CN107207601A

CN107207601A - 肿瘤坏死因子(tnf)超家族受体结合分子及其应用

Info

Publication number: CN107207601A
Application number: CN201680006321.XA
Authority: CN
Inventors: B·T-Y·王; M·A·施瓦泽; B·A·基特; R·巴利加
Original assignee: IGM Biosciences Inc
Current assignee: IGM Biosciences Inc
Priority date: 2015-01-20
Filing date: 2016-01-20
Publication date: 2017-09-26
Also published as: IL253054A0; NZ732922A; US20230203173A1; KR102435324B1; IL284430A; HUE051013T2; WO2016118641A1; AU2020201323A1; ES2806500T3; SG11201705116SA; US20210047419A1; US20180009897A1; JP2022177090A; EP3247728A4; PT3247728T; IL253054B; JP2021006044A; EP3750918A1; US10689449B2; IL284430B1

Abstract

本发明提供二聚、五聚和六聚肿瘤坏死因子(TNF)超家族受体蛋白结合分子，和采用所述结合分子来引导凋亡介导的表达TNF受体的细胞的杀伤的方法。

Description

肿瘤坏死因子(TNF)超家族受体结合分子及其应用

背景技术

自从人源化的抗体出现以来，抗体例如(利妥昔单抗)、(曲妥单抗)和(贝伐单抗)的治疗应用，已在医药学领域，包括肿瘤学、炎性紊乱(例如类风湿性关节炎，和许多其它适应症)的治疗方面掀起革命。在美国，超过30种人抗体或人源化的抗体已获批用于临床应用，并且，有超过600种新抗体或抗体样分子正处于开发的各种阶段。一些抗体对于可溶性靶标分子具有拮抗功能，所述可溶性靶标分子例如血管内皮生长因子(VEGF)或肿瘤坏死因子(TNF)，它们的作用是疾病的病理过程的部分。或者，抗体能够结合、阻断和/或诱导某些疾病(例如癌症)中的病理细胞的破坏。这些治疗抗体的主要功能是通过Fab区的结合，以及通过Fc结构域(其还介导抗体的长循环半衰期)招募效应物功能。相较于小分子药物，抗体的一个主要优势可能是它们的精准的特异性。抗体能够十分准确地靶向选定的蛋白质抗原，例如致癌基因，以排除极其类似的同系物，这允许良性安全性的概况。因此，抗体的特异性单一靶向功能被充分表征。

随着该领域的进展，抗体功能已通过如下方式而被增加：例如，蛋白质工程改造的创新性手段，以提供更高的亲和性、更长的半衰期，和/或更好的组织分布，以及用于增加通过毒性净负荷递送(例如抗体-药物偶联物)的细胞破坏的集中性小分子和大分子技术的组合。用于改善抗体功能的另一种方法利用了免疫球蛋白A(IgA)或免疫球蛋白M(IgM)结构的多价结合能力，这允许一个IgA或IgM分子结合多重抗原。感兴趣的重链和轻链可变区可被表达为IgA或IgM同种型抗体，由此产生与单体抗体，例如，IgG抗体，具有相同的特异性的多聚结合分子。

IgA或IgM分子的多价性质呈现了用于其中必须同时结合多重组分以传递生物信号的特定生物系统的应用的有用的工具。例如，真核细胞表面上的许多受体蛋白需要多重单体或亚基的同时活化，以实现跨过细胞膜的生物信号的活化和传递至该细胞的胞质。

在活化之前或与活化相应地需要多聚化的细胞表面蛋白质受体的一个这样的系统存在于受体蛋白的肿瘤坏死因子(TNF)超家族中。该受体蛋白的超家族中包括这样的成员，它们在活化之后，将信号传递至造成凋亡的细胞的核。该超家族的其它家族成员造成NF-κB、凋亡途径、胞外信号调节性激酶(ERK)、p38分裂素活化的蛋白质激酶(p38MAPK)和c-Jun N末端激酶(JNK)的活化。活化时调节所述细胞的凋亡的TNF超家族受体成员的示例如下：TNFR1(DR1)、TNFR2、TNFR1/2、CD40(p50)、Fas(CD95、Apo1、DR2)、CD30、4-1BB(CD137、ILA)、TRAILR1(DR4、Apo2)、DR5(TRAILR2)、TRAILR3(DcR1)、TRAILR4(DcR2)、OPG(OCIF)、TWEAKR(FN14)、LIGHTR(HVEM)、DcR3、DR3、EDAR和XEDAR。(参见，Aggarwal等，Blood,119:651-665,2012)。

更具体地，假设了上述的TNF超家族受体蛋白成员的活化需要，例如，通过配体，使至少三个非相互作用受体单体被交联，以形成稳定的受体三聚体，导致跨过细胞膜的信号转导。已观察到这些TNF超家族受体蛋白三聚体簇集成三聚体的“筏(raft)”，并且已假设其导致该TNF超家族受体蛋白依赖型信号转导级联的更有效活化。(参见，Valley等，J.Biol.Chem.,287(25):21265-21278,2012)。已讨论了活化的其它模式。(参见，例如，Lewis等，Biophys.J.,106(6):L21-L24,2014)。

通过如上所述的TNF超家族受体蛋白中的某些的信号转导能够导致细胞凋亡。在癌症治疗中，一个治疗策略是使癌细胞中的凋亡性信号转导级联活化，由此截停进展。能够完成该目的的一个方式是通过在癌细胞中表达的(或过表达的)TNF超家族受体蛋白与多价或多聚激动剂结合分子的结合，这能够促进受体三聚化和活化，导致凋亡。在交联后活化导致凋亡的一个TNF超家族受体蛋白是DR5(TRAILR2)。

提高了对于DR5的兴趣，这是因为发现其在多种癌中的表达水平高于正常组织，所述癌症例如膀胱癌(Y等，Urology，79(4):968.e7-15,2012)、胃癌(Lim等，Carcinogen.,32(5):723-732,2011)、卵巢癌(Jiang等，Mol.Med.Rep.,6(2):316-320,2012)、胰腺导管腺癌(Rajeshkumar等，Mol.Cancer Ther.,9(9):2583-92,2010)、口鳞状细胞癌(Chen等，Oncotarget 4:206-217,2013)和非小细胞肺癌(Reck等，Lung Canc.,82(3):441-448,2013)。其对于医学界的另一个重要性是，观察到该受体蛋白家族，尤其是家族成员DR5，在最难以检测和治疗癌症的一些(例如胰腺癌和胃癌)中具有较高表达水平。

尽管已发现某些单克隆抗体，例如替加珠单抗(CS-1008，第一三共株式会社(Daiichi Sankyo Co.Ltd.)，公开于美国专利号7,244,429，VH和VL在本文中分别示为SEQID NO:7和SEQ ID NO:8)在体外和体内是有效的，甚至不用添加其它交联剂，但这些抗体不曾导致显著临床功效。(参见，Reck等，2013)。所述抗DR5激动性的单克隆IgG抗体的示例是：可那木单抗(Conatumumab)(Amgen，描述于美国专利号7,521,048，VH和VL在本文中分别示为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6)、多兹图单抗(Drozitumab)(Genentech，描述于美国专利号8,029,783，VH和VL在本文中分别示为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4)，和来沙木单抗(Lexatumumab)(Human Genome Sciences，公开于美国专利申请公开号2006/0269555，VH和VL在本文中分别示为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)。

需要更好的结合分子来实现进行的基础研究的益处，其提供关于TNF超家族受体蛋白的该子集的关键理解。本文中公开了其它结合分子，基于对受体蛋白TNF超家族的潜在的生化机制的理解，它们能够满足该需求。

发明概述

本发明提供多聚结合分子，例如，二聚、五聚或六聚结合分子，其包括两个、五个或六个二价结合单元或其变体或片段，其中各结合单元包括两个IgA或IgM重链恒定区或其片段，各自与抗原结合结构域相关联，其中，该结合分子的抗原结合结构域中的至少三个特异性且竞争性地结合至肿瘤坏死因子(TNF)超家族受体蛋白，其能够诱导表达所述TNF超家族受体蛋白的细胞的凋亡，并且其中，所述结合分子能交联在细胞表面上表达的至少三个相同的TNF超家族受体蛋白，由此诱导所述细胞的凋亡。

在某些方面中，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子能以高于等量的二价IgG抗体或其片段的效能诱导表达TNF超家族受体的细胞中的TNF超家族受体介导的凋亡，其还特异性地结合至并激动相同的TNF超家族受体蛋白。在某些方面中，特异性结合至并激动TNF超家族受体蛋白的三个或更多个抗原结合结构域不与其它TNF超家族受体蛋白交叉反应。在某些方面中，特异性结合至并激动TNF超家族受体蛋白的三个或更多个抗原结合结构域能与其它TNF超家族受体蛋白交叉反应。

在某些方面中，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可包括至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域，所述抗原结合结构域特异性且竞争性地结合至在所述细胞的表面表达的TNF超家族受体蛋白，由此诱导所述细胞的凋亡。在某些方面中，所述至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域结合至在所述细胞的表面表达的单一类型的TNF超家族受体分子的相同的胞外表位。在某些方面中，至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域各自特异性结合在所述细胞的表面表达的单一类型的TNF超家族受体分子的两个或更多个不同的胞外表位的组中的一种。

本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子的结合单元可以是人、人源化或嵌合免疫球蛋白结合单元。

在某些方面中，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子能够结合至，但不限于，TNFR1(DR1)、TNFR2、TNFR1/2、CD40(p50)、Fas(CD95、Apo1、DR2)、CD30、4-1BB(CD137、ILA)、TRAILR1(DR4、Apo2)、TRAILR2(DR5)、TRAILR3(DcR1)、TRAILR4(DcR2)、OPG(OCIF)、TWEAKR(FN14)、LIGHTR(HVEM)、DcR3、DR3、EDAR和XEDAR。在某些方面中，所述结合分子包括能够特异性且竞争性地结合至DR5的至少三个抗原结合结构域。在某些方面中，所述抗原结合结构域不结合至DR4、DcR1或DcR2。在某些方面中，所述结合分子包括还能特异性结合至DR4的至少三个抗原结合结构域。在某些方面中，DR5在癌细胞上表达。

在某些方面中，提供二聚、五聚或六聚结合分子，其中至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中，所述VH和VL包括六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包括：分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ IDNO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ IDNO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89的抗体的CDR；或者ScFv序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQID NO:73的CDR，或者所述六个CDR在所述CDR中的一个或多个中具有一个或两个氨基酸取代。

在某些方面中，提供二聚、五聚或六聚结合分子，其中至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域包括抗体VH和VL，其中，所述VH和VL包括分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ IDNO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ IDNO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ IDNO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列；或者其中，所述VH和VL包含在具有与SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ IDNO:73至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列的ScFv中。

在某些方面中，本文提供的结合分子是还包括J链的二聚IgA分子形式。

在某些方面中，本文提供的结合分子是还包括J链的五聚IgM分子形式。

在某些方面中，本文提供的结合分子是六聚IgM分子。

本发明还提供包括本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子的组合物。

本发明还提供多核苷酸，所述多核苷酸包括编码多肽亚基(例如，本文提供的结合分子的重链或轻链)的核酸序列。在某些方面中，所述多肽亚基包括融合至VH的C末端的人IgA或IgM恒定区或其片段，包括：(a)HCDR1、HCDR2和HCDR3区，其包括VH氨基酸序列SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ IDNO:86或SEQ ID NO:88中所包含的CDR，或者，ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73中所包含的CDR；或者，VH氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQID NO:86或SEQ ID NO:88中所包含的CDR，或者，ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73中所包含的CDR，其中，在所述HCDR的一个或多个中有一个或两个单一氨基酸取代；或(b)与SEQ ID NO:SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86或SEQID NO:88至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列，或者，与具有氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ IDNO:73的ScFv的VH部分至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列。

在某些方面中，所述多肽亚基包括轻链恒定区或其片段，其融合至所述二聚、五聚或六聚结合分子的抗原结合结构域的抗体VL部分的多肽亚基的C末端。在某些方面中，所述多肽亚基包括融合至VL的C末端的人κ或λ轻链恒定区或其片段，包括：(a)LCDR1，LCDR2和LCDR3区，其包括VL氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:89中所含的CDR，或ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73中所含的CDR；或VL氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:89中所含的CDR，或ScFv氨基酸序列SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73中所含的CDR，其中，在所述LCDR中的一个或多个中有一个或两个单一氨基酸取代；或(b)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ IDNO:87或SEQ ID NO:89至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列，或与具有氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73的ScFv的VL部分至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列。

本发明还提供包括本文提供的一种、两种或更多种多核苷酸的组合物。在某些方面中，提供了一种组合物，其中，所述多核苷酸处于分开的载体上。提供所述载体。在某些方面中，提供了一种组合物，其中，所述多核苷酸处于单一载体上。提供所述载体。在某些方面中，所述组合物还包括一种多核苷酸，其包括编码J链或其片段或其变体的核酸序列。

本发明还提供宿主细胞，其包括本文提供的多核苷酸、本文提供的组合物，或本文提供的一种或多种载体，其中，所述宿主细胞能够表达本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子。本发明还提供一种产生本文提供的结合分子的方法，其中，所述方法包括培养所述宿主细胞和回收结合分子。

在另一个方面中，本发明提供一种诱导表达TNF超家族受体的细胞中的TNF超家族受体介导的凋亡的方法，其中，所述方法包括使表达TNF超家族受体的细胞与本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子接触。

在另一个方面中，本发明提供一种诱导表达TNF超家族受体的细胞中的TNF超家族受体脂质筏形成的方法，所述方法包括使表达TNF超家族受体的细胞与本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子接触。

在另一个方面中，本发明提供治疗癌症的方法，其中，所述方法包括给予有此需要的对象有效量的本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子，其中，所述癌细胞表达TNF超家族受体，其具有凋亡活性。在某些方面中，相较于非癌细胞(例如，正常肝细胞，例如，正常人肝细胞)，所述多聚结合分子能诱导癌细胞的更大的凋亡。在某些方面中，所述TNF超家族受体是DR5。在某些方面中，该对象是人。

附图简述

图1A和图1B：多个细胞系上的DR5表达概况。图1A)Colo205细胞上的人DR5的表面表达，通过流式细胞术检测；图1B)细胞系的组上的DR5表达的平均荧光强度(MFI)。

图2：抗DR5 mAb对DR5具有特异性。抗人DR5 mAb特异性地结合至DR5，但非DR4或诱饵受体DcR1和DcR2，通过ELISA检测。

图3：抗DR5 mAb细胞结合。抗人DR5 mAb或同种型对照与Colo205细胞孵育15分钟，经清洗，并用别藻蓝素偶联的二抗染色。结合通过流式细胞术检测。

图4：抗DR5 IgG需要交联剂来实现细胞毒性。Colo205细胞在不存在或存在交联剂的情况下与抗DR5孵育。24小时后检测细胞活力。同种型对照显示，在采用或不采用交联剂的情况下，均无细胞毒性(数据未显示)。

图5：抗DR5 IgG需要交联剂来实现凋亡。Colo205细胞在不存在或存在交联剂的情况下与5μg/mL抗DR5 mAb孵育。4小时处理之后，分别利用膜联蛋白V和7-AAD来检测凋亡细胞和死细胞。

图6：抗DR5 IgG需要交联剂来实现胱天蛋白酶活化。Colo205细胞在不存在或存在交联剂的情况下与5μg/mL抗DR5 mAb孵育。胱天蛋白酶活化在处理1、2、4和24小时之后检测。

图7A-D：多聚抗DR5 mAb的细胞毒性高于单体IgG。

图7A：非还原性SDS-PAGE显示优势性多聚化的一种抗DR5 mAb(泳道1)；泳道1对应于R&D系统公司(R&D Systems)克隆71903，泳道2对应于BioLegend克隆DJR2-4，泳道3对应于Acris抗体克隆B-K29，且泳道4对应于Acris抗体克隆B-D37。

图7B：细胞活力试验显示，仅多聚抗DR5 mAb在不存在交联剂的情况中造成Colo205细胞毒性-R&D系统公司(R&D Systems)克隆71903(实心方形)、BioLegend克隆DJR2-4(空心圆形，虚线)、Acris抗体克隆B-K29(实心菱形)、Acris抗体克隆B-D37(空心三角形，虚线)。

图7C：FACS试验结果显示，在不存在交联剂的情况中，多聚抗DR5 mAb诱导Colo205细胞中的凋亡，但对于单体抗DR5 mAb或同种型对照未观察到类似结果。

图7D：胱天蛋白酶活化发光试验显示，在不存在交联剂的情况中，多聚但非单体的抗DR5 mAb诱导Colo205细胞中的胱天蛋白酶活化。

图8A-B：DR5 MAb IgM对于DR5具有特异性。DR5 MAb IgG(图A)和IgM(图B)#2特异性地结合至人DR5，但非DR4或诱饵受体DcR1和DcR2，通过ELISA检测。DR5，实心圆形；DR4，实心三角形；DcR1，空心方形；DcR2，空心三角形。

图9：DR5 MAb IgM靶细胞结合。DR5 MAb IgM#1(实心圆形)或DR5 MAb IgG#1(空心方形)与Colo205细胞孵育15分钟，经清洗，并用抗人IgM或抗人IgG Fc Alexa 647偶联的二抗染色。结合(表示为细胞结合的％)通过流式细胞术检测。

图10A-E：DR5 MAb IgM超激动剂的细胞毒性高于单体IgG。多聚DR5 MAb IgM#1(图A)、IgM#2(图B)、IgM#3(图C)和IgM#4(图D)对于Colo205细胞的细胞毒性高于IgG等同形式。图E显示DR5 MAb IgM#1的细胞毒性高于交联的IgG。DR5 MAb IgM，实心圆形；DR5 MAb IgG，空心方形；DR5 MAb IgG+交联剂，空心三角形。

图11A-D：DR5 MAb IgM超激动剂对于Colo205肿瘤细胞的细胞毒性高于原代人肝细胞。多聚DR5 MAb IgM#1(图A)，DR5 MAb IgM#2(图B)，DR5 MAb IgM#3(图C)和DR5 MAbIgM#4(图D)与Colo205肿瘤细胞或原代人肝细胞孵育，并且24小时后检测细胞活力。DR5MAb IgM处理的Colo205细胞，实心圆形；DR5 MAb IgM处理的肝细胞，空心圆形。

详述

定义

应注意，术语“一个”或“一种”实体指一种或多种该实体；例如，“一种结合分子”应理解为代表一种或多种结合分子。如此，术语“一个”(或“一种”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可互换使用。

此外，本文使用“和/或”时应视作具体公开了两种特征或组分的每一种，有或没有另一种。因此，本文短语“A和/或B”中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)、和“B”(单独)。同样，短语如“A、B、和/或C”中使用的术语“和/或”旨在包括各种以下实施方式：A、B、和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

除非另有定义，本文使用的科技术语与本发明所属领域普通技术人员所理解的通常含义相同。例如，《生物医药和分子生物学简明词典》(Concise Dictionary ofBiomedicine and Molecular Biology)，Juo,Pei-Show，第2版，2002，CRC出版社(CRCPress)；《细胞和分子生物学词典》(The Dictionary of Cell and Molecular Biology)，第3版，1999，学术出版社(Academic Press)；和《牛津生物化学和分子生物学辞典》(OxfordDictionary Of Biochemistry And Molecular Biology)，修订，2000，牛津大学出版社(Oxford University Press)，向技术人员提供了本发明使用的很多术语的常用词典。

单位、前缀和符号以它们的国际单位制(SI)接受的形式表示。数值范围包括限定该范围的数值。除非另外说明，氨基酸以氨基到羧基的取向从左到右书写。本文提供的标题不是本发明的各种方面的限制，可以参考说明书整体理解本发明的各种方面或实施方式。因此，下面紧接着定义的术语完全参考说明书全文定义。

本文所用的术语“多肽”意在包括单数形式“多肽”和复数形式“多肽”，指由酰胺键(也称肽键)线性连接的多个单体(氨基酸)所组成的分子。术语"多肽"指的是两个或更多个氨基酸的任何一条链或多条链，并且不表示特定长度的产物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或其它任何用于指两个或多个氨基酸的一条或多条链的术语均包含于“多肽”的定义内，术语“多肽”可与任意这些术语替代或互换使用。术语“多肽”还指多肽表达后修饰的产物，所述修饰包括但不限于糖基化、乙酰基化、磷酸化、酰胺化，和通过已知保护/阻断基团衍生化、蛋白酶切割或非天然产生氨基酸修饰。多肽可由生物来源衍生或由重组技术产生，但不必定由指定核酸序列翻译而来。其可以任何方式产生，包括通过化学合成。

本文公开的多肽的大小可以是约3个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、50个或更多个、75个或更多个、100个或更多个、200个或更多个、500个或更多个、1,000个或更多个或者2,000个或更多个氨基酸。多肽可具有确定的三维结构，但它们不必定具有这种结构。具有确定三维结构的多肽被称为折叠多肽，不具有确定三维结构但能采用大量不同构象的多肽被称为非折叠多肽。本文所用的术语糖蛋白指偶联于至少一个糖部分的蛋白质，所述糖部分通过某一氨基酸如丝氨酸或天冬酰胺的含氧或含氮侧链连接于蛋白质。

“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物指不处于其天然环境中的多肽。没有规定的具体纯化水平。例如，可从其自然或天然环境中移出分离多肽。在宿主细胞中表达的重组产生多肽和蛋白质被认为是如本文公开的分离的，通过任何合适技术分离、分级，或者部分或基本上纯化的天然或重组多肽也如此。

本文中所用的术语“非天然产生的多肽”或其任何语法变化形式，是条件性的限定，其明确地排除，但仅排除，被法官或管理部门或司法机关或可能会被法官或管理部门或司法机关确定或解释为“天然产生的”那些多肽形式。

本文公开的其它多肽是前述多肽的片段、衍生物、类似物或变体，及其任何组合。本文所述的术语"片段"、"变体"、"衍生物"和"类似物"包括保持对应的原始抗体或多肽的至少一些性质(例如，特异性结合至抗原)的任何多肽。除本文他处讨论的具体抗体片段外，多肽的片段还包括，例如，蛋白酶水解片段以及缺失片段。例如，多肽的变体包括如上所述的片段，以及因氨基酸取代、缺失或插入而具有改变的氨基酸序列的多肽。在某些方面中，变体可以是非天然产生的。可使用本领域已知的诱变技术生成非天然产生变体。变体多肽可包含保守或非保守性氨基酸取代、缺失或添加。衍生物是已经改变从而显示原始多肽上不存在的其它特征的多肽。例子包括融合蛋白。多肽变体在本文中也可称作“多肽类似物”。本文所用的多肽的"衍生物"还可指：具有通过功能侧基的反应经由化学方法衍生的一个或多个氨基酸的对象多肽。“衍生物”还包括含有20种标准氨基酸中的一个或多个衍生形式的那些肽。例如，4-羟基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羟基赖氨酸可取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可取代组氨酸；高丝氨酸可取代丝氨酸；且鸟氨酸可取代赖氨酸。

“保守性氨基酸取代”是其中一个氨基酸被具有相似侧链的另一个氨基酸替代的情况。本领域中已定义了具有类似侧链的氨基酸的家族，包括碱性侧链(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，苯丙氨酸取代酪氨酸是保守取代。在某些实施方式中，本发明的多肽和抗体的序列中的保守取代不废除包含所述氨基酸序列的多肽或抗体与所述结合分子结合的抗原的结合。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的(参见，例如，Brummell等，Biochem.32:1180-1 187(1993)；Kobayashi等，Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:.412-417(1997))。

术语“多核苷酸”意在包括单个核酸和多个核酸，指分离的核酸分子或构建物，例如信使RNA(mRNA)、cDNA或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常规磷酸二酯键或非常规键(如酰胺键，如肽核酸(PNA)中发现的酰胺键)。术语“核酸”或“核酸序列”指多核苷酸中存在的任何一种或多种核酸区段，如DNA或RNA片段。

"分离的"核酸或多核苷酸意为与其原始环境分离的核酸或多核苷酸的任何形式。例如，凝胶纯化的多核苷酸，或编码载体中所含多肽的重组多核苷酸将被视作是“分离的”。并且，认为已被工程改造以具有供于克隆的限制性位点的多核苷酸区段，例如，PCR产物，是“分离的”。分离的多核苷酸的其它示例包括在异源性宿主细胞中维持的重组多核苷酸或在非原始溶液(例如缓冲液或盐水)中(部分地或基本上地)纯化的重组多核苷酸。分离的RNA分子包括多核苷酸的体内或体外RNA转录本，其中，所述转录本不是自然中存在的转录本。分离的多核苷酸或核酸还包括通过合成方式产生的这样的分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可包括调节元件例如启动子、核糖体结合位点，或转录终止子。

本文中所用的术语“非天然产生的多核苷酸”或其任何语法变化形式，是条件性的限定，其明确地排除，但仅排除，被判定机构或管理部门或司法机关或可能会被被判定机构或管理部门或司法机关确定或解释为“天然产生的”那些核酸或多核苷酸形式。

本文所用的术语“编码区”指由翻译成氨基酸的密码子组成的核酸部分。虽然“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)不翻译成氨基酸，但它可被认为是编码区的一部分，而任何侧接序列如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等均不是编码区的一部分。两个或更多个编码区可存在于单一多核苷酸构建物中，例如在单一载体上，或者在分开的多核苷酸构建物中，例如在单独(不同)载体上。此外，任何载体均能包含单一编码区，或可包含两个或更多个编码区，例如，单一载体可分开编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。此外，载体、多核苷酸或核酸可包括异源性的编码区，其融合或未融合至另一个编码区。异源性的编码区包括不限于，编码专有的元件或基序(例如分泌信号肽或异源性的功能结构域)的那些。

在某些实施方式中，所述多核苷酸或核酸是DNA。对DNA而言，包含多肽编码核酸的多核苷酸通常包含启动子和/或其它转录或翻译控制元件，这些元件与一个或多个编码区操作性连接。操作性连接指当基因产物如多肽的编码区与一个或多个调控序列以此方式连接时，将该基因产物的表达置于该调控序列的影响或控制下。如果启动子功能的诱导使编码所需基因产物的mRNA转录，且如果两个DNA片段间连接的属性不干扰表达调控序列指导基因产物表达或不干扰转录DNA模板的能力，则两个DNA片段(如多肽编码区及其相连的启动子)“操作性连接”。因此，如果启动子能够影响核酸的转录，则启动子区域与多肽编码核酸操作性连接。启动子可以是在预定细胞中指导DNA实质转录的细胞特异性启动子。启动子以外的其它转录控制元件如增强子、操纵子、阻遏物和转录终止信号，能与多核苷酸可操作连接以指导细胞特异性转录。

多种转录控制区对于本领域技术人员而言是已知的。它们包括但不限于在脊椎动物细胞中发挥作用的转录控制区，例如但不限于，来自巨细胞病毒(立即早期启动子，与内含子-A联用)、猿病毒40(早期启动子)和逆转录病毒(如劳氏肉瘤病毒)的启动子和增强子区段。其它转录控制区包括源自脊椎动物基因的那些，例如肌动蛋白、热激蛋白、牛生长激素和兔β-球蛋白，以及能够控制真核细胞中的基因表达的其它序列。其它合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导型启动子(例如，通过干扰素或白介素诱导的启动子)。

类似地，本领域普通技术人员了解各种翻译控制元件。它们包括但不限于：核糖体结合位点、翻译起始和终止密码子以及衍生自小核糖核酸病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也称为CITE序列)。

在其它实施方式中，多核苷酸可以是RNA，例如，信使RNA(mRNA)、转移RNA或核糖体RNA的形式。

多核苷酸和核酸编码区可与编码分泌或信号肽的其它编码区相关联，所述编码分泌或信号肽引导本文所述的多核苷酸编码的多肽的分泌。根据信号假说，哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，一旦生长的蛋白质链跨粗面内质网的输出启动，所述序列从成熟蛋白质上切除。本领域普通技术人员了解，脊椎动物细胞分泌的多肽可具有融合于所述多肽N末端的信号肽，它们从完整或“全长”多肽上切割产生分泌或“成熟”形式的多肽。在某些实施方式中，使用天然信号肽，例如免疫球蛋白重链或轻链信号肽，或者使用仍然能够指导与其操作性相连多肽分泌的该序列的功能衍生物。或者，可采用异源性的哺乳动物信号肽，或其功能衍生物。例如，野生型前导序列可用小鼠β-葡萄糖醛酸酶或人组织纤溶酶原激活剂(TPA)的前导序列取代。

本文中所用的术语“TNF受体蛋白超家族”、“TNF超家族”、“TNF受体家族”、“TNF受体”或此类短语的任何组合，指的是在多种细胞和组织的表面上表达的肿瘤坏死因子跨膜受体蛋白的家族。该超家族的家族成员包括，在通过配体结合活化之后触发其中表达所述受体蛋白的细胞中的凋亡、增殖和/或形态发生的那些。活化后触发凋亡的TNF超家族受体蛋白成员包括，但不限于如下受体：TNFR1(DR1)、TNFR2、TNFR1/2、CD40(p50)、Fas(CD95、Apo1、DR2)、CD30、4-1BB(CD137、ILA)、TRAILR1(DR4、Apo2)、TRAILR2(DR5)、TRAILR3(DcR1)、TRAILR4(DcR2)、OPG(OCIF)、TWEAKR(FN14)、LIGHTR(HVEM)、DcR3、DR3、EDAR和XEDAR。活化后触发增殖的TNF超家族受体蛋白成员包括但不限于如下受体：TNFR1/2、GITR(AITR)、TACI、BCMA、TWEAKR(FN14)、RANK(TRANCER)、CD27、CD40(p50)、OX40(CD134)、LT-βR、TNFR1(DR1)和TNFR2。据信活化后触发形态发生的TNF超家族受体蛋白成员包括，但不限于如下受体：Fas(CD95、Apo1、DR2)、TRAILR1(DR4、Apo2)、DR5(TRAILR2)、TRAILR3(DcR1)、TRAILR4(DcR2)、OPG(OCIF)、CD40(p50)、EDAR、XEDAR和TNFR1/2。

本文公开了某些结合分子或其抗原结合片段、变体或衍生物，其结合至某些TNF超家族受体蛋白，由此诱发细胞凋亡。除非特定地述及全尺寸抗体，否则术语"结合分子"涵盖全尺寸抗体以及所述抗体的抗原结合亚基、片段、变体、类似物或衍生物，例如，以类似于抗体分子的方式结合抗原但采用不同的支架的工程改造的抗体分子或片段。

本文中所用的术语“结合分子”以其最宽泛的含义指特异性结合至受体(例如，表位或抗原决定簇)的分子。如本文进一步描述，结合分子可包含本文所述的多种“抗原结合结构域”之一。结合分子的非限制性示例是抗体或其保持抗原-特异性结合的片段。

本文中所用的术语“结合结构域”或“抗原结合结构域”指的是必需且足以特异性结合至表位的结合分子的区域。例如，“Fv”，例如，抗体的可变重链和可变轻链，作为两个分开多肽亚基或作为单一链，被视作是“结合结构域”。其它结合结构域包括，但不限于，源自骆驼科物种的抗体的可变重链(VHH)，或在纤连蛋白支架上表达的六个免疫球蛋白互补决定区(CDR)。本文所述的“结合分子”可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个“抗原结合结构域”。

术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文中可互换使用。抗体(或其片段、变体或衍生物，如本文所述)包括：至少重链的可变区(对于骆驼科物种而言)或至少重链和轻链的可变区。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构是相对较好地了解的。参见例如，Harlow等，《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual)(冷泉港实验室出版社(Cold SpringHarbor Laboratory Press)，第2版，1988)。除非另有说明，术语“抗体”涵盖从抗体的小抗原结合片段到全尺寸抗体的范围内的任何物质，例如，IgG抗体，其包括两个完整重链和两个完整轻链，IgA抗体，其包括四个完整重链和四个完整轻链，并且任选地包括J链和/或分泌型组分，或IgM抗体，其包括十个或十二个完整重链和十个或十二个完整轻链且任选地包括J链。

正如下文中更详细讨论，术语“免疫球蛋白”包括可通过生化性质区分的各种类型多肽。本领域技术人员应理解，重链分为gamma、mu、alpha、delta或epsilon(γ、μ、α、δ、ε)，其中还有一些亚类(如γ1-γ4或α1-α2)。该链的特性决定抗体“同种型”分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亚类(亚型)如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等已被充分表征，且已知赋予功能特化。根据本文公开内容，本领域技术人员能容易地区分这些免疫球蛋白各自的经修饰形式，从而，它们涵盖在本发明范围内。

轻链分类为kappa或lambda(κ、λ)。各重链类别可与κ或λ轻链结合。通常，轻链和重链互相共价结合，并且当由例如杂交瘤、B细胞或遗传工程改造的宿主细胞表达免疫球蛋白时，两条重链的“尾”部分通过共价二硫键或非共价连接结合在一起。在重链中，氨基酸从Y构型的分叉末端处的N-端到各条链的底部处的C-端。某些抗体(例如，IgG抗体)的基础结构包括两个重链亚基和两个轻链亚基，其通过二硫键共价连接以形成“Y”结构，也在本文中称为“H2L2”结构，或“结合单元”。

术语“结合单元”在本文中用于指结合分子，例如，抗体或其抗原结合片段，的部分，其对应于标准“H2L2”免疫球蛋白结构，即，两个重链或其片段和两个轻链或其片段。在例如其中所述结合分子是二价IgG抗体或其抗原结合片段的某些方面中，术语“结合分子”和“结合单元”是等同的。在例如其中所述结合分子是IgA二聚体、IgM五聚体或IgM六聚体的其它方面中，所述结合分子包含两个或更多个“结合单元”。分别地，在IgA二聚体的情况中是两个，或在IgM五聚体或六聚体的情况中是五个或六个。结合单元不必包括全长抗体重链和轻链，但通常将是二价的，即，将包括两个“结合结构域”，如下定义。本发明提供的某些结合分子是二聚的，并且包括两个二价结合单元，其包括IgA恒定区或其片段。本发明提供的某些结合分子是五聚或六聚的，并且包括五个或六个二价结合单元，其包括IgM恒定区或其片段。包含两个或更多个，例如，两个、五个或六个结合单元的结合分子，在本文中称为“多聚的”。

术语“价”、“二价”、“多价”和语法等同形式，指的是给定的结合分子或结合单元中的结合结构域的数量。如此，述及给定的结合分子，例如，IgM抗体或其片段，术语“二价”、“四价”和“六价”分别表示存在两个结合结构域、四个结合结构域，和六个结合结构域。在其中各结合单元是二价的典型的IgM源性的结合分子中，该结合分子本身可具有10或12价。二价或多价结合分子可以是单特异性的，即，所有的结合结构域均是相同的，或可以是双特异性的或多特异性的，例如，其中两个或更多个结合结构域是不同的，例如，结合至相同的抗原上的不同的表位，或结合至完全不同的抗原。

术语“表位”包括能够特异性结合至抗体的任何分子决定簇。在某些方面中，表位可包括分子的化学活性的表面基团(例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基基团)，而在某些方面中，表位可具有一定的三维结构特点和/或特定的电荷特点。表位是由抗体结合的靶标的区域。

术语“靶标”以最广泛的含义使用以包括可由结合分子结合的物质。靶标可以是，例如，多肽、核酸、碳水化合物、脂质或其它分子。此外，例如，“靶标”可以是包含可被结合分子结合的表位的细胞、器官或生物体。

轻链和重链都划分成结构和功能同源性的区域。从功能角度使用术语“恒定”和“可变”。在这方面，应理解可变轻(VL)链或可变重(VK)链部分的可变区决定抗原识别和特异性。相反，轻链的恒定区(CL)和重链的恒定区(例如，CH1、CH2或CH3)提供生物学特性，例如分泌、跨胎盘移动、Fc受体结合、补体结合等。按照习惯，恒定区结构域的编号随着远离抗原结合位点或抗体的氨基端而增加。N末端部分是可变区，并且C末端部分是恒定区；CH3(或者，在IgM的情况中，CH4)和CL结构域实际上分别包括重链和轻链的羧基端。

“全长IgM抗体重链”是这样的多肽，其以N末端向C末端的方向包括，抗体重链可变结构域(VH)、抗体重链恒定结构域1(CM1或Cμ1)、抗体重链恒定结构域2(CM2或Cμ2)、抗体重链恒定结构域3(CM3或Cμ3)，和抗体重链恒定结构域4(CM4或Cμ4)，其可包括尾片段。

“全长IgA抗体重链”是这样的多肽，其以N末端向C末端的方向包括，抗体重链可变结构域(VH)、抗体重链恒定结构域1(CA1或Cα1)、抗体重链恒定结构域2(CA2或Cα2)，和抗体重链恒定结构域3(CA3或Cα3)，其可包括尾片段。

如上所述，一个或多个可变区允许结合分子选择性地识别抗原上的表位并特异性地结合该表位。即，VL结构域和VH结构域或结合分子(例如，抗体)的互补决定区(CDR)的子集组合，以形成抗原结合结构域。更具体地，所述抗原结合结构域可由各VH和VL链上的三个CDR确定。某些抗体形成较大结构。例如，IgA可形成这样的分子，该分子包括两个H2L2结合单元和通过二硫键共价连接的J链，其还可与分泌型组分相关联，并且，IgM可形成这样的五聚或六聚分子，该分子包括五个或六个H2L2结合单元和任选的通过二硫键共价连接的J链。

抗体抗原结合结构域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是氨基酸的非连续短序列，其特异性地定位，以随着抗体在水性环境中采用其三维构型而形成结合结构域。结合结构域中的其余氨基酸称为“构架”区，显示较小的分子间差异。构架区主要采用β-片层构象，并且CDR形成连接β-片层结构且在某些情况下形成β-片层结构的部分的环。因此，构架区用于通过链间非共价相互作用形成为CDR提供正确方向位置的支架。由定位的CDR形成的结合结构域确定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。这种互补表面促进了抗体与其互补表位的非共价结合。分别组成CDR和构架区域的氨基酸，可由本领域普通技术人员通过任何给定的重或轻链可变区而容易地鉴定，因为它们已以多种不同的方式被定义(参见，"免疫学热门蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)"，Kabat,E.等，美国卫生及公共服务部(U.S.Department of Health and Human Services)，(1983)；和Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)，其通过引用其全文纳入本文)。

除非明确表述为相反的含义，否则在本领域内所使用和/或接受的某一术语有两种或多种定义的情况下，本文所用的术语定义应包括所有这些含义。具体示例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)描述在重链和轻链多肽的可变区内发现的非毗连抗原结合位点。这些具体的区域已被描述，例如，由Kabat等，美国卫生及公共服务部，"免疫学热门蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)"(1983)，和由Chothia等，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)，其通过引用纳入本文。Kabat和Chothia定义包括氨基酸在彼此比较时的重叠或子集。不过，除非另有说明，述及抗体或其变体的CDR的定义(或本领域普通技术人员已知的其它定义)意图落在本文定义或所用的术语范围之内。合适的氨基酸残基包括上文引用的各参考文献中定义的CDR，如下表1所示以作对比。涵盖具体CDR的确切氨基酸编号将根据CDR的序列和大小而变化。鉴于抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员能够常规地确定哪些氨基酸包含具体CDR。

表1CDR定义^*

	Kabat	Chothia
			VH CDR1	31-35	26-32
VH CDR2	50-65	52-58
			VH CDR3	95-102	95-102
VL CDR1	24-34	26-32
			VL CDR2	50-56	50-52
VL CDR3	89-97	91-96

^*表1中所有CDR定义的编号均按照Kabat等所述的编号规则(见下文)。

Kabat等也定义了适用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员能明确地将所述“Kabat编号系统”应用于任何可变区序列，而不依赖序列本身外的任何实验数据。本文所用的“Kabat编号”指Kabat等(1983)美国卫生与公众服务部，“免疫学热门蛋白质序列(Sequence of Proteins of Immunological Interest)”(1983)中所述的编号系统。除非明确注明采用Kabat编号系统，否则，对本发明的全部氨基酸序列采用连贯的编号。

结合分子，例如，抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，包括但不限于，多克隆、单克隆、人、人源化的或嵌合抗体、单一链抗体、表位-结合片段，例如，Fab、Fab'和F(ab')₂、Fd、Fvs、单链Fvs(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fvs(sdFv)、包含VL或VH结构域的片段，通过Fab表达文库产生的片段。ScFv分子是本领域已知的，并且描述于例如美国专利号5,892,019。

"特异性结合"一般表示，结合分子，例如，抗体或其片段、变体或衍生物通过其抗原结合结构域结合至表位，并且所述结合需要所述抗原结合结构域和所述表位之间的一些互补性。按照这一定义，当结合分子通过其抗原结合结构域与表位结合比与随机无关的表位结合更容易时，称该结合分子“特异性结合”该表位。本文中使用术语“特异性”定性分析某一抗体与某一表位结合的相对亲和性。例如，可认为结合分子“A”比结合分子“B”对给定表位具有更高特异性，或者可以说结合分子“A”以比对相关表位“D”的特异性更高的特异性或亲和性结合表位“C”。

可以说结合分子，例如，本文公开的抗体或其片段、变体或衍生物，以小于或等于5X 10^-2秒^-1、10^-2秒^-1、5X 10^-3秒^-1、10^-3秒^-1、5X 10^-4秒^-1、10^-4秒^-1、5X 10^-5秒^-1或10^-5秒^-1 5X10^-6秒^-1、10^-6秒^-1、5X 10^-7秒^-1或10^-7秒^-1的解离速率(k(off))结合靶标抗原。

可以说本文公开的结合分子，例如，抗体或抗原结合片段、变体或衍生物，以大于或等于10³M^-1秒^-1、5X 10³M^-1秒^-1、10⁴M^-1秒^-1、5X 10⁴M^-1秒^-1、10⁵M^-1秒^-1、5X 10⁵M^-1秒^-1、10⁶M^-1秒^-1或5X 10⁶M^-1秒^-1或10⁷M^-1秒^-1的结合速率(k(on))结合靶标抗原。

如果结合分子，例如，抗体或其片段、变体或衍生物，以一定程度上阻断参比抗体或抗原结合片段与该表位的结合的程度优先结合至该表位，则可以说，该结合分子，例如，抗体或其片段、变体或衍生物竞争性地抑制参比抗体或抗原结合片段与给定的表位的结合。可通过本领域已知的任意方法确定竞争性抑制，例如，竞争ELISA试验。可以说，结合分子竞争性地抑制参比抗体或抗原结合片段与给定表位的至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％的结合。

本文所用的术语“亲和性”指单独表位与例如免疫球蛋白分子的一个或多个结合结构域结合的强度量度。参见例如，Harlow等，《抗体：实验室手册》(Antibodies:ALaboratory Manual)(冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，第2版，1988)，第27-28页。本文中所用的术语"亲和力(avidity)"指的是结合结构域的群和抗体之间的复合物的总体稳定性。参见，例如，Harlow，第29-34页。亲合力既与群体中单独结合结构域与特定表位的亲和性相关，也与免疫球蛋白分子和抗原的价态相关。例如，二价单克隆抗体和具有高度重复表位结构的抗原例如多聚体之间的相互作用是具有高亲合力的一个例子。二价单克隆抗体与以高密度存在于细胞表面上的受体之间的相互作用也将具有高亲和力。

本文公开的结合分子或其抗原结合片段、变体或衍生物也可就其交叉反应性进行描述或说明。本文所用的术语“交叉反应性”指，结合分子(例如抗体或其片段、变体或衍生物)对某一种抗原具有特异性、与第二种抗原发生反应的能力；它是两种不同抗原性物质之间关联性的量度。因此，如果结合分子与诱导其形成的表位以外的其他表位结合，则具有交叉反应性。交叉反应性表位通常含有许多与诱导表位相同的互补结构特征，在某些情况下甚至比原始表位更匹配。

结合分子，例如，抗体或其片段、变体或衍生物还可就它们与抗原的结合亲和性来描述或说明。例如，结合分子可以不超过5x 10^-2M、10^-2M、5x 10^-3M、10^-3M、5x 10^-4M、10^-4M、5x10^-5M、10^-5M、5x 10^-6M、10^-6M、5x 10^-7M、10^-7M、5x 10^-8M、10^-8M、5x 10^-9M、10^-9M、5x 10^-10M、10^-10M、5x 10^-11M、10^-11M、5x 10^-12M、10^-12M、5x 10^-13M、10^-13M、5x 10^-14M、10^-14M、5x 10^-15M或10^-15M的解离常数或K_D结合至抗原。

包括单链抗体或其它结合结构域的抗体片段可单独存在或以如下一种或多种的组合的形式存在：铰链区、CH1、CH2、CH3或CH4结构域、J链，或分泌型组分。还包括抗原结合片段，其可包括一个或多个可变区与铰链区、CH1、CH2、CH3或CH4结构域、J链或分泌型组分中的一个或多个的任何组合。结合分子，例如，抗体或其抗原结合片段，可来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。所述抗体可以是人、鼠、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲鸵、马或鸡抗体。在另一个实施方式中，所述可变区可以是软骨鱼(condricthoid)来源(例如，来自鲨鱼)。本文中所用的"人"抗体包括，具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，且包括从人免疫球蛋白文库分离或来自一种或多种人免疫球蛋白的动物转基因的抗体，并且其可在一些示例中表达内源性免疫球蛋白，但一些则不是，如下文所述，例如，描述于Kucherlapati等的美国专利号5,939,598。

本文中所用的术语“重链亚基”包括这样的氨基酸序列，其源自免疫球蛋白重链、结合分子，例如，包含重链亚基的抗体，可包括如下至少一项：VH结构域、CH1结构域、铰链(例如，上部、中部和/或下部铰链区)结构域、CH2结构域、CH3结构域、CH4结构域，或其变体或片段。例如，结合分子，例如，抗体或其片段、变体或衍生物，除了VH结构域以外，还可包括但不限于：CH1结构域；CH1结构域，铰链和CH2结构域；CH1结构域和CH3结构域；CH1结构域，铰链和CH3结构域；或CH1结构域，铰链结构域，CH2结构域和CH3结构域。在某些方面中，结合分子，例如，抗体或其片段、变体或衍生物，除VH结构域以外，还可包括，CH3结构域和CH4结构域；或CH3结构域，CH4结构域和J链。此外，用于本发明的结合分子可缺乏某些恒定区部分，例如，CH2结构域的全部或部分。本领域普通技术人员应理解，可修饰这些结构域(例如重链亚基)，从而其氨基酸序列不同于原始免疫球蛋白分子。

本文所用的术语“轻链亚基”包括衍生自免疫球蛋白轻链的氨基酸序列。轻链亚基包括至少VL，并且还可包括CL(例如，Cκ或Cλ)结构域。

结合分子，例如，抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可就它们识别或特异性结合的表位或抗原部分进行描述或说明。靶抗原与抗体的抗原结合结构域特异性相互作用的部分是“表位”或“抗原决定簇”。靶抗原可包含单个表位，或至少两个表位，并可包括任意数量的表位，这取决于抗原的大小、构象和类型。

如前所述，各种免疫球蛋白类别的恒定区的亚基结构和三维构型是众所周知的。本文所用的术语“VH结构域”包括免疫球蛋白重链的氨基末端可变区，术语“CH1结构域”包括免疫球蛋白重链的第一(最靠氨基末端)恒定区结构域。CH1结构域邻近VH结构域，并且位于典型IgG重链分子的铰链区的氨基末端。

本文所用的术语“CH2结构域”包括这样的重链分子部分，其例如从IgG抗体的约氨基酸244延伸到氨基酸360，采用常规的编号方案(氨基酸244至360，Kabat编号系统；和氨基酸231-340，EU编号系统；参见Kabat EA等，同前)。CH3结构域从CH2结构域延伸至IgG分子的C末端并且包含约108个氨基酸。某些免疫球蛋白类别，例如，IgM，还包括CH4区。

本文中所用的术语“铰链区”包括在IgG、IgA和IgD重链中将CH1结构域接合至CH2结构域的重链分子的部分。该铰链区包含约25个氨基酸并且是柔性的，因此允许两个N末端抗原结合区域独立地移动。

本文所用的术语“二硫键”包括两个硫原子之间形成的共价键。氨基酸半胱氨酸包含可形成二硫键或桥接第二巯基基团的巯基基团。

本文所用的术语“嵌合抗体”指这样的抗体，其中免疫反应性区域或位点获自或衍生自第一物种，而恒定区(其可能是完整、一部分或修饰的)获自第二物种。在一些实施方式中，靶标结合区或位点将来自非人来源(例如，小鼠或灵长类)并且恒定区是人的。

术语“多特异性抗体”或“双特异性抗体”指的是在单一抗体分子中具有针对两个或更多个不同的表位的结合结构域的抗体。可构建除了标准抗体结构以外的具有两种结合特异性的其它结合分子。由双特异性抗体或多特异性抗体进行的表位结合可以是同时或相继的。三元杂交瘤(trioma)和杂合杂交瘤是可分泌双特异性抗体的细胞系的两个示例。双特异性抗体还可通过重组手段构建。(和Heiss,Future Oncol.6:1387-94(2010)；Mabry和Snavely,IDrugs.13:543-9(2010))。双特异性抗体也可以是双特异抗体(diabody)。

本文中所用的术语"工程改造的抗体"指的是这样的抗体，其中重链和轻链之一或两者中的可变结构域通过在CDR或构架区域的一个或多个氨基酸的至少部分替代而被改变。在某些方面中，来自具有已知特异性的抗体整个CDR可被移接到异源性抗体的构架区域中。虽然替代性的CDR可衍生自与产生构架区的抗体属于同一类或甚至亚类的抗体，但CDR仍可衍生自不同类别的抗体，例如，不同物种的抗体。将来自具有已知特异性的非人抗体的一个或多个“供体”CDR移植到人重链或轻链构架区内形成的工程改造的抗体在本文中称为“人源化抗体”。在某些方面中，并非全部CDR由来自供体可变区的完整CDR替代，而所述供体的抗原结合能力仍可被转移至受者可变结构域。鉴于例如美国专利号5,585,089、5,693,761、5,693,762和6,180,370中给出的解释，本领域技术人员完全有能力通过进行常规实验法或通过试验和误差检定来获得功能工程改造的或人源化的抗体。

本文所用的术语“工程改造的”包括通过合成手段(例如通过重组技术、体外肽合成，通过酶或化学偶联肽，或这些技术的一些组合)进行的核酸或多肽分子的操作。

本文中所用的术语"连接的"、"融合的"或"融合"或其它语法等同形式可互换使用。这些术语指通过包括化学偶联或重组在内的方式将两个或更多元件或组件连接在一起。“框内融合”指以维持原始ORF翻译读框的方式，将两个或多个多核苷酸开放阅读框(ORF)连接形成连续的较长ORF。因此，重组融合蛋白是包含两个或多个片段的单一蛋白质，所述片段对应原始ORF编码的多肽(这些片段在自然条件下通常不如此连接)。尽管因此阅读框在融合片段中是连续的，但片段仍可被物理或空间分隔，如框内接头序列。例如，编码免疫球蛋白可变区CDR的多核苷酸可框内融合，但用编码至少一个免疫球蛋白构架区或额外CDR区的多核苷酸间隔开，前提是“融合的”CDR作为连续多肽的一部分共同翻译。

本文中所用的术语“交联的”指的是两个或更多个分子通过第三分子接合在一起。例如，具有特异性结合至相同的抗原的两个结合结构域的二价抗体可“交联”该抗原的两个拷贝，例如，当它们表达在细胞上时。许多TNF超家族受体蛋白需要细胞表面上的三个或更多个受体的交联以供活化。TNF超家族受体蛋白的交联表示，例如，本文所述的结合分子与在细胞表面上表达的TNF超家族受体的接触，从而至少三个所述家族成员同时由一个或多个结合分子结合在一起，由此活化所述受体。

对于多肽而言，“线性序列”或“序列”是多肽中从氨基到羧基末端方向上氨基酸的顺序，在序列中彼此相邻的氨基酸是多肽一级结构中的毗连残基。多肽的部分处于在连续的多肽链中出现得较早的多肽的另一个部分的“氨基末端”或“N末端”。类似地，多肽的部分处于在连续的多肽链中出现得较晚的多肽的另一个部分的“羧基末端”或“C末端”。例如，在典型的抗体中，可变区位于恒定区的“N末端”，并且恒定区位于可变区的“C末端”。

本文所用的术语“表达”指基因生成生化物质如多肽的过程。该过程包括在细胞内基因功能存在的任何表现，包括但不限于，基因敲除以及瞬时表达和稳定表达。它包括但不限于，基因转录成RNA，例如信使RNA(mRNA)，和将这类mRNA翻译成多肽。如果所需的最终产物是生化物质(biochemical)，则表达包括产生该生化物质和任何前体。基因的表达产生"基因产物"。本文中所用的基因产物可以是核酸，例如，通过基因转录产生的信使RNA，或由转录本翻译的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰的核酸，例如聚腺苷酸化，或具有翻译后修饰的多肽，如甲基化、糖基化、加入脂质、连接其它蛋白质亚基、经蛋白酶水解切割等。

术语例如"治疗(treating)"或"治疗(treatment)"或"以治疗(to treat)"或"缓解(alleviating)"或"以缓解(to alleviate)"指的是治愈、减缓、减少现存的已经诊断的病理病症或紊乱的症状，和/或截停或减缓现存的已经诊断的病理病症或紊乱的进展的治疗性措施。术语例如“预防(prevent)”、“预防(prevention)”、“避免”、“遏制(deterrence)”等指的是预防未经诊断的目标病理病症或紊乱的进展的预防性的或预防用的措施。因此，需要治疗的那些(对象)可包括已经患有疾病的那些(对象)；易于患有疾病的那些(对象)；和需要预防疾病的那些(对象)。

“对象”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”指需要诊断、预防或治疗的任何对象，特别是哺乳动物对象。哺乳动物对象包括人、家养动物、家畜和动物园动物、竞技动物或宠物，如犬、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、猪、奶牛、熊等。

本文中所用的短语例如“将受益于治疗的对象”和“有治疗需求的动物”包括这样的对象，例如哺乳动物对象，其将受益于结合分子例如包含一个或多个抗原结合结构域的抗体的给予。所述结合分子，例如，抗体，可用于，例如，诊断性操作方法和/或用于疾病的治疗或预防。

IgM结合分子

IgM是通过B细胞响应抗原刺激产生的第一种免疫球蛋白，并且以约1.5mg/ml在血清中以5天的半衰期存在。IgM是五聚或六聚分子。IgM结合单元包括两个轻和两个重链。尽管IgG包含三个重链恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，IgM的重(μ)链还包含第四恒定结构域(CH4)，其包括C末端“尾片段”。人IgM恒定区通常包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。人Cμ1区的范围是SEQ ID NO:74的约氨基酸5-约氨基酸102；人Cμ2区的范围是SEQ ID NO:74的约氨基酸114-约氨基酸205，人Cμ3区的范围是SEQ ID NO:74的约氨基酸224-约氨基酸319，Cμ4区的范围是SEQ ID NO:74的约氨基酸329-约氨基酸430，并且所述尾片段的范围是SEQ IDNO:74的约氨基酸431-约氨基酸453。SEQ ID NO:74如下所示：

GSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITLSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLICQATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLGQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVPDQDTAIRVFAIPPSFASIFLTKSTKLTCLVTDLTTYDSVTISWTRQNGEAVKTHTNISESHPNATFSAVGEASICEDDWNSGERFTCTVTHTDLPSPLKQTISRPKGVALHRPDVYLLPPAREQLNLRESATITCLVTGFSPADVFVQWMQRGQPLSPEKYVTSAPMPEPQAPGRYFAHSILTVSEEEWNTGETYTCVAHEALPNRVTERTVDKSTGKPTLYNVSLVMSDTAGTCY

五个IgM结合单元可与另一个小多肽链(J链)形成复合物，以形成IgM抗体。人J链包含氨基酸序列SEQ ID NO:76。在没有J链的情况下，IgM结合单元通常组装成六聚体。尽管不希望受理论限制，认为IgM结合单元组装成五聚或六聚结合分子涉及Cμ3和Cμ4结构域。因此，本发明提供的五聚或六聚结合分子通常包括IgM恒定区，其包括至少Cμ3和Cμ4结构域。SEQ ID NO:76如下所示：

MKNHLLFWGVLAVFIKAVHVKAQEDERIVLVDNKCKCARITSRIIRSSEDPNEDIVERNIRIIVPLNNRENISDPTSPLRTRFVYHLSDLCKKCDPTEVELDNQIVTATQSNICDEDSATETCYTYDRNKCYTAVVPLVYGGETKMVETALTPDACYPD

IgM重链恒定区还可包括Cμ2结构域或其片段、Cμ1结构域或其片段，和/或其它IgM重链结构域。在某些方面中，本文提供的结合分子可包括完整IgM重(μ)链恒定结构域，例如，SEQ ID NO:74或其变体、衍生物或类似物。

五聚或六聚TNF超家族结合分子

本发明提供五聚或六聚结合分子，即，具有如本文定义的五个或六个“结合单元”的结合分子，其可特异性结合至一个或多个TNF超家族受体蛋白，例如，DR5。相较于由单一结合单元组成的结合分子，例如，二价IgG抗体，本文提供的结合分子可具有改善的结合特点或生物活性。例如，五聚或六聚结合分子可更高效地交联细胞(例如，肿瘤细胞)表面上的三个或更多个TNF超家族受体分子，由此促进所述细胞的凋亡。

本文提供的结合分子可同样地具有与由合成或嵌合结构组成的多价结合分子不同的特点。例如，相对于包含嵌合恒定区或合成结构的结合分子，人IgM恒定区的应用可提供减少的免疫原性，和由此增加的安全性。此外，基于IgM的结合分子可一致地形成六聚或五聚寡聚体，导致同源性更高的表达产物。更优的补体结合也可以是基于IgM的结合分子的有利的效应物功能。

在某些方面中，本发明提供五聚或六聚结合分子，其分别包含五个或六个二价结合单元，其中各结合单元包括两个IgM重链恒定区或其片段。在某些方面中，所述两个IgM重链恒定区是人重链恒定区。

如果所述本文提供的结合分子是五聚的，则该结合分子还可包含J链，或其片段，或其变体。

IgM重链恒定区可包括Cμ1结构域、Cμ2结构域、Cμ3结构域和/或Cμ4结构域中的一个或多个，限制条件是，所述恒定区可在该结合分子中提供所需功能，例如，与第二IgM恒定区相关联以形成结合结构域，或与其它结合单元相关联以形成六聚体或五聚体。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgM重链恒定区或其片段各包含Cμ3结构域或其片段、Cμ4结构域或其片段、尾片段(TP)或其片段，或Cμ3结构域Cμ结构域，和TP或其片段的任何组合。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgM重链恒定区或其片段还各自包含Cμ2结构域或其片段、Cμ1结构域或其片段，或Cμ1结构域或其片段和Cμ2结构域或其片段。

在某些方面中，给定的结合单元中的两个IgM重链恒定区各自与抗原结合结构域，例如抗体的Fv部分，例如，人或鼠抗体的VH和VL相关联，其中，所述VL可以与轻链恒定区相关联。本文提供的结合分子中，所述结合分子的至少一个抗原结合结构域是TNF超家族受体蛋白结合结构域，即，可特异性结合至TNF受体蛋白超家族的成员(例如，人DR5)的结合结构域。

IgA结合分子

IgA在粘膜免疫中起关键作用，并且占产生的总免疫球蛋白的约15％。IgA是单体或二聚分子。IgA结合单元包括两个轻和两个重链。IgA包含三个重链恒定结构域(Cα1、Cα2和Cα3)，并且包括C末端“尾片段”。人IgA具有两个亚型，IgA1和IgA2。人IgA1恒定区通常包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。人Cα1区的范围是SEQ ID NO:78的约氨基酸6-约氨基酸98；人Cα2区的范围是SEQ ID NO:78的约氨基酸125-约氨基酸220，人Cα3区的范围是SEQ ID NO:78的约氨基酸228-约氨基酸330，并且所述尾片段的范围是SEQ ID NO:78的约氨基酸331-约氨基酸352。人IgA2恒定区通常包含氨基酸序列SEQ ID NO:79。人Cα1区的范围是SEQ IDNO:79的约氨基酸6-约氨基酸98；人Cα2区的范围是SEQ ID NO:79的约氨基酸112-约氨基酸207，人Cα3区的范围是SEQ ID NO:79的约氨基酸215-约氨基酸317，并且所述尾片段的范围是SEQ ID NO:79的约氨基酸318-约氨基酸340。SEQ ID NO:78和79如下所示：

SEQ ID NO:78

ASPTSPKVFPLSLCSTQPDGNVVIACLVQGFFPQEPLSVTWSESGQGVTARNFPPSQDASGDLYTTSSQLTLPATQCLAGKSVTCHVKHYTNPSQDVTVPCPVPSTPPTPSPSTPPTPSPSCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGVTFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAEPWNHGKTFTCTAAYPESKTPLTATLSKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY

SEQ ID NO:79

ASPTSPKVFPLSLDSTPQDGNVVVACLVQGFFPQEPLSVTWSESGQNVTARNFPPSQDASGDLYTTSSQLTLPATQCPDGKSVTCHVKHYTNPSQDVTVPCPVPPPPPCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGATFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAQPWNHGETFTCTAAHPELKTPLTANITKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRMAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY

两个IgA结合单元可与两个其它多肽链，J链(SEQ ID NO:76)和分泌型组分(前体，SEQ ID NO:80，成熟，SEQ ID NO:81)形成复合物，以形成分泌IgA(sIgA)抗体。尽管不希望受理论限制，认为IgA结合单元组装成二聚sIgA结合分子涉及Cα3和尾片段结构域。因此，本发明提供的二聚sIgA结合分子通常包括IgA恒定区，其包括至少Cα3和尾片段结构域。SEQID NO:80和SEQ ID NO:81如下所示：

SEQ ID NO:80:

MLLFVLTCLLAVFPAISTKSPIFGPEEVNSVEGNSVSITCYYPPTSVNRHTRKYWCRQGARGGCITLISSEGYVSSKYAGRANLTNFPENGTFVVNIAQLSQDDSGRYKCGLGINSRGLSFDVSLEVSQGPGLLNDTKVYTVDLGRTVTINCPFKTENAQKRKSLYKQIGLYPVLVIDSSGYVNPNYTGRIRLDIQGTGQLLFSVVINQLRLSDAGQYLCQAGDDSNSNKKNADLQVLKPEPELVYEDLRGSVTFHCALGPEVANVAKFLCRQSSGENCDVVVNTLGKRAPAFEGRILLNPQDKDGSFSVVITGLRKEDAGRYLCGAHSDGQLQEGSPIQAWQLFVNEESTIPRSPTVVKGVAGGSVAVLCPYNRKESKSIKYWCLWEGAQNGRCPLLVDSEGWVKAQYEGRLSLLEEPGNGTFTVILNQLTSRDAGFYWCLTNGDTLWRTTVEIKIIEGEPNLKVPGNVTAVLGETLKVPCHFPCKFSSYEKYWCKWNNTGCQALPSQDEGPSKAFVNCDENSRLVSLTLNLVTRADEGWYWCGVKQGHFYGETAAVYVAVEERKAAGSRDVSLAKADAAPDEKVLDSGFREIENKAIQDPRLFAEEKAVADTRDQADGSRASVDSGSSEEQGGSSRALVSTLVPLGLVLAVGAVAVGVARARHRKNVDRVSIRSYRTDISMSDFENSREFGANDNMGASSITQETSLGGKEEFVATTESTTETKEPKKAKRSSKEEAEMAYKDFLLQSSTVAAEAQDGPQEA

SEQ ID NO:81:

KSPIFGPEEVNSVEGNSVSITCYYPPTSVNRHTRKYWCRQGARGGCITLISSEGYVSSKYAGRANLTNFPENGTFVVNIAQLSQDDSGRYKCGLGINSRGLSFDVSLEVSQGPGLLNDTKVYTVDLGRTVTINCPFKTENAQKRKSLYKQIGLYPVLVIDSSGYVNPNYTGRIRLDIQGTGQLLFSVVINQLRLSDAGQYLCQAGDDSNSNKKNADLQVLKPEPELVYEDLRGSVTFHCALGPEVANVAKFLCRQSSGENCDVVVNTLGKRAPAFEGRILLNPQDKDGSFSVVITGLRKEDAGRYLCGAHSDGQLQEGSPIQAWQLFVNEESTIPRSPTVVKGVAGGSVAVLCPYNRKESKSIKYWCLWEGAQNGRCPLLVDSEGWVKAQYEGRLSLLEEPGNGTFTVILNQLTSRDAGFYWCLTNGDTLWRTTVEIKIIEGEPNLKVPGNVTAVLGETLKVPCHFPCKFSSYEKYWCKWNNTGCQALPSQDEGPSKAFVNCDENSRLVSLTLNLVTRADEGWYWCGVKQGHFYGETAAVYVAVEERKAAGSRDVSLAKADAAPDEKVLDSGFREIENKAIQDPR

IgA重链恒定区还可包括Cα2结构域或其片段、Cα1结构域或其片段，和/或其它IgA重链结构域。在某些方面中，本文提供的结合分子可包括完整IgA重(α)链恒定结构域(例如，SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79)或其变体、衍生物或类似物。

二聚TNF超家族受体结合分子

本发明提供二聚结合分子，例如，具有本文定义的两个IgA“结合单元”的结合分子，其可特异性结合至一个或多个TNF超家族受体蛋白，例如，DR5。相较于由单一结合单元组成的结合分子，例如，二价IgG抗体，本文提供的结合分子可具有改善的结合特点或生物活性。例如，IgA结合分子可更高效地交联细胞(例如，肿瘤细胞)表面上的三个或更多个TNF超家族受体，由此促进所述细胞的凋亡。此外，IgA结合分子可到达粘膜位点，提供本文提供的结合分子的更大的组织分布。基于IgA的结合分子的应用可允许，例如，本文提供的结合分子的更大的组织分布。粘膜分布可有益于某些癌症，例如，肺癌、卵巢癌、结直肠癌，或鳞状细胞癌。同样地，本文提供的二聚结合分子可具有可与包含五个或六个结合单元的结合分子(例如，六聚或五聚IgM抗体)区分开的结合特点或生物活性。例如，二聚结合分子将更小，从而能够，例如，实现实体肿瘤中更好的组织穿透。

在某些方面中，本发明提供二聚结合分子，其包含两个二价结合单元，其中各结合单元包括两个IgA重链恒定区或其片段。在某些方面中，所述两个IgA重链恒定区是人重链恒定区。

本文提供的二聚IgA结合分子还可包含J链，或其片段，或其变体。本文提供的二聚IgA结合分子还可包含分泌型组分，或其片段，或其变体。

IgA重链恒定区可包括Cα1结构域、Cα2结构域和/或Cα3结构域中的一个或多个，限制条件是，所述恒定区可在该结合分子中发挥所需功能，例如，与轻链恒定区相关联以促进抗原结合结构域的形成，或与另一个IgA结合单元相关联以形成二聚结合分子。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgA重链恒定区或其片段各自包含Cα3结构域或其片段、尾片段(TP)或其片段，或Cα3结构域、TP或其片段的任何组合。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgA重链恒定区或其片段还各自包含Cα2结构域或其片段、Cα1结构域或其片段，或Cα1结构域或其片段和Cα2结构域或其片段。

在某些方面中，给定的结合单元中的两个IgA重链恒定区各自与抗原结合结构域，例如抗体的Fv部分，例如，人或鼠抗体的VH和VL相关联，其中，所述VL可以与轻链恒定区相关联。本文提供的结合分子中，所述结合分子的至少一个抗原结合结构域是TNF超家族受体蛋白结合结构域，即，可特异性结合至TNF受体蛋白超家族的成员(例如，人DR5)的结合结构域。

TNF超家族受体结合结构域

本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子可以是二聚、五聚或六聚的，其分别包含两个、五个或六个二价结合单元。所述结合单元可以是全长的或其保持结合功能的变体或片段。

各结合单元包含两个IgA或IgM重链恒定区或其片段，其各自与抗原结合结构域相关联。如上所述，抗原结合结构域是必需的且足以特异性结合至表位的结合分子的区域。本文所述的“结合分子”可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个“抗原结合结构域”。

本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可包括至少三个抗原结合结构域，其特异性且竞争性地结合至肿瘤坏死因子(TNF)超家族受体蛋白。如上所述，这些TNF超家族受体蛋白中的一些，在活化后，能诱导表达其结合的TNF超家族受体蛋白的细胞的凋亡。如目前所理解的，当多个受体蛋白结合到一起时，造成受体分子的交联，由此信号被传递跨过细胞膜进入表达TNF超家族受体蛋白的细胞的胞质，从而将发生凋亡。

本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可交联在细胞表面上表达的至少三个相同的TNF超家族受体蛋白。归因于TNF超家族受体蛋白的二聚、五聚或六聚性质，本文提供的结合分子可交联多达三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个TNF超家族受体蛋白，所述受体蛋白必须空间上彼此接近，由此促进它们的交联和活化。当本文提供的二价结合单元TNF超家族受体蛋白结合分子的全部五个或全部六个分别结合至单一细胞上的至多十个或十二个TNF超家族受体蛋白时，可发生受体的交联和活化。

因为所述结合单元各自是二价的，所以各结合分子可结合至多达10个(对于五聚结合分子而言)或12个(对于六聚结合分子而言)TNF超家族受体蛋白。

在经本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子的结合所致的受体活化之后，细胞可经历凋亡、活化或形态发生，如上所述，这取决于结合了该超家族的哪种受体。

在某些方面中，本文公开的二聚、五聚或六聚结合分子能以高于等同量的二价IgG抗体或其片段的效能诱导表达TNF超家族受体的细胞中的TNF超家族受体介导的凋亡，其还特异性地结合至并激动相同的TNF超家族受体蛋白。不希望受理论限制，因为提供结合分子是二聚、五聚或六聚的，并且因为各结合单元是二价的，所以所述结合分子能以更高效能诱导受体介导的先前关于该受体蛋白超家族所表征的功能，相较于任何单独的单一结合单元，例如等同的IgG结合单元而言。IgG结合单元是二价的，包含两个结合位点，但如先前的临床研究所示，该超家族的两个受体与单一IgG分子的结合在不添加其它组分(例如交联剂等)的情况下可能是无效的。

“效能”或“改善的结合特点”是指，实现给定的生物结果，例如，给定的试验，例如，基于ELISA或Western印迹的胱天蛋白酶试验、通过FACS分析所见的膜联蛋白-v染色，或在下文实例中提供的其它试验中，20％、50％或90％的TNF超家族受体蛋白的活化所需的给定的结合分子的最小的量。例如，当TNF超家族受体蛋白是在活化时造成其中它被活化的细胞的凋亡的受体蛋白时，效能可被表示为曲线，其中％细胞存活处于Y轴，而结合分子浓度(例如，以μg/ml或μM计)处于X轴。

因为本文提供的结合分子是二聚、五聚或六聚的，所以其可分别具有多达4、10或12个抗原结合结构域。各抗原结合结构域可特异性结合至并激动TNF超家族受体。此外，各抗原结合结构域可对TNF超家族受体蛋白的一个具体的表位具有特异性。在某些方面中，所述结合分子不与其它TNF超家族受体蛋白交叉反应。然而，在其它方面中，所述抗原结合结构域中的两个或更多个可对不同的表位和/或不同的TNF超家族受体蛋白具有特异性。

因此，单个的二聚、五聚或六聚结合分子可：a)同时结合许多相同的受体蛋白上的单一表位，b)结合同一相同的受体蛋白上的许多不同的表位，或c)可结合不同的TNF超家族受体蛋白上的不同的表位。在实施方式a)中，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子可结合相同的TNF超家族受体的多重拷贝，对于各相同的拷贝在相同位置处结合，由此形成所述受体蛋白在单一位置处的筏，并且可能增加受体蛋白被活化的可能性。在其它实施方式中，例如实施方式c)，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可用于接触多重不同的TNF超家族受体蛋白，由此通过多种被靶标的受体活化多于一个途径，以实现细胞中的所需生物响应。当然，在这些实施方式中，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子可接触并激动全部处于一种单一细胞上或处于多重细胞间的此类受体。

因此，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可包含三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个，或在六聚结合分子的情况中，包含多达十一个，或十二个抗原结合结构域，其特异性且竞争性地结合至在一个或多个细胞的表面上表达的一个或多个TNF超家族受体蛋白，由此诱导该一个或多个细胞中的意图的或所需的生物响应。

本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子的结合单元可以是人、人源化或嵌合免疫球蛋白结合单元。人源化免疫球蛋白序列的方法是本领域已知的。因此，编码二聚、五聚或六聚结合分子多肽的核苷酸序列可直接来自人序列，或可以是人源化的或嵌合的，即，由来自多种不同的物种的序列编码。

本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可特异性结合已知TNF超家族受体蛋白中的任何一种。这些受体蛋白可基于触发形态发生、凋亡或增殖的特定功能而被分组。因此，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子可以，例如，特异性结合至如下受体中的任何一个或多个：TNFR1(DR1)、TNFR2、TNFR1/2、CD40(p50)、Fas(CD95、Apo1、DR2)、CD30、4-1BB(CD137、ILA)、DR4(TRAILR1、Apo2)、DR5(TRAILR2)、DcR1(TRAILR3)、DcR2(TRAILR4)、OPG(OCIF)、TWEAKR(FN14)、LIGHTR(HVEM)、DcR3、DR3、EDAR和XEDAR。

在一个实施方式中，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子特异性且竞争性地结合至DR5但不特异性结合至其它受体，例如，DR4(TRAILR1、Apo2)、诱饵受体DcR1(TRAILR3)或诱饵受体DcR2(TRAILR4)。在某些方面中，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子可特异性且竞争性地结合至DR5，并且还可特异性结合至DR4。

表达TNF超家族受体蛋白的细胞可以是任何动物细胞。例如，在一个实施方式中，所述细胞是人细胞。例如，所述细胞可以是灵长类、啮齿类、犬、马等的任何一种或多种的细胞。此外，表达所述TNF超家族受体蛋白的细胞可以是癌细胞。即，所述细胞可以是恶性或良性肿瘤中的细胞。

本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可经遗传工程改造，从而其抗原结合结构域由已知特异性结合TNF超家族受体蛋白的序列编码。许多团队已经公开了单克隆抗体、经表征且已知特异性结合至TNF超家族受体(例如，DR5)的大多数IgG同种型的可变区的序列。已知特异性结合至DR5的非限制性免疫球蛋白可变区序列提供于表2和3。对于TNF受体蛋白超家族的其它成员具有特异性的其它单克隆抗体序列已被公开。本领域技术人员能够将这些公开的序列工程改造成免疫球蛋白结构，例如IgG、IgA、IgM结构，或其生物活性或功能片段(例如scFv片段等，如上所述)。用于将克隆的可变区遗传工程改造成为免疫球蛋白结构域，并且表达和纯化所述构建体的方法是公开的并且处于本领域技术人员的能力范围内。

因此，在某些方面中，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合结构域包含抗DR5 mAb的六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，或所述六个免疫球蛋白互补决定区在一个或多个CDR中具有一个、两个、三个、四个或五个单氨基酸取代，其包含：分别如下的VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ IDNO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ IDNO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；或ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72，或SEQ ID NO:73。

表2抗DR5抗体VH和VL序列

表3：抗DR5 ScFv序列

在某些方面中，DR5结合结构域包含VH和VL，其中，所述VH和VL包含分别与SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ IDNO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ IDNO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列；或者其中，所述VH和VL位于ScFv中，该ScFv包含与SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72，或SEQ ID NO:73至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列。

尽管本领域普通技术人员基于本发明可设想多种不同的二聚、五聚和六聚结合分子，并因而包括在本发明中，但在某些方面中，提供如上所述的结合分子，其中各结合单元包含两个IgA或IgM重链，其各包含位于IgA或IgM恒定区或其片段的氨基末端的VH，和两个免疫球蛋白轻链，其各包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

此外，在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元，包含或包括如上所述的DR5结合结构域中的两个。在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元中的，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的两个DR5结合结构域，可以彼此不同，或它们可以是相同的。

在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的所述两个IgA或IgM重链，是相同的。在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元，或至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的两个相同的IgA或IgM重链包含公开于表2和3的重链可变结构域氨基酸序列。

在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的两个轻链是相同的。在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元内的两个相同的轻链是κ轻链，例如，人κ轻链，或λ轻链，例如，人λ轻链。在某些方面中，所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元内的两个相同的轻链各自包含公开于表2和3的轻链可变结构域氨基酸序列。

在某些方面中，本发明提供的二聚、五聚或六聚结合分子的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元包含或各包含两个相同的IgA或IgM重链恒定区，其各自包含相同的公开于表2和3的重链可变结构域氨基酸序列，和两个相同的轻链，其各自包含相同的公开于表2和3的重链可变结构域氨基酸序列。根据该方面，所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的DR5结合结构域可以是相同的。此外根据该方面，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子可包含如上所述的DR5结合结构域的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或至少十二个拷贝。在某些方面中，所述结合单元中至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个可以是相同的，并且，在某些方面中，所述结合单元可包含相同的结合结构域，例如，至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或至少十二个DR5结合结构域可以是相同的。

在某些方面中，相较于其它结合分子，本文提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子可具有有利的结构或功能性质。例如，相对于对应的具有相同的抗原结合结构域的二价结合分子，所述二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合。生物试验包括，但不限于ELISA和Western印迹胱天蛋白酶试验，和FACS分析，其利用指示凋亡细胞死亡的染色，例如膜联蛋白-v。在某些方面中，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子触发表达TNF超家族受体蛋白的细胞的凋亡的效能高于等同量的特异性结合至与该TNF超家族受体蛋白结合结构域相同的TNF超家族受体蛋白表位的单特异性的、二价IgG1抗体或其片段。在某些方面中，本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子触发表达DR5的细胞的凋亡的效能可高于等同量的单特异性的、二价抗DR5单克隆抗体或其片段，其中，所述抗体是或包含与提供于表2和3的抗体相同的VH和VL区域，例如，可那木单抗(Amgen)、多兹图单抗(Genentech)或来沙木单抗(HGS/GlaxoSmithKline)。

多核苷酸、载体和宿主细胞

本发明还提供多核苷酸，例如，分离的、重组和/或非天然产生的多核苷酸，其包含编码本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子的多肽亚基的核酸序列。“多肽亚基”表示可被独立地翻译的结合分子、结合单元或结合结构域的部分。示例包括但不限于，抗体VH、抗体VL、单链Fv、抗体重链、抗体轻链、抗体重链恒定区、抗体轻链恒定区，和/或其任何片段。

本发明还提供一种组合物，其包含两个或更多个多核苷酸，其中，所述两个或更多个多核苷酸可共同地编码如上所述的二聚、五聚或六聚结合分子。在某些方面中，所述组合物可包括编码IgA或IgM重链或其片段，例如，如上所述的人IgA或IgM重链的多核苷酸，其中，所述IgA或IgM重链包含TNF超家族受体蛋白结合结构域的至少VH，和，编码轻链或其片段，例如，人κ或λ轻链的多核苷酸，所述轻链包含TNF超家族受体蛋白结合结构域的至少VL。提供的多核苷酸组合物还可包括编码J链(例如，人J链)或其片段或其变体的多核苷酸。在某些方面中，本文提供的组合物所含的多核苷酸可位于两个或三个分开载体(例如，表达载体)上。本发明提供所述载体。在某些方面中，本文提供的组合物所含的多核苷酸中的两种或更多种可位于单一载体(例如，表达载体)上。本发明提供所述载体。

本发明还提供宿主细胞，例如，原核或真核宿主细胞，其包含编码本文提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子或其任何亚基的多核苷酸或两个或更多个多核苷酸，本文提供的多核苷酸组合物，或载体或两个、三个或更多个载体，其共同地编码本文提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子，或其任何亚基。在某些方面中，本发明提供的宿主细胞可表达本发明提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子，或其亚基。

在一个相关方面中，本发明提供产生本发明提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子的方法，其中，所述方法包括培养如上所述的宿主细胞，和，回收结合分子。

使用方法

本发明提供用于触发表达TNF超家族受体蛋白的细胞(例如，恶性或永生化的细胞)的凋亡的改进方法，该方法利用本文提供的二聚、五聚或六聚的基于IgA或基于IgM的TNF超家族受体蛋白结合分子。下述方法可利用结合分子，所述结合分子包含源自任何现存的抗TNF超家族受体蛋白抗体(包括但不限于提供于表2和3的抗体，或其变体、衍生物或类似物)的TNF超家族受体蛋白结合结构域，其中，相较于等同的二价抗体、片段、变体、衍生物或类似物，所述二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子可提供表达TNF超家族受体蛋白的细胞的改善的凋亡介导的细胞死亡。基于本发明，包含任何感兴趣的TNF超家族受体蛋白结合结构域的二聚、五聚或六聚的基于IgA或基于IgM的TNF超家族受体蛋白结合分子的构建完全在本领域普通技术人员的能力范围内。改善的活性可以，例如，允许使用减少的剂量，或可导致对于耐受原始抗体的杀伤的细胞的更有效杀伤。“耐受”表示抗TNF超家族受体蛋白抗体对于表达TNF超家族受体蛋白的细胞的任何程度的活性减少。

在某些方面中，本发明提供触发表达TNF超家族受体蛋白的细胞的凋亡、形态发生或增殖的方法，其中，所述方法包括，使表达TNF超家族受体蛋白的细胞与本文所述的二聚、五聚或六聚结合分子接触，其中，所述结合分子对于表达TNF超家族受体蛋白的细胞的凋亡、形态发生或增殖的触发的效能高于特异性结合至与该TNF超家族受体蛋白结合结构域相同的TNF超家族受体蛋白表位的等同量的单特异性的、二价IgG1抗体或其片段。

而在另一个方面，当以有效剂量给予有癌症治疗需求的对象时，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子可促进癌治疗，例如，通过减缓肿瘤生长、停止肿瘤生长，或减小现存肿瘤的尺寸来介导。本发明提供治疗癌症的方法，所述方法包括：给予有治疗需求的对象有效剂量的本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子，例如，本文提供的DR5结合分子。

在某些方面中，所述表达TNF超家族受体蛋白的细胞是永生化的细胞系，即癌细胞。术语“癌症”、“肿瘤”、“癌性”和“恶性”指或描述哺乳动物的生理病症，其典型特征是细胞生长失控。癌症的示例包括但不限于，癌，包括腺癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、黑素瘤、肉瘤和白血病。所述癌症的更具体的示例包括，鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、恶性胶质瘤、胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌例如肝细胞癌和肝细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌(包括激素介导的乳腺癌，参见，例如，Innes等(2006)Br.J.Cancer 94:1057-1065)、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)、涎腺癌、肾癌例如肾细胞癌和维尔姆斯瘤、基底细胞癌、黑素瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、食管癌、多种类型的头颈癌，包括但不限于，鳞状细胞癌，和粘蛋白来源的癌，例如，粘蛋白卵巢癌、胆管癌(肝)和乳头状肾细胞癌。粘膜分布，例如由本文提供的基于IgA的结合分子提供的粘膜分布，对于某些癌症，例如，肺癌、卵巢癌、结直肠癌或鳞状细胞癌而言是有益的。

本发明还提供一种预防或治疗有此需要的对象的癌症的方法，包括，给予该对象有效量的本文提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子或其抗原结合片段、包含所述结合分子的组合物或制剂，或本文所述的多核苷酸、载体或宿主细胞。

用于治疗癌症的组合物的有效剂量可根据许多不同的因素变化，包括给药方式、目标位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、给予的其他药物和治疗是预防性还是治疗性。在某些方面中，本文提供的治疗方法可提供增加的安全性，其中，相较于非癌细胞(例如，正常人肝细胞)，所述组合物对癌细胞显示更大的细胞毒性(例如，更大程度上地诱导凋亡)。通常，患者是人，但也可治疗非人哺乳动物(包括转基因哺乳动物)。可使用本领域技术人员已知的常规方法对治疗剂量进行滴定以优化安全性和功效。

本发明的组合物可以任何合适的方法给予，例如，肠胃外、心室内、经口、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻、口腔、阴道或通过植入型储器。本文所用术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、脑内和颅内注射或输注技术。

待治疗的对象可以是有治疗需要的任何动物，例如，哺乳动物，在某些方面中，对象是人对象。

以其最简形式，待给予对象的制剂是本文提供的二聚、五聚或六聚结合分子，或其抗原结合片段，其以常规的剂型给予，其可与本文他处所述的药物赋形剂、运载体或稀释剂联合给予。

本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子或其抗原结合片段可通过本文他处所述的任何合适的方法给予，例如，通过IV输注。在某些方面中，本文提供的TNF超家族受体蛋白结合分子或其抗原结合片段可被引入肿瘤，或肿瘤细胞附近。

全部类型的肿瘤均能受通过该方法的治疗，其包括但不限于，乳腺、肺、胰腺、卵巢、肾、结肠和膀胱的癌，以及黑素瘤、肉瘤和淋巴瘤。粘膜分布对于某些癌症，例如，肺癌、卵巢癌、结直肠癌或鳞状细胞癌可能是有益的。

用于本文提供的方法的二聚、五聚或六聚结合分子，是具有如本文定义的两个、五个或六个“结合单元”的结合分子，其可特异性结合至TNF超家族受体蛋白，例如，人DR5。在某些方面中，用于本文提供的方法的二聚、五聚或六聚结合分子分别包含两个、五个或六个二价结合单元，其中各结合单元包括两个IgA或IgM重链恒定区或其片段。在某些方面中，所述两个IgA或IgM重链恒定区是人重链恒定区。

其中，用于本文提供的方法的结合分子是基于二聚IgA的结合分子，所述结合分子还可包含J链，或其片段，或其变体，并且还可包含分泌型组分，或其片段，或其变体。

其中，用于本文提供的方法的结合分子是基于五聚IgM的结合分子，所述结合分子还可包含J链，或其片段，或其变体。

用于本文提供的方法的结合分子的IgA重链恒定区可包括Cα1结构域、Cα2结构域和/或Cα3结构域中的一个或多个，限制条件是，所述恒定区能够在该结合分子中发挥所需功能，例如，与轻链恒定区相关联以促进结合结构域的形成，或与另一个结合单元相关联以形成二聚体。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgA重链恒定区或其片段各包含Cα3结构域或其片段、尾片段(TP)或其片段，或Cα3结构域和TP或其片段的任何组合。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgA重链恒定区或其片段还各自包含Cα2结构域或其片段、Cα1结构域或其片段，或Cα1结构域或其片段和Cα2结构域或其片段。

用于本文提供的方法的结合分子的IgM重链恒定区可包括Cμ1结构域、Cμ2结构域、Cμ3结构域和/或Cμ4结构域中的一个或多个，限制条件是，恒定区可在该结合分子中发挥所需功能，例如，与轻链恒定区相关联以促进结合结构域的形成，或与其它结合单元相关联以形成六聚体或五聚体。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgM重链恒定区或其片段各包含Cμ3结构域或其片段、Cμ4结构域或其片段、尾片段(TP)或其片段，或Cμ3结构域Cμ4结构域，和TP或其片段的任何组合。在某些方面中，个体结合单元中的两个IgM重链恒定区或其片段还各自包含Cμ2结构域或其片段、Cμ1结构域或其片段，或Cμ1结构域或其片段和Cμ2结构域或其片段。

尽管本领域普通技术人员基于本发明可设想多种用于本文提供的方法的不同的二聚、五聚和六聚结合分子，并因而包括在本发明中，但在某些方面中，提供用于本文提供的方法的结合分子，其中各结合单元包含两个IgA或IgM重链，其各包含位于IgA或IgM恒定区或其片段的氨基末端的VH，和两个免疫球蛋白轻链，其各包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。

此外在某些方面中，用于本文提供的方法的结合分子的至少一个结合单元，或用于本文提供的方法的结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元，包含或含有如上所述的两个TNF超家族受体蛋白结合结构域。在某些方面中，用于本文提供的方法的所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的两个TNF超家族受体蛋白结合结构域可以彼此不同，或它们可以相同。

在某些方面中，用于本文提供的方法的结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的所述两个IgA或IgM重链，是相同的。

在某些方面中，用于本文提供的方法的所述结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元中的所述两个轻链是相同的。在某些方面中，用于本文提供的方法的结合分子的至少一个结合单元，或所述结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个，或至少六个结合单元内的两个相同的轻链是κ轻链，例如，人κ轻链，或λ轻链，例如，人λ轻链。

相较于其它结合分子，用于本文提供的方法的二聚、五聚或六聚TNF受体结合分子可具有有利的结构或功能性质。例如，相较于对应的结合分子(例如，来沙木单抗或其变体、类似物，或衍生物)，用于本文提供的方法的二聚、五聚或六聚TNF受体结合分子可在生物试验(体外或体内)中具有改善的活性。生物试验包括但不限于ELISA或Western印迹胱天蛋白酶试验和FACS分析，其采用指示凋亡的细胞死亡的染色，例如膜联蛋白-v。

药物组合物和给药方法

制备和给予本文提供的二聚、五聚或六聚TNF受体结合分子至有此需要的对象的方法是本领域人员熟知且能根据本发明容易地确定的。TNF受体结合分子的给予途径可以是，例如，经口、胃肠外、通过吸入或局部给予。本文所用的术语胃肠外包括例如，静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、直肠或阴道给药。尽管这些给予形式设想为合适的形式，但给予形式的其它示例将是注射用溶液，具体地是用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。合适的药物组合物可包含缓冲剂(如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)、表面活性剂(如聚山梨酯)，以及任选的稳定剂(如人白蛋白)等。

如本文所述，本文提供的二聚、五聚或六聚TNF受体结合分子可以药学上有效的量给予供于表达TNF超家族受体蛋白的癌的体内治疗。在这方面，应理解，将配制本发明公开的结合分子以利于给药并提高活性物质的稳定性。药物组合物因此可包含药学上可接受的、非毒性无菌运载体，例如生理盐水、非毒性缓冲液、防腐剂等。本文提供的二聚、五聚或六聚TNF受体结合分子的药学有效的量表示足以实现有效结合至靶标并实现治疗益处的量。合适的制剂描述于《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)马克出版公司(Mack Publishing Co.)第16版.(1980)。

本文提供的某些药物组合物可以可接受的剂型口服给予，包括例如，胶囊、片剂、水性悬液或溶液。也可通过鼻气溶胶或吸入来给予某些药物组合物。这类组合物可采用苯甲醇或其他合适的防腐剂，吸收促经济以增强生物可及性，和/或其他常规增溶剂或分散剂制备成盐水溶液。

可与运载体材料组合以产生单一剂型的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子的量将根据，例如，处理的对象和具体的给予模式而变化。可以单剂型、多剂型或在确立的时间段内的输注中给予组合物。也可调整给药方案，以提供最优所需响应(例如，治疗或预防性响应)。

保持在本发明范围内，本文提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子可以足够的量给予有治疗需求的对象以产生治疗作用。本文提供的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子可以常规的剂型给予该对象，该常规的剂型通过根据已知技术，将本发明的抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物与常规的药学上可接受的运载体或稀释剂相组合来制备。药学上可接受的运载体或稀释剂的形式和性质可根据其将要组合的活性成分的量、给予途径和其它熟知变量来描述。

"治疗有效剂量或量"或"有效量"意在表示，当给予时，就患有表达TNF超家族受体蛋白的癌的患者的治疗而言，获得积极治疗响应的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子的量。

本文公开的组合物的治疗有效剂量将根据许多不同的因素变化，包括给药方式、目标位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、给予的其他药物和治疗是预防性还是治疗性。在某些方面中，对象或患者是人，但也可治疗非人哺乳动物，包括转基因哺乳动物。可使用本领域技术人员已知的常规方法对治疗剂量进行滴定以优化安全性和功效。

待给予的二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子的量是本领域普通技术人员根据本发明而容易地确定的，无需过度实验。影响给予模式和二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子的相应量的因素影响包括但不限于，经历治疗个体的疾病严重性、病史、年龄、身高、体重、健康和身体状况。类似地，待给予的二聚、五聚或六聚TNF受体结合分子的量将取决于给予模式，以及对象将经历该试剂的单一剂量还是多重剂量。

本发明还提供二聚、五聚或六聚TNF超家族受体蛋白结合分子在制备用于治疗、预防，或控制癌的药物中的应用，其中，所述癌表达TNF超家族受体蛋白。

除非另有说明，本发明将采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，它们均在本领域技术范围内。这些技术在文献中已有充分描述。参见例如，Sambrook等编(1989)Molecular Cloning A Laboratory Manual(《分子克隆：实验室手册》)(第2版；冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press))；Sambrook等编(1992)Molecular Cloning:A Laboratory Manual(《分子克隆：实验室手册》)，(纽约州的冷泉港实验室出版社(Cold Springs HarborLaboratory，NY))；D.N.Glover编，(1985)DNA Cloning(《DNA克隆》)，第I和II卷；Gait编(1984)Oligonucleotide Synthesis(《寡核苷酸合成》)；Mullis等，美国专利号4,683,195；Hames和Higgins编(1984)Nucleic Acid Hybridization(《核酸杂交》)；Hames和Higgins编(1984)Transcription And Translation(《转录和翻译》)；Freshney(1987)Culture OfAnimal Cells(《动物细胞培养》)(ARL公司(Alan R.Liss，Inc.))；Immobilized Cells AndEnzymes(《固定的细胞和酶》)(IRL出版社)(1986)；Perbal(1984)A Practical Guide ToMolecular Cloning(《分子克隆实践指南》)；论文，Methods In Enzymology(《酶学方法》)(学术出版社公司(Academic Press，Inc.)，纽约州)；Miller和Calos编(1987)GeneTransfer Vectors For Mammalian Cells(《哺乳动物细胞的转基因载体》)(冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory))；Wu等编，Methods In Enzymology(《酶学方法》)，第154和155卷；Mayer和Walker编(1987)Immunochemical Methods In Cell AndMolecular Biology(《细胞和分子生物学中的免疫化学方法》)(学术出版社(AcademicPress)，伦敦)；Weir和Blackwell编(1986)Handbook Of Experimental Immunology(《实验免疫学手册》)，第I-IV卷；Manipulating the Mouse Embryo(《小鼠胚胎操作》)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y.)，(1986)；和Ausubel等(1989)Current Protocols in Molecular Biology(《新编分子生物学实验指南》)(马里兰州巴尔的摩的约翰韦利父子公司(John Wiley&Sons，Baltimore，Md.))。

抗体工程的一般原理可参见Borrebaeck编(1995)Antibody Engineering(《抗体工程》)(第2版；牛津大学出版社(Oxford Univ.Press))。蛋白质工程的一般原理可参见Rickwood等编(1995)Protein Engineering，A Practical Approach(《蛋白质工程，实践方法》)，(英国牛津的牛津大学出版社的IRL出版公司(IRL Press at Oxford Univ.Press，Oxford，Eng.))。抗体和抗体-半抗原结合的一般原理可参见：Nisonoff(1984)MolecularImmunology(《分子免疫学》)(第2版；马萨诸塞州桑德兰的辛奥尔联合公司(SinauerAssociates，Sunderland，Mass.))；和Steward(1984)Antibodies,Their Structure andFunction(《抗体的结构和功能》)(Chapman和Hall，纽约州纽约市)。此外，本领域已知且没有具体描述的免疫学标准方法可按照下述文献所述进行：Current Protocols inImmunology(《新编免疫学实验指南》)，纽约州的约翰韦利父子公司(John Wiley&Sons)；Stites等编(1994)Basic and Clinical Immunology(《基础和临床免疫学》)(第8版；Appleton和Lange，康涅狄格州的诺沃克(Norwalk，Conn.))和Mishell和Shiigi(编)(1980)Selected Methods in Cellular Immunology(《细胞免疫学的选用方法》)(W.H.弗里曼公司(W.H.Freeman and Co)，纽约州)。

列出免疫学通用原理的标准参考文献包括：Current Protocols in Immunology(《新编免疫学实验指南》)，约翰韦利父子公司(John Wiley&Sons)，纽约州；Klein(1982)J.，Immunology:The Science of Self-Nonself Discrimination(《免疫学：自身-非自身区别的科学》)(约翰韦利父子公司，纽约州)；Kennett等编(1980)Monoclonal Antibodies,Hybridoma:A New Dimension in Biological Analyses(《单克隆抗体，杂交瘤：生物学分析的新领域》)(普莱努公司(Plenum Press)，纽约州)；Campbell(1984)"MonoclonalAntibody Technology"in Laboratory Techniques in Biochemistry and MolecularBiology"(《生化和分子生物学实验室技术》中的“单克隆抗体技术”)，Burden等编(的埃尔斯威尔公司(Elsevere)，阿姆斯特丹)；Goldsby等编(2000)Kuby Immunnology(《库比免疫学》)(第4版；H.弗里曼公司(H.Freemand&Co.))；Roitt等(2001)Immunology(《免疫学》)(第6版；伦敦：摩兹比公司(Mosby))；Abbas等(2005)Cellular and Molecular Immunology(《细胞和分子免疫学》)(第5版；埃尔斯威尔健康科学分公司(Elsevier Health SciencesDivision))；Kontermann和Dubel(2001)Antibody Engineering(《抗体工程》)(施普林格公司(Springer Verlag))；Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning:A LaboratoryManual(《分子克隆：实验室手册》)(冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press))；Lewin(2003)Gene VIII(《基因VIII》)(普伦蒂斯霍尔出版社(Prentice Hall)2003)；Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual(《抗体：实验室手册》)(冷泉港出版社)；Dieffenbach和Dveksler(2003)PCR Primer(《PCR引物》)(冷泉港出版社)。

将上文中引用的所有参考文献以及其中引用的所有参考文献通过引用全文纳入本文。

通过说明的方式，而非限制性方式提供以下实施例。

实施例

实施例1：DR5表达概况

DR5细胞表面表达通过荧光活化的细胞分选(FACS)分析定量。简言之，FACS染色缓冲液(BD Pharmigen，目录号#554656)用于染色和清洗步骤。肿瘤细胞(1x10⁵-5x10⁵)用0.25μg的抗人DR5-PE(eBioscience，目录号#12-9908-42)或同种型-PE对照(eBioscience，目录号#12-4714-42)4℃染色15分钟，避光。细胞清洗两次，重悬于FACS染色缓冲液，并通过流式细胞术采集结果。图1A显示抗人DR5抗体的峰迁移(下图)，与同种型对照(上图)不同。图1B显示DR5表达在细胞系之间不同，其中在这组细胞系中，293F细胞表达最多的DR5。

实施例2：抗DR5 mAb特异性

特异性ELISA

该试验的目的是证明抗DR5 mAb结合至DR5，但非DR4或诱饵受体DcR1和DcR2。可溶性DR5、DR4、DcR1或DcR2蛋白(R&D Systems，目录号分别为#631-T2-100/CF，347-DR-100/CF，630-TR-100/CF，633-TR-100)以100mM NaHCO₃(pH 9.5)中的2μg/mL被覆在ELISA板上，4℃过夜。PBS中的2％BSA溶液用于封闭和抗体孵育步骤。板室温封闭1小时，然后用小鼠抗人DR5 mAb(Acris，抗体目录号#AM31206AF-N)室温孵育1小时。抗DR5 mAb 3倍连续稀释至浓度1-200ng/mL。用PBS加0.05％吐温20清洗3次之后，板用大鼠抗小鼠κ-HRP(SouthernBiotech，目录号#1180-05)室温孵育1小时，避光。用PBS加0.05％吐温20清洗3次之后，板用TMB基质(BD Biosciences，目录号#555214)室温孵育20分钟。反应用1M H₂SO₄终止，并采用微滴定酶标仪测定450nm的吸光度。图2显示，小鼠抗人DR5 mAb结合至DR5，但非DR4、DcR1或DcR2。

对于人抗DR5 mAb ELISA，1:2000小鼠抗人λ-HRP(Southern Biotech，目录号#9180-05)或1:6000小鼠抗人κ-HRP(Southern Biotech，目录号#9230-05)用于检测。

细胞结合

该实施例用于证实抗DR5 mAb结合至细胞。FACS染色缓冲液(BD Pharmigen，目录号#554656)用于染色和清洗步骤。Colo205细胞(2x10⁵细胞，来自ATCC编号#CCL-222)用10μg/mL的小鼠抗人DR5 mAb(Acris，抗体目录号#AM31206AF-N)或同种型对照(Invivogen，目录号#hcd20-mab9)4℃染色15分钟，避光。细胞清洗两次，然后以终稀释度1:200用山羊抗小鼠IgG-APC(Jackson ImmunoResearch，目录号#115-136-071)4℃染色15分钟，避光。细胞清洗两次，然后重悬于FACS染色缓冲液，并通过流式细胞术采集结果。结果示于图3，下图显示对于抗DR5 mAb观察到的峰迁移。

对于人抗DR5 mAb结合，山羊抗人IgG Fc-Alexa 647(Southern Biotech，目录号#2014-31)或兔抗人IgM-Alexa 647(Abcam，目录号#ab 150191)用于检测。

实施例3：抗DR5 mAb功能活性和细胞毒性试验

该实施例证明需要交联以实现DR5 mAb细胞毒性。Colo205细胞(ATCC目录号#CCL-222)以1x10⁴细胞/孔接种于96孔板并允许连接过夜。第二天，细胞用连续稀释的小鼠抗人DR5 mAb(Acris，抗体目录号#AM31206AF-N，R&D Systems，目录号#MAB631，BioLegend，目录号#307402，或Acris，抗体目录号#AM31205AF-N)处理，并37℃孵育24小时。比色读出：收获前三个小时，CCK-8细胞活力试剂(Dojindo CK04-13)以总反应体积的10％添加，并且板在37℃孵育剩下的3小时。在酶标仪评价450nm的吸光度。结果示于图4(空心圆形)，显示在不存在交联剂时，没有或几乎没有细胞毒性。

然后，试验如上所述进行，不同之处在于在用连续稀释的小鼠抗人DR5 mAb在室温预孵育细胞20分钟之后，以抗DR5 mAb的最高剂量的浓度的3倍添加山羊抗小鼠IgG1 Fc(Jackson ImmunoResearch，目录号#115-005-205)交联剂。结果示于图4(实心圆形)，显示采用交联剂的100％细胞毒性。

对于人抗DR5 mAb诱导的细胞毒性，抗人IgG Fc(Biolegend，目录号#409302)用作交联剂。或者，山羊抗人IgG加IgM(H+L)Fab2(Jackson ImmunoResearch，目录号#109-006-127)可用作交联剂。

发光读出：收获时，细胞效价Glo活力试剂(Promega G7572)以与孔中的培养基相等的体积添加。细胞裂解10分钟并在酶标仪上读取发光。

实施例4：凋亡试验

在存在或不存在交联剂的情况下的抗DR5-诱导的凋亡采用如下方法检测。Colo205细胞(1x10⁵细胞，来自ATCC，编号#CCL-222)用5μg/mL小鼠抗人DR5 mAb(Acris，抗体目录号#AM31206AF-N或R&D Systems，目录号#MAB631)或同种型对照(Invivogen，目录号#hcd20-mab9)37℃处理至多4小时。细胞用冷PBS清洗两次，然后用供应的结合缓冲液(BDPharmigen，目录号#559763)中的膜联蛋白V-PE和7-AAD(各1μL/样品)4℃染色15分钟，避光。膜联蛋白V和7-AAD分别用以检测凋亡的(x轴)和死细胞(y轴)，采用流式细胞术。未处理的细胞获得的结果示于图5的最左侧图(未处理的)，而采用抗人DR5 mAb在不存在交联剂的情况下获得的结果示于图5中从左计起的第二张图(仅抗DR5 IgG)。图中观察到没有或几乎没有变化。

然后，试验如上所述进行，不同之处在于在用连续稀释的小鼠抗人DR5 mAb在室温预孵育细胞20分钟之后，以比抗DR5 mAb的最高剂量增加3倍的浓度添加山羊抗小鼠IgG1Fc(Jackson ImmunoResearch，目录号#115-005-205)交联剂。图5中从左计起第三张图显示采用仅交联剂的结果(无凋亡)。图5的最右侧图显示显著膜联蛋白V染色的细胞，指示在交联剂存在的情况下(抗DR5 IgG+交联剂)发生凋亡。

对于人抗DR5 mAb诱导的凋亡，抗人IgG Fc(Biolegend，目录号#409302)用作交联剂。或者，山羊抗人IgG加IgM(H+L)Fab2(Jackson ImmunoResearch，目录号#109-006-127)可用作交联剂。

实施例5：胱天蛋白酶活化试验

该实施例显示通过胱天蛋白酶活化证明的抗DR5诱导的凋亡。Colo205细胞(ATCC目录号#CCL-222)以1x10⁴细胞/孔接种于96孔板并允许连接过夜。第二天，细胞用5μg/mL小鼠抗人DR5 mAb(Acris，抗体目录号#AM31206AF-N或R&D Systems，目录号#MAB631)37℃处理至多24小时。收获时，以与各孔中的总培养基相等的体积添加胱天蛋白酶Glo 3/7试剂(Promega目录号#G8090)。反应室温振荡孵育30分钟，并在酶标仪上评价发光。在不存在交联的情况中没有或几乎没有观察到胱天蛋白酶活性(图6，交叉阴影短线)。

然后，试验如上所述进行，不同之处在于在用连续稀释的小鼠抗人DR5 mAb在室温预孵育细胞20分钟之后，以比抗DR5 mAb的最高剂量高3倍的浓度添加山羊抗小鼠IgG1 Fc(Jackson ImmunoResearch，目录号#115-005-205)交联剂。结果以短实线示于图6。在存在交联的情况中，观察到显著胱天蛋白酶活性。

对于人抗DR5 mAb诱导的胱天蛋白酶活化，抗人IgG Fc(Biolegend，目录号#409302)用作交联剂。或者，山羊抗人IgG加IgM(H+L)Fab2(Jackson ImmunoResearch，目录号#109-006-127)可用作交联剂。

实施例6：多聚抗DR5抗体具有更优的活性

该实施例显示多聚抗DR5抗体的更优的体外活性。图7A，是非还原性SDS-PAGE的照片，其显示优势性的多聚的一种抗DR5 mAb(泳道1，R&D Systems，克隆71903)，泳道2对应于BioLegend克隆DJR2-4，泳道3对应于Acris抗体克隆B-K29，且泳道4对应于Acris抗体克隆B-D37。

抗DR5 mAb功能活性和细胞毒性试验

采用与实施例3类似的方法，显示，仅多聚抗DR5 mAb在不存在交联剂的情况中造成Colo205细胞毒性。(参见，图7B；R&D Systems克隆71903，实心方形；BioLegend克隆DJR2-4，空心圆形，虚线；Acris抗体克隆B-K29，实心菱形；Acris抗体克隆B-D37，空心三角形，虚线)。

凋亡试验

采用与实施例4类似的方法，显示，在不存在交联剂的情况中，多聚抗DR5 mAb诱导Colo205细胞随时间推移的凋亡，但单体抗DR5 mAb或同种型对照并非如此。(参见，图7C；所示的1小时、2小时和4小时时间点)。

胱天蛋白酶活化试验

采用方法类似于实施例5中提供的那些，显示，在不存在交联剂的情况中，多聚抗DR5 mAb，但非单体抗DR5 mAb，诱导Colo205细胞中的胱天蛋白酶活化。(参见，图7D)。

实施例7：IgM抗DR5抗体的构建

DNA构建体的产生

根据SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2(抗DR5 mAb#1)的VH和VL序列、根据SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6(抗DR5 mAb#2)的VH和VL序列、根据SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85(抗DR5mAb#3)的VH和VL序列，和根据SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89(抗DR5 mAb#4)的VH和VL序列通过标准克隆方法插入Aragen Bioscience公司和Lake Pharma公司的专有IgG和IgM载体。

转染

哺乳动物细胞用等摩尔比的不同的表达载体通过标准操作方法共转染。

人抗DR5 IgG的纯化

人抗DR5 IgG采用MabSelectSuRe亲和性基质(GE Life Sciences，目录号#17-5438-01)按照生产商推荐纯化。

人抗DR5 IgM的纯化。

具有或不具有J链的人抗DR5 IgM采用Capture Select IgM亲和性基质(BAC，Thermo Fisher，目录号#2890.05)按照生产商推荐纯化。

实施例8：IgM抗DR5 mAb#2对于DR5具有特异性

通过如实施例2描述的ELISA，测试了抗DR5 mAb#2的IgG形式和五聚IgM-J链形式的结合特异性。如图8A(IgG)和图8B(IgM)中所示，这些抗体结合至人DR5但非人DR4或诱饵受体DcR1或DcR2中的任一种。

通过如实施例2所描述的方法测试了抗DR5 Mab#1的IgG和IgM形式与靶标细胞Colo205的结合。结果示于图9。

实施例9：IgM抗DR5 mAb的细胞毒性高于对应的IgG形式

采用实施例3中描述的生物发光试验，测试了抗DR5 Mab#1、#2、#3和#4的IgG形式和五聚IgM-J链形式对于Colo205细胞的细胞毒性。如图10A-D中所示，抗DR5 IgM的细胞毒性高于IgG对应物。在图10E中，在采用和不采用交联剂的情况下，将抗DR5 Mab#1的IgM形式与对应的IgG形式做比较。甚至采用交联剂时，IgM形式更具细胞毒性。

肝毒性试验

此外，DR5 mAb IGM超激动剂对于Colo205肿瘤细胞的细胞毒性高于对于原代人肝细胞的细胞毒性。Colo205细胞毒性试验采用实施例3中描述的生物发光试验进行。约3.5x10⁴原代人肝细胞(Bioreclamation，目录号#X008001-P)接种于胶原被覆的96孔板并允许连接过夜。第二天，Colo205细胞和肝细胞用连续稀释的IgM抗DR5 mAb#1-#4处理，并37℃孵育24小时。收获时，细胞效价Glo活力试剂(Promega G7572)以与孔中的培养基相等的体积添加。细胞裂解10分钟并在酶标仪上读取发光。如图11A-D中所示，四种IgM抗DR5 mAb对于Colo205肿瘤细胞(实心圆形)的细胞毒性一致地高于对于原代人肝细胞(空心圆形)的细胞毒性。

序列表

<110> B·T-Y·王(WANG, BEATRICE TIEN-YI)

M·A·施瓦泽(SCHWARZER, MAX ALLEN)

B·A·基特(KEYT, BRUCE ALAN)

<120> 肿瘤坏死因子(TNF)超家族受体结合分子及其应用

<130> 57912-149854

<140>

<141>

<150> 62/105,323

<151> 2015-01-20

<160> 89

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 2

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 3

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 3

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asn Trp Gln Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 4

Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

1 5 10 15

Val Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

20 25 30

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

35 40 45

Ala Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn His Val

85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Asp Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Cys Ile Gly His Ile His Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Lys Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Arg Gly Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 6

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 7

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Asp Ser Met Ile Thr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 8

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Arg Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 9

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 9

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Leu Ser Met Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Arg Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 10

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 10

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 11

<211> 145

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 11

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Ser

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Lys Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Trp Met Asn Pro Asp Thr Asp Ser Thr Gly Tyr Pro

65 70 75 80

Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Arg Asp Tyr

115 120 125

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser

145

<210> 12

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 12

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

35 40 45

Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser

100 105 110

Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

115 120 125

<210> 13

<211> 471

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 13

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp

1 5 10 15

Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe

35 40 45

Ile Gly Tyr Phe Met Asn Trp Met Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Arg Phe Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr

85 90 95

Thr Ala His Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Phe Cys Gly Arg Ser Ala Tyr Tyr Phe Asp Ser Gly Gly Tyr Phe

115 120 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

130 135 140

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser

145 150 155 160

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

165 170 175

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

180 185 190

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

195 200 205

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys

210 215 220

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

225 230 235 240

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

245 250 255

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

260 265 270

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

275 280 285

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

290 295 300

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

305 310 315 320

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

325 330 335

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

340 345 350

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

355 360 365

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

370 375 380

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

385 390 395 400

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

405 410 415

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

420 425 430

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

435 440 445

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

450 455 460

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470

<210> 14

<211> 239

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 14

Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser

1 5 10 15

Gly Ala Tyr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro

20 25 30

Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

35 40 45

Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys

50 55 60

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe

65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

85 90 95

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe

100 105 110

Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

115 120 125

Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro

130 135 140

Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu

145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp

165 170 175

Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp

180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys

195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln

210 215 220

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235

<210> 15

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 15

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 16

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 17

<211> 470

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> 任何氨基酸

<400> 17

Met Gly Xaa Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Val Ile Leu Glu

1 5 10 15

Gly Val Gln Cys Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val

20 25 30

Arg Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala

35 40 45

Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg

50 55 60

Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Asp Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Pro Asp Thr Met Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys

85 90 95

Asn Thr Leu Ser Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Ile Thr Met Val Val Gly Pro Phe Ala

115 120 125

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys

130 135 140

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Gly

145 150 155 160

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

165 170 175

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

180 185 190

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

195 200 205

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

210 215 220

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro

225 230 235 240

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

245 250 255

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

260 265 270

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

275 280 285

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

290 295 300

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

305 310 315 320

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

325 330 335

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

340 345 350

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

355 360 365

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

370 375 380

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

385 390 395 400

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

405 410 415

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

420 425 430

Leu Thr Met Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

435 440 445

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

450 455 460

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470

<210> 18

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 18

Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser

1 5 10 15

Gly Ser Ser Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser

20 25 30

Val Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp

35 40 45

Ile Tyr Asn Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr

85 90 95

Ser Leu Gln Thr Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp

100 105 110

Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

115 120 125

Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Asp Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

145 150 155 160

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

165 170 175

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

195 200 205

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

210 215 220

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 19

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 19

Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Val Ile Leu Glu Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Lys Tyr Ser

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Glu Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

130 135 140

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

145 150 155 160

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

165 170 175

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

180 185 190

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

195 200 205

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

210 215 220

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

225 230 235 240

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Met Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455 460

Gly Lys

465

<210> 20

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 20

Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser

1 5 10 15

Gly Ser Ser Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser

20 25 30

Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp

35 40 45

Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp

65 70 75 80

Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Val Gln Ala Glu Asp Gln Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr

100 105 110

Arg Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

115 120 125

Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Asp Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

145 150 155 160

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

165 170 175

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

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Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

195 200 205

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

210 215 220

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 21

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 21

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Asp Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Asn His Tyr Gly Ser Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 22

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 22

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Thr Pro Leu

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

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<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 23

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

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Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

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Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Thr Lys Arg Leu Ile

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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

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<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

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Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser

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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

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Cys Ala Arg Asp Asp Ser Ser Gly Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

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Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Arg Asn Asp

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Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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65 70 75 80

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<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 27

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

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Cys Ala Arg Asp Asp Ser Ser Gly Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

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Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

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<210> 28

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 28

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Trp

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<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 29

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ser His Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Leu Asp Tyr Ala Asp Ser Val

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65 70 75 80

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100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 30

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 30

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

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His Asp Val Ser Ser Phe Gln Ser Ala Val Pro Ser Arg Phe Ser Arg

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Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Tyr Ile Thr Pro Phe

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Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 31

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

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65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 32

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 32

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 33

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 33

Gln Val Gln Ala Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

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Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Thr Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Ser Pro Arg Gly Phe Ser Gly Tyr Glu Ala Phe Asp Ser Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 34

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 34

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Ile Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

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Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Leu Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

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Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile

100 105 110

Lys

<210> 35

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 35

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

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Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

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Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Gly Val Asn Trp Asn Phe Leu Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

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<210> 36

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 36

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Arg

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

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Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

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100 105 110

<210> 37

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

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100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 38

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 38

Asp Ile Val Met Thr Gln Phe Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln

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100 105 110

Lys

<210> 39

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 39

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Asp Arg Thr Val Tyr Ser Asn Ser Ser Pro Phe Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 40

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 40

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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Ser Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

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65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Thr Val Tyr Ser Ser Ser Ser Pro Phe Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 42

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 42

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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Ser Ala Thr Ser Ser Phe Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 43

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 43

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Arg Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

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Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 44

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 44

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 45

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 45

Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 46

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 46

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 47

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 47

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

1 5 10 15

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met

20 25 30

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val

35 40 45

Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

85 90 95

Glu Val Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 48

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 49

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 49

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Cys Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Asn Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 50

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 50

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile

35 40 45

Phe Val Ala Ser Ser Phe Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 51

Gln Val Gln Met Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Asp Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Asn Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Asn Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 52

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 52

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile

35 40 45

Phe Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 53

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 53

Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 54

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 54

Asp Ile Ala Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Leu Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala

100 105

<210> 55

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 55

Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 56

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 56

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu

100

<210> 57

<211> 244

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 57

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala

130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp

145 150 155 160

Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

165 170 175

Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr

195 200 205

Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser

210 215 220

Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Thr Val Leu Gly

<210> 58

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 58

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Arg Ser Ala Ala Tyr Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro

130 135 140

Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly

145 150 155 160

Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

165 170 175

Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly

180 185 190

Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu

195 200 205

Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn

210 215 220

Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Thr Val Leu Gly

245

<210> 59

<211> 246

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Glu Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr

20 25 30

Thr Leu His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Asn Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Leu Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Phe Thr Tyr Ser Phe Gly Met Asp Val Trp Gly Arg Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser

130 135 140

Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly

145 150 155 160

Gly Ser Asn Ile Gly Arg Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro

165 170 175

Gly Thr Ala Pro Lys Leu Ile Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser

180 185 190

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser

195 200 205

Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Leu Tyr Tyr Cys

210 215 220

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr

225 230 235 240

Lys Leu Thr Val Leu Gly

245

<210> 60

<211> 244

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 60

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val His Arg Pro Gly Arg Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala

130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp

145 150 155 160

Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

165 170 175

Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr

195 200 205

Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser

210 215 220

Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Thr Val Leu Gly

<210> 61

<211> 235

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 61

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Val Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Ser Glu Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Val Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Phe Asn Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asn Gly Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

130 135 140

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Thr

145 150 155 160

Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Leu Leu Val Val Tyr

165 170 175

Ala Lys Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

180 185 190

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

195 200 205

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Ser Arg Asp Ser Ser Gly Trp Val

210 215 220

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

225 230 235

<210> 62

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 62

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Asp

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Ser Phe Asp Gly Ser Gln Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Pro Ala Arg Phe Phe Pro Leu His Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln

130 135 140

Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys

145 150 155 160

Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr His Tyr Ala Ser Trp Tyr His Gln Arg

165 170 175

Pro Gly Arg Ala Pro Val Leu Val Asn Tyr Pro Lys Asp Ser Arg Pro

180 185 190

Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala

195 200 205

Ser Leu Thr Ile Ile Gly Ala Gln Ala Ala Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Ser Arg Asp Ser Ser Gly Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Thr Val Leu Gly

245

<210> 63

<211> 247

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 63

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Phe Ser Gly Tyr Gly Asp Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro

130 135 140

Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly

145 150 155 160

Thr Ser Ser Asp Ile Gly Asn Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Val Asn Glu Arg

180 185 190

Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr

195 200 205

Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Arg Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn Ala Val Ile Phe Gly Gly Gly

225 230 235 240

Thr Gln Leu Thr Val Leu Gly

245

<210> 64

<211> 255

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 64

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr His

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Ser Arg Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Val Pro Pro Gly

100 105 110

Asp Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala

130 135 140

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

145 150 155 160

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Arg Ser Asp Ile Gly Gly Tyr

165 170 175

Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

180 185 190

Leu Ile Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asp His Phe

195 200 205

Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

210 215 220

Gln Ser Glu Asp Asp Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Tyr

225 230 235 240

His Thr Trp Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

245 250 255

<210> 65

<211> 248

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 65

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Val Asn Tyr

20 25 30

Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Thr Thr Lys Asn Arg Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Arg Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Phe Lys Gly Thr Asp Ile Leu Phe Arg Asp Trp Gly Arg

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro

130 135 140

Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Ser Ile Ser Cys Ser Gly

145 150 155 160

Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Ile Trp Tyr Gln Gln Leu

165 170 175

Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Met Tyr Ser Asn Asp Arg Arg Pro

180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala

195 200 205

Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr

210 215 220

Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly His Tyr Val Phe Gly Thr

225 230 235 240

Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

245

<210> 66

<211> 243

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 66

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ser Thr Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Ala Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly

130 135 140

Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn

145 150 155 160

Ile Gly Ser Arg Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala

165 170 175

Pro Lys Leu Leu Ile Gln Gly Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile

195 200 205

Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp

210 215 220

Asp Asp Ser Leu Thr Gly Tyr Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Thr

225 230 235 240

Val Leu Gly

<210> 67

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 67

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Ala Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Leu Arg Gly Leu Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala

130 135 140

Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser

145 150 155 160

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu

165 170 175

Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe

180 185 190

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala

195 200 205

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser

210 215 220

Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

225 230 235 240

<210> 68

<211> 243

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 68

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala

130 135 140

Ala Pro Gly Gln Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn

145 150 155 160

Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala

165 170 175

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro

180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile

195 200 205

Thr Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp

210 215 220

Asp Ser Ser Leu Ser Ala Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr

225 230 235 240

Val Leu Gly

<210> 69

<211> 253

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 69

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Thr Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Asn Asn

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Ile Pro Lys Phe Gly Thr Thr Asn His Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Asp Ser Thr Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ala Tyr Cys Gly Gly Gly Arg Cys Tyr Leu Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ala

130 135 140

Val Val Ile Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val

145 150 155 160

Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly His Tyr

165 170 175

Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr Leu Ile

180 185 190

Tyr Asp Thr Ser Asn Lys Arg Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly

195 200 205

Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro

210 215 220

Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Leu Val Ser Tyr Ser Gly Ser Leu

225 230 235 240

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

245 250

<210> 70

<211> 243

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 70

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Gly Ala Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Ala Leu Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu

130 135 140

Ser Pro Gly Lys Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Gly Ser

145 150 155 160

Val Ala Arg Asn Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala

165 170 175

Pro Thr Ile Val Ile Tyr Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro

180 185 190

Gly Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu

195 200 205

Thr Ile Ser Gly Leu Gln Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln

210 215 220

Ser Tyr Asn Tyr Asn Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

225 230 235 240

Val Leu Gly

<210> 71

<211> 247

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 71

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Lys Thr Asn Tyr Val Gln Glu Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Asn Asn Tyr Arg Phe Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Glu Thr Thr Leu Thr Gln

130 135 140

Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser

145 150 155 160

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser

180 185 190

Arg Ala Ile Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240

Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

245

<210> 72

<211> 248

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 72

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Thr

20 25 30

Thr Val Ala Trp Asp Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Glu Tyr Ala

50 55 60

Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Val Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

Gln Ile Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Asp Ala Gly Arg Gly Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Ser Pro Leu Arg Trp Gly Arg Phe

115 120 125

Gly Trp Arg Gly Leu Gly Arg Gly Trp Leu Arg Ser Pro Val Thr Gln

130 135 140

Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser

145 150 155 160

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser His Leu Ala Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser

180 185 190

Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Arg Ala Val Phe Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

245

<210> 73

<211> 248

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 73

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Arg Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Asn Asn

20 25 30

Asn Ala Ala Trp Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala

50 55 60

Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Pro Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Asp Gly Asn Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ile Leu Arg Trp Gly

115 120 125

Arg Phe Gly Trp Arg Gly Leu Gly Arg Gly Trp Leu Glu Ile Val Leu

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr

145 150 155 160

Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Gly Tyr Val Ser Trp

165 170 175

Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala

180 185 190

Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

195 200 205

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Asn Thr Tyr Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Lys Val Gly Ile Lys

245

<210> 74

<211> 452

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 74

Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn

1 5 10 15

Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp

20 25 30

Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser

35 40 45

Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys

50 55 60

Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln

65 70 75 80

Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn

85 90 95

Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys

100 105 110

Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg

115 120 125

Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile

130 135 140

Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr

145 150 155 160

Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr

165 170 175

Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln

180 185 190

Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln

195 200 205

Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val

210 215 220

Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr

225 230 235 240

Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr

245 250 255

Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn

260 265 270

Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala

275 280 285

Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr

290 295 300

Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg

305 310 315 320

Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro

325 330 335

Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu

340 345 350

Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg

355 360 365

Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro

370 375 380

Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val

385 390 395 400

Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Ala His

405 410 415

Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr

420 425 430

Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala

435 440 445

Gly Thr Cys Tyr

450

<210> 75

<211> 1347

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 75

gccccaaccc ttttccccct cgtctcctgt gagaattccc cgtcggatac gagcagcgtg 60

gccgttggct gcctcgcaca ggacttcctt cccgactcca tcactttctc ctggaaatac 120

aagaacaact ctgacatcag cagcacccgg ggcttcccat cagtcctgag agggggcaag 180

cacgcagcca cctcacaggt gctgctgcct tccaaggacg tcatgcaggg cacagacgaa 240

cacgtggtgt gcaaagtcca gcaccccaac ggcaacaaag aaaagaacgt gcctcttcca 300

gtgattgctg agctgcctcc caaagtgagc gtcttcgtcc caccccgcga cggcttcttc 360

ggcaaccccc gcaagtccaa gctcatctgc caggccacgg gtttcagtcc ccggcagatt 420

caggtgtcct ggctgcgcga ggggaagcag gtggggtctg gcgtcaccac ggaccaggtg 480

caggctgagg caaaggagtc tgggaccacg acctacaagg tgaccagcac actgaccatc 540

aaagagagcg actggctcag ccagagcatg ttcacctgcc gcgtggatca caggggcctg 600

accttccagc agaatgcgtc ctccatgtgt ggccccgatc aagacacagc catccgggtc 660

ttctccatcc ccccatcctt tgccagcatc ttcctcacca agtccaccaa gttgacctgc 720

ctggtcacag acctgaccac ctatgacagc gtgaccatct cctggacccg ccagaatggc 780

gaagctgtga aaacccacac caacatctcc gagagccacc ccaatgccac tttcagcgcc 840

gtgggtgagg ccagcatctg cgaggatgac tggaattccg gggagaggtt cacgtgcacc 900

gtgacccaca cagacctgcc ctcgccactg aagcagacca tctcccggcc caagggggtg 960

gccctgcaca ggcccgatgt ctacttgctg ccaccagccc gggagcagct gaacctgcgg 1020

gagtcggcca ccatcacgtg cctggtgacg ggcttctctc ccgcggacgt cttcgtgcag 1080

tggatgcaga gggggcagcc cttgtccccg gagaagtatg tgaccagcgc cccaatgcct 1140

gagccccagg ccccaggccg gtacttcgcc cacagcatcc tgaccgtgtc cgaagaggaa 1200

tggaacacgg gggagaccta cacctgcgtg gtggcccatg aggccctgcc caacagggtc 1260

accgagagga ccgtggacaa gtccaccggt aaacccaccc tgtacaacgt gtccctggtc 1320

atgtccgaca cagctggcac ctgctac 1347

<210> 76

<211> 159

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 76

Met Lys Asn His Leu Leu Phe Trp Gly Val Leu Ala Val Phe Ile Lys

1 5 10 15

Ala Val His Val Lys Ala Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp

20 25 30

Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser

35 40 45

Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val

50 55 60

Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg

65 70 75 80

Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro

85 90 95

Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn

100 105 110

Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg

115 120 125

Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr

130 135 140

Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp

145 150 155

<210> 77

<211> 480

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 77

atgaagaacc atttgctttt ctggggagtc ctggcggttt ttattaaggc tgttcatgtg 60

aaagcccaag aagatgaaag gattgttctt gttgacaaca aatgtaagtg tgcccggatt 120

acttccagga tcatccgttc ttccgaagat cctaatgagg acattgtgga gagaaacatc 180

cgaattattg ttcctctgaa caacagggag aatatctctg atcccacctc accattgaga 240

accagatttg tgtaccattt gtctgacctc tgtaaaaaat gtgatcctac agaagtggag 300

ctggataatc agatagttac tgctacccag agcaatatct gtgatgaaga cagtgctaca 360

gagacctgct acacttatga cagaaacaag tgctacacag ctgtggtccc actcgtatat 420

ggtggtgaga ccaaaatggt ggaaacagcc ttaaccccag atgcctgcta tcctgactaa 480

<210> 78

<211> 353

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 78

Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr

1 5 10 15

Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe

20 25 30

Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val

35 40 45

Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr

50 55 60

Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly

65 70 75 80

Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp

85 90 95

Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro

100 105 110

Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser

115 120 125

Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn

130 135 140

Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe

145 150 155 160

Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu

165 170 175

Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys

180 185 190

Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr

195 200 205

Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn

210 215 220

Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu

225 230 235 240

Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser

245 250 255

Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro

260 265 270

Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly

275 280 285

Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp

290 295 300

Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu

305 310 315 320

Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro

325 330 335

Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys

340 345 350

Tyr

<210> 79

<211> 340

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 79

Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr

1 5 10 15

Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe

20 25 30

Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val

35 40 45

Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr

50 55 60

Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly

65 70 75 80

Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp

85 90 95

Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Pro Pro Pro Pro Cys Cys His Pro

100 105 110

Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser

115 120 125

Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly

130 135 140

Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly

145 150 155 160

Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu

165 170 175

Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr Phe Thr Cys Thr

180 185 190

Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala Asn Ile Thr Lys

195 200 205

Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser

210 215 220

Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg

225 230 235 240

Gly Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln

245 250 255

Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro

260 265 270

Ser Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala

275 280 285

Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His

290 295 300

Glu Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Met Ala

305 310 315 320

Gly Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp

325 330 335

Gly Thr Cys Tyr

340

<210> 80

<211> 764

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 80

Met Leu Leu Phe Val Leu Thr Cys Leu Leu Ala Val Phe Pro Ala Ile

1 5 10 15

Ser Thr Lys Ser Pro Ile Phe Gly Pro Glu Glu Val Asn Ser Val Glu

20 25 30

Gly Asn Ser Val Ser Ile Thr Cys Tyr Tyr Pro Pro Thr Ser Val Asn

35 40 45

Arg His Thr Arg Lys Tyr Trp Cys Arg Gln Gly Ala Arg Gly Gly Cys

50 55 60

Ile Thr Leu Ile Ser Ser Glu Gly Tyr Val Ser Ser Lys Tyr Ala Gly

65 70 75 80

Arg Ala Asn Leu Thr Asn Phe Pro Glu Asn Gly Thr Phe Val Val Asn

85 90 95

Ile Ala Gln Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gly Arg Tyr Lys Cys Gly Leu

100 105 110

Gly Ile Asn Ser Arg Gly Leu Ser Phe Asp Val Ser Leu Glu Val Ser

115 120 125

Gln Gly Pro Gly Leu Leu Asn Asp Thr Lys Val Tyr Thr Val Asp Leu

130 135 140

Gly Arg Thr Val Thr Ile Asn Cys Pro Phe Lys Thr Glu Asn Ala Gln

145 150 155 160

Lys Arg Lys Ser Leu Tyr Lys Gln Ile Gly Leu Tyr Pro Val Leu Val

165 170 175

Ile Asp Ser Ser Gly Tyr Val Asn Pro Asn Tyr Thr Gly Arg Ile Arg

180 185 190

Leu Asp Ile Gln Gly Thr Gly Gln Leu Leu Phe Ser Val Val Ile Asn

195 200 205

Gln Leu Arg Leu Ser Asp Ala Gly Gln Tyr Leu Cys Gln Ala Gly Asp

210 215 220

Asp Ser Asn Ser Asn Lys Lys Asn Ala Asp Leu Gln Val Leu Lys Pro

225 230 235 240

Glu Pro Glu Leu Val Tyr Glu Asp Leu Arg Gly Ser Val Thr Phe His

245 250 255

Cys Ala Leu Gly Pro Glu Val Ala Asn Val Ala Lys Phe Leu Cys Arg

260 265 270

Gln Ser Ser Gly Glu Asn Cys Asp Val Val Val Asn Thr Leu Gly Lys

275 280 285

Arg Ala Pro Ala Phe Glu Gly Arg Ile Leu Leu Asn Pro Gln Asp Lys

290 295 300

Asp Gly Ser Phe Ser Val Val Ile Thr Gly Leu Arg Lys Glu Asp Ala

305 310 315 320

Gly Arg Tyr Leu Cys Gly Ala His Ser Asp Gly Gln Leu Gln Glu Gly

325 330 335

Ser Pro Ile Gln Ala Trp Gln Leu Phe Val Asn Glu Glu Ser Thr Ile

340 345 350

Pro Arg Ser Pro Thr Val Val Lys Gly Val Ala Gly Gly Ser Val Ala

355 360 365

Val Leu Cys Pro Tyr Asn Arg Lys Glu Ser Lys Ser Ile Lys Tyr Trp

370 375 380

Cys Leu Trp Glu Gly Ala Gln Asn Gly Arg Cys Pro Leu Leu Val Asp

385 390 395 400

Ser Glu Gly Trp Val Lys Ala Gln Tyr Glu Gly Arg Leu Ser Leu Leu

405 410 415

Glu Glu Pro Gly Asn Gly Thr Phe Thr Val Ile Leu Asn Gln Leu Thr

420 425 430

Ser Arg Asp Ala Gly Phe Tyr Trp Cys Leu Thr Asn Gly Asp Thr Leu

435 440 445

Trp Arg Thr Thr Val Glu Ile Lys Ile Ile Glu Gly Glu Pro Asn Leu

450 455 460

Lys Val Pro Gly Asn Val Thr Ala Val Leu Gly Glu Thr Leu Lys Val

465 470 475 480

Pro Cys His Phe Pro Cys Lys Phe Ser Ser Tyr Glu Lys Tyr Trp Cys

485 490 495

Lys Trp Asn Asn Thr Gly Cys Gln Ala Leu Pro Ser Gln Asp Glu Gly

500 505 510

Pro Ser Lys Ala Phe Val Asn Cys Asp Glu Asn Ser Arg Leu Val Ser

515 520 525

Leu Thr Leu Asn Leu Val Thr Arg Ala Asp Glu Gly Trp Tyr Trp Cys

530 535 540

Gly Val Lys Gln Gly His Phe Tyr Gly Glu Thr Ala Ala Val Tyr Val

545 550 555 560

Ala Val Glu Glu Arg Lys Ala Ala Gly Ser Arg Asp Val Ser Leu Ala

565 570 575

Lys Ala Asp Ala Ala Pro Asp Glu Lys Val Leu Asp Ser Gly Phe Arg

580 585 590

Glu Ile Glu Asn Lys Ala Ile Gln Asp Pro Arg Leu Phe Ala Glu Glu

595 600 605

Lys Ala Val Ala Asp Thr Arg Asp Gln Ala Asp Gly Ser Arg Ala Ser

610 615 620

Val Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Gln Gly Gly Ser Ser Arg Ala Leu

625 630 635 640

Val Ser Thr Leu Val Pro Leu Gly Leu Val Leu Ala Val Gly Ala Val

645 650 655

Ala Val Gly Val Ala Arg Ala Arg His Arg Lys Asn Val Asp Arg Val

660 665 670

Ser Ile Arg Ser Tyr Arg Thr Asp Ile Ser Met Ser Asp Phe Glu Asn

675 680 685

Ser Arg Glu Phe Gly Ala Asn Asp Asn Met Gly Ala Ser Ser Ile Thr

690 695 700

Gln Glu Thr Ser Leu Gly Gly Lys Glu Glu Phe Val Ala Thr Thr Glu

705 710 715 720

Ser Thr Thr Glu Thr Lys Glu Pro Lys Lys Ala Lys Arg Ser Ser Lys

725 730 735

Glu Glu Ala Glu Met Ala Tyr Lys Asp Phe Leu Leu Gln Ser Ser Thr

740 745 750

Val Ala Ala Glu Ala Gln Asp Gly Pro Gln Glu Ala

755 760

<210> 81

<211> 585

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 81

Lys Ser Pro Ile Phe Gly Pro Glu Glu Val Asn Ser Val Glu Gly Asn

1 5 10 15

Ser Val Ser Ile Thr Cys Tyr Tyr Pro Pro Thr Ser Val Asn Arg His

20 25 30

Thr Arg Lys Tyr Trp Cys Arg Gln Gly Ala Arg Gly Gly Cys Ile Thr

35 40 45

Leu Ile Ser Ser Glu Gly Tyr Val Ser Ser Lys Tyr Ala Gly Arg Ala

50 55 60

Asn Leu Thr Asn Phe Pro Glu Asn Gly Thr Phe Val Val Asn Ile Ala

65 70 75 80

Gln Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gly Arg Tyr Lys Cys Gly Leu Gly Ile

85 90 95

Asn Ser Arg Gly Leu Ser Phe Asp Val Ser Leu Glu Val Ser Gln Gly

100 105 110

Pro Gly Leu Leu Asn Asp Thr Lys Val Tyr Thr Val Asp Leu Gly Arg

115 120 125

Thr Val Thr Ile Asn Cys Pro Phe Lys Thr Glu Asn Ala Gln Lys Arg

130 135 140

Lys Ser Leu Tyr Lys Gln Ile Gly Leu Tyr Pro Val Leu Val Ile Asp

145 150 155 160

Ser Ser Gly Tyr Val Asn Pro Asn Tyr Thr Gly Arg Ile Arg Leu Asp

165 170 175

Ile Gln Gly Thr Gly Gln Leu Leu Phe Ser Val Val Ile Asn Gln Leu

180 185 190

Arg Leu Ser Asp Ala Gly Gln Tyr Leu Cys Gln Ala Gly Asp Asp Ser

195 200 205

Asn Ser Asn Lys Lys Asn Ala Asp Leu Gln Val Leu Lys Pro Glu Pro

210 215 220

Glu Leu Val Tyr Glu Asp Leu Arg Gly Ser Val Thr Phe His Cys Ala

225 230 235 240

Leu Gly Pro Glu Val Ala Asn Val Ala Lys Phe Leu Cys Arg Gln Ser

245 250 255

Ser Gly Glu Asn Cys Asp Val Val Val Asn Thr Leu Gly Lys Arg Ala

260 265 270

Pro Ala Phe Glu Gly Arg Ile Leu Leu Asn Pro Gln Asp Lys Asp Gly

275 280 285

Ser Phe Ser Val Val Ile Thr Gly Leu Arg Lys Glu Asp Ala Gly Arg

290 295 300

Tyr Leu Cys Gly Ala His Ser Asp Gly Gln Leu Gln Glu Gly Ser Pro

305 310 315 320

Ile Gln Ala Trp Gln Leu Phe Val Asn Glu Glu Ser Thr Ile Pro Arg

325 330 335

Ser Pro Thr Val Val Lys Gly Val Ala Gly Gly Ser Val Ala Val Leu

340 345 350

Cys Pro Tyr Asn Arg Lys Glu Ser Lys Ser Ile Lys Tyr Trp Cys Leu

355 360 365

Trp Glu Gly Ala Gln Asn Gly Arg Cys Pro Leu Leu Val Asp Ser Glu

370 375 380

Gly Trp Val Lys Ala Gln Tyr Glu Gly Arg Leu Ser Leu Leu Glu Glu

385 390 395 400

Pro Gly Asn Gly Thr Phe Thr Val Ile Leu Asn Gln Leu Thr Ser Arg

405 410 415

Asp Ala Gly Phe Tyr Trp Cys Leu Thr Asn Gly Asp Thr Leu Trp Arg

420 425 430

Thr Thr Val Glu Ile Lys Ile Ile Glu Gly Glu Pro Asn Leu Lys Val

435 440 445

Pro Gly Asn Val Thr Ala Val Leu Gly Glu Thr Leu Lys Val Pro Cys

450 455 460

His Phe Pro Cys Lys Phe Ser Ser Tyr Glu Lys Tyr Trp Cys Lys Trp

465 470 475 480

Asn Asn Thr Gly Cys Gln Ala Leu Pro Ser Gln Asp Glu Gly Pro Ser

485 490 495

Lys Ala Phe Val Asn Cys Asp Glu Asn Ser Arg Leu Val Ser Leu Thr

500 505 510

Leu Asn Leu Val Thr Arg Ala Asp Glu Gly Trp Tyr Trp Cys Gly Val

515 520 525

Lys Gln Gly His Phe Tyr Gly Glu Thr Ala Ala Val Tyr Val Ala Val

530 535 540

Glu Glu Arg Lys Ala Ala Gly Ser Arg Asp Val Ser Leu Ala Lys Ala

545 550 555 560

Asp Ala Ala Pro Asp Glu Lys Val Leu Asp Ser Gly Phe Arg Glu Ile

565 570 575

Glu Asn Lys Ala Ile Gln Asp Pro Arg

580 585

<210> 82

<211> 146

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 82

Met Asp Leu Met Cys Lys Lys Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu

1 5 10 15

Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu

20 25 30

Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys

35 40 45

Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ile Ser Lys Ser Ser Tyr Trp Gly Trp

50 55 60

Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr

65 70 75 80

Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr

85 90 95

Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser

100 105 110

Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Thr Val

115 120 125

Ala Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Ala Ser

145

<210> 83

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 83

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

35 40 45

Val Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser

100 105 110

Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg

115 120 125

Thr

<210> 84

<211> 146

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 84

Met Asp Leu Met Cys Lys Lys Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu

1 5 10 15

Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu

20 25 30

Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys

35 40 45

Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Arg Ser Asn Tyr Trp Gly Trp

50 55 60

Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Val Tyr

65 70 75 80

Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr

85 90 95

Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser

100 105 110

Val Thr Val Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Ser Val

115 120 125

Ala Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Ala Ser

145

<210> 85

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 85

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

35 40 45

Val Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ser Pro Ala

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser

100 105 110

Asp Trp Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg

115 120 125

Thr

<210> 86

<211> 154

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 86

Met Asp Leu Met Cys Lys Lys Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu

1 5 10 15

Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu

20 25 30

Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys

35 40 45

Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp

50 55 60

Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile His

65 70 75 80

Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr

85 90 95

Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser

100 105 110

Val Thr Ala Ala Asp Thr Thr Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Ser

115 120 125

Thr Val Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

130 135 140

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

145 150

<210> 87

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 87

Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

35 40 45

Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Gly Ser Ser Pro Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

115 120 125

Lys Arg Thr

130

<210> 88

<211> 139

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 88

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Arg Tyr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

85 90 95

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Ser Ser Gly Trp Phe Gly Ala Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 89

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 合成

多肽

<400> 89

Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala

1 5 10 15

Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val

20 25 30

Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile

35 40 45

Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys

50 55 60

Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg

65 70 75 80

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser

85 90 95

Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ser

100 105 110

Leu Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

115 120 125

Claims

1.一种多聚结合分子，其包含两个、五个或六个二价结合单元或其变体或片段，

其中，各结合单元包含两个IgA或IgM重链恒定区或其片段，其各自与抗原结合结构域相关联，

其中，所述结合分子的抗原结合结构域中的至少三个特异性且竞争性地结合至肿瘤坏死因子(TNF)超家族受体蛋白，其能诱导表达所述TNF超家族受体蛋白的细胞的凋亡，并且

其中，所述结合分子能交联在细胞表面上表达的至少三个相同的TNF超家族受体蛋白，由此诱导所述细胞的凋亡。

2.如权利要求1所述的多聚结合分子，其对于表达TNF超家族受体的细胞中的TNF超家族受体介导的凋亡的诱导的效能高于等同量的二价IgG抗体或其片段，所述二价IgG抗体或其片段也特异性结合至并激动相同的TNF超家族受体蛋白。

3.如权利要求1或权利要求2所述的多聚结合分子，其中，特异性结合至并激动所述TNF超家族受体蛋白的所述至少三个抗原结合结构域不与其它TNF超家族受体蛋白交叉反应。

4.如权利要求1或权利要求2所述的多聚结合分子，其中，特异性结合至并激动所述TNF超家族受体蛋白的所述至少三个抗原结合结构域能与其它TNF超家族受体蛋白交叉反应。

5.如权利要求3所述的多聚结合分子，其包含至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域，所述抗原结合结构域特异性且竞争性地结合至在所述细胞的表面表达的TNF超家族受体蛋白，由此诱导所述细胞的凋亡。

6.如权利要求5所述的多聚结合分子，其中，所述至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域结合至在所述细胞的表面表达的单一类型的TNF超家族受体分子的相同的胞外表位。

7.如权利要求5所述的多聚结合分子，其中至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域各自特异性结合在所述细胞的表面表达的单一类型的TNF超家族受体分子的两个或更多个不同的胞外表位的组中的一个。

8.如权利要求1-7中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述两个、五个或六个结合单元是人、人源化或嵌合免疫球蛋白结合单元。

9.如权利要求1-8中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述TNF超家族受体蛋白是TNFR1(DR1)、TNFR2、TNFR1/2、CD40(p50)、Fas(CD95、Apo1、DR2)、CD30、4-1BB(CD137、ILA)、TRAILR1(DR4、Apo2)、TRAILR2(DR5)、TRAILR3(DcR1)、TRAILR4(DcR2)、OPG(OCIF)、TWEAKR(FN14)、LIGHTR(HVEM)、DcR3、DR3、EDAR、XEDAR，或其组合。

10.如权利要求1-9中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述至少三个抗原结合结构域特异性且竞争性地结合至DR5。

11.如权利要求10所述的多聚结合分子，其中，所述至少三个抗原结合结构域不特异性结合至DR4、DcR1或DcR2。

12.如权利要求10所述的多聚结合分子，其中，所述至少三个抗原结合结构域还能特异性结合至DR4。

13.如权利要求1-11中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述细胞是癌细胞。

14.如权利要求1-13中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述结合分子的至少三个抗原结合结构域是DR5结合结构域，并且其中至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中，所述VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的CDR，所述抗体包含分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ IDNO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ IDNO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ IDNO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89的VH和VL氨基酸序列；或者，ScFv序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72，或SEQID NO:73，或者，具有在所述CDR中的一个或多个中具有一个或两个氨基酸取代的六个CDR。

15.如权利要求1-14中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述结合分子的至少三个抗原结合结构域是抗DR5结合结构域，并且其中至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中，所述VH和VL包含分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ IDNO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ IDNO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列；或者其中，所述VH和VL包含在具有与SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72，或SEQ ID NO:73至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列的ScFv中。

16.如权利要求15所述的多聚结合分子，其中至少四个、至少十个，或十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL区域，所述抗体VH和VL区域分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQID NO:2、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85，或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89。

17.如权利要求1-16中任一项所述的多聚结合分子，其是包含两个二价IgA结合单元或其片段和J链或其片段或变体的二聚结合分子，其中各结合单元包含各自与抗原结合结构域相关联的两个IgA重链恒定区或其片段。

18.如权利要求17所述的多聚结合分子，其还包含分泌型组分，或其片段或变体。

19.如权利要求17或权利要求18所述的多聚结合分子，其中，所述IgA重链恒定区或其片段各包含Cα2结构域或Cα3-tp结构域。

20.如权利要求19所述的多聚结合分子，其中，一个或多个IgA重链恒定区或其片段还包含Cα1结构域。

21.如权利要求17-20中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述IgA重链恒定区是人IgA恒定区。

22.如权利要求17-21中任一项所述的多聚结合分子，其中，各结合单元包含各自含有位于IgA恒定区或其片段的氨基末端的VH的两个IgA重链，以及各自含有位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL的两个免疫球蛋白轻链。

23.如权利要求1-16中任一项所述的多聚结合分子，其为分别包含五个或六个二价IgM结合单元的五聚或六聚结合分子，其中各结合单元包含各自与抗原结合结构域相关联的两个IgM重链恒定区或其片段。

24.如权利要求23所述的多聚结合分子，其中，所述IgM重链恒定区或其片段各包含Cμ3结构域和Cμ4-tp结构域。

25.如权利要求23或权利要求24所述的多聚结合分子，其中，一个或多个IgM重链恒定区或其片段还包含Cμ2结构域、Cμ1结构域，或其任何组合。

26.如权利要求23-25中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述结合分子是五聚的，并且还包含J链，或其片段，或其变体。

27.如权利要求23-26中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述IgM重链恒定区是人IgM恒定区。

28.如权利要求23-27中任一项所述的多聚结合分子，其中，各结合单元包含各自含有位于IgM恒定区或其片段的氨基末端的VH的两个IgM重链，以及各自含有位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL的两个免疫球蛋白轻链。

29.如权利要求1-28中任一项所述的多聚结合分子，其中各结合单元包含两个重链和两个轻链，其中，所述重链和轻链包含分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ IDNO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ IDNO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ IDNO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的VH和VL氨基酸序列；或者其中，所述重链和轻链包含在具有与SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72，或SEQ ID NO:73至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列的ScFv中包含的VH和VL氨基酸序列。

30.如权利要求29所述的多聚结合分子，其中，所述重链和轻链分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:84和SEQ IDNO:85，或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89。

31.如权利要求1-16或23-30中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述结合分子是五聚IgM分子，其还包含J链。

32.一种组合物，其包含如权利要求1-31中任一项所述的多聚结合分子。

33.一种多核苷酸，其包含编码如权利要求1-31中任一项所述的结合分子的多肽亚基的核酸序列。

34.如权利要求33所述的多核苷酸，其中，所述多肽亚基包含IgM重链恒定区和所述多聚结合分子的抗原结合结构域的至少抗体VH部分。

35.如权利要求34所述的多核苷酸，其中，所述多肽亚基包含融合至VH的C末端的人IgM恒定区或其片段，其包含：

(a)HCDR1、HCDR2和HCDR3区，其包含VH氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86，或SEQ ID NO:88中所含的CDR，或ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72，或SEQ ID NO:73中所含的CDR；或VH氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86，或SEQ ID NO:88中所含的CDR，或ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72，或SEQ ID NO:73中所含的CDR，其中，所述HCDR中的一个或多个具有一个或两个单一氨基酸取代；或

(b)与如下序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:86，或SEQ ID NO:88，或，具有氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72，或SEQ ID NO:73的ScFv的VH部分。

36.如权利要求33-35中任一项所述的多核苷酸，其中，所述多肽亚基包含轻链恒定区和所述多聚结合分子的抗原结合结构域的抗体VL部分。

37.如权利要求36所述的多核苷酸，其中，所述多肽亚基包含融合至VL的C末端的人κ或λ轻链恒定区或其片段，其包含：

(a)LCDR1、LCDR2和LCDR3区，其包含VL氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87，或SEQ ID NO:89中所含的CDR，或ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72，或SEQ ID NO:73中所含的CDR；或VL氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87，或SEQ ID NO:89中所含的CDR，或ScFv氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72，或SEQ ID NO:73中所含的CDR，其中，所述LCDR中的一个或多个中具有一个或两个单一氨基酸取代；或

(b)与如下序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQID NO:87，或SEQ ID NO:89，或具有氨基酸序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72，或SEQ ID NO:73的ScFv的VL部分。

38.一种组合物，其包含如权利要求33-35中任一项所述的多核苷酸，和如权利要求33、36或37中任一项所述的多核苷酸。

39.如权利要求38所述的组合物，其中，所述多核苷酸处于分开的载体上。

40.如权利要求38所述的组合物，其中，所述多核苷酸处于单一载体上。

41.如权利要求38-40中任一项所述的组合物，其还包含含有编码J链或其片段或其变体的核酸序列的多核苷酸。

42.根据权利要求40所定义的载体。

43.根据权利要求39所定义的载体。

44.一种宿主细胞，其包含如权利要求33-37中任一项所述的多核苷酸，如权利要求38-41中任一项所述的组合物，或根据权利要求42或43所定义的载体，其中，所述宿主细胞能表达如权利要求1-31中任一项所述的结合分子，或其亚基。

45.一种产生如权利要求1-31中任一项所述的结合分子的方法，其包括：培养如权利要求44所述的宿主细胞，和，回收所述结合分子。

46.一种诱导表达TNF超家族受体的细胞中TNF超家族受体介导的凋亡的方法，其包括，使表达TNF超家族受体的细胞与如权利要求1-31中任一项所述的多聚结合分子接触。

47.一种诱导表达TNF超家族受体的细胞中TNF超家族受体脂质筏形成的方法，其包括，使表达TNF超家族受体的细胞与如权利要求1-31中任一项所述的多聚结合分子接触。

48.一种治疗癌症的方法，其包括，给予有治疗需求的对象有效量的如权利要求1-31中任一项所述的多聚结合分子，其中，所述对象中的癌细胞表达具有凋亡活性的TNF超家族受体，并且其中，所述多聚结合分子能诱导所述癌细胞的凋亡。

49.如权利要求48所述的方法，其中，相对于非癌细胞，所述多聚结合分子能诱导癌细胞的更大凋亡。

50.如权利要求49所述的方法，其中，所述非癌细胞是正常肝细胞。

51.如权利要求48-50中任一项所述的方法，其中，所述TNF超家族受体是DR5。

52.如权利要求48-51中任一项所述的方法，其中，所述对象是人。