CN105267205A

CN105267205A - 治疗胰脏癌的医药配方及其应用

Info

Publication number: CN105267205A
Application number: CN201410292707.4A
Authority: CN
Inventors: 邱紫文; 韩鸿志; 林欣荣; 周怡雯; 黄茂轩
Original assignee: China Medical University
Current assignee: China Medical University
Priority date: 2014-06-04
Filing date: 2014-06-25
Publication date: 2016-01-27
Anticipated expiration: 2034-06-25
Also published as: EP2952184B1; JP2015229675A; JP5952890B2; TWI522099B; TW201545744A; ES2738512T3; US20150352213A1; EP2952184A1; CN105267205B; US9872912B2

Abstract

一种使用一医药配方于制备药剂的用途，其中该药剂用于治疗胰脏癌，且该医药配方包含(Z)-亚丁基苯酞((Z)-butylidenephthalide)，且实质上不包含(E)-亚丁基苯酞((E)-butylidenephthalide)。

Description

治疗胰脏癌的医药配方及其应用

技术领域

本发明是关于一种含有(Z)-亚丁基苯酞((Z)-butylidenephthalide)的医药配方的应用，尤其是关于该医药配方于治疗胰脏癌的应用。

背景技术

胰脏为位于生物体后腹膜腔的一柔软长形腺体。一般而言，人体的胰脏长度约15公分至20公分，宽度约2.5公分，重量约75克至100克。“胰脏癌”是指由胰脏细胞所生成的恶性肿瘤。在所有胰脏癌中，胰脏管腺癌占约90％，且其中有80％是发生在胰脏的前端。

胰脏癌通常好发于中老年人，且男性罹病率约为女性的二倍。初期的胰脏癌通常是不会表现明显症状，但随着胰脏肿瘤渐渐扩大，病患会陆续发生上腹痛、背痛、黄疸、体重减轻、及下痢等症状。此外，典型的胰脏癌会出现组织纤维化、以及周围组织粘连现象，且由于胰脏癌细胞经常发生渗透至周边神经及/或侵袭血管的现象，因此，几乎90％以上的胰脏癌，发现时都已无法通过手术治疗。胰脏癌病患五年的存活率低于5％，为一预后极差的疾病。

目前临床上对于胰脏癌的治疗方式主要包括外科手术、化学药物治疗、及放射线照射治疗等。一般而言，若胰脏癌病患的病况尚能进行手术时，则会以手术为优先治疗方式，以提高病患存活机率；关于化学药物治疗方法，通常是依胰脏癌临床分期不同，选择单一或多种药物组合来进行治疗，例如使用5-fluorouracil(5-FU)或吉西他滨(gemcitabine)等抗代谢药物(anti-metabolites)，但化学药物治疗效果仍偏低，且在胰脏癌复发的情况中，传统化学治疗亦几乎无效；至于放射线照射治疗，由于无法治愈非切除性胰脏肿瘤，故放射线照射治疗通常仅作为治疗胰脏癌过程中的辅助性治疗。鉴于此，目前临床上仍需要一种可治疗胰脏癌的药物。

本案发明人研究后发现，(Z)-亚丁基苯酞(Z-butylidenephthalide，Z-BP)可抑制胰脏癌细胞生长，而可用于治疗胰脏癌。尤其，当以缓释剂型使用时，可于胰脏癌病患进行手术开刀治疗之后，将含有(Z)-亚丁基苯酞的缓释药剂植入病患胰脏癌区域，达成局部稳定高剂量，渗透周围胰脏组织，以杀死“侵润性残余癌细胞”，达到治疗效果。

发明内容

本发明的一个目的，在于提供一种使用一医药配方于制备药剂的用途，其中该药剂是用于治疗胰脏癌，且该医药配方包含(Z)-亚丁基苯酞((Z)-butylidenephthalide，Z-BP)，且实质上不包含(E)-亚丁基苯酞((E)-butylidenephthalide，E-BP)。较佳地，于该医药配方中，(Z)-亚丁基苯酞是并于生物可相容聚合物基质中，以缓释剂型方式提供该药剂。

本发明的另一目的，在于提供一种于一个体中治疗胰脏癌的方法，包含投予该个体有效量的一医药配方，其中该医药配方包含(Z)-亚丁基苯酞，且实质上不包含(E)-亚丁基苯酞。较佳地，于该医药配方中，(Z)-亚丁基苯酞是并于生物可相容聚合物基质中，以缓释剂型方式使用该医药配方。

本发明的详细技术内容及部分实施方式，将描述于以下内容中，以供本发明所属领域具通常知识者据以明了本发明的特征。

附图说明

图1A为显示(E)-亚丁基苯酞对于胰脏癌细胞株D细胞存活率的影响的长条图；

图1B为显示(Z)-亚丁基苯酞对于胰脏癌细胞株的细胞存活率的影响的长条图；

图2为制备p(CPP-SA)共聚物的流程图；

图3为p(CPP-SA)-Z-BP圆盘的照片；

图4为p(CPP-SA)-Z-BP圆盘于第0至25天持续缓慢释放Z-BP的吸光值曲线图；

图5A为显示p(CPP-SA)-Z-BP降低PACA-2细胞存活率的长条图；

图5B为显示p(CPP-SA)-Z-BP诱发PACA-2细胞雕亡的照片；

图6A显示经Z-BP处理不同时间后，胰脏癌细胞株内细胞雕亡相关的基因表现量增加的电泳图；

图6B显示经不同浓度Z-BP处理后，胰脏癌细胞株内细胞雕亡相关基因表现量增加的电泳图；

图7A显示以Nurr1微小RNA处理PACA-2，而抑制经Z-BP诱导的Nurr1表现量的电泳图；

图7B显示以Nurr1微小RNA处理PACA-2，而回复经Z-BP抑制的细胞存活率的长条图；

图8A为显示Z-BP处理可增加胰脏癌细胞中Nur77基因相关路径中相关蛋白质的表现量的电泳图；

图8B为显示Z-BP处理可增加胰脏癌细胞中细胞雕亡路径相关蛋白质的表现量的电泳图

图9为显示将p(CPP-SA)-Z-BP通过皮下植入小鼠体内后，胰脏肿瘤尺寸的曲线图；以及

图10为显示将p(CPP-SA)-Z-BP通过皮下植入小鼠体内后，小鼠体重的曲线图。

具体实施方式

以下将具体地描述根据本发明的部分具体实施态样；只是，在不背离本发明精神下，本发明尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将本发明保护范围解释为限于说明书所陈述的内容。此外，除非文中有另外说明，于本申请文件中所使用的“一”、“该”及类似用语应理解为包含单数及复数形式；所谓“治疗”是指投予一有效量的医药配方给病患，该病患有肿瘤、肿瘤征兆、由肿瘤衍生的疾病或症状、或为易患肿瘤的体质，以达到治愈、缓和、减轻、医治或改善肿瘤、肿瘤征兆、由肿瘤衍生的疾病或症状或易患肿瘤的体质的目的；所谓“有效量”，是指投予至个体时，可有效至少部分改善怀疑个体的状况的化合物数量；所谓“个体”是指哺乳动物，哺乳动物可为人类或非人的动物；所谓“毫克/公斤体重”是指个体每公斤体重所须的剂量(毫克)；所谓“缓释剂型”(controlledreleasedosageform)是指于投予至一个体后可缓慢且持续释放所含活性成分的剂型。

亚丁基苯酞(butylidenephthalide；BP)可由当归(Angelicasinensis)中萃取而得。本案发明人研究发现，于亚丁基苯酞中，相较于(E)-亚丁基苯酞，(Z)-亚丁基苯酞(即，下式(I)化合物)具有明显优异的抑制胰脏癌细胞生长的功效，可用于治疗胰脏癌：

因此，本发明提供一种医药配方，该医药配方包含(Z)-亚丁基苯酞，且实质上不包含(E)-亚丁基苯酞。适用于本发明的(Z)-亚丁基苯酞可由商业上购得(例如可购自景明化工股份有限公司，台湾)或由天然材料中萃取而得，或者由当归的氯仿萃取物分离出来。此外，于使用萃取分离的(Z)-亚丁基苯酞以前，可进一步采用例如骤沸塔层析法(flashcolumnchromatography)、高效液相层析法、或结晶法的纯化方法以处理(Z)-亚丁基苯酞，提高(Z)-亚丁基苯酞的纯度。

视需要地，可于本发明的医药配方中更包含一生物可相容的聚合物基质，(Z)-亚丁基苯酞并含于该基质中，从而以缓释剂型使用该医药配方，提供持续性治疗胰脏癌的效果。合宜的生物可相容的聚合物基质通常为疏水性且具合宜的降解特性。较佳地，该生物可相容的聚合物基质是选自以下群组：聚(乳酸-共聚合-乙醇酸)、聚葡萄胺糖(chitosan)、胶原、水凝胶、聚酸酐、以及前述各项的任意组合。通过缓释剂型的使用方式，可于该医药配方投予至生物体内后，在一段长时间内(例如，20、30、35、40、50、60天内)在投药部位缓慢且持续释放出(Z)-亚丁基苯酞至邻近组织，以达到持续性治疗胰脏癌的功效。

于本发明一具体实施态样中，是将(Z)-亚丁基苯酞并含于聚酸酐中，以缓释剂型方式使用(Z)-亚丁基苯酞。较佳地，该聚酸酐是以下单体(A)与单体(B)的共聚合物：

其中m为1至10的整数，且n为0至20的整数。较佳地，m为2至8的整数，且n为3至10的整数。此外，较佳地，单体(A)的二苯环上的羧基是同时位于邻位、间位或对位的位置，更佳的是同时位于对位的位置。

举例言之，但不以此为限，单体(A)可以为双(对羧基苯氧基)乙烷、双(邻羧基苯氧基)乙烷、双(间羧基苯氧基)乙烷、双(对羧基苯氧基)丙烷、双(邻羧基苯氧基)丙烷、双(间羧基苯氧基)丙烷、双(对羧基苯氧基)丁烷、双(邻羧基苯氧基)丁烷、双(间羧基苯氧基)丁烷、双(对羧基苯氧基)戊烷、双(邻羧基苯氧基)戊烷、双(间羧基苯氧基)戊烷、双(对羧基苯氧基)己烷、双(邻羧基苯氧基)己烷、双(间羧基苯氧基)己烷、双(对羧基苯氧基)庚烷、双(邻羧基苯氧基)庚烷、双(间羧基苯氧基)庚烷、双(对羧基苯氧基)辛烷、双(邻羧基苯氧基)辛烷、以及双(间羧基苯氧基)辛烷之一或多者；较佳为双(对羧基苯氧基)乙烷、双(对羧基苯氧基)丙烷、双(对羧基苯氧基)丁烷、双(对羧基苯氧基)戊烷、双(对羧基苯氧基)己烷、双(对羧基苯氧基)庚烷、以及双(对羧基苯氧基)辛烷之一或多者。于本发明一具体实施态样中，是使用双(对羧基苯氧基)丙烷为单体(A)。

适用于本发明的单体(B)可以为，举例言之，但不以此为限，以下之一或多者：丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、以及癸二酸。于本发明一具体实施态样中，是使用辛二酸为单体(B)。

较佳地，于作为生物可相容的聚合物基质的聚酸酐中，单体(A)与单体(B)的含量比，以莫耳比计，为约1：2至约1：10，更佳为约1：3至约1：6。此外，较佳地，是以单体(A)与单体(B)的嵌段共聚物为该聚合物基质。于本发明一具体实施态样中，所使用的聚合物基质是由双(对羧基苯氧基)丙烷与癸二酸以1：4的莫耳比所提供的嵌段共聚物，其为聚酸酐。

适用于本发明医药配方的生物可相容聚合物可为商业上购得或通过本发明领域所知的合成方法制备而得。以由双(对羧基苯氧基)丙烷与癸二酸所提供的聚酸酐为例，是分别将癸二酸以及双(对羧基苯氧基)丙烷在醋酸酐回流，而单独获得癸二酸预聚物以及双(对羧基苯氧基)丙烷预聚物，接着，再通过熔融聚缩合法将该二预聚物共聚合而提供一嵌段共聚物(简称『p(CPP-SA)共聚物』)，其为聚酸酐。所涉熔融聚缩合法，可参见Domb等人，JournalofPolymerscience,1987,25:3373-3386，该文献全文并于此处以供参考。

于本发明的医药配方中，可视实际应用需求，调整配方中的(Z)-亚丁基苯酞的比例。举例言之，以该医药配方的总重为基准，(Z)-亚丁基苯酞的重量百分比可例如为约1％至约40％，较佳为约2％至约30％。

本发明医药配方可用以提供呈任何合宜形式的药剂，从而以任何合宜的方式施用该医药配方。举例言之，但不以此为限，所提供的药剂可呈圆盘(wafer)、粉末、膜片、薄片、棒状、微球、纳米球、糊状、或胶状的形态。此外，该医药配方可通过例如口服、皮下植入、组织间植入、胰脏内植入、鼻腔或静脉内等投药方式施用至个体上。

以制备适于口服投药的剂型为例，本发明医药配方中可另含有不会不利影响所含活性成分的活性的医药可接受载剂，例如：溶剂、油性溶剂、稀释剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、乳化剂、抗氧化剂、粘合剂、润滑剂、吸湿剂等。可利用任何合宜的方法，将该医药配方制成适于口服投药的剂型，例如：锭剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、乳剂、及酊剂等等。

至于制备适于皮下或静脉注射的剂型，则可于该医药配方中另含有一或多种例如等张溶液、盐类缓冲液(如磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)、增溶剂、乳化剂、以及其他载剂等成分，以制成如静脉输注液、乳剂静脉输注液、干粉注射剂、悬液注射剂、或干粉悬液注射剂等。

视使用形式及用途而定，本发明医药配方可包含一或多种医药上可接受的载剂。除了上述载剂以外，本发明医药配方可视需要更含有其他调味剂、调色剂、着色剂等添加剂，以提高所得药剂服用时的口适感及视觉感受；另可添加合宜用量的保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等，以改善所得药剂的储存性。视需要地，可于该医药配方中并含一或多种其他活性成分，例如抗氧化剂(如维他命E)、化学药剂、免疫调节剂(immunemodulators)等，以进一步加强所得药剂的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度，只要该其他活性成分对(Z)-亚丁基苯酞的效益没有不利的影响即可。

在本发明医药配方含有所述生物可相容的聚合物的情况中，为使医药配方可于投予至生物体内之后，缓慢释放所含(Z)-亚丁基苯酞至投药部位周围的组织，以达到局部稳定高剂量治疗功效，本发明医药配方较佳是呈供皮下植入、组织间植入、或胰脏内植入的剂型，例如圆盘(wafer)，以使该医药配方可供直接植入至患者体内的肿瘤(例如，胰脏肿瘤)周围，从而于一段特定时间内(例如，20、30、35、40、50、60天内)，缓慢且持续的释放出(Z)-亚丁基苯酞，以达到持续治疗胰脏癌及/或降低胰脏癌复发率的功效。

以制备适于皮下植入、组织间植入、或胰脏内植入的剂型为例，可于本发明医药配方中另含有不会不利影响所含活性成分的活性的医药可接受载剂，例如赋形剂、安定剂、缓冲剂等，以制成一可供皮下植入、组织间植入、或胰脏内植入的剂型，例如圆盘、锭剂、丸剂、胶囊等。于根据本发明的一实施态样中，是将(Z)-亚丁基苯酞与p(CPP-SA)共聚物混合，并将所得混合物溶于二氯甲烷中，再将混合物干燥形成粉末，接着，将粉末装填于一模具中，于轻微压力下压缩该干燥粉末，以形成一供皮下植入、组织间植入、或胰脏内植入的圆盘剂型。于胰脏癌的病患完成肿瘤切割之后，将该圆盘剂型的含有(Z)-亚丁基苯酞与p(CPP-SA)共聚物的医药配方植入病患的患部，以更彻底治疗胰脏癌、降低胰脏癌复发率。有关前述制备圆盘剂型的方法可参见实施例的说明以及Walter等人，CancerRes.1994,54(8):2207-12，该文献全文并于此处以供参考。

可以一日一次、一日多次、或数日一次等不同投药频率施用由本发明医药配方所制备的药剂，端视投予个体的需求而异。举例言之，当使用于人体以治疗胰脏癌时，药剂的用量，以(Z)-亚丁基苯酞计，为每天约10毫克/公斤体重至约1000毫克/公斤体重，较佳为每天约50毫克/公斤体重至约500毫克/公斤体重。但是，对于急性患者而言，其用量可视实际需要而酌增，例如增加至数倍或数十倍。

本发明另提供一种于一个体中治疗胰脏癌的方法，包含投予该个体有效量的一医药配方，其中该医药配方包含(Z)-亚丁基苯酞((Z)-butylidenephthalide)，且实质上不包含(E)-亚丁基苯酞((E)-butylidenephthalide)。其中，该医药配方的组成及特性、以及(Z)-亚丁基苯酞((Z)-butylidenephthalide)的功效及用量，皆如前文所述。

兹以下列实施例进一步例示说明本发明。其中该等实施例仅提供作为说明，而非用以限制本发明的保护范围。

[实施例]

[实施例1](Z)-亚丁基苯酞对不同胰脏癌细胞株的致死效果

使用MTT(噻唑蓝，3-[4,5-dimethylthiahiazo-2-y1]-2,4-dipheny-tetrazoliumbromide)细胞存活分析方法来研究(Z)-亚丁基苯酞对不同胰脏癌细胞株的致死效果。于一96孔微量孔盘中，每个孔中分别培养3×10³个人类胰脏癌细胞株PANC-1及PACA-2，培养至隔天再将不同浓度的(Z)-亚丁基苯酞(0微克/毫升、10微克/毫升、25微克/毫升、50微克/毫升、75微克/毫升、或100微克/毫升)或(E)-亚丁基苯酞(0微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、200微克/毫升、400微克/毫升、或800微克/毫升)、或50微莫耳浓度吉西他滨(传统用于治疗胰脏癌的药物，作为对照组)沿96孔微量孔盘的内壁滴入孔中。培养24小时后，将培养液吸出，加入含500微克/毫升MTT的培养液(200微升)继续培养4小时，将培养液吸出后，加入200微升二甲基亚砜，然后用微量孔盘分光光度计测量其在570纳米波长下的吸光值，据此计算细胞的存活率，以及(Z)-亚丁基苯酞与(E)-亚丁基苯酞对各胰脏癌细胞株达到50％致死率的浓度值(IC₅₀)。试验结果显示于图1A((E)-亚丁基苯酞)及图1B((Z)-亚丁基苯酞)。

由图1A及图1B所示的数据计算可知，(E)-亚丁基苯酞对于PANC-1胰脏癌细胞株的IC₅₀为约257.1微克/毫升(约1367微莫耳浓度)，对PACA-2胰脏癌细胞株的IC₅₀为约162.5微克/毫升(约864.5微莫耳浓度)；而(Z)-亚丁基苯酞对于PANC-1胰脏癌细胞株的IC₅₀为约45微克/毫升(约234微莫耳浓度)，对PACA-2胰脏癌细胞株的IC₅₀为约25微克/毫升(约133微莫耳浓度)。前述实验结果显示，(Z)-亚丁基苯酞对于胰脏癌细胞株的IC₅₀远低于(E)-亚丁基苯酞。

[实施例2]制备含有(Z)-亚丁基苯酞的缓释剂型

(1)制备SA预聚物

以乙醇再结晶癸二酸(SA)单体两次。添加2.7克SA单体于60毫升醋酸酐中，于135℃至140℃下真空(10^-4托耳)下回流30分钟，接着，移除未反应的醋酸酐，以获得SA预聚物。使SA预聚物在真空下于60℃下干燥，接着溶于干燥甲苯中，再将此溶液与无水乙醚与石油醚的混合物(1：1体积/体积)以体积比1：10的量混合，静置过夜，以沈淀SA预聚物(10：1体积/体积)。接着，移除乙醚及石油醚，在真空下干燥SA预聚物。

(2)制备CPP预聚物

混合3克双(对羧基苯氧基)丙烷(CPP)单体与50毫升醋酸酐，于150℃下在真空(10^-4托耳)下回流30分钟。冷却后，过滤该反应混合物。通过移除未反应的醋酸酐而浓缩滤液，再于0℃使该CPP预聚物结晶。接着，移除未反应的醋酸酐，以获得CPP预聚物。以醚清洗该CPP预聚物，并在真空下干燥。接着，将二甲基甲酰胺及无水乙醚(体积比为二甲基甲酰胺：无水乙醚＝1：9)依序添加至该CPP预聚物。经过12小时之后，移除二甲基甲酰胺及乙醚，再于真空下干燥该CPP预聚物晶体。

(3)制备p(CPP-SA)共聚物

将莫耳浓度比例20：80的CPP预聚物及SA预聚物填入一玻璃试管(2×20公分)内，于180℃下在一油浴内加热1分钟，再将压力降至10^-4毫米汞柱。在整个聚合过程中，每15分钟消除真空。以二氯甲烷清洗该试管，再添加石油醚，以使CPP预聚物及SA预聚物的共聚物(简称『p(CPP-SA)共聚物』)沈淀出来。接着，以无水乙醚清洗p(CPP-SA)共聚物，并于真空之下干燥。前述制备流程如图2所示。

借助红外光谱(IR)及核磁共振光谱(1HNMR)来观察所制得的p(CPP-SA)共聚物的特征(数据未显示)。实验结果显示，在p(CPP-SA)共聚物的IR光谱图中，于1812.76cm-1下可观察到酸酐键的特征信号。在p(CPP-SA)共聚物的1HNMR光谱图中，于6.9至8.2ppm下可观察到CPP的芳香族部分的特征信号，且于1.3ppm下可测得SA的亚甲基部分的特征信号。此外，根据该1HNMR光谱图中的CPP及SA的特征峰强度，鉴别出该p(CPP-SA)共聚物中的CPP及SA的莫耳比例为约1：4至约1：5。

(4)制备p(CPP-SA)-Z-BP医药配方

以(Z)-亚丁基苯酞(购自景明化工股份有限公司，台湾)的重量比例占总重0重量％、17.5重量％、或25重量％的比例，混合p(CPP-SA)共聚物及(Z)-亚丁基苯酞，以提供含有p(CPP-SA)共聚物与(Z)-亚丁基苯酞的混合物。将该混合物以10％(重量/体积)的浓度溶于二氯甲烷中。在真空下干燥该溶液72小时，获得一干燥粉末。利用不锈钢模(内径，13毫米)在CarverPress的轻微压力之下于200psi下压缩该干燥粉末，以形成一呈圆盘(100毫克/圆盘)，该圆盘含有(Z)-亚丁基苯酞与p(CPP-SA)共聚物的医药配方(简称『p(CPP-SA)-Z-BP』)。圆盘外观如图3所示。

[实施例3]p(CPP-SA)-Z-BP医药配方的药物释放动力学试验

将实施例2所制备的p(CPP-SA)-Z-BP圆盘(含有17.5％Z-BP或25％Z-BP)置于添加有1.0毫升0.1莫耳浓度磷酸盐缓冲食盐水(pH7.4)及1.0毫升正辛醇的闪烁瓶内，并于37℃下培养。于各不同时间点以新鲜缓冲液替换该溶液，并利用一光谱仪测量溶液于310纳米波长下的吸光度，以测量(Z)-亚丁基苯酞于该缓冲液中的浓度。前述试验方法可参见Weingart等人，Int.J.Cancer.1995,62(5):605-9，该文献全文并于此处以供参考。

结果如图4所示，p(CPP-SA)-Z-BP圆盘可于0至144小时持续缓慢释放，显示p(CPP-SA)-Z-BP圆盘可用以提供(Z)-亚丁基苯酞的缓释剂型。因此，当将p(CPP-SA)-Z-BP圆盘植入生物体内，Z-BP可缓慢且持续释放至邻近的组织，达到持续治疗的功效。

[实施例4]细胞实验：p(CPP-SA)-Z-BP医药配方的细胞毒性作用(cytotoxiceffect)

进行细胞培养试验，分别以含有0重量％(控制组)、17.5重量％、或25重量％(Z)-亚丁基苯酞的p(CPP-SA)-Z-BP处理人类胰脏癌PACA-2细胞株24小时后，观察肿瘤细胞形态与细胞存活率。

图5A显示，相较于控制组(即，不含(Z)-亚丁基苯酞的p(CPP-SA))，含有17.5重量％或25重量％(Z)-亚丁基苯酞的p(CPP-SA)-Z-BP可有效降低PACA-2细胞株的存活率；图5B显示PACA-2细胞株经过17.5重量％或25重量％(Z)-亚丁基苯的p(CPP-SA)-Z-BP处理后会发生细胞雕亡。前述实验结果显示，本发明p(CPP-SA)-Z-BP医药配方可有效抑制胰脏癌细胞生长。

[实施例5]细胞实验：Z-BP所诱发的细胞凋亡作用

(1)mRNA表现量分析

已知细胞内孤儿受体-1(orphanreceptors，NOR-1)、Nurr1、及Nur77的表现量的表现量上升与细胞雕亡作用有关。本实验以100微克/毫升Z-BP处理PANC-1及PACA-2胰脏癌细胞株，分别于处理0、1、3、6、及24小时后，进行反转录聚合酶连锁反应实验(图6A)；或者，以不同浓度升Z-BP处理PANC-1及PACA-2胰脏癌细胞株3小时后，进行反转录聚合酶连锁反应实验(图6B)，以检测Z-BP处理对于胰脏癌细胞株内NOR-1、Nurr1及Nur77的基因表现量的影响。实验以甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为控制组。

如图6A所示，PANC-1及PACA-2胰脏癌细胞株在经过Z-BP处理后1至3小时后，细胞内NOR-1及Nurr1的mRNA表现量明显提升；如图6B所示，PANC-1及PACA-2胰脏癌细胞株在经过不同浓度Z-BP处理3小时后，细胞内Nurr1的mRNA表现量明显提升。显示Nurr1表现量提升可能是Z-BP于PANC-1及PACA-2细胞内诱发细胞凋亡的初期现象。

(2)微小RNA干扰试验

利用微小RNA干扰技术抑制人类胰脏癌细胞PACA-2中Nurr1的RNA的表现后，再以133微莫耳浓度Z-BP处理细胞。接着，进行反转录聚合酶连锁反应，以检测细胞中Nurr1RNA表现量的变化。实验结果如图7A所示，当以50奈莫耳浓度Nurr1微小RNA处理人类胰脏癌细胞PACA-2后，可抑制约50％经Z-BP诱导的Nurr1，显示Z-BP处理确实会增加Nurr1的表现量。

此外，以Nurr1微小RNA(10奈莫耳浓度或50奈莫耳浓度)处理人类胰脏癌细胞PACA-2后，再以133微莫耳浓度Z-BP处理细胞。接着，以如实施例4所述的细胞实验方法，检测细胞存活率。实验结果如图7B所示，当以50奈莫耳浓度Nurr1微小RNA处理人类胰脏癌细胞PACA-2后，可回复经Z-BP抑制的PACA-2的细胞存活率，显示Z-BP处理确实会造成PACA-2的细胞存活率下降。(3)西方氏墨渍法试验

本实验以Z-BP处理人类胰脏癌细胞PACA-2不同时间后(0、30、60、120、或180分钟)，利用西方氏墨渍法分析Z-BP所诱发的Nur77基因所涉的信息传递路径中相关蛋白质的表现量变化，包括Pan-PKC、AKT、ERK、及JNK等蛋白质(图8A)；以及分析与细胞雕亡机制相关的蛋白质的表现量，包括聚腺苷二磷酸核醣聚合酶((poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)、细胞质聚腺苷二磷酸核醣聚合酶(cPARP)及凋亡蛋白酶-3等蛋白质(图8B)。实验以β-肌动蛋白作为对照组。

如图8A所示，以Z-BP处理PACA-2细胞180分钟后，PACA-2细胞内磷酸化JNK(Pi-SAPK/JNK)、及磷酸化AKT(Pi-AKT)的表现量明显上升，显示Z-BP处理会增加胰脏癌细胞中Nur77基因相关路径中蛋白的表现量。如图8B所示，以Z-BP处理PACA-2细胞24小时或48小时后，PACA-2细胞中凋亡蛋白酶-3、PARP及cPARP的蛋白质表现量上升，显示Z-BP处理会增加胰脏癌细胞中细胞雕亡路径相关蛋白质的表现量。

[实施例6]动物实验：p(CPP-SA)-Z-BP降低小鼠体内胰脏肿瘤的尺寸

使免疫缺陷裸小鼠(nudemice)(6只/组)接受1×10⁶个PACA-2人类胰脏癌细胞的皮下背部植入体(subcutaneousbackimplants)。接着，由PACA-2细胞植入部位分别将含有0％(控制组)、17.5％、或25％Z-BP的p(CPP-SA)-Z-BP通过皮下植入小鼠体内。之后，每两天利用测径器测量小鼠体内的肿瘤大小并量测小鼠体重。肿瘤体积的计算方式为：长度×高度×宽度×0.5236(L×H×W×0.5236)(立方毫米)。实验结果显示于图9及图10。

如图9所示，控制组小鼠(经不含Z-BP的p(CPP-SA)-Z-BP处理的小鼠)于实验进行30天后，小鼠体内胰脏肿瘤的相对尺寸快速扩大至超过1000，而经含有17.5％或25％Z-BP的p(CPP-SA)-Z-BP治疗的实验组小鼠体内肿瘤的相对尺寸则为约200，但是各组小鼠的体重则无明显变化(图10)。前述实验结果显示，p(CPP-SA)-Z-BP治疗可有效抑制小鼠体内胰脏肿瘤生长。

以上实验结果显示，本发明的含有(Z)-亚丁基苯酞的医药配方可有效抑制胰脏癌细胞生长，故可用于治疗胰脏癌。此外，本发明医药配方可另含一疏水性生物可相容聚合物，以形成一缓释剂型，提供缓慢且持续的治疗胰脏癌的功效。

上述实施例仅是用以例示说明本发明的原理及功效，而非用于限制本发明。本领域普通技术人员均可在不违背本发明的技术原理及精神的情况下，对上述实施例进行修改及变化，但均应当包含在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种使用包含(Z)-亚丁基苯酞的一医药配方于制备用以治疗胰脏癌的药剂的用途，其特征是，该医药配方实质上不包含(E)-亚丁基苯酞((E)-butylidenephthalide)。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征是，该医药配方更包含一生物可相容的聚合物基质，(Z)-亚丁基苯酞是并含于该基质中。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征是，该生物可相容的聚合物基质是选自以下群组：聚(乳酸-共聚合-乙醇酸)、聚葡萄胺糖(chitosan)、胶原、水凝胶、聚酸酐、以及前述各项的任意组合。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征是，该生物可相容的聚合物基质为一聚酸酐，其是下式单体A与单体B的共聚物：

其中

m为1至10的整数，且

n为0至20的整数。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征是，m为2至8的整数，且n为3至10的整数。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征是，该生物可相容的聚合物基质是单体A与单体B的嵌段共聚物。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征是，单体A为双(对羧基苯氧基)丙烷，且单体B为癸二酸。

8.根据权利要求4所述的用途，其特征是，单体A与单体B的莫耳比为1：2至1：10。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征是，单体A与单体B的莫耳比为1：3至1：6。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其特征是，以该医药配方的总重为基准，(Z)-亚丁基苯酞的重量百分比为1％至40％。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征是，(Z)-亚丁基苯酞的重量百分比为2％至30％。

12.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其特征是，该药剂是呈圆盘、粉末、膜片、薄片、棒状、微球、纳米球、糊状、或胶状的形态。

13.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其特征是，该药剂是以如下一种或多种方式投药至一病患体内：皮下植入、组织间植入、以及胰脏内植入。

14.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其特征是，该药剂的用量，以(Z)-亚丁基苯酞计，为每天10毫克/公斤体重至1000毫克/公斤体重。

15.根据权利要求14所述的用途，其特征是，该药剂的用量，以(Z)-亚丁基苯酞计，为每天50毫克/公斤体重至500毫克/公斤体重。