单糖组成不同。

综上，本申请提供的提取纯化方法，板栗种仁中可溶于水的活性成分提取出来后，利用微滤、超滤、纳滤相结合的方式收集与寡糖分子量对应的物质，然后再采用碳酸二乙酯和柠檬酸钠对过滤后的过滤截留液进行三相纯化以去除过滤截留液中的小分子寡肽，最后再利用透析除去纯化液中的柠檬酸钠和其他小分子盐后可得到高纯度提取物，该高纯度提取物中所含的活性成分中糖纯度高于95％。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，包括：

将栗仁粉与水混合充分浸提后进行固液分离得到提取液，所述栗仁粉由燕囍板栗、燕凤板栗和兴隆6号板栗中至少一个品种的板栗制得；

将所述提取液进行过滤以收集提取液中300～3000Da的物质得到过滤截留液；

将所述过滤截留液与碳酸二乙酯和浓度为0.05～0.08g/mL的柠檬酸钠溶液充分混合进行三相纯化，分层后取下层溶液得纯化液，所述过滤截留液、碳酸二乙酯和所述柠檬酸钠溶液的体积比为1:0.8～1.2:0.8～1.2；

将所述纯化液以超纯水进行透析去除所述纯化液中的柠檬酸钠得到超纯液；得到超纯液后还包括将其进行减压浓缩、冷冻干燥得到板栗种仁寡糖提取物；

将所述提取液进行过滤的方式包括：

采用微孔滤膜对所述提取液进行过滤，收集渗透液得到微滤液，微孔滤膜为膜孔径0.05～0.15μm的微孔滤膜；

采用3000Da的超滤膜对所述微滤液进行过滤，收集渗透液得到超滤液；

采用300Da的纳滤膜对所述超滤液进行过滤，收集截留液得到所述过滤截留液。

2.根据权利要求1所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，透析过程用到的透析膜为300Da的透析膜。

3.根据权利要求1所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，所述栗仁粉是将板栗仁于60～80℃下充分干燥后粉碎过60目筛得到。

4.根据权利要求1所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，将栗仁粉与水混合充分浸提是将所述栗仁粉置于温度为60～70℃的水中进行浸提。

5.根据权利要求4所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，浸提过程不断搅拌，浸提时间为2～3h。

6.根据权利要求4所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，浸提过程的料液比为1:10～20。

7.根据权利要求4所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，固液分离的方式为固液离心分离。

8.根据权利要求7所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，固液离心分离时，转速为6000～8000rpm，离心时间为5～10min。

9.根据权利要求1所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，采用微孔滤膜进行过滤时，压力设置为8～12bar；采用超滤膜进行过滤时，压力设置为8～12bar；采用纳滤膜进行过滤时，压力设置为10～14bar。

10.根据权利要求1所述的板栗种仁寡糖提取物的提取纯化方法，其特征在于，将所述过滤截留液、碳酸二乙酯和所述柠檬酸钠溶液充分混合的方式为：

将所述过滤截留液、碳酸二乙酯和所述柠檬酸钠溶液混合后的混合液震荡0.5～1h。