CN104788527A - 一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法 - Google Patents

一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，该方法包括以下步骤：1)超声强化提取：提取液为体积比为1：0.01～0.5：0.5～2.0的乙醇、水和咪唑类离子液体Ⅰ混合液，超声处理；2)有机溶剂萃取：按提取液、水与C1～C3的卤代烷烃的体积比1～5：1～3：1萃取，有机相减压浓缩至近干得雷公藤红色浸膏；3)柱层析净化：上述红色浸膏与硅胶充分混合后装柱，经石油醚淋洗，以及石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱挥干后得雷公藤红素粗品；4)HSCCC分离纯化；5)真空冷冻干燥。该方法大大减少了有机溶剂的使用，显著降低了提取过程中的污染和危害，改善了提取效果和效率。

Description

一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法
技术领域
本发明涉及制药工程技术领域，尤其涉及一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法。
背景技术
雷公藤又叫黄藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)为卫矛科雷公藤属植物，临床上广泛用于治疗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病，其见效快、疗效确切，几乎没有可以完全替代的类似中药。雷公藤红素是雷公藤植株内产生的具有较高生理活性的天然化学物，因其具有特殊的化学结构及作用机制，特别是在临床上对自身免疫性疾病(如红斑狼疮、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎和过敏性紫癜等)有独特疗效，药理研究证明其具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤和抗艾滋病等作用。因此，开展雷公藤中有效成分(如雷公藤红素)的分离提纯技术研究对未来新药的研发具有深远的影响。雷公藤红素结构式如下：
目前，从含雷公藤红素的植物原料中提取雷公藤红素主要采用挥发性有机溶剂进行提取，采用液/液萃取结合硅胶柱层析或液/液萃取结合高速逆流色谱法(HSCCC)。如专利申请号为201210230388.5(公开号为103524591A)的中国发明专利“一种雷公藤有效成分的制备方法”提供了一种硅胶柱层析法从雷公藤根中分离制备雷公藤甲素的方法。该专利以雷公藤根为原料，采用聚合物-无机盐水溶液和乙醇形成的双水相体系提取，然后用水不溶性有机溶剂反萃取，然后结合HSCCC法精制雷公藤红素。专利申请号为201310574275.1(公告号为103570795A)的中国发明专利《一种雷公藤红素的制备方法》，该发明专利将新鲜南蛇藤根干燥粉碎，采用正己烷溶液浸泡，获得的正己烷浸膏经两次柱层析分离净化后得雷公藤红素。专利申请号为201310027337.7(公告号为103087142A)的中国发明专利《一种提取雷公藤红素的方法》，该发明专利将含有雷公藤红素的植物原料采用甲醇或乙醇浸泡，得到含量不低于0.005％(W/W)的雷公藤红素醇提液，再用C1～C5的卤代烷烃萃取，并将萃取液浓缩并用硅胶柱分离后得雷公藤红素。这些方法获得的雷公藤红素纯度均可达到95％以上，但是在提取和分离制备中均使用了大量的有机溶剂，存在着有机溶剂的安全和污染问题。
离子液体的独特性能在化学领域得到广泛的关注，目前已在天然产物的提取分离中得到成功应用，如专利号为ZL200810114416.0(授权公告号为CN 101597296 B)的中国发明专利《一种离子液体高效提取生产青蒿素的新方法》利用咪唑类离子液体卤化物盐与水的混合物超声强化提取青蒿原料中的青蒿素。目前关于利用离子液体从雷公藤根、茎、叶中提取雷公藤红素的方法还未见报道，因此，开展雷公藤红素的离子液体提取研究，对解决当前提取分离制备过程中大量使用有机试剂造成的安全隐患具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术而提供一种安全、有效地利用离子液体提取雷公藤红素的方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)超声强化提取：含雷公藤红素的植物原料经干燥粉碎后过40～80目筛，按固液比1：5～100加入体积比为1：0.01～0.5：0.5～2.0的乙醇、水和咪唑类离子液体Ⅰ混合液，于超声功率密度10～200W/cm2及超声频率10～100kHz下，20～65℃条件下超声提取5～90min，固液分离后得含雷公藤红素的提取液；
2)有机溶剂萃取：将C1～C3的卤代烷烃和一定量的水加入到所述步骤1)得到的提取液中，按提取液、水与C1～C3的卤代烷烃的体积比1～5：1～3：1，萃取1～5次。分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在40～60℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液主要成份为上述咪唑类离子液体Ⅰ；
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏与硅胶(200～300目)按重量比1：10～100进行充分混合，然后装入一支底部具有筛板的玻璃层析柱中，先用适量石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在40～60℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：选择HSCCC溶剂体系，按体积/重量比0.2～2：1(mL/mg)将HSCCC溶剂体系和上述雷公藤红素粗品加入到分液漏斗中，震荡、静置分层，平衡后，将上、下相分开，以溶剂体系的上相为固定相，溶剂体系的下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，根据检测器的谱图分步收集目标物，分别获得雷公藤红素的溶液；
5)真空冷冻干燥：将上述各雷公藤红素溶液，在适当温度、干燥压力下真空冷冻干燥，回收有机萃取剂，分别得到纯度大于95％的雷公藤红素。
作为优选，所述咪唑类离子液体Ⅰ为1-乙基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑溴盐、1-丁基-3-甲基咪唑溴盐、1-辛基-3-甲基咪唑氯盐、1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐中的至少一种。
作为优选，所述步骤1)中乙醇、水和咪唑类离子液体Ⅰ混合液的体积比为1：0.05：1。
作为优选，所述HSCCC溶剂体系为体积比为2：3：3：2∶0.05的正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水-离子液体Ⅱ配制的HSCCC溶剂体系、体积比为2：3：3：4∶0.05的甲基叔丁基醚-正丁醇-乙醇-水-离子液体Ⅱ配制的HSCCC溶剂体系或者体积比为1：2：2：1∶0.05正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水-离子液体Ⅱ配制的HSCCC溶剂体系中的任意一种。
作为优选，所述咪唑类离子液体Ⅱ为1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-烯丙基-3-甲基咪唑溴盐中的至少一种。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明采用按一定比例混合而成的乙醇、水和咪唑类离子液体Ⅰ混合液作为提取液，结合超声辅助来提取含雷公藤红素的植物原料中的雷公藤红素，该提取液与现有的纯有机溶剂提取相比，大大节约了有机溶剂的使用量，绿色、环保，显著降低了传统的挥发性有机溶剂提取方法对环境及实验人员带来的污染及危害，同时离子液体的添加，大大改善了提取效果，提高了提取效率。进一步，本发明中以离子液体作为HSCCC流动相添加剂，明显缩短了HSCCC的分离时间，大大提高了与杂质的分离效率，得到的雷公藤红素的纯度大于95％，而且对环境和人体的安全性和友好性更具优势。
附图说明
图1为本发明实施例1中的HSCCC的雷公藤红素的紫外色谱图，其中，(1)为雷公藤红素。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：
1)超声强化提取：取雷公藤根1.0kg，干燥粉碎后过80目筛，然后取100克粉末放入2500毫升锥形瓶中，按固液比1：10(W/V)加入乙醇/水/1-乙基-3-甲基咪唑氯盐(10：0.5：8，V/V/V)的混合物，于超声功率密度100W/cm2，超声频率100kHz，温度40℃条件下，超声提取30min，经固液分离得到含雷公藤红素的提取液。
2)有机溶剂萃取：将二氯甲烷和一定量的水加入到上述步骤1)得到的提取液中，按提取液、水与二氯甲烷的体积比3：2：1萃取3次，分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在55℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液的主要成分为离子液体Ⅰ(1-乙基-3-甲基咪唑氯盐)。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏1g与50g硅胶(200～300目)充分混合后装入一支底端带有筛板的玻璃层析柱中，先用100mL石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂150mL洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在55℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：称取步骤3)得到的雷公藤红素粗品500mg，选择正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水-1-烯丙基-3-甲基咪唑溴盐(2：3：3：2∶0.05，V/V)作为HSCCC溶剂体系，将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤红素粗品加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为700r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图收集目标物，获得雷公藤红素的溶液。
5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的收集液，预冻温度-20℃，工作压力25Pa，升华温度50℃，解析温度70℃，得到纯度大于95％的雷公藤红素。
检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax XDB-C18柱(150mm×4.6mm I.D.,5μm,Agilent Technologies,USA)，流动相为0.05％醋酸-醋酸铵(5mmol/L)溶液/甲醇(25：75,V/V)，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，紫外检测器在425nm波长下进行检测，雷公藤红素的纯度大于95％。
实施例2：
1)超声强化提取：取雷公藤茎1.0kg，干燥粉碎后过60目筛，然后取100克粉末放入2500毫升锥形瓶中，按固液比1：30(W/V)加入乙醇/水/1-乙基-3-甲基咪唑溴盐(10：0.2：7，V/V/V)的混合物，于超声功率密度50W/cm2，超声频率50kHz，温度45℃条件下，超声提取30min，经固液分离得到含雷公藤红素的提取液。
2)有机溶剂萃取：将三氯甲烷和一定量的水加入到上述步骤1)得到的提取液中，提取液、水与三氯甲烷的体积比为3：2：1，萃取3次，分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在55℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液即1-乙基-3-甲基咪唑溴盐。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏1g与50g硅胶(200～300目)充分混合后装入一支底端带有筛板的玻璃层析柱中，先用50mL石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂150mL洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在45℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：称取步骤3)得到的雷公藤红素粗品500mg，选择甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐(2：3：3：4∶0.05，v/v)作为HSCCC溶剂体系，将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤红素粗品加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为750r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图收集目标物，获得雷公藤红素的溶液。
5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的收集液，预冻温度-15℃，工作压力30Pa，升华温度50℃，解析温度60℃，得到纯度大于95％的雷公藤红素。
检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax XDB-C18柱(150mm×4.6mm I.D.,5μm,Agilent Technologies,USA)，流动相为0.05％醋酸-醋酸铵(5mmol/L)溶液/甲醇(25：75,V/V)，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，紫外检测器在425nm波长下进行检测，雷公藤红素的纯度大于95％。
实施例3：
1)超声强化提取：取雷公藤根1.0kg，干燥粉碎后过60目筛，然后取100克粉末放入2500毫升锥形瓶中，按固液比1：20(W/V)加入乙醇/水/1-丁基-3-甲基咪唑溴盐(10：1：8，V/V/V)的混合物，于超声功率密度50W/cm2，超声频率50kHz，温度40℃条件下，超声提取50min，经固液分离得到含雷公藤红素的提取液。
2)有机溶剂萃取：将二氯甲烷和一定量的水加入到上述步骤1)得到的提取液中，提取液、水与二氯甲烷的体积比为3：2：2，萃取3次，分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在45℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液的主要成分为1-丁基-3-甲基咪唑溴盐。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏1g与50g硅胶(200～300目)充分混合后装入一支底端带有筛板的玻璃层析柱中，先用50mL石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂200mL洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在45℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：称取步骤3)得到的雷公藤红素粗品500mg，选择甲基叔丁基醚-正丁醇-乙醇-水-1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐(2：3：3：4∶0.05，v/v)作为HSCCC溶剂体系，将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤红素粗品加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为750r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图收集目标物，获得雷公藤红素的溶液。
5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的收集液，预冻温度-15℃，工作压力30Pa，升华温度50℃，解析温度60℃，得到纯度大于95％的雷公藤红素。
检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax XDB-C18柱(150mm×4.6mm I.D.,5μm,Agilent Technologies,USA)，流动相为0.05％醋酸-醋酸铵(5mmol/L)溶液/甲醇(25：75,V/V)，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，紫外检测器在425nm波长下进行检测，雷公藤红素的纯度大于95％。
实施例4：
1)超声强化提取：取雷公藤叶1.0kg，干燥粉碎后过60目筛，然后取100克粉末放入2500毫升锥形瓶中，按固液比1：10(W/V)加入乙醇/水/1-辛基-3-甲基咪唑氯盐(10：2：7，V/V/V)的混合物，于超声功率密度20W/cm2，超声频率100kHz，温度60℃条件下，超声提取50min，经固液分离得到含雷公藤红素的提取液。
2)有机溶剂萃取：将二氯甲烷和一定量的水加入到上述步骤1)得到的提取液中，提取液、水与二氯甲烷的体积比为5：4：3，萃取3次，分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在45℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液的主要成分为1-辛基-3-甲基咪唑氯盐。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏1g与50g硅胶(200～300目)充分混合后装入一支底端带有筛板的玻璃层析柱中，先用100mL石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂150mL洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在45℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：称取步骤3)得到的雷公藤红素粗品500mg，选择正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水-1-乙基-3-甲基咪唑六氟硼酸盐(1：2：2：1∶0.05，v/v)作为HSCCC溶剂体系，将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤红素粗品加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为750r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图收集目标物，获得雷公藤红素的溶液。
5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的收集液，预冻温度-15℃，工作压力25Pa，升华温度50℃，解析温度50℃，得到纯度大于95％的雷公藤红素。
检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax XDB-C18柱(150mm×4.6mm I.D.,5μm,Agilent Technologies,USA)，流动相为0.05％醋酸-醋酸铵(5mmol/L)溶液/甲醇(25：75,V/V)，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，紫外检测器在425nm波长下进行检测，雷公藤红素的纯度大于95％。
实施例5：
1)超声强化提取：取雷公藤茎1.0kg，干燥粉碎后过60目筛，然后取100克粉末放入2500毫升锥形瓶中，按固液比1：25(W/V)加入乙醇/水/1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐(10：1：6，V/V/V)的混合物，于超声功率密度100W/cm2，超声频率100kHz，温度45℃条件下，超声提取20min，经固液分离得到含雷公藤红素的提取液。
2)有机溶剂萃取：将二氯甲烷和一定量的水加入到上述步骤1)得到的提取液中，提取液、水与二氯甲烷的体积比为3：5：3，萃取3次，分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在45℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液的主要成分为1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏1g与50g硅胶(200～300目)充分混合后装入一支底端带有筛板的玻璃层析柱中，先用100mL石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂100mL洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在45℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：称取步骤3)得到的雷公藤红素粗品500mg，选择正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水-1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐(1：2：2：1∶0.05，v/v)作为HSCCC溶剂体系，将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤红素粗品加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为750r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图收集目标物，获得雷公藤红素的溶液。
5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的收集液，预冻温度-20℃，工作压力25Pa，升华温度55℃，解析温度65℃，得到纯度大于95％的雷公藤红素。
检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax XDB-C18柱(150mm×4.6mm I.D.,5μm,Agilent Technologies,USA)，流动相为0.05％醋酸-醋酸铵(5mmol/L)溶液/甲醇(25：75,V/V)，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，紫外检测器在425nm波长下进行检测，雷公藤红素的纯度大于95％。
实施例6：
1)超声强化提取：取雷公藤根1.0kg，干燥粉碎后过80目筛，然后取100克粉末放入2500毫升锥形瓶中，按固液比1：50(W/V)加入乙醇/水/1-丁基-3-甲基咪唑溴盐(10：1：7，V/V/V)的混合物，于超声功率密度80W/cm2，超声频率100kHz，温度45℃条件下，超声提取30min，经固液分离得到含雷公藤红素的提取液。
2)有机溶剂萃取：将三氯甲烷和一定量的水加入到上述步骤1)得到的提取液中，提取液、水与三氯甲烷的体积比为3：4：3，萃取3次，分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在45℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。萃取余液循环使用，该萃取余液的主要成分为1-丁基-3-甲基咪唑溴盐。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏1g与50g硅胶(200～300目)充分混合后装入一支底端带有筛板的玻璃层析柱中，先用100mL石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂100mL洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在45℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：称取步骤3)得到的雷公藤红素粗品500mg，选择正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水-1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐(2：3：3：2∶0.05，v/v)作为HSCCC溶剂体系，将200mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤红素粗品加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为750r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图收集目标物，获得雷公藤红素的溶液。
5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的收集液，预冻温度-20℃，工作压力25Pa，升华温度55℃，解析温度65℃，得到纯度大于95％的雷公藤红素。
检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax XDB-C18柱(150mm×4.6mm I.D.,5μm,Agilent Technologies,USA)，流动相为0.05％醋酸-醋酸铵(5mmol/L)溶液/甲醇(25：75,V/V)，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，紫外检测器在425nm波长下进行检测，雷公藤红素的纯度大于95％。

Claims (6)

1.一种利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)超声强化提取：含雷公藤红素的植物原料经干燥粉碎后过40～80目筛，按固液比1：5～100加入体积比为1：0.01～0.5：0.5～2.0的乙醇、水和咪唑类离子液体Ⅰ混合液，于超声功率密度10～200W/cm2及超声频率10～100kHz下，20～65℃条件下超声提取5～90min，固液分离后得含雷公藤红素的提取液；
2)有机溶剂萃取：将C1～C3的卤代烷烃和一定量的水加入到所述步骤1)得到的提取液中，按提取液、水与C1～C3的卤代烷烃的体积比1～5：1～3:1萃取1～5次；分离有机相得雷公藤红素萃取相，然后将得到的有机萃取相在40～60℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤红素的红色浸膏。
3)柱层析净化：将得到的含有雷公藤红素的红色浸膏与硅胶(200～300目)按重量比1：10～100进行充分混合，然后装入一支底部具有筛板的玻璃层析柱中，先用适量石油醚淋洗，再用体积比为4：1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂洗脱，控制洗脱液的流速不大于10mL/min，收集红色洗脱液，然后将得到的红色洗脱液在40～60℃下减压浓缩至近干，得到雷公藤红素粗品；
4)HSCCC分离纯化：选择HSCCC溶剂体系，按体积/重量比0.2～2：1(mL/mg)将HSCCC溶剂体系和上述雷公藤红素粗品加入到分液漏斗中，震荡、静置分层，平衡后，将上、下相分开，以溶剂体系的上相为固定相，溶剂体系的下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，根据检测器的谱图分步收集目标物，分别获得雷公藤红素的溶液；
5)真空冷冻干燥：将上述各雷公藤红素溶液，在适当温度、干燥压力下真空冷冻干燥，回收有机萃取剂，分别得到纯度大于95％的雷公藤红素。
2.如权利要求1所述的利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于：所述咪唑类离子液体Ⅰ为1-乙基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑溴盐、1-丁基-3-甲基咪唑溴盐、1-辛基-3-甲基咪唑氯盐、1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐中的至少一种。
3.如权利要求1所述的利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于：所述步骤1)中乙醇、水和咪唑类离子液体Ⅰ混合液的体积比为1：0.05：1。
4.如权利要求1所述的利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于：所述C1～C3的卤代烷烃为三氯甲烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷和四氯化碳中的至少一种。
5.如权利要求1所述的利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于：所述HSCCC溶剂体系为体积比为2：3：3：2∶0.05的正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水-离子液体Ⅱ配制的HSCCC溶剂体系、体积比为2：3：3：4∶0.05的甲基叔丁基醚-正丁醇-乙醇-水-离子液体Ⅱ配制的HSCCC溶剂体系或者体积比为1：2：2：1∶0.05正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水-离子液体Ⅱ配制的HSCCC溶剂体系中的任意一种。
6.如权利要求1或5所述的利用离子液体高效提取雷公藤红素的方法，其特征在于：所述咪唑类离子液体Ⅱ为1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐中的至少一种。
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