CN106636064A - 一种全血基因组dna高通量板式提取试剂盒及提取方法 - Google Patents
一种全血基因组dna高通量板式提取试剂盒及提取方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法，涉及生物技术领域，包括裂解液1、裂解液2、结合液和磁珠，其中裂解液1包括以下组分：盐酸胍2~8mol/L，1%~10%的曲拉通‑100（V/V），1%~10%的吐温‑20（V/V）,1%~10%的chelex‑100 (m/V)，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至4.5，溶剂为去离子水；裂解液2包括以下组分：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；结合液包括以下组分：1~3mol/L的氯化钠，40%~90%的异丙醇 (V/V)，溶剂为去离子水；本发明实现了无需离心或搭配自动化仪器，可在50分钟内实现96个样本同时提取的目的。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法。
背景技术
公知的，自1990年起，国际人类基因组计划正式启动，社会各界对人类基因组的研究进入了飞速发展阶段，人类全血基因组DNA提取对于人类基因组遗传连锁图谱的构建、测序和基因识别是最为重要的基础性工作，DNA提取的质量与产量直接影响下游实验能否顺利进行。
目前，全血基因组DNA提取试剂盒种类繁多，但大部分试剂盒都需要沉淀、离心等操作，提取过程复杂、耗时长、效率低，并且无法实现高通量、自动化操作；即使少数试剂盒可以实现高通量、自动化操作，也需要搭配昂贵的自动化仪器，无法实现高通量提取方案的良好普及，因此提供一种高通量、方便快捷、结果稳定的全血基因组DNA提取试剂盒成为本领域技术人员的基本诉求。
发明内容
为了克服背景技术中的不足，本发明公开了一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法，实现了无需离心或搭配自动化仪器，可在50分钟内实现96个样本同时提取的目的。
为了实现所述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，包括裂解液1、裂解液2、结合液和磁珠，其中裂解液1包括以下组分：盐酸胍2~8mol/L，1%~10%的曲拉通-100（V/V），1%~10%的吐温-20（V/V）, 1%~10%的chelex-100 (m/V)，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至4.5，溶剂为去离子水；裂解液2包括以下组分：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；结合液包括以下组分：1~3mol/L的氯化钠，40%~90%的异丙醇 (V/V)，溶剂为去离子水。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括洗涤液I，洗涤液I包括以下组分：2~8mol/L的盐酸胍，1~3mol/L的氯化钠，20%~30%的异丙醇（V/V），20%~30%的乙醇（V/V），1~4mol/L的PEG-6000，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，溶剂为去离子水，盐酸调节溶液pH至4.5。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括洗涤液II，洗涤液II为60%~80%的乙醇 (V/V)。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括洗脱液，洗脱液包括以下组分：1~20mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，1~20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，溶剂为去离子水，盐酸调节pH至8.0。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，所述磁珠为洛阳吉恩特生物科技有限公司生产的DNA提取磁珠，固含量为50~100mg/ml。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括耗材，所述耗材包括96孔深孔板、96针搅拌套和磁力板，所述96孔深孔板分离的设置在磁力板上，所述96针搅拌套设置在96孔深孔板内。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，所述去离子水的用量根据所需体积而定量。
一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法，具体包括以下步骤：
（1）、将全血样本送至96孔深孔板内，加入裂解液1和裂解液2，金属浴37度，30min后取下；
（2）、接上一步骤，加入结合液与磁珠，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（3）、接上一步骤，加入洗涤液I，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（4）、接上一步骤，加入洗涤液II，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（5）、接上一步骤，将96孔深孔板置于37度金属浴，5min后取下，加入洗脱液，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于37度金属浴，10min后取下；将96孔深孔板置于磁力板上，磁分离完全后，将上清转移至新板中，进行下游实验。
由于采用了上述技术方案，本发明所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法具有如下有益效果：
1、通过裂解液1和裂解液2的配合使用，整个操作过程无需离心，操作更加简便；通过结合液、磁珠和96针搅拌套的配合使用，可实现高通量的全血DNA提取；通过96孔深孔板和96针搅拌套的配合使用，本方案可在50分钟内完成96个样本的同时提取，大大提高了工作效率；
2、通过结合液和磁珠的配合使用，本方案的灵敏度明显提高，可从200ul全血中提取5ug以上的DNA，现有技术为3ug以上，且无需使用昂贵的自动化仪器，成本较低，能够普及与各种类型的实验室；
3、本方案不使用氯仿、酚等有毒物质；
4、本方案的提取过程均在37度下进行，相比于现有技术的55度-70度的提取过程，本方案有效避免了高温对人体的潜在烫伤风险。
具体实施方式
通过下面的实施例可以详细的解释本发明，公开本发明的目的旨在保护本发明范围内的一切技术改进。
本发明所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，包括裂解液1、裂解液2、结合液和磁珠，其中裂解液1包括以下组分：盐酸胍2~8mol/L，1%~10%的曲拉通-100（V/V），1%~10%的吐温-20（V/V）, 1%~10%的chelex-100 (m/V)，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至4.5，溶剂为去离子水；裂解液2包括以下组分：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；结合液包括以下组分：1~3mol/L的氯化钠，40%~90%的异丙醇 (V/V)，溶剂为去离子水。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括洗涤液I，洗涤液I包括以下组分：2~8mol/L的盐酸胍，1~3mol/L的氯化钠，20%~30%的异丙醇（V/V），20%~30%的乙醇（V/V），1~4mol/L的PEG-6000，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，溶剂为去离子水，盐酸调节溶液pH至4.5。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括洗涤液II，洗涤液II为60%~80%的乙醇 (V/V)。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括洗脱液，洗脱液包括以下组分：1~20mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，1~20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，溶剂为去离子水，盐酸调节pH至8.0，。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，所述磁珠为洛阳吉恩特生物科技有限公司生产的DNA提取磁珠，固含量为50~100mg/ml。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，还包括耗材，所述耗材包括96孔深孔板、96针搅拌套和磁力板，所述96孔深孔板分离的设置在磁力板上，所述96针搅拌套设置在96孔深孔板内。
所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，所述去离子水的用量根据所需体积而定量。
一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法，具体包括以下步骤：
（1）、将全血样本送至96孔深孔板内，加入裂解液1和裂解液2，金属浴37度，30min后取下；
（2）、接上一步骤，加入结合液与磁珠，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（3）、接上一步骤，加入洗涤液I，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（4）、接上一步骤，加入洗涤液II，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（5）、接上一步骤，将96孔深孔板置于37度金属浴，5min后取下，加入洗脱液，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于37度金属浴，10min后取下；将96孔深孔板置于磁力板上，磁分离完全后，将上清转移至新板中，进行下游实验。
实施例1
1）、裂解液1的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为4mol/L的盐酸胍，3%的曲拉通-100（V/V），5%的吐温-20（V/V），3%的Chelex-100（m/V）,6mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，40mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至4.5；
2）、裂解液2的配置：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；
3）、结合液的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为1.5mol/L的氯化钠，50%的异丙醇（V/V），用去离子水定容至所需体积；
4）、洗涤液I的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为3 mol/L的盐酸胍，1.5mol/L的氯化钠，25%的异丙醇（V/V），20%的乙醇（V/V），2 mol/L的PEG-6000，2mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，30mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至4.5；
5）、洗涤液II的配置：75%的乙醇（V/V）；
6）、洗脱液的配置：先在容量瓶中加入少量去离子水，加入浓度为10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，5mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至8.0；
提取方法：
（1）、将100ul全血样本送至96孔深孔板内，加入300ul裂解液1和10ul裂解液2，金属浴37度，30min后取下；
（2）、接上一步骤，加入300ul结合液与10ul磁珠，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（3）、接上一步骤，加入600ul洗涤液I，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（4）、接上一步骤，加入400ul洗涤液II，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（5）、接上一步骤，将96孔深孔板置于37度金属浴，5min后取下，加入100ul洗脱液，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于37度金属浴，10min后取下；将96孔深孔板置于磁力板上，磁分离完全后，将上清转移至新板中，进行下游实验。
实施例2
1）、裂解液1的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为6mol/L的盐酸胍，7%的曲拉通-100（V/V），3%的吐温-20（V/V），6%的Chelex-100（m/V）,3mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，70mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至4.5；
2）、裂解液2的配置：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；
3）、结合液的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为2mol/L的氯化钠，70%的异丙醇（V/V），用去离子水定容至所需体积；
4）、洗涤液I的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为6 mol/L的盐酸胍，2mol/L的氯化钠，20%的异丙醇（V/V），25%的乙醇（V/V），3 mol/L的PEG-6000，6mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，70mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至4.5；
5）、洗涤液II的配置：70%的乙醇（V/V）；
6）、洗脱液的配置：先在容量瓶中加入少量去离子水，加入浓度为15mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至8.0；
提取方法：
（1）、将100ul全血样本送至96孔深孔板内，加入300ul裂解液1和10ul裂解液2，金属浴37度，30min后取下；
（2）、接上一步骤，加入300ul结合液与10ul磁珠，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（3）、接上一步骤，加入600ul洗涤液I，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（4）、接上一步骤，加入400ul洗涤液II，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（5）、接上一步骤，将96孔深孔板置于37度金属浴，5min后取下，加入100ul洗脱液，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于37度金属浴，10min后取下；将96孔深孔板置于磁力板上，磁分离完全后，将上清转移至新板中，进行下游实验。
实施例3
1）、裂解液1的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为8mol/L的盐酸胍，9%的曲拉通-100（V/V），10%的吐温-20（V/V），10%的Chelex-100（m/V）,9mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至4.5；
2）、裂解液2的配置：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；
3）、结合液的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为3mol/L的氯化钠，90%的异丙醇（V/V），用去离子水定容至所需体积；
4）、洗涤液I的配置：先在容量瓶中加入去离子水，加入浓度为8 mol/L的盐酸胍，3mol/L的氯化钠，30%的异丙醇（V/V），30%的乙醇（V/V），4 mol/L的PEG-6000，10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至4.5；
5）、洗涤液II的配置：70%的乙醇（V/V）；
6）、洗脱液的配置：先在容量瓶中加入少量去离子水，加入浓度为15mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用去离子水定容至所需体积，用盐酸调节PH值至8.0；
提取方法：
（1）、将300ul全血样本送至96孔深孔板内，加入500ul裂解液1和20ul裂解液2，金属浴37度，30min后取下；
（2）、接上一步骤，加入500ul结合液与15ul磁珠，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（3）、接上一步骤，加入800ul洗涤液I，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（4）、接上一步骤，加入500ul洗涤液II，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（5）、接上一步骤，将96孔深孔板置于37度金属浴，5min后取下，加入100ul洗脱液，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于37度金属浴，10min后取下；将96孔深孔板置于磁力板上，磁分离完全后，将上清转移至新板中，进行下游实验。
本发明所述的本发明未详述部分为现有的技术。
为了公开本发明的发明目的而在本文中选用的实施例，当前认为是适宜的，但是，应了解的是，本发明旨在包括一切属于本构思和发明范围内的实施例的所有变化和改进。
Claims (8)
1.一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，包括裂解液1、裂解液2、结合液和磁珠，其特征是：其中裂解液1包括以下组分：盐酸胍2~8mol/L，1%~10%的曲拉通-100（V/V），1%~10%的吐温-20（V/V）, 1%~10%的chelex-100 (m/V)，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至4.5，溶剂为去离子水；裂解液2包括以下组分：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，盐酸调节溶液pH至8.0；结合液包括以下组分：1~3mol/L的氯化钠，40%~90%的异丙醇 (V/V)，溶剂为去离子水。
2.根据权利要求1所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，其特征是：还包括洗涤液I，洗涤液I包括以下组分：2~8mol/L的盐酸胍，1~3mol/L的氯化钠，20%~30%的异丙醇（V/V），20%~30%的乙醇（V/V），1~4mol/L的PEG-6000，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，溶剂为去离子水，盐酸调节溶液pH至4.5。
3.根据权利要求1所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，其特征是：还包括洗涤液II，洗涤液II为60%~80%的乙醇 (V/V)。
4.根据权利要求1所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，其特征是：还包括洗脱液，洗脱液包括以下组分：1~20mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，1~20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，溶剂为去离子水，盐酸调节pH至8.0。
5.根据权利要求1所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，其特征是：所述磁珠为洛阳吉恩特生物科技有限公司生产的DNA提取磁珠，固含量为50~100mg/ml。
6.根据权利要求1所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，其特征是：还包括耗材，所述耗材包括96孔深孔板、96针搅拌套和磁力板，所述96孔深孔板分离的设置在磁力板上，所述96针搅拌套设置在96孔深孔板内。
7.根据权利要求1所述的全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒，其特征是：所述去离子水的用量根据所需体积而定量。
8.一种全血基因组DNA高通量板式提取试剂盒及提取方法，具体包括以下步骤：
（1）、将全血样本送至96孔深孔板内，加入裂解液1和裂解液2，金属浴37度，30min后取下；
（2）、接上一步骤，加入结合液与磁珠，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（3）、接上一步骤，加入洗涤液I，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（4）、接上一步骤，加入洗涤液II，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分离完全后，吸弃废液；
（5）、接上一步骤，将96孔深孔板置于37度金属浴，5min后取下，加入洗脱液，利用96针搅拌套进行搅拌，将96孔深孔板置于37度金属浴，10min后取下；将96孔深孔板置于磁力板上，磁分离完全后，将上清转移至新板中，进行下游实验。
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