CN106243181A - 一种从苦瓜中提取雷公藤红素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从苦瓜中提取雷公藤红素的方法,属于植物活性成分提取技术领域。本发明所提供的方法是将苦瓜粉碎后利用乙醇进行回流提取获得浓缩液,将浓缩液与硅胶进行混合拌匀后获得颗粒原料,再向利用二氯甲烷‑甲醇溶液制备好的分离柱中加入颗粒原料,再利用洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液,脱水减压浓缩后洗涤干燥获得雷公藤红素。利用本发明所提供的方法可高效地从苦瓜中提取雷公藤红素,且获得产物的纯度很高,可达到98%以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种从苦瓜中提取雷公藤红素的方法,属于植物活性成分提取技术领域。
背景技术
雷公藤红素分子式为C29H38O4,又名南蛇藤素,是一种从卫矛科雷公藤属及南蛇藤属植物中分离出的活性较高的五环三萜类物质,其具有很强的抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等药理活性。自中美科学家发现雷公藤红素的抗肿瘤新机制以来,引发了雷公藤红素的抗癌活性研究热潮。
目前,世界上雷公藤红素主要是从卫矛科植物中提取。雷公藤红素在植物中的含量很低,基本上在0.001%左右,因此往往需要繁琐的提取过程。因此选择合适的原料,摸索合适的方法,对雷公藤红素工业制备意义重大。
发明内容
为解决雷公藤红素提取方法复杂和原材料范围局限的问题,本发明提供了一种从苦瓜中提取雷公藤红素的方法,采取的技术方案如下:
本发明的目的在于提供一种从苦瓜中提取雷公藤红素的方法,该方法是将苦瓜粉碎后利用乙醇进行回流提取获得浓缩液,将浓缩液与硅胶进行混合拌匀后获得颗粒原料,再向利用二氯甲烷-甲醇溶液制备好的分离柱中加入颗粒原料,再利用洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液,脱水减压浓缩后洗涤获得雷公藤红素。
所述方法的步骤如下:
1)将苦瓜粉碎成2~5mm的小段;
2)利用乙醇对步骤1)所得的苦瓜小段进行回流提取后获得浓缩液;
3)将步骤2)所得的浓缩液与60-80目硅胶按1:1的体积比混合拌匀后干燥,获得颗粒原料;
4)利用二氯甲烷-甲醇溶液平衡制备的200~300目硅胶分离柱后,将步骤3)所得的颗粒原料加入到分离柱中,加入洗脱剂进行洗脱;
5)收集步骤4)所得洗脱液,脱去洗脱剂水分后减压回收洗脱剂,再利用甲醇或无水乙醇洗涤后获得雷公藤红素。
优选地,步骤2)所述乙醇,为90~100%的乙醇。
优选地,步骤2)所述回流提取,是将苦瓜和乙醇按照苦瓜质量(Kg):乙醇体积(L)=1:10~30进行混合后,在60~80℃下提取5~10h。
优选地,步骤4)所述二氯甲烷-甲醇溶液,二氯甲烷与甲醇的体积比为25~15:1。
优选地,步骤4)所述将颗粒原料加入到分离柱中,是按照质量比为颗粒原料:硅胶=1:2~4。
优选地,步骤4)所述洗脱剂为二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的混合液,其中二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比二氯甲烷-甲醇:氨水=100:0.1~0.5的比例混合。
更优选地,所述二氯甲烷-甲醇溶液,体积比为二氯甲烷:甲醇=20~5:1。
所述方法的具体步骤如下:
1)将苦瓜粉碎成2~5mm的小段;
2)利用90~100%的乙醇对步骤1)所得的苦瓜小段按照苦瓜质量(Kg):乙醇体积(L)=1:10~30进行混合后在60~80℃下回流提取5~10h,提取后获得浓缩液;
3)将步骤2)所得的浓缩液与60-80目硅胶按照1:1的体积比混合拌匀后干燥,获得颗粒原料;
4)利用按照体积比为二氯甲烷:甲醇=25~15:1混合获得的二氯甲烷-甲醇溶液平衡制备的200~300目硅胶分离柱后,将步骤3)所得的颗粒原料按照质量比为颗粒原料:硅胶=1:2~4加入到分离柱中,加入二氯甲烷-甲醇与氨水的混合液作为洗脱剂进行洗脱;所述二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的混合液中二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比二氯甲烷-甲醇:氨水=100:0.1~0.5;
5)收集步骤4)所得洗脱液,加入无水硫酸钠脱去水分后在40~60℃下减压回收洗脱剂获得雷公藤红素纯品,再用甲醇或无水乙醇洗涤后获得雷公藤红素纯品。
以上所述任一方法在制备含有雷公藤红素的药品中的应用。
本发明获得的有益效果:
使用苦瓜为原料,降低成本原料易得;采用高浓度乙醇提取,目标成分提取彻底,而大极性及水溶性杂质较少,简化了纯化步骤;硅胶柱纯化步骤采用碱性二氯甲烷-甲醇体系作为洗脱剂,是产品色带集中,一步洗脱可得到纯品的雷公藤红素。综上,本发明具有工艺简单、高效、环保、收率高、产量大的有点,适合工业化生产。
附图说明
图1为雷公藤标准品的液相色谱图。
图2为实施例1提取的雷公藤样品的液相色谱图。
图3为实施例2提取的雷公藤样品的液相色谱图。
图4为实施例3提取的雷公藤样品的液相色谱图。
图5为实施例4提取的雷公藤样品的液相色谱图。
图6为实施例6提取的雷公藤样品的液相色谱图。
图7为实施例7提取的雷公藤样品的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明,但本发明不受实施例的限制。
以下实施例所用材料、试剂、仪器和方法,未经特殊说明,均为本领域常规材料、试剂、仪器和方法,本领域技术人员均可通过商业渠道获得。
实施例1
本实施例按以下步骤制备雷公藤红素单体:
1)备料:将苦瓜粉碎成2~5mm的段。
2)用浓度为90%的乙醇对粉碎好的苦瓜段进行回流提取,苦瓜的质量(kg)与乙醇的体积(L)的比例为1:10,提取温度为60℃,提取时间为5h;提取液于60℃减压回收乙醇,得浓缩液。
3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60~80目硅胶按1:1拌样,干燥成分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
4)将200~300目硅胶置于体积比为25:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离株直径为15cm,用体积比为25:1的二氯甲烷-甲醇溶液分离平衡柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:2的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液于氨水的体积比例为100:0.1,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于40℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分析液相检测,其纯度为98.6%。色谱柱填料为C18,粒度5μm,流动相为含1%醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。本实施实例的雷公藤红素的液相色谱图如图2所示,图形中杂波很少,最高峰在12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的单一峰,表明本实施案例的雷公藤红素纯度很高。
实施例2
本实施例按以下步骤制备雷公藤红素单体:
1)备料:将苦瓜粉碎成2~5mm的段。
2)用浓度为92%的乙醇对粉碎好的苦瓜段进行回流提取,苦瓜的质量(kg)与乙醇的体积(L)的比例为1:15,提取温度为65℃,提取时间为6h;提取液于62℃减压回收乙醇,得浓缩液。
3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60~80目硅胶按1:1拌样,干燥成分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
4)将200~300目硅胶置于体积比为22:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离株直径为18cm,用体积比为22:1的二氯甲烷-甲醇溶液分离平衡柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:3的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液于氨水的体积比例为100:0.2,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于45℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分析液相检测,其纯度为98.5%。色谱柱填料为C18,粒度5μm,流动相为含1%醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。本实施实例的雷公藤红素的液相色谱图如图3所示,图形中杂波很少,最高峰在12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的单一峰,表明本实施案例的雷公藤红素纯度很高。
实施例3
本实施例按以下步骤制备雷公藤红素单体:
1)备料:将苦瓜粉碎成2~5mm的段。
2)用浓度为95%的乙醇对粉碎好的苦瓜段进行回流提取,苦瓜的质量(kg)与乙醇的体积(L)的比例为1:20,提取温度为70℃,提取时间为7h;提取液于65℃减压回收乙醇,得浓缩液。
3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60~80目硅胶按1:1拌样,干燥成分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
4)将200~300目硅胶置于体积比为20:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离株直径为20cm,用体积比为20:1的二氯甲烷-甲醇溶液分离平衡柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:3的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液于氨水的体积比例为100:0.3,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于50℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分析液相检测,其纯度为98.9%。色谱柱填料为C18,粒度5μm,流动相为含1%醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。本实施实例的雷公藤红素的液相色谱图如图4所示,图形中杂波很少,最高峰在12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的单一峰,表明本实施案例的雷公藤红素纯度很高。
实施例4
本实施例按以下步骤制备雷公藤红素单体:
1)备料:将苦瓜粉碎成2~5mm的段。
2)用浓度为98%的乙醇对粉碎好的苦瓜段进行回流提取,苦瓜的质量(kg)与乙醇的体积(L)的比例为1:25,提取温度为75℃,提取时间为8h;提取液于68℃减压回收乙醇,得浓缩液。
3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60~80目硅胶按1:1拌样,干燥成分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
4)将200~300目硅胶置于体积比为18:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离株直径为22cm,用体积比为18:1的二氯甲烷-甲醇溶液分离平衡柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:4的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为18:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液于氨水的体积比例为100:0.4,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于55℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分析液相检测,其纯度为98.4%。色谱柱填料为C18,粒度5μm,流动相为含1%醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。本实施实例的雷公藤红素的液相色谱图如图5所示,图形中杂波很少,最高峰在12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的单一峰,表明本实施案例的雷公藤红素纯度很高。
实施例5
本实施例按以下步骤制备雷公藤红素单体:
1)备料:将苦瓜粉碎成2~5mm的段。
2)用浓度为100%的乙醇对粉碎好的苦瓜段进行回流提取,苦瓜的质量(kg)与乙醇的体积(L)的比例为1:30,提取温度为80℃,提取时间为10h;提取液于70℃减压回收乙醇,得浓缩液。
3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60~80目硅胶按1:1拌样,干燥成分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
4)将200~300目硅胶置于体积比为15:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离株直径为25cm,用体积比为15:1的二氯甲烷-甲醇溶液分离平衡柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:2的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为15:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液于氨水的体积比例为100:0.5,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于60℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分析液相检测,其纯度为98.3%。色谱柱填料为C18,粒度5μm,流动相为含1%醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。本实施实例的雷公藤红素的液相色谱图如图6所示,图形中杂波很少,最高峰在12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的单一峰,表明本实施案例的雷公藤红素纯度很高。
实施例6
本实施例按以下步骤制备雷公藤红素单体:
5)备料:将苦瓜粉碎成2~5mm的段。
6)用浓度为100%的乙醇对粉碎好的苦瓜段进行回流提取,苦瓜的质量(kg)与乙醇的体积(L)的比例为1:9,提取温度为80℃,提取时间为10h;提取液于70℃减压回收乙醇,得浓缩液。
7)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60~80目硅胶按1:1拌样,干燥成分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
8)将200~300目硅胶置于体积比为15:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离株直径为25cm,用体积比为15:1的二氯甲烷-甲醇溶液分离平衡柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:2的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为15:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液于氨水的体积比例为100:0.5,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于60℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分析液相检测,其纯度为64.1%。色谱柱填料为C18,粒度5μm,流动相为含1%醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。本实施实例的雷公藤红素的液相色谱图如图7所示,图形中杂波很多,在13.008分钟没有尖峰,且为峰型不单一,杂峰多,表明本实施案例的雷公藤红素没有被提取出来。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可以做各种改动和修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种从苦瓜中提取雷公藤红素的方法,其特征在于,是将苦瓜粉碎后利用乙醇进行回流提取获得浓缩液,将浓缩液与硅胶进行混合拌匀后获得颗粒原料,再向利用二氯甲烷-甲醇溶液制备好的分离柱中加入颗粒原料,再利用洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液,脱水减压浓缩后洗涤获得雷公藤红素。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤如下:
1)将苦瓜粉碎成2~5mm的小段;
2)利用乙醇对步骤1)所得的苦瓜小段进行回流提取后获得浓缩液;
3)将步骤2)所得的浓缩液与60-80目硅胶按体积的比例1:1的比例混合拌匀后干燥,获得颗粒原料;
4)利用二氯甲烷-甲醇溶液平衡制备的200~300目硅胶分离柱后,将步骤3)所得的颗粒原料加入到分离柱中,加入洗脱剂进行洗脱;
5)收集步骤4)所得洗脱液,脱去洗脱剂水分后减压回收洗脱剂,再利用甲醇或无水乙醇洗涤后获得雷公藤红素。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)所述乙醇,为90~100%的乙醇。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)所述回流提取,是将苦瓜和乙醇按照苦瓜质量(Kg):乙醇体积(L)=1:10~30进行混合后,在60~80℃下提取5~10h。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)所述二氯甲烷-甲醇溶液,二氯甲烷与甲醇的体积比为25~15:1。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)所述将颗粒原料加入到分离柱中,是按照质量比为颗粒原料:硅胶=1:2~4。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)所述洗脱剂为二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的混合液,其中二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比二氯甲烷-甲醇:氨水=100:0.1~0.5的比例混合。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述二氯甲烷-甲醇溶液,体积比为二氯甲烷:甲醇=20~5:1。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,具体步骤如下:
1)将苦瓜粉碎成2~5mm的小段;
2)利用90~100%的乙醇对步骤1)所得的苦瓜小段按照苦瓜质量(Kg):乙醇体积(L)=1:10~30进行混合后在60~80℃下回流提取5~10h,提取后获得浓缩液;
3)将步骤2)所得的浓缩液与60-80目硅胶按照1:1的体积比混合拌匀后干燥,获得颗粒原料;
4)利用按照体积比为二氯甲烷:甲醇=25~15:1混合获得的二氯甲烷-甲醇溶液平衡制备的200~300目硅胶分离柱后,将步骤3)所得的颗粒原料按照质量比为颗粒原料:硅胶=1:2~4加入到分离柱中,加入二氯甲烷-甲醇与氨水的混合液作为洗脱剂进行洗脱;所述二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的混合液中二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比二氯甲烷-甲醇:氨水=100:0.1~0.5;
5)收集步骤4)所得洗脱液,加入无水硫酸钠脱去水分后在40~60℃下减压回收洗脱剂获得雷公藤红素纯品,再用甲醇或无水乙醇洗涤后获得雷公藤红素纯品。
10.权利要求1-9所述任一方法在制备含有雷公藤红素的药品中的应用。
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