CN105061455B - 一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法，所述方法包括：采用正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比(6.5‑7.5)：(2.5‑3.5)：(6.5‑8.5)：(1.5‑3.5)进行混合后，静置使分层为上相和下相；采用适量的所述上相溶解藤黄的乙醇粗提物，得到样品溶液；以含有三氟乙酸的上相为固定相，以含有三乙胺的下相为流动相，采用高速逆流色谱仪进行分离，紫外检测器进行监测，分别收集目标流分，然后进行浓缩、干燥。本发明实现了对藤黄酸和新藤黄酸的同时大量分离纯化，且纯度均高于95％，解决了藤黄酸与新藤黄酸的同时分离难题。

Description

一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法
技术领域
本发明涉及一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法，属于天然产品分离提纯技术领域。
背景技术
藤黄酸(Gambogic acid，CAS#：2752-65-0)，分子式为C38H44O8，分子量为628.75；新藤黄酸(Gambogenic acid)，分子式为C38H46O8，分子量为630，它们都是从藤黄科藤黄属植物藤黄(Garcinia hanburyi Hook f.)树干割伤后所分泌的树脂中提取出来的主要活性成分。研究表明：藤黄酸对多种肿瘤显示较强的抗肿瘤活性，并在有效剂量范围内毒副作用比较小，对肿瘤细胞的抑制有非常高的选择性，能选择性地杀死癌细胞，而对正常动物造血系统和免疫功能没有影响；新藤黄酸对S180、ARS腹水癌、Lewis肺癌、白血病等实体癌具有较好的抑制作用。
但由于藤黄酸(Gambogic acid，CAS#：2752-65-0)和新藤黄酸(Gambogenic acid)两者的结构非常相似，极性、溶解度等理化性质也非常接近，因此给两者的分离提纯带来了很大困难。传统的分离提纯方法，如：柱色谱法和HPLC法，制备量小，难以实现大量分离纯化，实际应用价值小。目前，对藤黄酸、新藤黄酸的大量分离方法已有相关报道，如：陈葆仁提出的形成藤黄酸吡啶盐的方法分离藤黄酸(陈葆仁，藤黄抗癌成分的研究，江西医学院学报，1980，(2)：1-7)，但该方法不仅操作繁琐，不环保，尤其是仅能分离出藤黄酸一种有效成分，对其余活性成分造成浪费；而CN201010111243.4中公开的一种采用超临界流体提取中药藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的方法，虽然可以使提取物中的藤黄酸和新藤黄酸的含量有明显提高，但仍然未能将两者实现高纯度分离，并且该方法需严格调控釜内压力，也很难适应工业化生产需求；另外，虽然CN201510077377.1中公开的一种将藤黄粉碎微波提取后经模拟移动床色谱分离，可得到纯度95％以上的藤黄酸，但仍然不能同时实现高纯度新藤黄酸的分离，只能同时得到纯度10％～20％的藤黄酸与纯度30％～50％的新藤黄酸的混合物。综上所述可见：至今未见一种操作简单、可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法，以致影响了藤黄酸和新藤黄酸的药用价值的开发利用。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法，以促进藤黄酸和新藤黄酸的药用价值的开发利用。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法，包括如下步骤：
a)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比(6.5-7.5)：(2.5-3.5)：(6.5-8.5)：(1.5-3.5)进行混合后，静置使分层为上相和下相；
b)采用适量的所述上相溶解藤黄的乙醇粗提物，得到样品溶液；
c)以含有三氟乙酸的上相为固定相，以含有三乙胺的下相为流动相，采用高速逆流色谱仪进行分离，紫外检测器进行监测，分别收集目标流分；
d)对所收集的目标流分分别进行浓缩、干燥，即得到被分离纯化的藤黄酸、新藤黄酸。
作为优选方案，所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比7：3：8：2或依次按体积比7：3：7：3进行混合。
作为优选方案，所述藤黄的乙醇粗提物是由体积分数≥75％的乙醇水溶液对藤黄进行冷浸提取制得。
作为进一步优选方案，所述的冷浸提取是由体积分数≥95％的乙醇水溶液对藤黄进行冷浸提取制得。
作为优选方案，所述固定相中所含的三氟乙酸的体积分数为0.05％～0.15％。
作为优选方案，所述流动相中所含的三乙胺的体积分数为0.02％～0.04％。
作为优选方案，采用高速逆流色谱仪进行分离时，流动相的流速为2～6mL/分钟。
作为优选方案，紫外检测器进行监测的波长为360nm，分别收集保留时间为140～485分钟的流分及保留时间为80～130分钟的流分。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明通过采用特定的溶剂体系实现了高速逆流色谱法(HSCCC)对藤黄酸和新藤黄酸的同时大量分离纯化，可分别得到纯度均高于95％的高纯度藤黄酸和新藤黄酸，解决了藤黄酸与新藤黄酸的同时分离难题，对藤黄酸和新藤黄酸的药用价值的开发利用具有明显促进作用；另外，本发明方法还具有如下优点：
A、无固相载体，避免了有效成分不可逆吸附和峰形拖尾等缺点；
B、有机溶剂消耗少，无损失、高效、快速；
C、进样量较大，最多可达几克，是HPLC的104～105倍；
D、与常压和低压色谱相比，分离能力强且分离时间短。
综上所述可见：本发明相对于现有技术具有显著性进步。
附图说明
图1为本发明实施例1中的高速逆流色谱分离图谱；
图2为本发明实施例1中分离出的藤黄酸与新藤黄酸的UPLC分析图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明技术方案做进一步详细、完整地说明。
本发明分离得到的藤黄酸和新藤黄酸的纯度是采用UPLC检测分析，具体检测分析条件为：
Waters Acquity UPLC BEH Shield RP C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；
柱温：40℃；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B是体积分数为0.1％的甲酸水溶液；
梯度洗脱程序为：0～5min，70％A；5～20min，70％～100％A；
流速：0.2mL/min；
检测波长：360nm。
实施例1
(1)制备藤黄的乙醇粗提物：称取2Kg藤黄的干燥粉末，加入藤黄粉末2倍重量的体积分数为95％的乙醇水溶液进行冷浸提取，每次冷浸12小时，重复冷浸提取5次，合并浸提液，对合并的浸提液进行过滤，滤液减压浓缩至无乙醇，得到稠浸膏，然后对稠浸膏进行冷冻干燥，即得到藤黄的乙醇粗提物1.428Kg，产率为71.4％；
(2)分离藤黄酸和新藤黄酸：
a)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比7：3：8：2进行混合后，静置使分层上相和下相；
b)采用30mL所述上相溶解3.157g藤黄的乙醇粗提物，得到样品溶液；
c)以含有体积分数为0.1％的三氟乙酸的上相为固定相，以含有体积分数为0.03％的三乙胺的下相为流动相，采用高速逆流色谱仪进行分离：流动相的流速为6mL/分钟，紫外检测器在360nm波长下进行监测，分别收集保留时间为156～228min的藤黄酸流分和保留时间为90～114min的新藤黄酸流分；
d)对所收集的藤黄酸流分和新藤黄酸流分分别进行浓缩、干燥，即得到被分离纯化的藤黄酸1.134g(产率为35.9％)、新藤黄酸180mg(产率为5.7％)；
经UPLC检测分析：所得藤黄酸的纯度为98％，新藤黄酸的纯度为96％。
图1为本实施例所获得的高速逆流色谱分离图谱；由图1可见：采用实施例1所述分离条件，能使藤黄酸与新藤黄酸很好地分开，通过分别收集保留时间为156～228min的流分及保留时间为90～114min的流分，可基本无损失得到高纯度的藤黄酸和新藤黄酸；
图2为本实施例分离出的藤黄酸与新藤黄酸的UPLC分析图谱；由图2可见：采用本发明的分离方法，可分离得到高纯度的藤黄酸和新藤黄酸，并且峰型很好，没有拖尾现象。
实施例2
(1)制备藤黄的乙醇粗提物：同实施例1中所述；
(2)分离藤黄酸和新藤黄酸：
a)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比7：3：8：2进行混合后，静置使分层上相和下相；
b)采用8mL所述上相溶解1.0g藤黄的乙醇粗提物，得到样品溶液；
c)以含有体积分数为0.1％的三氟乙酸的上相为固定相，以含有体积分数为0.0375％的三乙胺的下相为流动相，采用高速逆流色谱仪进行分离：流动相的流速为2mL/分钟，紫外检测器在360nm波长下进行监测，分别收集保留时间为145～181min的藤黄酸流分和保留时间为85～93min的新藤黄酸流分；
d)对所收集的藤黄酸流分和新藤黄酸流分分别进行浓缩、干燥，即得到被分离纯化的藤黄酸365mg(产率为36.5％)、新藤黄酸37mg(产率为3.7％)；
经UPLC检测分析：所得藤黄酸的纯度为98％，新藤黄酸的纯度为95％。
实施例3
(1)制备藤黄的乙醇粗提物：同实施例1中所述；
(2)分离藤黄酸和新藤黄酸：
a)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比7：3：7：3进行混合后，静置使分层上相和下相；
b)采用8mL所述上相溶解1.0g藤黄的乙醇粗提物，得到样品溶液；
c)以含有体积分数为0.1％的三氟乙酸的上相为固定相，以含有体积分数为0.0375％的三乙胺的下相为流动相，采用高速逆流色谱仪进行分离：流动相的流速为2mL/分钟，紫外检测器在360nm波长下进行监测，分别收集保留时间为302～482min的藤黄酸流分和保留时间为114～130min的新藤黄酸流分；
d)对所收集的藤黄酸流分和新藤黄酸流分分别进行浓缩、干燥，即得到被分离纯化的藤黄酸413mg(产率为41.3％)、新藤黄酸41mg(产率为4.1％)；
经UPLC检测分析：所得藤黄酸的纯度为97％，新藤黄酸的纯度为95％。
最后有必要在此说明的是：以上仅为本发明的部分优选实施例，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种可同时大量分离高纯度藤黄酸和新藤黄酸的方法，其特征在于，所分离的新藤黄酸为英文名称为Gambogenic acid，分子式为C38H46O8的化合物，包括如下步骤：
a)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比(6.5-7.5)：(2.5-3.5)：(6.5-8.5)：(1.5-3.5)进行混合后，静置使分层为上相和下相；
b)采用适量的所述上相溶解藤黄的乙醇粗提物，得到样品溶液；
c)以含有三氟乙酸的上相为固定相，以含有三乙胺的下相为流动相，采用高速逆流色谱仪进行分离，紫外检测器进行监测，分别收集目标流分；
d)对所收集的目标流分分别进行浓缩、干燥，即得到被分离纯化的藤黄酸、新藤黄酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水依次按体积比7：3：8：2或依次按体积比7：3：7：3进行混合。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述藤黄的乙醇粗提物是由体积分数≥75％的乙醇水溶液对藤黄进行冷浸提取制得。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的冷浸提取是由体积分数≥95％的乙醇水溶液对藤黄进行冷浸提取制得。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固定相中所含的三氟乙酸的体积分数为0.05％～0.15％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述流动相中所含的三乙胺的体积分数为0.02％～0.04％。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：采用高速逆流色谱仪进行分离时，流动相的流速为2～6mL/分钟。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：紫外检测器进行监测的波长为360nm，分别收集保留时间为140～485分钟的流分及保留时间为80～130分钟的流分。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
pH区带逆流色谱研究进展;龚燕 等;《分析化学》;20040425;第32卷(第4期);第529-533页，第529-530页第1-3节 *
Preparative separation of gambogic acid and its C-2 epimer using recycling high-speed counter-current chromatography;Quan Bin Han et al.;《Journal of Chromatography A》;20060802;第1127卷(第1-2期);第298-301页，第298页摘要，第299页Fig.1 *
高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展;李爱峰 等;《理化检验（化学分册）》;20080531;第44卷(第5期);第481-487、489页，第482-483页第2.1节，表1 *
高速逆流色谱研究进展;戴德舜 等;《分析化学》;20010531;第29卷(第5期);第586-591页，第2.2节，第4.2节 *

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