CN114456142A - 一种从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药分析技术领域，具体涉及一种从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法。S1：将白花蛇草烘干后粉碎得到白花蛇草粉末。S2：将S1得到的白花蛇草粉末包裹在纱布内，得到白花蛇草药包。S3：将S2得到的白花蛇草药包放置在压缩缸内，使用水和乙醇的共沸蒸气穿透白花蛇草药包，并向白花蛇草药包施加周期性变化的压力，收集穿透白花蛇草药包后的共沸蒸气及其冷凝液，冷却浓缩干燥后得到白花蛇草初提物。S4：采用过柱法从S3得到的白花蛇草初提物中提取抗肿瘤成分。本发明的方法能够高效地从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分，提取效率是传统方案的5倍以上，并且操作时间有所缩短。
Description
技术领域
本发明属于医药分析技术领域，具体涉及一种从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法。
背景技术
白花蛇草，又名蛇舌草、二叶葎、竹叶菜、蛇利草，味微苦、甘、寒。现代研究表明，白花蛇草具有抗肿瘤功效，其能够抑制血管生成是发挥抗肿瘤作用的重要途径之一，但进一步的作用机制尚不清楚。
从白花蛇草中提取各活性成分是深入研究白花蛇草抗肿瘤机制的重要前提。近年来，陆续有从白花蛇草中提取蒽醌类、黄酮类、萜类、甾醇类、酸类、糖类、酯类等抗肿瘤活性成分进行研究的报道。专利CN 111670037 A报道其对白花蛇草中抗肿瘤有效组分进行了分离和纯化，并研究表明白花蛇草中E-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯和山奈酚-3-O-[2-O-(6-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-β-D-吡喃半糖对肿瘤具有明显的抑制作用。然而，其报道的方法对上述两种物质的提取效率较低，十分不利于进一步深入研究的开展和含上述两种物质的抗肿瘤制剂的制备。
发明内容
针对现有技术存在的不足，为了提高白花蛇草中抗肿瘤成分的提取效率，本发明提供一种从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，主要步骤如下：
S1：将白花蛇草烘干后粉碎得到粒径在50-1500μm范围内的白花蛇草粉末。
S2：将S1得到的白花蛇草粉末包裹在纱布内，得到白花蛇草药包。
S3：将S2得到的白花蛇草药包放置在压缩缸内，使用水和乙醇的共沸蒸气穿透白花蛇草药包，并向白花蛇草药包施加周期性变化的压力，收集穿透白花蛇草药包后的共沸蒸气及其冷凝液，冷却浓缩干燥后得到白花蛇草初提物。
S4：采用过柱法从S3得到的白花蛇草初提物中提取抗肿瘤成分，所述抗肿瘤成分包括E-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯和山奈酚-3-O-[2-O-(6-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-β-D-吡喃半糖。
上述从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法的进一步优化方案是：步骤S3中，控制白花蛇草药包的厚度在18-35mm范围内，所述共沸蒸气自上而下穿透白花蛇草药包。
上述从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法的进一步优化方案是：步骤S3中，所述共沸蒸气穿透白花蛇草药包的过程包括：
阶段一：共沸蒸气遇到温度低于共沸点的白花蛇草药包发生冷凝，冷凝液润湿白花蛇草药包，使内部的白花蛇草粉末发生溶胀，同时使白花蛇草药包逐渐升温至共沸点；
阶段二：共沸蒸气自上而下穿透处在共沸点的透白花蛇草药包，因热量耗散损失，共沸蒸气在白花蛇草药包内部分冷凝，冷凝液向下流出，携带出抗肿瘤成分；周期性变化的压力在此阶段施加。
上述从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法的进一步优化方案是：步骤S3中，周期性变化的压力的最大值a在4.0-4.5atm范围内，周期性变化的压力的最小值b在1.2-1.5atm范围内。
上述从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法的进一步优化方案是：步骤S3中，周期性变化的压力的周期d在0.5-2.2s范围内。
上述从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法的进一步优化方案是：步骤S3中，水和乙醇的共沸蒸气由水和乙醇按重量比95.6％：4.4％混合而成的共沸液加热蒸发得到，共沸点为78.1℃。
上述从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法的进一步优化方案是：穿透白花蛇草药包的共沸蒸气与该白花蛇草药包中的白花蛇草粉末的重量比在8-10:1范围内。
有益效果：相对于现有技术中已公开的提取方法，本发明提供的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，能够高效地从白花蛇舌草中提取E-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯和山奈酚-3-O-[2-O-(6-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-β-D-吡喃半糖的抗肿瘤成分，提取效率是传统方案的5倍以上。本发明提取效率的提升主要来源于白花蛇草初提物产量的显著增长，进一步分析表明，步骤S3的操作至关重要，尤其是特定成分的穿透蒸汽和特定的周期性施压过程都表现出十分显著的不可替代性。此外，本发明的提取方案在操作时间上也比传统方案有所减少。
附图说明
图1为抗肿瘤成分1的结构式。
图2为抗肿瘤成分2的结构式。
图3为施加压力的示意图。
图4为提取设备的结构示意图。
图5为压缩缸的内部结构示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施例进一步阐明本发明，这些实施例是示例性的，旨在说明问题和解释本发明，并不是一种限制。
从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤：
S1：将白花蛇草烘干后粉碎，过多级筛，分得到粒径在50-1500μm范围内的白花蛇草粉末。
S2：将2kg白花蛇草粉末包裹在纱布内，得到白花蛇草药包；并在白花蛇草药包外松散地绕有少量绕绳防止白花蛇草药包散开。
S3：将白花蛇草药包平铺放置在压缩缸内，四周与压缩缸内壁贴紧防止漏气，铺平后白花蛇草药包的厚度一般在18-35mm范围内。将水和乙醇的共沸液加入到蒸发器中，共沸液为水和乙醇按重量比95.6％：4.4％的混合物，开启蒸发器将共沸液加热至共沸点78.1℃，并持续加入产生共沸蒸气，持续通入压缩缸内，在压缩缸内自上而下穿透白花蛇草药包。穿透白花蛇草药包的共沸蒸气与该白花蛇草药包中的白花蛇草粉末的重量比在8-10:1范围内。共沸蒸气穿透白花蛇草药包的过程包括阶段一和阶段二。在阶段一中，共沸蒸气遇到温度低于共沸点的白花蛇草药包发生冷凝，冷凝液润湿白花蛇草药包，使内部的白花蛇草粉末发生溶胀，同时使白花蛇草药包逐渐升温至共沸点。在阶段二中，共沸蒸气自上而下穿透处在共沸点的透白花蛇草药包，因热量耗散损失，共沸蒸气在白花蛇草药包内部分冷凝，冷凝液向下流出，携带出抗肿瘤成分。在阶段二中，通过气缸和活塞向白花蛇草药包施加周期性变化的压力，如图3所示，控制白花蛇草药包受到的压强的最大值a在4.0-4.5atm范围内，最小值b在1.2-1.5atm范围内，变化周期d在0.5-2.2s范围内。使用冷凝器冷却收集穿透白花蛇草药包后的共沸蒸气及其冷凝液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得到白花蛇草初提物。
S4：采用过柱法从白花蛇草初提物中提取抗肿瘤成分。使用50ml含5％(体积分数)乙醇的水溶液溶解10g白花蛇草初提物，上D-101型大孔树脂，静态吸附过夜，然后分别用体积分数为10％、20％、30％、40％乙醇溶液洗脱4倍柱体积，收集40％乙醇溶液洗脱得到的洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得到白花蛇草次提物。使用体积分数为20％的乙醇溶液溶解白花蛇草次提物，每克白花蛇草次提物对应加入5ml乙醇溶液，得到白花蛇草次提溶液。用体积分数为20％的乙醇溶液将LH-20凝胶减压层析柱的凝胶进行溶胀，溶胀后装填，实测4.1g凝胶床体积/1g干胶粉末。将白花蛇草次提溶液上LH-20凝胶减压层析柱，上样体积为床体积的2％，先后用体积分数为20％和50％的乙醇溶液洗脱，分别收集洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥得到粉末样品。20％的乙醇溶液对应得到的粉末样品为E-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯，记为抗肿瘤成分1，50％的乙醇溶液对应得到的粉末样品为山奈酚-3-O-[2-O-(6-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-β-D-吡喃半乳糖，记为抗肿瘤成分2。
表1不同实施方案的工艺参数及提取结果
各实施例的步骤S3采用的提取设备如图4所示，包括压缩缸1、滤板2、活塞板3、气缸4、均气板5、冷凝器6、收集罐7和蒸发器8；压缩缸1上段呈圆柱状，下段呈圆锥状；上段与下段之间设有可拆卸的滤板2，滤板2上密布有上下贯通的大量滤孔，如图5所示；上段内部具有可上下滑动的活塞板3，活塞板3上密布有上下贯通的大量导气孔，如图5所示；滤板2和活塞板3之间的空间用于平铺白花蛇草药包；压缩缸1顶部安装有竖直向下的气缸4，气缸4的伸缩杆向下连接活塞板3，通过向气缸4提供压力周期性变化的动力气，即可控制白花蛇草药包受到的压强；均气板5水平固定在压缩缸1内，且位于活塞板3上方，用以使共沸蒸气均匀分布；压缩缸1底部连接冷凝器6，冷凝器6下方连接收集罐7，压缩缸1内的气液混合成分经过冷凝器6冷却后落入收集罐7；蒸发器8顶部设置管道连接至压缩缸1内，且接口位于均气板5上方，蒸发器8内放置共沸液，通过加热装置加热形成共沸蒸气。
对比例1的白花蛇草采用以下方法进行提取：
A1：将白花蛇草烘干后粉碎，过多级筛，分得到粒径在200-500μm范围内的白花蛇草粉末。取2kg白花蛇草粉末，将其置于24L体积分数为60％乙醇溶液中浸泡过夜，然后加热至80℃回流提取2h，重复提取2次并合并提取液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，白花蛇草初提物。
A2：参照本发明具体实施方式的步骤S4执行。
对比例2与实施例2区别仅在于将乙醇与水的共沸液更换为纯的乙醇，并将其持续加热至沸点形成乙醇蒸气。
对比例3与实施例2区别仅在于周期性压力的参数不同，详见表1。
对比例4与实施例2区别仅在于向白花蛇草药包持续施压，使白花蛇草药包持续受到大小为4.2atm的压强。
结论
通过对表1各项数据的分析和比对可以得出以下结论：
1.本发明采用乙醇与水的共沸蒸气穿透和周期性施压相结合的提取手段，能够显著提升白花蛇草中抗肿瘤成分的提取效率，特别是针对E-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯和山奈酚-3-O-[2-O-(6-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-β-D-吡喃半乳糖两种抗肿瘤成分，提取效率能够达到传统提取方法的5倍以上。
2.两种抗肿瘤成分的提取效率的提升主要表现为白花蛇草初提物产量的大幅增长，能够达到传统方法的5倍以上。在白花蛇草初提物产量大幅增长的同时，虽然伴随着白花蛇草初提物中两种抗肿瘤成分含量的轻微下降，但是这种轻微下降与初提物产量5倍的增长相比几乎可以忽略不计。
3.步骤S3的操作对白花蛇草初提物产量的大幅提升起到了至关重要的作用，尤其是特定成分的穿透蒸汽和特定的周期性施压过程都在对比试验中表现出十分显著的不可替代性。
以上实施方式是示例性的，其目的是说明本发明的技术构思及特点，以便熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：将白花蛇草烘干后粉碎得到粒径在50-1500μm范围内的白花蛇草粉末；
S2：将S1得到的白花蛇草粉末包裹在纱布内，得到白花蛇草药包；
S3：将S2得到的白花蛇草药包放置在压缩缸内，使用水和乙醇的共沸蒸气穿透白花蛇草药包，并向白花蛇草药包施加周期性变化的压力，收集穿透白花蛇草药包后的共沸蒸气及其冷凝液，冷却浓缩干燥后得到白花蛇草初提物；
S4：采用过柱法从S3得到的白花蛇草初提物中提取抗肿瘤成分，所述抗肿瘤成分包括E-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯和山奈酚-3-O-[2-O-(6-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖基]-β-D-吡喃半糖。
2.根据权利要求1所述的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：步骤S3中，控制白花蛇草药包的厚度在18-35mm范围内，所述共沸蒸气自上而下穿透白花蛇草药包。
3.根据权利要求2所述的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：步骤S3中，所述共沸蒸气穿透白花蛇草药包的过程包括：
阶段一：共沸蒸气遇到温度低于共沸点的白花蛇草药包发生冷凝，冷凝液润湿白花蛇草药包，使内部的白花蛇草粉末发生溶胀，同时使白花蛇草药包逐渐升温至共沸点；
阶段二：共沸蒸气自上而下穿透处在共沸点的透白花蛇草药包，因热量耗散损失，共沸蒸气在白花蛇草药包内部分冷凝，冷凝液向下流出，携带出抗肿瘤成分；周期性变化的压力在此阶段施加。
4.根据权利要求3所述的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：步骤S3中，周期性变化的压力的最大值a在4.0-4.5atm范围内，周期性变化的压力的最小值b在1.2-1.5atm范围内。
5.根据权利要求3所述的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：步骤S3中，周期性变化的压力的周期d在0.5-2.2s范围内。
6.根据权利要求1所述的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：步骤S3中，水和乙醇的共沸蒸气由水和乙醇按重量比95.6%：4.4%混合而成的共沸液加热蒸发得到，共沸点为78.1℃。
7.根据权利要求6所述的从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法，其特征在于：穿透白花蛇草药包的共沸蒸气与该白花蛇草药包中的白花蛇草粉末的重量比在8-10:1范围内。
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| CN202210135972.6A CN114456142A (zh) | 2022-02-15 | 2022-02-15 | 一种从白花蛇舌草中提取抗肿瘤成分的方法 |
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Citations (5)
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|---|---|---|---|---|
| US5466455A (en) * | 1990-10-18 | 1995-11-14 | Huffstutler, Jr.; Miles C. | Polyphase fluid-extraction process, resulting products and methods of use |
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| CN110698496A (zh) * | 2019-10-08 | 2020-01-17 | 江苏医药职业学院 | 一种芳环上含冠醚或硫杂冠醚结构的分子中芳香甲硫基转化为二硫键的方法 |
| CN111670037A (zh) * | 2020-04-02 | 2020-09-15 | 广东新纪元生命科技有限公司 | 白花蛇舌草抗肿瘤有效组分及其制备方法和用途 |
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-
2022
- 2022-02-15 CN CN202210135972.6A patent/CN114456142A/zh active Pending
Patent Citations (5)
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 伍振峰;罗晶;万娜;王学成;罗莹;杨明;: "中药减压提取沸点与饱和蒸气压关系影响因素研究", 中草药, vol. 2022, no. 23, pages 4166 - 4172 * |
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