CN108354960B - 一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法 - Google Patents

一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药提取技术领域，涉及一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，具体涉及利用低共熔溶剂提取淫羊藿叶中黄酮苷类化合物的方法。所述的制备方法是以淫羊藿为原料，利用低共熔溶剂，尤其是胆碱类低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮苷类化合物。该提取方法对于黄酮苷类成分提取效率更高，提取更加彻底，提取效率可接近100％。提取条件温和，操作简便同时该类具有提取剂不燃爆、不挥发、损耗小、耗能低、等特点，可用于黄酮苷类化合物高效绿色规模化生产和实现淫羊藿资源的综合利用。

Description

一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法
【技术领域】
本发明涉及中药提取技术领域，涉及一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，具体涉及利用低共熔溶剂提取淫羊藿叶中黄酮苷类化合物的方法。
【背景技术】
低共熔溶剂是一种新型的溶剂，是由氢键供体和氢键受体相互结合，破坏了晶格能使熔点大幅降低的溶剂。几年来一直是化工领域的研究热点。由于低共熔溶剂的合成简单，合成成本低，性能绿色环保等优点在电化学、材料、能源、有机合成等领域都有所应用。低共熔溶剂相比于传统有机溶剂，具有低熔点、低成本、低蒸汽压、可降解、可再生的特点。在酸性气体、醇类、酚类、芳烃等分离领域也有相应研究、应用。
淫羊藿是属于小檗科植物淫羊藿(Epidemium brevicornum Maxim)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescensMaxim.)或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥叶，夏、秋季莲叶茂盛时采收。淫羊藿具有壮阳补肾、祛风除湿、健骨强筋的功效，是我国传统的补虚壮阳中药。目前已从淫羊藿中分离得到多种化学成分，而黄酮苷类化合物是淫羊藿中含量较高的成分，目前认为是淫羊藿提取物中的有效成分之一。因此提高淫羊藿中黄酮苷类成分的提取效率是决定淫羊藿提取物药用效果的关键。
目前，有机溶剂提取法是近年来国内外用于提取淫羊藿中黄酮苷类成分应用最为普遍的方法。但有机溶剂易燃、易爆、挥发性强，存在安全隐患，同时严重污染环境。因此，寻找一种绿色环保、成本低廉且能提高淫羊藿中黄酮苷类成分的提取率的提取方法是本领域的技术人员正在努力研究的方向。
【发明内容】
本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，采用本发明提取黄酮苷类化合物可有效提高黄酮苷类化合物的提取效率，并解决现有黄酮苷提取技术中使用易燃、易爆有机溶剂存在的问题。
本发明的技术方案：
一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，以淫羊藿为原料，利用低共熔溶剂，尤其是胆碱类低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮苷类化合物。
1)即将干燥淫羊藿粉碎，加入胆碱类低共熔溶剂，在超声条件下提取，得到黄酮苷类化合物的提取液；
2)提取液加入水进行稀释，涡旋混合；过滤，除杂，得到黄酮苷类化合物的精制提取液。
步骤1)中所述胆碱类低共熔溶剂为氯化胆碱与溶剂形成的透明溶液，所述的溶剂选自1,2-丙二醇、甘油、乳酸、1，4-丁二醇、乙二醇或苯酚。
所述的胆碱类低共熔溶剂可以为氯化胆碱-1,2-丙二醇(1：2-3)，氯化胆碱-甘油(1：1-3)，氯化胆碱-乳酸(1：1-4)，氯化胆碱-1，4-丁二醇(1：3-4)，氯化胆碱-乙二醇(1：1-2)，氯化胆碱-苯酚(1：0.5-2)的室温熔盐液体。优选为：氯化胆碱-苯酚(1：0.5-2)，氯化胆碱-1，2-丙二醇(1：2-3)，氯化胆碱-1，4-丁二醇(1：3-4)，氯化胆碱-乳酸(1：1-4)。
所述的胆碱类低共熔溶剂通过如下方法制备：
将所述的氯化胆碱，溶剂在无水条件下搅拌，60-80℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与溶剂的体积比为：1:0.5-4。优选为：1:2-3。
以氯化胆碱-苯酚为例：
将所述的氯化胆碱，苯酚在无水条件下搅拌，60-80℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与苯酚的摩尔比为：1：0.5-2，优选为：1：2。
以氯化胆碱-1，2-丙二醇为例：
将所述的氯化胆碱，1，2-丙二醇在无水条件下搅拌，60-80℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与1，2-丙二醇的摩尔比为：1：2-3，优选为：1：3。
以氯化胆碱-1，4-丁二醇为例：
将所述的氯化胆碱，1，4-丁二醇在无水条件下搅拌，60-80℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与1，4-丁二醇的摩尔比为：1：3-4，优选为：1：3。
以氯化胆碱-乳酸为例：
将所述的氯化胆碱，乳酸在无水条件下搅拌，60-80℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与乳酸的摩尔比为：1：1-4，优选为：1：3。
淫羊藿与胆碱类低共熔溶剂的重量体积比(g/ml)为：1-20:200，优选为：1:150-200。
水与低共熔溶剂的体积比为：0.5-2:1，优选为：0.8-1.2:1。
超声的条件为：超声功率为90-110W/cm2，温度30-60℃，时间10-40分钟。
具体地，本发明包括以下步骤：
1)将干燥淫羊藿粉碎，过50-100目筛，加入胆碱类低共熔溶剂，干燥淫羊藿与胆碱类低共熔溶剂的的用量比为0.01g-0.2g:2mL，在超声功率为90-110W/cm2，温度为30-60℃条件下，提取10-40分钟，得到黄酮苷类化合物的提取液；
2)提取液加入水进行稀释，水和胆碱类低共熔溶剂的体积比为1:1，后涡旋混合10-30s；将稀释混合后的提取液经0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到黄酮苷类化合物的精制提取液。
本发明的优点是：
该提取方法对于黄酮苷类成分提取效率更高，提取更加彻底，提取效率可接近100％。提取条件温和，操作简便同时该类具有提取剂不燃爆、不挥发、损耗小、耗能低、等特点，可用于黄酮苷类化合物高效绿色规模化生产和实现淫羊藿资源的综合利用。
【附图说明】
图1是实施例1黄酮苷类标准品混合溶液的高效液相色谱图。
图2是实施例2淫羊藿中黄酮苷类物质的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
实施例1
配制氯化胆碱、苯酚的低共熔溶剂：
摩尔比为1:2的氯化胆碱和苯酚在无水条件下搅拌，60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
本发明将低共熔溶剂用于黄酮苷类标准品的处理，并借助于高效液相色谱对黄酮苷类物质进行灵敏检测。具体步骤如下：
1)称取一定量的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷四种黄酮苷类物质的标注品，加入甲醇配成朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷浓度分别为0.040,0.039,0.171,0.273mg/ml的黄酮苷类物质的混合溶液；
2)量取2.0ml步骤(1)中得到的混合溶液，加入4.0ml低共熔溶剂，再加入4毫升水稀释后涡旋混匀；再经过0.45μm有机滤膜过滤；
3)采用高效液相色谱仪紫外检测器检测4种黄酮苷类成分
液相条件：有机相为乙腈，水相为超纯水，采取梯度洗脱程序，梯度程序为见表1；流速为1mL·min-1，柱温为30℃，检测波长为270nm，进样5μL检测，色谱图见图1。
表1.梯度洗脱程序
Figure BDA0001579546580000021
Figure BDA0001579546580000031
实施例2
一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿叶中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)按照实施例1所述方法制备氯化胆碱-苯酚(1：2)的低共熔溶剂。
2)干燥淫羊藿粉碎，过80目筛，取0.05克淫羊藿粉末加2ml胆碱类低共熔溶剂，40℃超声提取30分钟，功率100W/cm2，加入2毫升水稀释，涡旋震荡2min，得黄酮苷类化合物提取液；
3)将步骤2)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。色谱图见图2。经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为2.06mg/g，2.28mg/g，7.24mg/g，1.72mg/g，提取效率分别为96％，96％，100％，100％。
实施例3：
一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿叶中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)按照实施例1所述方法制备氯化胆碱-1,2-丙二醇(1：2)的低共熔溶剂。
2)取粉碎并过40目筛的淫羊藿粉末0.05克，加2ml胆碱类低共熔溶剂，50℃超声提取40分钟，功率100W/cm2，加入2毫升水稀释，涡旋震荡2min，得黄酮苷类化合物提取液；
3)将步骤2)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，.经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为2.04mg/g，2.27mg/g，5.85mg/g，1.50mg/g，提取效率分别为95％，95％，81％，87％。
实施例4：
一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)按照实施例1所述方法制备氯化胆碱-1,2-丙二醇(1：3)的低共熔溶剂。
2)取粉碎并过60目筛的淫羊藿粉末0.05克，加2毫升胆碱类低共熔溶剂，60℃超声提取20分钟，功率100W/cm2，加入2毫升水稀释，涡旋震荡2min，得黄酮苷类化合物提取液；
2)将步骤2)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为2.02mg/g，2.32mg/g，5.93mg/g，1.54mg/g，提取效率分别为94％，97％，82％，89％。
实施例5：
一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)按照实施例1所述方法制备氯化胆碱-1乳酸(1：3)的低共熔溶剂。
2)取粉碎并过100目筛的淫羊藿粉末0.05克，加2毫升胆碱类低共熔溶剂，35℃超声提取15分钟，功率100W/cm2，加入2毫升水稀释，涡旋震荡2min，得黄酮苷类化合物提取液；
3)将步骤2)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液；
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为1.86mg/g，2.04mg/g，6.20mg/g，1.48mg/g，提取效率分别为86％，85％，86％，86％。
实施例6：
一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)按照实施例1所述方法制备氯化胆碱-1乳酸(1：4)的低共熔溶剂。
2)取粉碎并过100目筛的淫羊藿粉末0.05克，加2毫升胆碱类低共熔溶剂，35℃超声提取15分钟，功率100W/cm2，加入2毫升水稀释，涡旋震荡2min，得黄酮苷类化合物提取液；
3)将步骤2)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液；
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为2.13mg/g，2.27mg/g，5.70mg/g，1.46mg/g，提取效率分别为99％，95％，79％，85％。
实施例7：
一种利用低共熔溶剂提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)按照实施例1所述方法制备氯化胆碱-1,4-丁二醇(1：3)的低共熔溶剂。
2)取粉碎并过100目筛的淫羊藿粉末0.05克，加2毫升胆碱类低共熔溶剂，35℃超声提取15分钟，功率100W/cm2，加入2毫升水稀释，涡旋震荡2min，得黄酮苷类化合物提取液；
3)将步骤1)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液；
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为2.08mg/g，2.31mg/g，6.38mg/g，1.52mg/g，提取效率分别为97％，97％，88％，88％。对比例1：一种利用有机溶剂提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，包括以下步骤：
1)取粉碎并过100目筛的淫羊藿粉末0.05克，加入70％乙醇5ml，40℃超声提取30分钟，功率100W/cm2，得黄酮苷类化合物提取液；
2)将步骤1)得到的黄酮苷类化合物提取液加水定容至10ml，经过0.45μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液；
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样5μL检测，经计算得到朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的得率分别为2.04mg/g，2.20mg/g，6.01mg/g，1.54mg/g，提取效率分别为95％，94％，84％，92％。
以上所述，仅为本发明部分具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种提取淫羊藿中黄酮苷类化合物的方法，其特征在于，以淫羊藿为原料，利用低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮苷类化合物，所述的低共熔溶剂为胆碱类低共熔溶剂，选自氯化胆碱-苯酚1：2的室温熔盐液体，淫羊藿与低共熔溶剂的重量体积比为：1-20:200 g/ml。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，
1）将干燥淫羊藿粉碎，加入低共熔溶剂，在超声条件下，提取，得到黄酮苷类化合物的提取液；
2）步骤1）的提取液加入水进行稀释，涡旋混合；过滤，除杂，得到黄酮苷类化合物的精制提取液。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，淫羊藿与低共熔溶剂的重量体积比为：1:150-200 g/ml。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，水与低共熔溶剂的体积比为：0.5-2：1。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，水与低共熔溶剂的体积比为： 0.8-1.2:1。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述超声的条件为：超声功率为90-110W/cm2，温度30-60℃，时间10-40 分钟。
7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将氯化胆碱，溶剂在无水条件下搅拌，60-80℃加热直至形成均一稳定的透明溶液低共熔溶剂。
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