CN105368820A - 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用 - Google Patents

一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105368820A
CN105368820A CN201510970714.XA CN201510970714A CN105368820A CN 105368820 A CN105368820 A CN 105368820A CN 201510970714 A CN201510970714 A CN 201510970714A CN 105368820 A CN105368820 A CN 105368820A
Authority
CN
China
Prior art keywords
washings
concentration
whole blood
liquid
nucleic acid
Prior art date
Application number
CN201510970714.XA
Other languages
English (en)
Inventor
孟庆海
黄远福
王炜
Original Assignee
南京先进激光技术研究院
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 南京先进激光技术研究院 filed Critical 南京先进激光技术研究院
Priority to CN201510970714.XA priority Critical patent/CN105368820A/zh
Publication of CN105368820A publication Critical patent/CN105368820A/zh

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C12N15/1013Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads

Abstract

本发明公开了一种基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒及其应用,该试剂盒包括细胞裂解液、结合液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和核酸洗脱液。与以往的试剂盒相比,该试剂盒具有操作简单快速、使用安全、提取效率高、制造成本低等优点;应用本发明试剂盒时不使用有毒试剂和有机溶剂,且无需对血液样本进行前处理,提取过程既可手工完成,也可在全自动核酸提取仪中自动完成,自动提取时使用96孔反应板可一次性处理1-16个动物组织样本,提取过程中无需其它操作,为全血DNA提取检测节约时间,降低成本;应用本发明试剂盒,可以对血液中的DNA进行快速的提取,提取的核酸浓度、纯度高,重复性好,可供科研和临床检测使用。

Description

-种基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物技术领域,设及一种基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,可应用 于多个物种全血DNA提取。本发明还设及应用该试剂盒从全血样本中提取DNA的方法。
背景技术 阳00引基因组DNA中含有细胞中全部的遗传信息,从全血中提取DNA是获得生物基因组DNA较为简单的方法,也是进行基因相关性研究的重要手段盒技术。DNA提取的质量盒产量 直接影响着后续实验的准确性。
[0003] 目前有多种全血DNA提取试剂盒可应用于多种领域,但传统的提取技术需要进行 沉淀、离屯、等操作,并需要大量的生物样本,导致使用当前的全血DNA提取试剂盒进行提取 存在诸多缺点,如提取过程复杂、样本处理时间长、样本处理丢失大量DNA、提取步骤易错、 易造成样本交叉污染、需多种仪器等。
[0004] 磁珠法属于固相抽提法,是采用磁珠为载体的分离技术。由于磁珠法提取核算 操作简单,快速,重复性好,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和 RNA,可应用在疾病控制中屯、、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品 安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。相比传统的DNA提取方法,磁珠法无需 离屯、和大量检材,也无需接触酪/氯仿等有毒试剂,且操作简单方便,很容易实现自动化操 作,基于磁珠法的核酸提取具备传统DNA提取无法比拟的优势,是未来核酸提取发展的重 要方向。为更有效的配合磁珠法使用,需要研发适用于磁珠法的新型全血DNA提取试剂盒。
发明内容
[00化]本发明的目的在于克服上述现有全血基因组DNA提取试剂盒的缺陷,提供一种基 于磁珠法的全血DNA提取试剂盒及其应用,该试剂盒具有操作简单快速、使用安全、提取效 率高、制造成本低的优点,提取得到的高浓度、搞纯度DNA可供科研和临床检测之用。为了 实现上述技术目的,本发明试剂盒的技术方案为: 本发明提供一种全血基因组DNA提取的试剂盒,所述试剂盒中的试剂包括细胞裂解 液、结合液、洗涂液和核酸洗脱液,所述洗涂液包括洗涂液I和洗涂液II;所述细胞裂解液 含有盐酸脈、乙二胺四乙酸、Ξ径甲基氨基甲烧、氯化钢和曲拉通X-100 ;所述结合液含有 聚乙二醇-8000和氯化钢;所述洗涂液包括洗涂液I和洗涂液II,其中:所述洗涂液I含有 盐酸脈、乙二胺四乙酸、Ξ径甲基氨基甲烧、氯化钢和乙醇;所述洗涂液II含有乙醇;所述 核酸洗脱液含有乙二胺四乙酸和Ξ径甲基氨基甲烧。
[0006] 优选地,在所述细胞裂解液中,盐酸脈的浓度为2-lOmol/L,乙二胺四乙酸的浓度 为5-20mmol/l,S径甲基氨基甲烧的浓度为2〇-8〇111111〇1/1,氯化钢的浓度为100-500mmol/ L曲拉通X-100的浓度为1%-5% (v/v),余量皆为去离子水;使用氨氧化钢和盐酸调节所述 细胞裂解液的抑值为7. 0-9. 0。更为优选地,所述盐酸脈的浓度为6mol/l,所述乙二胺四 乙酸的浓度为lOmmol/l,所述Ξ径甲基氨基甲烧的浓度为50mmol/l、所述氯化钢的浓度为 200mmol/l,所述曲拉通X-100的浓度为4% (v/v),细胞裂解液的抑值调节为8. 0。
[0007] 优选地,在所述结合液中,聚乙二醇-8000的浓度为40-50mmol/l,氯化钢的浓度 为5mol/L。更为优选地,所述聚乙二醇-8000的浓度为50mmol/L。
[0008] 优选地,在所述洗涂液I中,盐酸脈的浓度为2-lOmol/l,乙二胺四乙酸的浓度为 5-20mmol/l,S径甲基氨基甲烧的浓度为2〇-8〇111111〇1/1,氯化钢的浓度为100-500mmol/l, 乙醇的体积比浓度为50%-70%,余量皆为去离子水;使用氨氧化钢和盐酸调节所述洗涂液 I的抑值为7. 0-9. 0。更为优选地,所述盐酸脈的浓度为6mol/l,所述乙二胺四乙酸的浓 度为lOmmol/l,所述Ξ径甲基氨基甲烧的浓度为50mmol/l,所述氯化钢的浓度为200mmol/ L,所述乙醇的浓度为50% (v/v),洗涂液I的抑值调节为8. 0。
[0009] 优选地,在所述洗涂液II中,乙醇的浓度为50%-100% (v/v)。更为优选地,所述乙 醇的浓度为75% (v/v)。
[0010] 优选地,在所述核酸洗脱液中,Ξ径甲基氨基甲烧的浓度为5-15mmol/l,乙二胺四 乙酸的浓度为1. 0-1. 5mmol/L。更为优选地,所述Ξ径甲基氨基甲烧的浓度为8111111〇1/1,所 述乙二胺四乙酸的浓度为1. 3mmol/L。
[0011] 本发明还提供两种上述试剂盒的应用方法,方法一的技术方案为,包括如下步 骤: ① 在EP管中加入抗凝全血、细胞裂解液和蛋白酶K,56°C水浴解育30分钟; ② 再加入磁珠、结合液和无水乙醇,结合时间10分钟; ③ 使用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去EP管内所有液体; ④ 在EP管中加入洗涂液I,混匀后,使用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体; ⑥在EP管中加入洗涂液II,混匀后,使用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体, 该步骤重复一次; ⑧在EP管中加入核酸洗脱液,于65°C水浴下洗脱5分钟,使用磁铁将磁珠吸附至管壁, 将洗脱液转移至新的EP管内,-20°C保存备用; 其中:步骤①中加入的裂解液与全血的体积比为1:1-1:5 ;步骤②中加入的磁珠与结 合液的体积比为1:10-1:20 ;步骤④与步骤⑥中加入的洗涂液I和洗涂液II分别与裂解液 的体积比为5:1-10:1 ;步骤⑧中核酸洗脱液与细胞裂解液的体积比为1:1-1:5。
[0012] 优选地,所述EP管容量为加入的试剂为:10μL浓度lOmg/mL的蛋白酶K,抗 凝全血100μ以细胞裂解液200μ以磁珠20μ以结合液100μ以无水乙醇300μ以洗涂液I 和洗涂液II各600μ以核酸洗脱液100μL。
[0013] 方法二的技术方案为,包括如下步骤: ① 96孔反应板1排和7排加入细胞裂解液、蛋白酶Κ、结合液和无水乙醇; ② 所述96孔反应板2排和8排加入磁珠和去离子水; ③ 所述96孔反应板3排和9排加入洗涂液I; ④ 所述96孔反应板4-5排和10-11排加入洗涂液II; ⑥所述96孔反应板6排和12排加入核酸洗脱液; ⑧所述96孔反应板1排和7排加入全血,运行核酸提取仪,结束后将96孔反应板6排 和12排中的核酸洗脱液转移至新的ΕΡ管内,-20°C保存备用; 其中:所述96孔反应板单孔内的液体总体积小于1.OmL;步骤①中加入的细胞裂解液 为200μk300μL,结合液为50-100μL,无水乙醇的体积为200-400μL;步骤②中加入的 磁珠为20-100μ以且用300-600μL去离子水与其混匀;步骤③与步骤④中加入的洗涂液 I和洗涂液II分别为500μ心700μL;步骤⑥中加入的核酸洗脱液为50-300μL。更为优选 地,细胞裂解液、结合液、无水乙醇的体积比为2:1:3,两种洗涂液与细胞裂解液的体积比均 为3:1,核酸洗脱液与细胞裂解液的体积比为1:4,细胞裂解液与全血的体积比为2:1。因 96孔反应板为8X12孔,当所述96孔反应板使用1排至12排时,使用核酸提取仪最多可一 次性处理16个全血样本。
[0014] 优选地,加入的试剂为:10μL浓度lOmg/mL的蛋白酶Κ,全血100 细胞裂解液 200μ以磁珠20μL和去离子水600μ以结合液100μ以洗涂液I和洗涂液II各600μ以核 酸洗脱液50μL。
[0015] 本发明技术方案中,待提取的全血无需进行预处理,细胞裂解液直接与全血混合 裂解全血中的所有细胞,再利用磁珠法对裂解出的核酸进行纯化。本发明试剂盒可应用于 多个物种全血DNA的提取,包括人类、晒齿类、鸟类等多种生物;提取过程既可W手工完成, 也可W应用于全自动核酸提取仪自动完成;使用本发明试剂盒提取的全血DNA可应用于 PCR扩增、基因突变筛查、基因分型、基因测序等科研或法医鉴定或临床诊断的分析。
[0016] 与传统的全血DNA提取技术相比,本发明技术方案的有益效果为: 1. 无需对全血进行预处理,直接将全血与细胞裂解液混合并裂解全血中的所有细胞, 大大节省了全血基因组DNA提取的时间; 2. 结合液使得磁珠发挥更大的核酸结合能力,尽可能多的吸附血细胞释放的核酸,从 而可获取高浓度的核酸溶液; 3. 使用两种洗涂液可W洗去全血样本中绝大部分的蛋白、酪类、多糖等杂质,最大限度 的减少杂质的污染,从而获得更高纯度的核酸溶液; 4. 使用本发明的技术方案提取全血DNA,可有效的减少提取过程中核酸的损失,大大增 加提取效率,且提取过程中不使用有毒试剂和有机溶剂,可大幅降低对实验人员的身体伤 害; 5. 本发明试剂盒应用于核酸提取仪,可一步完成全血DNA的提取,并可同时进行1-16 个全血样本的DNA提取,实现核酸提取的自动化。
附图说明
[0017] 图1为本发明实施例2中使用方法一提取的人类全血基因组DNA的琼脂糖凝胶电 泳条带; 图2为本发明实施例3中使用方法二提取过程中使用的96孔反应板立体图; 图3为图2所示96孔反应板在方法二提取过程中各排注入试剂的示意图; 图4为本发明实施例3中使用方法二提取的人类全血基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳条 带。
具体实施方式
[0018] W下结合附图通过实施例对本发明做进一步说明,W便更好地理解本发明。
[0019] 实施例1 :全血基因组DNA提取试剂盒中试剂的配制 (1) 细胞裂解液的配制:先在容量瓶中加入少量去离子水,加入浓度为6mol/L的盐酸 脈、加入浓度为lOmmol/L的乙二胺四乙酸、加入浓度为50mmol/L的Ξ径甲基氨基甲烧、加 入浓度为200mmol/L的氯化钢、加入浓度为4% (v/v)的曲拉通X-100,加入去离子水至所需 体积,使用氨氧化钢和盐酸调节抑值,使所述细胞裂解液的抑值为8. 0,高压蒸汽灭菌10 分钟; (2) 结合液的配制:先在容量瓶中加入少量去离子水,加入浓度为50mmol/L的聚乙二 醇-8000,浓度为5mol/L的氯化钢,加入去离子水至所需体积,高压蒸汽灭菌10分钟; (3)洗涂液I的配制:加入浓度为6mol/L的盐酸脈、加入浓度为lOmmol/L的乙二胺四 乙酸、加入浓度为50mmol/L的Ξ径甲基氨基甲烧、加入浓度为200mmol/L的氯化钢,加入去 离子水至所需体积,使用氨氧化钢和盐酸调节抑值,使所述洗涂液I的抑值为8.0,高压蒸 汽灭菌10分钟; (4) 洗涂液II的配制:采用75%乙醇; (5) 核酸洗脱液的配制:加入浓度为8mmol/L的Ξ径甲基氨基甲烧,加入浓度为 1. 3mmol/L的乙二胺四乙酸,加入去离子水至所需体积,高压蒸汽灭菌10分钟; 除上述所配制试剂外,应用本试剂盒还需要蛋白酶K,纳米磁珠及无水乙醇,试剂盒中 配备蛋白酶K及磁珠,蛋白酶K保存于-20°C,其余保存于室溫,有效期为1年。
[0020] 实施例2 :使用方法一应用实施例1中的试剂盒提取人类全血DNA 采取人类全血样本8份,应用的具体操作为: (1) 取2血EP管8只,管中加入抗凝全血100μL,细胞裂解液200μL,lOmg/mL蛋白酶 K10μL56°C水浴解育30分钟; (2) 再加入磁珠20μ^结合液100μL和无水乙醇300μ以结合时间10分钟; (3) 用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体; (4) 加入洗涂液I600μL混匀后,用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体; 妨加入洗涂液II600yL,混匀后,用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体,将 该步骤重复一次; (6) 各管中加入核酸洗脱液100μL并于65°C的水浴锅中洗脱5分钟,磁铁将磁珠吸附 至管壁,将洗脱液转移至新的EP管内,-20°C保存备用。
[0021] 提取完成后进行琼脂糖凝胶电泳检测,步骤如下: (1) 准确称量琼脂糖干粉0. 4g,加至Ξ角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液40ml;在短时间 内,用微波炉加热琼脂糖全部烙化,使溶液冷却至6(TC,加入一滴巧光染料漠化乙锭,轻轻 旋转W充分混匀凝胶溶液,倒入电泳槽中,待其凝固; (2) 室溫下30-45分钟后凝胶完全后,小屯、拔出梳子,5μLMarker加入加样孔内,取洗 脱液样品5μ以加入6X样品缓冲液1μ以混匀后,用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝 胶加样孔内; 做接通电源,90V电压,电泳40-60min即可,根据指示剂电泳带的位置,判断是否终止 电泳,电泳完毕,关上电源。打开凝胶成像系统及电脑上的系统软件,在凝胶成像仪上观察 电泳带及其位置,拍照并存储,并与核酸分子量标准Marker比较核酸的大小。
[0022] 图1显示的是琼脂糖凝胶电泳检测方法一提取的人类全血基因组DNA的电泳图, 图中显示为单一条带,条带清晰,样品孔内无杂质残留。
[0023] 实施例3:使用方法二应用实施例1中的试剂盒提取人类全血DM 采取人类全血样本8份,应用的具体操作为: (1) 96孔反应板1排和7排加入细胞裂解液200μLlOmg/mL蛋白酶K10μL结合液 200μΙ和无水乙醇300μΙ; 似96孔反应板2排和8排加入磁珠20μL和去离子水600μL; (3) 96孔反应板3排和9排加入洗涂液I600μL; (4) 96孔反应板4-5排和10-11排加入洗涂液II600μL; (5) 96孔反应板6排和12排加入核酸洗脱液50μL; (6) 96孔反应板1排和7排加入全血100μ以运行核酸提取仪,结束后将96孔反应板 6排和12排中的核酸洗脱液转移至新的ΕΡ管内,-20°C保存备用。
[0024] 如图2为使用的96孔反应板的立体图,图3为1排至12排均加入试剂后的96孔 反应板侧视示意图,一个96孔反应板最多可一次性处理16个全血样本。
[0025] 提取完成后进行琼脂糖凝胶电泳检测,操作步骤同实施例2,图4显示琼脂糖凝胶 电泳检测方法二提取的人类全血基因组DNA的电泳图,图中显示为单一条带,条带清晰,样 品孔内无杂质残留。
[00%] W下对前述实施例2和实施例3中分别提取到的人类全血基因组DNA进行定量及 纯度检测。
[0027] 取实施例2和实施例3中提取的人类全血基因组DNA洗脱液2μL样本,W实施例 1中的洗脱液为空白,使用化e-Drop0D-1000仪测定样本Α230、Α260及Α280的值,及波长 为230皿、260皿及280皿的吸光光度值,利用比值Α260/Α280及Α260/230评估所提取的核 酸的纯度,利用Α260X50ng/μL计算核酸的浓度,结果如下: 表一:使用方法一和方法二提取得到的人类全血基因组核酸纯度和浓度
Figure CN105368820AD00081
表一的结果说明,采用发明中的试剂盒提取人类全血基因组DNA的浓度和纯度均较 高,其中:1和2项为使用方法一提取的人类全血基因组DNA,其Α260/Α280的值约为1. 67, 说明几乎无蛋白和酪类物质的污染,Α260/230的值大于1.89,说明无盐类、多糖及有机溶 剂的污染,200μL全血提取的核酸的浓度约为78. 8ng/μL;3和4项为使用方法一提取的 人类全血基因组DNA,其Α260/Α280的值为1. 70,说明无蛋白和酪类物质的污染,Α260/230 的值约为1. 98,说明无盐类、多糖及有机溶剂的污染,200μL全血提取的核酸的浓度约为 117. 8ng/μL。结果说明本发明提供的试剂盒能有效的提取人类全血中的基因组DNA,满足 科研及临床检测样本的需求。
[0028] 应理解,上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点,其目的在于供本领域技 术人员了解本发明的内容并据W实施,并非具体实施方式的穷举,并不能W此限制本发明 的保护范围。凡根据本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案 的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (11)

1. 一种基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,所述试剂盒中的试剂包括细胞裂解液、结 合液、洗涤液和核酸洗脱液,其特征在于: 所述细胞裂解液含有盐酸胍、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和曲拉通X-100 ; 所述结合液含有聚乙二醇-8000和氯化钠; 所述洗涤液包括洗涤液I和洗涤液II,其中:所述洗涤液I含有盐酸胍、乙二胺四乙 酸、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和乙醇;所述洗涤液II含有乙醇; 所述核酸洗脱液含有乙二胺四乙酸和三羟甲基氨基甲烷。
2. 根据权利要求1所述的基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:在所述细 胞裂解液中,盐酸胍的浓度为2-10m〇l/L,乙二胺四乙酸的浓度为5-20mmol/L,三羟甲基 氨基甲烷的浓度为20-80mmol/L,氯化钠的浓度为100-500mmol/L,曲拉通X-100的体积 比浓度为1%_5%,余量皆为去离子水;使用氢氧化钠和盐酸调节所述细胞裂解液的pH值为 7. 0~9, 0〇
3. 根据权利要求1所述的基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:在所述结 合液中,聚乙二醇-8000的浓度为40-50mmol/L,氯化钠的浓度为5mol/L。
4. 根据权利要求1所述的基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:在所述 洗涤液I中,盐酸胍的浓度为2-10m〇l/L,乙二胺四乙酸的浓度为5-20mmol/L,三羟甲基 氨基甲烧的浓度为20-80mmol/L,氯化钠的浓度为100-500mmol/L,乙醇的体积比浓度为 50%-70%,余量皆为去离子水;使用氢氧化钠和盐酸调节所述洗涤液I的pH值为7. 0-9. 0。
5. 根据权利要求1所述的基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:在所述洗 涤液II中,乙醇的体积比浓度为50%-100%。
6. 根据权利要求1所述的基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:在 所述核酸洗脱液中,三羟甲基氨基甲烷的浓度为5-15mmol/L,乙二胺四乙酸的浓度为
1. 〇-l. 5mmol/L〇
7. 权利要求1-6任一项所述基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒的应用,其特征在于包 括以下步骤: ① 在EP管中加入抗凝全血、细胞裂解液和蛋白酶K,56°C水浴孵育30分钟; ② 再加入磁珠、结合液和无水乙醇,结合时间10分钟; ③ 使用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去EP管内所有液体; ④ 在EP管中加入洗涤液I,混匀后,使用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体; ⑤ 在EP管中加入洗涤液II,混匀后,使用磁铁将磁珠吸附至管壁,弃去管内所有液体, 该步骤重复一次; ⑥ 在EP管中加入核酸洗脱液,于65 °C水浴下洗脱5分钟,使用磁铁将磁珠吸附至管壁, 将洗脱液转移至新的EP管内,-20°C保存备用; 其中:加入的裂解液与全血的体积比为1:1-1:5 ;加入的磁珠与结合液的体积比为 1:10-1:20,洗涤液I和洗涤液II分别与裂解液的体积比为5:1-10:1,核酸洗脱液与细胞裂 解液的体积比为1:1-1: 5。
8. 根据权利要求7所述的试剂盒的应用,其特征在于:所述EP管容量为2mL,加入的试 剂为:10μL浓度10mg/mL的蛋白酶K,抗凝全血100μL,细胞裂解液200μL,磁珠20μL, 结合液100μL,无水乙醇300μL,洗涤液I和洗涤液II各600μL,核酸洗脱液100μL。
9. 权利要求1-6任一项所述基于磁珠法的全血DNA提取试剂盒的应用,其特征在于包 括以下步骤: ① 96孔反应板1排和7排加入细胞裂解液、蛋白酶K、结合液和无水乙醇; ② 所述96孔反应板2排和8排加入磁珠和去离子水; ③ 所述96孔反应板3排和9排加入洗涤液I; ④ 所述96孔反应板4-5排和10-11排加入洗涤液II; ⑤ 所述96孔反应板6排和12排加入核酸洗脱液; ⑥ 所述96孔反应板1排和7排加入全血,运行核酸提取仪,结束后将96孔反应板6排 和12排中的核酸洗脱液转移至新的EP管内,-20°C保存备用; 其中:所述96孔反应板单孔内的液体总体积小于1.OmL;加入的细胞裂解液为 200μL-300μL,结合液为50-100μL,无水乙醇的体积为200-400μL;加入的磁珠为 20-100μL,且用300-600μL去离子水与其混匀;加入的洗涤液I和洗涤液II分别为 500μL-700μL,核酸洗脱液为 50-300μL。
10. 根据权利要求9所述的试剂盒的应用,其特征在于:加入的试剂为:10μL浓度 10mg/mL的蛋白酶Κ,全血100μL,细胞裂解液200μL,磁珠20μL和去离子水600μL,结合 液100μL,洗涤液I和洗涤液II各600μL,核酸洗脱液50μL。
CN201510970714.XA 2015-12-22 2015-12-22 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用 CN105368820A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510970714.XA CN105368820A (zh) 2015-12-22 2015-12-22 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510970714.XA CN105368820A (zh) 2015-12-22 2015-12-22 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105368820A true CN105368820A (zh) 2016-03-02

Family

ID=55371451

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510970714.XA CN105368820A (zh) 2015-12-22 2015-12-22 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105368820A (zh)

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105648108A (zh) * 2016-04-15 2016-06-08 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 实时荧光定量pcr对川贝母的鉴别方法
CN105754994A (zh) * 2016-04-19 2016-07-13 武汉血液中心 一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组dna的方法
CN106011130A (zh) * 2016-07-29 2016-10-12 淮北师范大学 一种土壤dna提取试剂盒及提取土壤dna的方法
CN106244583A (zh) * 2016-09-23 2016-12-21 广东国盛医学科技股份有限公司 一种磁珠法核酸提取方法
CN106497915A (zh) * 2016-09-23 2017-03-15 广东国盛医学科技股份有限公司 一种磁珠法提取唾液核酸的裂解液
CN106636064A (zh) * 2016-12-09 2017-05-10 洛阳吉恩特生物科技有限公司 一种全血基因组dna高通量板式提取试剂盒及提取方法
CN106834277A (zh) * 2017-02-11 2017-06-13 上海塔歌生物技术有限公司 一种用磁珠法分离游离dna的方法及分离试剂盒
CN106867992A (zh) * 2017-01-11 2017-06-20 上海芯超生物科技有限公司 一种全血dna提取试剂盒及提取方法
CN106967712A (zh) * 2017-05-12 2017-07-21 广州和实生物技术有限公司 粪便dna快速提取试剂盒
CN107254465A (zh) * 2017-07-01 2017-10-17 济凡生物科技(北京)有限公司 一种采用磁性微球分离外周血中游离核酸的试剂盒及方法
CN107779451A (zh) * 2017-11-20 2018-03-09 广州海思医疗科技有限公司 一种人类游离dna提取方法及其试剂盒
CN107988204A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 广州基迪奥生物科技有限公司 一种全血dna快速提取方法
CN108642044A (zh) * 2018-04-28 2018-10-12 广州奕昕生物科技有限公司 用于提取病毒核酸的试剂盒和方法
CN109022420A (zh) * 2018-08-29 2018-12-18 武汉纳磁生物科技有限公司 一种基于磁珠的dna提取方法、裂解液及试剂盒
CN109913445A (zh) * 2019-03-19 2019-06-21 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 一步洗涤磁珠法血液dna提取试剂盒
CN110373450A (zh) * 2019-06-24 2019-10-25 苏州佰然基因科技有限公司 宫颈粘液样本dna无损提取试剂盒及提取方法
CN110904097A (zh) * 2019-12-27 2020-03-24 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 一种用于血液游离dna提取的试剂盒
CN110938624A (zh) * 2019-12-27 2020-03-31 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 一种用于基因组dna提取的试剂盒及其应用
WO2020140975A1 (en) * 2019-01-03 2020-07-09 Hangzhou New Horizon Health Technology Co. Ltd. Compositions and methods for urine sample storage and dna extraction
CN111607590A (zh) * 2020-06-08 2020-09-01 申翌生物科技(杭州)有限公司 适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101613697A (zh) * 2009-08-05 2009-12-30 公安部物证鉴定中心 一种提取纯化dna的方法
CN102888397A (zh) * 2012-09-25 2013-01-23 杭州硕航生物科技有限公司 一种利用磁珠提取全血基因组dna的试剂盒及应用
CN104450684A (zh) * 2014-12-26 2015-03-25 南京中科神光科技有限公司 一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101613697A (zh) * 2009-08-05 2009-12-30 公安部物证鉴定中心 一种提取纯化dna的方法
CN102888397A (zh) * 2012-09-25 2013-01-23 杭州硕航生物科技有限公司 一种利用磁珠提取全血基因组dna的试剂盒及应用
CN104450684A (zh) * 2014-12-26 2015-03-25 南京中科神光科技有限公司 一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法

Cited By (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105648108A (zh) * 2016-04-15 2016-06-08 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 实时荧光定量pcr对川贝母的鉴别方法
CN105754994A (zh) * 2016-04-19 2016-07-13 武汉血液中心 一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组dna的方法
CN106011130A (zh) * 2016-07-29 2016-10-12 淮北师范大学 一种土壤dna提取试剂盒及提取土壤dna的方法
CN106011130B (zh) * 2016-07-29 2019-03-01 淮北师范大学 一种土壤dna提取试剂盒及提取土壤dna的方法
CN106244583A (zh) * 2016-09-23 2016-12-21 广东国盛医学科技股份有限公司 一种磁珠法核酸提取方法
CN106497915A (zh) * 2016-09-23 2017-03-15 广东国盛医学科技股份有限公司 一种磁珠法提取唾液核酸的裂解液
CN106636064A (zh) * 2016-12-09 2017-05-10 洛阳吉恩特生物科技有限公司 一种全血基因组dna高通量板式提取试剂盒及提取方法
CN106867992A (zh) * 2017-01-11 2017-06-20 上海芯超生物科技有限公司 一种全血dna提取试剂盒及提取方法
CN106834277A (zh) * 2017-02-11 2017-06-13 上海塔歌生物技术有限公司 一种用磁珠法分离游离dna的方法及分离试剂盒
CN106967712A (zh) * 2017-05-12 2017-07-21 广州和实生物技术有限公司 粪便dna快速提取试剂盒
CN106967712B (zh) * 2017-05-12 2020-08-07 广州和实生物技术有限公司 粪便dna快速提取试剂盒
CN107254465A (zh) * 2017-07-01 2017-10-17 济凡生物科技(北京)有限公司 一种采用磁性微球分离外周血中游离核酸的试剂盒及方法
CN107254465B (zh) * 2017-07-01 2020-10-09 济凡生物科技(北京)有限公司 一种采用磁性微球分离外周血中游离核酸的试剂盒及方法
CN107779451A (zh) * 2017-11-20 2018-03-09 广州海思医疗科技有限公司 一种人类游离dna提取方法及其试剂盒
CN107988204A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 广州基迪奥生物科技有限公司 一种全血dna快速提取方法
CN108642044A (zh) * 2018-04-28 2018-10-12 广州奕昕生物科技有限公司 用于提取病毒核酸的试剂盒和方法
CN109022420A (zh) * 2018-08-29 2018-12-18 武汉纳磁生物科技有限公司 一种基于磁珠的dna提取方法、裂解液及试剂盒
WO2020140975A1 (en) * 2019-01-03 2020-07-09 Hangzhou New Horizon Health Technology Co. Ltd. Compositions and methods for urine sample storage and dna extraction
CN109913445A (zh) * 2019-03-19 2019-06-21 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 一步洗涤磁珠法血液dna提取试剂盒
CN110373450A (zh) * 2019-06-24 2019-10-25 苏州佰然基因科技有限公司 宫颈粘液样本dna无损提取试剂盒及提取方法
CN110373450B (zh) * 2019-06-24 2020-06-09 苏州佰然基因科技有限公司 宫颈粘液样本dna无损提取试剂盒及提取方法
CN110938624A (zh) * 2019-12-27 2020-03-31 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 一种用于基因组dna提取的试剂盒及其应用
CN110904097A (zh) * 2019-12-27 2020-03-24 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 一种用于血液游离dna提取的试剂盒
CN111607590A (zh) * 2020-06-08 2020-09-01 申翌生物科技(杭州)有限公司 适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10711315B2 (en) Method for producing RNA
US9624252B2 (en) Selective nucleic acid fragment recovery
Thatcher DNA/RNA preparation for molecular detection
JP5937013B2 (ja) 細胞の選択的溶解
Wilfinger et al. Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity
CA2260940C (en) Methods for isolating nucleic acids using alkaline protease
US5989431A (en) Method and apparatus for DNA extraction
US20170369930A1 (en) Method for identifying pathogens of bacterial infectious diseases by using bacteria-derived nanovesicles
US6673631B1 (en) Simultaneous isolation and quantitation of DNA
US10829797B2 (en) Method for determining antimicrobial susceptibility of a microorganism
Wang et al. Past, present and future applications of flow cytometry in aquatic microbiology
CN105400868B (zh) 使用miRNA检测体内细胞死亡情况的方法
DK2539449T3 (en) Procedure for parallel isolation and cleaning rna and dna
AU2019204844A1 (en) Methods and kits for detecting cell-free pathogen-specific nucleic acids
US10655188B2 (en) Method for determining the identity and antimicrobial susceptibility of a microorganism
US8852929B2 (en) Plasmid DNA isolation
CN101115833B (zh) 分离核酸的方法,该核酸在提高的温度下固定于基质上
CN103993007B (zh) 一种从土壤样品中高效提取dna的简易方法
US9416356B2 (en) Compositions and methods for nucleic acid extraction
Sanders et al. Laser microdissection separation of pure spermatozoa from epithelial cells for short tandem repeat analysis
US8530228B2 (en) Integrated versatile and systems preparation of specimens
ES2372538T3 (es) Procedimiento para mejorar la permeabilidad celular a partículas foráneas.
RU2557311C2 (ru) Автоматическая система для лизиса микроорганизмов, имеющихся в пробе, для извлечения и очистки нуклеиновых кислот указанных микроорганизмов с целью анализа
EP0188450B1 (en) Methods for the in vitro detection and identification of unknown pathogens or genetic entities
US7498133B2 (en) FTA-coated media for use as a molecular diagnostic tool

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160302