CN106701672A - 一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途，具体地，本发明公开人源脂肪间充质干细胞因子的培养方法，它包括如下步骤：取人脂肪间充质干细胞，置于高辅酶无血清培养基中，培养至细胞汇合度75～85％时，收集上清液，即可。本发明还公开了人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液的制备方法以及该方法制备得到的浓缩液及其进一步应用。本发明还公开了该方法制备得到细胞因子浓缩物以及用其制备的化妆品和药物。本发明方法制备得到的浓缩液脂肪间充质干细胞因子含量高，质量稳定，与其他材料在特定配比下组合物制备的产品，修复皮肤损伤的效果好；而且本发明方法简单易行、适合大规模生产，具有良好的市场前景。

Description

一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于皮肤修复技术领域，具体涉及一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途。
背景技术
近年来，间充质干细胞分泌的因子已成为研究热点，这些细胞因子可有效调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。将细胞因子添加到美容化妆品，不仅具有一般化妆品的保湿美白功效，还能够修复受损皮肤，消除皮肤皱纹，收缩毛孔，改善面色等，越来越受到人们的关注。然而市面上的细胞因子化妆品一般采用直接掺入或经冻干后掺入化妆品基质的方式制造，细胞因子含量较低，且含有大量糖分等其它杂质，使用这些化妆品后反而会造成皮肤干燥脱皮等不适感。
公开号为CN 105543313 A的申请公开了一种分离人源间充质干细胞因子的方法以及一种细胞因子化妆品或药物，每100ml化妆品或药物中包含权利要求6所述的间充质干细胞因子冻干粉0.5～1.5g，生物多糖胶0.1～1g，胶原蛋白1～5ml。但是其效果有待进一步改进。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途。
本发明人源脂肪间充质干细胞因子的制备方法，它包括如下步骤：取人脂肪间充质干细胞，置于高辅酶无血清培养基中，培养至细胞汇合度75～85％时，收集上清液，即可；其中，所述高辅酶无血清培养基是每1L添加有辅酶A 10mg～28mg、辅羧酶5mg～15mg、黄素腺嘌呤二核苷酸4mg～12mg、尿苷酸磷酸0.5mg～2.5mg的间充质干细胞无血清培养基。
优选地，所述培养是在低氧条件下培养，其中，24h内细胞的氧浓度为21％，24h～26h氧浓度由21％均匀降到18％，第27h的氧浓度为18％，第28～36h氧浓度由18％均匀降到8％，第37h的氧浓度为8％，第38h～44h氧浓度由8％均匀降到2％，后持续于2％的氧浓度下培养；优选地，所述的细胞活率为97.3％。
本发明还提供了一种人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液的制备方法，步骤如下：
a、按照前述的方法培养，得培养液上清；
b、过滤、浓缩。
其中，所述过滤、浓缩方法是：先采用0.22μm滤膜过滤；然后通过40KD超滤膜，收集透析液，再将透析液通过100D超滤膜，收集截留液，得到细胞因子浓缩液,即可。
本发明还提供了前述方法制备得到的人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液。
本发明还提供了一种人源间充质干细胞因子冻干粉的制备步骤，如下：取前述细胞因子浓缩液，冻干，得人源间充质干细胞因子冻干粉。
其中，冻干前，先加入冻干保护剂；其中，所述冻干保护剂每100ml中含有如下组分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羟脯氨酸0.05g、精氨酸0.2g、组氨酸0.2g、蛋氨酸0.2g、酪氨酸0.2g、氨基乙酸2g、柠檬酸钠0.26g。
本发明还提供了前述方法制备得到的人源间充质干细胞因子冻干粉。
本发明还提供了前述细胞因子浓缩液或前述细胞因子冻干粉在制备化妆品或者修复皮肤损伤的药物中的用途。
本发明还提供了一种细胞因子化妆品或药物，每10ml化妆品或药物中包含前述间充质干细胞因子冻干粉0.005～0.05g，生物多糖胶0.1～0.145g，胶原蛋白溶液0.3ml，叶酸0.05g；优选地，每10ml中化妆品或药物中包含前述的间充质干细胞因子冻干粉0.05g，生物多糖胶0.1g，胶原蛋白溶液0.3ml，叶酸0.05g。
本发明分离纯化人源脂肪间充质干细胞因子的方法，通过特定的低氧培养体系和培养基培养得到高浓度细胞因子培养液，并且可有效去除间充质干细胞培养液中的杂质，而且得到的细胞因子纯度高，产量高，并且脂肪组织取材容易，不再依托脐带组织来源，成本低廉。本发明的间充质干细胞因子浓缩液能够促进表皮细胞营养代谢；促进皮下胶原细胞功能，加速皮肤胶原细胞生长，增加胶原分泌，具有预防和修复皮肤损伤，延缓衰老，抗皱及美白等功效，而且使用时无皮肤干燥等不适感。
本发明的间充质干细胞因子浓缩液与其他原料制备而成的化妆品或药品，可以增强其皮肤修复、抗老化、祛皱美白等美容护肤功效，具有良好的市场前景。
下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
附图说明
图1为P5代ADSCADSC细胞表面标志图。
图2为烫伤后48h创面。
图3为烫伤后14d创面。
图4左图为烫伤后18d创面。
图5左图为烫伤后21d创面。
图2-图5用药说明：a为含本发明细胞因子的凝胶；b为生理盐水；c为1％SD-Ag霜；d为成纤维细胞生长因子。
具体实施方式
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照试剂盒说明书选择。
实验试剂及仪器：
试剂 购买厂家
CD45-FITC CD90-FITC 美国Coulter公司
HLA-DR-FITC 美国Coulter公司
CD105-PE 美国Coulter公司
DMEM/F12培养基 美国GIBICO公司
胰蛋白酶 美国Sigma公司
胎牛血清 澳大利亚PAA
无血清培养基 美国GIBICO公司
CoA(辅酶A) Solarbio公司
TPP(辅羧酶) Solarbio公司
FDA(黄素腺嘌呤二核苷酸) Solarbio公司
UTP(尿苷酸磷酸)。 Solarbio公司
生物多糖胶 Solabia公司
胶原蛋白溶液(胶原蛋白浓度为10％) 山东隆贝生物科技有限公司
白蛋白 成都蓉生药业有限责任公司
无血清培养基 美国GIBICO公司；
EGF ELISA试剂盒 美国RD公司
FGF 美国RD公司
VEGF 美国RD公司
实施例1本发明脂肪间充质干细胞因子的制备
一、脂肪来源
供者签署脂肪捐赠知情者同意书，采集前检查供者凝血功能、丙型肝炎病毒抗体、艾滋病病毒Ⅰ/Ⅰ抗体、乙型肝炎病毒抗原和梅毒螺旋体抗体。分离脂肪，保证所采脂肪无病毒污染。
二、制备方法
脂肪改良培养基和本发明低氧培养组：
1、人脂肪间充质干细胞(AADSC)低氧培养上清液的获取
(1)细胞培养：
将采集瓶中下层液体用吸管吸出，留下黄色脂肪组织，注意不要吸到黄色脂肪颗粒；
加入30ml生理盐水，振荡采集瓶，清洗脂肪组织，然后静置3分钟，待分层后用吸管吸出下层液体。反复重复此步骤，清洗3次；
将采集瓶中清洗后的脂肪组织取出，每3ml放入一个100mm2培养皿中，用手术剪将脂肪组织剪成1mm3大小碎块，均匀铺在培养皿底部；
每个培养皿加入10ml人脂肪干细胞无血清培养基，然后将培养皿放置在37℃，5％CO2培养箱中培养；
培养过程中，每3天用倒置显微镜观察细胞生长情况，并将培养上清液吸出，添加10ml新鲜培养基。
用倒置显微镜观察细胞生长情况，当观察到培养皿中细胞生长出来且汇合度达40％时，将培养皿中上清液和脂肪组织吸出，注意不要吸到细胞。
加入1ml0.25％胰酶-0.38g/L EDTA溶液消化细胞。
在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml培养基终止消化。
用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打，将细胞吹散。将细胞转移到15ml离心管中，1000rpm离心5min。
弃上清，加入10ml培养基重悬细胞。此时获得的细胞为P0代脂肪干细胞。
(2)制备种子库细胞
将收获的细胞以3000个/cm2密度接种到T75培养瓶中，并采用无血清培养基培养。当细胞生长到汇合度75～85％时，收获细胞，添加10％DMSO，用无血清培养基调整细胞量至1.0～10.0×106个/ml/管，用程控降温仪降温后保存在液氮罐中作为种子库细胞(即P1代细胞)。对得到的P1代细胞进行活率测定，活率为98.3％。
(3)制备人脂肪间充质干细胞的上清液
按需求量复苏种子库细胞，进行扩大培养，复苏细胞活率为97.3％。将种子库细胞以3000个/cm2密度接种到T75培养瓶中，并采用无血清培养体系培养。当细胞生长到汇合度75～85％时，对细胞(即P2代细胞)进行传代，再以8000个/cm2密度接种到T225培养瓶中，在培养瓶中加入40ml高辅酶无血清培养基【培养基中加入了CoA(辅酶A)10mg～28mg/L、TPP(辅羧酶)5mg～15mg/L、FDA(黄素腺嘌呤二核苷酸)4mg～12mg/L、UTP(尿苷酸磷酸)0.5mg～2.5mg/L】，放入三气培养箱，细胞按上述培养条件正常培养24h，24h后，氧气浓度在24h～27h期间由21％均匀降到18％，并在18％维持1h，28h后调节氧浓度，使之在28h～37h期间由18％均匀降到8％，并持续在8％培养1h后调节氧浓度，使之在38h～44h期间由8％均匀降到2％，并持续在2％培养10h。当细胞生长到汇合度75～85％时，收集上清液并保存在-40℃低温冰箱内，对细胞(即P3代细胞)进行传代，如此重复操作直到收获P5代细胞，按1.0～10.0×107个细胞/ml密度冻存(细胞冻存时加入10％DMSO)，并对最后收集的细胞上清液取样，进行细胞活率、无菌、支原体、细菌内毒素检测。
(4)将收集的P2-P5代细胞的所有无血清培养液在37℃解冻后合并在一起，得到15L液体。
脂肪常规培养实验组：步骤(3)中培养基为常规的不添加高辅酶的无血清培养基，培养条件为正常氧状态，其余同脂肪改良培养基和本发明低氧培养组；
脂肪改良培养基和现有低氧培养方法培养后的上清：步骤(3)中的低氧条件为：5％O2、5％CO2、90％N2，其余同脂肪改良培养基和本发明低氧培养组；
脂肪常规培养基和本发明低氧培养方法培养后的上清：步骤(3)中培养基为常规的不添加高辅酶的无血清培养基，其余同脂肪改良培养基和本发明低氧培养组。
2、过滤浓缩
对收集的无血清上清液先采用0.22μm滤膜过滤，去除混在上清液中的细胞碎片；再采用分级无菌超滤分离机进行截留，此处所述分级超滤分离机，是由电磁供料泵、耐震压力表、无菌原料罐、压力表、无菌管道支架以及100D和40KD无菌有机滤膜等配件连接组成。
培养上清液通过滤膜的顺序为，先通过50KD有机滤膜，收集低于40KD的细胞因子液；然后将细胞因子液用电磁泵再次打入100d有机滤膜，收集到3L-5L细胞因子浓缩液，根据工艺需要，通过反复浓缩可以将细胞因子体积浓缩为原培养上清液体积的1/3-1/10，即可。
三、实验结果
1、人脂肪间充质干细胞的形态
取P5代细胞悬液进行流式检测，检测结果如表1，图1所示。
表1 P5代ADSC细胞的免疫表型
细胞免疫表型表达 P5代ADSC细胞免疫表型
CD90-FITC 99.9
CD105-PE 99.9
CD73-FITC 99.7
HLA-DR-PC5 1.0
CD45-PC7 0.3
CD14/34/79a-PE 1.1
FITC：代表异硫氰酸荧光素标记；PE：代表藻红蛋白标记；PC5：藻红蛋白－花青素5、P75：藻红蛋白－花青素7。
由表1，图1可见，细胞高表达CD90、CD105、CD73，但不表达CD45、HLA-DR\CD14/34/79a，符合人脂肪间充质干细胞的表面标志特征。
2、细胞因子浓缩液中的细胞因子含量测定
用ELISA试剂盒对表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)为代表的细胞因子进行检测，试验中对正常培养条件和常规无血清培养基培养所得的培养上清液、和改良后的培养基与低氧浓度培养所得培养上清液进行细胞因子含量测定。
再对脂肪培养所得上清液采用100D与40KD联合超滤后进行含量测定，以及回收率检测。
试验均取5L细胞培养上清液，用0.22μm滤膜过滤后进行超滤，直至浓缩液为500mL为止，即浓缩10倍(而现有专利一般浓缩20倍以上)，取样进行含定比较。
检测结果见表2。
表2细胞因子含量对比
由表2可见，与组1采用常规的培养方法(培养基为常规培养基，且氧浓度为正常氧浓度)相比，本发明改进的培养方式(组2)可以有效提高细胞因子表达水平，进而提高最终得到的产物中的生长因子含量；
与现有低氧培养方法相比(组3)，本发明改进的低氧培养方式(组4)可以有效提高细胞因子的表达水平，进而提高最终得到的产物中的生长因子含量；
与组1采用常规的培养方法(培养基为常规培养基，且氧浓度为正常氧浓度)相比，本发明同时改进培养基和采用低氧培养(组4)的方法，最终得到的产物中的生长因子含量高。
实验结果说明，本发明改良后的培养基与低氧浓度培养方式，均可以有效提高上清中生长因子的含量，获得上清后用滤膜超滤法进一步纯化，得到的细胞培养上清液的细胞因子含量均较高，回收率高。
而且发明中采用脂肪得到细胞培养上清液，所得到的培养上清液中细胞因子量高且稳定，浓缩倍数少，节约时间，利于工业化，用于美容护肤，优势明显。
实施例2本发明间充质干细胞因子的制备
1、取实施例1制备得到的细胞因子浓缩液，通过反复超滤调整细胞因子浓缩液浓度，使浓缩液中EGF含量为6ug/ml。
2、在细胞因子浓缩液中加入一定量冻干保护剂，使EGF的含量为0.5ug/ml，并调节pH值为6.0。
其中，冻干保护剂每100ml中含有如下组分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羟脯氨酸0.05g、精氨酸0.02g、组氨酸0.2g、蛋氨酸0.2g、酪氨酸0.2g、氨基乙酸2g、柠檬酸钠0.26g。冻干条件为：温度在-25～-40℃，压强维持在10-30pa，时间为18-28h，得到细胞因子冻干粉。
3、细胞因子冻干粉的活性测定
采用细胞增值法/MTT比色法测定冻干前溶液的EGF和冻干后的EGF，其EGF的活性保持率为97.1％。
细胞因子冻干粉水分经测定小于1.3％。
本发明的冻干保护剂可以有效保护细胞因子的活性，而且冻干时间短，生产效率较高。
实施例3本发明细胞因子化妆品或药物的制备
取实施例2制备的细胞因子冻干粉，加入生物多糖胶、胶原蛋白、叶酸、无菌超纯水制成组合物，该组合物可以加入到常规护肤品中，也可单独作为护肤品使用。
其中10ml水溶液中含细胞因子冻干粉0.05g，生物多糖胶0.1g，胶原蛋白无菌溶液0.3ml、叶酸0.05g。
实施例4本发明细胞因子化妆品或药物的制备
取实施例2制备的细胞因子冻干粉，加入生物多糖胶、胶原蛋白、叶酸、无菌超纯水制成组合物。
其中10ml水溶液中含细胞因子冻干粉0.025g，生物多糖胶0.125g，胶原蛋白无菌溶液0.3ml、叶酸0.05g。
实施例5本发明细胞因子化妆品或药物的制备
取实施例2制备的细胞因子冻干粉，加入生物多糖胶、胶原蛋白、叶酸、无菌超纯水制成组合物。
其中10ml水溶液中含细胞因子冻干粉0.005g，低分子量生物多糖胶0.145g，胶原蛋白无菌溶液0.3ml、叶酸0.05g。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1本发明间充质干细胞因子的冻干保护剂筛选
一、试验方法
1、取实施例1制备得到的细胞因子浓缩液，通过超滤调整浓度，使浓缩液中EGF含量为0.6ug/ml。
2、在细胞因子浓缩液中加入一定量的冻干保护剂，使EGF的含量为0.5ug/ml，并调节pH值为6.0。冻干保护剂配方分别如下所示：
配方1：100ml中含有如下组分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羟脯氨酸0.05g、精氨酸0.0.2g、组氨酸0.2、蛋氨酸0.2、络氨酸0.2、氨基乙酸2g、柠檬酸钠0.26g。
配方2：100ml中含有如下组分：抗坏血酸(VC)1.0g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.8g、海藻糖3.0g，甘氨酸0.1、精氨酸0.17g、氨基乙酸4g、柠檬酸钠0.26g。
3、在压强为10～30pa，-25～-40℃下进行冻干。
二、试验结果
见表3。
表3两种冻干保护剂比较
组分 冻干时间 EGF活性 冻干粉所含水分(n＝3)
配方1 30h 97.1％ 1.2％
配方2 35h 94.2％ 1.7％
由表3可见，使用本发明冻干保护剂配方(配方1)可以显著增加EGF活性，而且冻干粉中水分含量低，使冻干粉更易于保存。
因此，本发明的冻干保护剂用于冻干时效果好，具有显著优势。
试验例2本发明细胞因子化妆品或药物的配方筛选
一、方法
选取体重250g左右雄性Wistar大鼠30只。经脱毛、局麻后，用3cm沸水加热铁棒紧贴背部皮肤，持续7s，每只大鼠背部造成4个创面。烫伤后立即腹腔注射乳酸林格氏液5ml抗休克,创面经病理证实为深Ⅰ度。
大鼠24只随机分为两组：正常对照组(6只)和实验组(24只)，实验组分为4组，每组6只，实验组动物分别涂抹实施例3、4、5的药物，每日一次。于烫伤后10d、14d、18d、21d测量创面愈合率。
二、结果
1、创面愈合率
烫伤后10d、14d、18d、21d的创面愈合率如下表所示：
表4各组创面愈合率比较(％,x±s，n＝6)
*：与生理盐水相比，P<0.05；#：与最佳组(实施例3)相比，P<0.05。
由上表可以看出，本发明三个实验组的愈合效果显著优于对照组，说明三个组合的药品/化妆品均可以有效促进创面愈合，其中，实施例3所示的组合方式的愈合效果最佳，显著优于另外两个实验组。
试验例3本发明间充质干细胞因子的应用
一、方法
选取体重250g左右雄性Wistar大鼠48只。经脱毛、局麻后，用3cm沸水加热铁棒紧贴背部皮肤，持续7s，每只大鼠背部造成4个创面。烫伤后立即腹腔注射乳酸林格氏液5ml抗休克,创面经病理证实为深Ⅰ度。大鼠4处创面分别给予含本发明细胞因子的凝胶、按照公开号为CN 105543313A的申请的实施例4制备的药物、成纤维细胞生长因子喷雾剂、1％SD-Ag霜和生理盐水，每日一次。
大鼠48只随机分为两组：正常对照组(6只)和实验组(42只)，实验组分为7组，每组6只，其中试验组每组又随机分为A、B二个小组，每小组3只，A小组与B小组前后两个创面用药相交换，以排除部位不同的干扰。7组大鼠分别于烫伤后4h、12h、24h、48h、7d、14d、21d处死，取创面全层皮肤测量创面愈合率和创面微血管密度。
二、结果
2.1创面愈合率
烫伤后第10d，各组间创面愈合率没有显著差别，第14d、18d和21d时，含本发明细胞因子的凝胶组和成纤维细胞生长因子组创面愈合率显著大于SD-Ag和生理盐水组(P<0.05)，而含本发明细胞因子的凝胶组与成纤维细胞生长因子组、SD-Ag组与生理盐水组间无显著性差异。见表5、图2～图5。
表5各组创面愈合率比较(％,x±s，n＝6)
*：与生理盐水相比，P<0.05；#：与1％SD-Ag霜相比，P<0.05。
2.2创面微血管密度(MVD)
烫伤后各组创面组织微血管密度逐渐增加，第21d达高峰。在烫伤后第7d，含本发明细胞因子的凝胶创面MVD显著多于SD-Ag和生理盐水组，烫伤后第14d和21d，含本发明细胞因子的凝胶组和成纤维细胞生长因子组与SD-Ag和生理盐水组相比，创面MVD显著增加(P<0.05)，含本发明细胞因子的凝胶组与成纤维细胞生长因子组间以及SD-Ag组与生理盐水组间相比，差异无显著性意义，见表6。
表6创面微血管密度变化(条/mm2，x±s，n＝6)
注：*：与生理盐水相比，P<0.05；#：与1％SD-Ag霜相比，P<0.05。
由表5、表6以及图2～图5可知，本发明药物/化妆品促进创面愈合的能力优良，优于市售的药物成纤维细胞生长因子喷雾剂和1％SD-Ag霜，同时也优于现有文献报道的类似产品，修复效果良好，应用前景优良。
综上，本发明方法制备得到的浓缩液脂肪间充质干细胞因子含量高，质量稳定，与其他材料在特定配比下组合物制备的产品，修复皮肤损伤的效果好；而且本发明方法简单易行、适合大规模生产，具有良好的市场前景。

Claims (10)

1.一种人源脂肪间充质干细胞因子的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：取人脂肪间充质干细胞，置于高辅酶无血清培养基中，培养至细胞汇合度75～85％时，收集上清液，即可；其中，所述高辅酶无血清培养基是每1L添加有辅酶A 10mg～28mg、辅羧酶5mg～15mg、黄素腺嘌呤二核苷酸4mg～12mg、尿苷酸磷酸0.5mg～2.5mg的间充质干细胞无血清培养基。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述培养是在低氧条件下培养，其中，24h内细胞的氧浓度为21％，24h～26h氧浓度由21％均匀降到18％，第27h的氧浓度为18％，第28～36h氧浓度由18％均匀降到8％，第37h的氧浓度为8％，第38h～44h氧浓度由8％均匀降到2％，后持续于2％的氧浓度下培养；优选地，所述的细胞活率为97.3％。
3.一种人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液的制备方法，其特征在于：步骤如下：
a、按照权利要求1或2所述的方法培养，得培养液上清；
b、过滤、浓缩。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述过滤、浓缩的方法是：先采用0.22μm滤膜过滤；然后通过40KD超滤膜，收集透析液，再将透析液通过100D超滤膜，收集截留液，得到细胞因子浓缩液,即可。
5.权利要求3或4所述的方法制备得到的人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液。
6.一种人源间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤如下：取权利要求6所述的细胞因子浓缩液，冻干，得人源间充质干细胞因子冻干粉。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：冻干前，先加入冻干保护剂；其中，所述冻干保护剂每100ml中含有如下组分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羟脯氨酸0.05g、精氨酸0.2g、组氨酸0.2g、蛋氨酸0.2g、酪氨酸0.2g、氨基乙酸2g、柠檬酸钠0.26g。
8.权利要求6或7所述方法制备得到的人源间充质干细胞因子冻干粉。
9.权利要求5所述细胞因子浓缩液或权利要求8所述细胞因子冻干粉在制备化妆品或者修复皮肤损伤的药物中的用途。
10.一种细胞因子化妆品或药物，其特征在于：每10ml化妆品或药物中包含权利要求8所述的间充质干细胞因子冻干粉0.005～0.05g，生物多糖胶0.1～0.145g，胶原蛋白溶液0.3ml，叶酸0.05g；优选地，每10ml化妆品或药物中包含权利要求8所述的间充质干细胞因子冻干粉0.05g，生物多糖胶0.1g，胶原蛋白溶液0.3ml，叶酸0.05g。
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