CN109485700A - 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 - Google Patents
一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109485700A CN109485700A CN201811477568.7A CN201811477568A CN109485700A CN 109485700 A CN109485700 A CN 109485700A CN 201811477568 A CN201811477568 A CN 201811477568A CN 109485700 A CN109485700 A CN 109485700A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- ace inhibitory
- added
- component
- volume
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 101000984728 Chiropsoides quadrigatus Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptide Proteins 0.000 title claims abstract description 57
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 27
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 title 1
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 claims abstract description 63
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 51
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 26
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 claims abstract description 23
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- RCHFYMASWAZQQZ-ZANVPECISA-N Gly-Trp-Ala Chemical group C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CN)=CNC2=C1 RCHFYMASWAZQQZ-ZANVPECISA-N 0.000 claims abstract description 16
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 15
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 154
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 65
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 50
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 30
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 24
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 20
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 claims description 18
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 claims description 18
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 claims description 18
- 241001212699 Pinctada martensii Species 0.000 claims description 17
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 claims description 17
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 16
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000006735 epoxidation reaction Methods 0.000 claims description 15
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 15
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 14
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 13
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 11
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-3-methyloxirane Chemical compound CC1OC1Cl LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 claims description 10
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 10
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 10
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 claims description 9
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 7
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 7
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 claims description 7
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims description 6
- 108010021724 tonin Proteins 0.000 claims description 6
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 5
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 claims description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 5
- -1 Ethyl alcohol Chemical compound 0.000 claims description 4
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 claims description 4
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims description 3
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000001573 invertase Substances 0.000 claims description 3
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 claims description 3
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N Leu-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N 0.000 claims 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 claims 1
- 241000879903 Pteria Species 0.000 abstract description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 4
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 12
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000001597 immobilized metal affinity chromatography Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 208000031662 Noncommunicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001906 matrix-assisted laser desorption--ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N octoxybenzene Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=CC=C1 ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014860 sensory perception of taste Effects 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法,其以马氏珠母贝肉蛋白为原料,采用碱性蛋白酶进行酶解后,利用磁性限进亲和介质从马氏珠母贝肉蛋白的酶解产物超滤液中快速分离出具有ACE抑制活性的组分,并通过反相色谱柱进一步分离得到两个新的具有高ACE抑制活性的肽段,其氨基酸序列为His‑Leu‑His‑Thr或者为Gly‑Trp‑Ala,IC50值分别为458.06±3.24μmol/L和109.25±1.45μmol/L。本发明制备ACE抑制肽的原料丰富,制备工艺合理、可操作性强,两个新的ACE抑制肽可以用于制备减缓高血压症状的功能食品。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法。
背景技术
高血压可导致许多严重疾病,包括心脏和血管疾病,肾脏疾病,动脉硬化和中风(世界卫生组织,2014年全球非传染性疾病报告)。血管紧张素转换酶(ACE)通过引起血管收缩而在血压升高中起关键作用。ACE抑制剂的使用通常被认为是降低血压并预防心血管疾病的有效解决方案。然而,化学合成的ACE抑制剂存在副作用,如引起咳嗽,皮疹,异常味觉等。与合成的ACE抑制剂相比,源自天然产物的ACE抑制肽稳定并且副作用最小,是重要的ACE抑制剂之一。ACE抑制肽来源于食物蛋白的酶解产物,如植物蛋白,鱼类,牛奶,贝类等。
马氏珠母贝,是世界上三大海产珍珠贝类之一。其肉质鲜美、蛋白含量高、脂肪低,营养价值丰富。近年来,由于珍珠养殖业的快速发展,其数量已相当可观。采珠后剩余的贝肉因为肉质口感的限制以及缺乏有效的加工手段,除少数用于加工鱼饲料和海产调味料外,大部分被作为饲料廉价出售,或当作生活废弃物进行处理,不仅造成了资源的浪费,而且也带来了严重的环境污染。因此,提高马氏珠母贝肉的附加值,提高其经济效益和资源利用率,具有重要意义。目前,有关马氏珠母贝肉高值化利用的研究还很少,可以将利用蛋白酶对马氏珠母贝肉进行酶解来获得ACE抑制肽作为提高马氏珠母贝肉综合利用效率的一个重要研究内容。
然而从酶解产物中分离ACE抑制肽存在分离效率低的瓶颈。传统的分离方法如超滤、微滤、盐析、透析、电泳等存在操作过程复杂、分离速度慢、样品处理量小、回收率低以及成本昂贵等问题。因此,如何快速、高效的从天然产物中分离纯化ACE抑制肽成为学者研究的重点内容。近年来,固定化金属亲和层析(IMAC)技术成为高效分离多肽的有力技术之一,许多有关IMAC分离多肽的研究已有报道。此外,IMAC也被用于分离蛋白质酶解产物中的ACE抑制肽,然而大多数报道的ACE抑制肽一般是具有2-12个氨基酸的小分子肽,并且在酶解产物中含量很低,酶解液中大量存在的大分子杂蛋白不仅会影响小分子肽的扩散,也会竞争IMAC的亲和吸附位点,大大降低目标肽的纯度及吸附量。同时近年来研究发现,限进介质(RAM)作为生物样品直接进行高通量分析的重要工具,其可以有效减少大分子的吸附,还可以特异性吸附小分子。这主要是基于其表面修饰的亲水性聚合物链如聚乙二醇或纤维素可以形成半透膜结构能有效地阻止介质表面上吸附大分子,而小分子则可以自由通过膜结构与亲和位点结合而被保留。
在本发明中,结合IMAC和RAM技术的优势制备了磁性限进亲和介质并用于快速从马氏珠母贝肉蛋白的酶解产物中分离ACE抑制肽,而且使用限进亲和介质分离ACE抑制肽具有效率高,成本低的特点。
发明内容
本发明为了解决现有技术的不足,提供了一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法,该方法利用制备的限进亲和介质快速从马氏珠母贝肉贝肉蛋白的酶解产物中快速分离ACE抑制肽,提高了ACE抑制肽的分离效率,并且获得对血管紧张素转化酶具有高抑制活性的ACE抑制肽。
本发明是采用如下技术方案实现的:
一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽,其氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala。
上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽为从马氏珠母贝肉中提取获得。
一种上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的制备方法,其包括以下步骤:
S1.限进亲和介质的制备:
(1)取平均粒径为10~20 nm的Fe3O4分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到Fe3O4的质量浓度为0.3~0.5 mg/mL的A溶液,然后按照正硅酸乙酯: A溶液为1~1.5%的体积百分比加入正硅酸乙酯,并且按照聚乙二醇单辛基苯基醚:A溶液为0.1~0.2%的体积百分比加入聚乙二醇单辛基苯基醚,并以50 kHz功率超声10 min,得到B溶液,然后按照氨水:B溶液为9~11 %的体积百分比加入浓度为25 wt%的氨水,反应2~4 h后利用外加磁场分离出固体产物得到磁性二氧化硅微球;
(2)取上述步骤(1)中制备的磁性二氧化硅微球分散于乙醇和水体积比为99:1的乙醇/水混合溶液中,得到磁性二氧化硅微球的质量浓度为1~2 mg/mL的C溶液,对C溶液进行超声分散20~30 min,再以500 r/min的转速搅拌10~15 min,然后按照3-氨丙基三乙氧基硅烷:C溶液为1~3%的体积百分比加入3-氨丙基三乙氧基硅烷,在70~75 °C下回流8~10 h,反应结束后借助磁铁分离产物,加入无水乙醇和水反复洗涤3~5遍,磁性分离得到氨基化微球;
(3)将上述步骤(2)中得到氨基化微球分散在摩尔浓度为0.4 mol/L的NaOH中,得到氨基化微球的质量浓度为60~80 mg/mL的D溶液,然后按照环氧氯丙烷: D溶液为50~60%的体积百分比加入环氧氯丙烷,并且按照二甲基亚砜: D溶液20~30%的体积百分比加入二甲基亚砜,在30~35 °C下摇床振荡4~6 h,然后用去离子水洗涤3~5遍得到环氧化微球,再将上述获得的环氧化微球分散于摩尔浓度为0.5 mol/L的Na2CO3溶液中,得到环氧化微球的质量浓度为7~8 mg/mL的E溶液,然后再按照亚氨基二乙酸: E溶液为0.01~0.03 wt%的重量百分比加入亚氨基二乙酸得到F溶液,在40~50 °C下反应6~8 h,反应结束后按照每7~8g重量的F溶液中加入1mL CuSO4溶液的比例加入摩尔浓度为0.05 mol/L的CuSO4溶液,摇床震荡2~4h得到亲和微球;
(4)按照每1g重量的聚乙二醇单甲醚溶于4mL二甲基亚砜的比例将聚乙二醇单甲醚溶于二甲基亚砜中得到G溶液,再按照氯仿: G溶液为30~40%的体积百分比加入氯仿及按照乙酸酐: G溶液为15~20%的体积百分比加入乙酸酐,在30~40 °C下反应10~12 h,得到醛基化改性的聚乙二醇单甲醚;将上述步骤(3)制备的的亲和微球分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到亲和微球的质量浓度为4~6 mg/mL的H溶液,然后按照醛基化改性的聚乙二醇单甲醚: H溶液为2~4 wt%的重量百分比加入上述制备的醛基化改性的聚乙二醇单甲醚,得到I溶液,在室温下搅拌反应20~24 h后再按照NaBH4 : I溶液为0.01~0.03 wt%的重量百分比加入NaBH4,继续反应24~48 h,将反应后产物置于透析袋中,在蒸馏水中透析24~48 h,最后磁性分离得到磁性限进亲和介质;
S2.马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤液的制备:
将贝肉去足丝洗净,并匀浆至糊状,将贝肉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到贝肉的质量浓度为350~400 g/L的J溶液,煮沸10~15 min,按照碱性蛋白酶: J溶液为0.5~1 wt%的重量百分比加入碱性蛋白酶进行酶解,酶解条件为pH 9~10,温度50~60 °C,酶解2~4 h,最后加热至100 °C灭酶10~15 min,得到酶解液;将所得酶解液的上清液经0.45 μm滤膜微滤后,用截留分子量为10 kDa的超滤膜进行超滤,得到超滤液;
S3.磁性限进亲和介质分离:
将上述S1中得到的磁性限进亲和介质分散于上述S2中得到的超滤液中,得到磁性限进亲和介质的质量浓度为4~6 mg/mL的K溶液,在30~35°C下进行吸附1~2 h,然后利用外加磁场快速将介质分离,再用0.5~1 mL摩尔浓度为1~1.2mol/L的氯化铵在摇床中对介质洗脱0.5~2 h得到洗脱液,旋转蒸发洗脱液得到浓缩洗脱液;所述的氯化铵溶液中含有氯化钠,氯化钠的摩尔浓度为0.5~1 mol/L;
S4.反相柱色谱分离:
将上述S3中得到的浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离并测定各组分的ACE抑制活性,然后将收集到的具有最高抑制活性的组分浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列为His-Leu-His-Thr 或者为Gly-Trp-Ala 的血管紧张素转化酶抑制肽。
进一步,上述S4中对浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离的分析条件为色谱柱:Agilent SB-C18,检测器:DAD二极管阵列检测器,流动相:A相为含有0.1%TFA的水,B相为含有0.1%TFA的乙腈。
进一步,上述S4中对浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离采用两级分离程序,第一级分离程序为:0~40 min,B相乙腈体积由5%到65%,流速为0.5 mL/min,检测波长:280 nm;收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的两个组分F5和F6分别进行第二级反相柱色谱分离;组分F5的第二级分离程序为:0~5 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F51;组分F6的第二级分离程序为:0~7 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F61;将收集到的具有最高抑制活性的组分F52和F61浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列分别为His-Leu-His-Thr 或者为Gly-Trp-Ala 的血管紧张素转化酶抑制肽。
进一步,上述S1中在步骤(4)里所述的聚乙二醇单甲醚是分子量为5000的聚乙二醇单甲醚。
进一步,在上述S2中向所述的J溶液中加入碱性蛋白酶后,使用质量分数为0.3%的氢氧化钠溶液调节pH值至9~10,再加入一半J溶液体积的摩尔浓度为0.0025mol/L的氯化钙溶液,这样可以有效提高碱性蛋白酶的活性,因为加入的钙离子与碱性蛋白酶通过静电作用力结合,使得碱性蛋白酶分子的平均粒径减小,疏水结构逐渐向酶分子内部转移,有利于碱性蛋白酶活性的提高,加快马氏珠母贝肉蛋白的酶解速度。
进一步,上述所制备提取的血管紧张素转化酶抑制肽可以用于制备减缓高血压症状的功能食品。
本技术方案与现有技术相比较具有以下有益效果:
1、本发明以马氏珠母贝肉蛋白为原料,用碱性蛋白酶酶解后,利用磁性限进亲和介质快速分离出具有较高抑制活性的组分,再利用反相色谱技术对分离后的组分进行分离纯化,并检测每步分离所得组分的ACE抑制活性,最终获得了两种氨基酸序列分别为His-Leu-His-Thr ,缩写为HLHT或者氨基酸序列为Gly-Trp-Ala,缩写为GWA 的ACE抑制肽,它们对血管紧张素转化酶的抑制率分别可以达到85%和83%以上。
2、本发明对马氏珠母贝肉蛋白经过酶解得到的酶解液依次采用0.45 μm的滤膜和截留分子量为10 kDa的超滤膜进行微滤和超滤,有效清除杂质,提高后续磁性限进亲和介质分离的效率。
3、本发明采用反相柱色谱分离的分离纯化方法,并且一级分离后即对各组分进行ACE抑制活性检测,挑选高抑制活性的组分再进行第二级分离和检测,最终获得ACE抑制活性最好的ACE抑制肽,这样可以精确快速地从马氏珠母贝肉蛋白的酶解液中分离出高抑制活性的血管紧张素转化酶抑制肽。
4、本发明制备的限进亲和介质在特异性吸附小分子多肽的同时阻拒大分子杂蛋白的吸附,而且相比于原有的IMAC技术,本发明制备获得的活性组分的含量大幅提高。利用本发明制备的限进亲和介质能够快速地从马氏珠母贝肉蛋白酶解液中吸附分离具有高抑制活性的ACE抑制肽。而且本发明制备的限进亲和介质非常适用于从复杂的生物基质样品中快速、有效的分离出小分子活性物,提高分离效率。
5、本发明制备ACE抑制肽的原料丰富,制备工艺合理、可操作性强,两个新的ACE抑制肽可以用于制备减缓高血压症状的功能食品。
附图说明
图1为实施例1中浓缩洗脱液一级分离的反相柱色谱图。
图2为实施例1中浓缩洗脱液经过一级分离后所得各组分的ACE抑制率(IP)。
图3为实施例1中所述组分F5进行第二级分离的反相柱色谱图。
图4为实施例1中所述组分F5经过第二级分离后所得各组分的ACE抑制率(IP)。
图5为实施例1中所述组分F6进行第二级分离的反相柱色谱图。
图6为实施例1中所述组分F6经过第二级分离后所得各组分的ACE抑制率(IP)。
图7为实施例1中所述的多肽His-Leu-His-Thr的质谱图。
图8为实施例1中所述的多肽Gly-Trp-Ala的质谱图。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明,但不作为对本发明的限制。下列实施例中未注明的具体实验条件和方法,所采用的技术手段通常为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1:
一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽,其氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala。
上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽为从马氏珠母贝肉中提取获得。
一种上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的制备方法,其包括以下步骤:
S1.限进亲和介质的制备:
(1)取平均粒径为10 nm的Fe3O4分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到Fe3O4的质量浓度为0.3 mg/mL的A溶液,然后按照正硅酸乙酯: A溶液为1%的体积百分比加入正硅酸乙酯,并且按照聚乙二醇单辛基苯基醚: A溶液为0.1%的体积百分比加入聚乙二醇单辛基苯基醚,并以50 kHz功率超声10 min,得到B溶液,然后按照氨水: B溶液为9%的体积百分比加入浓度为25 wt%的氨水,反应2 h后利用外加磁场分离出固体产物得到磁性二氧化硅微球;
(2)取上述步骤(1)中制备的磁性二氧化硅微球分散于乙醇和水体积比为99:1的乙醇/水混合溶液中,得到磁性二氧化硅微球的质量浓度为1mg/mL的C溶液,对C溶液进行超声分散30 min,再以500 r/min的转速搅拌10 min,然后按照3-氨丙基三乙氧基硅烷: C溶液为1%的体积百分比加入3-氨丙基三乙氧基硅烷,在75 °C下回流8 h,反应结束后借助磁铁分离产物,加入无水乙醇和水反复洗涤3遍,磁性分离得到氨基化微球;
(3)将上述步骤(2)中得到氨基化微球分散在摩尔浓度为0.4 mol/L的NaOH中,得到氨基化微球的质量浓度为60 mg/mL的D溶液,然后按照环氧氯丙烷: D溶液为50%的体积百分比加入环氧氯丙烷,并且按照二甲基亚砜: D溶液20%的体积百分比加入二甲基亚砜,在30°C下摇床振荡4 h,然后用去离子水洗涤4遍得到环氧化微球,再将上述获得的环氧化微球分散于摩尔浓度为0.5 mol/L的Na2CO3溶液中,得到环氧化微球的质量浓度为7mg/mL的E溶液,然后再按照亚氨基二乙酸: E溶液为0.01 wt%的重量百分比加入亚氨基二乙酸得到F溶液,在50 °C下反应8 h,反应结束后按照每7g重量的F溶液中加入1mL CuSO4溶液的比例加入摩尔浓度为0.05 mol/L的CuSO4溶液,摇床震荡2 h得到亲和微球;
(4)按照每1g重量的聚乙二醇单甲醚溶于4mL二甲基亚砜的比例将聚乙二醇单甲醚溶于二甲基亚砜中得到G溶液,再按照氯仿: G溶液为37.5%的体积百分比加入氯仿及按照乙酸酐: G溶液为15%的体积百分比加入乙酸酐,在40 °C下反应12 h,得到醛基化改性的聚乙二醇单甲醚;将上述步骤(3)制备的的亲和微球分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到亲和微球的质量浓度为4mg/mL的H溶液,然后按照醛基化改性的聚乙二醇单甲醚: H溶液为2 wt%的重量百分比加入上述制备的醛基化改性的聚乙二醇单甲醚,得到I溶液,在室温下搅拌反应24 h后再按照NaBH4 : I溶液为0.01wt%的重量百分比加入NaBH4,继续反应48 h,将反应后产物置于透析袋中,在蒸馏水中透析48 h,最后磁性分离得到磁性限进亲和介质;
S2.马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤液的制备:
将贝肉去足丝洗净,并匀浆至糊状,将贝肉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到贝肉的质量浓度为400 g/L的J溶液,煮沸15 min,按照碱性蛋白酶: J溶液为0.5 wt%的重量百分比加入碱性蛋白酶进行酶解,酶解条件为pH 9.5,温度55 °C,酶解2 h,最后加热至100 °C灭酶10 min,得到酶解液;将所得酶解液的上清液经0.45 μm滤膜微滤后,用截留分子量为10kDa的超滤膜进行超滤,得到超滤液;
S3.磁性限进亲和介质分离:
将上述S1中得到的磁性限进亲和介质分散于上述S2中得到的超滤液中,得到磁性限进亲和介质的质量浓度为5 mg/mL的K溶液,在35°C下进行吸附2 h,然后利用外加磁场快速将介质分离,再用1 mL摩尔浓度为1.5 mol/L的氯化铵在摇床中对介质洗脱 1h得到洗脱液,旋转蒸发洗脱液得到浓缩洗脱液;所述的氯化铵溶液中含有氯化钠,氯化钠的摩尔浓度为1mol/L;
S4.反相柱色谱分离:
将上述S3中得到的浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离采用两级分离程序,第一级分离程序为:0~40 min,B相乙腈体积由5%到65%,流速为0.5 mL/min,检测波长:280 nm;收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的两个组分F5和F6分别进行第二级反相柱色谱分离;组分F5的第二级分离程序为:0~5 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F51;组分F6的第二级分离程序为:0~7 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F61;将收集到的具有最高抑制活性的组分F52和F61浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列分别为His-Leu-His-Thr 或者为Gly-Trp-Ala 的血管紧张素转化酶抑制肽;所述反相柱色谱分离的分析条件为色谱柱:Agilent SB-C18,检测器:DAD二极管阵列检测器,流动相:A相为含有0.1%TFA的水,B相为含有0.1%TFA的乙腈。
实施例2:
一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽,其氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala。
上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽为从马氏珠母贝肉中提取获得。
一种制备上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的方法,其包括以下步骤:
S1.限进亲和介质的制备:
(1)取平均粒径为20 nm的Fe3O4分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到Fe3O4的质量浓度为0.5 mg/mL的A溶液,然后按照正硅酸乙酯: A溶液为1.5%的体积百分比加入正硅酸乙酯,并且按照聚乙二醇单辛基苯基醚: A溶液为0.2%的体积百分比加入聚乙二醇单辛基苯基醚,并以50 kHz功率超声10 min,得到B溶液,然后按照氨水: B溶液为10 %的体积百分比加入浓度为25 wt%的氨水,反应3 h后利用外加磁场分离出固体产物得到磁性二氧化硅微球;
(2)取上述步骤(1)中制备的磁性二氧化硅微球分散于乙醇和水体积比为99:1的乙醇/水混合溶液中,得到磁性二氧化硅微球的质量浓度为2mg/mL的C溶液,对C溶液进行超声分散25 min,再以500 r/min的转速搅拌15 min,然后按照3-氨丙基三乙氧基硅烷: C溶液为2%的体积百分比加入3-氨丙基三乙氧基硅烷,在72 °C下回流10 h,反应结束后借助磁铁分离产物,加入无水乙醇和水反复洗涤4遍,磁性分离得到氨基化微球;
(3)将上述步骤(2)中得到氨基化微球分散在摩尔浓度为0.4 mol/L的NaOH中,得到氨基化微球的质量浓度为70 mg/mL的D溶液,然后按照环氧氯丙烷: D溶液为55%的体积百分比加入环氧氯丙烷,并且按照二甲基亚砜: D溶液30%的体积百分比加入二甲基亚砜,在35°C下摇床振荡6 h,然后用去离子水洗涤3遍得到环氧化微球,再将上述获得的环氧化微球分散于摩尔浓度为0.5 mol/L的Na2CO3溶液中,得到环氧化微球的质量浓度为8mg/mL的E溶液,然后再按照亚氨基二乙酸: E溶液为0.02 wt%的重量百分比加入亚氨基二乙酸得到F溶液,在40 °C下反应7 h,反应结束后按照每8g重量的F溶液中加入1mL CuSO4溶液的比例加入摩尔浓度为0.05 mol/L的CuSO4溶液,摇床震荡4 h得到亲和微球;
(4)按照每1g重量的聚乙二醇单甲醚溶于4mL二甲基亚砜的比例将聚乙二醇单甲醚溶于二甲基亚砜中得到G溶液,再按照氯仿: G溶液为30%的体积百分比加入氯仿及按照乙酸酐: G溶液为20%的体积百分比加入乙酸酐,在30 °C下反应10 h,得到醛基化改性的聚乙二醇单甲醚;将上述步骤(3)制备的的亲和微球分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到亲和微球的质量浓度为5mg/mL的H溶液,然后按照醛基化改性的聚乙二醇单甲醚: H溶液为3 wt%的重量百分比加入上述制备的醛基化改性的聚乙二醇单甲醚,得到I溶液,在室温下搅拌反应20 h后再按照NaBH4 : I溶液为0.02wt%的重量百分比加入NaBH4,继续反应36 h,将反应后产物置于透析袋中,在蒸馏水中透析36 h,最后磁性分离得到磁性限进亲和介质;
S2.马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤液的制备:
将贝肉去足丝洗净,并匀浆至糊状,将贝肉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到贝肉的质量浓度为380 g/L的J溶液,煮沸10 min,按照碱性蛋白酶: J溶液为1 wt%的重量百分比加入碱性蛋白酶进行酶解,使用质量分数为0.3%的氢氧化钠溶液调节pH值至9,再加入一半J溶液体积的摩尔浓度为0.0025mol/L的氯化钙溶液,在温度50 °C下,酶解3 h,最后加热至100 °C灭酶15 min,得到酶解液;将所得酶解液的上清液经0.45 μm滤膜微滤后,用截留分子量为10 kDa的超滤膜进行超滤,得到超滤液;
S3.磁性限进亲和介质分离:
将上述S1中得到的磁性限进亲和介质分散于上述S2中得到的超滤液中,得到磁性限进亲和介质的质量浓度为4 mg/mL的K溶液,在30°C下进行吸附1 h,然后利用外加磁场快速将介质分离,再用0.75 mL摩尔浓度为1 mol/L的氯化铵在摇床中对介质洗脱 2h得到洗脱液,旋转蒸发洗脱液得到浓缩洗脱液;所述的氯化铵溶液中含有氯化钠,氯化钠的摩尔浓度为1.2 mol/L;
S4.反相柱色谱分离:
将上述S3中得到的浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离采用两级分离程序,第一级分离程序为:0~40 min,B相乙腈体积由5%到65%,流速为0.5 mL/min,检测波长:280 nm;收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的两个组分F5和F6分别进行第二级反相柱色谱分离;组分F5的第二级分离程序为:0~5 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F51;组分F6的第二级分离程序为:0~7 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F61;将收集到的具有最高抑制活性的组分F52和F61浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列分别为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala的血管紧张素转化酶抑制肽;所述反相柱色谱分离的分析条件为色谱柱:Agilent SB-C18,检测器:DAD二极管阵列检测器,流动相:A相为含有0.1%TFA的水,B相为含有0.1%TFA的乙腈。
实施例3:
一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽,其氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala。
上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽为从马氏珠母贝肉中提取获得。
一种上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的制备方法,其包括以下步骤:
S1.限进亲和介质的制备:
(1)取平均粒径为15 nm的Fe3O4分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到Fe3O4的质量浓度为0.4 mg/mL的A溶液,然后按照正硅酸乙酯: A溶液为1.2%的体积百分比加入正硅酸乙酯,并且按照聚乙二醇单辛基苯基醚: A溶液为0.15%的体积百分比加入聚乙二醇单辛基苯基醚,并以50 kHz功率超声10 min,得到B溶液,然后按照氨水: B溶液为11 %的体积百分比加入浓度为25 wt%的氨水,反应4h后利用外加磁场分离出固体产物得到磁性二氧化硅微球;
(2)取上述步骤(1)中制备的磁性二氧化硅微球分散于乙醇和水体积比为99:1的乙醇/水混合溶液中,得到磁性二氧化硅微球的质量浓度为1.5mg/mL的C溶液,对C溶液进行超声分散20 min,再以500 r/min的转速搅拌12 min,然后按照3-氨丙基三乙氧基硅烷: C溶液为3%的体积百分比加入3-氨丙基三乙氧基硅烷,在70 °C下回流9 h,反应结束后借助磁铁分离产物,加入无水乙醇和水反复洗涤5遍,磁性分离得到氨基化微球;
(3)将上述步骤(2)中得到氨基化微球分散在摩尔浓度为0.4 mol/L的NaOH中,得到氨基化微球的质量浓度为80 mg/mL的D溶液,然后按照环氧氯丙烷: D溶液为60%的体积百分比加入环氧氯丙烷,并且按照二甲基亚砜: D溶液25%的体积百分比加入二甲基亚砜,在32°C下摇床振荡5 h,然后用去离子水洗涤5遍得到环氧化微球,再将上述获得的环氧化微球分散于摩尔浓度为0.5 mol/L的Na2CO3溶液中,得到环氧化微球的质量浓度为7.5mg/mL的E溶液,然后再按照亚氨基二乙酸: E溶液为0.03 wt%的重量百分比加入亚氨基二乙酸得到F溶液,在45 °C下反应6 h,反应结束后按照每7.5g重量的F溶液中加入1mL CuSO4溶液的比例加入摩尔浓度为0.05 mol/L的CuSO4溶液,摇床震荡3 h得到亲和微球;
(4)按照每1g重量的聚乙二醇单甲醚溶于4mL二甲基亚砜的比例将聚乙二醇单甲醚溶于二甲基亚砜中得到G溶液,再按照氯仿: G溶液为40%的体积百分比加入氯仿及按照乙酸酐: G溶液为18%的体积百分比加入乙酸酐,在35 °C下反应11 h,得到醛基化改性的聚乙二醇单甲醚;将上述步骤(3)制备的的亲和微球分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到亲和微球的质量浓度为6mg/mL的H溶液,然后按照醛基化改性的聚乙二醇单甲醚: H溶液为4 wt%的重量百分比加入上述制备的醛基化改性的聚乙二醇单甲醚,得到I溶液,在室温下搅拌反应22 h后再按照NaBH4: I溶液为0.03wt%的重量百分比加入NaBH4,继续反应24 h,将反应后产物置于透析袋中,在蒸馏水中透析24 h,最后磁性分离得到磁性限进亲和介质;
S2.马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤液的制备:
将贝肉去足丝洗净,并匀浆至糊状,将贝肉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到贝肉的质量浓度为350g/L的J溶液,煮沸13 min,按照碱性蛋白酶: J溶液为0.75 wt%的重量百分比加入碱性蛋白酶进行酶解,使用质量分数为0.3%的氢氧化钠溶液调节pH值至10,再加入一半J溶液体积的摩尔浓度为0.0025mol/L的氯化钙溶液,在温度60 °C下,酶解4 h,最后加热至100 °C灭酶12min,得到酶解液;将所得酶解液的上清液经0.45 μm滤膜微滤后,用截留分子量为10 kDa的超滤膜进行超滤,得到超滤液;
S3.磁性限进亲和介质分离:
将上述S1中得到的磁性限进亲和介质分散于上述S2中得到的超滤液中,得到磁性限进亲和介质的质量浓度为6 mg/mL的K溶液,在32°C下进行吸附1.5 h,然后利用外加磁场快速将介质分离,再用0.5 mL摩尔浓度为1.1 mol/L的氯化铵在摇床中对介质洗脱 0.5h得到洗脱液,旋转蒸发洗脱液得到浓缩洗脱液;所述的氯化铵溶液中含有氯化钠,氯化钠的摩尔浓度为0.5 mol/L;
S4.反相柱色谱分离:
将上述S3中得到的浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离采用两级分离程序,第一级分离程序为:0~40 min,B相乙腈体积由5%到65%,流速为0.5 mL/min,检测波长:280 nm;收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的两个组分F5和F6分别进行第二级反相柱色谱分离;组分F5的第二级分离程序为:0~5 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F51;组分F6的第二级分离程序为:0~7 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F61;将收集到的具有最高抑制活性的组分F52和F61浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列分别为His-Leu-His-Thr 或者为Gly-Trp-Ala的血管紧张素转化酶抑制肽;所述反相柱色谱分离的分析条件为色谱柱:Agilent SB-C18,检测器:DAD二极管阵列检测器,流动相:A相为含有0.1%TFA的水,B相为含有0.1%TFA的乙腈。
ACE抑制肽的氨基酸序列分析:将上述实施例1~3中分离浓缩后所得的ACE抑制肽通过MALDI-TOF MS/MS进行结构鉴定。F52的分子量确定为507.117 Da,在此分子量和质谱的基础上,氨基酸序列被鉴定为His-Leu-His-Thr,缩写为HLHT,其IC50值为458.06 ±3.24 μmol/L;F61的分子量确定为334.202 Da,在此分子量和质谱的基础上,氨基酸序列被鉴定为Gly-Trp-Ala,缩写为GWA,其IC50值为109.25±1.45 μmol/L。本申请人委托上海吉尔生化公司合成相应的肽段,并测定其IC50值。HLHT的IC50值为452.23±2.36 μmol/L,GWA的IC50值为98.92± 5.73 μmol/L。化学合成肽的IC50值与首次从马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤液中纯化得到的IC50值相近,这说明质谱结果的正确性。经检索确定,HLHT与GWA 为新发现的ACE抑制肽。
ACE抑制肽的ACE抑制活性试验:
对采用上述实施例1~3中ACE抑制肽的制备方法分离浓缩后所获得的HLHT和GWA两种新发现的ACE抑制肽进行ACE抑制活性测试;
主要试剂配制方法:
ACE溶液:将1U ACE溶于冷的1mol/L pH 8.3的硼酸盐缓冲液(含0.3mol/L NaCl)10mL配制 成0.1U/mLACE溶液,分装,储存于-20℃,备用;
HHL(马尿酰组氨酰亮氨酸)溶液:取HHL适量,以0.1mol/L pH 8.3的硼酸盐缓冲液(含0.3mol/L NaCl)配制成浓度为5mmol/L HHL溶液,备用;
马尿酸标准溶液:准确称取马尿酸标准样品,加超纯水溶解配制成浓度为50μg/mL 马尿酸标准溶液,备用;
反应体系环境为pH 8.3,0.1mol/L硼酸盐缓冲液(含有0.3mol/L NaCl),于1.5mL离心管中,取50μL,5mmol/L HHL,加入20μL样品溶液,混合均匀,37℃±0.5℃恒温水浴中预热5min,然 后加入20μL,0.1U/mL ACE,充分混匀。37℃恒温水浴保温60min后,加入10μL,0.2mol/L HCl中止反应。同时用20μL水代替样品作为空白对照组。反应液离心后用HPLC(Waters)检测Hip生成量。色谱条件:Ghall 12S05-2546C18柱(250mm×4.6mm);乙腈:水(含0.05%TFA)=25:75,等梯度洗脱;流速0.5mL/min;检测波长228nm;进样量10μL。ACE抑制率(IP)按下式进行计算,所得结果见表1:
IP=(Ac-As)/Ac ×100%
式中:Ac为加入抑制剂组中马尿酸的峰面积mAU;
As为空白对照组中马尿酸的峰面积mAU。
采用实施例1~3中ACE抑制肽的制备方法分离浓缩后所获得的ACE抑制肽的半抑制浓度测定:
精确称取ACE抑制肽样品10.0mg,用含0.5mol/L氯化钠、pH8.3、0.1mol/L的硼酸缓冲溶液溶解定容至10mL,得到1.0mol/L的ACE抑制肽样品溶液;取不同量的ACE抑制肽样品溶液按照上述ACE抑制肽的ACE抑制活性试验的方法进行马尿酸含量的测定与抑制率的计算,然后以ACE抑制肽样品自然对数浓度为横坐标,以抑制率为纵坐标做图,计算ACE抑制肽样品对ACE的半抑制率浓度(IC50),其结果见表1。
表1 实施例1~3中所获得的ACE抑制肽的ACE抑制效果
由表1可知,由本发明制备的HLHT和GWA两种ACE抑制肽具有很高的活性和抑制率。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (6)
1.一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽,其特征在于:其氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala 。
2.根据权利要求1所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽,其特征在于:所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽为从马氏珠母贝肉中提取获得。
3.一种权利要求1所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的制备方法,其特征在于:其制备方法包括以下步骤:
S1.限进亲和介质的制备:
(1)取平均粒径为10~20 nm的Fe3O4分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到Fe3O4的质量浓度为0.3~0.5 mg/mL的A溶液,然后按照正硅酸乙酯: A溶液为1~1.5%的体积百分比加入正硅酸乙酯,并且按照聚乙二醇单辛基苯基醚: A溶液为0.1~0.2%的体积百分比加入聚乙二醇单辛基苯基醚,并以50 kHz功率超声10 min,得到B溶液,然后按照氨水: B溶液为9~11 %的体积百分比加入浓度为25 wt%的氨水,反应2~4 h后利用外加磁场分离出固体产物得到磁性二氧化硅微球;
(2)取上述步骤(1)中制备的磁性二氧化硅微球分散于乙醇和水体积比为99:1的乙醇/水混合溶液中,得到磁性二氧化硅微球的质量浓度为1~2 mg/mL的C溶液,对C溶液进行超声分散20~30 min,再以500 r/min的转速搅拌10~15 min,然后按照3-氨丙基三乙氧基硅烷:C溶液为1~3%的体积百分比加入3-氨丙基三乙氧基硅烷,在70~75 °C下回流8~10 h,反应结束后借助磁铁分离产物,分别用无水乙醇和水反复洗涤3~5遍,磁性分离得到氨基化微球;
(3)将上述步骤(2)中得到氨基化微球分散在摩尔浓度为0.4 mol/L的NaOH中,得到氨基化微球的质量浓度为60~80 mg/mL的D溶液,然后按照环氧氯丙烷: D溶液为50~60%的体积百分比加入环氧氯丙烷,并且按照二甲基亚砜:D溶液20~30%的体积百分比加入二甲基亚砜,在30~35 °C下摇床振荡4~6 h,然后用去离子水洗涤3~5遍得到环氧化微球,再将上述获得的环氧化微球分散于摩尔浓度为0.5 mol/L的Na2CO3溶液中,得到环氧化微球的质量浓度为7~8 mg/mL的E溶液,然后再按照亚氨基二乙酸: E溶液为0.01~0.03 wt%的重量百分比加入亚氨基二乙酸得到F溶液,在40~50 °C下反应6~8 h,反应结束后按照每7~8g重量的F溶液中加入1mL CuSO4溶液的比例加入摩尔浓度为0.05 mol/L的CuSO4溶液,摇床震荡2~4 h得到亲和微球;
(4)按照每1g重量的聚乙二醇单甲醚溶于4mL二甲基亚砜的比例将聚乙二醇单甲醚溶于二甲基亚砜中得到G溶液,再按照氯仿: G溶液为30~40%的体积百分比加入氯仿及按照乙酸酐: G溶液为15~20%的体积百分比加入乙酸酐,在30~40 °C下反应10~12 h,得到醛基化改性的聚乙二醇单甲醚;将上述步骤(3)制备的的亲和微球分散于乙醇和水体积比为1:1的乙醇/水混合溶液中,得到亲和微球的质量浓度为4~6 mg/mL的H溶液,然后按照醛基化改性的聚乙二醇单甲醚: H溶液为2~4 wt%的重量百分比加入上述制备的醛基化改性的聚乙二醇单甲醚,得到I溶液,在室温下搅拌反应20~24 h后再按照NaBH4 : I溶液为0.01~0.03 wt%的重量百分比加入NaBH4,继续反应24~48 h,将反应后产物置于透析袋中,在蒸馏水中透析24~48 h,最后磁性分离得到磁性限进亲和介质;
S2.马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤液的制备:
将贝肉去足丝洗净,并匀浆至糊状,将贝肉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到贝肉的质量浓度为350~400 g/L的J溶液,煮沸10~15 min,按照碱性蛋白酶: J溶液为0.5~1 wt%的重量百分比加入碱性蛋白酶进行酶解,酶解条件为pH 9~10,温度50~60 °C,酶解2~4 h,最后加热至100 °C灭酶10~15 min,得到酶解液;将所得酶解液的上清液经0.45 μm滤膜微滤后,用截留分子量为10 kDa的超滤膜进行超滤,得到超滤液;
S3.磁性限进亲和介质分离:
将上述S1中得到的磁性限进亲和介质分散于上述S2中得到的超滤液中,得到磁性限进亲和介质的质量浓度为4~6 mg/mL的K溶液,在30~35°C下进行吸附1~2 h,然后利用外加磁场快速将介质分离,再用0.5~1 mL摩尔浓度为1~1.2mol/L的氯化铵在摇床中对介质洗脱0.5~2 h得到洗脱液,旋转蒸发洗脱液得到浓缩洗脱液;所述的氯化铵溶液中含有氯化钠,氯化钠的摩尔浓度为0.5~1 mol/L;
S4.反相柱色谱分离:
将上述S3中得到的浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离并测定各组分的ACE抑制活性,然后将收集到的具有最高抑制活性的组分浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala 的血管紧张素转化酶抑制肽。
4.根据权利要求3所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的制备方法,其特征在于:所述S4中对浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离的分析条件为色谱柱:Agilent SB-C18,检测器:DAD二极管阵列检测器,流动相:A相为含有0.1%TFA的水,B相为含有0.1%TFA的乙腈。
5.根据权利要求3所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的制备方法,其特征在于:所述S4中对浓缩洗脱液进行反相柱色谱分离采用两级分离程序,第一级分离程序为:0~40 min,B相乙腈体积由5%到65%,流速为0.5 mL/min,检测波长:280 nm;收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的两个组分F5和F6分别进行第二级反相柱色谱分离;组分F5的第二级分离程序为:0~5 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F51;组分F6的第二级分离程序为:0~7 min,B相乙腈体积由1%到25%,流速为1 mL/min,检测波长:280 nm,收集反相柱分离的各组分,测定并选出ACE抑制活性最高的组分F61;将收集到的具有最高抑制活性的组分F52和F61浓缩后利用基质辅助激光电离飞行时间质谱进行结构鉴定得到氨基酸序列为His-Leu-His-Thr 或者为Gly-Trp-Ala 的血管紧张素转化酶抑制肽。
6.一种权利要求1所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽的应用,其特征在于:所述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽可以用于制备减缓高血压症状的功能食品。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811477568.7A CN109485700B (zh) | 2018-12-05 | 2018-12-05 | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811477568.7A CN109485700B (zh) | 2018-12-05 | 2018-12-05 | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109485700A true CN109485700A (zh) | 2019-03-19 |
CN109485700B CN109485700B (zh) | 2021-08-17 |
Family
ID=65698245
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811477568.7A Active CN109485700B (zh) | 2018-12-05 | 2018-12-05 | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109485700B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111004308A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-14 | 华南理工大学 | 一种抑制血管紧张素转换酶的七肽及其应用 |
CN111116712A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-05-08 | 中新国际联合研究院 | 一种具有ace抑制活性的六肽及其应用 |
CN113024633A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-06-25 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种珍珠贝肉来源ace活性抑制肽及其制备筛选方法和应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06166697A (ja) * | 1992-12-01 | 1994-06-14 | Senmi Ekisu Kk | 新規ペプチド、その製法及び用途 |
CN103242430A (zh) * | 2013-05-31 | 2013-08-14 | 南京中医药大学 | 血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 |
CN104762358A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-07-08 | 浙江海洋学院 | 贻贝蛋白降压肽的快速制备方法 |
CN105859868A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-08-17 | 广西科技大学 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法 |
CN107163130A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-09-15 | 广西大学 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 |
-
2018
- 2018-12-05 CN CN201811477568.7A patent/CN109485700B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06166697A (ja) * | 1992-12-01 | 1994-06-14 | Senmi Ekisu Kk | 新規ペプチド、その製法及び用途 |
CN103242430A (zh) * | 2013-05-31 | 2013-08-14 | 南京中医药大学 | 血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 |
CN104762358A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-07-08 | 浙江海洋学院 | 贻贝蛋白降压肽的快速制备方法 |
CN105859868A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-08-17 | 广西科技大学 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法 |
CN107163130A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-09-15 | 广西大学 | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
安桂香: "《食物中血管紧张素转化酶抑制肽的研究进展》", 《食品研究与开发》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111004308A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-14 | 华南理工大学 | 一种抑制血管紧张素转换酶的七肽及其应用 |
CN111116712A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-05-08 | 中新国际联合研究院 | 一种具有ace抑制活性的六肽及其应用 |
CN111004308B (zh) * | 2019-12-30 | 2021-06-08 | 华南理工大学 | 一种抑制血管紧张素转换酶的七肽及其应用 |
CN113024633A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-06-25 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种珍珠贝肉来源ace活性抑制肽及其制备筛选方法和应用 |
CN113024633B (zh) * | 2021-03-12 | 2022-12-27 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种珍珠贝肉来源ace活性抑制肽及其制备筛选方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109485700B (zh) | 2021-08-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109485700A (zh) | 一种血管紧张素转化酶ace抑制肽及其制备方法 | |
CN105254714B (zh) | 一种源自酪蛋白的抗氧化肽及应用 | |
CN104356200B (zh) | 一种抗氧化肽及其制备方法 | |
CN105017412B (zh) | 一种从牛血清中分离高纯度牛血清白蛋白的方法 | |
CN105237622B (zh) | 玉米抗氧化活性肽及其制备方法 | |
CN104356201B (zh) | 一种海参抗氧化多肽 | |
CN104931597B (zh) | 能同时检测水产品中多种类药物残留的方法 | |
CN108196069B (zh) | 一种包含重组融合抗原a和b的丙型肝炎病毒抗体检测试剂及应用和重组融合抗原a和b | |
CN109265536A (zh) | 一种钙螯合肽及其制备方法和应用 | |
CN104610430B (zh) | 利用灵芝蛋白制备的抗氧化多肽及其制备方法 | |
CN115385986B (zh) | 具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的小分子肽及其应用 | |
CN102286589A (zh) | 甲鱼低聚肽的制备方法 | |
CN108103130A (zh) | 从海洋生物蛋白资源中提取分离小分子活性肽的联用工艺 | |
CN107163130A (zh) | 一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备提取方法 | |
CN107602665A (zh) | 一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽 | |
CN104805164A (zh) | 一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽制备方法 | |
CN115152927B (zh) | 一种紫玉米花色苷复合物及其制备方法 | |
CN110627896B (zh) | 一种钙螯合肽及其制备方法和应用 | |
CN109369783B (zh) | 一种多肽rdp1及其提纯方法与应用 | |
CN104628823B (zh) | 一种紫菜抗氧化多肽及其制备方法 | |
CN107991277B (zh) | 五羟色胺-磁性微粒复合物及富集唾液酸化糖蛋白的方法 | |
CN106892965A (zh) | 一种利用复合蛋白酶制备的抗氧化多肽 | |
CN106110290B (zh) | 一种动物睾丸提取物的制备方法 | |
CN107312064A (zh) | 一种抗高血压活性肽GABA‑The‑Pro及应用和药物组合物 | |
CN107337710A (zh) | 一种抗高血压活性肽The‑The‑Pro及应用和药物组合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |