CN111135147A - 一种南方红豆杉配方颗粒剂及其制备、质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种南方红豆杉配方颗粒剂的制备方法，包括：将南方红豆杉加入水浸泡后，加热至50～70℃搅拌提取1.5～5h，收集提取液，剩下的药渣再加水重复提取，合并提取液；将所得提取液经过滤后，减压浓缩得到清膏；将所得清膏经干燥后得干膏；将所得干膏经粉碎过筛后得干膏粉，然后加入辅料，混匀，制粒即得。该制备方法下得到的10‑脱乙酰基巴卡亭Ⅲ和7‑木糖苷‑10‑脱乙酰基紫杉醇含量转移率高的同时出膏率也相对较高，制备得到的南方红豆杉颗粒剂1g相当于南方红豆杉饮片2.5g。本发明还提供了所述南方红豆杉颗粒剂的对照特征图谱及其构建方法，用于对南方红豆杉颗粒剂的质量进行控制，专属性强，重复率高、稳定。

Description

一种南方红豆杉配方颗粒剂及其制备、质量控制方法
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域，尤其涉及一种南方红豆杉配方颗粒剂及其制备、质量控制方法。
背景技术
南方红豆杉归属于红豆杉科红豆杉属，是第四纪冰川遗留下来的古老孑遗树种，在地球上已有250万年的历史。红豆杉全株富含紫杉烷类化合物，是广谱抗癌药物—紫杉醇的主要提取来源。南方红豆杉也是一味中药，可以消肿散结、通经利尿，用以癥瘕积聚，水肿，小便不利、风湿痹痛等。现尚没有有关南方红豆杉颗粒剂的相关报道。
中药配方颗粒剂是由中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，供患者冲服使用，是对传统中药饮片的补充。中药配方颗粒剂相对传统中药饮片，具有质量稳定，安全卫生，服用、携带方便等优点，但是要保证与汤剂的药效一致，需要对生产工艺严格验证。现有的中药配方颗粒剂主要采用静态煎煮工艺，该方法虽然简单，但是存在温度高、煎煮时间长等问题，而南方红豆杉中富含的活性成分如10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ等热不稳定，长时间高温煎煮会导致有效成分提取率低，损耗大，含量会低于标准汤剂的技术要求范围，进而影响药效。中药配方颗粒剂相对于中药饮片，性状发生改变，无法通过外观、显微鉴别等方式进行专属性鉴别，目前还未有南方红豆杉配方颗粒剂的质量控制方法的相关报道。
因此，如何开发一种南方红豆杉配方颗粒剂的制备方法，制备方法下得到的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率高的同时出膏率也相对较高，同时开发一种南方红豆杉配方颗粒剂的质量控制方法，成为亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种南方红豆杉配方颗粒剂及其制备、质量控制方法，该制备方法下得到的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率高的同时出膏率也相对较高，工艺简单、易于质量控制；同时提供一种基于南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱的质量检测方法，该方法根据南方红豆杉配方颗粒剂的制剂特点，合理控制高效液相色谱的流动相条件，构建得到南方红豆杉配方颗粒剂的特征图谱和有效成分含量指标，从而为南方红豆杉配方颗粒剂质量评价体系研究提供科学的实验依据。
本发明是这样实现的：
本发明目的之一在于提供一种南方红豆杉配方颗粒剂的制备方法，所述方法包括：
步骤1、将南方红豆杉加入水浸泡后，加热至50～70℃搅拌提取1.5～5h，收集提取液，剩下的药渣再加水重复提取，合并提取液；
步骤2、将所得提取液经过滤后，浓缩得到清膏；
步骤3、将所得清膏经干燥后得干膏；
步骤4、将所得干膏经粉碎过筛后得干膏粉，然后加入辅料，混匀，制粒得该南方红豆杉配方颗粒剂。
优选地，所述步骤1中南方红豆杉加入水浸泡的时间为10～50min；加水浸泡时所加水的体积与所述煎药袋内的南方红豆杉饮片的重量的比值为8～12ml：1g。作为以上实施方式之一，浸泡前先将南方红豆杉药材除杂、精选，切成0.5～1.5cm的段状饮片，填装于煎药袋中用于浸泡。
优选地，所述搅拌的转速为100～150rpm/min；提取2～4次。
优选地，所述步骤2中浓缩的具体步骤为：采用温度为50～70℃减压浓缩至得到相对生药浓度为0.80～1.00g/mL的清膏。
优选地，所述步骤3中干燥采用真空微波干燥，干燥箱温度控制在55℃～65℃以内，真空度-0.08～-0.09Mpa，微波功率2～3KW，干燥至含水量4.5％±0.5％。
优选地，所述步骤4中辅料为糊精、淀粉、乳糖、糖粉、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素中的一种或几种。
本发明制备得到的南方红豆杉配方颗粒剂，10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ含量的转移率为71.40％～95.87％；7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量的转移率为39.21～50.52％；干膏的得率为25-40％；
本发明目的之二在于提供一种所述方法制备得到的南方红豆杉配方颗粒剂。该南方红豆杉配方颗粒剂1g相当于南方红豆杉饮片2.5g。
本发明目的之三在于提供一种南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱，所述图谱包括7个特征峰，其中1号峰为10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照峰，2号峰与所述1号峰的相对保留时间为2.18；
4号峰为7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇的对照峰，其他3个峰与所述4号峰的相对保留时间为：3号峰0.96，5号峰1.06，6号峰1.11，7号峰1.15。
本发明目的之四在于提供一南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱的构建方法，所述的构建方法包括：
供试品溶液的制备：取南方红豆杉配方颗粒剂，粉碎，加甲醇水溶液提取，过滤，所得滤液作为供试品溶液；
对照品参照物溶液的制备：取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇对照品，加入甲醇制成的溶液，作为对照品参照物溶液；
对照药材参照物溶液的制备：称取南方红豆杉饮片，水煎煮，过滤所得滤液作为对照药材参照物溶液；
高效液相色谱检测：吸取多批次对照药材参照物溶液，注入液相色谱仪，检测，获得多批次南方红豆杉饮片标准汤剂的HPLC特征图谱，通过比较分析获得南方红豆杉配方颗粒剂药材的对照特征图谱。
优选地，每1mL所述对照品参照物溶液含0.02mg的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及0.02mg的7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇。
优选地，所述高效液相色谱的测试条件为：所用色谱柱为ZORBAX Eclipse plusC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为：以超纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；进样量为10μL；检测波长为228nm；采用梯度洗脱方式。
优选地，所述液相色谱的洗脱程序为：0-12min，流动相A：流动相B体积比为70：30，进行等度洗脱，12-25min，流动相A：流动相B体积比按线性渐变为45：55，进行线性梯度洗脱；25-30min，流动相A：流动相B体积比按线性渐变为10：90，进行线性梯度洗脱；30-32min，流动相A：流动相B体积比按线性渐变为70：30，进行线性梯度洗脱；32min后，流动相A：流动相B体积比为70：30等度洗脱。
本发明的目的之五在于提供一种基于南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱的质量检测方法，所述方法包括如下步骤：
吸取所述供试品溶液，注入液相色谱仪，检测，获得南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱；
吸取所述对照品参照物溶液，注入液相色谱仪，检测，获得对照品的参照物峰；
将南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱与南方红豆杉配方颗粒的对照特征图谱以及对照品的参照物峰进行比较，依据比较结果对南方红豆杉配方颗粒剂的进行质量评价，所述质量评价包括：
定性分析：所述南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱中呈现7个特征峰，并应与南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱中7个特征峰的保留时间相对应，则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好；
定量分析：按比值法计算10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量：每1g南方红豆杉配方颗粒剂中含10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ为0.85mg～5.17mg，同时含7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇为0.35mg～0.90mg，则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好。
所述与南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱中7个特征峰的保留时间相对应，具体指：
1号峰(S1)和4号峰(S2)应分别与对照品的参照物峰中的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇的保留时间相对应。2号峰与所述1号峰(S1)的相对保留时间为2.18±5％；其他4个峰与所述4号峰(S2)的相对保留时间为：3号峰0.96±5％，5号峰1.06±5％，6号峰1.11±5％，7号峰1.15±5％；则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：
1、本发明提供的一种南方红豆杉配方颗粒剂的制备方法，采用50～70℃搅拌提取1.5～5h的工艺，使得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)含量的转移率为71.40％～95.87％；7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量的转移率为39.21～50.52％；干膏的得率为25-40％；本发明提供的制备方法下制备的配方颗粒剂中各成分组成与标准汤剂一致，有效成分10-DABⅢ的含量优于标准汤剂，保证配方颗粒剂的药效；同时本方面提供的工艺工序简单、有效、效率高、节能且稳定，适用于大规模工业化生产。
2、本发明针对南方红豆杉配方颗粒剂存在的质量控制技术问题，提供一种基于南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱的质量检测方法，该方法根据南方红豆杉配方颗粒剂的制剂特点，合理控制高效液相色谱的流动相条件，构建得到南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱和有效成分含量指标，从而为南方红豆杉配方颗粒剂质量评价体系研究提供科学的实验依据，从内在质量上实现南方红豆杉配方颗粒剂的专属性鉴别，能够弥补原材料外观及显微特征缺失而造成鉴别不准确的缺陷，削减混伪品给中药市场带来的不良影响，确保公众用到优质、正品南方红豆杉配方颗粒剂。同时也建立了一种简单、可靠、实用的南方红豆杉配方颗粒剂的检测方法，该质量控制方法专属性强，重复率高、稳定。
附图说明
图1为南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱；其中，峰1：10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ；峰2：巴卡亭Ⅲ；峰3：7-木糖苷-10-脱乙酰基三尖杉宁碱；峰4：7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇；峰6：10-脱乙酰基紫杉醇。
图2为南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱；其中，峰1：10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ；峰2：巴卡亭Ⅲ；峰3：7-木糖苷-10-脱乙酰基三尖杉宁碱；峰4：7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇；峰6：10-脱乙酰基紫杉醇。
具体实施方式
实施例1
1、将装有南方红豆杉饮片(先将南方红豆杉药材除杂、精选，切成0.5～1.5cm的段状饮片填装于煎药袋)的煎药袋投入加热搅拌罐中，加入10倍量的水，浸泡0.5h后加热至60℃，搅拌提取2.5h，转速120rpm/min，过滤，收集提取液，药渣再加水重复提取1次，合并2次提取液。
2、提取液经滤药机过滤后，60℃减压浓缩至相对生药浓度为0.80～1.00g/mL的清膏。
3、清膏采用真空微波干燥，干燥箱温度为65℃，真空度为-0.08Mpa，微波功率2～3KW，干燥至含水量4.5％±0.5％，得干膏。
4、干膏粉碎过筛得干膏粉，干膏粉中加入辅料，混匀，制粒得南方红豆杉配方颗粒剂。
实施例2
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的温度改为50℃外，其余均同实施例1。
实施例3
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的温度改为70℃外，其余均同实施例1。
实施例4
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为1.5h外，其余均同实施例1。
实施例5
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为2h外，其余均同实施例1。
实施例6
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为3h外，其余均同实施例1。
实施例7
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为4h外，其余均同实施例1。
实施例8
该实施例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为5h外，其余均同实施例1。
对比例1
动态水煎法(回流法)：精密称取南方红豆杉饮片100g置圆底烧瓶中，加水1L，静置0.5h后，连接回流冷凝管，加热套加热至沸腾，保持微沸2h后停止加热，冷却至常温，用干燥滤器滤过；残渣再加水1L重复提取1次，滤过；合并两次滤液，滤液60℃减压浓缩为清膏，清膏置于真空微波干燥箱内干燥至含水量4.5％，得干膏，精密称定，计算出膏率；精密称取干膏1.00g，用适量水溶解后，100mL定容，滤过，滤液上液相检测，计算10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量的转移率。
对比例2
传统水煎法：精密称取红豆杉饮片150g置煎药罐中，加蒸馏水1500mL，搅拌1min，静置30min后，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，自然冷却后滤纸过滤，收得药液；药渣再加1500mL蒸馏水，武火煮沸后文火煎煮0.5h，过滤收得药液。滤液依回流法所述，计算出膏率，10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量的转移率。
对比例3
该对比例除步骤1提取时采用的温度改为80℃外，其余均同实施例1。
对比例4
该对比例除步骤1提取时采用的温度改为90℃外，其余均同实施例1。
对比例5
该对比例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为0.5h外，其余均同实施例1。
对比例6
该对比例除步骤1搅拌提取时采用的时间改为1h外，其余均同实施例1。
对比例7
该对比例除步骤1中南方红豆杉药材装入煎药袋前，将南方红豆杉原药材经粉碎机粉碎为20～60目粗粉，装入煎药袋投入加热搅拌罐中；其余均同实施例1。
对比例8
该对比例除步骤1中南方红豆杉药材装入煎药袋前，将南方红豆杉原药材经粉碎机粉碎为100目以下的细粉，装入煎药袋投入加热搅拌罐中；其余均同实施例1。
实施例9特征图谱和有效物质含量指标测定
中药配方颗粒剂相对于中药饮片，性状发生改变，无法通过外观、显微鉴别等方式进行专属性鉴别，特征图谱和有效物质含量指标是鉴别配方颗粒剂真伪非常重要的指标。发明人采用高效液相色谱法，建立液相分析方法、对不同批次的南方红豆杉饮片汤剂的HPLC特征图谱进行研究，建立了南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱，并对配方颗粒剂中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇的含量指标进行了限定。具体构建方法如下：
取南方红豆杉配方颗粒剂0.5g，研细后，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25mL(精密量取)，密塞，称定重量，超声处理20min，放冷，用50％的甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇对照品，加入甲醇制成每1mL各含0.02mg的溶液，作为对照品参照物溶液。
取15个不同批次的质量合格的南方红豆杉饮片各10.0g，至具塞锥形瓶中，加水100ml，煮沸0.5h，放冷，离心，取上清液10ml，然后加入甲醇10ml，摇匀，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液作为对照药材参照物溶液；
高效液相色谱检测：吸取所述对照药材参照物溶液，注入液相色谱仪，检测，获得15批次南方红豆杉饮片汤剂的HPLC特征图谱，根据各批次的特征图谱建立南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱；吸取所述供试品溶液，注入液相色谱仪，检测，获得南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱；吸取所述对照品参照物溶液，注入液相色谱仪，检测，获得对照品的参照物峰。
色谱条件为：所用色谱柱为ZORBAX Eclipse plus C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为：以超纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；进样量为10μL；按下表1的规定进行梯度洗脱；同时进行单通道检测，检测波长为228nm。
表1
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 70.0 30.0
12 70.0 30.0
25 45.0 55.0
30 10.0 90.0
32 70.0 30.0
35 70.0 30.0
南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱如图1所示，所述图谱包括7个特征峰，其中1号峰为10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照峰，2号峰与所述1号峰的相对保留时间为2.18；4号峰为7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇的对照峰，其他3个峰与所述4号峰的相对保留时间为：3号峰0.96，5号峰1.06，6号峰1.11，7号峰1.15。
将南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱与南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱以及对照品的参照物峰进行比较，依据比较结果对南方红豆杉配方颗粒剂的质量进行评价。图2为南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱。
所述对南方红豆杉配方颗粒剂的质量进行评价的比较结果为：定性分析：所述南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱中应呈现7个特征峰，并应与南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱中7个特征峰的保留时间相对应，其中1号峰(S1)和4号峰(S2)应分别与对照品的参照物峰中的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ和7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇的保留时间相对应。2号峰与所述1号峰(S1)的相对保留时间为2.18±5％；其他4个峰与所述4号峰(S2)的相对保留时间为：3号峰0.96±5％，5号峰1.06±5％，6号峰1.11±5％，7号峰1.15±5％；则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好。定量分析：按比值法计算10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量：每1g南方红豆杉配方颗粒剂中含10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ为0.85mg～5.17mg，同时含7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇为0.35mg～0.85mg，则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好。
实验例1不同提取工艺的对比
计算实施例1、对比例1-2的出膏率及10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ、7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率，结果如表2所示。所述
Figure BDA0002371752540000111
Figure BDA0002371752540000112
下同。
表2
Figure BDA0002371752540000113
由表2可知，10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量转移率差别很大，对比例1和对比例2明显低于实施例1，原因可能是10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ热不稳定性，传统水煎法和回流法均要煮沸，从而导致部分有效成分分解。本发明实施例1的南方红豆杉配方颗粒剂的10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ、7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率高的同时出膏率也相对较高。
实验例2
一、提取温度的对比
计算实施例1、实施例2-3、对比例3-4的出膏率及10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ、7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率，结果如表3所示。
表3
Figure BDA0002371752540000121
由表3结果可知，在相等条件下，适当提高提取温度可以提高10-DABⅢ含量转移率及出膏率，但是超过一定温度后，10-DABⅢ分解进而导致提取率降低。所以为了保证10-DABⅢ含量转移率与出膏率同时较优，提取温度优选为50～70℃，最为优选提取温度为60℃。
二、提取时间的筛选
计算实施例1、实施例4-8、对比例5-6的出膏率及10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量转移率，结果如表4所示。
表4
Figure BDA0002371752540000122
Figure BDA0002371752540000131
由表4可知，在其他提取条件一致的情况下，加热至50～70℃搅拌提取的时间为1.5～5h时含量转移率高的同时出膏率也相对较高。更为优选的搅拌提取的时间为2～4h。在0.5h～2h范围内，10-DABⅢ含量转移率及出膏率随提取时间升高迅速升高，在2h～4h范围内，升高速率逐渐减低，最后趋于稳定。由此可见，在2h以内，温度对提高10-DABⅢ含量转移率的效果很明显，而2h后，这种增益效果逐渐消失，所以搅拌法最优提取时间为2～4h，该范围内，可以保证有效成分10-DABⅢ彻底溶出，进而保证成品配方颗粒剂药效与标准汤剂一致，甚至优于标准汤剂。
三、南方红豆杉的粒度
计算实施例1、对比例7-8的出膏率及10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ、7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率，结果如表5所示。
表5
Figure BDA0002371752540000132
由表5可知，将南方红豆杉粉碎，可以提高10-DABⅢ含量转移率及出膏率，因为药材经粉碎后增加了与溶剂的接触面积，进而促进药材中的药理成分溶出。虽然在粉碎为细粉时可以明显提高10-DABⅢ含量转移率和出膏率，甚至可以缩短提取时间，但是粉碎为细粉在规模化生产条件下并不可行，主要是细粉会造成滤器堵塞，延长过滤时间、增加过滤成本，而粉碎为粗粉带来的增益效果不明显，且增加了操作难度。所以从工艺可行性和工艺复杂程度考虑，同时综合出膏率，优选将南方红豆杉切制为0.5～1.5cm的段状提取。
四、提取工艺筛选
采用正交试验设计优选南方红豆杉的提取工艺。分别选取提取时间、料液比(W：V)和提取次数三个因素进行正交设计。提取液按照下表6进行制备。
表6
Figure BDA0002371752540000141
以10-DABⅢ、7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率和出膏率的综合评分为指标，采用L9(33)正交表进行试验，结果见下表7。
表7
Figure BDA0002371752540000142
Figure BDA0002371752540000151
注：综合得分＝样品10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ含量转移率÷10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ最高含量转移率×30％+7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量转移率÷7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇最高含量转移率×30％+出膏率÷最大出膏率×40％。
由上表可知，在水提取南方红豆杉过程中，各因素作用次序为C>B>A，即提取次数>提取时间>料液比。主要因素取最好的水平，次要因素根据成本、时间和收益等方面统筹考虑选取适当的水平。由此得到各因素的最佳搭配为A2B2C3，即料液比为1：10，提取时间为3h。提取次数为3次。
实验例3浓缩和干燥工艺的筛选
通过以上试验，确认了南方红豆杉最佳水提取工艺，水提取液再经过浓缩和干燥得到干膏。在提取温度的筛选中可知，10-DABⅢ在高温下不稳定，温度过高会导致10-DABⅢ含量转移率降低，所以采用减压浓缩、低温真空干燥的技术，控制温度不高于60℃。由于常规真空干燥方法是通过空气传导加热，在真空下热传导速率缓慢、效率低、能耗大，而微波加热通过辐射进行，是微波对物料直接加入，可以使其内外同时被加热，提高热传导效率，缩减干燥时间，提高效率，降低能耗。
所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种南方红豆杉配方颗粒剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1、将南方红豆杉加入水浸泡后，加热至50～70℃搅拌提取1.5～5h，收集提取液，剩下的药渣再加水重复提取，合并提取液；
步骤2、将所得提取液经过滤后，浓缩得到清膏；
步骤3、将所得清膏经干燥后得干膏；
步骤4、将所得干膏经粉碎过筛后得干膏粉，然后加入辅料，混匀，制粒得该南方红豆杉配方颗粒剂。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中南方红豆杉加入水浸泡的时间为10～50min；加水浸泡时所加水的体积与所述煎药袋内的南方红豆杉饮片的重量的比值为8～12ml：1g；所述搅拌的转速为100～150rpm/min；提取2～4次；所述浸泡前先将南方红豆杉药材除杂、精选，切成0.5～1.5cm的段状饮片，填装于煎药袋中用于浸泡。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中浓缩的具体步骤为：采用温度为50～70℃减压浓缩至得到相对生药浓度为0.80～1.00g/mL的清膏；所述步骤3中干燥采用真空微波干燥，干燥箱温度控制在55℃～65℃以内，真空度-0.08～-0.09Mpa，微波功率2～3KW，干燥至含水量4.5％±0.5％；所述步骤4中辅料为糊精、淀粉、乳糖、糖粉、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素中的一种或几种。
4.权利要求1-3所述方法制备得到的南方红豆杉配方颗粒剂。
5.一种南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱，其特征在于，所述图谱包括7个特征峰，其中1号峰为10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照峰，2号峰与所述1号峰的相对保留时间为2.18；
4号峰为7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇的对照峰，其他3个峰与所述4号峰的相对保留时间为：3号峰0.96，5号峰1.06，6号峰1.11，7号峰1.15。
6.一种南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括：
供试品溶液的制备：取南方红豆杉配方颗粒剂，粉碎，加甲醇水溶液提取，过滤，所得滤液作为供试品溶液；
对照品参照物溶液的制备：取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇对照品，加入甲醇制成的溶液，作为对照品参照物溶液；
对照药材参照物溶液的制备：称取南方红豆杉饮片，水煎煮，过滤所得滤液作为对照药材参照物溶液；
高效液相色谱检测：吸取多批次对照药材参照物溶液，注入液相色谱仪，检测，获得多批次南方红豆杉饮片标准汤剂的HPLC特征图谱，通过比较分析获得南方红豆杉配方颗粒剂药材的对照特征图谱。
7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，每1mL所述对照品参照物溶液含0.02mg的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及0.02mg的7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇。
8.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱的测试条件为：所用色谱柱为ZORBAX Eclipse plus C18；流动相为：以超纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；进样量为10μL；检测波长为228nm。
9.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述液相色谱采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为：0-12min，流动相A：流动相B体积比为70：30，进行等度洗脱，12-25min，流动相A：流动相B体积比按线性渐变为45：55，进行线性梯度洗脱；25-30min，流动相A：流动相B体积比按线性渐变为10：90，进行线性梯度洗脱；30-32min，流动相A：流动相B体积比按线性渐变为70：30，进行线性梯度洗脱；32min后，流动相A：流动相B体积比为70：30等度洗脱。
10.一种基于南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱的质量检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
吸取所述供试品溶液，注入液相色谱仪，检测，获得南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱；
吸取所述对照品参照物溶液，注入液相色谱仪，检测，获得对照品的参照物峰；
将南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱与南方红豆杉配方颗粒的对照特征图谱以及对照品的参照物峰进行比较，依据比较结果对南方红豆杉配方颗粒剂的进行质量评价，所述质量评价包括：
定性分析：所述南方红豆杉配方颗粒剂的HPLC特征图谱中呈现7个特征峰，并应与南方红豆杉配方颗粒剂的对照特征图谱中7个特征峰的保留时间相对应，则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好；
定量分析：按比值法计算10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ及7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇含量：每1g南方红豆杉配方颗粒剂中含10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ为0.85mg～5.17mg，同时含7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉醇为0.35mg～0.90mg，则判定该南方红豆杉配方颗粒剂质量好。
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