CN102146361B - 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 - Google Patents
一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102146361B CN102146361B CN 201110034437 CN201110034437A CN102146361B CN 102146361 B CN102146361 B CN 102146361B CN 201110034437 CN201110034437 CN 201110034437 CN 201110034437 A CN201110034437 A CN 201110034437A CN 102146361 B CN102146361 B CN 102146361B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- volume
- resin
- amount
- transglutaminase
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 title claims abstract description 49
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims abstract description 18
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 33
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 15
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 6
- GHXRKGHKMRZBJH-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O.OB(O)O GHXRKGHKMRZBJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 6
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 claims description 5
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 5
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 2
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 claims description 2
- WUWHFEHKUQVYLF-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetate Chemical compound [Na+].NCC([O-])=O WUWHFEHKUQVYLF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 4
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- LCGISIDBXHGCDW-VKHMYHEASA-N L-glutamine amide Chemical group NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O LCGISIDBXHGCDW-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000002478 diastatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- -1 phenolic aldehyde Chemical class 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法，它有效地提高了谷氨酰胺转胺酶的比酶活，解决了酶的颜色过深从而影响其应用等问题。本发明仅用一种阳离子交换树脂分离纯化出高纯度的谷氨酰胺转胺酶，方法简单，耗时短，收率高，且可大规模制备，放大到工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法，具体涉及一种采用阳离子树脂分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法。
背景技术
谷氨酰胺转胺酶，又称转谷氨酰胺酶，是一种催化酰基转移反应的转移酶。它可以催化蛋白质分子内和分子间发生交联，蛋白质和氨基酸之间连接，以及蛋白质分子内谷氨酰胺侧链酰胺基的水解，被认为是用来生产各种新型蛋白类加工产品的重要酶种，在食品、生物制药、纺织等领域有着广泛的应用前景。
在发达国家，谷氨酰胺转胺酶已经开始普遍推广应用，在日本已成为食品工业中仅次于淀粉酶的第二大酶种。用微生物发酵法生产谷氨酰胺转胺酶，是一种大量获得廉价谷氨酰胺转胺酶的方法，但目前国内谷氨酰胺转胺酶的发酵水平不高，制得酶粉的比酶活不高，且含有其它杂蛋白，颜色暗沉，影响其在各领域、尤其是生物制药领域的应用。
近些年来，各国对谷氨酰胺转胺酶的纯化的研究取得了长足的进展，但多限于实验室规模，且工艺繁琐、总收率低，不适合工业化生产。目前常用的谷氨酰胺转胺酶的分离纯化工艺采用的是几种层析联合的方法：粗酶经透析后，首先使用CM-纤维素柱进行离子交换层析，洗脱时采用的是梯度洗脱，然后使用superdex或sephadex进行凝胶柱层析。经CM-纤维素柱后酶活收率一般在55-65%，再经凝胶柱层析后酶活收率仅为20-40%，难以满足生产和应用中的需要。
发明内容
针对上述情况，本发明的目的在于提供一种在较大的规模下，采用阳离子交换树脂分离纯化谷氨酰胺转胺酶，得到高比酶活谷氨酰胺转胺酶的方法。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种采用阳离子交换树脂分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法，具体步骤为：
（1）在0-10℃下，用体积为1-5倍树脂量(v/v)的浓度为0.02-0.15mol/L的缓冲液平衡阳离子交换树脂，流速为1/2-3柱体积/小时；
（2）用体积为1/50-1/8倍树脂量(v/v)的谷氨酰胺转胺酶酶活为100-1000U/ml的料液以1/2-2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为2-5倍树脂量(v/v)的浓度为0.02-0.15mol/L的缓冲液以1/2-2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为1/2-5倍树脂量(v/v)的洗脱剂浓度为0.1-1mol/L的洗脱液以1/5-2柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为1000-20000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/5-1/20；
（6）用体积为酶浓缩液体积的1/5-2倍、浓度为40%-100%(v/v)的乙醇溶液沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
上述过程中所用的缓冲液都须经脱气处理，上柱方式为正上柱，即顺流上柱。
阳离子交换树脂骨架的化学组成是聚苯乙烯、聚丙烯酸或酚醛中的一种或几种，优选Amberlite IR-120强酸性阳离子交换树脂、ion exchanger IV弱酸性阳离子交换树脂或者Dowex 50强酸性阳离子交换树脂中的一种。
所述的Amberlite IR-120强酸性阳离子交换树脂、ion exchanger IV弱酸性阳离子交换树脂、Dowex 50强酸性阳离子交换树脂均为市售。
其中，缓冲液是选自乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中的一种。
本发明采用强酸型阳离子交换树脂时，洗脱液优选含H+、Na+、K+、NH4 +等无机离子洗脱剂的洗脱缓冲液，进一步优选含NH4OH、NaCl、K2SO4等洗脱剂的洗脱缓冲液；采用弱酸型阳离子交换树脂时，优先选含稀酸溶液洗脱剂的洗脱缓冲液，进一步优选含HCl、H2SO4等洗脱剂的洗脱缓冲液。
本发明所使用的阳离子交换树脂，具有高载量、高蛋白回收率、低稀释体积的特点，可将分离纯化速度提高5倍。
本发明洗脱收集酶液时采用阶段洗脱，不需使用梯度混合仪。此法不仅设备简单、耗时短、分离效果好，而且酶活回收率高，酶活收率为80-90%，有利于医药级谷氨酰胺转胺酶的产业化。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
谷氨酰胺转胺酶的酶活的测定：以CBZ-Gln-Gly为作用底物，L-谷氨酸-γ-单羟肟酸做标准曲线。1个单位的谷氨酰胺转胺酶酶活定义为：37℃时每分钟催化形成1μmol的L-谷氨酸-γ-单羟肟酸的酶量(U/mL)。
以下实施方式旨在进一步说明本发明，而不是限制本发明。
实施例1
（1）在0-10℃下，用体积为5倍树脂量(v/v)的浓度为0.02mol/L、pH5.0的磷酸盐缓冲液平衡Amberlite IR-120强酸性阳离子交换树脂，流速为3柱体积/小时；
（2）用体积为1/50倍树脂量(v/v)的谷氨酰胺转胺酶酶活为1000U/ml的料液以1/2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为5倍树脂量(v/v)的浓度为0.02mol/L、pH5.0的磷酸盐缓冲液以2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为3倍树脂量(v/v)的含1mol/L K2SO4的0.02mol/L、pH5.0的磷酸盐洗脱液以1/2柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为1000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/5；
（6）用体积为酶浓缩液体积的2倍、浓度为40%(v/v)的乙醇溶液沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
经测定，谷氨酰胺转胺酶的酶活回收率为90.5%，比酶活为23056U/g蛋白质。
实施例2
（1）在0-10℃下，用体积为2倍树脂量(v/v)的浓度为0.1mol/L、pH7.0的Tris-HCl缓冲液平衡ion exchanger IV弱酸性阳离子交换树脂，流速为1柱体积/小时；
（2）用体积为1/8倍树脂量(v/v)的谷氨酰胺转胺酶酶活为100U/ml的料液以2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为3倍树脂量(v/v)的浓度为0.1mol/L、pH7.0的Tris-HCl缓冲液以1.5倍柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为5倍树脂量(v/v)的含0.1mol/L H2SO4的0.1mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗脱液以1柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为10000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/10；
（6）用体积为酶浓缩液体积的1/5倍、浓度为100%(v/v)的乙醇沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
经测定，谷氨酰胺转胺酶的酶活回收率为92.7%，比酶活为22183U/g蛋白质。
实施例3
（1）在0-10℃下，用体积为1倍树脂量(v/v)的浓度为0.15mol/L、pH8.5的硼酸-硼砂缓冲液平衡Dowex 50强酸性阳离子交换树脂，流速为1/2柱体积/小时；
（2）用体积为1/20倍树脂量(v/v)的谷氨酰胺转胺酶酶活为500U/ml的料液以1柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为2倍树脂量(v/v)的浓度为0.15mol/L、pH8.5的硼酸-硼砂缓冲液以1/2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为1/2倍树脂量(v/v)的含0.5mol/L NaCl的0.15mol/L、pH8.5的硼酸-硼砂洗脱液以1/5柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为20000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/20；
（6）用体积为酶浓缩液体积的1/2倍、浓度为80%(v/v)的乙醇溶液沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
经测定，谷氨酰胺转胺酶的酶活回收率为88.2%，比酶活为25246U/g蛋白质。
Claims (4)
1.一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法，其特征在于具体步骤为：
（1）在0-10℃下，用体积为1-5倍树脂量的浓度为0.02-0.15mol/L的缓冲液平衡阳离子交换树脂，流速为1/2-3柱体积/小时，所述阳离子交换树脂为Amberlite IR-120强酸性阳离子交换树脂、ion exchanger IV弱酸性阳离子交换树脂或者Dowex 50强酸性阳离子交换树脂中的一种；
（2）用体积为1/50-1/8倍树脂量的谷氨酰胺转胺酶酶活为100-1000U/ml的料液以1/2-2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为2-5倍树脂量的浓度为0.02-0.15mol/L的缓冲液以1/2-2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为1/2-5倍树脂量的洗脱剂浓度为0.1-1mol/L的洗脱液以1/5-2柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为1000-20000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/5-1/20；
（6）用体积为酶浓缩液体积的1/5-2倍、体积浓度为40%-100%的乙醇溶液沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品；
所述的缓冲液是选自乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中的一种；所述洗脱剂为NH4OH、NaCl、K2SO4、HCl、H2SO4中的一种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于具体步骤为：
（1）在0-10℃下，用体积为5倍树脂量的浓度为0.02mol/L、pH5.0的磷酸盐缓冲液平衡Amberlite IR-120强酸性阳离子交换树脂，流速为3柱体积/小时；
（2）用体积为1/50倍树脂量的谷氨酰胺转胺酶酶活为1000U/ml的料液以1/2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为5倍树脂量的浓度为0.02mol/L、pH5.0的磷酸盐缓冲液以2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为3倍树脂量的含1mol/L K2SO4的0.02mol/L、pH5.0的磷酸盐洗脱液以1/2柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为1000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/5；
（6）用体积为酶浓缩液体积的2倍、体积浓度为40%的乙醇溶液沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于具体步骤为：
（1）在0-10℃下，用体积为2倍树脂量的浓度为0.1mol/L、pH7.0的Tris-HCl缓冲液平衡ion exchanger IV弱酸性阳离子交换树脂，流速为1柱体积/小时；
（2）用体积为1/8倍树脂量的谷氨酰胺转胺酶酶活为100U/ml的料液以2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为3倍树脂量的浓度为0.1mol/L、pH7.0的Tris-HCl缓冲液以1.5倍柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为5倍树脂量的含0.1mol/L H2SO4的0.1mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗脱液以1柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为10000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/10；
（6）用体积为酶浓缩液体积的1/5倍、100%的乙醇沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于具体步骤为：
（1）在0-10℃下，用体积为1倍树脂量的浓度为0.15mol/L、pH8.5的硼酸-硼砂缓冲液平衡Dowex 50强酸性阳离子交换树脂，流速为1/2柱体积/小时；
（2）用体积为1/20倍树脂量的谷氨酰胺转胺酶酶活为500U/ml的料液以1柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱；
（3）用体积为2倍树脂量的浓度为0.15mol/L、pH8.5的硼酸-硼砂缓冲液以1/2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质；
（4）再用体积为1/2倍树脂量的含0.5mol/L NaCl的0.15mol/L、pH8.5的硼酸-硼砂洗脱液以1/5柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶；
（5）收集所得的洗脱液，经过分子截留量为20000道尔顿的超滤设备进行浓缩，至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/20；
（6）用体积为酶浓缩液体积的1/2倍、体积浓度为80%的乙醇溶液沉降，离心，得到沉淀；
（7）将沉淀冷冻干燥，得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110034437 CN102146361B (zh) | 2011-02-01 | 2011-02-01 | 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110034437 CN102146361B (zh) | 2011-02-01 | 2011-02-01 | 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102146361A CN102146361A (zh) | 2011-08-10 |
| CN102146361B true CN102146361B (zh) | 2013-06-19 |
Family
ID=44420835
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110034437 Active CN102146361B (zh) | 2011-02-01 | 2011-02-01 | 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102146361B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102719411B (zh) * | 2012-06-18 | 2014-06-25 | 华东师范大学 | 一种微生物谷氨酰胺转胺酶及其应用 |
| CN106011099A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-10-12 | 华东理工大学 | 分离纯化昆虫谷氨酰胺转氨酶的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5731183A (en) * | 1995-02-09 | 1998-03-24 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacillus-derived transglutaminase |
| CN1334867A (zh) * | 1998-12-28 | 2002-02-06 | 味之素株式会社 | 转谷氨酰胺酶的制备方法 |
-
2011
- 2011-02-01 CN CN 201110034437 patent/CN102146361B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5731183A (en) * | 1995-02-09 | 1998-03-24 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacillus-derived transglutaminase |
| CN1334867A (zh) * | 1998-12-28 | 2002-02-06 | 味之素株式会社 | 转谷氨酰胺酶的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ando H，Adachi M，Umeda K，et al．.Purification and characteristics of a novel transglutaminase derived from microorganisms.《［J］． Agric． Biol． Chem》.1989,第53卷2613－2617. * |
| 尹少谦 王 淼.St reptomyces hygroscopicus 谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及其性质研究.《食品与发酵工业》.2005,第31卷(第3期),26-29. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102146361A (zh) | 2011-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5948343B2 (ja) | トランスジェニックイネの子実からヒト血清アルブミンを精製する方法 | |
| CN108026132B (zh) | 一种烟酰胺单核苷酸的纯化方法 | |
| WO2018228246A1 (zh) | 一种酶法制备谷胱甘肽的方法 | |
| CN102532208B (zh) | 一种连续分离唾液酸的方法 | |
| CN108070032B (zh) | 一种重组人源胶原蛋白的纯化方法 | |
| CN102775523B (zh) | 一种制备高纯度低分子肝素钠的工艺 | |
| CN108424897B (zh) | 一种rhTNK-tPA细胞收获液的纯化方法 | |
| CN101781346B (zh) | 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 | |
| CA1333779C (en) | Method for producing galactooligosaccharide | |
| CN102146361B (zh) | 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 | |
| CN108752405A (zh) | 一种离子交换树脂组合层析分离核苷酸的方法 | |
| CN110038524B (zh) | 一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法 | |
| US4649111A (en) | Process for the preparation of 5'-ribonucleotides | |
| KR102669887B1 (ko) | 시알로올리고당의 정제 | |
| CN104109204A (zh) | 一种从水稻种子中分离纯化重组人乳铁蛋白的方法 | |
| CN101096380A (zh) | 一种从生物转化或多酶反应液中分离纯化胞二磷胆碱的方法 | |
| CN103539688B (zh) | 一种从谷氨酸棒杆菌发酵液中分离提取l-丝氨酸的方法 | |
| CN101914511A (zh) | 一种制备高纯度胰激肽原酶的方法 | |
| CN115073539A (zh) | 一种2’-岩藻糖基乳糖分离纯化的方法 | |
| CN102382150B (zh) | 高纯度混合脱氧核苷酸钠的制备方法 | |
| CN106046066B (zh) | 一种纯化制备高纯度木二糖的方法 | |
| CN105837685A (zh) | 一种基于阴离子交换树脂纯化乌司他丁的方法 | |
| CN101831417A (zh) | 一种l-门冬酰胺酶的制备方法 | |
| RU2612813C1 (ru) | Способ получения гепарина | |
| CN103923230A (zh) | 一种肝素钠的精制方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: The root of 225433 Taixing Road, Jiangsu Yiming home city in Taizhou Province Patentee after: JIANGSU YIMING BIOLOGICAL CO.,LTD. Address before: The root of 225433 Taixing Road, Jiangsu Yiming home city in Taizhou Province Patentee before: YIMING BIOLOGICAL PRODUCTS Co.,Ltd. |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A Method for Separation and Purification of Transglutaminase Effective date of registration: 20230721 Granted publication date: 20130619 Pledgee: Jiangsu Changjiang Commercial Bank Co.,Ltd. Taixing Branch Pledgor: JIANGSU YIMING BIOLOGICAL CO.,LTD. Registration number: Y2023980049356 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Granted publication date: 20130619 Pledgee: Jiangsu Changjiang Commercial Bank Co.,Ltd. Taixing Branch Pledgor: JIANGSU YIMING BIOLOGICAL CO.,LTD. Registration number: Y2023980049356 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A method for separating and purifying glutamine transaminase Granted publication date: 20130619 Pledgee: Jiangsu Changjiang Commercial Bank Co.,Ltd. Taixing Branch Pledgor: JIANGSU YIMING BIOLOGICAL CO.,LTD. Registration number: Y2024980022801 |