CN101443024A - 植物提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有阿江榄仁提取物的药物组合物和食物，和用于预防或治疗哺乳动物例如人的以下疾病的方法：心脏病、糖尿病、变性神经病、癌症、与年龄有关的疾病如淀粉样变、急性胰腺炎、关节炎、动脉粥样硬化、癌状、心血管病、炎性肠病、心肌梗死、老年痴呆、视网膜变性和老年性白内障及相关病症，及其应用。

Description

植物提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及能用于处置诸如糖尿病、肥胖、心血管病、癌症和相关病症的方法的榄仁树植物提取物。更具体地说，本发明涉及得自阿江榄仁树的某些提取物，它们作为治疗哺乳动物、特别是人的某些疾病，例如糖尿病、肥胖、心血管病和癌症的药物的用途，其制备方法和递药方式。

背景技术

糖尿病

糖尿病是一种以高血糖为特征的常见的严重疾病。这种疾病可分成两个主要类型：胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)，也称作I型糖尿病，和非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)，也称作II型糖尿病(世界卫生组织研究组、糖尿病、WHO技术报告系列号727：1-113，1985)。IDDM起因于由细胞介导的胰β细胞自身免疫破坏造成的胰岛素缺乏，一般在年青人中发生

                          (Yoon J W.，Insulin-dependent diabetesmellitus.In：Roitt I M and Delves P J.(Eds.)Encyclopedia of Immunology，SecondEdition.Academic Press Ltd.，London，pp.1390-1398，1998；Bach J F.，Insulin-dependent diabetes mellitus as a beta cell targeted disease of immunoregulation.J.Autoimm.8：439-463，1995).

IDDM占世界糖尿病患者总数的约10-15％(世界卫生组织研究组。糖尿病。WHO技术报告系列号727：1-113，1985)。相比之下，NIDDM源自胰岛素抗性和胰岛素缺乏的各式各样的组合，一般在成年人中发生

              (Jun H S，et al.，Pathogenesis of non-insulin-dependent(Type II)diabetes mellitus(NIDDM)--Genetic predisposition and metabolic abnormalities.Advanced Drug Delivery Reviews 35：157-177，1999；DeFronzo R A.，Thetriumvirate：.beta.-cell，muscle，liver：a collusion responsible for NIDDM.Diabetes37：667-687，1988).

然而，正如在成熟青年型糖尿病中所见到的，NIDDM也会在年轻时发生

              (Pirart J.，Diabetes mellitus and itsdegenerative complications：a prospective study of 4400 patients observed between1947 and 1973.Diabetes Care 1：168-188，1978).

NIDDM占世界糖尿病患者总数的85％以上。IDDM和NIDDM都会引起微血管和大血管并发症，造成患病率和死亡率增高

(Fajans S S，et al.，Prediabetes，subclinical diabetes，and latent clinical diabetes：interpretation，diagnosis and treatment.In：Leibel D S，Wrenshall G S.(Eds.)On theNature and Treatment of Diabetes.Excerpta Medica，Amsterdam，pp.641-656，1965).

NIDDM是一种复杂的疾病，目前被认为受多种单基因或环境因素的影响

             (Ghosh S，et al.，Genetic analysis of NIDDM.Diabetes 45：1-14，1995；Kobberling J.Studies on the genetic heterogeneity ofdiabetes mellitus.Diabetologia 7：46-49，1971；Rotter J L，et al.，Genetics of diabetesmellitus.In：Rifkin H，Porte D(Eds.)Diabetes Mellitus Theory and Practice.Elsevier，N.Y.，pp.378-413，1990).

家族性聚集和同卵双胎中该疾病的高一致率(60-100％)表明，遗传因素在NIDDM的发病机制中起重要作用

                          (O′Rahilly S，et al.，Type 2(noninsulindependent)diabetes mellitus.New genetics for old nightmares.Diabetologia 31：407-414，1988；Barnett A H，et al.，Diabetes in identical twins.A study of 200 pairs.Diabetologia 20：87-93，1981).

此外，环境因素，例如肥胖、身体活动和饮食，也强烈影响该疾病的发生

(Knowler W C，et al.，Gm and type 2 diabetes mellitus：an association in AmericanIndians with genetic admixture.Am.J.Hum.Genet.43：520-526，1988；Bennett P H，et al.，Epidemiology and natural history of NIDDM：non-obese and obese.In：AlbertiKGMM，DeFronzo R A，Keen H，Zimmett P(Eds.)International Textbook ofDiabetes Mellitus.Wiley，N.Y.，pp.147-176，1992；Helmrich S P，et al.，Physicalactivity and reduced occurrence of NIDDM.N.Engl.J.Med325：147-152，1991).

虽然遗传和环境因素对NIDDM的发生的相对贡献因个体而异，但患者一般有两种共同的代谢反常，胰岛素抗性和葡萄糖刺激的胰岛素分泌不足，这导致疾病状态

                         (Saad M F，et al.，A two step modelfor development of non-insulin-dependent diabetes.Am.J.Med.90：229-235，1991；DeFronzo R A，et al.，Pathogenesis of NIDDM：A balanced overview.Diabetes Care15：318-368，1992；Lillioja S，et al.，Insulin resistance and insulin secretorydysfunction as precursors of non-insulin-dependent diabetes mellitus.N.Engl.J.Med.329：1988-1992，1993).

靶组织在响应胰岛素方面的不敏感性(胰岛素抗性)似乎是在必要的环境因素存在下首先发生于遗传上易感性对象

(Jun H S，et al.，Pathogenesis of non-insulin-dependent(TypeII)diabetes mellitus(NIDDM)--Genetic predisposition and metabolic abnormalities.Advanced Drug Delivery Reviews 35：157-177，1999).

为弥补这一点，即，为了降低血糖和保持血糖正常，从β细胞分泌的胰岛素增多，造成高胰岛素血症。胰岛素抗性随时间逐渐变差，补偿作用失败，最终导致葡萄糖耐量降低。胰岛素分泌达到一个平台，β细胞功能受损，造成胰岛素缺乏，并最终导致高血糖NIDDM。此外，高血糖本身造成胰岛素抗性和胰岛素分泌受损，加剧了病情。

调节饮食和锻炼以及/或用胰岛素或降血糖药物治疗已经被用来控制糖尿病。用这些药物治疗在一些情形是成功的，但是死亡率指数继续上升。胰岛素治疗提供了症状的缓解而不是治愈NIDDM。降糖药物例如磺酰脲类和双胍类(二甲双胍)也降低血糖，但同样是简单的缓解症状。磺酰脲通过刺激胰β细胞释放胰岛素而降低血糖。这些药物通过关闭对三磷酸腺苷(ATP)敏感的钾通道和将细胞膜去极化，直接刺激胰岛素释放

                            (Aguilar-Bryan L，et al.，Cloning of the beta cell high-affinity sulfonylurea receptor：a regulator of insulinsecretion.Science 268：423-426，1995；Tan G H，et al.，Pharmacologic treatmentoptions for non-insulin-dependent diabetes mellitus.Mayo Clinic Proceedings71：763-768，1996；Lubbos H，et al.，Oral hypoglycemic agents in type II diabetesmellitus.American Family Physician.52：2075-2078，1995)

磺酰脲的副作用包括低血糖、肾和肝病，胃肠道紊乱，心血管死亡率增高，皮肤病反应，头晕，昏昏欲睡和头痛。双胍类药物通过降低肠的葡萄糖吸收和肝葡萄糖来降低血糖水平，而不是通过刺激胰岛素分泌。双胍的主要副作用是乳酸性酸中毒和心血管死亡率增高。α-葡糖酶抑制剂抑制肠的α-葡糖酶，从而延缓蔗糖和复杂碳水化合物的消化。α-葡糖酶抑制剂的副作用包括胃肠道副作用和低血糖。噻唑烷二酮类直接提高胰岛素抗性，增强循环的胰岛素的作用，直接刺激外周葡萄糖摄取和抑制肝中的葡萄糖产生。噻唑烷二酮只在胰岛素存在时才有效，并可能引起红细胞反常和头痛。

因此，显然需要更有效的治疗糖尿病的药物。

肥胖病

医学界普遍承认，在过去几十年中，美国和其它一些国家中肥胖人群稳定地增多。

肥胖是以脂肪在身体上的过多积累为特征的症状。肥胖可以用体重或体表指数(BMI)来测定。通常，当体重超过典型的高度-重量指数表中列出的重量20％时，被认为存在肥胖。肥胖的另一量度BMI是体内存在的脂肪数量，被认为是非运动员成人中肥胖的可靠指示。BMI可以通过以下公式计算：

BMI＝[体重Kg数]/[高度(米)]²

一般，正常的BMI处在20至25的范围内，而肥胖个体的BMI大于或等于30。

这种肥胖已经造成或者促使心脏病、高血压、糖尿病、膝和髋的骨关节炎的发生率显著增加和相关的医学病症的发病率增高。已报道说约50％的美国成年人超重。

通常用来治疗肥胖的有各式各样的方法。这包括饮食调节，例如限制热量，运动方案，药物疗法，手术和心理治疗。然而，这些治疗中很多都存在问题。

在美国专利5,597,595中描述了使用人生长激素(hGH)治疗肥胖。由垂体腺分泌的这种最丰富的激素hGH是对哺乳动物生长、加速脂解(脂肪代谢)和蛋白质合成负责的首要激素。在肥胖个体中hGH的分泌显著减少。hGH与广泛分布在体内的特异性生长激素受体相互作用。例如，脂肪细胞具有hGH受体，当hGH与这些受体结合时，它刺激脂肪细胞破坏甘油三酯并抑制其摄取和积累循环的脂质的能力。然而，服用hGH需要密切监视，因为接受hGH治疗的个体可能发生糖尿病。糖尿病可能是因为hGH减少了细胞摄取的葡萄糖数量，从而造成血糖浓度升高的结果。不仅血糖浓度的这一增加刺激胰的β细胞分泌额外的胰岛素，而且hGH还直接刺激β细胞产生胰岛素。这两种刺激作用的结合大大地超量刺激胰岛素分泌，使得β细胞简直被“烧光”。当发生这种情形时，可能会发生糖尿病。参见Ghyton and Hall，TEXT-BOOK OFMEDICAL PHYSIOLOGY，938 (1995)。

诱发减重的最好方式之一被认为是节食或限制热量，即，通过使摄入低于输出，建立热量短缺。减少热量摄入的最常用的方法是采用低热量的饮食。然而，节食有若干常见的隐患。一是当节食者停止节食并回到普通饮食时，过度摄食的诱惑会成倍增加。第二，很多肥胖人选择新颖或怪异的饮食。这类饮食的一个实例是高脂肪/高蛋白饮食。这些饮食被称作生酮饮食，因为它们含有高水平的胆固醇，它促进酮体症。酮体症与恶心、低血压及嗜睡有关(Kaplan等，同上文献，735)。

药物疗法包括服用通过提高脑中血清素含量并最终控制食欲的药物起作用。血清素(5-羟色胺，5HT)与几种一般行为例如睡眠、情绪、性和食欲有关。通常作为控制体重的药物使用的Redux.RTM(右芬氟拉明)通过提高血清素水平起作用。具体地说，Redux.RTM通过抑制血清素的重摄取并同时刺激血清素的释放来发挥作用。几项受控的临床试验已证实Redux.RTM能帮助个体保持限制热量和较轻的体重至少一年。还应当指出，Redux.RTM似乎降低食欲的能力对肥胖者比对不肥胖的个体更强。Katzung，BASIC&CLINICAL PHARMA COLOGY，276(1998)。然而，使用Redux.RTM有一些有害的副作用，例如头痛、失眠和肺动脉高压(同前文献)。

造成食物吸收不良或减小胃容积的手术方法已被广泛用于显著肥胖的人群。胃旁路术是用来使胃较小的一种方法。具体地说，通过纤维包扎或者横切胃弯之一使胃减小。减小胃容积的主要目的是减慢食物的通过，从而限制个体能摄入的食物数量。虽然结果是成功的，但产生很多不利的副作用。例如，恶心，电解质失衡，以及可能发生阻塞。另一种手术方法是除去脂肪的脂肪切除术。然而，这一方法主要用于美容目的，对于长期的减重没有实际影响(Kaplan等，同上文献，276)。

因此，由于上面详述的各种理由，需要一种容易采用和合算的促进肥胖或超重个体减重的更好方法。

心血管病

心血管病(CVD)是造成死亡的首要原因，并且是全球死亡人数的1/3的病因。接近全球死亡率的85％和CVD患者出生于低和中等收入的国家。例如，在印度，约53％的CVD死者不到70岁；在中国，相应的数字为35％。每年发生的估计为3200万心肌梗死和中风事件中大多数是由一种或多种心血管危险因素—高血压、糖尿病、吸烟、高血脂和身体不活动造成的，如果采取消除这些危险因素的有意义的行动，大多数这类CVD事件是可以防止的。

数目惊人的人群注定要在其生命的某个时刻经历与心血管有关的疾病。每年几乎有100万美国人死于心血管病，而每年因癌症死亡的人数是55万6千人。尽管有这些事实，人们常常害怕癌症甚于心血管病。

美国人对于动脉疾病的危险性已变得漠不关心。一个原因是死于心肌梗死的年青人百分数在过去50年大大下降。对于这一下降的解释包括生活方式改变，更多地采用饮食补充剂/预防性药物，和心脏医学护理改善。

问题是为什么这么多美国人继续死于心肌梗死和中风？基本答案是人们寿命更长了。大多数人已成功地延缓了动脉疾病的发生。于是，不再是50岁时突然死于心肌梗死，而是做到了在60或80岁之前不显示血管症状。这时，全身动脉硬化已危及主要的器官系统，多发性变性疾病造成生命的质量和数量下降。

科学文献中已确定了动脉疾病的很多深层原因。遗憾的是，心脏病学家只是应付了有限数目的这些因素，例如开出降胆固醇药物处方，控制高血压等。由于忽略了与血管有关的疾病流行的其它已被证实的病因，很大数目的美国人正经受着不必要的折磨并且过早地去世。

阿江榄仁树提取物

阿江榄仁树是一种在印度到处可见的生长到约60-90英尺高的落叶树。阿江榄仁树属于使君子科，在当地土语中被称作“阿江”。阿江榄仁树在印度作为强心药使用已超过1500年，并且在印度草药医学中适用于风、火和土所有三种体液的紊乱。阿江榄仁树的树皮在印度医学体系中被广泛地用于各种目的。

美国专利6,162,438描述了一种可食的草药组合物，它是至少3种，优选至少6种选自阿江榄仁、洋蓟、姜、大蒜、锐刺山楂、姜黄、黄细心和胡卢巴的草药的混合物，作为药剂用来控制哺乳动物的高血压、高胆固醇血和高脂血。

Sharma YN等评价了阿江榄仁树皮(印度药典中一种常用的强心物质)的抗氧化和降血液胆固醇作用，并在随机对照试验中与一种已知的抗氧化剂维生素E比较。由这一试验中断定，阿江榄仁树皮粉有和维生素E相近的显著的抗氧化作用。此外，它还有显著的降低血胆固醇的作用

                                     (Antioxidant andhypocholesterolaemic effects of Terminalia arjuna tree-bark powder：a randomisedplacebo-controlled trial，J Assoc Physicians India 2001 Feb；49：231-235)。

Chapuis等曾使用生物测定导引的分离方法来确定毛里求斯药用植物阿江榄仁树(使君子科)的树皮、树干和树叶中抑制癌细胞生长的组分。结果发现癌细胞系活性组分是没食子酸、没食子酸乙酯和黄酮(四羟黄酮)。以前只知道这种植物中存在没食子酸。四羟黄酮已有充分确定的抑制各种癌细胞系的记录，并可能是在传统的癌症治疗中使用阿江榄仁的主要原因。四羟黄酮还被发现对致病细菌淋病奈瑟氏球菌显示特异活性

           (Antineoplastic agents 338.The cancer cell growth inhibitoryconstituents of Terminalia arjuna(Combretaceae).J Ethnopharmacol.1996Aug；53(2)：57-63).

阿江榄仁树的树皮还有作为强心药使用的悠久历史，已被用于治疗冠状动脉病、心力衰竭、高胆固醇血和缓解心绞痛

                              (Miller，A.L.BotanicalInfluences on cardiovascular disease.Alternative Medicine Review.Dec1998，vol 3.No.6，pages 421-431.

阿江榄仁树的树干树皮的水和甲醇提取物被发现在0.2mg/mL时能抑制HIV-1活性70％以上

                             (Kandil F.E.et al.A Tanninanti-cancer promoter from Terminalia arjuna.April 1998，Vol 47.No.8，pages 1567-1568.

在心肌梗死后的心绞痛患者中使用阿江榄仁树皮粉辅助治疗使心绞痛得到缓解，同时改善了左心室射血分数(LVEF)和左心室质量(LVM)

                                          (Dwivedi，S.et al.Beneficial effects of Terminalia arjuna in coronary Artery Disease.Indian HeartJournal.Spet-Oct 1997，vol.49.No.5，pages 507-510.)

剂量为100mg/kg和500mg/kg的阿江榄仁树皮的乙醇提取物显著降低高胆固醇血的兔子的总胆固醇和LDL胆固醇水平

(Ram et al.Hypocholesterolaemic effects of Terminalia arjuna tree bark.Journal of Ethnopharmacology.Vol 55.No.3，pages 165-169.)

现有技术中没有数据或技术信息指出阿江榄仁提取物在治疗或预防或处置糖尿病和肥胖症中的应用。

据报道，阿江榄仁的树干的水和甲醇提取物显示出具有HIV-1活性。但没有其它参考文献涉及在癌症治疗中使用由连续提取溶剂系统得到的阿江榄仁树皮提取物。

阿江榄仁植物因其强心作用而闻名。还有报道指出阿江榄仁在治疗冠状动脉病、心力衰竭、高胆固醇血和缓解心绞痛中的应用。但是对于造成这些活性的作用机制没有明确的评价。然而在本发明中，我们确定了用阿江榄仁提取物处理的细胞在总脂量方面显著减少。该提取物还显示3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制活性。HMG-CoA是胆固醇生物合成途径中的第一个关键步骤。HMG-CoA还原酶是胆固醇生物合成中的限速酶步骤，它已成为降低总血浆胆固醇，特别是LDL胆固醇的最成功的药物治疗。

需要研发对于治疗肥胖、心血管病、某些癌症和糖尿病及相关疾病有效的新药物。

发明概要

本发明的目的将在以下说明和实施例中变得显而易见。

本发明涉及来自榄仁物种，例如阿江榄仁的植物部分的某些提取物，它们被指出在诸如肥胖、心血管病、某些癌症、糖尿病和相关疾病的治疗中可能有用。另外，本发明涉及含有榄仁物种的提取物，例如阿江榄仁物种的提取物的预防性组合物。

提取物命名简介：

植物提取物的命名

1.AV-Avesthagen的头两个字母。

2.植物名称：使用的植物均指定一个唯一的3位数，016代表阿江榄仁。

3.植物的部分/组织：使用的各植物部分均有一个两个字母的标志。例如，Ba表示树皮，Fr表示全果实。

4.溶剂：用于提取的溶剂也被指定一个两位数字，01代表丙酮，02代表苯，03氯仿，04乙醇，05己烷，06甲醇，07石油醚，08水，09乙酸乙酯。用来提取的溶剂的百分含量在括号内给出，(20)表示20％的该溶剂。例如，如果用20％的乙醇进行提取，则是04(20)。

5.提取方法：连续提取用Su表示，而直接提取表示成Di，提取温度写在括号内。例如，Su(65)表示在65℃连续提取。

6.提取物类型，g：胶状物，ng：非胶状物。

表和图的简述：

表1：提取物AV016BaDi(65)04(100)的HPLC指纹图谱

表2：提取物AV016BaDi(28)04(20)的HPLC指纹图谱

表3：提取物AV016BaSu(65)09(100)的HPLC指纹图谱

表4：提取物AV016BaSu(65)01(100)的HPLC指纹图谱

表5：提取物AV016BaSu(65)01(100)ng的HPLC指纹图谱

表6：提取物AV016BaSu(65)01(100)g的HPLC指纹图谱

表7：提取物AV016BaSu(65)04(100)的HPLC指纹图谱

表8：提取物AV016BaSu(65)06(100)的HPLC指纹图谱

表9：提取物AV016BaSu(105)08(100)的HPLC指纹图谱

表10：提取物AV016Fr(105)08(100)的HPLC指纹图谱

表11：提取物AV016BaDi(28)04(20)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表12：提取物AV016BaDi(28)04(20)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表13：提取物AV016BaDi(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表14：提取物AV016BaDi(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表15：提取物AV016BaSu(65)09(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表16：提取物AV016BaSu(65)01(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表17：提取物AV016BaSu(65)01(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式))

表18：提取物AV016BaSu(65)01(100)ng的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表19：提取物AV016BaSu(65)01(100)g的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表20：提取物AV016BaSu(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表21：提取物AV016BaSu(65)06(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表22：提取物AV016BaSu(105)08(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表23：提取物AV016FrDi(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表24：提取物AV016FrSu(105)08(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式))

表25：由阿江榄仁树的不同部分得到的提取物的α-葡糖苷酶抑制活性的IC50值

表26：胰岛素和阿江榄仁提取物对于3T3-L1脂肪细胞摄入葡萄糖的影响

表27：阿江榄仁提取物的抗肥胖能力

表28：阿江榄仁提取物对CHO-K1细胞中脂质含量的影响

表29：阿江榄仁树皮的20％乙醇提取物AV016BaDi(28)04(20)对HMG-CoA还原酶活性的影响

表30：阿江榄仁树皮的100％乙醇直接提取物AV016BaDi(65)04(100)对HMG-CoA还原酶活性的影响

表31：阿江榄仁提取物对HepG2细胞的细胞生存力的影响。

图1：阿江榄仁的乙醇直接提取物AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)抑制α-葡糖苷酶的能力。

图2：阿江榄仁果实提取物AV016FrDi(65)04(100)和AV016FrSu(65)08(100)抑制α-葡糖苷酶的能力。

图3：阿江榄仁连续提取物AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng和AV016BaSu(65)04(100)抑制α-葡糖苷酶的能力。

图4：阿江榄仁的甲醇和水连续提取物AV016BaSu(65)06(100)和AV016BaSu(105)08(100)抑制α-葡糖苷酶的能力。

图5：阿江榄仁连续提取物AV016BaSu(65)09(100)抑制α-葡糖苷酶的能力。

发明详述

本发明的第一方面提供了一种治疗哺乳动物的疾病的方法，该方法包括向哺乳动物施用有效和无毒性数量的至少一种本文定义的阿江榄仁提取物。优选该哺乳动物是人类。有经验的读者会理解，对哺乳动物“治疗疾病”意味着治疗，即，减轻疾病的症状，并且还可意味着在下述意义上处置某种疾病：防止该疾病发展，即变得更糟或者变得更具侵袭性，或者减慢疾病的进展速度。

在本发明的第二方面，提供了一种用来防止哺乳动物发生疾病的方法，该方法包括对哺乳动物施用在食物制品中的有效和无毒性数量的本文定义的阿江榄江提取物，用来预防选自糖尿病、肥胖、心血管病和癌症的某种疾病的发生。最好是，该哺乳动物是人，提取物中含有如本文详述的得自阿江榄仁某个植物部分的单独一种提取物或是几种提取物的组合。因此，本发明还涉及可以从阿江榄仁树的不同部分，例如树皮和果实，分离出的提取物，这些提取物的制备，含有这些提取物的药物，以及这些提取物和成分对于制备药物的应用。

本发明的提取物可以利用常规的有机溶剂萃取法和超临界萃取技术，从榄仁树，例如阿江榄仁树中分离出来。一般来说，这里概述的能以预防或治疗方式起作用的本发明的提取物，可以根据对提取物要求的最终用途，从阿江榄仁树的任何组织，例如树皮或果实中，提取出来。

在本发明的第三方面，提供了一种从阿江榄仁树的各部分制备本发明的提取物的方法，该方法包括：

(1)将所选择的植物材料粉碎成粉末；

(2)对粉状植物材料进行溶剂萃取；

(3)将得到的提取物冷冻干燥。

所选择的植物材料可以是任何类型，但优选选自阿江榄仁树的树皮或果实。

溶剂萃取法可以选自直接提取或者连续提取，例如在索氏萃取器中或在烧瓶中于室温下或在更高的温度，用极性和/或非极性溶剂从植物部分中萃取。通常，提取过程如这里所简述的一样。

有经验的读者会理解，在具有活性的本发明提取物的分离中，用于每一步骤的溶剂或溶剂混合物的选择，正如在这里所指出的和/或实施例中所示，可以根据分离级分的生物测定分析结果进行。

在本发明的范围内还包括一种适合用来治疗选自糖尿病、肥胖、心血管病和癌症的疾病的药物制剂，其中包含至少一种与可药用的载体混合的从榄仁树物种，例如阿江榄仁树中分离出的提取物。该至少一种提取物优选根据计划和所关心的疾病选自在表1-24(含首尾)中列出的那些。优选该至少一种提取物选自表25-30(含首尾)中定义的提取物，同样取决于最终用途。自然，有经验的读者会理解，这些组合物可以含有能产生疗效的任何浓度的两种或多种本发明提取物。因此，治疗组合物可以含有基本上没有不良的污染化合物的榄仁树植物提取物。该植物提取物可以例如经过多次溶剂萃取步骤，基本上将不良组分与所要的组分，例如在实施例和上述表格中提到的组分，分离开来。

本发明还提供了一种治疗哺乳动物，包括人的选自肥胖、癌症、心血管病和糖尿病的疾病的方法，该方法包括使用临床有效数量的表1-24(包括首尾)、优选表25-30(包括首尾)中列出的提取物，以药学上适用的形式，一天一次或几次，或者按照其它合适的时刻表，口服或静脉内施用，或者以干燥或“湿”喷雾方式向肺部释药。

为有效治疗上述疾病所需的提取化合物的数量当然会随所治疗的疾病而变，最终要由医师或兽医确定。要考虑的因素包括所治疗的症状，用药途径，制剂性质，哺乳动物的体重、表面积、年龄和一般状况，以及要服用的具体化合物。本发明提取物的合适的有效剂量一般处在约0.01至约120mg/kg体重的范围内，例如0.1至约120mg/kg体重，优选约0.1-50mg/kg，例如0.5-50mg/kg。总日剂量可以一次给药或多次给药，例如每天2-6次给药。例如，对于75kg的哺乳动物(例如人)，剂量范围约为每天8-9000mg。典型的剂量可以是每天约50mg。如果需要分开的多次给药，一般是15mg式(1)化合物每天最多施用4次。

虽然活性提取物可以单独服用，但活性提取物最好是存在于药物制剂中。用作药物的本发明的制剂含有本发明的提取物和一种或多种可药用的载体以及任选存在的其它治疗成分。载体在与制剂中其它成分相容的意义上应当是可药用的，并且对其接受者应当基本上无不利作用。

因此，本发明还提供了一种药物制剂，其中含有至少一种选自表1-24(首尾在内)中列出的提取物，优选选自表25-30(首尾在内)中提到的提取物，及其可药用的载体。在一项优选的方案中，药物制剂中含有至少一种根据所治疗的疾病类型选自表25-30列出名单的一种提取物。自然，有经验的读者会理解，当为了治疗任何单独一种疾病而选择上述表中列出的不止一种提取物时，要选择适合该疾病类型的提取物。例如，为治疗糖尿病，要从该表中选择适合此用途的提取物。

当然，有经验的读者会理解，含有本发明活性提取物的任何药物制剂可以包括从某一种的榄仁树物种的提取物纯化得到的至少一种活性提取物。因此，药物组合物可以包含从两种或多种榄仁树物种衍生得到的一种以上活性提取物。

还提供了一种制备药物制剂的方法，包括将一种本发明提取物与其可药用的载体相结合。

本发明的制剂包括适合口服或静脉内给药的制剂。

包含至少一种本发明的提取物的静脉内制剂也可以以合适的脂质体或非离子型表面活性剂囊泡制剂的形式或其它合适的释药载体的形式施用。

适合用在本发明制剂中的乳化剂和乳状液稳定剂包括Tween60，Span80，十六/十八烷醇，十四烷醇，甘油单硬脂酸酯和十二烷基硫酸钠。

这些制剂可以方便地配制成单位剂型，并可按照药学领域熟知的任何方法配制。所有方法均包括将活性提取物与构成一种或多种辅助成分的载体结合。一般来说，制备制剂的方法是：将活性提取物与液体载体或者细分的固体载体，或者与二者一起均匀地充分混合，然后如有必要，将产品成型制成所要的制剂。

适合口服的本发明的制剂可以是分离单元的形式，例如胶囊、香囊剂、片剂、锭剂，在调味的基料(常常是蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶)中含有活性成分；在惰性基料(例如明胶和甘油，或蔗糖与阿拉伯胶)中含有活性成分的软锭剂；以及在合适的液体载体中含有活性成分的漱口剂。各制剂通常含有预定数量的活性提取物；其形式为粉末或颗粒，或是在水或非水液体中的溶液或悬浮液，例如浆剂、酏剂、乳剂或者饮剂等。

片剂可以任选地与一种或多种辅助成分一起压制或模塑制成。压制片剂的制备方法可以是：用合适的机械压制自由流动形式的活性提取物，例如粉末或颗粒，可以任选地与一种粘合剂(例如聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如淀粉羟乙酸钠、交联的聚维酮、交联的羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂混合。模塑片剂可以通过在合适的机械内将用惰性液体稀释剂湿化的粉状提取物模塑制得。片剂可任选地包衣或刻痕，并可配制成缓慢或可控地释放其中的活性成分，例如使用比例变化的羟丙基甲基纤维素以提供所希望的释放型式。

糖浆剂可以通过向糖(例如蔗糖)的浓水溶液中加入活性提取物来制备，其中还可以加入任何必要的成分。这些辅助成分可包括增香剂，延迟糖结晶的试剂，或增加任何其它成分的溶解度的试剂，例如多元醇，如甘油或山梨醇。

除了上述成分之外，本发明的制剂还可以包含选自稀释剂、缓冲剂、增香剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等的一种或多种辅助成分。

或者是，组合物是适合人和动物消费的饮食补充剂、食品组合物或饮料组合物。

本发明描述了阿江榄仁树各部分的直接和连续溶剂提取物的HPLC数据和质谱结果，从而对每种提取物给出了自身识别特征。用于连续提取的各种溶剂是按照从非极性到极性的次序，即，己烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇和水。在直接提取的情形，使用单独的醇类溶剂和其与水的混合物作为萃取溶剂。

本发明还包括参照表1-24(包括首尾)中确定的HPLC和MS数据定义的，由阿江榄仁植物不同部位分离出的新的提取物，这些提取物的制备，含有该提取物的药物，以及这些提取物和组分在制备药物方面的应用。

在本发明的另一方面，用于预防、治疗或控制糖尿病和与糖尿病有关的疾病的药物制剂含有单独的或组合的下述提取物：阿江榄仁树皮用100％乙醇溶剂和20％乙醇溶剂的直接提取物[AV016BaDi(65)04(100)]和[AV016BaDi(28)04(20)]，阿江榄仁树皮用乙酸乙酯溶剂的连续提取物[AV016BaSu(65)09(100)]，阿江榄仁树皮用丙酮溶剂的连续提取物[AV016BaSu(60)01(100)g]，阿江榄仁树皮用丙酮溶剂的连续提取物[AV016BaSu(65)01(100)ng]，阿江榄仁树皮用乙醇溶剂的连续提取物[AV016BaSu(65)04(100)]，阿江榄仁树皮用甲醇溶剂的连续提取物[AV016BaSu(65)06(100)]和阿江榄仁树皮用水溶剂的连续提取物[AV016BaSu(105)08(100)]，阿江榄仁果实用乙醇溶剂的直接提取物[AV016FrDi(65)04(100)]和阿江榄仁果实用水溶剂的连续提取物[AV016FrSu(105)08(100)]。如本文中所述，这些药物制剂可以含有可药用的载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的另一方面，用于预防、治疗或控制肥胖和与肥胖有关的疾病的药物组合物含有单独的或组合的以下提取物：阿江榄仁树皮用100％乙醇溶剂和20％乙醇溶剂的直接提取物[AV016BaDi(65)04(100)]和[AV016BaDi(28)04(20)]，阿江榄仁树皮用乙酸乙酯、丙酮、乙醇和甲醇的连续提取物AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)g，AV016BaSu(65)01(100)ng，AV016BaSu(65)04(100)，AV016BaSu(65)06(100)和AV016FrDi(65)04(100)。如本文中所述，这些药物制剂可以含有可药用的载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的另一方面，用于预防、治疗或控制心血管病(CVD)和与CVD有关的疾病的药物制剂含有单独的或组合的以下提取物：阿江榄仁树皮用100％乙醇溶剂和20％乙醇溶剂的直接提取物[AV016BaDi(65)04(100)]和[AV016BaDi(28)04(20)]，阿江榄仁树皮用乙酸乙酯的连续提取物[AV016BaSu(65)09(100)]和用丙酮的连续提取物[AV016BaSu(65)01(100)]。如本文中所述，这些药物制剂可以含有可药用载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的另一方面，用于预防、治疗或控制癌症和与癌症有关的疾病的药物制剂含有阿江榄仁树皮的单独或组合的以下连续提取物：乙酸乙酯提取物[AV016BaSu(65)01(100)]，丙酮提取物[AV016BaSu(65)01(100)]，乙醇提取物[[AV016BaSu(65)04(100)]，甲醇提取物[AV016BaSu(65)06(100)]和水提取物[AV016BaSu(105)08(100)]。这些药物制剂可以如本文所述，含有可药用载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的另一方面，提供了一种食物，也就是说，一种含有至少一种本发明提取物的食物，该提取物通常是干的形式，例如选自表1-24，特别是表25-30中列出的提取物的冷冻干燥形式。有经验的读者会理解，这些食物可以含有一种以上的本发明提取物并可被使用。这些食物可以以预防的方式使用，并可含有与最先加入的提取物功能相似的其它提取物，或者可以加入具有不同的预防功能的其它提取物。因此食物中可以含有使食物具有单一功能的提取物，例如具有预防糖尿病发生的提取物，或是食物可以有对抗两种或更多种疾病的多功能预防作用。一般认为，含有两种或多种提取物的药物制剂也能够具有类似的多功能作用，若是这些提取物具有计划用于预防或者治疗哺乳动物(尤其是人)的一种以上的疾病的不同的治疗或预防性能。

其中可以加入至少一种本发明提取物的食物或食品的类型包括任何加工的食品，例如，糖果，烘烤产品，包括面包如枕形面包和扁平面包，例如空心圆面包、印度式面包等，糕点，快餐食品，例如穆兹利块、压制的果脯块、饼干，奶制品，例如酸奶、牛奶和奶制品，例如蛋奶甜羹，稀奶油，奶酪，奶油和弗拉茨稀奶油，仿制的奶制食品，例如人造黄油、基于橄榄油的糊状制品和低脂奶油代用品，例如Elmlea产品(稀奶油代用品)，水果和蔬果汁，充气饮料，例如碳酸化软饮料和非充气饮料，例如带果肉的鲜果汁，豆奶，牛奶糊和椰子奶等，意大利面食、面条、蔬菜、种子和坚果油，如水果调味的油，例如葵花子油，菜籽油，橄榄油，胡桃油，榛子油和芝麻油等，以及冷冻的甜食，例如冰淇淋，冰冻酸奶等。

食品中包含的本发明提取物的合适的有效剂量一般为每Kg体重约0.01-120mg，例如每Kg体重0.1-约120mg，优选约0.1-50mg/kg，例如0.5-50mg/kg。总日剂量可以每天一次给药或多次给药，例如每天2-6次。

本发明的另一方面提供了选自表1-24，特别是表25-30的提取物在制备于治疗糖尿病、癌症、心血管病和肥胖等疾病的药物方面的应用。

因此，提供了选自以下的一种提取物在制备用于治疗或预防糖尿病和/或相关疾病的药物中的应用：AV016BaDi(65)04(100)，AV016BaDi(28)04(20)，AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)g，AV016BaSu(65)01(100)ng，AV016BaSu(65)04(100)，AV016BaSu(65)06(100)，AV016BaSu(105)08(100)，AV016FrDi(65)04(100)和AV016FrSu(105)08(100)。

另外，还提供了选自以下的一种提取物在制备用于治疗或预防肥胖症的药物中的应用：AV016BaDi(65)04(100)，AV016BaDi(28)04(20)，AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)g，AV016BaSu(65)01(100)ng，AV016BaSu(65)04(100)，AV016BaSu(65)06(100)和AV016FrDi(65)04(100)。

另外，还提供了以下的单独一种提取物或其一种或多种的组合在制备用于治疗或预防心血管病的药物中的应用：AV016BaDi(65)04(100)，AV016BaDi(28)04(20)，AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)。

另外，还提供了以下的单独一种提取物或其一种或多种组合在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用：AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)，AV016BaSu(65)04(100)，AV016BaSu(65)06(100)和AV016BaSu(105)08(100)。

现在将参照以下实施例部分和附表及图，示例说明本发明。应该清楚，这些实施例不要被认为是以任何方式限制本发明的范围。

实施例部分

实施例1：阿江榄仁树的提取：

阿江榄仁树各部分的提取用直接提取法及连续提取法在室温下及在索氏提取器中利用有关的液-液提取技术进行，随后冷冻干燥。

1.连续提取

用索氏萃取器进行阿江榄仁树皮的连续提取。所用的溶剂按照其极性顺序由非极性至极性，即，己烷、石油醚、氯仿、丙酮、乙醇、甲醇和水，温度为65℃。

详细过程给出如下：

1.称量100g粉状植物材料加入提取器(索氏萃取器主体)中，索氏萃取器的底部放置棉花。在顶上用棉花覆盖。向圆底烧瓶中加入1000ml溶剂(从己烷开始)，放在加热套中，在其中加入几小片陶瓷。在材料上加100ml溶剂将其刚好润湿。

2.将萃取器放在烧瓶上，萃取器本身又与冷凝管连接。

3.让冷自来水在冷凝管中连续循环。该装置紧密吻合，就像制成整件装置一样。

4.令加热套加热，设定在65℃。来自烧瓶的溶剂蒸汽将通过萃取器的入口并被冷凝。冷凝(蒸馏)的溶剂汇集在萃取器(主体)中，萃取其中的化合物。

5.当植物材料完全被溶剂充满时，它会泄放到烧瓶中。这一过程是连续的，只要有稳定的加热和循环水。

6.继续提取8小时，每小时循环4-5次。

7.用真空冷冻干燥法将收集在烧瓶内的提取物浓缩。

8.按照与上述相同的步骤，依次用以下溶剂进行提取：石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇和水。

II.直接提取

a.基于索氏萃取器用100％乙醇溶剂的提取步骤

1.称量100g粉状植物材料放在布袋中，转移到该提取器(索氏萃取器主体)中。用棉花盖住顶部。(确保材料的水平面比蒸汽进口管低一英寸)。

2.向圆底烧瓶中加入1升溶剂(从石油醚开始)，将烧瓶放在加热套中，加几个陶瓷片。在材料上加100ml溶剂刚好将其润湿。

3.将萃取器放在烧瓶上，它本身又与冷凝器连接。

4.让冷自来水在冷凝器中连续循环。该装置吻合紧密得如同制成一个整体装置。

5.起动加热套，设定在65℃。来自烧瓶的溶剂蒸汽将通过萃取器入口并冷凝。冷凝(蒸馏)的溶剂将汇集在萃取器(主体)中，从而提取其中的化合物。

6.当植物材料被溶剂完全充满时，它会泄放到烧瓶中。此过程是连续的，只要有稳定的加热和循环水。

7.继续萃取8小时，每小时循环4-5次。

8.用真空冷冻干燥法将收集在烧瓶中的提取物浓缩。

b.室温下用20％乙醇溶剂提取阿江榄仁树皮

1.称量已知量(100g)的粉状植物材料放入锥形瓶中，用铝箔盖住瓶口以防溶剂蒸发。

2.向锥形瓶中加入已知体积(500ml)20％乙醇(100ml乙醇+400ml水)，将其放入轨道摇荡器上，设定速度为210rpm，室温28℃，进行提取。

3.提取该植物材料4小时，彻底排走溶剂。

4.将滤液在1000rpm离心10分钟。收集上清液，冷冻干燥。

5.用250ml溶剂再萃取2×2小时。

6.将滤液在1000rpm下离心10分钟。

7.在真空下用冷冻干燥机将萃取液浓缩。

实施例2：阿江榄仁提取物的代谢指纹分析

得自阿江榄仁树各部分的所有直接和连续提取物的代谢指纹分析是用HPLC和LC/MS技术进行的。

I：HPLC指纹图谱分析

用直接/连续提取法得到的植物提取物进行HPLC分析。高效液相色谱法(HPLC)是这样一种技术，其中少量的样品在高压下被注入到一根C-18柱上，各组分由于它们与柱的相互作用和在柱中的停留时间而被分离。HPLC分析的主要目的是发现该植物提取物中的组分总数。

将适量的提取物溶于甲醇中，配制用于HPLC分析的样品。将这些样品过滤并收集在总回收HPLC小瓶中。这些样品用Waters2695HPLC仪进行分离，然后被分析。

运行条件：

1.用于HPLC分析的软件是Water Millennium³²。

2.用于分离的HPLC柱是WaterμBondpack C-18，5μ，4.6×150mm。

3.柱温保持25℃。

4.溶剂流量设定为每分钟1.0ml。HPLC条件包括梯度色谱—使用的溶剂是乙腈(溶剂A)，甲醇(溶剂B)和水(溶剂C和D)。

阿江榄仁提取物和HPLC运行条件：

1.阿江榄仁提取物：

1.AV016BaDi(65)04(100)

2.AV016BaDi(28)04(20)

3.AV016BaSu(65)04(100)

4.AV016FrDi(65)04(100)

5.AV016BaSu(65)06(100)

1.方法：乙醇_11

压力范围：

         高限 4000psi     低限  0psi

程序化流动：

泵送模式：梯度

在2分钟内加速至10ml/min   (5ml/min/min)

A：乙腈，B：甲醇，C：水

2.阿江榄仁提取物

1.AV016BaSu(65)01(100)

2.AV016BaSu(65)01(100)g

3.AV016BaSu(65)01(100)g

II.方法：乙酸乙酯_10a

压力范围：

高限 4000psi   低限 0psi

程序化流动：

泵送模式：梯度

在2分钟内加速至10ml/min  (5ml/min/min)

 

	时间	流速	％A	％B	％C	％D	曲线
								1	0.01	0.75	5.0	2.5	92.5	0.0	6
2	1.00	0.75	5.0	2.5	92.5	0.0	6
								3	25.00	0.75	25.0	2.5	72.5	0.0	6
4	30.00	0.75	5.0	2.5	92.5	0.0	1

A：乙腈，B：甲醇，C：水

3.阿江榄仁提取物

1.AV016BaSu(65)09(100)

III.方法：乙酸乙酯_4a

压力范围：

       高限 4000psi  低限 0psi

程序化流动：

泵送模式：梯度

在2.0分内加速至10ml/min(5ml/min/min)

A：乙腈，B：甲醇，C：水

4.阿江榄仁提取物

1.AV016BaSu(105)08(100)

2.AV016FrSu(105)08(100)

IV.方法：Gy_水_12

压力范围：

        高限 4000psi  低限 0psi

程序化流动：

泵送模式：梯度

在2.0分内加速至10ml/min  (5ml/min/min)

 

	时间	流速	％A	％B	％C	％D	曲线
								1	0.01	0.75	5.0	5.0	90.0	0.0	6
2	1.00	0.75	5.0	5.0	90.0	0.0	6
								3	20.00	0.75	25.0	15.0	60.0	0.0	4
4	26.00	0.75	70.0	5.0	25.0	0.0	4
								5	30.00	0.75	5.0	5.0	90.0	0.0	1

A：乙腈，B：甲醇，C：水

II.液相色谱质谱(LG/MS)指纹图谱分析：

质谱法是一种可以测定分子质量的仪器方法。质谱仪的5个基本组件是真空系统、样品加入装置、离子化源、质量分析器和离子检测器。将这些组件相结合，质谱仪通过离子化、按照质量-电荷比(m/z)分离和测定分子离子，确定化合物的分子量。

对于阿江榄仁的LC/MS表征，使用的运行条件如下：

1.使用Applied Biosystems的Q-Trap LC/MS仪器。用于LC/MS分析的软件是Analyst。

2.用于分离的HPLC柱是5C18-MS-II填充柱18，5μm，4.6mm内径×150mm。

3.柱温保持在25℃。

4.溶剂流量设定为每分1.0ml。HPLC条件包括梯度色谱法—使用的溶剂是乙腈(溶剂C)、甲醇(溶剂B)和水(溶剂D)。

1.阿江榄仁提取物：

AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)，AV016BaSu(65)01(100)g，

AV016BaSu(65)01(100)g，AV016BaSu(65)04(100)，AV016BaSu(65)06(100)，

AV016BaSu(65)06(80)，AV016BaDi(65)04(100)，and AV016FrDi(65)04(100)

a.所有上述阿江榄仁样品的LC/MS样品运行条件

质谱仪             QTrap              0                MASS

SPEC

配置表版本         01

固件版本           M401400 B4T0301 M3L1400B3 T0300

部件名称             线性离子阱四极LC/MS质谱仪

部件标识             QTrap

制造商               AB Sciex Instrum ents

型号                 027170-C

S/N                  M1100301

开始后时间＝0.0500min

质谱仪           QTrap           0           MASS

SPEC

开始运行-详细状态

真空状态                         施压

真空度   (10e-5Torr)             0.7

前级泵                           Ok

双涡轮泵                         正常

样品加入状态                     备好

离子源/离子通道电路              开

离子源类型                       涡动喷雾

源温(在设定点)                   400.0C

离子源排出泵                     Ok

界面加热器                       备好

质谱仪           QTrap           0              MASS

SPEC

运行结束-详细状态

真空状态                         施压

真空度    (10e-5Torr)            0.7

前级泵                           Ok

双涡轮泵                                正常

样品加入状态                            备好

离子源/离子通道电路                     开动

离子源类型                              涡动喷雾

源温(在设定点)                          400.0C

离子源排出泵                            Ok

界面加热器                              备好

离开始的时间＝61.4833min

PE LC-200 泵法性能

PE LC-200 四级泵

最小压力  (psi)：0.0

最大压力  (psi)：                       6100.0

停车时间(min)：999.9

分步表：

步      总时间   流速     梯度型式    A(％)  B(％)  C(％)  D(％)  TE#1   TE#2

        (min)   (μl/min)

0       0.5     1000.00   1.0        0.0    0.0    10.0    90.0  开     开

1       1.0     1000.00   1.0        0.0    0.0    10.0    90.0  开     开

2       15.0    1000.00   1.0        0.0    0.0    15.0    85.0  开     开

3       40.0    1000.00   1.0        0.0    0.0    25.0    75.0  开     开

4       50.0    1000.00   1.0        0.0    0.0    35.0    65.0  开     开

5       60.0    1000.00   1.0        0.0    0.0    50.0    50.0  开     开

定量测定信息：

样品类型：       Unknown

稀释因子：       1.000000

常规数据：

定量测定表：

第1期：

--------------

期内扫描次数：2243

相对起始时间：　　　0.00msec

期间实验数：　　　　1

第1期实验1：

----------------------------

扫描类型：   Q1MS(Q1)

极性：       正

扫描方式：   一维扫描

分辨率 Q1：  UNIT

强度阈：     0.00cps

置位时间：   0.0000ms

MR停顿：     5.0070ms

MCA：        无

中心/宽度：  无

步大小：     0.10amu

起始(amu)    停止(amu)     时间(sec)    参量     起始   停止

50.00        1700.00       1.60         CEP     6.47   66.65

参量表(第1期实验1)

CUR：       20.00

TEM：       400.00

GS1：       20.00

GS2：       50.00

ihe：       ON

IS：       4500.00

DP         90.00

EP         10.00

2.阿江榄仁提取物：

AV016BaSu(105)08(100)，AV016FrSu(105)08(100)and AV016BaDi(28)04(20).

a.所有上述阿江榄仁样品的LC/MS样品运行条件：

质谱仪              QTrap               0           MASS

SPEC

配置表版本          01

固件版本            M401400 B4T0301 M3L1400 B3T0300

部件名称            线型离子阱四级LC/MS/MS质谱仪

部件标识            QTrap

制造商              AB Sciex Instruments

型号                027170-C

S/N                 M1100301

起始后时间＝2.1000min

质谱仪              QTrap          0          MASS

起始运行-详细状态

真空状态                           施压

真宽度(10e-5Torr)                  0.7

前级泵                                 Ok

双涡轮泵                               正常

样品加入状态                           备好

离子源/离子通道电路                    接通

离子源类型                             涡动喷雾

源温(在设定点)                         400.0C

离子源排出泵                           Ok

界面加热器                             备好

起始后时间＝2.1167min

质谱仪               QTrap             0         MASS

SPEC

运行结束-详细状态

真空状态                               施压

真空度(10e-5Torr)                      0.7

前级泵                                 Ok

双涡轮泵                               正常

样品加入状态                           备好

离子源/离子通道电路                    接通

离子源类型                             Turbo Spray

源温(在设定点)                         400.0C

离子源排出泵                           Ok

界面加热器                             备好

起始后时间＝42.9333min

PE LC-200泵方法性质

PE LC-200四级泵

最小压力(psi)：0.0

最大压力       (psi)：           6100.0

停车时间 (min)：999.9

分步表：

步  总时间(min)  流速(μl/min)  梯度型式  A(％)  B(％)  C(％)  D(％)  TE#1  TE#2

0     0.5           750.00      1.0      0.0    5.0    5.0   90.0   开     开

1     1.0           750.00      1.0      0.0    5.0    5.0   90.0   开     开

2     20.0          750.00      1.0      0.0    15.0   25.0  60.0   开     开

3     26.0          750.00      1.0      0.0    5.0    70.0  25.0   开     开

4     30.0          750.00      1.0      0.0    5.0    5.0   90.0   开     开

5     40.0          750.00      1.0      0.0    5.0    5.0   90.0   开     开

模拟/数字转换器性能

间隔(sec)：     0.200

速度(pts/sec)： 5

极性：          双极性

通道总结

No.名称：       判读值原样大小：  判读单位：

   电压(volts)：状态

1        100.0          ％              1.0 Used

定量测定信息：

样品类型：   Unknown

稀释因子：   1.000000

常规数据：

定量测定表：

第1期：

-------------

期内扫描数： 1495

相对起始时间：   0.00msec

期内实验数：     1

第1期实验1：

扫描类型：  Q1 MS(Q1)

极性：      正

扫描方式：  一维扫描

分辨率 Q1： UNIT

强度阈：    0.00cps

置位时间：  0.0000ms

MR停顿：    5.0070ms

MCA：       No

中心/宽度： No

步大小：    0.10amu

起始(amu)  停止(amu)   时间(sec)  参量  起始    停止

50.00      1700.00     1.60       CEP   6.47   66.65

参量表(第1期实验1)

CUR：    20.00

TEM：    400.00

GS1：    20.00

GS2：    50.00

ihe：    ON

IS：     4500.00

DP       90.00

EP       10.00

实施例3：阿江榄仁提取物的生物治疗能力的测定

I.抗糖尿病能力

进餐后血糖急剧升高是与多种葡萄糖介导的组织缺陷、氧化应激、糖基形成和糖化最终产物形成有关，其结构和功能后果已经遍及实际上每一个人体器官系统。只有同时降低餐后和餐前的血浆葡萄糖水平，才能将糖基化血红蛋白降低到防止或者延缓这些并发症发生的程度。

小肠中的α-葡糖苷酶复合物参与了糖的吸收。例如，α-葡糖苷酶的抑制剂将限制饮食中的碳水化合物的吸收，这又抑制了餐后高血糖。因此，α-葡糖苷酶抑制剂是有希望的治疗和预防糖尿病的候选药物。α-葡糖酶抑制剂(阿卡波糖，伏格列波糖，米格列醇)已在延缓碳水化合物的消化和吸收方面显示有效，从而能不损失热量地减小餐后血糖水平的起伏。

1.α-葡糖苷酶测定

α-葡糖苷酶水解末端非还原性的1，4-连接的α-D-葡萄糖残基，释放出α-D-葡萄糖。在此测定中，通过测量由于对硝基苯基-α-D-吡喃葡糖苷水解释放出对硝基苯酚而引起的400nm处吸收的增加，确定酶的活性。

a.试剂：

·磷酸钾缓冲液0.1M，pH6.8

·PNPG4mM

·碳酸钠0.2M

·0.2％BSA/缓冲溶液

·酶1.2v/ml，在0.2％BSA中

b.步骤：

缓冲剂  600μl

抑制剂  100μl

酶      25μl

    ↓

在37℃温育15分钟

    ↓

PNPG 25μl

    ↓

在37℃温育15分钟

    ↓

加入Na₂CO₃ 750μl

    ↓

读取400nm处的吸收

c.结果和讨论

对于从阿江榄仁树皮和果实的连续和直接提取物，分析其抑制α-葡糖苷酶的能力。结果表明阿江榄仁提取物显示出剂量依赖性的对α-葡糖苷酶的抑制作用。IC₅₀被定义为对酶活性产生50％抑制所需的提取物数量。

如IC₅₀值所示(表25)，所有的阿江榄仁提取物均比市售的阿波糖有更高的抑制α-葡糖苷酶的能力。

2.葡萄糖摄入测定：

脂肪细胞(3T3-L1)的脱氧葡萄糖摄入测定有助于鉴别促进脂肪细胞增加摄入葡萄糖的提取物/生物活性物质。分化的3T3-L1细胞在其由增生性成纤维细胞转化为非增生性脂肪细胞期间，显示出胰岛素刺激的葡萄糖转运速度的急剧增加。Green和Kehinde(1975)最早证实了融合的3T3-L1细胞可以在6-9天内被激素诱发分化成脂肪细胞。

因此此项测定有助于筛选出会促使糖尿病个体迅速除掉血流中的葡萄糖并同时帮助脂肪细胞建立更好的能量储存的那些植物提取物。

3T3-L1的氚化的脱氧葡萄糖摄入是用于体外筛选具有抗糖尿病活性的活性成分的最通用的测定方法之一。

a.3T3-L1细胞培养物

3T3-L1成纤维细胞在37℃和5％CO₂气氛中，于含10％FCS、NEAA、谷氨酰胺、抗生素、抗真菌剂等的DME-F12培养基中培养。将成纤维细胞培养至融合。按3天的间隔，用胰蛋白酶-EDTA溶液处理得到传代培养物。

b.成纤维细胞成熟为脂肪细胞

用含0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、4mg/ml地塞米松、1mg/ml胰岛素和10％FCS的葡萄糖(4.5g/L)极限培养基处理细胞48小时以诱发分化。将细胞在含有前述的标准补加物的DMEM培养基中再培养6-10天。只有至少95％的细胞通过脂滴积累显示出脂肪细胞表型的那些细胞才被使用。这些细胞被取来用于用氚化葡萄糖进行的葡萄糖摄入研究。

c.测定步骤

将50,000个分化的3T3-L1脂肪细胞分配在一只新的96孔板的各孔中。在37℃用KRH缓冲液温育10分钟。分别加入胰岛素10nM，25nM和50nM。对于实验组，在试验化合物(333.0μg)存在下用或者不用10nM胰岛素处理，随后在37℃再温育15分钟。用KRH缓冲液洗池一次。加入含2-脱氧[H]葡萄糖(最终浓度12.2Kbq/ml)的0.1mM2-脱氧葡萄糖引发葡萄糖摄取反应。在37℃温育1小时。加入40μM细胞松驰素B终止试验。用冰冷的KRH缓冲液洗池三次。将细胞增溶在20μL的1％Triton X中，在37℃温育10分钟。在微量滴板放射性计数器上计数放射性。

d.结果和讨论

通过测定含有2.2KBq/ml脱氧氚化葡萄糖的0.1mM脱氧葡萄糖的摄入，分析葡萄糖摄入活性。

如从表26可见，用100％乙醇溶剂直接提取的阿江榄仁树皮提取物[AV016BaDi(65)04(100)]在胰岛素不存在时刺激指数为3.0，在10nM胰岛素存在时为2.0。这些数据表明AV016BaDi(65)04(100)具有有效的胰岛素模拟能力。

2.抗肥胖能力

研究表明，中心性肥胖比一般肥胖更强烈地与脂/脂蛋白反常有关。肥胖会由于心肌细胞中的脂质积累而引起心脏功能不良，还会诱发II型糖尿病。肥胖个体中的这些不利的脂/脂蛋白情况是重要的，因为它们可能是造成心血管病(CVD)危险性增加的原因。

此测定是用来定量确定脂肪组织分化，从而确定细胞在植物提取物存在或不存在下经受分化刺激后的细胞内脂质与甘油三酯含量的一种半定量方法。

a.测定原理

油红染色是用来测定脂肪组织分化的一种半定量方法。用油溶性染料染色是基于染料在脂性物质中的溶解度大于在通常的醇类染料溶剂中的溶解度。油溶O是一种亲脂性红染料，它能将胞内脂滴染色。脂质的定量测定可以在用有机溶剂萃取胞内脂质后进行。因此它被用来估测细胞在经过植物提取物刺激后的脂质和甘油三酯的含量。

b.分析方案

按照每孔10⁵细胞的密度，用分化培养基和提取物(0.33mg)接种3T3-L1细胞，并在37℃和5％CO₂下温育24小时。24小时后除去培养基，加入新鲜的分化培养基，将细胞在培养基中再保持24小时。从第1天开始的48小时后除去培养基，加入只含胰岛素的培养基(DMEMF12+FBS+胰岛素)，将细胞保持24小时。24小时后抽吸走培养基，进行油溶红染色。

c.油红染色

各孔中的试剂总体积为500μL/孔。除去培养基，用PBS洗细胞3次。为固定细胞，将其用4％福尔马林温育1小时，除去福尔马林，再用PBS洗2次。为了用油红O染色，将其用该染色剂温育1小时。1小时后除去该染色剂，用PBS洗，干燥10分钟。加4％NP40。在分光光度计上读出520nm处的吸收。

d.结果和讨论

用3T3-L1细胞进行的抗肥胖试验表明，阿江榄仁提取物对脂质积累显示出抑制作用。正如从表27看到的，阿江榄仁树皮的100％和20％乙醇直接提取物AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)与对照样相比，显示出76.3％和64.3％的抑制作用。

在阿江榄仁树皮的乙酸乙酯、丙酮(胶状)、丙酮(非胶状)、乙醇和甲醇连续提取物AV016BaSu(65)09(100)，AV016BaSu(65)01(100)g，AV016BaSu(65)01(100)ng，AV016BaSu(65)04(100)和AV016BaSu(65)06(100)，与对照样相比，显示出61.9、58.5、86.8、49.4和57.9％的抑制作用。阿江榄仁果实的100％乙醇直接提取物AV016FrDi(65)04(100)与对照样比较显示41.9％的抑制作用。

与对照样相比，正对照测定显示104％的抑制作用。

3.心血管病

胆固醇增高与动脉粥样硬化及心血管的危险大于平常值相联系。高甘油三酯血本身不引起动脉粥样硬化，但是在甘油三酯中富集的脂蛋白也含有胆固醇，它在很多高甘油三酯的人中引起动脉粥样硬化。因此，高甘油三酯可以是对CHD有贡献的脂蛋白问题的一个迹象。

1.基于细胞的脂积累水平检测试验

a.测定原理：

在缺乏脂蛋白的血清存在下生长细胞会诱发细胞内的脂质生物合成。对于在缺乏脂蛋白的血清中生长诱发的细胞进行测定，随后用油红染色法估计总脂量。油红O是一种用来对细胞内中性脂质染色的亲脂性红色染料。染色量与细胞内脂的数量成正比。对于用提取物处理组和对照组检测脂含量，用光度法测定染料的数量并从而得到脂含量。

b.分析步骤

CHO-K1细胞按照10⁵细胞/孔接种在12孔板中。将细胞在37℃和5％CO₂环境下于含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠和抗真菌剂以及青霉素和链霉素的DMEM-F12培养基中生长至80％融合。温育2天后，将培养基换成含10％缺脂蛋白血清、2mM谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠和抗真菌剂以及青霉素和链霉素的DMEM-F12培养基，在37℃和5％CO₂环境下再生长24小时。在24小时后，向提取物处理组以0.5mg/mL的浓度加入阿江榄仁提取物，而对照组用载体(DMSO)处理。再继续培养4小时，随后用无菌的PBS缓冲液洗，固定，并用油红O染色。

c.油红O染色

每孔内试剂总体积为500μl/孔。除去培养基，用PBS洗细胞3次。为了固定细胞，将其与4％福尔马林一起温育1小时。除去福尔马林，再用PBS洗2次。为了用油红O染色，将细胞与该染色剂一起温育1小时。1小时后除去染色剂，用PBS洗，干燥10分钟。加入4％NP40。在光度计上读取520nm处的吸收。

d.结果和讨论

由表28可见，阿江榄仁提取物显示出用提取物处理的细胞中总脂量显著减少。与对照组相比，阿江榄仁树皮连续提取物AV016BaSu(65)09(100)和AV016BaSu(65)01(100)显示出22％和21％的抑制作用。与对照组相比，阿江榄仁乙醇直接提取物AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)在总脂含量方面显示31％和28％的抑制作用。

2.HMG-CoA还原酶测定

3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶是胆固醇生物合成途径中的第一个关键步骤。在胆固醇生物合成中作为限速步骤酶的HMG-CoA还原酶已成为降低总血浆胆固醇，特别是LDL-胆固醇的最成功的治疗药物。

a.测定原理

HMG-CoA还原酶测定是以在来自肝微粒体级分的固定浓度HMG-CoA还原酶催化下NADpH氧化成NADP的反应为基础。

NADPH氧化成NADP⁺伴随着340nm处吸收的减小，并且与样品中HMG-CoA还原酶活性成正比。

b.结果和讨论

检验阿江榄仁树皮的100％乙醇和20％乙醇直接提取物AV016BaDi(28)04(20)和AV016BaDi(65)04(100)的HMG-CoA还原酶抑制能力。与对照组相比，AV016BaDi(28)04(20)和AV016BaDi(65)04(100)显示出对HMG-CoA的93％(表29)和63.1％(表30)的抑制作用。

4.抗癌测定

通过体外筛选植物提取物对于人肝细胞系Hep G2的细胞毒性，确定阿江榄仁植物提取物的抗癌潜力。

a.实验细节

将细胞按每ml2.5×10⁵细胞的密度接种在24孔板中。让细胞附着2小时，然后按10μg/ml的浓度加入提取物。用载体(即DMSO)、抗坏血酸和提取物AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)、AV016BaSu(65)04(100)温育48小时。24小时后测定的细胞生存力。

b.测定方案

按照每ml2.5×10⁵细胞的细胞密度接种HepG2。加入抗坏血酸和阿江榄仁提取物至最终浓度为10μg/ml。在5％CO₂培养箱中于37℃温育48小时。加胰蛋白酶以消化细胞。与1份台盼蓝和4份PBS混合，计数吸收台盼蓝的细胞(非活体细胞)和排斥台盼蓝的细胞(活体细胞)，得到存活的和死亡的细胞数目。

c.结果和讨论

结果发现，与未处理组或用DMSO处理组相比，在药物处理组的情形，用阿江榄仁连续提取物：乙酸乙酯AV016BaSu(65)09(100)、丙酮AV016BaSu(65)01(100)和乙醇AV016BaSu(65)04(100)处理HepG2细胞，减少了细胞总计数和存活细胞的数目。

表1：提取物AV016BaDi(65)04(100)的HPLC指纹图谱

表2：提取物AV016BaDi(28)04(20)的HPLC指纹图谱

表3：提取物AV016BaSu(65)09(100)的HPLC指纹图谱

表4：提取物AV016BaSu(65)01(100)的HPLC指纹图谱

表5：提取物AV016BaSu(65)01(100)ng的HPLC指纹图谱

表6：提取物AV016BaSu(65)01(100)g的HPLC指纹图谱

表7：提取物AV016BaSu(65)04(100)的HPLC指纹图谱

表8：提取物AV016BaSu(65)06(100)的HPLC指纹图谱

表9：提取物AV016BaSu(105)08(100)的HPLC指纹图谱

表10：提取物AV016Fr(105)08(100)的HPLC指纹图谱

表11：提取物AV016BaDi(28)04(20)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							2.1775	1.06E+08	12.3131	1.97E+07	17.7412	0.1874	谷
2.3167	3.07E+08	35.522	3.45E+07	31.1894	0.2408	谷
							2.8588	2.07E+07	2.398	2.52E+06	2.2768	0.2408	底线至底线
3.2879	1.84E+07	2.1314	2.99E+06	2.7	0.1873	底线至底线
							3.7661	1.19E+07	1.3822	1.74E+06	1.5668	0.2408	底线至底线
5.0086	9.58E+06	1.1091	1.08E+06	0.9759	0.2941	底线至底线
							6.1538	8.09E+06	0.9365	1.03E+06	0.9294	0.2141	底线至底线
6.8962	6.00E+06	0.6949	1.39E+06	1.2572	0.1605	底线至底线
							7.7876	8.31E+06	0.9627	1.05E+06	0.9452	0.2676	谷
7.9719	1.18E+07	1.3624	1.89E+06	1.7057	0.214	谷
							10.735	8.06E+06	0.9334	1.45E+06	1.3135	0.2408	底线至底线
12.0425	2.48E+06	0.2866	6.74E+05	0.6081	0.107	底线至底线
							12.3092	1.54E+06	0.1783	8.28E+05	0.7472	0.0803	底线至底线
12.7311	4.83E+06	0.5597	9.68E+05	0.8739	0.1605	底线至底线
							14.3893	3.76E+06	0.4351	9.54E+05	0.8611	0.1605	底线至底线
15.0886	3.66E+06	0.4237	9.12E+05	0.8235	0.1338	底线至底线
							17.5521	1.82E+07	2.1125	2.34E+06	2.1145	0.3211	底线至底线
17.9476	1.90E+07	2.1971	1.86E+06	1.6753	0.2408	底线至底线
							19.5586	1.44E+07	1.6648	1.53E+06	1.3819	0.3211	底线至底线
20.3886	4.78E+06	0.553	1.22E+06	1.1028	0.1605	底线至底线
							21.5431	1.49E+07	1.7195	1.31E+06	1.1854	0.3746	底线至底线
23.6233	8.28E+06	0.9586	1.77E+06	1.5935	0.1873	底线至底线
							24.5583	8.58E+06	0.9939	1.18E+06	1.0651	0.2676	底线至底线
25.1938	9.77E+06	1.131	1.24E+06	1.117	0.3211	底线至底线
							25.6005	5.11E+07	5.9143	5.26E+06	4.7467	0.3478	底线至底线
25.9137	1.34E+07	1.5528	1.76E+06	1.5921	0.2141	底线至底线
							26.7469	1.82E+07	2.1106	2.05E+06	1.8533	0.2943	底线至底线
27.3985	1.09E+07	1.2594	1.39E+06	1.2536	0.2675	底线至底线
							27.6349	4.60E+06	0.5329	1.06E+06	0.9601	0.1338	底线至底线
28.7272	1.89E+07	2.1893	1.77E+06	1.5968	0.3478	底线至底线
							28.8934	1.03E+07	1.1905	2.09E+06	1.8883	0.1338	底线至底线
29.1613	3.01E+06	0.3489	9.23E+05	0.8329	0.1338	底线至底线
							29.9922	8.20E+07	9.495	5.03E+06	4.5397	0.6957	底线至底线
34.628	1.16E+07	1.3485	1.01E+06	0.9137	0.3746	底线至底线
							36.8649	2.86E+06	0.3315	8.91E+05	0.804	0.107	底线至底线
37.1874	1.77E+06	0.2051	6.81E+05	0.6146	0.0802	底线至底线
							37.7494	4.85E+06	0.5616	7.24E+05	0.6535	0.1873	底线至底线

表12：提取物AV016BaDi(28)04(20)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							2.1961	2.85E+08	24.4168	3.04E+07	25.3851	0.2676	谷
2.4834	4.77E+08	40.8241	2.58E+07	21.5134	0.5084	谷
							3.4214	7.47E+06	0.6387	1.44E+06	1.2067	0.1873	底线至底线
4.4188	3.03E+06	0.2592	1.25E+06	1.0442	0.107	底线至底线
							7.9809	8.39E+06	0.7181	1.33E+06	1.1079	0.1873	底线至底线
9.6559	5.75E+06	0.4914	1.14E+06	0.9551	0.1873	底线至底线
							11.4246	2.60E+06	0.2223	8.53E+05	0.7128	0.1338	底线至底线
12.387	6.72E+06	0.575	1.29E+06	1.0785	0.1873	底线至底线
							12.7886	3.28E+07	2.8027	4.15E+06	3.4643	0.2408	底线至底线
14.0996	3.48E+06	0.2974	1.12E+06	0.9338	0.107	底线至底线
							14.8736	3.87E+06	0.3307	5.13E+05	0.4282	0.1605	底线至底线
15.1974	2.00E+06	0.1714	1.08E+06	0.9018	0.0803	底线至底线
							16.2118	1.20E+07	1.0275	1.28E+06	1.0691	0.2676	底线至底线
17.1494	6.42E+06	0.5495	1.26E+06	1.0499	0.214	底线至底线
							17.3337	1.35E+07	1.157	2.57E+06	2.1439	0.1873	底线至底线
17.6906	3.73E+07	3.1891	2.51E+06	2.0939	0.4013	谷
							17.8922	9.86E+06	0.8435	1.99E+06	1.6607	0.1338	谷
18.3572	4.74E+06	0.4051	2.29E+06	1.9131	0.0803	底线至底线
							18.7319	9.901E+06	0.8468	1.37E+06	1.144	0.2408	底线至底线
19.6901	6.66E+06	0.5693	1.68E+06	1.4049	0.1338	底线至底线
							20.1151	1.26E+07	1.082	1.77E+06	1.4749	0.2408	底线至底线
21.084	5.171E+06	0.4419	1.45E+06	1.2082	0.1338	底线至底线
							21.4301	6.15E+06	0.5263	2.11E+06	1.7665	0.0803	谷
21.5887	1.05E+07	0.8972	2.53E+06	2.1134	0.1605	谷
							23.7467	8.39E+06	0.7173	1.24E+06	1.0376	0.2675	底线至底线
23.9916	4.44E+06	0.3795	8.19E+05	0.6845	0.1338	底线至底线
							24.7774	6.82E+06	0.5835	1.14E+06	0.9516	0.2943	底线至底线
25.5831	2.43E+07	2.0804	2.38E+06	1.9909	0.3211	底线至底线
							25.9059	1.37E+07	1.1725	2.04E+06	1.7081	0.2675	底线至底线
26.2502	1.00E+07	0.8555	1.08E+06	0.9016	0.2408	底线至底线
							26.7168	1.72E+07	1.471	2.26E+06	1.8859	0.2408	谷
26.9142	2.14E+07	1.8288	2.20E+06	1.8395	0.2676	谷
							28.3515	3.10E+07	2.6494	3.47E+06	2.8963	0.4281	谷
28.6747	2.53E+07	2.1615	3.53E+06	2.9518	0.3478	谷
							28.9455	4.47E+06	0.3823	1.21E+06	1.0119	0.1338	底线至底线
29.6212	7.70E+06	0.6586	7.87E+05	0.6574	0.2408	底线至底线
							30.0197	1.10E+07	0.939	2.58E+06	2.1565	0.1873	底线至底线
30.4766	9.79E+06	0.8377	1.86E+06	1.552	0.1605	底线至底线

表13：提取物AV016BaDi(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							1.6819	5.13E+07	3.3673	1.07E+07	7.702	0.1873	底线至底线
2.1223	4.05E+07	2.6634	4.33E+06	3.1211	0.2408	底线至底线
							2.4137	3.19E+08	20.9505	4.49E+07	32.3621	0.3479	底线至底线
35.37	7.19E+07	4.7236	3.26E+06	2.3544	0.6422	底线至底线
							43.1584	2.30E+08	15.0758	1.02E+07	7.3293	0.7759	底线至底线
46.4236	1.38E+07	0.9069	1.66E+06	1.1971	0.3746	底线至底线
							48.1523	2.43E+07	1.5953	2.55E+06	1.8369	0.3211	底线至底线
48.5731	7.28E+07	4.7831	6.02E+06	4.3446	0.3746	底线至底线
							49.1844	4.59E+07	3.0145	4.22E+06	3.0466	0.4014	底线至底线
49.7221	1.53E+08	10.0401	1.05E+07	7.5644	0.6421	底线至底线
							50.41	1.98E+08	13.0047	1.31E+07	9.4266	0.6422	底线至底线
53.0591	1.83E+07	1.2049	2.30E+06	1.6573	0.3478	底线至底线
							53.7262	1.26E+08	8.2723	8.93E+06	6.4387	0.5619	底线至底线
55.4126	1.19E+08	7.8049	1.12E+07	8.068	0.4013	底线至底线
							55.8032	3.95E+07	2.5926	4.92E+06	3.5508	0.3478	底线至底线

表14：提取物AV016BaDi(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							1.5858	4.95E+08	33.2934	5.09E+07	33.5845	0.3211	谷
1.6837	4.68E+08	31.4658	4.70E+07	30.9815	0.2675	谷
							2.281	2.71E+08	18.2632	2.23E+07	14.6901	0.3479	谷
2.3736	1.40E+08	9.4462	2.07E+07	13.6345	0.214	谷
							42.7019	3.33E+06	0.2239	1.08E+06	0.7156	0.2141	底线至底线
51.6555	9.78E+06	0.6583	1.30E+06	0.8605	0.2408	底线至底线
							54.1648	7.99E+07	5.3782	4.28E+06	2.8245	0.7224	底线至底线
55.1059	3.72E+06	0.2501	1.06E+06	0.697	0.107	底线至底线
							57.6108	6.57E+06	0.4422	1.30E+06	0.855	0.214	底线至底线
58.0334	6.71E+06	0.4517	9.03E+05	0.5959	0.2141	底线至底线
							58.9956	1.89E+06	0.127	8.50E+05	0.5609	0.0802	底线至底线

表15：提取物AV016BaSu(65)09(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							0.6837	2.30E+07	1.9654	2.66E+06	2.8378	0.3211	底线至底线
1.7359	3.23E+08	27.6122	2.10E+07	22.4515	0.6155	底线至底线
							2.1817	6.42E+08	54.9509	5.24E+07	55.9679	0.3212	底线至底线
46.2873	2.68E+06	0.2294	1.06E+06	1.1283	0.0802	底线至底线
							51.3977	1.34E+07	1.1443	1.86E+06	1.987	0.2408	底线至底线
51.7551	1.14E+07	0.9773	2.30E+06	2.4614	0.1605	底线至底线
							53.5882	4.82E+07	4.1246	4.09E+06	4.3665	0.4281	底线至底线
56.8025	3.06E+07	2.6205	2.29E+06	2.4491	0.2943	底线至底线
							57.7937	7.45E+07	6.3753	5.94E+06	6.3504	0.4549	底线至底线

表16：提取物AV016BaSu(65)01(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							0.9306	6.79E+06	0.9084	1.15E+06	1.8547	0.1873	底线至底线
1.6126	3.36E+07	4.493	1.23E+06	1.9756	0.2943	底线至底线
							2.2467	5.48E+08	73.275	2.92E+07	46.9161	0.5887	底线至底线
2.6959	5.61E+06	0.7509	2.37E+06	3.8115	0.0803	底线至底线
							8.7292	4.57E+06	0.6115	7.87E+05	1.2645	0.1605	底线至底线
22.1814	1.19E+07	1.5974	9.94E+05	1.5977	0.3478	底线至底线
							22.538	5.22E+06	0.6979	8.29E+05	1.3331	0.1873	底线至底线
24.7315	5.89E+06	0.7887	1.07E+06	1.7263	0.1605	底线至底线
							26.7098	3.29E+06	0.4408	1.01E+06	1.6234	0.107	底线至底线
28.9401	1.24E+07	1.6572	1.40E+06	2.2533	0.2676	底线至底线
							29.316	3.87E+06	0.5185	1.47E+06	2.3673	0.0803	底线至底线
33.8775	4.43E+06	0.5927	1.17E+06	1.883	0.1605	底线至底线
							35.7436	4.34E+06	0.5805	8.92E+05	1.4329	0.1873	底线至底线
37.7239	6.26E+06	0.8374	1.17E+06	1.8777	0.214	底线至底线
							37.8343	1.99E+06	0.2659	7.72E+05	1.2402	0.107	底线至底线
39.1183	5.39E+06	0.7212	9.96E+05	1.6006	0.1606	底线至底线
							44.5179	7.33E+06	0.9815	9.63E+05	1.5473	0.2676	底线至底线
49.8635	3.66E+06	0.4897	8.38E+05	1.347	0.1338	底线至底线
							51.9325	3.25E+06	0.4342	1.23E+06	1.9711	0.0803	底线至底线
52.2278	3.39E+06	0.4532	1.25E+06	2.0023	0.1071	底线至底线
							52.5806	1.33E+07	1.7735	1.73E+06	2.7832	0.2676	谷
52.735	1.12E+07	1.5033	1.69E+06	2.7234	0.1873	谷
							53.8915	1.27E+07	1.706	2.22E+06	3.5732	0.2141	底线至底线
54.4726	7.86E+06	1.0524	1.51E+06	2.4278	0.1338	底线至底线
							57.8304	1.22E+07	1.6307	2.45E+06	3.9445	0.1873	底线至底线
59.5907	5.79E+06	0.7754	1.11E+06	1.7919	0.1338	底线至底线
							59.9224	3.46E+06	0.463	7.03E+05	1.1303	0.1338	底线至底线

表17：提取物AV016BaSu(65)01(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1-ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							0.9354	4.30E+06	1.2293	1.22E+06	2.4333	0.214	底线至底线
2.2806	1.29E+08	36.7178	1.08E+07	21.6409	0.4549	底线至底线
							2.6726	4.11E+07	11.7354	1.62E+07	32.297	0.0803	底线至底线
2.9712	3.79E+07	10.8273	7.74E+06	15.4562	0.1873	底线至底线
							51.3175	1.61E+06	0.4586	6.88E+05	1.3736	0.0803	底线至底线
53.8048	2.24E+07	6.3996	1.62E+06	3.2379	0.3211	底线至底线
							54.3764	3.18E+07	9.0759	2.29E+06	4.5779	0.5351	底线至底线
56.2363	1.47E+07	4.2035	1.55E+06	3.1017	0.3478	底线至底线
							56.9396	2.67E+06	0.7637	1.65E+06	3.2962	0.0535	底线至底线
57.4693	1.54E+07	4.4064	2.12E+06	4.2359	0.2676	谷
							57.8919	4.50E+07	12.8633	3.30E+06	6.595	0.5886	谷
58.5708	4.62E+06	1.3192	8.79E+05	1.7544	0.2141	底线至底线

表18：提取物AV016BaSu(65)01(100)ng的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							0.2815	2.64E+07	2.56	1.89E+06	2.0165	0.4014	底线至底线
0.6177	2.15E+07	2.0898	4.89E+06	5.2322	0.214	底线至底线
							1.4595	6.17E+07	5.9816	5.53E+06	5.911	0.3478	谷
1.6305	2.63E+07	2.5549	3.33E+06	3.5575	0.1873	谷
							2.2215	5.21E+08	50.5534	3.02E+07	32.3009	0.5352	底线至底线
4.4158	5.86E+06	0.5685	1.43E+06	1.5317	0.1605	底线至底线
							10.5664	6.14E+06	0.5957	7.92E+05	0.8469	0.2408	底线至底线
23.1719	7.20E+06	0.6985	1.10E+06	1.1733	0.2141	底线至底线
							26.6471	2.14E+06	0.2071	1.07E+06	1.1409	0.0803	底线至底线
28.4723	8.22E+06	0.7973	9.73E+05	1.04	0.2676	底线至底线
							29.1292	3.99E+06	0.387	7.08E+05	0.7574	0.1873	底线至底线
31.5736	8.16E+06	0.7917	8.24E+05	0.8813	0.2408	底线至底线
							31.6945	2.56E+06	0.2481	7.61E+05	0.8141	0.107	底线至底线
33.9826	1.00E+07	0.9715	1.28E+06	1.3722	0.2943	底线至底线
							36.5048	4.65E+06	0.4512	8.70E+05	0.93	0.1338	底线至底线
37.6212	3.23E+06	0.3131	1.19E+06	1.2726	0.107	底线至底线
							39.8509	3.18E+06	0.3083	7.69E+05	0.822	0.1338	底线至底线
42.0646	4.16E+06	0.4038	9.70E+05	1.0375	0.1605	底线至底线
							42.4115	3.05E+06	0.2954	6.68E+05	0.7142	0.1338	底线至底线
42.5886	5.36E+06	0.5203	1.14E+06	1.2137	0.1338	底线至底线
							43.7214	1.66E+06	0.1606	8.64E+05	0.9238	0.0803	底线至底线
49.6266	3.44E+06	0.3332	6.23E+05	0.6663	0.1605	底线至底线
							49.8477	1.80E+06	0.175	9.30E+05	0.9949	0.0803	底线至底线
50.2725	2.67E+06	0.2585	1.22E+06	1.3044	0.0803	底线至底线
							50.4625	2.57E+06	0.2489	1.25E+06	1.3321	0.0803	底线至底线
51.6971	9.21E+06	0.8936	1.33E+06	1.4175	0.3211	底线至底线
							52.2644	3.77E+06	0.3661	1.08E+06	1.1526	0.1338	底线至底线
52.6743	1.05E+07	1.0181	1.27E+06	1.3617	0.3478	底线至底线
							53.3229	180E+06	0.175	7.11E+05	0.7607	0.0803	底线至底线
54.0466	5.16E+07	5.0087	5.02E+06	5.3685	0.4281	底线至底线
							54.5611	7.42E+06	07194	1.35E+06	1439	0.1873	底线至底线
55.786	3.29E+06	0.3187	1.22E+06	1.304	0.107	底线至底线
							56.3205	9.29E+06	0.9008	1.81E+06	1.9397	0.1605	底线至底线
56.982	1.01E+07	0.9748	1.91E+06	2.0474	0.1873	底线至底线
							57.5849	6.16E+07	5.9742	5.18E+06	5.5408	0.4549	谷
57.9722	1.07E+08	10.4	6.43E+06	6.8743	0.6421	谷
							59.2956	8.01E+06	0.7772	9.41E+05	1.0067	0.2676	底线至底线

表19：提取物AV016BaSu(65)01(100)g的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							0.2462	4.54E+06	0.4516	1.28E+06	1.5367	0.1605	底线至底线
0.7783	2.91E+07	2.896	2.30E+06	2.7508	0.4281	底线至底线
							1.4229	1.44E+08	14.3325	1.54E+07	18.4396	0.2676	谷
1.6808	2.48E+08	24.6093	1.67E+07	20.0141	0.4281	谷
							2.2103	5.05E+08	50.1865	3.12E+07	37.4091	0.5084	底线至底线
2.6741	2.06E+07	2.0484	6.02E+06	7.2093	0.1338	底线至底线
							3.5511	4.01E+06	0.3982	1.49E+06	1.7817	0.107	底线至底线
4.8158	1.41E+07	1.4004	2.22E+06	2.6599	0.2676	底线至底线
							27.5026	4.41E+06	0.4385	1.10E+06	1.3192	0.2141	底线至底线
53.9115	1.52E+07	1.5124	1.73E+06	2.0716	0.3479	底线至底线
							55.1432	1.04E+07	1.0317	1.45E+06	1.735	0.3478	底线至底线
56.3186	2.19E+06	0.2172	8.58E+05	1.0289	0.0803	底线至底线
							57.4751	1.54E+06	0.153	7.41E+05	0.8876	0.0803	底线至底线
57.9589	3.26E+06	0.3241	9.65E+05	1.1566	0.107	底线至底线

表20：提取物AV016BaSu(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							1.3402	1.14E+08	17.1348	1.35E+07	13.7133	0.2676	谷
1.6073	1.74E+07	2.6038	1.93E+06	1.9612	0.1606	谷
							2.2967	1.87E+08	28.0404	1.01E+07	10.3069	0.4817	底线至底线
4.0358	4.53E+06	0.6786	1.01E+06	1.0332	0.1338	谷
							4.1691	3.10E+06	0.4647	1.31E+06	1.3305	0.0803	谷
4.385	5.02E+06	0.7515	1.42E+06	1.4467	0.1338	底线至底线
							4.9989	5.94E+06	0.8892	1.16E+06	1.1771	0.1605	底线至底线
5.3019	3.46E+06	0.5183	1.06E+06	1.0776	0.1338	底线至底线
							5.9113	2.78E+06	0.4167	1.30E+06	1.3198	0.0803	底线至底线
6.1778	4.49E+06	0.6721	7.58E+05	0.7719	0.1873	底线至底线
							6.3704	2.71E+06	0.4056	7.84E+05	0.7985	0.107	底线至底线
6.8924	6.19E+06	0.9275	7.75E+05	0.7891	0.214	底线至底线
							7.2702	3.77E+06	0.5654	1.17E+06	1.1885	0.107	底线至底线
7.4357	2.04E+06	0.3051	9.28E+05	0.945	0.0803	底线至底线
							7.9721	4.93E+06	0.7391	9.22E+05	0.939	0.1873	底线至底线
8.8605	6.09E+06	0.9128	7.53E+05	0.7667	0.2141	底线至底线
							9.4252	2.87E+06	0.4292	7.85E+05	0.7996	0.1071	底线至底线
9.789	4.10E+06	0.6138	6.12E+05	0.6234	0.2676	底线至底线
							10.7492	1.94E+06	0.2902	7.58E+05	0.7718	0.0803	底线至底线
13.0858	2.60E+06	0.3897	6.98E+05	0.7105	0.1094	谷
							13.1888	3.36E+06	0.5029	7.11E+05	0.7238	0.1582	谷
15.4704	4.27E+06	0.64	1.29E+06	1.3121	0.1338	底线至底线
							16.5549	2.37E+06	0.3545	8.66E+05	0.8822	0.0802	底线至底线
17.1515	4.19E+06	0.6275	1.24E+06	1.2608	0.107	谷
							17.2577	5.17E+06	0.7752	9.38E+05	0.9557	0.1606	谷
17.4256	5.27E+06	0.7899	8.05E+05	0.8196	0.1605	底线至底线
							17.7689	5.45E+06	0.816	1.09E+06	1.1149	0.1338	底线至底线
19.3648	2.95E+06	0.4416	8.37E+05	0.8528	0.1606	底线至底线
							19.5311	1.19E+06	0.1786	5.57E+05	0.5667	0.0803	底线至底线
20.302	5.74E+06	0.8605	9.81E+05	0.9987	0.1605	底线至底线
							23.1422	4.84E+06	0.7254	8.61E+05	0.8767	0.1605	底线至底线
23.4055	3.51E+06	0.5262	7.76E+05	0.7901	0.1345	底线至底线
							25.5012	2.20E+06	0.3299	1.04E+06	1.0621	0.0803	底线至底线
25.9266	2.59E+06	0.3882	9.14E+05	0.931	0.107	底线至底线
							26.7339	3.31E+06	0.496	1.09E+06	1.1142	0.107	底线至底线
27.8535	3.91E+06	0.5853	1.02E+06	1.0382	0.1873	底线至底线
							28.7851	2.65E+06	0.3968	9.95E+05	1.0129	0.0803	谷
28.9276	5.31E+06	0.7949	8.69E+05	0.8849	0.1873	谷
							29.0503	4.46E+06	0.6684	1.13E+06	1.1496	0.1605	谷
29.6159	2.76E+06	0.413	1.10E+06	1.1195	0.107	底线至底线
							31.7858	2.66E+06	0.3987	7.40E+05	0.7538	0.1338	谷
31.9243	2.84E+06	0.4248	533E+05	0.543	0.1605	谷
							32.5063	3.51E+06	0.5259	1.20E+06	1.2204	0.107	底线至底线

 

33.128	3.73E+06	0.558	7.30E+05	0.7436	0.2141	底线至底线
							33.3651	1.37E+06	0.2059	5.85E+05	0.596	0.0803	底线至底线
34.7807	3.81E+06	0.5705	9.24E+05	0.9412	0.1338	底线至底线
							35.2633	2.05E+06	0.3075	7.05E+05	0.7181	0.107	底线至底线
36.9489	5.65E+06	0.8458	9.78E+05	0.9955	0.1605	底线至底线
							38.1394	2.87E+06	0.4303	8.43E+05	0.8586	0.107	底线至底线
38.6896	6.18E+06	0.9252	1.03E+06	1.0486	0.2408	底线至底线
							40.5898	2.15E+06	0.3224	5.81E+05	0.5917	0.1338	底线至底线
41.5733	7.00E+06	1.0491	9.43E+05	0.96	0.2408	底线至底线
							42.0674	3.46E+06	0.5184	8.98E+05	0.9143	0.1338	底线至底线
42.2718	8.14E+06	1.2191	1.05E+06	1.0705	0.2676	底线至底线
							42.4327	2.55E+06	0.3818	6.87E+05	0.6998	0.107	底线至底线
44.1144	7.48E+06	1.1211	1.08E+06	1.1033	0.2943	底线至底线
							46.1964	6.08E+06	0.9103	8.94E+05	0.9104	0.1873	底线至底线
46.8725	3.21E+06	0.4811	7.64E+05	0.7785	0.1338	底线至底线
							47.3852	1.47E+06	0.2207	7.06E+05	0.7194	0.0803	底线至底线
50.6192	1.54E+06	0.2307	6.74E+05	0.6865	0.0803	底线至底线
							50.8303	3.42E+06	0.5122	1.03E+06	1.0527	0.107	底线至底线
51.2141	6.26E+06	0.9376	1.25E+06	1.2757	0.1873	底线至底线
							51.531	8.74E+06	1.3088	1.14E+06	1.1594	0.2408	谷
51.6971	7.62E+06	1.1419	1.49E+06	1.5193	0.1606	谷
							51.9366	3.58E+06	0.5358	1.13E+06	1.146	0.1338	底线至底线
52.5223	4.27E+06	0.6399	1.01E+06	1.0277	0.1338	底线至底线
							53.2728	4.39E+06	0.6573	7.78E+05	0.7923	0.1606	底线至底线
53.8949	1.32E+07	1.9795	1.63E+06	1.6568	0.3211	底线至底线
							54.4009	4.66E+06	0.6975	1.34E+06	1.3633	0.107	谷
54.5073	1.82E+07	2.7254	1.63E+06	1.6624	0.2676	谷
							55.9786	4.07E+06	0.6101	9.34E+05	0.9515	0.1338	底线至底线
56.3475	1.33E+07	1.9928	1.13E+06	1.1551	0.3211	谷
							56.5847	4.61E+06	0.6907	8.48E+05	0.864	0.1605	谷
56.8275	9.26E+06	1.3875	1.22E+06	1.243	0.1873	谷
							57.0145	4.88E+06	0.7309	9.98E+05	1.016	0.1606	谷
57.1188	2.45E+06	0.3669	7.75E+05	0.7891	0.107	底线至底线
							57.7155	6.35E+06	0.952	1.11E+06	1.1327	0.1606	谷
57.8152	9.52E+06	1.4268	1.38E+06	1.4031	0.2141	谷

表21：提取物AV016BaSu(65)06(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							1.3425	1.34E+08	15.6624	2.35E+07	34.2569	0.2141	底线至底线
2.3068	6.22E+08	72.7416	3.24E+07	47.2835	0.5886	底线至底线
							4.4357	5.31E+06	0.6201	1.63E+06	2.3849	0.1605	底线至底线
5.2161	2.96E+06	0.3463	1.29E+06	1.8752	0.107	底线至底线
							5.6491	9.55E+06	1.1164	1.58E+06	2.3015	0.1873	底线至底线
6.6417	9.07E+06	1.0594	2.04E+06	2.9753	0.1605	底线至底线
							17.6827	1.27E+07	1.4888	1.34E+06	1.954	04281	底线至底线
54.1984	5.00E+07	5.8447	3.32E+06	4.8386	0.4548	底线至底线
							57.3586	9.59E+06	1.1203	1.46E+06	2.1301	0.1873	底线至底线

表22：提取物AV016BaSu(105)08(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							2.0569	2.14E+08	27.1727	2.15E+07	36.3993	0.2677	底线至底线
3.0165	5.13E+08	65.1587	2.56E+07	43.3466	0.7224	底线至底线
							4.4937	1.06E+07	1.3463	2.07E+06	3.4978	0.1873	底线至底线
4.8116	9.88E+06	1.255	1.36E+06	2.304	0.2141	底线至底线
							7.1128	9.55E+06	1.2133	1.79E+06	3.0334	0.1606	底线至底线
20.2582	6.97E+06	0.8856	1.05E+06	1.7785	0.1873	底线至底线
							21.0285	2.37E+06	0.3008	8.07E+05	1.3647	0.107	底线至底线
21.9949	5.91E+06	0.751	1.41E+06	2.3921	0.1605	底线至底线
							26.1397	4.67E+06	0.5933	1.60E+06	2.7139	0.1338	底线至底线
28.479	1.04E+07	1.3233	1.87E+06	3.1697	0.1873	底线至底线

表23：提取物AV016FrDi(65)04(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							1.6028	1.52E+09	29.4877	6.12E+07	29.3519	0.6423	谷
2.2961	3.50E+09	68.0186	1.30E+08	62.3426	0.99	谷
							4.0708	3.33E+06	0.0647	1.35E+06	0.6474	0.107	底线至底线
4.8702	1.71E+07	0.3327	2.48E+06	1.1882	0.2675	底线至底线
							5.4024	9.12E+06	0.1773	2.48E+06	1.1914	0.1338	底线至底线
6.2587	4.84E+06	0.0941	1.53E+06	0.7348	0.107	底线至底线
							47.0653	5.85E+07	1.1379	2.31E+06	1.1097	0.6689	底线至底线
48.8324	4.52E+06	0.0879	1.54E+06	0.7369	0.1338	底线至底线
							49.5832	5.13E+06	0.0998	1.18E+06	0.5668	0.1338	底线至底线
51.2074	3.34E+06	0.065	1.38E+06	0.6601	0.0802	底线至底线
							51.9303	6.03E+06	0.1171	1.52E+06	0.7281	0.1338	底线至底线
57.0683	1.63E+07	0.3173	1.55E+06	0.7421	0.3211	底线至底线

表24：提取物AV016FrSu(105)08(100)的LC/MS指纹图谱(TIC谱(Q1+ve模式)峰值表：

 

时间(分)	面积(计数)	面积％	高度(cps)	高度％	宽度(分)	基线类型
							1.9597	2.64E+08	29.489	2.96E+07	45.0514	0.2677	底线至底线
3.1068	6.21E+08	69.4326	3.28E+07	49.9315	0.6689	底线至底线
							5.6942	4.34E+06	0.485	1.88E+06	2.8549	0.0802	底线至底线
22.1023	5.31E+06	0.5934	1.42E+06	2.1622	0.1605	底线至底线

表25.阿江榄仁树不同部分的提取物抑制α-葡糖苷酶活性的IC₅₀值

表26：胰岛素和阿江榄仁提取物对葡萄糖在3T3-L1脂肪细胞中摄入的影响

刺激指数＝{(样品的平均值-对照样(只用细胞)的平均值)/对照样(只用细胞)的平均值}

表27：阿江榄仁提取物的抗肥胖能力

 

处理方式	读数OD520nm	平均值	最后读数(读数-空白)	抑制％
空白(无细胞)	0.887		0	－
只用细胞	2.883	2.883	1.996	0.0
						2.883
					细胞+DMSO	2.786	2.786	1.899	0.0
	2.786
细胞+AV016BaDi(65)04(100)	1.428	1.344	0.457	76.3
						1.26
					细胞+AV016BaSu(65)09(100)	2.105	1.616	0.729	61.9
	1.127
细胞+AV016BaSu(65)01(100)ng	1.161	1.146	0.259	86.8
						1.131
					细胞+AV016BaSu(65)01(100)g	2.23	1.6805	0.7935	58.5
	1.131
细胞+AV016BaSu(65)04(100)	1.813	1.8535	0.9665	49.4
						1.894
					细胞+AV016BaSu(65)06(100)	1.905	1.693	0.806	57.9
	1481
细胞+AV016BaDi(28)04(20)	1.832	1.6	0.713	64.3
						1.368
					细胞+AV016FrDi(65)04(100)	1.941	1.9895	1.1025	41.9
	2.038
细胞++ve Control	0.774	0.807	-0.08	104.0
						0.84

抑制％＝{(对照样平均值-样品平均值)/对照样平均值}*100

表28.阿江榄仁提取物对CHO-K1细胞中脂质含量的影响

抑制％＝{(对照样-提取物处理样)/对照样}*100}

表29.阿江榄仁树皮的20％乙醇提取物 AV016BaDi(28)04(20)

对HMG-CoA还原酶活性的影响

 

时间(分)	无抑制剂时的读数	有抑制剂时的读数
0	1.3465	1.7372
			1	1.3103	1.726
2	1.2891	1.726
			3	1.2768	1.726
4	1.2689	1.7042
			5	1.2534	1.7042
			底物空白	0.0277	0.0307
	0
			最终读数	0.0654	0.0046
			抑制％	0	93.0

抑制％＝{(对照样-提取物处理样)/对照样}*100

表30.阿江榄仁树皮的100％乙醇直接提取物 AV016BaDi(65)04(100)对HMG-CoA还原酶活性的影响

 

时间(分)	无抑制剂的读数	有抑制剂的读数
0	1.162	1.7815
			1	1.1125	1.7637
2	1.1048	1.7637
			3	1.0828	1.7637
4	1.0756	1.746
			5	1.0652	1.7467
			底物空白	0.023	0.0212
	0
			最终读数	0.0738	0.0272
			抑制％	0	63.1

抑制％＝{(对照样-提取物处理样)/对照样}*100

表31：阿江榄仁提取物对HepG2细胞的细胞生存力的影响

 

处理方式	活细胞数目	死细胞数目
			细胞	85	20
细胞+DMSO	82	11
			细胞+抗坏血酸	66.5	18.5
细胞+AV016BaSu(65)09(100)	27	7
			细胞+AV016BaSu(65)01(100)	55	2
细胞+AV016BaSu(65)04(100)	11	1

Claims (28)

1.一种治疗哺乳动物中选自肥胖症、癌症、心血管病和糖尿病的一种疾病的方法，该方法包括向哺乳动物施用有效和无毒数量的至少一种选自表1-24中定义的阿江榄仁提取物。

2.根据权利要求1的方法，其中该疾病是肥胖症，提取物选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng、AV016BaSu(65)04(100)、AV016BaSu(65)06(100)和AV016FrDi(65)04(100)，或它们中两种或多种的组合。

3.根据权利要求1的方法，其中该疾病是癌症，提取物选自AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)和AV016BaSu(65)04(100)或其两种或多种的组合。

4.根据权利要求1的方法，其中该疾病是心血管病，提取物选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)和AV016BaSu(65)01(100)或其两种或多种的组合。

5.根据权利要求1的方法，其中该疾病是糖尿病，提取物选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng、AV016BaSu(65)04(100)、AV016BaSu(65)06(100)、AV016BaSu(105)08(100)、AV016FrDi(65)04(100)和AV016FrSu(105)08(100)或其两种或多种的组合。

6.根据权利要求1的方法，其中该疾病是糖尿病、肥胖症和心血管病，提取物是选自AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)或二者的组合。

7.根据权利要求1-6中任一项的方法，其中的治疗是预防性治疗。

8.一种用于治疗选自糖尿病、肥胖症、心血管病和癌症的一种疾病的药物制剂，其中含有至少一种表1-24中列出的从阿江榄仁树分离出的提取物，和与其混合的一种可药用的载体。

9.权利要求8的一种用于治疗糖尿病的制剂，其中包含至少一种以下提取物或其两种或多种的组合：AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng、AV016BaSu(65)04(100)、AV016BaSu(65)06(100)、AV016BaSu(105)08(100)、AV016FrDi(65)04(100)和AV016FrSu(105)08(100)或其两种或多种的混合物。

10.根据权利要求8的用于治疗癌症的制剂，其中含有至少一种选自AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)和AV016BaSu(65)04(100)的提取物或其两种或多种的组合。

11.根据权利要求8的用于治疗心血管病的制剂，其中含有至少一种选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)和AV016BaSu(65)01(100)的提取物或其两种或多种的组合。

12.根据权利要求8的用于治疗肥胖症的制剂，其中含有至少一种选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng、AV016BaSu(65)04(100)、AV016BaSu(65)06(100)和AV016FrDi(65)04(100)的提取物或其两种或多种的组合。

13.根据权利要求8的用于治疗糖尿病、肥胖症和心血管病的制剂，其中含有至少一种选自AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)的提取物或二者的组合。

14.根据权利要求8-13中任一项的用于预防用途的制剂。

15.一种制备药物制剂的方法，包括将至少一种本发明的提取物和其可药用的载体相结合。

16.一种阿江榄仁提取物，选自具有表1-24中所示的HPLC和/或MS特征的提取物。

17.一种食物，其中含有至少一种选自具有表1-24中所示HPLC和/或MS特征的提取物的阿江榄仁提取物。

18.根据权利要求17的食物，其中含有至少一种用于预防癌症的提取物。

19.根据权利要求17的食物，其中含有至少一种用于预防心血管病的提取物。

20.根据权利要求17的食物，其中含有至少一种用于预防糖尿病的提取物。

21.根据权利要求17的食物，其中含有至少一种用于预防肥胖症的提取物。

22.根据权利要求17的食物，其中含有至少一种选自AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)的提取物，以单独的或其一种或多种组合物的形式，用于预防糖尿病、肥胖症和心血管病。

23.选自具有表1-24中所示HPLC和/或MS特征的提取物的一种提取物在制备用于治疗糖尿病、癌症、心血管病和肥胖症的药物中的应用。

24.根据权利要求23的选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng、AV016BaSu(65)04(100)、AV016BaSu(65)06(100)、AV016BaSu(105)08(100)、AV016FrDi(65)04(100)和AV016FrSu(105)08(100)的提取物在制备用于治疗或预防糖尿病和/或有关疾病的药物中的应用。

25.根据权利要求23的选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)g、AV016BaSu(65)01(100)ng、AV016BaSu(65)04(100)、AV016BaSu(65)06(100)和AV016FrDi(65)04(100)的提取物在制备用于治疗或预防肥胖症的药物中的应用。

26.根据权利要求23的选自AV016BaDi(65)04(100)、AV016BaDi(28)04(20)、AV016BaSu(65)09(100)和AV016BaSu(65)01(100)的提取物，单独地或其一种或多种组合物，在制备用于治疗或预防心血管病的药物中的应用。

27.根据权利要求23的选自AV016BaSu(65)09(100)、AV016BaSu(65)01(100)和AV016BaSu(65)04(100)的提取物，单独地或其一种或多种组合物，在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用。

28.根据权利要求23的提取物AV016BaDi(65)04(100)和AV016BaDi(28)04(20)，单独地或其一种或多种组合物，在制备用于治疗或预防糖尿病、肥胖症和心血管病的药物中的应用。

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