CN105168278B - 用于预防和治疗动脉硬化的组合物 - Google Patents
用于预防和治疗动脉硬化的组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明的组合物是包含人参C.A.Meyer果实提取物作为活性成分的组合物,用于预防或治疗动脉硬化。该提取物已被证实可有效抑制由动脉硬化引起的血管炎症因子的产生和病变。因此,该提取物可作为用于预防和治疗动脉硬化的组合物的活性成分。
Description
技术领域
本发明涉及用于预防和治疗动脉硬化的组合物。
背景技术
人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是五加科人参属的一种植物。2000多年前,在韩国、中国和日本就已经将它用作草药。根据经验,它已被用于预防疾病和延长寿命。
人参皂苷,人参的生理活性成分,均匀分布在地面和地下部分。根据特定部位,例如,根、叶和浆果(浆果复数),人参皂苷的含量和成分都不同。
近来,西方化的高脂肪食物引起的血管功能障碍导致了各种成人疾病的发生。包括心脏病、动脉硬化、中风等的心血管疾病占所有死亡人数的30%。
一般用于心血管的药物包括血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和HMG-CoA还原酶抑制剂,大多是昂贵的合成药物,而且这些心血管药物具有长期服用导致不良反应的问题。
发明内容
技术问题
本发明涉及提供一种预防或治疗动脉硬化的组合物,它能有效抑制因动脉硬化引起的血管炎症因子的产生或病变,该组合物包含通常不用作活性成分的人参浆果提取物。
技术方案
一方面,本发明提供一种预防或治疗动脉硬化的组合物,该组合物包含人参(Panax ginseng C.A.Meyer)浆果提取物作为活性成分。
有益效果
本发明所述组合物包含含量和成分不同于人参根部的人参(Panax ginsengC.A.Meyer)浆果提取物作为活性成分,该组合物能抑制血管炎症性疾病(如动脉硬化)引起的主动脉粥样硬化斑块和病变,并且显著减少血管炎症因子TNF-α的生成,以及由于iNOS激活引起的一氧化氮的生成。因此,该组合物展现了预防或治疗动脉硬化的优越效果。
附图说明
图1展示了利用高效液相色谱(HPLC)分析人参浆果提取物及人参根部提取物中人参皂苷含量的结果图;
图2a展示了经本发明组合物处理后的组中,主动脉中动脉粥样硬化斑块形成的测定结果照片;
图2b展示了经本发明组合物处理后的组中,主动脉中动脉粥样硬化斑块形成的测定结果图;
图3a展示了经本发明组合物处理后的组中,主动脉弓发病面积的测定结果照片;
图3b展示了经本发明组合物处理后的组中,主动脉弓发病面积的测定结果图;
图4a展示了经本发明组合物处理后的组中,动脉硬化的诱导因子,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生变化的分析结果图;
图4b展示了经本发明组合物处理后的组中,一氧化氮(NO)的产生变化的分析结果图。
具体实施方式
如下面实施例证明的,本发明的发明人证实,用含人参浆果提取物作为活性成分的本发明组合物处理后,减少了动脉壁上脂肪的堆积(脂肪的堆积随动脉硬化的发展而增加),并显著减少了由动脉硬化引起的病变。
此外,还证实了含人参浆果提取物作为活性成分的所述组合物能够显著减少肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,这些是已知引起动脉硬化的主要原因。
在一个具体实施例中,所述活性成分可以是通过将已去除种子的人参(Panaxginseng C.A.Meyer)浆果的果肉和果皮干燥,例如,通过日晒干燥或热风干燥,再加入溶剂而获得的提取物。
预处理得到的所述干人参浆果(即去除种子的、经日晒干燥或热风干燥的人参浆果果肉和果皮)可用溶剂提取,特别是水或乙醇,再在减压条件下浓缩得到人参浆果提取物。
所述人参浆果提取物与人参根部提取物的成分和含量不同。例如,原人参三醇(PT)皂苷与原人参二醇(PD)皂苷的比可为0.5-3.2。
人参浆果中比人参根部包含更多的人参皂苷,且原人参二醇皂苷的成分Rb1、Rb2、Rc和Rd,及原人参三醇皂苷的成分Re、Rg1和Rg2与人参根部的完全不同。
此外,所述人参浆果提取物中可包含一种或多种矿物质,选自钾、钙、铁、磷、镁和锌,和/或包含一种或多种维生素,选自维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C、维生素E、维生素K、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)和维生素B9(叶酸)。这些丰富的矿物质与维生素也是人参浆果作为果实的鲜明特点。这一点上,人参浆果与人参根部不同。
因此,包含所述人参浆果提取物作为活性成分的所述本发明组合物与包含人参根部提取物作为活性成分的组合物在成分上明显不同。
例如,所述提取物可占组合物总重量的0.01-100wt%。当所述提取物占组合物总重量的100wt%时,组合物中仅包含所述提取物作为活性成分,对动脉硬化起到预防和治疗的作用。
由于本发明组合物包含人参浆果提取物作为活性成分,可起到抗动脉粥样硬化的作用,所以该组合物可减少因动脉硬化引起的病变的形成(如高脂肪食物引起),或抑制血管炎症因子的产生。血管炎症因子的抑制可通过抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成和抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达来实现。
例如,由动脉硬化引起的病变的形成可能会发生在下列情况中。当巨噬细胞迁移到血管炎症的位置,会吞噬氧化低密度脂蛋白(LDLs),成为泡沫细胞,这些细胞产生炎症细胞因子TNF-α和IL-1β,从而刺激和促进中膜平滑肌细胞的增殖,并向内膜迁移。最终,动脉内膜会增厚变得突出,形成动脉粥样硬化斑块(动脉粥样化)。
例如,由动脉硬化引起的病变的形成可能会发生在下列情况中。当巨噬细胞迁移到血管炎症的位置,会吞噬氧化低密度脂蛋白(LDLs),成为泡沫细胞,这些细胞产生炎症细胞因子TNF-α和IL-1β,从而刺激和促进中膜平滑肌细胞的增殖,并向内膜迁移。最终,动脉内膜会增厚变得突出,形成动脉粥样硬化斑块(动脉粥样化)。
所述本发明药物组合物可包含无机或有机载体,或以固体或半固体或液体的形式口服,或通过直肠、局部、透皮、静脉、肌肉、腹腔内或皮下途径进行肠外给药。特别是,它可以口服。
口服的制剂形式包括片剂、丸剂、颗粒剂、软/硬胶囊、粉末剂、细粉剂、粉剂、乳剂、糖浆、丹剂和饮剂等。此外,胃肠外给药制剂形式包括注射液、滴、膏药、乳液、喷雾、悬浮液、乳胶和栓剂等。
根据普遍采用的方法,可以轻松制备本发明组合物。可能会使用足够的表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、缓冲液、悬浮液或其它常用的佐剂。
所述活性成分的给药剂量取决于使用对象的年龄、性别和体重,特定疾病的病理状态,疾病的严重程度,给药途径和内科医生的考虑。本领域的技术人员可根据这些因素确定剂量。普通的给药剂量范围约为0.001-2000mg/kg/day。
下面将描述实施例和实验。下面的实施例和实验仅作说明用途,并不是为了限制本发明的范围。
[实施例1]人参(Panax ginseng C.A.Meyer)浆果提取物的制备和分析
1.人参浆果的预处理
收获活的人参浆果。去除种子后,以日晒干燥或热风干燥的方式干燥人参浆果的果肉和果皮,制备干的人参浆果。
2.人参浆果提取物的制备
向干的人参浆果(1kg)中加入水或乙醇(3L)。在室温下萃取或回流,接着过滤,再在40-45℃减压浓缩,即可获得人参浆果提取物(300g)。
3.人参浆果提取物的成分分析(与人参根部人参皂苷(人参皂甙)比较)
用乙醚去除人参浆果提取物和人参根部提取物中的油溶性成分。接着用丁醇(BuOH)提取粗皂苷,最后用高效液相色谱(HPLC)对人参皂苷成分进行分析,结果列于表1和图1。
【表1】
人参浆果提取物 | 人参根部提取物 | |
粗皂苷(干重) | 33.42% | 16.70% |
PD/PT比 | 0.73 | 3.23 |
所述人参浆果提取物中包含的粗皂苷约是人参根部提取物中的2倍。同时,人参浆果和人参根部原人参二醇(PD)皂苷(Rb1、Rb2、Rc和Rd)与原人参三醇(PT)皂苷(Re、Rg1和Rg2)的比明显不同,分别为0.73和3.23。
[人参浆果提取物中矿物质的分析]
为了区别作为“果实”的人参浆果与人参根部的特征,对实施例1制备的人参(Panax ginseng C.A.Meyer)浆果提取物中的矿物质和维生素成分进行了分析。结果列于表2。
【表2】
成分 | 含量 | 成分 | 含量 |
钾(mg/100g) | 5865.57 | 镁(mg/100g) | 354.38 |
钙(mg/100g) | 819.26 | 锌(mg/100g) | 178.49 |
铁(mg/100g) | 59.31 | 维生素A(μg/100g,RE) | 213.11 |
磷(mg/100g) | 187.17 | 维生素B1(mg/100g) | 12.29 |
维生素B2(mg/100g) | 8.45 | 维生素B6(mg/100g) | 10.50 |
维生素C(mg/100g) | 4.91 | 维生素E(mg/100g,α-TE) | 23.61 |
维生素K(μg/100g) | 231.12 | 烟酸(mg/100g,NE) | 5.76 |
泛酸(mg/100g) | 5.87 | 叶酸(μg/100g) | 349.97 |
由上表可知,人参浆果比人参根部包含更多的人参皂苷。所述皂苷成分完全不同,与人参根部相比,人参浆果富含维生素和矿物质。
基于这些发现,对其预防或治疗动脉硬化的作用进行了研究。将人参浆果提取物的这种作用与广泛用作保健食品的红参提取物进行了比较。
1.测试方法
测试中使用载脂蛋白(ApoE)缺陷的小鼠。自由供给饲料和水16周。也就是说,作为在抗动脉硬化测试中常用的动物模型,连续16周供给高脂肪食物,会诱导载脂蛋白缺陷的小鼠产生动脉硬化,并测定了经所述人参浆果提取物给药的组的抑制作用。
1)食物的准备
向Purina5001食物中加入20%的脂肪(10%猪油、10%可可脂、0.15%胆固醇和0.05%胆酸),作为高脂肪食物。向准备好的高脂肪食物中加入GB(300或500mg/Kg)或RG(750mg/Kg)。所有饲料均用紫外线辐射消毒。
2)测试组的构成
第1组(16只小鼠):高脂肪食物(HCD)
第2组(16只小鼠):HCD+GB 300mg/Kg
第3组(16只小鼠):HCD+GB 500mg/Kg
第4组(16只小鼠):HCD+RG 750mg/Kg
第5组(8只小鼠):普通食物(NCD)
3)表面分析
将小鼠杀死,切开心脏和腹主动脉及其附近的脂肪组织,彻底移除动脉外膜。切断心脏基部的动脉使腹主动脉与心脏分离。用手术剪和镊子切开腹主动脉,并用别针固定,从而可看见血管的内部。在10%中性缓冲福尔马林溶液中固定16小时后,用蒸馏水洗所述动脉。将由此产生的样本置于纯的丙二醇中浸泡1分钟,接着在油红O溶液中染色16小时,再在85%的丙二醇中浸泡2分钟,之后用蒸馏水洗净,最后在解剖显微镜下观察(Leica)。用AxioVision交流成像软件分析所述样本的图像,从而确定主动脉总面积病变的百分比。
4)主动脉弓中形成的动脉粥样硬化斑块的识别和面积测量
将小鼠杀死,将心脏和在升主动脉和胸主动脉之间的部分切下,并固定在10%中性缓冲福尔马林溶液中。用剃刀修整固定好的心脏,嵌入最佳切削温度(OCT)混合物中,置于深冷器中冷冻,在低温恒温器中将主动脉弓切成10μm厚度。对于脂肪染色,将准备好的切片浸入蒸馏水中,用纯丙二醇处理1分钟,接着在油红O溶液中染色16小时,再用85%的丙二醇处理2分钟。用蒸馏水洗净切片,安装在水性封固剂中,在光学显微镜下观察。从配备摄像机的光学显微镜(Carl Zeiss)中获得的动脉粥样硬化斑块的显微图像,用图像处理软件测定斑块的面积。
5)动脉硬化的小鼠模型血清中一氧化氮(NO)的分析
用硝酸盐/亚硝酸盐比色检测试剂盒(Cayman Chemical Co.,Ann Arbor,MI)来测定血清中NO的浓度。根据提供的手册,向96孔板中加入血清和标准试剂(每个40μL),并向其中加入酶的辅助因子混合物(5μL)。加入5μL硝酸还原酶后,让得到的混合液在室温下反应3小时。然后,加入10%的ZnSO4(50μL),在每分钟转速为1,5000条件下离心15分钟。将上清液(80μL)转移至96孔板中,加入Griess试剂1溶液(40μL)和Griess试剂2溶液(40μL)后,反应10分钟。在550nm下测定反应产物的吸光度。
6)动脉硬化的小鼠模型血清中TNF-α的分析
动脉硬化会通过炎症反应产生各种细胞因子。肿瘤坏死因子(TNF-α)是其中最重要的细胞因子。将所述组合物给药16周后,从小鼠身上采血,并从中分离出血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)识别血清中的TNF-α。
2.测试结果
1)主动脉中形成的动脉粥样硬化斑块的识别与面积测定
向ApoE-缺陷的小鼠提供16周的高脂肪食物后,分离主动脉,利用表面分析可观察到主动脉中动脉粥样硬化斑块的变化。与正常食物组相比,高脂肪食物组中形成的动脉粥样硬化斑块增加了。结果见图2a。经证实:用浓度依赖性所述组合物的给药方式可降低动脉粥样硬化斑块的增加。
人参浆果(GB)提取物(500mg/kg)给药组对动脉粥样硬化斑块形成的抑制作用要大于红参(RG)提取物(750mg/kg)给药组对动脉粥样硬化斑块形成的抑制作用,结果见图2b。
2)通过油红O染色的主动脉弓中发病面积的分析
动脉粥样硬化斑块会导致脂肪在动脉壁上堆积。因此,用油红O染色后,测定GB组合物的给药对主动脉中脂肪堆积的抑制作用。与正常对照组相比,高脂肪食物组的动脉粥样硬化斑块显著增加。人参浆果提取物以浓度依赖性的方式抑制动脉粥样硬化斑块的增加。结果见图3a。与RG(红参提取物750mg/Kg)给药组相比,GB(人参浆果提取物500mg/Kg)给药组对降低主动脉弓中病变展示了更好的效果。结果见图3b。
3)血液中动脉硬化诱导因子的变化分析
众所周知,由iNOS的表达引起的细胞因子TNF-α产生和一氧化氮的合成是影响血管炎症疾病(如动脉硬化)的主因。因此,对血液中TNF-α和一氧化氮的浓度进行测定。与正常食物组相比,高脂肪食物组中TNF-α和一氧化氮显示出增长。通过人参浆果提取物的给药,显著降低了这种增长。结果分别见图4a和图4b。与RG(红参提取物750mg/Kg)给药组相比,GB(人参浆果提取物300mg/Kg)给药组对降低主动脉弓中病变展示了更好的效果。GB(人参浆果提取物500mg/Kg)给药组的抑制作用最优越。
下面的制备实施例仅作说明用途,并不是为了限制本发明的范围。
[制备实施例1]丸剂的制备
将实施例1制备的人参浆果提取物(30wt%)、玉米淀粉(30wt%)、甘油(20wt%)和山梨醇粉(20wt%)混合,并制成丸剂。丸剂的最终质量为3.5g。
[制备实施例2]片剂的制备
将实施例1制备的人参浆果提取物(30wt%)、乳糖(20.5wt%)、糊精(20wt%)、麦芽糖醇粉(20wt%)和木糖醇粉(7wt%)混合,用硫化床干燥机进行颗粒化,加入糖酯(2.5wt%)后制成片剂。片剂的最终质量为2g。
[制备实施例3]颗粒剂的制备
将实施例1制备的人参浆果提取物(30wt%)、木糖醇(5wt%)和异麦芽酮糖醇(65wt%)混合,用硫化床干燥机进行颗粒化,并装入袋中。颗粒剂的最终质量为2g。
本领域的技术人员可以明白上述概念和具体实施例,可用于作为修改或设计实现与本发明相同目的的其它实施例的基础。
Claims (5)
1.人参(PanaxginsengC.A.Meyer)浆果提取物在制造用于抑制血管炎症因子的产生的组合物中的用途,其中所述提取物的原人参三醇(PT)皂苷与原人参二醇(PD)皂苷的比为0.5-3.2。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述血管炎症因子的抑制通过抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成和抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达来实现。
3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述提取物是通过将人参浆果的果肉和果皮干燥、并加入溶剂而得到的。
4.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,原人参三醇皂苷为Re,Rg1,和Rg2;并且原人参二醇皂苷为Rb1,Rb2,Rc和Rd。
5.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述组合物包含占组合物总重量的0.01-100wt%的人参浆果提取物。
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