RU2258509C2

RU2258509C2 - Применение олтипраза для профилактики и лечения фиброза и цирроза печени и фармацевтическая композиция, содержащая олтипраз

Info

Publication number: RU2258509C2
Application number: RU2002129873/15A
Authority: RU
Inventors: Санг Геон КИМ (KR); Санг Геон КИМ; Кеон Вук КАНГ (KR); Кеон Вук КАНГ
Original assignee: Санг Геон КИМ
Priority date: 2000-04-07
Filing date: 2001-03-02
Publication date: 2005-08-20
Also published as: CN1420772A; CN1192775C; EP1292309A4; US20030191137A1; AU3776701A; RU2002129873A; AU780161B2; ZA200207867B; WO2001076604A1; CA2404915A1; HUP0300221A3; JP2003530353A; KR100404303B1; NO20024724L; EP1292309A1; KR20010091012A; NZ521710A; HUP0300221A2; PL362965A1; NO20024724D0

Abstract

Предложено: применение олтипраза (5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тиона, ранее известного как средство против шистосомоза и канцерогенеза), для профилактики и лечения прогрессирующего фиброза и цирроза печени, для производства лекарственного средства указанного назначения, фармацевтическая композиция, содержащая олтипраз, и способ ее использования. Изобретение отличается тем, что олтипраз оказывает действие на печень и защиту от гепатотоксичности за счет ингибирования продукции β-TGF. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 10 ил., 3 табл.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к области медицины и, в частности, касается применения 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тиона (олтипраза) для профилактики и лечения фиброза и цирроза печени, а также фармацевтической композиции, содержащей олтипраз в качестве активного ингредиента.

Уровень техники

Печень играет ключевую роль в метаболизме ксенобиотиков и метаболизме эндогенных веществ и является важным органом с соответствующими ферментативными реакциями и энергетическим метаболизмом. Среди многих хронических заболеваний в Корее после сердечно-сосудистых заболеваний наиболее распространенными и угрожающими жизни болезнями являются гепатит, цирроз и рак печени. Поскольку в Корее имеется относительно большая популяция пьющих по сравнению с развитыми странами и вызванные пьянством повреждения печени встречаются довольно часто, много внимания уделяется лечению заболеваний печени. Хронические повреждения печени, вызванные вирусными инфекциями или употреблением алкоголя, зачастую приводят к циррозу или раку печени. Учитывая физиологические характеристики и значение тканей печени, а также ввиду важности лечения и профилактики заболеваний печени, существует большая потребность в окончательной разработке терапевтических и профилактических средств против повреждения печени.

Различные вещества, включая некоторые синтетические соединения и галеновые препараты, проявляют защитное действие на печень in vitro и in vivo. Известно, что силимарин (silymarin) и бетаин обладают защитным действием на печень, причем их механизм действия заключается в ингибировании цитокинов и повышении уровня глутатиона, однако от них трудно ожидать лечебного эффекта вследствие их низкой эффективности. Эти средства часто применяются в клинических испытаниях, поскольку сейчас не имеется хороших лечебных средств против заболеваний печени. Малотилат (malotilate) и его производные, которые показаны при лечении фиброза печени, защищают печень от токсических химикатов, а их вероятный механизм действия включает индукцию конъюгирующих ферментов II фазы и ингибирование цитохромов Р450. Однако эти соединения неизбирательно ингибируют некоторые цитохромы Р450 и проявляют лишь профилактическое действие.

Известно, что некоторые замещенные серосодержащие дитиолтионы, встречающиеся в природе в крестоцветных растениях, обладают защитным действием на печень. Из них олтипраз (oltipraz) применялся как лечебное средство против шистосомоза; он имеет следующую формулу:

Олтипраз повышает клеточное содержание тиолов и индуцирует экспрессию ферментов, ответственных за поддержание пула глутатиона (GSH) и детоксикацию тканей от электрофильных молекул. Олтипраз повышает активности следующих ферментов: NAD(Р)Н-хинонредуктазы, микросомной эпоксидгидроксилазы, глутатион-S-трансферазы (GST) и UDP-глюкуронилтрансферазы (UDP-GT). В частности, GST защищает печень от таких токсических химикатов, как тетрахлорид углерода или ацетаминофен (Ansher SS, Dolan P, and Bueding E. Chemoprotective effects of two dithiolthiones and of butylhydroxyanisole against carbon tetrachloride and acetaminophen toxicity. 1983, Hepatology 3, 932-935).

Кроме того, олтипраз подавляет канцерогенез, вызванный бензо[а]пиреном, NDEA и урациловым ипритом, а также индуцированный афлатоксином В1 онкогенез в печени и индуцированный азоксиметаном канцерогенез в толстой кишке (Bolton MG, Munoz A Jacobson LP, Groopman JD, Maxuitenko YY, Roebuck BD, and Kensler TW. Transient intervention with oltipraz protects against aflatoxininduced hepatic tumorigenesis. 1993, Cancer Res. 53, 3499-3504).

Известны следующие механизмы подавления канцерогенеза олтипразом. Во-первых, он повышает уровень антиоксиданта - восстановленного GSH в тканях. Во-вторых, он ингибирует биоактивацию канцерогенов такими ферментами I фазы, как цитохром Р450. В-третьих, олтипраз усиливает детоксикацию канцерогенов, индуцируя детоксикационные ферменты II фазы, включая GST и UDP-GT. В-четвертых, он ингибирует репликацию вируса иммунодефицита человека (HIV) I типа in vitro. В-пятых, он устраняет реакционноспособные промежуточные продукты в клетках путем повышения уровня тиолов и усиливает репарацию ДНК. Сообщалось, что олтипраз повышает уровень GSH в большинстве тканей и устраняет свободные радикалы, образовавшиеся при облучении или из ксенобиотиков. Также известно, что олтипраз действует как защитное средство от радиации, способствуя поддержанию клеточного гомеостаза.

Учитывая вышеприведенное описание, далее будет изложена более подробная информация. Рак представляет собой неконтролируемый рост и дифференцировку клеток, вероятно, вследствие повреждения ДНК в соматических клетках (Cancer Biology, 3 rd ed. Raymond W. Ruddon, pp.61-95, 497-507, Oxford Press). Противораковое действие химических веществ зависит главным образом от их антимутагенных свойств или от их активности по подавлению трансформации в раковые клетки или пролиферации раковых клеток. Олтипраз изучали в качестве средства для химиопрофилактики рака (Ansher et al., 1983; Bolton et al., 1993). Противораковое химиопрофилактическое действие олтипраза связано не только с ингибированием цитохрома Р450 3А, но также с индукцией детоксикационных ферментов II фазы. Олтипраз повышает экспрессию GST в клетках и на животных (Clapper et al., 1994; Davidson et al., 1990), что связано с подавлением вызванных токсическими веществами тканевых повреждений и канцерогенеза (Kensler et al., 1987; Maxuitenko et al., 1998). Олтипраз предохраняет печень от тканевых повреждений, вызванных облучением (Kim et al., 1997), а известная из предшествующего исследования индукция GST означает адаптационную реакцию клетки. Олтипраз также защищает печень от токсических веществ (Ansher et al., 1983). Олтипраз подавляет индуцированный афлатоксином В1 канцерогенез посредством катализируемой цитохромом Р450 ЗА метаболической активации карциногена. Согласно недавним клиническим испытаниям олтипраз снижает уровень афлатоксина В1 в плазме крови у людей, подверженных высокому риску возникновения рака печени. Применение олтипраза также вело к снижению индуцированного афлатоксином В1 канцерогенеза у животных.

Сообщалось, что олтипраз ингибирует репликацию вируса гепатита В (HBV) в клетках 2.2.15, инфицированных плазмидой, содержащей ДНК HBV. Так, олтипраз ингибирует транскрипцию гена вируса гепатита В, повышает экспрессию белка р53 (Chi et al., 1998) и ингибирует репликацию вируса HIV (Prochaska et al., 1995).

Проводились клинические испытания в отношении химиопрофилактического действия олтипраза против канцерогенеза в печени в Китае. Результаты показали, что олтипраз обладает слабым защитным действием против канцерогенеза в печени. Также известно, что олтипраз предохраняет печень от гепатотоксичности токсических веществ, по крайней мере в небольшой степени. Кроме того, была доказана безопасность олтипраза в испытаниях на токсичность, проводившихся на крысах и собаках (Fund. Appl. Toxicol. 1997 Jan; 35(1): 9-21).

Фиброз печени - это предпатологическое состояние, в котором пораженные ткани печени при таких хронических заболеваниях печени, как гепатит, не восстанавливаются до нормальной ткани, а превращаются в волокнистые ткани типа коллагена в процессе адаптационной реакции in vivo. Хотя фиброз печени является следствием восстановительного процесса in vivo в ответ на повреждение ткани, однако ткань печени при этом замещается волокнистыми тканями, которые не могут выполнять нормальные функции (метаболизма in vivo или выработки желчи). Поскольку постоянный и повторяющийся фиброгенез печени ведет к циррозу и в конечном итоге приводит к смерти, большое значение имеет разработка новых лекарственных препаратов для лечения фиброза печени. Однако, поскольку механизм фиброгенеза печени в точности не известен, хорошие лекарственные препараты еще не разработаны.

Последние исследования показали, что β-трансформирующий ростовой фактор (β-TGF) - цитокин, секретируемый клетками Купфера и клетками Ито в печени, - является важным фактором фиброза печени. Кроме того, сообщалось, что блокирование активности β-TGF с помощью антител, антисмысловой РНК или модифицирования рецепторов β-TGF значительно уменьшает фиброз печени. Однако эти исследования были подтверждены только на уровне экспериментов. Не было сообщений о лекарственных препаратах против фиброза и цирроза печени, пригодных для клинического применения.

Сущность изобретения

Цель настоящего изобретения заключается в получении фармацевтической композиции, максимально эффективной при лечении фиброза и цирроза печени, которая может применяться и как средство профилактики.

В частности, цель настоящего изобретения заключается в применении 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тиона (олтипраза) для лечения и профилактики фиброза и цирроза печени. Другая цель настоящего изобретения - обеспечение способа лечения или профилактики фиброза и цирроза печени, включающего введение млекопитающему фармацевтической композиции, содержащей олтипраз в качестве активного ингредиента.

Авторы настоящего изобретения проводили исследования с целью разработки эффективного лекарства для лечения и профилактики фиброза и цирроза печени и при этом обнаружили, что 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тион (олтипраз) обладает необычайно хорошим действием при лечении и профилактике фиброза и цирроза печени.

Таким образом, настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для лечения и профилактики фиброза и цирроза печени, которая включает 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тион и фармацевтически приемлемый наполнитель.

Олтипраз по настоящему изобретению может применяться в качестве медикамента для лечения и профилактики фиброза и цирроза печени, причем он оказывает тормозящее действие на фиброз печени при сравнительно низких дозах. Предусмотренные изобретением композиции, содержащие оптимальные дозы олтипраза, оказывают необычайно хорошее действие при лечении и профилактике фиброза и цирроза печени и являются безопасными препаратами, обладающими низкой токсичностью в организме человека.

Перечень фигур

Фиг.1а - фотография ткани печени нормального животного (окрашивание Н&Е).

Фиг.1b - фотография ткани печени в группе, получавшей олтипраз (окрашивание Н&Е).

Фиг.1с - фотография ткани печени в группе, получавшей DMN (окрашивание Н&Е).

Фиг.1d - фотография ткани печени в группе, получавшей одновременно DMN и олтипраз (окрашивание Н&Е).

Фиг.2а - фотография ткани печени в группе, получавшей DMN (окрашивание по Van Gieson).

Фиг.2b - фотография ткани печени в группе, получавшей одновременно DMN и олтипраз (окрашивание по Van Geison).

Фиг.2с - фотография ткани печени в группе, получавшей DMN (трехцветное окрашивание по Массону).

Фиг.2d - фотография ткани печени в группе, получавшей одновременно DMN и олтипраз (трехцветное окрашивание по Массону).

Фиг.3 - фотография, показывающая ингибирующее действие олтипраза на экспрессию мРНК β1-TGF в ткани печени крыс при введении DMN.

Фиг.4 - фотография, показывающая ингибирующее действие олтилраза на стимуляцию LPS продукции α-TNF у крыс.

Подробное описание

Авторы настоящего изобретения сделали беспрецедентное открытие, что олтипраз обладает непредвиденным, необычным действием при лечении и профилактике фиброза и цирроза печени посредством ингибирования продукции β-TGF.

Как показано выше, известно, что олтипраз защищает от гепатотоксичности и подавляет процесс канцерогенеза. Однако нигде и никогда не сообщалось, что олтипраз эффективен при лечении и профилактике фиброза и цирроза печени, как предусматривается настоящим изобретением.

Фиброз - это предварительная стадия цирроза, он возникает при тяжелом повреждении печени под действием ряда факторов. Цирроз имеет некоторое отношение к канцерогенезу: он заметно повышает вероятность рака печени у больных. Однако патологический механизм цирроза четко отличается от рака печени. Таким образом, фиброз печени возникает при хроническом и тяжелом повреждении тканей печени. К факторам, вызывающим повреждение тканей печени, относятся вирусы, паразиты, употребление алкоголя, химические вещества и лекарства. Фиброз печени возникает из-за чрезмерной продукции внеклеточного матрикса (коллагена I, III и IV типа) вследствие активации непаренхиматических клеток в ткани печени: клеток Купфера, звездчатых клеток и др. В частности, фиброз возникает при активации и последующей трансформации звездчатых клеток в миофибробласты. Активированные звездчатые клетки затем вырабатывают избыточное количество внеклеточного матрикса. Более того, фиброз и цирроз как патологические феномены четко отличаются от вирусного гепатита и рака печени. Следовательно, способы их лечения и профилактики также отличаются. Однако в настоящее время пригодных для клинического применения лекарств от цирроза печени нет.

Настоящее изобретение основывается на открытии того, что олтипраз, известный как эффективное средство предупреждения рака печени, также эффективен против фиброза и цирроза печени, которые совершенно отличаются по патологическим механизмам от рака печени. Эти факты подтверждены экспериментами, описанными ниже.

Олтипраз уменьшает число баллов по шкале фиброза и шкале Knodell, служащих показателями вызванного диметилнитрозамином (DMN) фиброза. Это совпадает с результатами микроскопического исследования образцов ткани. Кроме того, при введении олтипраза значительно уменьшаются такие показатели гепатотоксичности, как аланин-аминотрансфераза (ALT), аспартат-аминотрансфераза (AST), билирубин и γ-глутамил-транспептидаза (γ-GT). Это свидетельствует, что олтипраз может облегчать фиброз, замедляя соответствующие процессы. Механизм подавления фиброза олтипразом вращается вокруг ингибирования экспрессии β-TGF. Согласно результатам количественного RT-PCR олтипраз полностью ингибирует усиление экспрессии β-TGF, вызванное диметилнитрозамином. Это служит свидетельством того, что олтипраз как лекарство способен подавлять возникновение и развитие фиброза и цирроза печени. В частности, олтипраз обладает потенциалом лучшего препарата против фиброза потому, что он проявляет сильное антифиброзное действие, индуцирует детоксикационный фермент печени GST, повышает GSH и способен конъюгировать радикалы.

В настоящем изобретении лечебные эффекты олтипраза на фиброз печени исследовали на крысах, которым предварительно вводили различные дозы DMN. При этом после введения DMN активности ALT и AST в плазме повышались в 4 раза. По сравнению с этим введение олтипраза вело к подавлению повышения активностей ALT и AST в плазме. Активность γ-GT и содержание билирубина в плазме служат показателями функционального состояния печени. Олтипраз подавлял вызванное DMN повышение активности γ-GT у крыс на 70-80%. С другой стороны, при введении DMN содержание билирубина повышалось в 8 раз. При совместном введении DMN и олтипраза билирубин в плазме крови снижался на 65%. Данные гистологических исследований по шкале фиброза и шкале Knodell также показали, что олтипраз значительно блокирует развитие DMN-индуцированного фиброза печени. По-видимому, эти фармакологические эффекты обусловлены главным образом тем, что олтипраз ингибирует продукцию β-TGF, при этом можно полагать, что антифиброзному действию олтипраза частично способствует индукция антиокислительных ферментов и повышение GSH.

Олтипраз может применяться в клинике как препарат, эффективный при лечении и профилактике фиброза и цирроза печени. На практике фармацевтическая композиция настоящего изобретения применяется в виде готовых лекарственных форм, подходящих для приема внутрь в соответствии с правилами соответствующей области фармацевтики. При этом лекарственные формы для приема внутрь (перорально) включают твердые и мягкие капсулы, таблетки, порошки и т.д. Пероральные композиции, наряду с олтипразом как фармакологически активным агентом, могут содержать один или несколько фармакологически неактивных, стандартных носителей. Например, пероральная композиция может содержать такие наполнители, как крахмал, лактоза, карбоксиметилцеллюлоза и каолин; такие связующие вещества, как вода, желатин, спирт, глюкоза, гуммиарабик и трагакантовая камедь; такие дезинтегрирующие вещества, как крахмал, декстрин и альгинат натрия; и такие смазочные вещества, как стеариновая кислота, старат магния и вазелиновое масло.

Ежедневная дозировка по настоящему изобретению зависит от различных факторов, таких как степень поражения печени пациента, продолжительность гепатита, возраст, состояние здоровья, осложнения и т.п. Тем не менее, обычно взрослым олтипраз назначают один или два раза в день в общей дозе от 10 до 1000 мг в день, более предпочтительно от 50 до 300 мг. Однако у больных с тяжелым поражением печени или при применении в качестве средства против рецидивов после удаления раковой опухоли печени настоящее изобретение позволяет выходить за указанные пределы фармацевтической композиции и назначать еще большие дозы.

Настоящее изобретение предусматривает применение олтипраза - наилучшего средства, подавляющего развитие фиброза и цирроза печени, для получения лекарства, обладающего слабой токсичностью и почти не имеющего побочных эффектов, не только в целях лечения, но также для профилактики при безопасном, длительном применении. Таким образом, фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно применять безопасно в течение длительного времени для лечения и профилактики фиброза и цирроза печени.

Далее настоящее изобретение будет раскрыто более подробно на рабочих примерах. Однако настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Контрольные примеры

Контрольный пример 1. Влияние олтипраза на фиброз (1)

У крыс, которым непрерывно вводили диметилнитрозамин (DMN) на протяжении 4 недель, наблюдалось 4-кратное повышение активностей ALT и AST в плазме крови. При предварительном введении олтипраза в дозе 50 мг/кг повышение активностей ALT и AST ингибировалось на 50% (табл. 1).

Активность γ-GT и содержание билирубина в плазме крови служат индикаторами функционального состояния печени. Олтипраз ингибировал повышение активности γ-GT на 70-80% у получавших DMN крыс. С другой стороны, при введении DMN содержание билирубина повышалось в 8 раз по сравнению с контрольной группой. Когда же одновременно с DMN вводили олтипраз (50 мг/кг), повышение билирубина в плазме подавлялось на 65%.

Таблица 1. Значения ALT, AST, γ-GT и билирубина
Группа	ALT	AST	γ-GT	Билирубин
Контроль	49±2	113±6	0,2±0,1	0,2±0,01
DMN	190±12*	412±39*	12,1±4,1*	0,9±0,2*
DMN+олтипраз 50 мг/кг	116±4^#	246±32^#	2,6±0,5^#	0,3±0,03^#

Каждое значение представляет среднее значение ± стандартное отклонение. Число использованных животных колебалось от 8 до 16. Статистическую значимость по каждой группе определяли с помощью критерия Ньюмана-Кельса для многофакторного анализа. Показатели значимости: *=р<0,05 по сравнению с контролем; ^#=р<0,05 по сравнению с группой, получавшей DMN.

Контрольный пример 2. Влияние олтипраза на фиброз (2)

Гистопатологический эффект олтипраза на DMN-индуцированный фиброз печени исследовали на лабораторных животных. Явный фиброз наблюдался у крыс, получавших DMN по 3 раза в неделю на протяжении 4 недель. Когда одновременно с DMN вводили олтипраз (перорально в дозах 5-50 мг/кг по 3 раза в неделю на протяжении 4 недель), фиброз печеночной ткани уменьшался по сравнению с введением одного DMN. Некроз и фиброз печеночной ткани определяли гистологически, используя такие показатели патологии печени, как окрашивание по Ван Гизону (Van Gieson) и трехцветное окрашивание по Массону (Masson) (табл. 2).

На фиг.1а приведена фотография ткани печени нормального животного (окрашивание Н&Е). На фиг.1b - фотография ткани печени в группе, получавшей олтипраз (окрашивание Н&Е). На фиг.1с - фотография ткани печени в группе, получавшей DMN (окрашивание Н&Е), а на фиг.1d - фотография ткани печени в группе, получавшей одновременно DMN и олтипраз (окрашивание Н&Е). На фиг.2а приведена фотография ткани печени в группе, получавшей DMN (окрашивание по Van Gieson). На фиг.2b - фотография ткани печени в группе, получавшей одновременно DMN и олтипраз (окрашивание по Van Geison). На фиг.2с - фотография ткани печени в группе, получавшей DMN (трехцветное окрашивание по Массону), а на фиг.2d - фотография ткани печени в группе, получавшей одновременно DMN и олтипраз (трехцветное окрашивание по Массону).

Олтипраз в дозе 50 мг/кг эффективно уменьшал DMN-индуцированный фиброз (табл. 2). Степень фиброза определяли по шкале фиброза и шкале Knodell, которые показывают степень повреждения печени и фиброза. По сравнению с группой, получавшей только DMN, в группе DMN+олтипраз отмечалось меньшее число баллов по шкале фиброза и шкале Knodell, что свидетельствует об излечении повреждений печени и фиброза.

Таблица 2. Подавление олтипразом фиброза печеночной ткани
Группа	По шкале фиброза	По шкале Knodell
Контроль	0	0
DMN	3,7±0,5	16,1±2,9
DMN+олтипраз 5 мг/кг	3,1±0,4*	11,1±1,7*
DMN+олтипраз 15 мг/кг	2,9±0,8*	12.1±1,9*
DMN+олтипраз 50 мг/кг	2,5±0,9**	8,0±1,6**

Каждое значение представляет среднее значение ± стандартное отклонение. Число использованных животных колебалось от 8 до 16. Статистическую значимость по каждой группе определяли с помощью критерия Ньюмана-Кельса для многофакторного анализа. Показатели значимости: *=р<0,05, **=р<0,01. Степень фиброза: 0=норма, 1=слабое присутствие фиброзной ткани, 2=умеренное присутствие фиброзной ткани, 3=заметное присутствие фиброзной ткани, 4=признаки сильного фиброза. Шкала Knodell - это сумма баллов по перипортальным перемычкам (максимум=10), внутридольковой гибели клеток (максимум=4), портальному воспалению (максимум=4) и фиброзу (максимум=4).

Контрольный пример 3. Фармакологический механизм антифиброзного действия олтипраза

β1-TGF - это основной цитокин, экспрессия которого возрастает при фиброзе вследствие повреждения тканей. Экспрессию мРНК β1-TGF у животных измеряли аналитическим методом RT-PCR при введении одного DMN и при одновременном введении олтипраза и DMN. У животных, получавших DMN на протяжении 4 недель, экспрессию мРНК β1-TGF не измеряли из-за необратимого чрезмерного фиброгенеза. Экспрессию мРНК β1-TGF измеряли у животных, получавших однократную дозу DMN. Через 18 часов после введения DMN вводили олтипраз, а затем измеряли экспрессию мРНК β1-TGF через 24 часа. У крыс, получавших DMN, мРНК β1-TGF заметно возрастала в ткани печени. DMN-индуцированная экспрессия мРНК β1-TGF полностью ингибировалась при введении олтипраза в дозе 100 мг/кг. Экспрессия мРНК GAPDH не изменялась ни при введении одного DMN, ни при одновременном введении олтипраза и DMN. Следовательно, это означает, что фармакологический механизм подавления фиброза печени олтипразом заключается в уменьшении экспрессии β1-TGF (фиг.3).

Контрольный пример 4. Оценка ингибирования олтипразом продукции β-TGF

Проводили опыты на клетках макрофагов RAW264.7 для проверки того, что олтипраз непосредственно ингибирует продукцию β-TGF, который экспрессируется на высоком уровне в макрофагах, а также для оценки связанных с этим молекулярных фармакологических механизмов. Когда олтипраз добавляли к экспрессирующим β-TGF клеткам RAW264.7, он ингибировал экспрессию β-TGF дозозависимым образом. Эти результаты показывают, что олтипраз может действовать как антифиброзный агент в печеночных клетках Купфера путем ингибирования продукции β-TGF. Более того, повышение экспрессии β-TGF ингибируется EGTA или генистеином, который является ингибитором тирозиновых киназ. Этот результат показывает, что ингибирование олтипразом продукции β-TGF может быть следствием регуляции внутриклеточного кальция и изменения активности протеинкиназ (табл. 3).

Таблица 3. Ингибирование олтипразом экспрессии β-TGF в макрофагах
	Контроль	Олтипраз 30 мкМ	Олтипраз 100 мкМ	EGTA 1 мМ	Генистеин 100 мкМ
Ингибирование β-TGF (%)	0	30	60	80	80

Контрольный пример 5. Ингибирование олтипразом продукции α-TNF

α-TNF - цитокин, вьщеляемый макрофагами, который играет роль в механизме иммунной защиты организма, убивая микробы типа бактерий. Однако при чрезмерной продукции α-TNF воспалительная реакция усиливается настолько, что вызывает гибель клеток. Это служит общим основанием для применения антител к α-TNF или ингибиторов продукции α-TNF для лечения системных воспалительных заболеваний. В данном опыте, для проверки того, что олтипраз ингибирует активность клеток Купфера, исследовали влияние олтипраза на продукцию α-TNF у крыс, получавших эндотоксин (LPS). При введении этим крысам олтипраза LPS-стимулируемая продукция α-TNF ингибировалась дозозависимым образом. Ингибирование олтипразом продукции α-TNF свидетельствует, что олтипраз также ингибирует воспалительные реакции в печеночной ткани, а клетки, на которые он действует, - это клетки Купфера. Наряду с ингибированием продукции α-TGF, ингибирование воспалительного процесса в печени может быть тем механизмом, посредством которого олтипраз оказывает защитное действие на печеночную ткань (фиг.4, значимость отличий: *=р<0,05, **=р<0,01 по сравнению с группой животных, получавших LPS).

Рабочие примеры

Рабочий пример 1

Олтипраз	25 мг
Лактоза	50 мг
Крахмал	10 мг
Стеарат магния	надлежащее количество

Вышеуказанные компоненты смешивали и получали таблетки общепринятым способом таблетирования.

Рабочий пример 2

Олтипраз	100 мг
Лактоза	50 мг
Крахмал	10 мг
Стеарат магния	надлежащее количество

Рабочий пример 3

Олтипраз	250 мг
Лактоза	50 мг
Крахмал	10 мг
Стеарат магния	надлежащее количество

Рабочий пример 4

Олтипраз	25 мг
Лактоза	30 мг
Крахмал	28 мг
Тальк	2 мг
Стеарат магния	надлежащее количество

Вышеуказанные компоненты смешивали и получали капсулы путем заполнения этой смесью капсул из твердого желатина общепринятым способом получения капсул.

Рабочий пример 5

Олтипраз	100 мг
Лактоза	30 мг
Крахмал	28 мг
Тальк	2 мг
Стеарат магния	надлежащее количество

Рабочий пример 6

Олтипраз	250 мг
Сахар изомеризованный	10 г
Сахар	30 мг
КМЦ натриевая	100 мг
Лимонный ароматизатор	надлежащее количество
(добавить очищенную воду до общего объема 100 мл)

Из вышеуказанных компонентов готовили суспензию согласно общепринятым способам получения суспензий. Заполняли суспензией темный флакон на 100 мл и стерилизовали.

Рабочий пример 7

Олтипраз	500 мг
Сахар изомеризованный	20 г
Сахар	20 г
Альгинат натрия	100 мг
Апельсиновый ароматизатор	надлежащее количество
Добавить очищенную воду до 100 мл

Рабочий пример 8

Олтипраз	250 мг
Лактоза	30 мг
Крахмал	20 мг
Стеарат магния	надлежащее количество

Вышеуказанные компоненты смешивали, вносили в покрытую полиэтиленом оболочку и плотно закрывали, получая препарат в виде порошка.

Рабочий пример 9

На 1 мягкую капсулу:

Олтипраз	100 мг
Полиэтиленгликоль 400	400 мг
Глицерин концентрированный	55 мг
Вода очищенная	35 мг

Полиэтиленгликоль смешивали с концентрированным глицерином, а затем добавляли очищенную воду. После нагревания смеси до 60°С в нее добавляли олтипраз. Смесь перемешивали примерно при 1500 об/мин. После достижения однородного состояния смесь охлаждали при комнатной температуре с медленным перемешиванием. Удаляли пузырьки воздуха с помощью вакуумного насоса, получая содержимое для мягких капсул.

Оболочку мягких капсул производили согласно общепринятым способам, используя хорошо известную формулу из желатина и пластификатора: 132 мг желатина, 52 мг концентрированного глицерина, 6 мг 70%-го раствора дисорбитола на 1 капсулу, соответствующее количество этилванилина в качестве ароматизатора и карнаубский воск в качестве покровного материала.

Промышленное применение

Фармацевтическая композиция, содержащая олтипраз согласно настоящему изобретению, проявляет необычайно хорошее действие при лечении и профилактике фиброза и цирроза печени.

Claims

1. Применение 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тион (олтипраза) в качестве лекарственного средства для профилактики и лечения прогрессирующего фиброза и цирроза печени.

2. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения прогрессирующего фиброза и цирроза печени, включающая 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тиона в количестве от 10 до 1000 мг и фармацевтически приемлемый наполнитель.

3. Фармацевтическая композиция по п.2, изготовленная в виде лекарственной формы, выбранной из группы, состоящей из капсул, таблеток, мягких капсул, суспензий, сиропов, растворов для инъекций и порошков.

4. Фармацевтическая композиция по п.2, предназначенная для орального введения.

5. Применение 5-(2-пиразинил)-4-метил-1,2-дитиол-3-тиона в качестве активного ингредиента при получения лекарственного средства для профилактики и лечения прогрессирующего фиброза и цирроза печени.

6. Способ профилактики и лечения прогрессирующего фиброза и цирроза печени, включающий введение млекопитающим фармацевтической композиции по п.2.