CN106794160A - 含有新的氧肟酸衍生物或其盐的药物组合物 - Google Patents

Abstract

含有选自(2S)‑2‑((4‑((4‑((1S)‑1,2‑二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)‑N‑羟基‑N',2‑二甲基丙二酰胺、(2S)‑2‑((4‑((4‑((1R)‑1,2‑二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)‑N‑羟基‑N',2‑二甲基丙二酰胺和(2S)‑N‑羟基‑2‑((4‑((4‑((1S)‑1‑羟基‑2‑甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)‑N',2‑二甲基丙二酰胺中的氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂的药物组合物显示出强的抗菌活性，对水的溶解性优异，作为药物是有用的。

Description

含有新的氧肟酸衍生物或其盐的药物组合物

技术领域

本发明涉及含有新的氧肟酸衍生物或其盐的药物组合物。

背景技术

革兰氏阴性菌由于具有由革兰氏阳性菌中不存在的脂质双分子层构成的外膜，与革兰氏阳性菌相比，存在耐药性强的倾向。另外，已知革兰氏阴性菌具有多个药物外排蛋白，该药物外排蛋白与耐药性相关(Antimicrobial Resistance，2002年，3月1日，34，第634-640页)。

在革兰氏阴性菌中，特别是绿脓杆菌对各种抗菌药显示固有耐药性的倾向强。近年来，在医疗现场，对碳青霉烯类药物、喹诺酮类药物或氨基糖苷类药物等获得了耐药性的绿脓杆菌时常被分离(J.Antimicrob.Chemother.，2003年，第51卷，第347-352页)。进而，多药耐药性绿脓杆菌也被分离(Jpn.J.Antibiotics，2006年，第59卷，第5号，第355-363页)，成为世界性的大问题。

UDP-3-O-酰基-N-乙酰葡糖胺脱乙酰酶(LpxC)是担负脂质A(作为外膜构成成分的LPS的疎水性锚)的合成的酶。

脂质A的生物合成由10个阶段的反应组成，LpxC催化其第2阶段，使UDP-3-O-酰基-N-乙酰葡糖胺的乙酰基脱离(J.Biol.Chem.，1995年，第270卷，第30384-30391页)。脂质A是形成外膜所必须的成分，对革兰氏阴性菌的生存来说也是必须(J.Bacteriol.，1987年，第169卷，第5408-5415页)。LpxC是在脂质A的生物合成过程中控制速度的重要的酶之一，是脂质A的生物合成所必须的酶。因此，抑制LpxC活性的药物被强烈期待能够成为对包括绿脓杆菌在内的革兰氏阴性菌、特别是耐药性绿脓杆菌有效的抗菌剂，由于其具有与以往药物不同的作用机制。

迄今为止，已知具有LpxC抑制活性的化合物(专利文献1～7)。

为了使药物发挥药效，有必要使药物在吸收部位溶解。因此，在将难溶于水的药物经口给药时，往往从消化道的吸收不充分，难以发挥药效。另外，在非经口给药、特别是静脉内给药的情况下，药物有必要以溶解的形式给药。

环糊精(以下，有时称为“CD”)或环糊精衍生物(以下，有时称为“CD衍生物”)已知可用于溶解化合物(International J.Pharmaceutics.，2013年，第453卷，第167-180页；Yakugaku Zasshi，2012年，第132卷，第1号，第85-105页)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第04/062601号小册子

专利文献2：国际公开第07/069020号小册子

专利文献3：国际公开第08/154642号小册子

专利文献4：国际公开第10/031750号小册子

专利文献5：国际公开第10/017060号小册子

专利文献6：国际公开第10/032147号小册子

专利文献7：国际公开第11/132712号小册子

发明内容

发明要解决的课题

本发明的课题在于，提供通过抑制LpxC而对以绿脓杆菌为代表的革兰氏阴性菌及其耐药性菌显示出强的抗菌活性、对水的溶解性优异的药物组合物。进而，本发明的课题在于，提供稳定性优异的含有药物组合物的液体制剂的制备方法。

解决课题的手段

在这样的情况下，本发明人等进行深入研究的结果发现，含有选自(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺(以下，有时称为“化合物A”)、(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺(以下，有时称为“化合物B”)和(2S)-N-羟基-2-((4-((4-((1S)-1-羟基-2-甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N’,2-二甲基丙二酰胺(以下，有时称为“化合物C”)中的氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂的药物组合物具有强的抗菌活性和优异的溶解性，作为药物是有用的。进而，本发明人等发现，在得到氧肟酸衍生物或其盐和增溶剂的水溶液后，根据需要，通过将所得水溶液的pH调整至3～8，能够制备稳定性优异的液体制剂，至此完成了本发明。

即，本发明提供以下内容。

[1]药物组合物，含有选自化合物A、化合物B和化合物C的氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂。

[2]上述[1]所述的药物组合物，其中，增溶剂为CD或CD衍生物。

[3]上述[1]或[2]所述的药物组合物，其中，氧肟酸衍生物为化合物A。

[4]上述[2]或[3]所述的药物组合物，其中，CD或CD衍生物为选自α-环糊精(以下，有时称为“αCD”)、γ-环糊精(以下，有时称为“γCD”)、羟丙基-α-环糊精(以下，有时称为“HPαCD”)、磺丁基醚-β-环糊精(以下，有时称为“SBEβCD”)、2,3,6-三-O-甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精(以下，有时称为“HPβCD”)、七-2,6-二-O-甲基-β-环糊精(以下，有时称为“DMβCD”)、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精和羟丙基-γ-环糊精(以下，有时称为“HPγCD”)中的一种或两种以上。

[5]上述[2]或[3]所述的药物组合物，其中，CD或CD衍生物为选自αCD、γCD、HPαCD、SBEβCD、HPβCD和HPγCD中的一种或两种以上。

[6]上述[1]～[5]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。

[7]上述[6]所述的药物组合物，其中，液体制剂的pH为3～8。

[8]上述[1]～[5]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为冷冻液体制剂。

[9]上述[8]所述的药物组合物，其中，解冻后的冷冻液体制剂的pH为3～8。

[10]上述[1]～[5]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为冻干制剂。

[11]上述[10]所述的药物组合物，其中，冻干制剂的水溶液的pH为3～8。

[12]上述[1]所述的药物组合物，其中，增溶剂为选自一元醇类、多元醇类、酰胺类、亚砜类、氨基酸类、表面活性剂、酸类和碱类中的一种或两种以上。

[13]上述[12]所述的药物组合物，其中，氧肟酸衍生物为化合物A。

[14]上述[12]或[13]所述的药物组合物，其中，一元醇类为碳数1～6的醇，多元醇类为二醇，酸类为有机酸。

[15]上述[12]或[13]所述的药物组合物，其中，增溶剂为选自碳数1～6的醇、二醇、氨基酸类和有机酸中的一种或两种以上与酰胺类的组合。

[16]上述[12]～[15]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。

[17]上述[1]～[16]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为用作LpxC抑制剂的药物组合物。

[18]上述[1]～[16]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为用作抗菌剂的药物组合物。

[19]含有氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂的液体制剂的制备方法，其特征在于，将选自化合物A、化合物B和化合物C的氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂溶解于水，得到氧肟酸衍生物或其盐的水溶液，然后根据需要，将得到的水溶液的pH调整至3～8。

[20]上述[19]所述的制备方法，其中，增溶剂为CD或CD衍生物。

[21]上述[19]或[20]所述的制备方法，其中，氧肟酸衍生物为化合物A。

[22]上述[20]或[21]所述的制备方法，其中，CD或CD衍生物为选自αCD、γCD、HPαCD、SBEβCD、2,3,6-三-O-甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、HPβCD、DMβCD、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精和HPγCD中的一种或两种以上。

[23]上述[20]或[21]所述的制备方法，其中，CD或CD衍生物为选自αCD、γCD、HPαCD、SBEβCD、HPβCD和HPγCD中的一种或两种以上。

另外，本发明提供以下内容。

[24]上述[1]～[11]任一项所述的药物组合物，其还含有pH调节剂。

[25]上述[24]所述的药物组合物，其中，pH调节剂为选自无机酸、有机酸、无机碱和有机碱中的一种或两种以上。

[26]上述[25]所述的药物组合物，其中，无机酸是盐酸、硫酸、磷酸和硝酸，有机酸是马来酸、苯甲酸、抗坏血酸、甲磺酸、乙酸、苹果酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸和己二酸，无机碱是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸三钠和氨，有机碱是柠檬酸二钠、单乙醇胺、二乙醇胺、氨丁三醇、二异丙醇胺、三乙醇胺、三异丙醇胺、L-精氨酸、L-组氨酸、L-赖氨酸和葡甲胺。

[27]上述[25]所述的药物组合物，其中，无机酸为盐酸和硫酸，有机酸为乙酸和柠檬酸，无机碱为氢氧化钠和碳酸钠，有机碱为氨丁三醇和葡甲胺。

[28]上述[24]～[27]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。

[29]上述[28]所述的药物组合物，其中，液体制剂的pH为3～8。

[30]上述[24]～[27]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为冷冻液体制剂。

[31]上述[30]所述的药物组合物，其中，解冻后的冷冻液体制剂的pH为3～8。

[32]上述[24]～[27]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为冻干制剂。

[33]上述[32]所述的药物组合物，其中，由冻干制剂调制的注射用制剂的pH为3～8。

[34]上述[24]～[33]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为用作LpxC抑制剂的药物组合物。

[35]上述[24]～[33]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为用作抗菌剂的药物组合物。

[36]上述[1]～[16]或[24]～[33]任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物是用于处置由革兰氏阴性菌引起的感染症的药物组合物。

发明效果

本发明的含有氧肟酸衍生物或其盐和增溶剂的药物组合物显示出强的抗菌活性，对水的溶解性优异，作为药物是有用的。进而，本发明的制备方法作为稳定性优异的含有药物组合物的液体制剂的制备方法是有用的。

具体实施方式

以下，详述本发明。

本说明书中，只要没有特殊说明，“％”是指“质量％”。

处置是指对疾病的预防或治疗等。

<氧肟酸衍生物>

作为氧肟酸衍生物，可举出选自化合物A、化合物B和化合物C中的氧肟酸衍生物，优选化合物A。

氧肟酸衍生物例如可根据后述的制备例来制备。

当在氧肟酸衍生物或其盐中存在异构体(例如，光学异构体、几何异构体和互変异构体等)的情况下，本发明包括这些异构体，还包括溶剂合物、水合物以及各种形状的晶体。

作为氧肟酸衍生物的盐，例如可举出与钠和钾等碱金属的盐，与钙和镁等碱土类金属的盐，铵盐，以及与三甲胺、三乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二乙胺、二环己胺、二苄胺、N-苄基-β-苯乙胺、1-二苯羟甲胺和N,N'-二苄基乙二胺等含氮有机碱的盐等。

在上述的盐中，作为优选的盐，可举出药理学上可接受的盐。

氧肟酸衍生物或其盐的给药方法、给药量和给药次数可根据患者的年龄、体重和症状适宜选择。通常，对成人来说，通过经口或非经口(例如，注射、滴注和向直肠部位给药等)给药，可1日分1次至数次给药0.01～1000mg/kg。

<增溶剂>

在本发明中，通过使用增溶剂，可实现氧肟酸衍生物或其盐的优异的溶解性。

作为增溶剂，例如可举出一元醇类、多元醇类、酰胺类、亚砜类、氨基酸类、表面活性剂、酸类、碱类、CD和CD衍生物。

作为一元醇类，例如，乙醇、丙醇、2-丙醇、丁醇和氯丁醇等碳数1～6的醇，3-吲哚丙醇、苄醇、辛醇、壬醇、癸醇、十一醇、十二醇、十三醇、十四醇、十五醇、十六醇、十七醇和硬脂醇等碳数7～20的醇，以及油醇、亚油醇和亚麻醇等不饱和的碳数7～20的醇。

作为优选的一元醇类，可举出碳数1～6的醇和碳数7～20的醇，优选碳数1～6的醇和苄醇，更优选乙醇、丙醇、2-丙醇、丁醇和苄醇，进一步优选乙醇和苄醇，特别优选乙醇。

作为多元醇类，例如可举出乙二醇、丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2,3-丁二醇、1,5-戊二醇、二丙二醇、二甘醇、三甘醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000和α-硫代甘油等二醇；以及甘油等三醇。

作为优选的多元醇类，可举出二醇，更优选丙二醇、1,3-丁二醇、二丙二醇、二甘醇、三甘醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1500和聚乙二醇4000，进一步优选三甘醇和聚乙二醇400。

作为酰胺类，例如可举出N,N-二甲基乙酰胺、聚乙烯吡咯烷酮、脲、乙基脲和烟酰胺。

作为优选的酰胺类，可举出N,N-二甲基乙酰胺、脲、乙基脲和烟酰胺，更优选N,N-二甲基乙酰胺和烟酰胺。

作为亚砜类，例如可举出二甲亚砜。

作为氨基酸，例如可举出甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、羟基赖氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、N-乙酰基色氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、胱氨酸、L-谷氨酸-L-赖氨酸、牛磺酸、β-丙氨酸叔丁酯和苯丙氨酸叔丁酯等氨基酸及其衍生物以及它们的盐。

作为优选的氨基酸类，可举出甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、羟基赖氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、N-乙酰基色氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、牛磺酸、β-丙氨酸叔丁酯和苯丙氨酸叔丁酯，更优选β-丙氨酸、精氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、N-乙酰基色氨酸、脯氨酸、牛磺酸、β-丙氨酸叔丁酯和苯丙氨酸叔丁酯，进一步优选β-丙氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。

作为表面活性剂，例如可举出月桂基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯、聚山梨酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和蔗糖脂肪酸酯。

作为优选的表面活性剂，可举出聚山梨酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和蔗糖脂肪酸酯。

作为酸类，例如可举出马来酸、苯甲酸、抗坏血酸、甲磺酸、乙酸、苹果酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖酸、己二酸、琥珀酸、巯基乙酸、脱氧胆酸，熊去氧胆酸、乙二胺四乙酸，水杨酸、间磺基苯甲酸、肉桂酸、3-苯基丙酸、3-(4-羟基苯基)丙酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、蔗糖酸和硫酸软骨素等有机酸，辛酸、壬酸、癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七酸和硬脂酸等饱和的碳数8～20的脂肪酸，香茅酸、十一碳烯酸、乌药酸、抹香鲸酸、鲨油酸、棕榈油酸、油酸和亚油酸等不饱和的碳数8～20的脂肪酸，以及盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、磷酸二氢钠和磷酸二氢钾等无机酸。

作为优选的酸类，可举出有机酸，更优选马来酸、苯甲酸、抗坏血酸、甲磺酸、乙酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖酸、己二酸、巯基乙酸、脱氧胆酸、熊去氧胆酸、水杨酸、间磺基苯甲酸、肉桂酸、3-苯基丙酸、3-(4-羟基苯基)丙酸、苯磺酸和对甲苯磺酸，进一步优选苯甲酸、柠檬酸、肉桂酸、3-苯基丙酸、3-(4-羟基苯基)丙酸和对甲苯磺酸，特别优选苯甲酸。

作为碱类，例如可举出柠檬酸二钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、葡糖酸镁、蔗糖酸钙和苯甲酸钠等有机酸的盐，单乙醇胺、二乙醇胺、氨丁三醇、二异丙醇胺、三乙醇胺、三异丙醇胺、乙二胺和葡甲胺等有机碱，以及氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸三钠和氨等无机碱。

作为优选的碱类，可举出柠檬酸二钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、葡糖酸镁、蔗糖酸钙、苯甲酸钠、二乙醇胺、氨丁三醇、二异丙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、葡甲胺、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠和磷酸三钠，更优选柠檬酸钠、乳酸钠、苯甲酸钠、氨丁三醇、葡甲胺和氢氧化钠。

作为CD，例如可举出αCD、β-环糊精(以下，有时称为“βCD”)或γCD。

作为CD衍生物，例如可举出HPαCD、二甲基-β-环糊精、SBEβCD、2,3,6-三乙酰基-β-环糊精、2,3,6-三-O-甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、HPβCD、DMβCD、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、单乙酰基-β-环糊精、单氯三嗪-β-环糊精或HPγCD。

作为优选的CD或CD衍生物，可举出αCD、γCD、HPαCD、SBEβCD、2,3,6-三-O-甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、HPβCD、DMβCD、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精或HPγCD，更优选αCD、γCD、HPαCD、SBEβCD、HPβCD或HPγCD。

作为本发明的优选的增溶剂，可举出CD和CD衍生物。

另外，作为本发明的优选的增溶剂，可举出选自一元醇类、多元醇类、酰胺类、亚砜类、氨基酸类、表面活性剂、酸类和碱类中的一种或两种以上，更优选为选自碳数1～6的醇、二醇、氨基酸类和有机酸中的一种或两种以上与酰胺类的组合。

本发明的药物组合物以液体制剂、冷冻液体制剂或冻干制剂的形式提供。

接下来，说明本发明的药物组合物的制备方法。

制备法1液体制剂

通过将氧肟酸衍生物或其盐和增溶剂溶解于水中，可以制备液体制剂。

作为氧肟酸衍生物，优选化合物A。

作为增溶剂，优选CD或CD衍生物。

增溶剂的量只要是足以溶解氧肟酸衍生物或其盐的量即可，通常，相对于氧肟酸衍生物或其盐，只要为1～20倍摩尔即可，优选为1.2～10倍摩尔、更优选为1.5～5倍摩尔。

作为其他形式，作为增溶剂，优选选自一元醇类、多元醇类、酰胺类、亚砜类、氨基酸类、表面活性剂、酸类和碱类中的一种或两种以上。

予以说明，在本发明的液体制剂的制备中，灭菌处理等可根据通常进行的顺序来实施。

对于本发明的液体制剂来说，液体制剂的pH优选为3～8，更优选为3.5～7.5，进一步优选为4.0～6.5。

根据需要，加入pH调节剂，液体制剂的pH优选调节为3～8，更优选调节为3.5～7.5，进一步优选调节为4.0～6.5。

作为所使用的pH调节剂，例如可举出选自无机酸、有机酸、无机碱和有机碱中的一种或两种以上。

作为pH调节剂使用的无机酸，例如可举出盐酸、硫酸、磷酸和硝酸等，优选盐酸、硫酸和磷酸，更优选盐酸和硫酸。

作为pH调节剂使用的有机酸，例如可举出马来酸、苯甲酸、抗坏血酸、甲磺酸、乙酸、苹果、乳酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸和己二酸等，优选抗坏血酸、甲磺酸、乙酸、柠檬酸和天冬氨酸，更优选乙酸和柠檬酸。

作为pH调节剂使用的无机碱，例如可举出氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸三钠和氨等，优选氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠和磷酸三钠，更优选氢氧化钠和碳酸钠。

作为pH调节剂使用的有机碱，例如可举出柠檬酸二钠、单乙醇胺、二乙醇胺、氨丁三醇、二异丙醇胺、三乙醇胺、三异丙醇胺、L-精氨酸、L-组氨酸、L-赖氨酸和葡甲胺等，优选单乙醇胺、二乙醇胺、氨丁三醇、三乙醇胺和葡甲胺，更优选氨丁三醇和葡甲胺。

在本发明的液体制剂中，可以根据需要添加通常使用的渗透压调节剂、稳定剂、表面活性剂、无痛化剂、赋形剂和/或防腐剂等添加剂。

作为渗透压调节剂，例如可举出葡萄糖、氯化钠、D-甘露醇、甘油和丙二醇等。

作为稳定剂，例如可举出亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、焦磷酸钠、硫代硫酸钠、间磺基苯甲酸钠、甲醛次硫酸钠、乙二胺、乙二胺四乙酸钠、巯基乙酸、葡糖酸钠、L-谷氨酸钾、L-赖氨酸-L-谷氨酸盐、软骨素硫酸钠、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸和二丁羟基甲苯。

作为表面活性剂，例如可举出山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、和聚氧乙烯聚氧丙二醇共聚物等。

作为无痛化剂，例如可举出利多卡因、普鲁卡因、美普卡因和苄醇等。

作为赋形剂，例如可举出海藻糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、白糖、果糖等糖类、D-山梨醇、木糖醇、肌醇和D-甘露醇等糖醇类或甘氨酸、L-丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、牛磺酸、DL-蛋氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸钠、乙酰基色氨酸和L-组氨酸等氨基酸类。

作为防腐剂，例如可举出对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸四钠、氯丁醇、葡糖酸氯己定、苯扎氯铵和苄索氯铵等。

本发明的液体制剂可作为注射用液体制剂提供。

本发明的液体制剂中的氧肟酸衍生物的含量优选为1～100mg/mL，更优选为2～50mg/mL。

氧肟酸衍生物的给药量可根据用法、患者的年龄、性別、疾病的形式、其他条件等适宜选择，通常，对成人来说，1日给药0.1～1000mg/kg即可。

制备法2冷冻液体制剂

通过将制备法1所述的方法得到的液体制剂冷冻，可制备冷冻液体制剂。

冷冻工序的温度只要是能冷冻液体制剂的温度即可，优选为-78～-15℃。

冷冻工序的时间没有特殊限定，只要为1～24小时即可。

予以说明，在本发明的冷冻液体制剂的制备中，灭菌处理等可根据通常进行的顺序来实施。

本发明的冷冻液体制剂通过解冻，可作为注射用液体制剂提供。

解冻后的冷冻液体制剂的pH优选为3～8，更优选为3.5～7.5，进一步优选为4.0～6.5。

解冻后的冷冻液体制剂中的氧肟酸衍生物的含量优选为1～100mg/mL，更优选为2～50mg/mL。

氧肟酸衍生物的给药量根据用法、患者的年龄、性別、疾病的形态、其他条件等适宜确定，通常，对成人来说，1日给药0.1～1000mg/kg即可。

制备法3冻干制剂

通过冻干由制备法1所述的方法得到的液体制剂，可制成冻干制剂。

该工序根据通常实施的冷冻干燥的方法进行即可。例如可根据“医药品的实际”，第11卷，制剂的单位操作和机械，仲井由宣编，第388～396页(1988年，广川书店)中所述的“15.2冷冻干燥的实际”来进行。

在本发明的冻干制剂中可加入用于改善溶解性和/或外观的添加物。

作为添加物，可举出氨基酸类、聚乙二醇类、糖类、糖醇类、脲、乙基脲、肌酸酐、氨丁三醇、精制大豆卵磷脂和聚山梨酯80等，它们可以一种或两种以上混合使用。

作为优选的添加物，可举出氨基酸类、聚乙二醇类、糖类和糖醇类，更优选氨基酸类、糖类和糖醇类，进一步优选糖醇类。

作为用作添加物的氨基酸类，可举出甘氨酸、L-丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、牛磺酸、DL-蛋氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸钠、乙酰基色氨酸和L-组氨酸等，优选为甘氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-丙氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸，更优选为甘氨酸。

作为用作添加物的聚乙二醇类，可举出聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000等，优选聚乙二醇300、聚乙二醇600和聚乙二醇4000。

作为用作添加物的糖类，可举出海藻糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、白糖、果糖和糊精等，优选海藻糖、葡萄糖、白糖和果糖。

作为用作添加物的糖醇类，可举出D-山梨醇、木糖醇、肌醇和D-甘露醇等，优选D-山梨醇、木糖醇和D-甘露醇。

在本发明的冻干制剂的制备中，灭菌处理等可根据通常进行的顺序来实施。

本发明的冻干制剂可用注射用水等溶解，作为注射用制剂提供。

由冻干制剂调制的注射用制剂的pH优选为3～8，更优选为3.5～7.5，进一步优选为4.0～6.5。

由冻干制剂调制的注射用制剂中的氧肟酸衍生物的含量优选为1～100mg/mL，更优选为2～50mg/mL。

氧肟酸衍生物的给药量可根据用法、患者的年龄、性別、疾病的形式、其他条件等适宜选择，通常，对成人来说，1日给药0.1～1000mg/kg即可。

本发明的液体制剂、冷冻液体制剂和冻干制剂的制备优选不使用有机溶剂。因此，在这些制剂中不存在残留溶剂，对人体安全。

用制备例、实施例和试验例来说明本发明，但本发明并不限定于此。

只要没有特殊说明，硅胶柱色谱为快速柱色谱，其载体为富士硅化学株式会社的B.W.硅胶BW-300。

洗脱液中的混合比为容量比。

冻干条件如下所述。

将小瓶冷却至-60℃，冷冻内容物。然后，在真空下(50Pa以下)将环境温度升温至-10℃，在相同压力、相同温度下进行一次干燥。产品温度达到-10℃以上后，将环境温度升温至20℃，在相同压力、相同温度下进行二次干燥。当产品温度与设定温度基本一致，产品温度没有变化时，结束干燥。

各缩写具有以下含义。

DMSO-d₆：氘代二甲亚砜

ESI：电喷雾电离法

IPE：二异丙基醚

Me：甲基

TBS：叔丁基二甲基硅基

THP：四氢-2H-吡喃-2-基

s：单峰

d：双峰

dd：双二重峰

m：多重峰

在NMR谱中，例如，[1.81]，1.82(3H,s)的记载表示，来自非对映体混合物的各非对映体的峰在1.81和1.82处被观测到单峰，总质子数为3H。

制备例1

向N-甲基吡咯烷酮1000mL中加入N-甲基苄胺421g和2-溴-2-甲基丙二酸二乙酯400g，在100℃下搅拌1小时后，冷却反应混合物。依次加入甲苯1.5L和水1.5L，然后加入盐酸70mL。分离有机层，在减压下蒸馏除去溶剂，得到无色油状物499g。

向得到的油状物400g中依次加入乙酸乙酯2.0L、10％钯-碳(50％湿)32g和乙酸81.9g，在氢气氛下(0.5MPa)在45℃下搅拌18小时30分钟。冷却反应混合物，用硅藻土过滤后，将残渣用乙酸乙酯400mL洗涤。向滤液中加入水1200mL，用盐酸调整至pH2以下，分离水层。向得到的水槽中加入乙酸乙酯1200mL，用20％氢氧化钠水溶液调整至pH9。分离有机层，减压蒸馏除去溶剂，得到无色油状物204g。

向得到的油状物200g中加入乙腈1.0L和碳酸氢钠198g。接着，在冰冷下用25分钟滴落氯甲酸苄酯168g。将反应混合物升温至室温，搅拌7小时45分钟，静置过夜。接着将反应混合物在40～45℃下搅拌1小时30分钟，冷却后，过滤除去不溶物。将残渣用乙腈200mL洗涤。合并滤液和洗涤液，在减压下浓缩，得到无色油状物324g。

向水1968mL中加入磷酸二氢钠二水合物15.36g，加入0.05mol/L氢氧化钠水溶液1125mL。在24℃下向该水溶液中加入得到的油状物120g和乙腈360mL的混合物，在相同温度下搅拌2小时45分钟后，静置过夜。再将反应混合物在相同温度下搅拌6小时后，静置22小时。接着向猪肝酯酶2.9g(20单位/mg)中加入0.05mol/L磷酸缓冲液30mL(pH7.4)，照射30分钟超声波，将由此得到的悬浮液在25℃下加入到反应混合物中。将反应混合物用1mol/L氢氧化钠水溶液调整至pH6.7～7.1的范围，在26℃下搅拌5小时。向反应混合物中加入乙酸乙酯1200mL，在冰冷下依次加入盐酸37mL、氯化钠300g和Celpure48g。在相同温度下搅拌1小时后，过滤除去不溶物。将残渣用乙酸乙酯240mL洗涤，合并滤液和洗涤液。分离有机层，将水层用乙酸乙酯180mL萃取。合并有机层和萃取液，加入无水硫酸钠48g和活性炭1.2g，搅拌30分钟后，用硅藻土过滤。将残渣用乙酸乙酯180mL洗涤，合并滤液和洗涤液，在减压下蒸馏除去溶剂1540mL，向得到的残留物中加入庚烷240mL，用2小时冷却至18℃。过滤收集固体成分，用庚烷120mL洗涤2次，得到作为无色晶体的(((((2R)-2-羧基-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯88.18g(>99.9％ee)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ值：1.15-1.20(3H，m)，1.61(3H，s),2.86(3H，s)，3.95-4.15(2H，m)，5.07(2H，s)，7.28-7.43(5H，m)

HPLC测定条件

柱：4.6×150mm CHIRALPAK IA 5μm

测定波长：210nm

柱温度：40℃

流动相：己烷：乙醇＝95：5(0.1％三氟乙酸)

流速：0.7mL/分钟

制备例2

向(((((2R)-2-羧基-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯250g中加入乙酸乙酯1300mL和N,N-二甲基甲酰胺1.0mL，在5℃下用20分钟滴落草酰氯133g，然后加入乙酸乙酯200mL。将反应混合物升温至20℃，搅拌4小时。在减压下蒸馏除去溶剂1395mL，向得到的残留物中加入四氢呋喃1000mL，冷却至8℃。在相同温度下，依次加入三乙胺94.1g和O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺109g，一边用3小时升温至20℃一边搅拌。将反应混合物静置过夜后，加入丙酮225mL，搅拌40分钟。接着加入甲苯750mL和水1000mL，冷却至10℃后，加入盐酸62mL。再用6mol/L盐酸和20％氢氧化钠水溶液调整至pH3，分离出水层。向得到的水层中加入乙酸乙酯1250mL，加入20％氢氧化钠水溶液210mL。接着，加入氯化钠1450g，升温至30℃温。分离有机层，将水层用乙酸乙酯750mL萃取。合并有机层和萃取液，在减压下蒸馏除去溶剂。向得到的残留物中加入甲苯250mL，在减压下蒸馏除去溶剂，得到橙色油状物215g。

在室温下向得到的油状物213g中加入40％甲胺/甲醇溶液，在40～43℃下搅拌8小时30分钟后，静置过夜。再在45℃下搅拌5小时，然后在减压下蒸馏除去溶剂。向得到的残留物中加入甲苯，在减压下蒸馏除去溶剂。接着，向得到的残留物中加入四氢呋喃，在减压下蒸馏除去溶剂，得到黄色油状物203g。

向得到的油状物203g中加入四氢呋喃1400mL，在35℃下加入碳酸氢钠117g。接着，在相同温度下加入4-碘苯甲酰氯168g和四氢呋喃200mL的混合物以及四氢呋喃100mL，搅拌5小时。在相同温度下，向反应混合物中加入碳酸氢钠58.2g和吗啉29mL，搅拌2小时后，在室温下静置过夜。向反应混合物中依次加入乙酸乙酯1370mL、水1700mL和氯化钠170g，分离有机层。向得到的有机层中加入水860mL和氯化钠42.7g，搅拌15分钟后，分离有机层。过滤得到的有机层，在减压下蒸馏除去滤液的溶剂。向得到的残留物中加入乙酸乙酯300mL和甲苯300mL，在30℃下搅拌1小时后，静置过夜。过滤收集固体成分，用乙酸乙酯/甲苯混合液(1：1，300mL)洗涤，得到褐色固体206g。向得到的褐色固体中加入乙酸乙酯2000mL，在40℃下搅拌1小时后，在冰冷下冷却，过滤出固体成分。将固体成分用乙酸乙酯洗涤，得到作为无色晶体的(2S)-2-((4-碘苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺148.9g(>99.9％ee)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ值：1.40-1.75(6H，m)，1.61(3H，s)，[2.62]2.63(3H，d，J＝3.7Hz),2.99(3H，d，J＝2.7Hz)，3.40-3.60(1H，m)，[3.82-3.92]3.92-4.02(1H，m)，[4.74-4.80]4.80-4.86(1H，m)，[7.31]7.33(2H，d，J＝8.2Hz)，7.85(2H，d，J＝8.3Hz)，[8.25-8.33]8.35-8.43(1H，m)，11.52(1H，s)

HPLC测定条件

柱：4.6×250mm CHIRALPAK ID 5μm

测定波长：230nm

柱温：40℃

流动相：己烷：乙醇＝85：15

流速：1.0mL/分钟

制备例3

在氮气氛下，向(1S)-1-(4-溴苯基)乙烷-1,2-二醇1.08g、双(三苯膦)二氯化钯(II)350mg、碘化銅(I)190mg和乙酸丁酯10mL的混合物中加入三异丙基甲硅烷基乙炔7.8mL和三乙胺7.0mL，在回流下搅拌1小时。冷却反应混合物，加入饱和氯化铵水溶液，用6mol/L盐酸调整至pH6.2后，加入Celpure和乙酸乙酯，过滤除去不溶物。分离出滤液的有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物赋予硅胶柱色谱[洗脱液，乙酸乙酯：己烷＝40：60→45：55]，得到黄色油状物1.32g。

在冰冷下，向得到的黄色油状物1.32g和四氢呋喃13mL的混合物中加入1mol/L四丁基氟化铵/四氢呋喃溶液6.2mL，在相同温度下搅拌30分钟后，在室温下搅拌45分钟。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液，用1mol/L盐酸调整至pH2.0后，加入乙酸乙酯。分离有机层，将水层用乙酸乙酯萃取2次。合并有机层和萃取液，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，乙酸乙酯：己烷＝50：50→70：30]精制，得到淡褐色固体513mg。向其中加入己烷，过滤收集固体成分，得到作为淡褐色固体的(1S)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇466mg。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：1.97-2.07(1H，m),2.56(1H，d，J＝3.4Hz)，3.08(1H，s)，3.56-3.70(1H，m)，3.71-3.82(1H，m)，4.79-4.88(1H，m)，7.34(2H，d，J＝8.3Hz)，7.49(2H，d，J＝8.3Hz)

制备例4

在氮气氛下，在冰冷下，向(2S)-2-((4-碘苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺587mg、(1S)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇253mg、双(三苯膦)二氯化钯(II)84mg、碘化銅(I)46mg和四氢呋喃6.0mL的混合物中加入三乙胺0.59mL，在相同温度下搅拌2小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯，用1mol/L盐酸调节至pH6.4。分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取。合并有机层和萃取液，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，丙酮：氯仿＝40：60]精制，得到作为淡黄色泡状固体的(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺767mg。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：1.50-1.68(3H，m)，1.71-1.92(3H，m)，[1.82]，1.83(3H，s),2.08-2.14(1H，m),2.63-2.68(1H，m)，[2.86],2.87(3H，d，J＝4.1Hz)，[3.17]，3.20(3H，s)，3.53-3.83(3H，m)，3.83-4.07(1H，m)，4.83-4.89(1H，m)，4.93-5.03(1H，m)，7.37(2H，d，J＝8.0Hz)，7.48-7.61(6H，m)，[6.97-7.04]，7.61-7.67(1H，m)，[10.10]，10.51(1H，s)

制备例5

在冰冷下，向(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺767mg和甲醇6.0mL的混合物中加入对甲苯磺酸一水合物46mg，在相同温度下搅拌40分钟后，在室温下搅拌1小时。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液中和。分离有机层，向水层中加入乙酸乙酯和氯化钠，过滤收集固体成分。分离滤液的有机层，向水层中加入乙酸乙酯和氯化钠，过滤收集固体成分。分离滤液的有机层，合并迄今为止得到的有机层和固体成分，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，甲醇：氯仿＝10：90→15：85]精制，得到黄色泡状固体585mg。向其中加入乙酸乙酯和IPE，过滤收集固体成分，得到作为黄色固体的(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺(化合物A)463mg。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ值：1.77(3H，s),2.79(3H，s)，3.17(3H，s)，3.55-3.68(2H，m)，4.67-4.74(1H，m)，7.41(2H，d，J＝8.3Hz)，7.51(2H，d，J＝8.3Hz)，7.55(2H，d，J＝8.5Hz)，7.68(2H，d，J＝8.5Hz)，MS(ESI)：462[M+Na]⁺，438[M-H]^-

制备例6

通过与制备例3同样的方法，由(1R)-1-(4-溴苯基)乙烷-1,2-二醇1.09g，得到作为白色固体的(1R)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇558mg。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：2.00(1H，dd，J＝7.1,4.9Hz),2.54(1H，d，J＝3.4Hz)，3.08(1H，s)，3.60-3.68(1H，m)，3.73-3.81(1H，m)，4.80-4.88(1H，m)，7.34(2H，d，J＝8.1Hz)，7.49(2H，d，J＝8.0Hz)

制备例7

通过与制备例4同样的方法，由(2S)-2-((4-碘苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺587mg和(1R)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇291mg，得到作为淡褐色泡状固体的(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺797mg。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：1.53-1.69(3H，m)，1.76-1.92(3H，m)，[1.81]，1.82(3H，s),2.27-2.37(1H，m),2.83-2.91(4H，m)，[3.17]，3.19(3H，s)，3.53-3.83(3H，m)，[3.83-3.92]，3.98-4.08(1H，m)，4.81-4.88(1H，m)，4.94-5.04(1H，m)，7.35(2H，d，J＝8.1Hz)，7.45-7.59(6H，m)，[6.96-7.06]，7.59-7.68(1H，m)，[10.14]，10.56(1H，s)

制备例8

在冰冷下，向(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺797mg和甲醇6.3mL的混合物中加入对甲苯磺酸一水合物46mg，在相同温度下搅拌30分钟后，在室温下搅拌45分钟。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液中和。分离有机层，将水层用乙酸乙酯萃取2次。向水层中加入氯化钠，过滤收集固体成分。向滤液中加入氯化钠和乙酸乙酯，过滤收集固体成分。分离滤液的有机层，合并迄今为止得到的有机层、萃取液和固体成分，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，甲醇：氯仿＝10：90→15：85]精制，得到黄色泡状固体556mg。向其中加入乙酸乙酯和IPE，过滤收集固体成分，得到作为黄色固体的(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺(化合物B)458mg。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ值：1.78(3H，s),2.80(3H，s)，3.17(3H，s)，3.57-3.67(2H，m)，4.68-4.74(1H，m)，7.42(2H，d，J＝8.3Hz)，7.52(2H，d，J＝8.3Hz)，7.56(2H，d，J＝8.6Hz)，7.61(2H，d，J＝8.6Hz)，

MS(ESI)：462[M+Na]⁺，438[M-H]^-

制备例9

在氮气氛下、在冰冷下，向采用与制备例3同样的方法得到的(1S)-1-(4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)苯基)乙烷-1,2-二醇2.79g、二氯甲烷28mL、三乙胺2.7mL和N,N-二甲基氨基吡啶213mg的混合物中加入叔丁基二甲基氯硅烷1.45g，在室温下搅拌2小时，在相同温度下静置过夜。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯，用6mol/L盐酸调整至pH4.0。分离有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，得到褐色油状物3.70g。

向得到的褐色油状物3.70g中加入二氯甲烷28mL和对甲苯磺酸吡啶盐439mg，在冰冷下，加入3，4-二氢-2H-吡喃2.4mL后，在室温下搅拌5小时。向反应混合物中加入三乙胺3.0mL，在减压下蒸馏除去溶剂。向得到的残留物中加入水和乙酸乙酯。分离有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，乙醚：己烷＝10：90]精制，得到黄色油状物3.65g。

向得到的黄色油状物3.65g中加入四氢呋喃18mL，在冰冷下，加入1mol/L四正丁基氟化铵/四氢呋喃溶液17mL，在室温下搅拌1小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯。分离有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，乙酸乙酯：己烷＝30：70→40：60]精制，得到作为白色固体的(2S)-2-(4-乙炔基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙醇1.78g。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：1.40-1.93(6H，m),2.11-2.20(1H，m)，[3.06]，3.07(1H，s)，3.51-3.61(1H，m)，3.62-3.76(2H，m)，[3.25-3.34]，3.92-4.07(1H，m)，[4.48-4.53]，4.79-4.86(1H，m)，[4.70-4.75]，4.87-4.93(1H，m)，[7.29]，7.35(2H，d，J＝8.3Hz)，7.45(2H，d，J＝8.0Hz)

制备例10

在氮气氛下、在冰冷下，向(2S)-2-(4-乙炔基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙醇800mg、二甲亚砜4.0mL和碘甲烷0.4mL的混合物中加入氢氧化钾545mg，在室温下搅拌1小时30分钟。向反应混合物中加入甲苯和饱和氯化铵水溶液，用6mol/L盐酸调整至pH6.1。分离有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，乙酸乙酯：己烷＝10：90]精制，得到作为无色油状物的2-((1S)-1-(4-乙炔基苯基)-2-甲氧基乙氧基)四氢-2H-吡喃836mg。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：1.40-1.94(6H，m)，[3.05]，3.07(1H，s)，[3.36]，3.39(3H，s)，3.45-3.56(2H，m)，[3.56-3.62]，3.62-3.69(1H，m)，[3.28-3.35]，3.97-4.06(1H，m)，[4.80-4.85]，4.91-4.97(1H，m)，[4.41-4.46]，4.97-5.01(1H，m)，[7.30]，7.37(2H，d，J＝8.4Hz)，7.44-7.51(2H，m)

制备例11

在氮气氛下、在冰冷下，向2-((1S)-1-(4-乙炔基苯基)-2-甲氧基乙氧基)四氢-2H-吡喃478mg、四氢呋喃3.0mL、(2S)-2-((4-碘苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺300mg、双(三苯膦)(II)二氯化钯43mg和碘化銅(I)23mg的混合物中加入三乙胺0.51mL，在相同温度下搅拌2小时30分钟。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯，用6mol/L盐酸调整至pH6.0。分离有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，丙酮：氯仿＝10：90]精制，得到作为褐色泡状固体的(2S)-2-((4-((4-((1S)-2-甲氧基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺485mg。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ值：1.42-1.94(12H，m)，[1.81]，1.82(3H，s)，[2.85],2.86(3H，d，J＝4.4Hz)，[3.17]，3.20(3H，s)，[3.37]，3.40(3H，s)，3.47-3.72(4H，m)，[3.29-3.36]，3.83-3.91(1H，m)，3.97-4.07(1H，m)，[4.43-4.48]，4.93-4.98(1H，m)，[4.84]，4.95(1H，dd，J＝7.3，4.2Hz)，4.98-5.03(1H，m)，[7.34]，7.41(2H，d，J＝8.3Hz)，7.44-7.61(6H，m)，[6.96-7.04]，7.62-7.72(1H，m)，[10.01]，10.53(1H，s)

制备例12

在冰冷下，向(2S)-2-((4-((4-((1S)-2-甲氧基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺485mg和甲醇4.8mL的混合物中加入对甲苯磺酸一水合物23mg，在相同温度下搅拌10分钟后，在室温下搅拌1小时。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液中和。分离有机层，将得到的水层用乙酸乙酯萃取。向水层中加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取2次。合并有机层和萃取液，用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱[洗脱液，甲醇：氯仿＝4：96→6：94]精制，得到褐色固体288mg。向其中加入乙酸乙酯和IPE，过滤收集固体成分，得到作为褐色固体的(2S)-N-羟基-2-((4-((4-((1S)-1-羟基-2-甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N’,2-二甲基丙二酰胺(化合物C)240mg。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ值：1.77(3H，s),2.79(3H，s)，3.17(3H，s)，3.37(3H，s)，3.50(2H，d，J＝5.9Hz)，7.41(2H，d，J＝8.3Hz)，7.47-7.65(6H，m)，

MS(ESI)：476[M+Na]⁺，452[M-H]^-

实施例1

向HPβCD(HPB-EC，日本食品化工)72.0g的注射用水130mL溶液中加入化合物A一水合物7.2g后，在室温下搅拌，得到化合物A的水溶液。向该溶液中加入注射用水，使总量为200mL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为4.5。

实施例2

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入0.1mol/L盐酸50μL和0.01mol/L盐酸250μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为3.0。

实施例3

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入0.01mol/L盐酸70μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为4.0。

实施例4

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入0.01mol/L氢氧化钠水溶液20μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为5.1。

实施例5

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入0.01mol/L氢氧化钠水溶液160μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为6.0。

实施例6

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入0.1mol/L氢氧化钠水溶液90μL和0.01mol/L氢氧化钠水溶液50μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为7.0。

实施例7

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入1mol/L氢氧化钠水溶液60μL和0.1mol/L氢氧化钠水溶液80μL，用0.22μm的膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为8.0。

实施例8

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入10％柠檬酸一水合物水溶液40μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为3.0。

实施例9

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入10％柠檬酸一水合物水溶液2μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为3.9。

实施例10

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入1％葡甲胺水溶液5μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为5.1。

实施例11

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入1％葡甲胺水溶液25μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为5.9。

实施例12

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入10％葡甲胺水溶液20μL，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为6.9。

实施例13

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入葡甲胺19mg，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到液体制剂。该液体制剂的pH为8.0。

实施例14

向HPβCD(HPB-EC、日本食品化工)14.4g的注射用水25mL溶液中加入化合物A一水合物1.44g后，在室温下搅拌，得到化合物A的水溶液。向该溶液中加入注射用水，使总量为40mL，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。向该调制液5mL中加入5％葡萄糖水溶液(大塚糖液5％，大塚制药工厂)，使总量为100mL。将该调制液在-78℃下冷冻，得到冷冻液体制剂。

实施例15

向实施例14得到的调制液10mL中加入5％葡萄糖水溶液(大塚糖液5％，大塚制药工厂)，使总量为100mL。将该调制液在-78℃下冷冻，得到冷冻液体制剂。

实施例16

向实施例14得到的调制液20mL中加入5％葡萄糖水溶液(大塚糖液5％，大塚制药工厂)，使总量为100mL。将该调制液在-78℃下冷冻，得到冷冻液体制剂。

实施例17

向HPβCD(HPB-EC，日本食品化工)115.0g的注射用水200mL溶液中加入化合物A一水合物11.5g后，在室温下搅拌，得到化合物A的水溶液。向该溶液中加入注射用水，使总量为320mL，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例18

向实施例17得到的调制液23mL中加入D-甘露醇2.31g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例19

向实施例17得到的调制液23mL中加入D-山梨醇2.31g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例20

向实施例17得到的调制液23mL中加入木糖醇2.31g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例21

向实施例17得到的调制液23mL中加入海藻糖2.30g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例22

向实施例17得到的调制液23mL中加入葡萄糖2.29g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例23

向实施例17得到的调制液23mL中加入果糖2.31g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例24

向实施例17得到的调制液23mL中加入白糖2.30g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例25

向实施例17得到的调制液23mL中加入甘氨酸2.29g，搅拌后，用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例26

向采用与实施例17同样的方法得到的调制液24mL中加入0.01mol/L氢氧化钠水溶液40μL。该水溶液的pH为5.0。将该水溶液用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例27

向采用与实施例17同样的方法得到的调制液24mL中加入0.1mol/L氢氧化钠水溶液100μL、0.01mol/L氢氧化钠水溶液40μL和0.1mol/L盐酸95μL。该水溶液的pH为5.0。将该水溶液用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例28

向采用与实施例17同样的方法得到的调制液24mL中加入1％葡甲胺水溶液10μL。该水溶液的pH为5.0。将该水溶液用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例29

向采用与实施例17同样的方法得到的调制液24mL中加入10％葡甲胺水溶液20μL、1％葡甲胺水溶液5μL和0.1mol/L盐酸10μL。该水溶液的pH为5.0。将该水溶液用0.22μm膜滤器过滤，得到调制液。将该调制液2mL填充到小瓶中，冻干后，栓塞密封，得到冻干制剂。

实施例30

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入1mol/L盐酸50μL和0.1mol/L盐酸350μL，得到液体制剂。该液体制剂的pH为pH2.0。

实施例31

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入1mol/L氢氧化钠水溶液300μL，得到液体制剂。该液体制剂的pH为9.0。

实施例32

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入柠檬酸一水合物20mg和10％柠檬酸一水合物水溶液225μL，得到液体制剂。该液体制剂的pH为2.0。

实施例33

向实施例1得到的液体制剂10mL中加入葡甲胺100mg，得到液体制剂。该液体制剂的pH为9.0。

实施例34～75

根据以下的实验顺序，得到实施例34～75的液体制剂。

表中的各缩写具有以下含义。

Ac-L-Trp-OH：N-乙酰基-L-色氨酸

Ala：丙氨酸

Arg：精氨酸

BnOH：苄醇

DMAc：N,N-二甲基乙酰胺

DMSO：二甲亚砜

EtOH：乙醇

His：组氨酸

L-Phe-OBu(t)HCl：L-苯丙氨酸叔丁酯盐酸盐

PEG：聚乙二醇

Phe：苯丙氨酸

Pro：脯氨酸

Trp：色氨酸

β-Ala-OBu(t)HCl：β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐

实验顺序A

混合化合物A一水合物、生理盐水或注射用水、以及增溶剂后，在室温下搅拌，得到液体制剂。将该液体制剂在室温下静置2小时，结果，未发现析出物。

实验顺序B

混合化合物A一水合物、生理盐水或注射用水、以及增溶剂，进行超声波处理，使之分散。将该混合物加温至40～50℃，使化合物A一水合物溶解后，放置至室温，得到液体制剂。将该液体制剂在室温下静置2小时，结果，未发现析出物。

[表1]

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

[表6]

试验例1 绿脓杆菌LpxC酶抑制活性评价试验

作为试验化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。

绿脓杆菌LpxC酶活性通过如下方法测定：使LpxC与其底物UDP-3-O-(R-3-羟基癸酰基)-N-乙酰葡糖胺反应，通过定量产物中存在的氨基来测定该反应产物的量。该测定根据国际公开第11/132712号小册子等中记载的方法或基于此的方法来实施。

具体地说，向绿脓杆菌LpxC酶(通过如下方法获得：由绿脓杆菌调制染色体DNA，通过使用LpxC-特异性引物的PCR法(聚合酶链反应法)获得绿脓杆菌LpxC基因，将其引入载体，使用大肠杆菌来表达)中加入20μmol/L的UDP-3-O-(R-3-羟基癸酰基)-N-乙酰葡糖胺(和光纯药)，在25℃下孵育1小时。该反应在含有0.02％Brij35和80μmol/L-二硫苏糖醇的40mmol/L HEPES缓冲液(pH8.0)中实施。向反应液中添加20％乙酸(终浓度：0.95％)结束反应，然后添加溶解在无水二噁烷中的荧光胺(终浓度：1.6mg/mL)，在激发波长/荧光波长＝390nm/495nm处检测反应产物的量。通过使各种浓度的试验化合物在上述反应中共存，得到抑制曲线。从该抑制曲线求出反应产物的量被抑制50％时的试验化合物的浓度(IC₅₀值)，作为绿脓杆菌LpxC酶抑制活性的指标。

其结果，试验化合物的IC₅₀值均小于50nM。

试验化合物显示出优异的绿脓杆菌LpxC酶抑制活性。

试验例2 抗菌活性评价试验

作为试验化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。

最小抑菌浓度(MIC)的测定基于CLSI(临床和实验室标准化研究所)标准法，使用如下所示的微量液体稀释法。

作为细菌，使用绿脓杆菌ATCC27853株。

刮取在马-欣二氏琼脂培养基中培养过夜的被检菌体，以0.5麦氏比浊标准悬浮，将其稀释10倍作为细菌接种液。将细菌接种液0.005mL接种至含有试验化合物的调节了阳离子的马-欣二氏琼脂培养基中，在35℃下培养16～20小时。将肉眼观察不到菌生长时的最小药物浓度作为MIC。

其结果，试验化合物的MIC均为1μg/mL。

试验化合物对绿脓杆菌显示出优异的抗菌活性。

试验例3 使用绿脓杆菌的小鼠全身感染防御试验

作为试验化合物，使用化合物A和化合物B。

小鼠使用ICR系雄性SPF小鼠(4周龄：1组5只)。

细菌接种液采用如下方法调制：将在37℃在马-欣二氏琼脂平板上培养过夜的绿脓杆菌临床分离株(S-3232株)在调节了阳离子的马-欣二氏琼脂培养基中培养4小时后，用10％粘蛋白/磷酸缓冲液稀释10倍，由此调制细菌接种液。

感染通过将细菌接种液0.5mL(约10⁴CFU/小鼠)接种在小鼠的腹腔内来诱发。试验化合物用10％HPβCD/2.5％甘露醇水溶液溶解，在感染1小时后以12.5mg/kg的单次剂量皮下给药。感染3日后，记录存活只数。

其结果，未给药试验化合物的对照组全例死亡，但给药试验化合物的组在菌接种3日后，发现80％以上的小鼠存活，确认了体内的抗绿脓杆菌活性。并且，给药6.25mg/kg试验化合物的组在菌接种3日后，确认80％以上的小鼠存活，确认了体内的优异的抗绿脓杆菌活性。

试验例4 使用多药耐药性绿脓杆菌的小鼠全身感染防御试验

作为试验化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。

小鼠使用ICR系雄性SPF小鼠(4周龄：1组5只)。

细菌接种液采用如下方法调制：将在37℃在马-欣二氏琼脂平板上培养过夜的多药耐药性绿脓杆菌临床分离株(S-2838株)在调节了阳离子的马-欣二氏琼脂培养基中培养5小时后，用10％粘蛋白/磷酸缓冲液稀释10倍，由此调制细菌接种液。

感染通过将细菌接种液0.5mL(约10⁶CFU/mouse)接种到小鼠的腹腔内来诱发。试验化合物用10％HPβCD/2.5％甘露醇水溶液溶解，在感染1小时后，以50mg/kg的单次剂量尾静脉内给药。感染3日后，记录存活只数。

其结果，未给药试验化合物的对照组全例死亡，但给药试验化合物的组均在菌接种3日后观察到100％的小鼠存活，确认体内的抗多药耐药性绿脓杆菌活性。并且，给药25mg/kg试验化合物A的组在菌接种3日后确认60％以上的小鼠存活，确认体内的优异的抗多药耐药性绿脓杆菌活性。

试验例5 小鼠的多药耐药性绿脓杆菌尿路感染模型试验

作为试验化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。

小鼠使用ICR系雌性SPF小鼠(5周龄：1组5只)。

细菌接种液采用如下方法调制：将在37℃在马-欣二氏琼脂平板上培养过夜的绿脓杆菌临床分离株(S-2838株)悬浮在灭菌生理盐水中，由此调制细菌接种液。

感染通过将细菌接种液0.2mL(约10³CFU/小鼠)接种到小鼠的尿道内来诱发。试验化合物用10％HPβCD/2.5％甘露醇水溶液溶解,在感染2小时后，以25mg/kg的单次剂量尾静脉内给药。记录感染第2天的肾内的活菌数，计算平均值。

其结果，给药试验化合物的组与未给药试验化合物的对照组相比，均观察到2logCFU/肾以上的肾内活菌数的降低，确认尿路感染模型中的抗绿脓杆菌活性。并且，给药12.5mg/kg试验化合物A的组与未给药试验化合物的对照组相比，观察到2log CFU/肾以上的肾内活菌数的降低，确认尿路感染模型中的优异的抗绿脓杆菌活性。

试验例6 小鼠的多药耐药性绿脓杆菌肺感染模型试验

作为试验化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。

小鼠使用ICR系雄性SPF小鼠(感染时4.5周龄：1组5只)，为了成为一过性易感染状态，在感染前4日，腹腔内给药环磷酰胺200mg/kg。

细菌接种液采用如下方法调制：将在37℃在马-欣二氏琼脂平板上培养过夜的绿脓杆菌临床分离株(S-2838株)悬浮在灭菌生理盐水中，由此调制细菌接种液。

感染通过将细菌接种液0.05mL(约10⁵CFU/小鼠)接种至小鼠的鼻腔内来诱发。试验化合物用10％HPβCD/2.5％甘露醇水溶液溶解，在感染2和8小时后，以50mg/kg的剂量，两次尾静脉内给药。记录感染第2天的肺内活菌数，计算平均值。

其结果，给药试验化合物的组与未给药试验化合物的对照组相比，均观察到2logCFU/肺以上的肺内活菌数的降低，确认肺感染模型中的抗绿脓杆菌活性。并且，给药25mg/kg试验化合物A的组与未给药试验化合物的对照组相比，观察到2log CFU/肺以上的肺内活菌数的降低，确认肺感染模型中的优异的抗绿脓杆菌活性。

试验例7 Vero细胞增殖抑制试验

作为试验化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。

将试验化合物用二甲亚砜溶解，使用MEM培养基调制成各浓度后，以0.1mL/孔分注到96-孔微板的各孔中。使用添加有20％FBS的MEM培养基以3×10⁴细胞/mL调制Vero细胞悬浮液，以0.1mL/孔向各孔播种，在5％CO₂、37℃下培养3日。培养结束时，制作添加有1mg/mL2,3-双-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-5-((苯基氨基)羰基)-2H-四氮唑内盐单钠盐(XTT)和25μM吩嗪甲磺酸盐(PMS)的PBS，以50μL/孔添加到各孔中。约2小时后，使用酶标仪测定450nm的吸光度。

计算未添加试验化合物的对照与各孔的吸光度比，计算抑制50％细胞增殖的化合物的浓度(CC₅₀，μg/mL)。

其结果，试验化合物的CC₅₀均为100μg/mL以上。

试验例8 hERG抑制活性的评价

作为试验化合物，使用化合物A和化合物C。

使用引入hERG基因(人体乙醚麻醉舞蹈症(eag)相关基因)的HEK293细胞(人胚肾293细胞，CYTOMYX公司)。

培养液使用向含有10％胎牛血清和1％非必需氨基酸的MEM培养基中加入Geneticin(遗传霉素)至400μg/mL的浓度而得到的培养液。细胞在二氧化碳培养机中(37.0℃，5％CO₂)培养。

hERG电流的测定采用全细胞钳位法进行。将粘接有测定用细胞的盖玻片放入平皿内，用灌流液(组成(mmol/L)：NaCl 137、KCl 4、HEPES 10、CaCl₂ 1.8、MgCl₂ 1、葡萄糖10，pH7.4)以2mL/分钟的速度灌流。灌流槽内的温度维持在25℃。使细胞与填充有内液(组成(mmol/L)：KCl 130、MgCl₂ 1、EGTA 5、HEPES 10、MgATP 5，pH 7.2)的玻璃电极(2.0～8.0MΩ)接触，膜片破碎后，经由膜片钳软件pClamp 10(Molecular Devices Corporation)，使用膜片钳放大器(EPC-7Plus，HEKA)，测定hERG电流。脉冲方案设定为：保持电位-80mV、去极化脉冲+20mV 1.5秒、复极化脉冲-50mV 1.5秒，确认得到稳定的电流波形后，应用试验化合物。

分析应用前和应用10分钟后的hERG电流波形中的尾电流的峰值，计算出应用10分钟后相对于应用前的比率(相对值，％)。

其结果，试验化合物均不显示达到300μmol/L的hERG抑制活性。

试验例9 检查是否存在遗传毒性的体外微核试验

作为试验化合物，使用化合物A。

为了调查试验化合物对培养细胞有无染色体异常诱发性，实施体外微核试验。试验使用中国仓鼠肺纤维母细胞(CHL/IU细胞)，通过短时间处理法(代谢激活存在下和不存在下)和30小时处理法来实施。予以说明，试验化合物的浓度参考“关于医药品的遗传毒性试验和解释的指南”，设定1.00mmol/L为最高用量。标本观察针对0.25、0.50和1.00mmol/L的用量来实施。

向60mm平皿(IWAKI)中播种15×10⁴个细胞，使用含有10％新生小牛血清(Sigma-Aldrich Co.)和50U/mL-50μg/mL的青霉素-链霉素(Sigma-Aldrich Co.)的MEM培养基(Sigma-Aldrich Co.)，在37℃、5％CO₂下预培养24小时。预培养结束后，添加介质(DMSO)或试验化合物。在短时间处理法中，在培养6小时后，用PBS(-)(Sigma-Aldrich Co.)洗涤细胞后，更换为新的培养基，再培养24小时。在30小时处理法中，添加试验化合物后，培养30小时。培养结束后，用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液(Sigma-Aldrich Co.)剥离细胞。离心分离后，除去上清液，加入0.075mol/L氯化钾水溶液3mL，在室温下进行5分钟低渗处理后，用冰冷的固定液(甲醇：乙酸＝19：1)固定细胞，制作载玻片标本(吉姆萨染色(Merck))。针对每1种用量，观察2000个细胞，计算具有微核的细胞数。将试验化合物组的微核出现频率与介质对照组相比有统计学显著性增加的情况设为阳性，与介质对照同等的情况设为阴性。

其结果，在任一种处理方法中，试验化合物在1mmol/L以下的用量为阴性。

试验例10 血浆中蛋白质结合率的测定

作为试验化合物，使用化合物A和化合物C。

向人血清中加入试验化合物，调制添加有1μg/mL化合物的血清，在室温下静置1小时以上。通过离心超滤法(分级分子量10,000，1500×g，25℃，10分钟)，采集20μL滤液，加入人血清和内标溶液(呋塞米-乙腈溶液)。向添加有化合物的血清中加入PBS和内标溶液。搅拌后，离心分离，通过LC-MS/MS定量上清液中的浓度。

使用下述计算式求出蛋白结合率。

蛋白结合率(％)＝(1-(滤液的浓度)/(添加有化合物的血清的浓度))×100

其结果，试验化合物的蛋白质结合率均为80％以下。

试验例11 人中的肝药物代谢酶的抑制作用

作为试验化合物，使用化合物A和化合物C。

使用混合人肝微粒体。底物及其最终添加浓度、阳性对照及其最终添加浓度如表7和8所述。反应在磷酸缓冲液(100mmol/L，pH7.4)中进行，反应体系的最终浓度设定为：人肝微粒体蛋白质0.5mg/mL、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)1.55mmol/L、葡萄糖-6-磷酸3.3mmol/L、氯化镁3.3mmol/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)0.4单位/mL。反应液中的各化合物的最终浓度为100μM。将这些反应液在37℃下预孵育30分钟后，添加底物，在37℃下反应10分钟。通过添加1.5倍体积的内标物溶液(含有0.25mmol/L右咖烷和2％甲酸的乙腈溶液)使反应停止后，离心分离，通过LC-MS/MS定量上清液中的代谢物浓度。

使用下述计算式，求得添加抑制剂时的抑制活性率。

抑制活性率(％)＝(1-(试验化合物存在下的CYP代谢物浓度)/(试验化合物不存在下的CYP代谢物浓度))×100

其结果，试验化合物的抑制活性率均为30％以下。

[表7]

[表8]

试验例12 稳定性试验

将由实施例2～13和30～33得到的液体制剂在25℃保存24小时。通过HPLC法测定保存后的化合物A的浓度，求出残存率。另外，测定保存后的pH。

结果示于表9。

残存率通过以下公式计算。

残存率(％)＝(保存后的化合物A的浓度/试验开始时的化合物A的浓度)×100

<HPLC测定条件>

检出器：LC-2010CHT(岛津制作所)

测定波长：254nm

柱：XBridge C18 4.6×150mm(Waters公司)

前置柱：Develosil ODS-HG 4.0×10mm(野村化学)

柱温：40℃

流速：1.0mL/分钟

流动相A：水/(0.2mol/L甲酸缓冲液(pH3))＝90/10

流动相B：乙腈/(0.2mol/L甲酸缓冲液(pH3))＝90/10

梯度循环：0分钟(A液/B液＝90/10)，15分钟(A液/B液＝70/30),20分钟(A液/B液＝0/100)，30分钟(A液/B液＝0/100)

[表9]

实施例的液体制剂的残存率为90％以上。特别是pH为3～8的实施例的液体制剂的残存率为95％以上。实施例的液体制剂稳定。

试验例13 溶解度试验

作为试验化合物，使用化合物A一水合物。

向CD或CD衍生物的10％溶液5mL中加入化合物A一水合物约100mg，在室温下搅拌24小时。6小时后，向使用αCD、HPαCD、DMβCD和甲基-β-环糊精的溶液中追加化合物A一水合物约100mg。离心分离(3000rpm，10分钟)后，用过滤器过滤上清液，通过HPLC法测定溶解度。

结果示于表10。

[表10]

由于CD或CD衍生物，化合物A显示优异的溶解性。

产业实用性

本发明的含有氧肟酸衍生物或其盐和增溶剂的药物组合物显示出强的抗菌活性，具有优异的溶解性，作为药物是有用的。

Claims (23)

1.药物组合物，其含有选自(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺、(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺和(2S)-N-羟基-2-((4-((4-((1S)-1-羟基-2-甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N’,2-二甲基丙二酰胺中的氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂。

2.权利要求1所述的药物组合物，其中，增溶剂为环糊精或环糊精衍生物。

3.权利要求1或2所述的药物组合物，其中，氧肟酸衍生物为(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺。

4.权利要求2或3所述的药物组合物，其中，环糊精或环糊精衍生物为选自α-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-α-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、2,3,6-三-O-甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、七-2,6-二-O-甲基-β-环糊精、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精和羟丙基-γ-环糊精中的一种或两种以上。

5.权利要求2或3所述的药物组合物，其中，环糊精或环糊精衍生物为选自α-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-α-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和羟丙基-γ-环糊精中的一种或两种以上。

6.权利要求1～5任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。

7.权利要求6所述的药物组合物，其中，液体制剂的pH为3～8。

8.权利要求1～5任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为冷冻液体制剂。

9.权利要求8所述的药物组合物，其中，解冻后的冷冻液体制剂的pH为3～8。

10.权利要求1～5任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为冻干制剂。

11.权利要求10所述的药物组合物，其中，冻干制剂的水溶液的pH为3～8。

12.权利要求1所述的药物组合物，其中，增溶剂为选自一元醇类、多元醇类、酰胺类、亚砜类、氨基酸类、表面活性剂、酸类和碱类中的一种或两种以上。

13.权利要求12所述的药物组合物，其中，氧肟酸衍生物为(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺。

14.权利要求12或13所述的药物组合物，其中，一元醇类为碳数1～6的醇，多元醇类为二醇，酸类为有机酸。

15.权利要求12或13所述的药物组合物，其中，增溶剂为选自碳数1～6的醇、二醇、氨基酸类和有机酸中的一种或两种以上与酰胺类的组合。

16.权利要求12～15任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。

17.权利要求1～16任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为用作LpxC抑制剂的药物组合物。

18.权利要求1～16任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为用作抗菌剂的药物组合物。

19.含有氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂的液体制剂的制备方法，其特征在于，将选自(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺、(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺和(2S)-N-羟基-2-((4-((4-((1S)-1-羟基-2-甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N’,2-二甲基丙二酰胺中的氧肟酸衍生物或其盐以及增溶剂溶解于水中，得到氧肟酸衍生物或其盐的水溶液，然后根据需要，将得到的水溶液的pH调整至3～8。

20.权利要求19所述的制备方法，其中，增溶剂为环糊精或环糊精衍生物。

21.权利要求19或20所述的制备方法，其中，氧肟酸衍生物为(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羟乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N-羟基-N’,2-二甲基丙二酰胺。

22.权利要求20或21所述的制备方法，其中，环糊精或环糊精衍生物为选自α-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-α-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、2,3,6-三-O-甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、七-2,6-二-O-甲基-β-环糊精、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精和羟丙基-γ-环糊精中的一种或两种以上。

23.权利要求20或21所述的制备方法，其中，环糊精或环糊精衍生物为选自α-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-α-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和羟丙基-γ-环糊精中的一种或两种以上。