CN105408344A - 肽-树脂结合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有式(2)的肽-树脂结合物，其中：Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；Y为直接结合键；或者为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的肽，其中这些氨基酸残基均可任选地被保护；Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；A为与所述二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的肽，其中这些氨基酸残基均可任选地被保护；R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2。本发明的另一方面还涉及制备具有式(2)的肽-树脂结合物的方法、以及其在肽的制备中的应用。

Description

肽-树脂结合物及其用途
技术领域
本发明涉及适用于肽的合成的肽-树脂结合物。更具体而言，本发明涉及序列中含有二氨基酸的短肽，以及其在肽酰胺的合成中的应用。
背景技术
将对酸不稳定的三苯甲基型树脂用于肽和受保护肽的固相合成在本领域中是已知的(例如，参见BarlosK,ChatziO,GatosD,StavropoulosG.,IntJPeptProteinRes.1991Jun；37(6):513-20)。肽树脂结合物通常通过以羧基为端基的共轭酯键而与树脂相连(例如，参见US7,939,629)。还已知肽-树脂结合物通过末端赖氨酸氨基酸残基的侧链而与树脂相连(例如，参见US2009/0292106)。
通常使用的Rinck-酰胺树脂可得到肽酰胺，在许多情况中其包含若干副产物，这些副产物来源于连接物的部分裂解。
Giraud等人在US2010/0197891中描述了这样一种方法：其中，在化学合成中，借助氨基酸侧链中的氨基将生长肽链固定至固相支持体上。然而，US2010/0197891并未披露肽酰胺与树脂连接。
本发明旨在提供用于肽合成中的新型肽-树脂结合物。更具体而言，在一个实施方案中，本发明旨在提供新型肽-树脂结合物以及与之相关的方法，该方法能够制备表现出如下一种或多种特征的肽，这些特征为：更高的产率、更高的纯度、更少的副反应以及更温和的反应条件。
在随附的权利要求中描述了本发明的各方面，在下文中将对本发明的各方面进行更为详细地说明。
发明内容
本发明的第一方面涉及具有式(2')的肽-树脂结合物，
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为包含两个或更多个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中所述天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基均可任选地被保护，并且其中所述天然肽或合成肽选自：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-；
[2]Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[3]Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[4]Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-；
[11]Pyr-His～Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-；
[13]D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-；
[14]D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-；
[15]Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-；
[16]Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-；
[17]Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-；
[18]Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-；
[19]Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-；
[20]Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-；和
[21]Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-；
Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；
A为与二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，这些氨基酸残基均可任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2。
据我们所知，至今还没有公开过本发明所披露的肽-树脂结合物。也没有公开过本发明所披露的肽-树脂结合物在肽合成中的应用。
有利的是，本发明的肽酰胺结合物能够以更高的产率和/或更高的纯度和/或更少的副反应来制备肽。此外，将肽酰胺从树脂上除去所需的温和的反应条件使得能够获得受到保护或部分保护的形式的肽酰胺，即，该方法使得能够使部分保护的肽酰胺与树脂裂解。这使得能够选择性地将所获得的肽转化为相应的胍基化(guanylated)肽。本发明的结合物尤其可用于本文所述的多种特定肽的制备。
本发明的第二方面涉及肽-树脂结合物，其选自如下这些结合物：
其中所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂、和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的可TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团。
本发明的第三方面涉及制备式(2)的肽-树脂结合物的方法，
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键(directbond)；或者为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基均可任选地被保护；
Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；
A为与所述二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的肽，这些氨基酸残基均可任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2；
所述方法包括在碱存在的条件下，于合适的溶剂中使式(1)的肽酰胺与合适的树脂卤化物反应的步骤，
Pr1-Y-Dia-X-NR1R2
式(1)
其中Pr1、Dia、X、Y、R1和R2的定义如上所述。
本发明的第四方面涉及由式(2)的肽-树脂结合物制备含有精氨酸的肽或者所述肽的盐的方法，
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键；或者为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基均可任选地被保护；
Dia为鸟氨酸；
A为与二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，这些氨基酸残基均可任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2；
所述方法包括如下步骤：
(a)将所述式(2)的肽-树脂结合物中的N端α-氨基官能团脱保护，以除去保护基团Pr1；
(b)使具有游离或活化的羧酸官能团的、至少N端被保护的氨基酸或肽与步骤(a)中的脱保护的α-氨基官能团偶联，从而使式(2)的化合物延长，
(c)可任选地将步骤(a)和(b)重复一次或多次，其中至少N端被保护的氨基酸或肽与前一步骤(b)中的至少N端被保护的氨基酸或肽相同或不同；
(d)使所得到的肽与A裂解；
(e)将步骤(d)中获得的肽的鸟氨酸残基(Dia)的侧链进行胍基化；
(f)可任选地将步骤(d)之后剩余的所有保护基团除去；
(g)分离所获得的肽并可任选地将其纯化。
本发明的第五方面涉及由式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物制备肽或者肽的盐的方法，
其中所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂、和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的可TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
所述方法包括如下步骤：
(a)将所述式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物中的N端α-氨基官能团脱保护，以除去保护基团Pr1；
(b)使具有游离或活化的羧酸官能团的、至少N端被保护的氨基酸或肽与步骤(a)中的脱保护的α-氨基官能团偶联，从而使式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的化合物延长，
(c)可任选地将步骤(a)和(b)重复一次或多次，其中至少N端被保护的氨基酸或肽与前一步骤(b)中的至少N端被保护的氨基酸或肽相同或不同；
(d)使所得到的肽与树脂裂解；
(e)可任选地对步骤(d)中获得的肽进行胍基化；
(f)可任选地将步骤(d)之后剩余的所有保护基团除去；
(g)分离所获得的肽并可任选地将其纯化。
本发明的第六方面涉及上述结合物在肽的制备中的应用，其中所述肽选自：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg8-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；或其药学可接受的盐。
本发明的第七方面涉及通过或可通过本文所述方法获得的肽。
发明详述
本文所用的术语“烷基”包括可被取代(单取代或多取代)或未被取代的饱和直链或支链烷基。优选的是，烷基为C1-20烷基，更优选为C1-15烷基，还更优选为C1-12烷基，还更优选为C1-6烷基，更优选为C1-3烷基。尤其优选的烷基包括(例如)甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。适合的取代基包括(例如)选自OH、O-烷基、卤素、NH2、NH-烷基、N-(烷基)2、CF3、NO2、CN、COO-烷基、COOH、CONH2、CO-NH-烷基、CO-N(烷基)2、SO2-烷基、SO2NH2和SO2NH-烷基中的一种或多种基团。
本文所用的术语“芳基”指的是可被取代(单取代或多取代)或未被取代的C6-12芳香族基团。其典型的例子包括苯基和萘基等。适合的取代基包括(例如)选自OH、O-烷基、卤素、NH2、NH-烷基、N-(烷基)2、CF3、NO2、CN、COO-烷基、COOH、CONH2、CO-NH-烷基、CO-N(烷基)2、SO2-烷基、SO2NH2和SO2-NH-烷基中的一种或多种基团。
所用的术语“芳烷基”为上述术语烷基和芳基的联合。本文所用的术语“芳酰基”指的是“Ar-CO”基团，其中Ar为上文中所定义的芳基。芳酰基的例子包括苯甲酰基和萘甲酰基。
本文所用的术语“酰基”是指“烷基-CO”基团，其中烷基的定义见上文。
本发明化合物的药学可接受的盐包括其适当的酸加成盐和碱盐。Berge等人的JPharmSci,66,1-19(1977)中有关于适当的药物盐的综述。例如，可利用下述酸来形成盐，所述酸为：强无机酸，例如矿物酸，如硫酸、磷酸或氢卤酸；强有机羧酸，如具有1至4个取代(例如，被卤素取代)或未取代的碳原子的烷烃羧酸，如乙酸；饱和或非饱和二羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或对苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、羟基丁二酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，如取代(例如，被卤素取代)或未取代的(C1-C4)-烷基磺酸或芳基磺酸，如甲烷磺酸或对甲苯磺酸。乙酸盐是尤其优选的。
在本发明的前述所有方面中，本发明适当地包括本发明化合物的所有对映异构体和互变异构体。本领域的技术人员将会得知具有光学性质(具有一个或多个手性碳原子)或互变异构特性的化合物。可通过本领域已知的方法来分离/制备相应的对映异构体和/或互变异构体。
本发明的一些化合物可以立体异构体和/或几何异构体存在，例如，其可具有一个或多个非对称中心和/或几何中心，从而可以两种或多种立体异构和/或几何异构的形式存在。本发明预期可使用这些化合物的各立体异构体和几何异构体、及其混合物。权利要求中所用的术语包括所有这些形式。
本发明还包括这些化合物或其药学可接受的盐的所有合适的同位素变体。本发明的药剂或其药学可接受的盐的同位素变体的定义为：其中至少一个原子被具有相同原子数但原子量不同于自然界中所通常具有的原子量的原子替代。可引入所述药剂或其药学可接受的盐中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如2H、3H、13C、14C、15N、17O,18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。在药物和/或底物组织分布研究中可使用所述药剂及其药学可接受的盐的某些同位素变体，例如，其中引入有放射性同位素(如3H或14C)的那些。氚(即3H)和碳-14(即14C)同位素易于制备和检测，因此是尤其优选的。此外，用同位素(如氘，即2H)进行替代可实现更高的代谢稳定性，例如更长的体内半衰期或更小的要求剂量，因此可提供一定的治疗益处，因而在一些情况中是优选的。通常可通过利用适合试剂的合适同位素变体的常规方法来制备本发明的药剂及其药学可接受的盐的同位素变体。
天然氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
本文所用的术语“非天然氨基酸”包括α-氨基酸和α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸、天然氨基酸的卤化物衍生物(如三氟酪氨酸、对-Cl-苯丙氨酸、对-F-苯丙氨酸、对-Br-苯丙氨酸)、对-NO2-苯丙氨酸、苯基甘氨酸、杂氮甘氨酸、肌氨酸、青霉胺、D-2-甲基色氨酸、磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、对-L-苯丙氨酸、L-烯丙基-甘氨酸、β-丙氨酸、β-天冬氨酸、β-环己基丙氨酸、瓜氨酸、高丝氨酸、高半胱氨酸、焦谷氨酸、L-α-氨基丁酸、L-γ-氨基丁酸、L-α-氨基异丁酸、α-环己基甘氨酸、二氨基丁酸、二氨基庚二酸、N-ε-二硝基苯基-赖氨酸、L-1-萘基丙氨酸、L-2-萘基丙氨酸、3-(2-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(4-吡啶基)-L-丙氨酸、N-ε-甲基-赖氨酸、N,N-ε-二甲基-赖氨酸、N,N,N-ε-三甲基-赖氨酸、3-巯基丙酸、L-ε-氨基己酸、7-氨基庚酸、6-氨基己酸、L-蛋氨酸砜、鸟氨酸、L-正亮氨酸、L-正缬氨酸、对硝基-L-苯丙氨酸、L-羟脯氨酸、γ-谷氨酸、γ-氨基丁酸、L-硫杂脯氨酸、苯丙氨酸(Phe)的甲基衍生物，如4-甲基-Phe、五甲基-Phe、L-Phe(4-氨基)、L-Tyr(甲基)、L-Phe(4-异丙基)、L-Tic(1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧基酸)、L-二氨基丙酸、和L-Phe(4-苄基)。
本发明的肽可包含L形式或D形式的氨基酸，即，一种或多种残基、优选所有残基可为L形式或D形式。
本发所用的术语“合成肽”指的是化学合成的肽。可由天然氨基酸或非天然氨基酸、或者其组合来制备合成肽。
本文所用的术语“天然肽”指的是在自然界中存在的肽。
本发明人已证实，这样的二氨基酸能够提供更大的肽酰胺以及部分被保护的肽酰胺，这种部分被保护的肽酰胺具有选择性释放(liberated)的二氨基酸侧链氨基官能团，其中上述二氨基酸包含其侧链与高度酸敏感的适当树脂相连的短的肽酰胺。可以进一步对释放的二氨基酸侧链进行选择性修饰。例如，一种重要的对二氨基酸侧链的修饰为对Arg进行Orn的选择性胍基化，以得到含Arg的肽。这优于通过使用侧链被保护的Arg衍生物来合成含Arg的肽，这是因为利用常见的胍基保护基团将Arg侧链脱保护通常会形成若干种副产物，此外，这在许多情况中是不完全的。
在从提供肽酰胺(如Rink-酰胺树脂)的树脂上除去肽酰胺的过程中也会形成若干副产物。
本发明人发现，将含有二氨基酸的短肽连接至三苯甲基型树脂上的产率较高，并且所获得的肽和部分被保护的肽酰胺具有高纯度，其纯度高于利用酰胺树脂并借助相应的肽酰胺合成方法而获得的纯度。从树脂上裂解的肽酰胺和部分被保护的肽酰胺能够以高产率转化为这样的肽，这种肽在其序列中含有胍基化的氨基酸，如Arg、D-Arg、homo-Arg。所获得的肽酰胺的纯度高于利用侧链被保护的Arg衍生物(例如，Fmoc-Arg(Pbf)-OH)而合成得到的相应的含Arg的肽的纯度。
所需的适当短肽酰胺(1)是通过本领域已知方法获得的，例如，对短肽的侧链氨基官能团脱保护。接下来，根据如下方案，通过肽链中所包含的二氨基酸的侧链氨基官能团将受到保护的短肽酰胺与具有极高的酸敏感性的三苯甲基类型的树脂结合。
例如，在碱的存在下，使包含在肽酰胺的C端部分中的二氨基酸与树脂卤化物A-Cl反应，从而以高产率提供肽-树脂结合物(2)：
其中Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键；或者为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基均可任选地被保护；
Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；
A为与二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的肽，这些氨基酸残基均可任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2。
在一个优选实施方案中，碱为三烷基胺碱，更优选为DIPEA。
在一个优选实施方案中，A为可TFA裂解的聚合物树脂，其结合至Dia的侧链氨基官能团。
更优选的是，A为可TFA裂解的三苯甲基型树脂。
甚至更优选的是，A选自如下所示的三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂，其中Q可不存在，或者为三苯甲基与聚合物基体P之间的连接物，如羧基。
如下述方案所示，还可通过如下方式获得与树脂连接的肽酰胺：将二氨基酸通过侧链氨基官能团连接至树脂，并且使氨基酸酰胺或肽酰胺偶联至树脂上：
如下所示，也可通过对与树脂连接的肽进行酰胺化，从而获得肽酰胺(3)。
式(2)和(3)的与树脂连接的肽可用于固相肽合成中。在完成链组装之后，所获得的通式(2)的肽酰胺可以从高度酸敏感性的树脂上裂解，从而处于通式(1)的被部分保护的肽形式、或者处于如下述方案中的通式(4)所示的完全脱保护的形式。
对于在二氨基酸侧链官能团被选择性地脱保护的肽(1)，如上述方案所示，可进一步通过胍基化对二氨基酸的侧链进行修饰。可通过本领域已知的任何方法进行胍基化步骤，例如，利用诸如S-甲硫脲、1-H-1,2,4-三唑-甲脒(1-H-1,2,4-triazole-carboxamidine)之类的胍基化试剂。
在一个优选实施方案中，胍基化试剂选自1H-吡唑-1-甲脒、1-H-1,2,4-三唑-甲脒、三氟甲磺酰基胍和苯并三唑-1-甲脒对甲苯磺酸盐(benzotriazole-1-carboxamidiniumtosylate)。
随后，可将所获得的通式(5)的经过胍基化的部分保护肽完全脱保护，以得到通式(6)的含有胍基侧链官能团的肽，其中Gua为含有侧链胍基的氨基酸，如Arg。
在本发明的一个优选实施方案中，肽-树脂结合物具有式(2'a)
其中：
n为1至10之间的整数；
A、X、Y、R1和R2的定义如上；并且
Pr1为保护基团，其正交于A与氨基官能团之间的键。
更优选的是，n为1至5的整数。
在一个优选实施方案中，X为选自Gly、Pro、D-Ala、Azagly、Leu、Val、Cys和Tyr中的氨基酸，或者其两种或多种的组合。
在一个优选实施方案中，X选自Gly、Pro、D-Ala、Azagly、Leu、Val、Cys、Tyr、Pro-Gly、Pro-Azagly、Pro-D-Ala和Pro-Val。
在一个优选实施方案中，X为选自Gly、Pro,D-Ala和Tyr的氨基酸。
在一个优选实施方案中，Dia为选自L-Dap、D-Dap、L-Dab、D-Dab、L-Orn、D-Orn、L-Lys和D-Lys的二氨基酸。
在甚至更优选的实施方案中，Dia选自L-Orn、D-Orn、L-Lys和D-Lys。
在一个尤其优选的实施方案中，Dia为L-Orn或D-Orn，更优选为L-Orn。
适合于氨基酸的保护基团对于本领域的技术人员而言是熟知的(例如，参见Chem.Rev.2009,109,2455-2504)。这些保护基团可分为如下三类：
·N端保护基团
·C端保护基团
·侧链保护基团
用于氨基酸的尤其优选的N端保护基团的例子包括(但不限于)t-Boc(叔丁氧羰基)和Fmoc(9-芴甲氧基-羰基)。这些保护基团的不稳定性是由氨基甲酸酯基团造成的，该基团在不可逆的去偶联(decoupling)步骤中易于释放CO2。另一适合的氨基甲酸酯类基团为苄氧基-羰基(Z或Cbz)基团；在更严苛的条件下将该保护基团除去。
另一优选的实例为烯丙氧基羰基(alloc)保护基团，其通常用于在需要正交脱保护(orthogonaldeprotection)方案时保护羧酸、羟基或氨基。
另一优选实例为硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)基团，其可用于在肽合成中保护并活化氨基和羟基。通过利用3-硝基-2-吡啶亚磺酰氯处理氨基酸，可容易地引入Npys基团。通过利用非常稀释的HCl(例如溶解于二噁烷中的0.1N至0.2N的HCl)进行处理，可容易地除去Npys基团，但是该基团对三氟乙酸和88％的甲酸具有抗性。也可利用三苯基膦或2-吡啶硫醇1-氧化物在中性条件下选择性地除去Npys，而不会影响到苄氧羰基(Z)、叔丁氧羰基(Boc)、2-(4-联苯基)丙基(2)氧羰基(Bpoc)、9-芴甲氧基羰基(Fmoc)、苄基(Bzyl)或叔丁基(tBu)保护基团。
氨基酸侧链呈现出了众多的官能团，并且在肽合成过程中为非特异性反应活性位点。因此，需要通常基于苄基(Bzl)或叔丁基(tBu)基团的许多不同的保护基团。根据肽序列以及所用的N端保护的类型，特定肽的合成中所使用的具体保护基团有所不同。侧链保护基团通常被称为永久保护基团或半永久保护基团，这是因为这些保护基团能够经受合成过程中的多个循环的化学处理，并且在肽合成结束之后仅可通过强酸处理而被除去。
在合成之前，使经过纯化的各氨基酸与这些保护基团反应，然后在肽合成的特定步骤中选择性地除去这些保护基团。
在一个优选实施方案中，Pr1为选自Fmoc、Boc、Cbz、Npys和Alloc的正交保护基团。
在一个非常优选的实施方案中，Pr1为Fmoc。
在一个尤其优选的实施方案中，肽-树脂结合物选自如下这些：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[2]Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys(树脂)-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Orn(树脂)-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Orn(树脂)-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Orn(树脂)-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Orn(树脂)-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Orn(树脂)-Pro-D-Ala-NH2；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys(树脂)-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(树脂)-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Orn(树脂)-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Orn(树脂)-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(树脂)-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Orn(树脂)-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Orn(树脂)-Tyr-NH2；
以及这些结合物的盐，
其中，所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的可TFA裂解的聚合物树脂。
本发明的另一方面涉及肽-树脂结合物，其选自如下这些：
其中，所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的可TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团。
在一个优选实施方案中，Pr1为保护基团，更优选为Fmoc保护基团。
更优选的是，所述树脂为三苯甲基树脂或4-甲氧基-三苯甲基树脂。
如上所述，本发明的另一方面涉及制备式(2)的肽-树脂结合物的方法
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键；或者为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基均可任选地被保护；
Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；
A为与二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的肽，这些氨基酸残基均可任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2；
所述方法包括在碱存在的条件下，于合适的溶剂中使式(1)的肽酰胺与合适的树脂卤化物反应的步骤，
Pr1-Y-Dia-X-NR1R2
式(1)
其中Pr1、Dia、X、Y、R1和R2的定义如上所述。
在一个优选实施方案中，Y为可任选被保护的包含2至100个氨基酸残基的肽。更优选的是，Y为可任选被保护的、包含2至50个氨基酸残基的肽，甚至更优选包含2至20个氨基酸残基，还更优选包含2至10个氨基酸残基，甚至更优选包含2至6个氨基酸残基。
优选的是，所述卤化物选自氯化物、溴化物和碘化物。
优选的是，所述溶剂选自DCM、DCE、DMF、NMP、THF、DME及其混合物。
优选的是，所述碱选自DIPEA、NMM、DBU、吡啶、DMAP和TEA。
本发明的另一方面涉及由式(2)的肽-树脂结合物制备含有精氨酸的肽或其盐的方法，
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键；或者为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基可任选地被保护；
Dia为鸟氨酸；
A为与二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为可任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，这些氨基酸残基均可任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2；
所述方法包括如下步骤：
(a)将所述式(2)的肽-树脂结合物中的N端α-氨基官能团脱保护，以除去保护基团Pr1；
(b)使具有游离或活化的羧酸官能团的、至少N端被保护的氨基酸或肽与步骤(a)中的脱保护的α-氨基官能团偶联，从而使式(2)的化合物延长，
(c)可任选地将步骤(a)和(b)重复一次或多次，其中至少N端被保护的氨基酸或肽与前一步骤(b)中的至少N端被保护的氨基酸或肽相同或不同；
(d)使所得到的肽与A裂解；
(e)将步骤(d)中获得的肽中的鸟氨酸残基(Dia)的侧链进行胍基化；
(f)可任选地将步骤(d)之后剩余的所有保护基团除去；
(g)分离所获得的肽并可任选地将其纯化。
在一个优选实施方案中，Pr1为选自由Fmoc、Boc、Cbz、Npys和Alloc所构成的组中的正交保护基团。
在一个优选实施方案中，步骤(b)和(c)中的N端被保护的氨基酸或肽为被Fmoc保护的氨基酸或肽。
在一个优选实施方案中，最后重复的步骤(c)中的至少N端被保护的氨基酸或肽被与Fmoc正交的保护基团保护。
在一个优选实施方案中，正交保护基团为Boc。
在一个优选实施方案中，A为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的树脂。
在一个优选实施方案中，步骤(d)包括通过酸处理使肽与树脂裂解。
在一个优选实施方案中，步骤(e)包括利用选自1H-吡唑-1-甲脒2、1-H-1,2,4-三唑-甲脒、三氟甲磺酰基胍和苯并三唑-1-甲脒对甲苯磺酸盐中的胍基化试剂对肽进行处理。
在一个优选实施方案中，式(2)的肽-树脂结合物选自如下这些：
其中，所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的可TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团。
在一个优选实施方案中，式(2)的肽-树脂结合物选自如下这些：
其中，所述树脂为三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂。
在一个优选实施方案中，本发明的方法用于制备肽，所述肽选自如下这些：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg8-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2乙酸盐；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2乙酸盐；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
在一个优选实施方案中，所述方法还包括通过上面所限定的方法来制备所述式(2)的肽-树脂结合物的步骤。
本发明的另一个方面涉及由式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物制备肽或者肽的盐的方法，
其中所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂、和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的可TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
所述方法包括如下步骤：
(a)将所述式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物中的N端α-氨基官能团脱保护，以除去保护基团Pr1；
(b)使具有游离或活化的羧酸官能团的、至少N端被保护的氨基酸或肽与步骤(a)中的脱保护的α-氨基官能团偶联，从而使式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的化合物延长，
(c)可任选地将步骤(a)和(b)重复一次或多次，其中至少N端被保护的氨基酸或肽与前一步骤(b)中的至少N端被保护的氨基酸或肽相同或不同；
(d)使所得到的肽与树脂裂解；
(e)可任选地对步骤(d)中获得的肽进行胍基化；
(f)可任选地将步骤(d)之后剩余的所有保护基团除去；
(g)分离所获得的肽并可任选地将其纯化。
在一个优选实施方案中，Pr1为选自由Fmoc、Boc、Cbz、Npys和Alloc所构成的组中的正交保护基团。
在一个优选实施方案中，步骤(b)和(c)中的N端被保护的氨基酸或肽为被Fmoc保护的氨基酸或肽。
在一个优选实施方案中，最后重复的步骤(c)中的至少N端被保护的氨基酸或肽被与Fmoc正交的保护基团保护。
在一个优选实施方案中，正交保护基团为Boc。
在一个优选实施方案中，所述树脂选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂。
在一个优选实施方案中，步骤(d)包括通过酸处理使肽与树脂裂解。
在一个优选实施方案中，胍基化步骤(e)是必要的，而非可任选特征。
在一个优选实施方案中，所述方法包括利用选自1H-吡唑-1-甲脒2、1-H-1,2,4-三唑-甲脒、三氟甲磺酰基胍和苯并三唑-1-甲脒对甲苯磺酸盐中的胍基化试剂对肽进行处理。
在一个优选实施方案中，肽-树脂结合物选自如下这些：
其中所述树脂为三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂。
在一个优选实施方案中，所述方法用于制备选自如下这些的肽：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg8-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；及其药学可接受的盐。
在一个优选实施方案中，所述方法还包括通过上面所定义的方法制备所述式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物的步骤。
本发明的另一方面涉及上文中所限定的结合物在肽的制备中的应用，所述肽选自如下这些：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg8-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；及其药学可接受的盐。
通过本发明方法制备的具体的肽包括如下这些：
醋酸阿托西班
3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2乙酸盐
醋酸加压素
Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2乙酸盐
醋酸鸟氨酸加压素
H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2乙酸盐
醋酸特利加压素
H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2乙酸盐
醋酸去氨加压素
3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2乙酸盐
醋酸曲普瑞林
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐
醋酸那法瑞林
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐
戈舍瑞林
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
醋酸布舍瑞林
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐
亮脯利特(亮丙瑞林)
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt
醋酸组氨瑞林
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐
高醋酸德舍瑞林(DeslorelinHighAcetate)
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐
西曲瑞克
Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐
Ozarelix
Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐
醋酸齐考诺肽
H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2乙酸盐
Afamelanotide
Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2乙酸盐
醋酸GRF(人)
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2乙酸盐
GRF(1-29)酰胺(人)
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2
醋酸α-促黑激素(人)(a-Melanotropin(human)Acetate)
Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2乙酸盐
醋酸神经肽Y(人，大鼠)
H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2乙酸盐
醋酸多肽YY(人)
H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2乙酸盐
本发明的方法适合于制备多种不同的肽，这些肽包括(但不限于)：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[1]Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2乙酸盐；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2乙酸盐；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2乙酸盐；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2乙酸盐；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2乙酸盐；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2乙酸盐；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2乙酸盐.
有利的是，本发明的方法使得从树脂上裂解下来的肽酰胺和部分保护的肽酰胺能够以高产率转化为这样的肽，所述肽的序列中包含胍基化的氨基酸，如Arg、D-Arg、homo-Arg。所获得的肽酰胺的纯度高于利用侧链被保护的Arg衍生物(例如，Fmoc-Arg(Pbf)-OH)合成得到的相应的含Arg的肽的纯度。
下文中将通过非限制性实例进一步对本发明进行说明。
实施例
肽及其受保护链段的固相合成
总体步骤
负载有肽(通过二氨基酸的侧链进行连接)的三苯甲基树脂的制备，总体步骤
将CBL-Patras的三苯甲基氯树脂(100g，负载量0.9mmol/g至1.6mmol/g)置于2L的肽合成反应器中，并在25℃下用700mL的二氯甲烷(DCM)溶胀30分钟。过滤树脂，并加入使100mmol的Fmoc-肽酸和二异丙基乙胺(DIEA)溶解于DCM中而获得的溶液，从而使Fmoc-肽/DIPEA的mmol比为0.80。在25℃下，将该混合物在氮气下静置4小时。然后，加入10mL的甲醇(MeOH)并在室温下反应1小时，从而将树脂中残留的活性位点中和。过滤树脂，并用400mL的DMF洗涤4次，用500mL的异丙醇(IPA)洗涤3次并用400mL的DEE洗涤4次以将其消溶胀。将树脂干燥至恒重。60mmol％至80mmol％的所用的肽被连接至树脂上。
本发明中所描述的所有三苯甲基型树脂均为市售产品(CBL-Patras公司等)。
A3.通过二氨基酸的氨基酸侧链而连接至固相上的肽酸的酰胺化，总体步骤
将与树脂连接的肽(5.0g＝0.2mmol/g至1.2mmol/g)置于固相反应器中，并用0.25mmol至1.4mmol的HOBt和DIC处理。将该混合物在室温下静置1小时，然后以1.00摩尔至1.5摩尔过量加入氨或烷基胺在DMF中或者HOBt.NH3盐中的溶液或肽酰胺在DMF中的溶液。将该混合物在室温下静置2小时，然后将该步骤重复一次。然后过滤树脂并用DMF洗涤5次，用IPA洗涤3次并用DEE洗涤3次，在真空中干燥至恒重。
B.固相合成，总体方案
B1.树脂的溶胀
将树脂置于15ml的反应器中，并用7ml的NMP处理两次，随后过滤。
B2.氨基酸的活化
称取氨基酸(3.0当量)和1-羟基苯并三唑(4.0当量)，并在反应器中利用NMP将其溶解，其中NMP的体积为氨基酸和1-羟基苯并三唑的体积的2.5倍，将其冷却至0℃。然后加入DIC(3.0当量)，搅拌该混合物15分钟。
B3.偶联(coupling)
然后将在B2中制备的溶液加入B1反应器中。将1体积的DCM加入该反应器中，并在25℃至30℃下搅拌1-3小时，从而将该反应器洗涤1次。对样品进行Kaiser测试，以确定反应的完成。如果3小时后偶联反应未完成(阳性Kaiser测试)，则过滤该反应混合物并利用活化氨基酸的新鲜溶液进行再偶联。待偶联完成后，过滤反应混合物并用NMP(每次洗涤为5体积)洗涤4次。
B4.Fmoc基团的去除
过滤B3中所得到的树脂，然后利用5mL的溶液处理30分钟，该溶液包含25体积％的哌啶。然后用5mL的NMP将该树脂洗涤三次。
B5.肽链的延长
在引入各氨基酸之后，重复步骤B1至B5，直至肽链完成。
为了引入各氨基酸，使用了如下Fmoc-氨基酸：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Orn(Mtt)-OH、Fmoc-Orn(Mmt)-OH、Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Mmt)-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Thr(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Clt)-OH、Fmoc-Asn-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH和Fmoc-Cys(Acm)-OH；以及如下的Boc-氨基酸：Boc-Phe-OH和Boc-Gly-OH。
C.使三苯甲基型的部分保护的肽及其受保护链段从树脂上裂解的总体方法，其中所述部分保护的肽及其受保护链段的N端包含Fmoc-或Boc-基团或者其他适合的保护基团，并且在各赖氨酸、鸟氨酸或其他二氨基酸侧链处被选择性地脱保护。
对于如上述B1-B5中制备的与树脂连接的肽或肽链段，利用5mL的NMP洗涤4次，用5ml的IPA洗涤3次，最后用7ml的DCM洗涤5次，以完全除去所有残余的NMP或其他基础成分，其中所述肽或肽链段在特定的Lys、Orn或任何其他二氨基酸侧链处与2-氯三苯甲基(Clt)树脂、Trt树脂、Mmt树脂或Mtt树脂连接。然后将树脂冷却至0℃，将其从DCM中过滤出来，并用10mL5℃的、1.0％至1.5％TFA在DCM/TES(95:5)中的溶液处理6次。将树脂过滤并用10mL的DCM洗涤三次。然后向滤液(相对于TFA为1.3当量)中加入吡啶，以中和TFA。随后将DCM的裂解溶液与等体积的水混合。将所得混合物减压蒸馏，以除去DCM(28℃，350托)。在除去DCM后，析出了肽或肽链段。利用水和醚洗涤所得的肽，并在15托的真空中，于30℃至35℃下将其干燥。或者，可在真空中除去DCM，并且可通过添加DEE或二异丙醚(DIE)使部分被保护的肽析出。
D.对被部分保护的肽进行胍基化的总体方法，其中该被部分保护的肽在一个或多个二氨基酸侧链处被选择性的脱保护。
将在二氨基酸侧链处部分脱保护的肽(1.0mmol)溶解在10ml至15ml的DMF、或DMF/水的适当混合物中，然后加入DIPEA或1N的NaOH将该溶液中和。然后，加入1.0至1.5摩尔的过量胍基化试剂(例如，1-H-1,2,4-三唑-甲脒盐酸盐)，并搅拌该混合物，直至经HPLC、TLC或者Kaiser测试确定胍基化完成为止。然后用盐水稀释该混合物，并用EtAc或DCM将产物萃取于有机相中，随后进行标准酸/碱萃取。然后，通过加入DEE或DIE将所获得的胍基化肽的溶液再沉淀并浓缩，并根据下述的总体方法进行脱保护。
E.肽脱保护-总体方法
对于上述获得的部分保护的肽(0.01mmol至0.005mmol)，用10mL的TFA/TES或TIPS/苯甲硫醚/水(85:5:5:5)或者TFA/DTT/水(90:5:5)在5℃下对其进行处理3小时，并在15℃下对其进行处理1小时。将所得溶液真空浓缩，然后通过加入DEE或DIE将脱保护的肽析出，并用10mL的DEE或DIE将其洗涤三次。将所得固体真空干燥(25℃，1托-10托)至恒重。
实施例1.由Fmoc-Orn-Gly-NH2起始合成阿托西班，其中Fmoc-Orn-Gly-NH2通过鸟氨酸的侧链而连接于三苯甲基树脂上。
将三苯甲基氯树脂(20.0g；负载量为24.4mmol)置于肽合成反应器中，并在25℃下用200mL的DCM/DMF(1:1)将其溶胀30分钟。然后加入4.63g(10mmol)的Fmoc-Orn-Gly-NH2.HCl，其通过本领域已知的方法在二恶烷中由Fmoc-Orn(Boc)-Gly-NH2和HCl制得。将该混合物在室温下静置过夜。然后，加入10mL的甲醇(MeOH)并在室温下反应2小时，从而将树脂中存留的活性位点中和。然后过滤树脂，用400mL的DMF洗涤4次，并且通过用500mL的异丙醇(IPA)洗涤3次并用400mL的DEE洗涤4次从而使其消溶胀，并使其在DMF中再溶胀。然后，利用Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Thr(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH和Fmoc-D-Tyr(Et)-OH并根据标准方法进行肽链的延长。最终通过与引入Fmoc-氨基酸类似的方法引入N端S-Trt-巯基丙酸(MPA)。然后用DMF将该树脂洗涤6次，并用DCM洗涤6次。随后用100mL的1％TFA的DMF溶液处理该树脂6次，并向合并的滤液中加入2.54g(100mmol)的碘，搅拌该溶液直至氧化反应完成(20分钟)。然后通过利用3％的Na2S2O3进行萃取以中和过量的碘，利用DEE进行再沉淀以除去DCM。随后利用标准方法将所获得的肽脱保护，并通过HPLC将其纯化并冻干。产率：7.14g的TFA盐，78％的肽含量(44.8％)。
实施例2.由Fmoc-Orn-OH起始合成阿托西班，其中Fmoc-Orn-OH通过鸟氨酸的侧链而连接于4-甲氧基树脂上。
将1mmol的Fmoc-Orn-OH溶解于15ml的DCM中。然后，加入1.5mmol的DIPEA和1g的4-甲氧基三苯甲基树脂(1.2mmol/g)，并将该混合物搅拌过夜。加入1ml的甲醇，将该混合物在室温下继续搅拌4小时。然后过滤树脂，利用DCM洗涤3次，用DMF洗涤3次，用iPrOH洗涤3次并用己烷洗涤3次，真空干燥至恒重，得到Fmoc-Orn(4-甲氧基三苯甲基树脂)-OH。
将2.0g(1.0mmol)的Fmoc-Orn(4-甲氧基三苯甲基树脂)-OH悬浮于10.0ml的DMF中，冷却至5℃，并与0.18g(1.3mmol)的HOBt和0.13g(1.0mmol)的DIC反应。将该混合物在5℃下静置5分钟，然后温热至15℃。然后加入0.22g(2mmol)的甘氨酰胺盐酸盐和0.39g(3.0mmol)的DIPEA，并将该混合物在室温下静置90分钟。重复该步骤，并将所获得的Fmoc-Orn(4-甲氧基三苯甲基树脂)-Gly-NH2按照上述方法用于合成阿托西班。产率：0.79g的TFA盐，76％的肽含量(48.6％)。
实施例3.与树脂连接的Fmoc-Orn-Pro-NH2、Fmoc-Orn-Pro-NHEt和Fmoc-Orn-Pro-NH-NH-CO-NH2的合成，总体步骤。
通过本领域已知的方法使Fmoc-Orn(Boc)-OH或Fmoc-Orn(Mtt)-OH或Fmoc-Orn(Mmt)-OH与H-Pro-NH2或H-Pro-NHEt或H-Pro-NH-NH-CO-NH2偶联。随后在DCM中，利用TFA使所获得的产物的侧链脱保护。然后，将所获得的经过充分干燥的10.0mmol鸟氨酸二肽溶解于100ml的DCM/DMF(1:1)中。随后将该溶液加入10.0g的2-氯三苯甲基树脂或三苯甲基树脂、或4-甲基三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基氯树脂(负载量＝0.9mmol/g至1.6mmol/g)，并向所得混合物中加入30.0mmol的DIPEA。将所得混合物在室温下静置12小时，然后加入5.0ml的MeOH，将该混合物继续在室温下静置2小时。然后过滤树脂，并用DMF洗涤6次，用IPA洗涤3次并用DEE洗涤3次，并真空干燥至恒重。产率：12.5g至14.5g，总负载量为7.9mmol至8.7mmol。
实施例4.Fmoc-Orn(4-甲氧基三苯甲基树脂)-Tyr(tBu)-NH2的合成
通过本领域已知的方法使Fmoc-Orn(Mtt)-OH或Fmoc-Orn(Mmt)-OH与H-Tyr(tBu)-NH2偶联。随后在室温下，在DCM/TES(97:3)中，利用1％的TFA使所获得的产物的侧链脱保护2小时。然后，将所获得的经过充分干燥的1.0mmol鸟氨酸二肽溶解于10ml的DCM/DMF(1:1)中。随后将该溶液加入2.0g的4-甲氧基三苯甲基氯树脂(负载量＝1.42mmol/g)，并向所得混合物中加入3.0mmol的DIPEA。然后将所得混合物在室温下静置12小时，然后加入0.5ml的MeOH，将该混合物继续在室温下静置2小时。然后过滤树脂，并用DMF洗涤6次，用IPA洗涤3次并用己烷洗涤3次，并真空干燥至恒重。产率：3.02g，总负载量为0.86mmol(0.28mmol二肽/g)。
实施例5.Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2(戈舍瑞林)的合成
使1.0g(0.64mmol)的Fmoc-Orn(4-甲氧基三苯甲基树脂)-Pro-NH-CO-NH2依次与Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Clt)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Mmt)-OH和焦谷氨酸偶联。随后将所获得的树脂用DMF洗涤6次，用IPA洗涤3次并用DEE洗涤3次，并真空干燥。随后加入20ml包含1％TFA的DCM/TES(97:3)溶液，过滤树脂并用含有1％TFA的DCM/TES(97:3)洗涤。随后将合并的滤液真空浓缩，通过加入DEE进行析出并在空气中干燥。然后将存留的树脂用DMF洗涤3次并用DMF/水(1:1)洗涤4次。向合并的滤液中加入通过用TFA处理树脂而获得的固体，并添加1N的NaOH将溶液中和。加入145.5mg(1.0mmol)的1-H-1,2,4-三唑-甲脒盐酸盐和258mg(2.0mmol)的DIPEA，并将混合物搅拌过夜。将该混合物酸化至pH＝2.5，通过RP-HPLC将其浓缩并纯化，并将其冻干。产率：555.3mg(67.6％)。
实施例6.Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt(布舍瑞林)的合成
使1.0g(0.55mmol)的Fmoc-Orn-Pro-NHEt依次与Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Clt)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Mmt)-OH和焦谷氨酸偶联。根据上述步骤，获得了477.0mg的肽(61.8％)。
实施例7.Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt(亮脯利特，亮丙瑞林)的合成
使1.0g(0.55mmol)的Fmoc-Orn-Pro-NHEt依次与Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Tyr(Clt)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Mmt)-OH和焦谷氨酸偶联。根据上述步骤，获得了488.1mg(61.5％)。
实施例8.H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(肽YY)的合成
使1.0g(0.28mmol)的Fmoc-Orn(4-甲氧基三苯甲基树脂)-Tyr(tBu)-NH2依次与Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Orn(Mmt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Orn(Mmt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Orn(Mmt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Pro-OH和Fmoc-Tyr(tBu)-OH偶联。随后使肽与树脂裂解，并在鸟氨酸侧链处部分脱保护，然后在DMF和DIPEA中利用442.5mg(3mmol)的1-H-1,2,4-三唑-甲脒盐酸盐对其进行胍基化。通过加入水使产物析出并将其过滤，用水和DEE洗涤、脱保护，并通过RP-HPLC将其纯化，并将其冻干。产率为289.9mg(24.4％)。
在不脱离本发明范围和宗旨的前提下，本发明所述方面的各种修改和变形对本领域的技术人员而言是显而易见的。尽管已参照具体的优选实施方案描述了本发明，但是应当认识到，本发明不应当被不适当地局限于这些具体实施方案。事实上，对相关领域技术人员而言显而易见的本发明实施方式的各种变型均旨在包含于所附权利要求书的范围内。

Claims (42)

1.一种具有式(2')的肽-树脂结合物，
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为包含两个或更多个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中所述天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基均任选地被保护，并且其中所述天然肽或合成肽选自以下：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-；
[2]Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[3]Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[4]Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-；
[13]D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-；
[14]D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-；
[15]Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-；
[16]Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-；
[17]Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-；
[18]Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-；
[19]Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-；
[20]Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-；和
[21]Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-；
Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；
A为与所述二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，这些氨基酸残基均任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2。
2.根据权利要求1所述的肽-树脂结合物，其具有式(2'a)：
其中：
n为1和10之间的整数；
A、X、Y、R1和R2的定义与权利要求1中的相同；并且
Pr1为保护基团，其正交于A与氨基官能团之间的键。
3.根据权利要求1或2所述的肽-树脂结合物，其中X为选自Gly、Pro、D-Ala、Azagly、Leu、Val、Cys和Tyr中的氨基酸，或其两种或更多种的组合。
4.根据权利要求1至3中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中X选自Gly、Pro、D-Ala、Azagly、Leu、Val、Cys、Tyr、Pro-Gly、Pro-Azagly、Pro-D-Ala和Pro-Val。
5.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中Dia为选自L-Dap、D-Dap、L-Dab、D-Dab、L-Orn、D-Orn、L-Lys和D-Lys中的二氨基酸。
6.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中Dia选自L-Orn、D-Orn、L-Lys和D-Lys。
7.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中Dia为L-Orn。
8.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中A为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂、和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的能TFA裂解的聚合物树脂。
9.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中Pr1为选自Fmoc、Boc、Cbz、Npys和Alloc中的正交保护基团。
10.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中Pr1为Fmoc。
11.根据权利要求1至10中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其选自以下：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[2]Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys(树脂)-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Orn(树脂)-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Orn(树脂)-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Om(树脂)-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Orn(树脂)-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Orn(树脂)-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-(B-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Orn(树脂)-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Orn(树脂)-Pro-D-Ala-NH2；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys(树脂)-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(树脂)-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Orn(树脂)-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Orn(树脂)-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(树脂)-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-IIe-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Orn(树脂)-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Orn(树脂)-Tyr-NH2；
以及这些结合物的盐，
其中，所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的能TFA裂解的聚合物树脂。
12.一种肽-树脂结合物，其选自如下这些：
其中，所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的能TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团。
13.根据权利要求12所述的肽-树脂结合物，其中Pr1为保护基团。
14.根据权利要求13所述的肽-树脂结合物，其中Pr1为Fmoc保护基团。
15.根据权利要求12至14中的任意一项所述的肽-树脂结合物，其中所述树脂为三苯甲基树脂或4-甲氧基-三苯甲基树脂。
16.一种制备具有式(2)的肽-树脂结合物的方法：
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键；或者为任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基均任选地被保护；
Dia为天然二氨基酸或非天然二氨基酸；
A为与所述二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的肽，这些氨基酸残基均任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2；
所述方法包括在碱存在的条件下，于合适的溶剂中使式(1)的肽酰胺与合适的树脂卤化物反应的步骤，
Pr1-Y-Dia-X-NR1R2
式(1)
其中Pr1、Dia、X、Y、R1和R2的定义如上所述。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述卤化物选自氯化物、溴化物和碘化物，所述溶剂选自DCM、DCE、DMF、NMP、THF、DME及其混合物，所述碱选自DIPEA、NMM、DBU、吡啶、DMAP和TEA。
18.一种由式(2)的肽-树脂结合物制备含有精氨酸的肽或者其盐的方法，
其中：
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
Y为直接结合键；或者为任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至200个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，其中这些氨基酸残基均任选地被保护；
Dia为鸟氨酸；
A为与二氨基酸的侧链氨基官能团结合的聚合物树脂；
X为任选被保护的天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基；或者为包含2至15个天然氨基酸残基或非天然氨基酸残基的天然肽或合成肽，这些氨基酸残基均任选地被保护；
R1和R2各自独立地选自H、烷基、芳基、芳烷基、NH2和NH-CO-NH2；
所述方法包括如下步骤：
(a)将所述式(2)的肽-树脂结合物中的N端α-氨基官能团脱保护，以除去保护基团Pr1；
(b)使具有游离或活化的羧酸官能团的、至少N端被保护的氨基酸或肽与步骤(a)所述的脱保护的α-氨基官能团偶联，从而使式(2)的化合物延长，
(c)任选地将步骤(a)和(b)重复一次或多次，其中至少N端被保护的氨基酸或肽与前一步骤(b)中所述的至少N端被保护的氨基酸或肽相同或不同；
(d)使所得到的肽与A裂解；
(e)将步骤(d)获得的肽的鸟氨酸残基(Dia)的侧链进行胍基化；
(f)任选地将步骤(d)之后剩余的所有保护基团除去；
(g)分离所获得的肽并任选地将其纯化。
19.根据权利要求18所述的方法，其中Pr1为选自由Fmoc、Boc、Cbz、Npys和Alloc所构成的组中的正交保护基团。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中步骤(b)和(c)中的所述N端被保护的氨基酸或肽为被Fmoc保护的氨基酸或肽。
21.根据权利要求20所述的方法，其中最后重复的步骤(c)中的至少N端被保护的氨基酸或肽被与Fmoc正交的保护基团保护。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述正交保护基团为Boc。
23.根据权利要求18至22中的任意一项所述的方法，其中A为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的树脂。
24.根据权利要求18至23中的任意一项所述的方法，其中步骤(d)包括通过酸处理来使所述肽与树脂裂解。
25.根据权利要求18至24中的任意一项所述的方法，其中步骤(e)包括利用选自1H-吡唑-1-甲脒2、1-H-1,2,4-三唑-甲脒、三氟甲磺酰基胍和苯并三唑-1-甲脒对甲苯磺酸盐中的胍基化试剂对所述肽进行处理。
26.根据权利要求18至25中的任意一项所述的方法，其中所述式(2)的肽-树脂结合物选自如下这些：
其中，所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的能TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团。
27.根据权利要求18至26中的任意一项所述的方法，其中所述式(2)的肽-树脂结合物选自如下这些：
其中，所述树脂为三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂。
28.根据权利要求18至27中的任意一项所述的方法，所述方法用于制备选自如下这些的肽：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg8-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和其药学可接受的盐。
29.根据权利要求18至28中的任意一项所述的方法，其还包括通过根据权利要求16或17所述的方法来制备所述具有式(2)的肽-树脂结合物的步骤。
30.一种由式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物制备肽或者肽的盐的方法，
其中所述树脂为选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂、和4-甲氧基-三苯甲基树脂中的能TFA裂解的聚合物树脂；并且
Pr1选自H、烷基、芳基、芳烷基、酰基、芳酰基和保护基团；
所述方法包括如下步骤：
(a)将所述式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物的N端α-氨基官能团脱保护，以除去保护基团Pr1；
(b)使具有游离或活化的羧酸官能团的、至少N端被保护的氨基酸或肽与步骤(a)中的所述脱保护的α-氨基官能团偶联，从而使式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的化合物延长，
(c)任选地将步骤(a)和(b)重复一次或多次，其中至少N端被保护的氨基酸或肽与前一步骤(b)中的所述至少N端被保护的氨基酸或肽相同或不同；
(d)使所得到的肽与所述树脂裂解；
(e)任选地对步骤(d)中获得的肽进行胍基化；
(f)任选地将步骤(d)之后剩余的所有保护基团除去；
(g)分离所获得的肽并任选地将其纯化。
31.根据权利要求30所述的方法，其中Pr1为选自由Fmoc、Boc、Cbz、Npys和Alloc所构成的组中的正交保护基团。
32.根据权利要求30或31所述的方法，其中步骤(b)和(c)中的所述N端被保护的氨基酸或肽为被Fmoc保护的氨基酸或肽。
33.根据权利要求32所述的方法，其中最后重复的步骤(c)中的至少N端被保护的氨基酸或肽被与Fmoc正交的保护基团保护。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述正交保护基团为Boc。
35.根据权利要求30至34中的任意一项所述的方法，其中所述树脂选自三苯甲基树脂、2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基-三苯甲基树脂和4-甲氧基-三苯甲基树脂。
36.根据权利要求30至35中的任意一项所述的方法，其中步骤(d)包括通过酸处理使所述肽与所述树脂裂解。
37.根据权利要求30至36中的任意一项所述的方法，其包括利用选自1H-吡唑-1-甲脒2、1-H-1,2,4-三唑-甲脒、三氟甲磺酰基胍和苯并三唑-1-甲脒对甲苯磺酸盐中的胍基化试剂对所述肽进行处理。
38.根据权利要求30至37中的任意一项所述的方法，其中所述肽-树脂结合物选自如下这些：
其中所述树脂为三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂。
39.根据权利要求30至38中的任意一项所述的方法，所述方法用于制备选自如下这些的肽：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2乙酸盐；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt乙酸盐；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2乙酸盐；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2乙酸盐；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2乙酸盐；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
40.根据权利要求30至39中的任意一项所述的方法，还包括通过权利要求16或17所述的方法制备所述式(2b)、(2c)、(2d)、(2e)或(2f)的肽-树脂结合物的步骤。
41.根据权利要求1至15中任意一项所述的结合物在肽的制备中的应用，所述肽选自如下这些：
[1]3-巯基丙酰基-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[2]Arg8-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2；
[3]H-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2；
[4]H-Gly-Gly-Gly-Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2；
[5]3-巯基丙酰基-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2；
[6]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[7]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；
[8]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2；
[9]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[10]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[11]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[12]Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt；
[13]Ac-D-2-Nal-4-氯-D-Phe-β-(3-吡啶基)-D-Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[14]Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Hci-Nle-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
[15]H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2；
[16]Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[17]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；
[18]H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2；
[19]Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2；
[20]H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2；和
[21]H-Tyr-Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
42.一种肽，其通过或能够通过根据权利要求18至39中任意一项所述的方法获得。
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