CN107163130A - 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 - Google Patents
一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107163130A CN107163130A CN201710428742.8A CN201710428742A CN107163130A CN 107163130 A CN107163130 A CN 107163130A CN 201710428742 A CN201710428742 A CN 201710428742A CN 107163130 A CN107163130 A CN 107163130A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tonin
- microballoon
- preparation
- pro
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 108010021724 tonin Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 37
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 22
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 68
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 27
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 11
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 10
- 238000006735 epoxidation reaction Methods 0.000 claims description 10
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical class OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 9
- LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-3-methyloxirane Chemical compound CC1OC1Cl LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 claims description 6
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 claims description 6
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical class COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000004075 acetic anhydrides Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 5
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 4
- 229910020889 NaBH3 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 4
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical class CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical class CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 abstract description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 22
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 9
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 4
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 3
- 101000984728 Chiropsoides quadrigatus Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptide Proteins 0.000 description 3
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 3
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 3
- 229940021722 caseins Drugs 0.000 description 3
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101710129690 Angiotensin-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 101710086378 Bradykinin-potentiating and C-type natriuretic peptides Proteins 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000790917 Dioxys <bee> Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229910003978 SiClx Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000028208 end stage renal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000523 end stage renal failure Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4732—Casein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法，该血管紧张素转化酶抑制肽氨基酸序列为：Leu‑Leu‑Tyr‑Gln‑Glu‑Pro‑Val‑Leu‑Gly‑Pro‑Val‑Pro‑Arg；本发明制备出一种限进亲和介质，利用该限进亲和介质从酪蛋白的酶解液中分离提取目标小分子肽，然后对该限进亲和介质进行洗脱，再用HPLC从洗脱液中提取出血管紧张素转化酶抑制肽。本发明适用于从复杂的生物基质样品中快速、有效的分离出小分子活性物，提高分离效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法。
背景技术
高血压是一种世界性的疾病，影响到大多数国家30％的成年人口。它是最常见的严重慢性疾病，是引发动脉硬化，中风，心肌梗死和终末期肾脏疾病等的重要因素。血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)是调节外周血压和电解质平衡的关键酶，它能促进血管紧张素I高度有效的转化为血管紧张素II，导致血压升高。ACE抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)可以抑制ACE的活性，通过动物模型和临床实验已证明其可有效的降低血压。从天然产物中提取的ACE抑制肽以其稳定、安全、无副作用的优势已经引起了广泛的兴趣，快速、高效的从天然产物中纯化ACE抑制肽将对治疗高血压有着非常重要的作用。但小分子肽所处环境复杂且浓度很低，特别是杂质特性与目标小分子肽性质相似，使得小分子肽的分离纯化非常困难。
传统的分离方法如超滤、微滤、盐析、透析、离子交换、电泳等操作过程复杂、分离速度慢、样品处理量小、回收率低以及成本昂贵。另一方面，由于生物样品中目标小分子含量低，大量存在的生物大分子会影响小分子扩散和竞争吸附位点，会降低目标小分子的纯度及吸附量。因此高选择性并高效的分离纯化方法是小分子肽的重要研究方向。
发明内容
本发明的目的是提供一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法，本发明先利用聚乙二醇单甲醚5000将固定化金属亲和介质(IMAC)进行修饰制备限进亲和介质这种分离介质，限进亲和介质具有的特异性吸附和大分子阻拒的特点，再利用限进亲和介质高效快速地提取分离血管紧张素转化酶抑制肽，提高了IMAC分离小分子肽的效率。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种血管紧张素转化酶抑制肽，其氨基酸序列为：Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg。
一种血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.磁性二氧化硅微球的制备：取0.03～0.05g Fe3O4、0.95～1.05mL正硅酸乙酯(TEOS)和0.08～0.12mL聚乙二醇单辛基苯基醚(TritionX-100)加入100mL乙醇/水混合液中并以50～60KHz功率超声分散8～15min，然后加入9mL浓度为25％的氨水，反应2～3h后利用外加磁场分离出固体产品得到磁性二氧化硅微球，所述Fe3O4的粒径为10～30nm，所述乙醇/水混合液中乙醇和水的体积比为1:1；Fe3O4为磁性粒子，TritionX-100为表面活性剂，使得Fe3O4粒子分布均匀，氨水给反应提供碱性环境，正硅酸乙酯在碱性条件下能够水解生成二氧化硅，反应结束后得到磁性二氧化硅微球；
S2.限进亲和介质的制备：利用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)将S1中的磁性二氧化硅微球进行氨基化改性得到氨基化微球，再用环氧氯丙烷对氨基化微球进行活化，然后用活化后的氨基化微球螯合铜离子得到螯合微球；将1～2g聚乙二醇单甲醚5000(mPEG-5000)加入装有4～8mL二甲基亚砜(DMSO)的三口瓶中，再向三口瓶中加入1.5～3mL氯仿及0.6～0.8mL乙酸酐并在35～40℃反应12h，得到mPEG-CHO；将0.2g的螯合微球溶于50～100mL乙醇/水(乙醇和水的体积比为1:1)混合溶液中，加入1g的mPEG-CHO，在室温下搅拌反应24h后再加入0.05～0.08g还原剂NaBH3，继续反应48h，将反应后产物置于透析袋中，在蒸馏水中透析48h，最后磁性分离得到限进亲和介质；磁性二氧化硅微球氨基化后能接枝mPEG-CHO，氨基化微球与铜离子螯合使得微球获得特异性吸附功能；
S3.将酪蛋白用胰蛋白酶和胃蛋白酶在55℃下酶解2h以上得到酶解液，然后采用超滤离心管(10KDa)对酶解液进行超滤得到滤液，将10mg S2中的限进亲和介质加入2mL滤液中进行吸附1～2h，然后利用外加磁场分离出限进亲和介质,再用0.5～1mL浓度为0.5～1mol/L的氯化铵和0.5～1mL浓度为0.5～1mol/L的氯化钠对其洗脱0.5～1h得到洗脱液，旋转蒸发洗脱液得到浓缩液；酶解液超滤是为了将一部分杂质和没有酶解的大分子除去，使得酶解液得到纯化，有利于限进亲和介质吸附目标小分子多肽；
S4.采用HPLC对S3中所述浓缩液进行分离，流动相为：A相为水(1％TFA)，B相为乙腈(1％TFA)；分离程序为：0～40min，B相乙腈体积由5％到30％，流速为0.5mL/min，检测波长为280nm，分离收集到氨基酸序列为Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg的血管紧张素转化酶抑制肽。
作为优选，S2中所述氨基化微球的制备方法为：取0.2g S1中的磁性二氧化硅微球置于三口瓶中，加入200mL乙醇，2mL去离子水，然后超声分散30min，再以400～600r/min的转速搅拌10min，向三口瓶中逐滴加入1.8～2.2mLAPTES，在72～78℃下回流8～10h，反应结束后用磁铁在瓶底吸附，倾去上清液，再加入无水乙醇，经超声、洗涤，最后磁性分离得到氨基化微球。
作为优选，S2所述螯合微球的制备方法为：称取0.15g S2中的氨基化微球，加入2.5mL浓度为0.4mol/L的NaOH和2.5mL浓度为2.5mol/L环氧氯丙烷，接着加入0.9～1.1mL的DMSO，在30～40℃下摇床振荡4h，然后去离子水洗涤去除未反应的环氧氯丙烷得到环氧化微球，将制备出的环氧化微球加入20mL浓度为0.5mol/L的Na2CO3溶液中，再加入0.05～0.1g亚氨基二乙酸(IDA)，在40～50℃下反应8h，Cu2+与IDA发生配位反应，反应结束后加入20mL浓度为0.05mol/L的CuSO4溶液，摇床震荡2h得到螯合微球。
作为优选，所述胰蛋白酶和胃蛋白酶的质量比为1：1，所述胰蛋白酶与酪蛋白的质量比为1:60～100。
作为优选，所述限进亲和介质的Cu2+螯合密度不低于50μmol/g，保障限进亲和介质对小分子肽特异性吸附性能；mPEG-5000的接枝率为10％～50％，接枝率太低无法形成体积排阻效应，接枝率过高则会不利于小分子肽的吸附。
本发明提供所述血管紧张素转化酶抑制肽在制备减缓高血压症状的功能食品中的应用。
本发明的有益效果：
本发明制备的限进亲和介质能特异性吸附小分子多肽的同时阻拒大分子杂蛋白的吸附，相对于IMAC其活性组分的含量提高20％～30％。利用制备的限进亲和介质快速的从酪蛋白酶解液中分离纯化的ACE抑制肽具有良好的ACE抑制效果。本发明制备的限进亲和介质非常适用于从复杂的生物基质样品中快速、有效的分离出小分子活性物，提高分离效果。
附图说明
图1为实施例1中酪蛋白酶解液(a)、亲和介质洗脱液(b)和限进亲和介质洗脱液(c)的凝胶色谱图。测试条件：色谱柱：Shodex PTOTENIN KW-802.5，检测器：DAD二极管阵列检测器，流动相：0.01M PBS缓冲液(pH＝7)，检测波长：280nm，流速：0.5mL/min；
图2为实施例1中酪蛋白酶解液(a)、亲和介质洗脱液(b)和限进亲和介质洗脱液(c)的高效液相色谱图。测试条件：色谱柱：Agilent SB-C18，检测器：DAD二极管阵列检测器，流动相：A相：水(0.1％TFA)，B相：乙腈(0.1％TFA)，流动相：5％～30％B相(0～40min)，流速：0.5mL/min，检测波长：280nm；
图3为实施例1中限进亲和介质从酪蛋白酶解液中纯化的多肽Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg的质谱图。
具体实施方式
参照附图对本发明具体实施例做进一步说明。
本发明的血管紧张素转化酶抑制肽的氨基酸序列为：Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg。
实施例1
一种血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，包括以下步骤：
(1)磁性二氧化硅微球的制备：取0.03g平均粒径为10nm的Fe3O4、1mL正硅酸乙酯(TEOS)和0.1mL聚乙二醇单辛基苯基醚(TritionX-100)加入100mL乙醇/水混合液(乙醇和水的体积比为1：1)中并以50KHz功率超声分散10min，然后加入9mL浓度为25％的氨水，反应2h后利用外加磁场分离出固体产品得到磁性二氧化硅微球；
(2)氨基化微球的制备：取0.2g(1)中制备的磁性二氧化硅微球置于三口瓶中，加入200mL乙醇，2mL去离子水，然后超声分散30min，再以500r/min的转速搅拌10min，向三口瓶中逐滴加入2mLAPTES，在75℃下回流8h，反应结束后用磁铁在瓶底吸附，倾去上清液，再加入无水乙醇，经超声、洗涤，磁性分离得到氨基化微球；
(3)螯合微球的制备：称取0.15g(2)中制备的氨基化微球，加入2.5mL浓度为0.4mol/L的NaOH和2.5mL浓度为2.5mol/L环氧氯丙烷，接着加入1mL的DMSO，在30℃下摇床振荡4h，然后去离子水洗涤得到环氧化微球，将制备出的环氧化微球加入20mL浓度为0.5mol/L的Na2CO3溶液中，再加入0.05g亚氨基二乙酸(IDA)，在50℃下反应8h，反应结束后加入20mL浓度为0.05mol/L的CuSO4溶液，摇床震荡2h得到螯合微球；
(4)限进亲和介质的制备：将1g聚乙二醇单甲醚5000(mPEG-5000)加入装有4mL二甲基亚砜(DMSO)的三口瓶中，再向三口瓶中加入1.5mL氯仿及0.6mL乙酸酐并在40℃反应12h，得到mPEG-CHO；将0.2g(3)中制备的的螯合微球溶于50mL乙醇/水(乙醇和水的体积比为1:1)混合溶液中，加入1g的mPEG-CHO，在室温下搅拌反应24h后再加入0.05g还原剂NaBH3，继续反应48h，将反应后产物置于透析袋中，在蒸馏水中透析48h，最后磁性分离得到限进亲和介质。
(5)将60g酪蛋白用1g胰蛋白酶和1g胃蛋白酶在55℃下酶解2h以上得到酶解液，然后采用超滤离心管(10KDa)对酶解液进行超滤得到滤液，将10mg(4)中制备的限进亲和介质加入2mL滤液中进行吸附2h，然后利用外加磁场分离出限进亲和介质,再用0.5mL浓度为0.5mol/L的氯化铵和0.5mL浓度为0.5mol/L的氯化钠对其洗脱1h得到洗脱液，旋转蒸发洗脱液得到浓缩液；
(6)采用HPLC对(5)中浓缩液进行分离，流动相为：A相为水(1％TFA)，B相为乙腈(1％TFA)；分离程序为：0～40min，B相乙腈体积由5％到30％，流速为0.5mL/min，检测波长为280nm，分离收集到氨基酸序列为Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg的血管紧张素转化酶抑制肽。
所述限进亲和介质的Cu2+螯合密度为52μmol/g，mPEG-5000的接枝率为10.3％。
实施例2
一种血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，包括以下步骤：
(1)磁性二氧化硅微球的制备：取0.04g平均粒径为15nm的Fe3O4、1.05mL正硅酸乙酯(TEOS)和0.12mL聚乙二醇单辛基苯基醚(TritionX-100)加入100mL乙醇/水混合液(乙醇和水的体积比为1：1)中并以60KHz功率超声分散15min，然后加入9mL浓度为25％的氨水，反应3h后利用外加磁场分离出固体产品得到磁性二氧化硅微球；
(2)氨基化微球的制备：取0.2g(1)中制备的磁性二氧化硅微球置于三口瓶中，加入200mL乙醇，2mL去离子水，然后超声分散30min，再以400r/min的转速搅拌10min，向三口瓶中逐滴加入1.8mLAPTES，在72℃下回流10h，反应结束后用磁铁在瓶底吸附，倾去上清液，再加入无水乙醇，经超声、洗涤，磁性分离得到氨基化微球；
(3)螯合微球的制备：称取0.15g(2)中制备的氨基化微球，加入2.5mL浓度为0.4mol/L的NaOH和2.5mL浓度为2.5mol/L环氧氯丙烷，接着加入0.9mL的DMSO，在40℃下摇床振荡4h，然后去离子水洗涤得到环氧化微球，将制备出的环氧化微球加入20mL浓度为0.5mol/L的Na2CO3溶液中，再加入0.08g亚氨基二乙酸(IDA)，在40℃下反应8h，反应结束后加入20mL浓度为0.05mol/L的CuSO4溶液，摇床震荡2h得到螯合微球；
(4)限进亲和介质的制备：将2g聚乙二醇单甲醚5000(mPEG-5000)加入装有8mL二甲基亚砜(DMSO)的三口瓶中，再向三口瓶中加入2.8mL氯仿及0.8mL乙酸酐并在38℃反应12h，得到mPEG-CHO；将0.2g(3)中制备的的螯合微球溶于100mL乙醇/水(乙醇和水的体积比为1:1)混合溶液中，加入1g的mPEG-CHO，在室温下搅拌反应24h后再加入0.08g还原剂NaBH3，继续反应48h，将反应后产物置于透析袋中，在蒸馏水中透析48h，最后磁性分离得到限进亲和介质。
(5)将80g酪蛋白用1g胰蛋白酶和1g胃蛋白酶在55℃下酶解2h以上得到酶解液，然后采用超滤离心管(10KDa)对酶解液进行超滤得到滤液，将10mg(4)中制备的限进亲和介质加入2mL滤液中进行吸附1.5h，然后利用外加磁场分离出限进亲和介质,再用1mL浓度为1mol/L的氯化铵和1mL浓度为1mol/L的氯化钠对其洗脱0.5h得到洗脱液，旋转蒸发洗脱液得到浓缩液；
(6)采用HPLC对(5)中浓缩液进行分离，流动相为：A相为水(1％TFA)，B相为乙腈(1％TFA)；分离程序为：0～40min，B相乙腈体积由5％到30％，流速为0.5mL/min，检测波长为280nm，分离收集到氨基酸序列为Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg的血管紧张素转化酶抑制肽。
所述限进亲和介质的Cu2+螯合密度为61μmol/g，mPEG-5000的接枝率为12.4％。
实施例3
一种血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，包括以下步骤：
(1)磁性二氧化硅微球的制备：取0.05g平均粒径为30nm的Fe3O4、0.95mL正硅酸乙酯(TEOS)和0.08mL聚乙二醇单辛基苯基醚(TritionX-100)加入100mL乙醇/水混合液(乙醇和水的体积比为1：1)中并以55KHz功率超声分散8min，然后加入9mL浓度为25％的氨水，反应2.5h后利用外加磁场分离出固体产品得到磁性二氧化硅微球；
(2)氨基化微球的制备：取0.2g(1)中制备的磁性二氧化硅微球置于三口瓶中，加入200mL乙醇，2mL去离子水，然后超声分散30min，再以600r/min的转速搅拌10min，向三口瓶中逐滴加入2.2mLAPTES，在78℃下回流9h，反应结束后用磁铁在瓶底吸附，倾去上清液，再加入无水乙醇，经超声、洗涤，磁性分离得到氨基化微球；
(3)螯合微球的制备：称取0.15g(2)中制备的氨基化微球，加入2.5mL浓度为0.4mol/L的NaOH和2.5mL浓度为2.5mol/L环氧氯丙烷，接着加入1.1mL的DMSO，在35℃下摇床振荡4h，然后去离子水洗涤得到环氧化微球，将制备出的环氧化微球加入20mL浓度为0.5mol/L的Na2CO3溶液中，再加入0.1g亚氨基二乙酸(IDA)，在45℃下反应8h，反应结束后加入20mL浓度为0.05mol/L的CuSO4溶液，摇床震荡2h得到螯合微球；
(4)限进亲和介质的制备：将1.6g聚乙二醇单甲醚5000(mPEG-5000)加入装有6mL二甲基亚砜(DMSO)的三口瓶中，再向三口瓶中加入3mL氯仿及0.7mL乙酸酐并在35℃反应12h，得到mPEG-CHO；将0.2g(3)中制备的的螯合微球溶于80mL乙醇/水(乙醇和水的体积比为1:1)混合溶液中，加入1g的mPEG-CHO，在室温下搅拌反应24h后再加入0.07g还原剂NaBH3，继续反应48h，将反应后产物置于透析袋中，在蒸馏水中透析48h，最后磁性分离得到限进亲和介质。
(5)将100g酪蛋白用1g胰蛋白酶和1g胃蛋白酶在55℃下酶解2h以上得到酶解液，然后采用超滤离心管(10KDa)对酶解液进行超滤得到滤液，将10mg(4)中制备的限进亲和介质加入2mL滤液中进行吸附1h，然后利用外加磁场分离出限进亲和介质,再用0.7mL浓度为0.8mol/L的氯化铵和0.8mL浓度为0.7mol/L的氯化钠对其洗脱0.6h得到洗脱液，旋转蒸发洗脱液得到浓缩液；
(6)采用HPLC对(5)中浓缩液进行分离，流动相为：A相为水(1％TFA)，B相为乙腈(1％TFA)；分离程序为：0～40min，B相乙腈体积由5％到30％，流速为0.5mL/min，检测波长为280nm，分离收集到氨基酸序列为Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg的血管紧张素转化酶抑制肽。
所述限进亲和介质的Cu2+螯合密度为57μmol/g，mPEG-5000的接枝率为14.2％。
本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种血管紧张素转化酶抑制肽，其特征在于，其氨基酸序列为：Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg。
2.一种权利要求1所述的血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.磁性二氧化硅微球的制备：取0.03～0.05g Fe3O4、0.95～1.05mL正硅酸乙酯(TEOS)和0.08～0.12mL聚乙二醇单辛基苯基醚(TritionX-100)加入100mL乙醇/水混合液中并以50～60KHz功率超声分散8～15min，然后加入9mL浓度为25％的氨水，反应2～3h后利用外加磁场分离出固体产品得到磁性二氧化硅微球，所述Fe3O4的粒径为10～30nm，所述乙醇/水混合液中乙醇和水的体积比为1:1；
S2.限进亲和介质的制备：利用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)将S1中的磁性二氧化硅微球进行氨基化改性得到氨基化微球，再用环氧氯丙烷对氨基化微球进行活化，然后用活化后的氨基化微球螯合铜离子得到螯合微球；将1～2g聚乙二醇单甲醚5000(mPEG-5000)加入装有4～8mL二甲基亚砜(DMSO)的三口瓶中，再向三口瓶中加入1.5～3mL氯仿及0.6～0.8mL乙酸酐并在35～40℃反应12h，得到mPEG-CHO；将0.2g的螯合微球溶于50～100mL乙醇/水(乙醇和水的体积比为1:1)混合溶液中，加入1g的mPEG-CHO，在室温下搅拌反应24h后再加入0.05～0.08g还原剂NaBH3，继续反应48h，将反应后产物置于透析袋中，在蒸馏水中透析48h，最后磁性分离得到限进亲和介质；
S3.将酪蛋白用胰蛋白酶和胃蛋白酶在55℃下酶解2h以上得到酶解液，然后采用10KDa超滤离心管对酶解液进行超滤得到滤液，将10mg S2中的限进亲和介质加入2mL滤液中进行吸附1～2h，然后利用外加磁场分离出限进亲和介质,再用0.5～1mL浓度为0.5～1mol/L的氯化铵和0.5～1mL浓度为0.5～1mol/L的氯化钠对其洗脱0.5～1h得到洗脱液，旋转蒸发洗脱液得到浓缩液；
S4.采用HPLC对S3中所述浓缩液进行分离，流动相为：A相为水(1％TFA)，B相为乙腈(1％TFA)；分离程序为：0～40min，B相乙腈体积由5％到30％，流速为0.5mL/min，检测波长为280nm，分离收集到氨基酸序列为Leu-Leu-Tyr-Gln-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Pro-Arg的血管紧张素转化酶抑制肽。
3.根据权利要求2所述的血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，其特征在于，S2中所述氨基化微球的制备方法为：取0.2g S1中的磁性二氧化硅微球置于三口瓶中，加入200mL乙醇，2mL去离子水，然后超声分散30min，再以400～600r/min的转速搅拌10min，向三口瓶中逐滴加入1.8～2.2mLAPTES，在72～78℃下回流8～10h，反应结束后用磁铁在瓶底吸附，倾去上清液，再加入无水乙醇，经超声、洗涤，最后磁性分离得到氨基化微球。
4.根据权利要求2所述的血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，其特征在于，S2所述螯合微球的制备方法为：称取0.15g S2中的氨基化微球，加入2.5mL浓度为0.4mol/L的NaOH和2.5mL浓度为2.5mol/L环氧氯丙烷，接着加入0.9～1.1mL的DMSO，在30～40℃下摇床振荡4h，然后去离子水洗涤得到环氧化微球，将制备出的环氧化微球加入20mL浓度为0.5mol/L的Na2CO3溶液中，再加入0.05～0.1g亚氨基二乙酸(IDA)，在40～50℃下反应8h，反应结束后加入20mL浓度为0.05mol/L的CuSO4溶液，摇床震荡2h得到螯合微球。
5.根据权利要求2所述的血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，其特征在于，所述胰蛋白酶和胃蛋白酶的质量比为1：1，所述胰蛋白酶与酪蛋白的质量比为1:60～100。
6.根据权利要求2所述的血管紧张素转化酶抑制肽的制备提取方法，其特征在于，所述限进亲和介质的Cu2+螯合密度不低于50μmol/g，mPEG-5000的接枝率为10％～50％。
7.权利要求1中的血管紧张素转化酶抑制肽在制备减缓高血压症状的功能食品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710428742.8A CN107163130B (zh) | 2017-06-08 | 2017-06-08 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710428742.8A CN107163130B (zh) | 2017-06-08 | 2017-06-08 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107163130A true CN107163130A (zh) | 2017-09-15 |
| CN107163130B CN107163130B (zh) | 2021-02-02 |
Family
ID=59825701
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710428742.8A Active CN107163130B (zh) | 2017-06-08 | 2017-06-08 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107163130B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108048520A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-05-18 | 周文辽 | 一种利用贝肉制备ace抑制肽的方法 |
| CN108077543A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-05-29 | 周文辽 | 一种降血压口香糖的制备方法 |
| CN108208168A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-06-29 | 周文辽 | 一种具有降血压功能的奶制品制备方法 |
| CN109485700A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-03-19 | 广西大学 | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 |
| CN115920793A (zh) * | 2022-12-28 | 2023-04-07 | 江苏海洋大学 | 一种血管紧张素转化酶ace功能化磁性纳米微球的制备及其应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03280835A (ja) * | 1990-03-29 | 1991-12-11 | Yamasa Shoyu Co Ltd | 卵白分解物およびそれを含有する食品 |
| JPH06340692A (ja) * | 1992-05-08 | 1994-12-13 | Suetsuna Yoko | 新規なヘクサペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素 阻害剤 |
| CN101845080A (zh) * | 2010-01-08 | 2010-09-29 | 宁波大学 | 一种血管紧张素转化酶的抑制肽及其制备方法 |
| CN102133519A (zh) * | 2010-11-25 | 2011-07-27 | 南开大学 | 限进手性色谱固定相材料及其制备方法 |
| CN103275176A (zh) * | 2013-06-18 | 2013-09-04 | 天津商业大学 | 一种ace抑制肽及其制备方法 |
| CN104592350A (zh) * | 2013-06-18 | 2015-05-06 | 天津商业大学 | 一种ace抑制肽及其制备方法 |
-
2017
- 2017-06-08 CN CN201710428742.8A patent/CN107163130B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03280835A (ja) * | 1990-03-29 | 1991-12-11 | Yamasa Shoyu Co Ltd | 卵白分解物およびそれを含有する食品 |
| JPH06340692A (ja) * | 1992-05-08 | 1994-12-13 | Suetsuna Yoko | 新規なヘクサペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素 阻害剤 |
| CN101845080A (zh) * | 2010-01-08 | 2010-09-29 | 宁波大学 | 一种血管紧张素转化酶的抑制肽及其制备方法 |
| CN102133519A (zh) * | 2010-11-25 | 2011-07-27 | 南开大学 | 限进手性色谱固定相材料及其制备方法 |
| CN103275176A (zh) * | 2013-06-18 | 2013-09-04 | 天津商业大学 | 一种ace抑制肽及其制备方法 |
| CN104592350A (zh) * | 2013-06-18 | 2015-05-06 | 天津商业大学 | 一种ace抑制肽及其制备方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| S.V.SILVA等: "Bioactive Peptides in Ovine and Caprine Cheeselike Systems Prepared with Proteases from Cynara cardunculus", 《J.DAIRY SCI.》 * |
| 何跃文等: "mPEG修饰固定化金属离子介质的制备及应用研究", 《食品科技》 * |
| 徐存华: "磁性Si02微球制备及其亲和分离血管紧张素转化酶抑制肽的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
| 胡玮等: "四氧化三铁磁性纳米微粒表面的氨基化修饰", 《化学研究》 * |
| 谭斌: "聚乙二醇限进亲和介质的制备及应用研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108048520A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-05-18 | 周文辽 | 一种利用贝肉制备ace抑制肽的方法 |
| CN108077543A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-05-29 | 周文辽 | 一种降血压口香糖的制备方法 |
| CN108208168A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-06-29 | 周文辽 | 一种具有降血压功能的奶制品制备方法 |
| CN108048520B (zh) * | 2018-01-31 | 2019-02-12 | 青岛海盈智高新技术有限公司 | 一种利用贝肉制备ace抑制肽的方法 |
| CN109485700A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-03-19 | 广西大学 | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 |
| CN109485700B (zh) * | 2018-12-05 | 2021-08-17 | 广西大学 | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 |
| CN115920793A (zh) * | 2022-12-28 | 2023-04-07 | 江苏海洋大学 | 一种血管紧张素转化酶ace功能化磁性纳米微球的制备及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107163130B (zh) | 2021-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107163130A (zh) | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 | |
| CN104372054A (zh) | 一种鳕鱼皮胶原蛋白源螯合肽及其制备方法 | |
| CN102849817B (zh) | 生物吸附剂填充柱分离重金属铅镉的方法 | |
| CN103626847A (zh) | 一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽及其制备方法 | |
| WO1998006739A1 (en) | Method for purification of recombinant proteins | |
| CN104628810B (zh) | 一种细胞膜蛋白质富集纯化方法 | |
| CN103880945B (zh) | 制备高纯度胸腺法新的方法 | |
| CN102040674A (zh) | 四配位体金属螯合层析填料乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶制备方法 | |
| CN100999746A (zh) | 酶法合成γ－D－谷氨酰－L－色氨酸的方法 | |
| CN109485700B (zh) | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 | |
| CN101367844A (zh) | 一种从阿拉伯胶水解液中提取阿拉伯糖的方法 | |
| CN102671638B (zh) | 一种仿生物特异性免疫吸附材料及其制备方法与应用 | |
| CN102049241A (zh) | 贵金属螯合吸附树脂的制备 | |
| CN101270351B (zh) | 一种采用金属亲和膜提纯木瓜蛋白酶的方法 | |
| CN108059673B (zh) | 一种人血清中分离免疫球蛋白IgG的方法 | |
| CN112645994B (zh) | 一种红景天苷的提取工艺 | |
| CN101402949B (zh) | 一种利用钴离子金属螯合亲和膜纯化木瓜蛋白酶的方法 | |
| CN113941317B (zh) | 一种SiO2@Uio-66固相萃取柱的制备及其应用 | |
| CN101307309B (zh) | 一种利用金属螯合亲和膜提纯菠萝蛋白酶的方法 | |
| CN102872808B (zh) | 通过重金属吸附材料实现铜镍分离、富集、提纯的方法 | |
| CN103880951B (zh) | 一种通过乌司他丁亲和层析介质制备纯品乌司他丁的方法 | |
| CN105381631B (zh) | 一种鲜味肽亲和柱的制备方法 | |
| CN104744585B (zh) | 一种扩张床吸附（eba）技术制备纤维蛋白原的工艺方法 | |
| CN105301230A (zh) | 一种基于疏水性电荷诱导磁性微球的抗体荧光标记新方法 | |
| CN102146361B (zh) | 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |