KR100956278B1

KR100956278B1 - 복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물

Info

Publication number: KR100956278B1
Application number: KR1020090071210A
Authority: KR
Inventors: 이승영
Original assignee: 대한약품공업 주식회사
Priority date: 2009-08-03
Filing date: 2009-08-03
Publication date: 2010-05-10
Also published as: JP2011032272A; US20110027305A1; CN101987169A

Abstract

본 발명은 복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로 보다 구체적으로는 여주, 동충하초, 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 혈당강하 활성 및 당뇨성 합병증의 억제활성을 가지는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 제 2형 당뇨병 모델 동물의 인슐린 분비를 증가시키며 인슐린 저항성을 개선시키고, 강력한 혈당강하 활성 및 당뇨성 합병증 억제활성을 나타내고 천연식물성 성분으로서 안전성이 확보되어 있으므로 당뇨성 질환의 예방 또는 개선 및 당뇨합병증 억제에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

당뇨병, 당뇨 합병증, 인슐린, 혈당

Description

복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물{Composition comprising an extract of herbal combination thereof for preventing and treating diabetes mellitus}

본 발명은 복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로 보다 구체적으로는 여주, 동충하초, 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 혈당강하 활성 및 당뇨성 합병증의 억제활성을 가지는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

당뇨병은 21세기 최대의 질병으로 손꼽히며 세계적으로 현재 환자는 1억 7000 만명이며 한 해 320 만명이 당뇨병으로 목숨을 잃고 있다. 국내에서도 당뇨병 환자가 지난 20년 동안 12배 이상 증가하였으며, 2025년에는 국민 4명중 1명이 당뇨병 환자가 될 가능성이 높기 때문에 국가적인 차원에서 대책 마련이 시급한 실정이며, 50대 이상 남성의 30%, 여성의 20% 이상이 당뇨병으로 진행될 수 있는 ‘당뇨병 전단계(pre-diabetes)'라는 조사결과는 당뇨병의 심각성을 의미한다.

당뇨병은 유전적 요인과 더불어 후천적 요인인 비만, 식생활, 운동부족 및 스트레스 등에 의해 영향을 받는 질병으로, 췌장 세포에서 분비되는 인슐린의 분비 장애 및 작용 부족에 의해 유발된 대사장애로 정의되며, 포도당의 과잉생산, 체지방의 분해 및 단백질의 낭비를 수반하고 글루카곤의 분비를 비정상적으로 항진시켜 대사상의 혼란을 야기시킨다(Abrams, J.J., Ginsberg, H, et al., Metabolism of cholesterol and plasma trigyceride in nonketotic diabetes mellitus. Diabetes, 31, pp903-910, 1982).

따라서 당뇨는 생체 내 대사조절기능에 이상을 초래하고, 고혈당증이 나타나며 뇨 중으로 당이 배설되어 이에 적절한 치료와 관리가 이루어지지 않으면 순환기계 등의 합병증을 수반하는 만성적인 대사성 질환이다(Mandrup-Poulsen, T., British Medical Journal., 316, pp1221-1225, 1998; Wilson, P. W. F. et al., Am. J. Med., 80, pp3-9, 1986).

당뇨병은 그 발병원인 및 증상의 치료방법에 따라 크게 인슐린 의존형 당뇨병(insulin dependent diabetes mellitus, IDDM)과 인슐린 비의존형 당뇨병(non-insulin dependent diabetes mellitus, NIDDM)으로 분류할 수 있다. 우리나라의 경우 당뇨병 환자의 95% 이상이 인슐린 비의존형 당뇨병 환자이다. 당뇨병은 그 자체가 큰 질환이라기 보다는 장기간 이 질환에 걸려 있음으로 해서 발병하는 합병증, 예를 들어 당뇨병성 신경병증(neuropathy), 망막병증(retinopathy), 백내장(cataract), 신장병(nephropathy) 등으로 인해 환자들이 정상적인 삶을 영위할 수 없을 뿐 아니라 치명적인 결과까지 초래할 수 있기 때문에 사회적으로 큰 문제가 되는 것이다.

당뇨병 치료의 가장 중요한 목표는 혈당치를 가능한 정상 수치에 가깝게 조절하는 것인데, 공복혈당과 함께 식ㆍ후 혈당 조절이 당뇨병 증세의 개선과 합병증의 예방 및 치료에 있어서 중요하며, 치료방법으로 약물요법, 식이요법 및 운동 요법이 있다(Ref. Jenkins, D.J.A., Woever et.al., starchy food and glycemic index, Diabetes care, 11, pp149-159, 1988).

그러나 흔히 사용되는 약물요법은 인슐린 및 화학적 경구혈당강하제 등의 화학물질을 사용하고 있어 약물복용에 따른 부작용과 환자의 내성이 끊임없는 문제가 되고 있어 이 때문에 천연물을 이용한 당뇨치료제의 개발은 매우 중요한 의미를 가진다.

여주(Momordica charantia L.)는 박과(cucurbitaceae)의 덩굴식물로 학명은 모모르디카 카란리아(momordica charantia)이며 오이처럼 긴 건을 “쓴오이(bitter melon)" 라고도 부른다. 원산지는 확실하게 알려있지 않으나 인도를 비롯한 열대아시아 지역인 것으로 추정된다.

여주 성분 중 특히 주목 받고 있는 카란틴(Charantin)과 식물-인슐린(plant-Insulin)으로 카란틴은 인슐린을 분비하는 췌장의 기능을 활발하게 하는 지용성 성분이고, 식물-인슐린은 체내에서 인슐린과 비슷한 작용을 하는 펨타이드의 일종으로 여주의 열매와 씨에 많이 들어 있다(Ref. D. Sathishsekar and S. Subramanian, Biol. pharm. Bull. 28(6) pp978-983, 2005)

동충하초(Cordyceps Sinensis SACC .)는 동충하초 균의 자실체와 거기에 기생하는 박쥐나방과 곤충인 초박쥐 나방의 유충 사체와의 복합체이다. 동충하초의 성 분으로는 수분 10.84%, 지방 8.4%, 단백질 25.32%, 조직유 18.53%, 탄수화물 28.90%, 회분 4.10%을 함유한다. 이밖에 퀴닉산(guinic acid)의 이성체인 콜디세픽산(cordycepic acid) 약 7%를 함유한다. 동충하초는 강장작용, 면역게에 대한 작용, 혈중 콜레스테롤 저하작용 및 니코틴아마이드(nicotinamide)와 스트렙토조토신(streptozotocin)으로 유도한 당뇨에 대하여 혈당강하 작용이 있다(Ref. Lo H.C., etal. Life sci., 74, pp2897-2908, 2004).

한편, 위와 같은 생약을 각 1종 또는 2종 이상의 원료로 배합을 달리하여 얻어진 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 예방 및 개선 효과가 있는 복합추출물이 밝혀진 바 있다.

그러나 여주, 동충하초,지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼으로 구성된 복합생약추출물에 대한 당뇨병 예방 및 치료 효과에 대해서는 어떠한 개시나 교시된 바가 없다.

이에 본 발명은 기존에 혈당강하 등의 기능성 효과가 있는 것으로 알려진 여주 추출물과 동충하초, 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼으로 마우스의 당뇨유발에 의한 체중변화, 식이효율, 공복혈당 및 부하정도를 실험하여, 생약을 단독을 사용하는 것보다 본 발명의 복합생약 추출물을 사용하는 것이 항당뇨 효과에 보다 탁월함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 여주, 동충하초, 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 복합생약 추출물, 및 비수리 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 혈당강하 활성 및 당뇨성 합병증의 억제활성을 가지는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물을 제공하기 위한 것이다.

삭제

본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 열수 추출물로 구성되는 복합생약 추출물, 및 비수리 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에 있어서, 혈당조절은 특별한 언급이 없는 한, 혈당강하를 의미한다.

본 발명은 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 지골피 1 : 상백피 1 내지 10 : 귀전우 1 내지 10 : 갈근 1 내지 10 : 황정 1 내지 10 : 백출 1 내지 5 : 맥문동 1 내지 5 : 산수유 1 내지 5 : 인삼 1 내지 5인 중량 조성비의 열수 추출물로 구성되는 복합생약 추출물, 및 비수리 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

본 발명의 여주는 수용성 에탄올 추출물로부터 감압건조 후 분말로 수득되는 것을 특징으로 한다. 구체적인 예로, 여주의 열매와 씨를 분쇄하여 분말로 만든 후, 95% 에탄올에 48시간 한류 한 후, 추출액을 상온에서 감압 건조하여 황색 분말가루 활성 성분을 수득한 것을 사용한다.

본 발명의 동충하초는 백강균 동충하초를 이용하는 것으로 백강균 균사체 및 자실체를 백강균 동충하초를 열수추출(hot-water extract)법으로 추출하여 정제한 후 동결건조하여 동충하초 추출물을 수득한 것을 사용한다.

상기 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물의 혼합 비율이 4 : 1 내지 4 인 것이 바람직하며, 본 발명의 혈당강하 활성에 중요한 의미를 가진다.

상기 지골피(Lycii Radicis cortex)는 구기자나무의 뿌리 껍질로, 성분으로는 베타인, 다우코스테린, 아스코르빈산이 있다. 또한 회분에서는 Si, K, Na, Ca, Mg, Fe, D, S, Zn 등이 확인되었으며 해연작용, 혈압강하 및 혈당강하 작용이 있다(Ref. Funagama S. etal, Fetrahedron Letf. 21, pp1355-1356, 1980).

상기 상백피(Mori cortex Radicis)는 뽕나무 또는 뽕나무과의 뿌리껍질로 성분으로는 물베르린(C25H26O6, 0.15%), 물르베르로크멘(C25H24O6, 0.2%), 싸이클로 물베르린(C25H24O6, 0.02%), 싸이클로 물베르로크멘(C25H22O6, 0.016%) 등이 있으며, 이뇨, 혈압강하작용, 혈당강하 작용이 있다(Ref. Hikino. H etal. plant Med. 159 pp 160(1985)).

상기 귀전우(Euonymi Lignum Suberalatum)는 노박덩굴과의 화살나무 줄기에 화살처럼 돋아난 코르크를 잘라 말린 것으로 성분으로는 코르크의 탄닌질과 뿌리껍질에는 굿다 페르카와 비슷한 고무질이 있다. 이는 암세포의 침입과 전이 과정에 활성을 억제하며, 알록산(alloxan)으로 유도한 당뇨(rabbit)에 대하여 혈당이나 요당을 낮추며, 체중을 증가시키는 작용이 있다(Ref. Kitanaka S. etal. chem.pharm.Bull 44, pp615-617, 1996).

상기 갈근(Puerariae Radix)은 칡(콩과)의 주피를 제거한 뿌리로 성분으로는 이소플라본 화합물인 4,7-디히드록시 이소플라본, 다미드제인-7-글리코시드 등과 쿠마린을 갖고 있으며 해열 진정작용, 순환계에 대한 작용과 포도당의 활성을 증가시키는 혈당강하 작용이 있다(Ref. Hsu H.H etal. planta Med. 68, pp999-1003 (2002)).

상기 황정(polygonati Rhizoma)은 시베리아 둥굴레, 진황정 또는 전황점(백화과)의 뿌리줄기를 외피를 벗기어 찐 것으로, 콘발라린, 콘발라마린 등 적은양의 알칼로이드, 아스파라긴, 만니트를 비롯한 Mn, Cu, Fe, Mg, Zn, Mo를 포함하고 있다. 자양강장 작용과 스트렙토조토신(streptozotocin) 당뇨를 유발시킨 생주의 혈당을 낮추는 작용이 있다(Ref. Kato A. Miura T., planta Med. 60 pp201-203 (1994)).

상기 백출(Atractylodis Rhizoma Alba)은 삽주 또는 당백출(국화과)의 뿌리줄기 또는 주피를 제거한 것이다. 성분으로는 뿌리줄기에 약 1.5% 점유와 카로린, 이눌린 고무진, 사포닌, 쿠마린 등을 포함하고 있으며, 진위, 이뇨, 진정작용과 혈 관강하 작용이 있다(Ref. Konno C. etal. planta Med. 51, pp102 (1985)).

상기 맥문동(Liriopis Tuber)은 백화과의 뿌리의 팽대부이다. 마른 덩이뿌리의 약 71%는 단당(약 10%)과 분자량이 적은 다당류(점액 43%)이다. 또한 β-시토스테롤, 루스코케닌 등을 함유하고 있다. 해열 진해, 항염증 작용이 있고, 물 추출물에는 지속적인 혈관강하작용이 있다(Ref. Lin YC etal. Am.J. Chin Med 31, pp354-579(2003)).

상기 산수유(Corni Fructus)는 층층나무과에 속하는 산수유나무의 과육으로 씨를 제거한 것이다. 몰식자산, 사과산, 포도주산과 모르로니시드와 사포닌 성분인 로가닌이 주성분으로 이뇨, 혈압강하, 자양강장 및 혈당강하 작용에 있다(Ref. Jeng H etal. Am.J. Chin Med. 25, pp301-306 (1997)).

상기 오갈피나무과에 속하는 인삼(Ginseug Radix Alba)은 뿌리로 가는 뿌리와 코르크층을 제거한 것이다. 뿌리에는 크게 배당체, 정유, 아미노산, 알칼로이드, 탄수화물, 수지, 미량원소 등이 있다. 이는 크게 자양강장작용, 면역증강작용, 중추신경계, 심혈관계작용, 혈관강하작용, 지질대사작용, 항암작용, 뇌하수체 부신피질계 등에 작용을 한다(Ref. Yokozawa T. etal. Chem.pharm.Bull 33, pp869-872 (1985)).

본 발명의 조성물의 경우 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물에 상기 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유 및 인삼은 열수 추출물을 사용하며, 지골피 1 : 상백피 1 내지 10 : 귀전우 1 내지 10 : 갈근 1 내지 10 : 황정 1 내지 10 : 백출 1 내지 5 : 맥문동 1 내지 5 : 산수유 1 내지 5 : 인삼 1 내지 5인 중량 조성비로 구성되는 열수 추출물을 포함한 복합생약 추출물을 사용하는 것을 특징으로 한다.

구체적인 예로 지골피 250 g, 상백피 280 g, 귀전우 200 g, 갈근 250 g, 황정 230 g, 백출 100 g, 맥문동 100 g, 산수유 100 g, 인삼 100 g을 세절 한 후 상온에서 20ℓ 물에 2시간 담가 두었다가 80℃에서 3시간 가열하고, 두 번째는 15ℓ물에 1.5시간 가열하고, 세 번째는 물 15ℓ에 1시간 3회 반복 가열하여 얻은 추출액을 80℃에서 감압 농축하여 열수 추출물을 수득한 것을 사용하였다.

본 발명에 따른 복합생약 추출물은 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 열수 추출물로 구성되며, 이들의 혼합 비율이 4 : 1 내지 4 : 2 내지 5의 중량비인 것을 특징으로 한다.

삭제

본 발명에 따른 상기 비수리 추출물의 발효물은 비수리 추출물 20 내지 40 중량%에 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 균주를 접종시켜 고체발효 시킨 것을 특징으로 하며, 또한 상기 비수리 추출물은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출 후, 에탄올 비등점(78.3℃) 이상으로 고온 살균하여 수득되는 것을 특징으로 한다.

상기 비수리는 뿌리를 포함한 비수리 식물 전체를 깨끗이 세척한 후 잘게 세절한다. 상기 세절시 맛이 달고 풍미가 뛰어 난 배, 사과, 감, 구기자 열매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상 열매 또는 과일을 더 첨가하여 제조될 수 있으 며, 상기 열매 또는 과일은 맛이 쓰고 매운 비수리의 기호성을 증진시켜 남녀노소가 모두 음용할 수 있는 음료나 차를 제조될 수 있다.

상기 세절된 비수리, 구기자 열매나 사과 등의 과일을 분말형태로 분쇄한 후 에탄올을 첨가하여 정치 및 숙성시키는 단계를 거친다. 특히 비수리는 기능성 웰빙 한약재로 이용되고 있지만 에탄올로 숙성시킨 후 추출하지 않으면 그 효능이 떨어지는 문제가 있다. 따라서 일반 차나 음료를 제조하는 방법과 달리 비수리의 효능을 증가시키기 위해 에탄올로 5일 내지 10일 정도 정치 보관하여 자연 숙성시키는 과정이 필요하다.

상기 회수된 비수리 추출물은 숙성 과정에서 에탄올이 증발되어 일부 소멸하지만 아직 에탄올 성분이 포함되어 알코올기가 남아 있어 음료로서 부적합 측면이 있고 그 맛이 쓴 단점이 있다. 그래서 본 발명자들은 이러한 문제점을 해결하고자 에탄올 잔기를 제거하기 위해 에탄올 비등점(78.3℃) 이상으로 5시간 정도 고온 살균하여 상기 알코올 잔기를 증류 소멸시키면서 살균하여 상기 비수리 추출물을 수득하였다.

구체적인 예로, 비수리를 잘게 세절한 후 95% 에탄올을 첨가하여 10일 동안 정치 및 숙성시킨다. 상기 숙성된 비수리 추출액을 체 또는 망사 천으로 고형화된 불순물을 분리 여과하여 비수리 추출액을 회수한 후, 에탄올 비등점(78.3℃)이상으로 5시간 고온 살균하여 알코올 잔기를 증류 소멸시키면서 살균하여 비수리 추출액을 수득하였다. 상기 수득된 비수리 추출물을 20 g 칭량하여 균질하게 혼합한 후 종균인 황국곰팡이 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) KFRI 00888(ATCC 22887) 균주 0.1%를 접종시킨 후 온도 30 내지 32℃, 습도 70 내지 85%의 배양실에서 36 내지 42시간 동안 고체 배양하여 본 발명에 따른 조성물을 제조하였다. 이때, 배양을 촉진하기 위하여 바이오틴(biotin) 0.001%를 첨가하여 비수리 추출물의 발효물을 제조하였다.

상기 비추리 추출물은 발효공정을 통해 원료내의 유효성분들이 다양한 유용성 성분으로 전이되는 것으로 생각되며, 특히 발효를 통해 다양한 효소성분들이 생성되고 단백질의 저분자화가 일어나며, 또한 비타민의 합성과 기능성 성분이 활성형태로 전이되는 등 그 유용성이 극대화될 수 있다. 혈중 포도당의 대사가 원활하지 못해서 발생하는 당뇨병은 고체발효 산물내의 전이된 활성성분들이 체내 에너지 대사를 촉진시키고, 효소 및 세포기능을 활성화시킴으로써 당뇨병 개선 및 예방에 도움을 줄 수 있다.

본 발명에 따른 당뇨병은 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병인 것이며, 당뇨 합병증은 신경 합병증, 당뇨성 망막증, 신부전증, 성기능 장애, 피부질환, 고혈압, 동맥 경화증, 뇌졸증, 심장병 또는 괴저인 곳에도 유용하게 사용될 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물은 당뇨병 포유동물의 췌장으로부터 인슐린 분비를 증가시키며, 췌장 인슐린 함량을 증가시키며, 공복시 혈당을 강화시키며, 내당능(glucose tolerance)을 개선시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 열수 추출물로 구성 되는 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물 또는 이의 분말에 적어도 하나 이상의 부형제 예를들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate) 및 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 및 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함 될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 및 올리브 오일과 같은 식물성 기름 및 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지 및 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 0.01 내지 20 g/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10 g/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 추출물 또는 복합생약분말은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%의 함량으로 배합될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 및 뇌혈관내(Intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명은 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 열수 추출물로 구성되는 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈당강하용 건강식품을 제공한다.

상기 추출물을 식품으로 사용할 경우에는 이를 그대로 사용하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 상기 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 지골피, 상백피, 귀전우, 갈근, 황정, 백출, 맥문동, 산수유, 인삼을 포함하는 열수 추출물로 구성되는 복합생약 추출물이 원료에 대하여 10 내지 90 중량%, 바람직하게는 30 내지 70 중량%의 양으로 첨가된다.

그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하의 양이어도 무방하며, 유효성분은 안전성면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물은 제2형 당뇨병 모델 동물의 인슐린 분비를 증가시키며 인슐린 저항성을 개선시키고, 강력한 혈당강하 활성 및 당뇨성 합병증 억제활성을 나타내고 천연식물성 성분으로서 안전성이 확보되어 있으므로 당뇨성 질환의 예방 또는 개선 및 당뇨합병증 억제에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명을 상세히 기술하기 전에, 특정 구체예의 변형예들이 행해질 수 있으나 첨부된 특허 청구범위의 범주내에 포함되기 때문에, 본 발명은 이하에 기술된 본 발명의 특정한 구체예들에 의해 제한되지 않는다는 것을 이해하여야 한다. 또한, 사용된 용어는 특정 구체예들을 설명하기 위한 것이지 한정하는 것이 아님을 이해하여야 한다. 대신에, 본 발명의 범위는 첨부한 특허청구범위에 의해서 확립될 것이다.

본 명세서와 첨부한 특허청구범위에 사용하는 단수 형태들은 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수 형태도 포함하는 것을 알아야 한다. 다르게 정의되지 않는 한, 모든 본 명세서에 사용된 전문 과학 용어들은 본 발명이 속하는 당 업자에게 보편적으로 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.

[ 제조예 ]

(1) 여주 추출물의 제조

여주의 열매(1kg)와 씨(1kg) 총 2 kg을 불순물을 제거하고 물로 흙과 먼지를 씻은 후 100 내지 400 메쉬(mash) 크기의 입자로 분쇄하여 분말로 만들었다. 여기에 20ℓ의 95% 에탄올에 48시간 한류 한 후, 추출액을 상온에서 감압 건조하여 30g의 황색 분말가루 활성 성분을 수득하였다.

(2) 동충하초 추출물의 제조

백강균 동충하초 1kg을 불순물을 제거 한 후, 물로 흙과 먼지를 씻고 세절 한 후, 물 20ℓ에 상온에서 2시간 담가 두었다가 80℃에서 3시간 가열하고, 두 번 째는 15ℓ물에 1.5시간 가열하고, 세 번째는 물 15ℓ에 1시간 가열하였다.

상기 3회 반복 가열하여 얻은 추출액을 80℃에서 감압 농축하여 정제한 후 동결건조하여 동충하초 추출물 10 g을 수득하였다.

(3) 열수 추출물의 제조

지골피 250 g, 상백피 280 g, 귀전우 200 g, 갈근 250 g, 황정 230 g, 백출 100 g, 맥문동 100 g, 산수유 100 g, 인삼 100 g에서 불순물을 제거 한 후, 물로 흙과 먼지를 씻고 세절 한 후 1610g을 물 20ℓ에 상온에서 2시간 담가 두었다가 80℃에서 3시간 가열하고, 두 번째는 15ℓ물에 1.5시간 가열하고, 세 번째는 물 15ℓ에 1시간 가열하였다.

상기 3회 반복 가열하여 얻은 추출액을 80℃에서 감압 농축하여 열수 추출물 250 g을 수득하였다.

(4) 비수리 발효물의 제조

비수리 1 kg을 깨끗이 세척한 후 잘게 세절한 후 20 ℓ의 95% 에탄올을 첨가하여 10일 동안 정치 및 숙성시킨다. 상기 숙성된 비수리 추출액을 20 내지 50 메쉬(mash) 체 또는 망사 천으로 고형화된 불순물을 분리여과하여 비수리 추출액을 회수한 후 에탄올 비등점(78.3℃)이상으로 5시간 고온살균하여 알코올 잔기를 증류 소멸시키면서 살균하여 비수리 추출액을 수득하였다.

상기 수득된 비수리 추출물을 20 g 칭량하여 균질하게 혼합한 후 종균인 황국곰팡이 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) KFRI 00888(ATCC 22887) 균주 0.1%를 접종시킨 후 온도 30 내지 32℃, 습도 70 내지 85%의 배양실에서 36 내지 42시간 동안 고체 배양하여 본 발명에 따른 조성물을 제조하였다. 이때, 배양을 촉진하기 위하여 바이오틴(biotin) 0.001%를 첨가하였다.

[ 실시예 ] 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물의 제조

상기 방법으로 추출한 여주 에탄올 추출물 30 g, 동충하초 추출물 10 g, 열수 추출물 250 g 및 발효물 10 g을 40℃이하에서 혼합기로 균질하게 혼합하여 300g의 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물을 제조하였다.

[ 시험예 1] 급성독성 시험

1. 시 험 계

(1) 종 및 계:계통의 특정병원균 부재(SPF) 마우스

(2) 공급원: 길림수의대학 연구센터 실험동물육종과

(3) 시험계의 선택이유

마우스는 독성시험에 적당한 실험동물로서 급성독성시험에 널리 사용되고 있다. 본 계통의 마우스는 풍부한 시험 기초자료가 축적되어 있어서, 시험결과의 해석 및 평가시에 이러한 자료를 이용하는 것이 가능하다.

(4) 주령 및 체중범위

(5) 검역 및 순화

동물입수 후 외관을 육안으로 검사하여 7일간 시험을 실시하는 동물실에서 순화시킨 후 일반증상을 관찰하여 건강한 동물만을 시험에 제공하였다.

2, 사육환경

(1) 환경조건

본 시험은 온도 23±30℃, 상대습도 55±15%, 조명 시간 12시간(오전 8시∼오후 8시) 및 조도 150 내지 300 Lux로 설정된 한국화학연구소 안전성연구센터 중동물동의 2호실에서 실시되었다. 시험자들은 모두 고압증기멸균(121'C, 20분)된 작업복, 두건, 마스크 및 장갑 등을 착용하고 작업을 실시하였다.

(2) 사육환경 모니터링

시험기간 중 동물실들의 온습도는 자동은습도측정기에 의하여 매 시간마다 측정되었으며, 조도 등의 환경조건은 정기적(3개월에 1회)으로 측정되었다. 환경측정의 결과, 시험에 영향을 미칠 것으로 사료되는 변동은 없었다.

(3) 사육상자, 사육밀도 및 사육상자의 식별시험기간 동안 스테인레스제 망사육상자(220w x 410L x 200H mm)를 이용하여 순화기간에는 4 마리씩, 투여와 관찰기간중에 5마리씩을 수용하였다. 시험기간 중 사육상자에는 시험번호 및 동물번호를 기입한 개체식별카드(매체대조군:백색, T1:황색)를 붙였다.

(4) 사료 및 식수

㉠ 사료의 급여방법

사료는 실험동물용 고형사료(길림사료공사)를 방사선(2.0 Mrad) 멸균하여 자유롭게 섭취시켰다. 또한 당 연구소 실험동물실과 공급회사에서 미생물 및 오염물질 확인시험을 실시한 바, 본 시험에 영향을 미칠만한 요인은 발견되지 않았다.

㉡ 식수의 급여방법 및 오염물질의 확인

식수는 상수도수를 자외선살균기로 소독시킨 후 자유롭게 섭취시켰다. 식수에 대하여는 급여전에 미리 일반수질검사를 실시하였으며, 검사 결과 시험에 영향을 미치는 요인은 발견되지 않았다.

3. 투여량 및 시험군의 구성

(1) 투여량 설정

본 시험물질은 식물추출물 제재로서 예비시험 결과 한계용량인 2000 ㎎/㎏의 용량에서 사망동물이 관찰되지 않아 한계용량시험의 일환으로 최고용량을 2000 ㎎/㎏으로 하고, 매체를 투여하는 매체대조군만을 두었다. 단, 중국 위생부의 '독성시 험 조례'에는 한계용량에 대한 기준이 없기 때문에 일본 후생성의 "의약품 비임상시험 guideline 해설 (1997)"을 참고하였다.

(2) 시험군의 구성, 투여농도 및 용량

(3) 군 분리 및 동물식별

동물의 군 분리는 다음과 같이 실시하였다. 우선, 순화기간 중 건강하다고 판정된 동물의 체중을 측정한 후 5 g 간격으로 구분시켜 두었다. 그리고 암ㆍ수 각각의 평균체중에 가까운 개체를 암수 각각 10 마리씩을 선택하였다. 5 g 간격으로 구분되어 선택된 암수 각 10 마리를 암ㆍ수 각 군에 5마리씩 균등히 들어가도록 체중을 이용한 무작위법을 이용하여 분배하였다. 동물의 개체식별은 피모색소마킹법 및 개체식별카드 표시법으로 실시하였다.

4. 시험물질의 투여

(1) 투여액의 조제법

투여직전에 주사용 생리식염수를 매체로 하여 시험물질을 2000㎎/20㎖/㎏으로 조제하였다. 매체대조군(vehicle control)의 동물에는 매체인 0.5 % CMC만을 투여하였다.

(2) 투여경로 및 투여방법

투여전날 하룻밤을 절식시킨 후 경구투여용 존데(sonde)를 장착한 주사기를 이용하여 조제시험물질을 강제 경구투여하였다.

(3) 투여경로 선택이유

임상예정 경로로서 경구투여를 선택하였다.

(4) 투여횟수 및 투여기간

투여당일 오전에 개체별로 단회 투여하였다.

(5) 투여액량 계산

투여당일의 측정된 체중을 기준으로 하여 투여액량(20 ㎖/㎏)을 계산하였다.

5. 관찰 및 검사항목

(1) 일반증상 및 사망동물의 관찰

투여당일은 투여 후 1시간에서 6시간까지는 매 시간마다. 투여익일부터 14일까지는 매일 1회 이상씩 일반증상 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.

(2) 체중측정

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 투여개시전과 투여 후 1, 3, 7 및 14일에 체중을 측정하였다.

(3) 부검소견

전 생존동물을 CO₂가스로 마취하여 개복하였으며 방혈치사 시킨 후 육안으로 모든 내부장기를 관찰하였다.

6. 통계학적 방법

길림수의대학 독성연구센터의 SOP 에 따라 통계처리를 실시하였다.

7. 결 과

일반증상을 관찰한 결과, 모든 시험군에서는 관찰기간 동안 어떠한 이상증상도 관찰되지 않았으며 암ㆍ수의 모든 시험군에서 투여 후 1, 3, 7 및 14일째 정상적인 체중증가가 관찰되었다.

또한, 사망률 및 LD50값(50% 동물을 사망시킬 수 있는 농도)을 조사한 결과, 암ㆍ수의 매체대조군 및 2000 mg/kg 투여군에서 시험기간을 통하여 사망동물은 관찰되지 않았으며, 암ㆍ수동물에 대한 본 시험물질의 LD50값은 각각 2000 ㎎/㎏을 상회하였으며, 부검결과 역시, 암수의 모든 시험군에서 육안으로 이상이 있는 부검소견은 관찰되지 않았다.

본 발명에 따른 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물에 대한 단회 경구투여 독성시험을 암수 SD계통의 마우스를 이용하여 실시한 결과, 시험기간동안 사망율, 일반증상, 체중변화 및 부검소견에 있어서 시험물질의 투여에 기인한 변화는 관찰되지 않았다.

[시험예 2] 장기독성 시험

1. 시험약

본 발명에 따른 시료는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물로 분말 1 g은 생약으로 10.6 g에 해당하며 증류수를 용제로 하여 필요한 농도로 제조하여 사용하였다.

2. 실험동물

마우스는 체중이 95 내지 102 g, 성별은 암ㆍ수 동수인 서안의과대학 실험동물센터 제공 SD계 마우스(비준 번호 07-005호)를 이용하였다.

분류는 SD계 마우스 160 마리를 무작위로 4개 군으로 분류, 각 군 40 마리 자웅 동수, 고용량군은 시험약 3.0 g을 15.0% 농도의 현탁액으로 하고(임상용량의 50배) 20 ㎖/kg을 경구투여 하였고, 중용량군은 시험약 1.5 g을 7.5% 농도의 현탁액으로 하여 20 ㎖/kg을 경구투여 하였으며, 저용량군은 시험약 0.3 g을 1.5% 농도의 현탁액으로 하여 20 ㎖/kg을 경구투여 하였다. 대조군은 증류수만을 투여하였다.

사육은 공조시설, 시육온도 18 내지 24℃, 상대 습도 45 내지 70%로 하고 환풍기를 이용하여 통풍을 시켜주고 1일 12시간씩 조명을 주었다. 사료는 서안의과대학 실험동물센터에서 제조한 표준 고체사료로 사육하고, 일반 가정용수로 식수를 공급하되 성별을 구분하여 사육하였다.

사육상자 당 5 마리를 사육하며 매 3일마다 사육상자를 청소하였으며, 위 조건에 1주일간 적응시킨 다음 실험을 실시하였다.

마우스를 시험동물로 선정한 이유는 이 동물이 독성시험에 적당한 실험동물로서 급성독성시험에 널리 사용되고 있으며, 특히 SD계는 시험기초자료가 충분히 확보될 수 있으므로, 시험결과의 해석 및 평가시 이러한 자료를 이용하는 것이 가능하다.

3. 실험방법(투여방법)

매일 1회 경구투여하고 투여 3개월 후 시험동물에 대하여 관련 검사를 실시한다.

4. 시험항목

(1) 일반적 상황 및 체중

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 신경상태, 활동상태, 분미물, 음식습관, 변, 모발, 피부 등의 상태를 관찰하였으며, 매 2주마다 체중을 측정 변화에 따라 용량을 조절하였다.

(2) 혈액학적 검사

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 투여 3개월 후 각 군별로 대퇴부동맥에서 채혈하여 혈단백(Hb), 적혈구(RBC), 백혈구(WBC) 및 혈소판(Pt)을 검사하였다.

(3) 혈액생화학적검사

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 투여 3개월 후 대퇴부동맥에서 채혈하여 혈액 내의 각종 물질의 농도(ALT, AST, ALP, TP, ALB, BUN, Crea, T-BIL, GLU)를 검사하였다.

(4) 요(尿) 검사

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 검사기간에 마우스 대사 케이스를 사용하여 요(尿)를 수집하고 색상, 요당, 요단백, 적혈구, 백혈구 등을 검사하였다.

(5) 심전도

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 검사기간에 표준 심전도를 검사하였다.

(6) 해부(주요장기계수)

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 검사기간에 심장, 간, 비장, 폐, 신장, 흉선, 신상선, 고환, 난소 등 9개 장기를 측정하였다.

(7) 조직 병리학적 검사

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 심장, 간, 비장, 폐, 신장, 위두부, 십이지장, 공장, 결장, 방광, 장간막임파절, 고환, 부고환, 난소, 자궁, 흉골(골수), 대뇌, 수체, 신상선, 흉선, 갑상선 등 21개 조직을 검사하였다.

5. 결과

일반적인 상태 및 체중 변화를 관찰한 결과, 투여 13주 후 일반적인 상태는 양호하며 모발, 신경상태, 활동상태, 눈, 코의 분비물 역시 정상이었다. 24시간 동안의 식이습관도 정상이었으며, 체중은 점차 증가하였으나 대조군과 비교시 변화 정도에는 유의성이 없었다.

혈액학적 영향 및 혈액생화학적 영향을 조사하기 위하여 투여 3개월 후 및 회복 후, 각각 펜토바르비탈(pentobarbital)을 피하주사하여 마취시킨 다음, 대퇴부동맥에서 채혈하여 혈액검사 및 생화학적 검사를 실시하였다. 그 결과 혈액학적 영향은 하기 표 1에서도 확인할 수 있듯이, 투여군의 검사 수치에 특별한 변화가 없었으며, 대조군과 비교할 때 현저한 차이는 없었다.

혈액생화학적 영향은 아미노트란스페라아제(aminotransferase), 간기능, 신기능, 혈당을 조사한 결과 하기 표 2의 결과에서도 확인할 수 있듯이, 고용량 투여군의 혈당은 현저히 강하하였고, 대조군에 비해 현저한 차이를 확인하였으며 기타 항목별 생화학적 검사치는 정상이었으며, 대조군과 통계학적 차이점은 없었다.

요(尿)에 대한 영향을 조사한 결과, 하기 표 3의 결과와 같이 각 시험동물의 요(尿)상태는 정상이었으며 요당, 요단백 등 모두 음성으로 나타났으며 현미경 검사 결과 적혈구와 백혈구도 발견되지 않았다. 이는 시험약물이 마우스의 요에 대하여 아무런 영향이 없다는 것을 확인한 것이다.

시험약물 투여 3개월 후 심전도에 대한 영향을 조사한 결과, 시험동물의 심박율, S-파, T파 등 각 파는 대조군과 차이가 없었다. 또한 시험약물 투여 후 시험동물을 해부하여 육안으로 심장, 간, 비장, 폐, 신장, 위, 공장, 결장, 방광, 담낭, 신상선, 흉선, 고환, 자궁, 뇌, 수체, 복강, 흉강 등의 주요 장기 및 체강의 색상, 형태, 병소 등을 관찰한 결과, 장기 및 체강의 색상과 형태에는 이상이 없었으며 병소도 관찰되지 않았다.

상기 해부된 시험동물의 심장, 간, 비장, 폐, 신장, 신상선, 흉선, 고환, 난소 등을 채취하여 장기의 크기에 따라 무게를 단 뒤 장기계수를 측정하였다.(g/100 g체중 or mg/100 g체중)

그 결과 하기 표 4의 결과에서도 확인할 수 있듯이, 각 장기계수는 모두 정상범위 내에 포함되는 것을 확인하였다.

조직병리학적 검사를 위하여 마우스 장기를 채취하였으며, 그 중 대조군 및 고용량 투여군은 각 6 마리씩에서, 중용량군과 저용량군도 각 6 마리에서 채취하였다.

장기조직은 심장, 간장, 비장, 폐, 신장, 위, 십이지장, 공장, 결장, 장간막임파절, 신상선, 흉선, 갑상선, 고환, 부고환, 난소, 자궁, 흉골(골수), 대뇌, 수체와 추가적으로 본 시험약물이 혈당강하 작용이 있으므로 췌장선의 조직을 추가하여 총 21개 조직을 채취하였다.

상기 조직들은 10% 포름알데하이드(formaldehyde) 용액으로 고정하고, 파라핀(paraffin) 절편을 만들어 HE로 염색한 뒤 현미경으로 시험군과 대조군을 비교하면서 관찰한 결과 도 1 및 도 2에서도 확인 할 수 있듯이, 시험군의 장기 조직은 구조상 명확하며 시험약물투여시의 충혈, 부종, 변성, 괴사, 세포침윤 등의 병리학적 변화는 관찰되지 않았다.

따라서 본 시험약물은 병리학적 영향이 나타나지 않았다는 것을 확인하였으며, 시험약물은 마우스에 대한 13주간의 반복투여 결과 특이한 독성 반응은 없었으 며, 안전한 복용량은 체중으로 환산하여 3.0 g/kg체중/day인 것을 확인할 수 있었다.

[ 시험예 3] 혈당강하 효과 측정

상기 실시예에서 제조된 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물(이하 시험약물이라 칭한다.)의 혈당 강하 효과를 측정하기 위하여 아래와 같은 실험을 수행하였다.

실험동물은 대한실험 동물 센터로부터 공급받은 마우스에 0.85% 식염수(Saline)에 용해시킨 스트렙토조토신(Streptozotoxin;STZ, Sigma.co.,USA)을 5일간 반복 투여하여 인위적으로 당뇨를 유발한 뒤 상기 시험약물을 투여하여 혈당의 변화를 비교 관찰하여 본 발명 조성물의 치료 효과를 보았다.

1. 실험방법

실험동물은 대한실험동물센터로부터 공급 받아 청정실 내에서 온도 22±2℃, 습도 55±5%, 조명 12L/12D의 조건하에서 관리하였다.

시험동물은 총 4개 군으로 나누었으며, 구체적으로 제1 대조군은 스트렙토조토신을 투여하지 않는 대조군으로, 제2 대조군은 스트렙토조토신을 60 mg/kg을 3 내지 5회 복강투여하고, 제3 대조군은 스트렙토조토신과 함께 위약으로 0.85% 식염수(Saline)를 투여하고, 실험군은 상기 제3 대조군에 투여한 시료에 본 발명에 따른 시험약물을 267 mg/㎖/kg을 투여하였다.

시험약물은 투여 당일부터 23일까지 투여하였으며 매 4일마다 혈당, 요당, 체중을 측정하였다.

혈당의 측정은 마우스 꼬리 정맥에서 채혈하여 혈당 간이 혈당계(아큐트렌드, 녹십자)로 측정하였으며, 측정 기술상 최고 혈중농도 500 mg/dl까지만 측정하였다.

2. 결과

본 발명에 따른 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물(이하 시험약물이라 칭한다.)에 대한 마우스 개체별 혈당을 측정한 결과 하기 표 5에서 확인한 결과, 혈당 치 300 mg/dl 이상을 당뇨 마우스로 판정할 때 제2 대조군에서는 시험을 마친 10마리 중 9마리에서, 제3 대조군에서는 10마리 중 8마리가 당뇨로 판정 받았으나 시험약물을 투여한 실시한 실험군에서 스트렙토조토신 마우스의 당뇨병 발병이 억제되었음을 확인할 수 있었다.

[ 시험예 4] 인슐린 비의존형 당뇨병( NIDD )에 대한 효과

제2형(인슐린 의존형)당뇨에 대한 시험약의 효과를 측정하기 위해 2007년 12월 내지 2008년 9월 기간 중 중국 섬서성 서안시와 중국 길림성 장춘시 일대에 거주하는 51명의 인슐린비의존형(NIDD)당뇨병 환자에 대하여 본 시험약을 투여하고 임상 치료 효과를 관찰하였다.

1. 대상자 선정

1) 선정환자기준(1998년 WHO 표준): 혈당을 측정하여 아래 (1) 내지 (3)의 조건 중에 하나에만 부합되면 당뇨병 환자로 진단한다.

(1) 공복혈당 ≥7.8 mmol/ℓ(140㎎/100㎖), 또는 식후혈당 ≥11.1 mmol/ℓ(200㎎/100㎖)

(2) 공복혈당은 7.8 mmol/ℓ 보다 낮지만, 포도당 75 g으로 OGTT를 실시하였을 때 혈당이 ≥11.1mmol/ℓ(200㎎/100㎖)

(3) OGTT 1시간 후 ≥11.1 mmol/ℓ이거나 또 OGTT 2시간 후 혈당이 ≥11.1 mmol/ℓ, 또는 공복혈당이 ≥7.8 mmol/ℓ

2) 시험대상자 선정 기준

상기 1)항의 기준에 적합한 자라도 다음 각 호 중의 하나에 해당이 되면 제외한다.

(1) 시험약 투약전보다 혈당은 정상보다 높지만, 식이요법이나 운동요법 등으로 공복혈당이 7.8 mmol/ℓ(140 ㎎/100 ㎖)보다 높거나, 식후 2시간 후 혈당이 11.1 mmol/ℓ(200 ㎎/100 ㎖)보다 낮은 경우

(2) 식이요법 규정이나 약물 복용 규정을 지키지 않아 약효에 영향을 주는 자

(3) 합병증이 심각한 자, 혹은 다른 병력자

(4) 당뇨병이 최근 1개월내에 발병한 자 또는 산중독 및 감염자

(5) 치료를 중단한 자, 약효를 판단하지 못하거나 자료가 불완전한 자

(6) 인슐린의존형 당뇨병(IDD)환자

(7) 15세 이하이거나 임신부 혹은 산모

3) 일반

2. 시험방법

1) 일반적 관찰

(1) 일반적인 신체검사

(2) 혈, 당뇨 검사 및 혈, 뇨 루틴 검사

(3) 일부 환자에 대하여 심장, 신장, 간, 혈중지질검사

2) 약효관찰

(1) 병력을 상세히 확인하고, 식이, 운동, 심리, 당뇨병에 대한 지식 등을 확인한다

(2) 공복 및 식후 2시간시 혈당검사(투약 후 10 내지 15일마다 관찰한다.)

(3) 내당능(glucose tolerance) 실험(OGTT)

(4) 인슐린 분비(insulin release) 실험(INSRT)

(5) 아미노 프루토스(Amino Fructose) 측정

약물투여기간은 기본 60일을 단위로 하여 위의 (1)항의 혈당검사 및 (2)항의 내당능(glucose tolerance)은 반드시 실행하고, 나머지 항목은 환자 상황에 따라 실시하되, 시험약물 복용 후 10 내지 15일마다 공복혈당, 요당 또는 식후 2시간 후 혈당과 요당을 측정하였다.

약물 복용 시작 후 환자는 아래 기준에 의해 식이요법을 실시하고, 투여 60일 후에 치료 전 기록과 비교하여 평가하였다.

3) 치료 및 관찰

(1) 약물투여 방법: 3회/일, 4캅셀/회, 식전 30분 내지 식후 30분 사이에 경 구로 복용하며, 이후 혈당강하정도에 따라 용량조절, 기본 유지량은 3-4 캅셀/일로 복용하였다.

(2) 치료기간: 60일을 치료주기로 매 10 내지 15일 간격으로 공복 및 식후 2시간 혈당 및 요당을 검사하였다.

4) 약효판정표준

중국 당뇨병 회의 표준 및 중화인민공화국 위생부 표준에 따라,

(1) 현저한 효과:

○ 치료 후 증상은 기본적으로 없어졌으며,

○ 공복혈당 ＜7.2 mmol/ℓ(130 ㎎/100 ㎖),

○ 식후 2시간시 혈당 ＜8.3 mmol/ℓ(150 ㎎/100 ㎖),

○ 24시간 내 요당량 ＜10(g),

○ 혈당량 및 24시간 내 요당의 양은 치료 전 보다 30% 강하 한 경우 현저한 효과로 판정하였다.

(2) 유효:

○ 치료 후 일반적인 증상은 개선되며,

○ 공복혈당 ＜8.3 mmol/ℓ(150 ㎎/100 ㎖),

○ 식후 2시간 혈당 ＜10 mmol/ℓ(180 ㎎/100 ㎖),

○ 24시간 내 요당량 ＜25(g),

○ 또는 혈당량 및 24시간 내 요당량은 치료 전 보다 10% 강하한 경우 유효로 판정하였다.

(3) 무효:

○ 치료 후 증상은 개선되지 않았으며, 혈당 및 요당 강하 작용이 위 기준 이외인 경우 무효로 판정하였다.

3. 시험결과

투약 전ㆍ후의 혈당 변화를 조사한 결과를 하기 표 6 내지 7에 나타내었다.

상기 표 6 내지 7에서 확인할 수 있듯이, 치료 후 혈당강하치(mmol/ℓ)를 보면 3.1 mmol/ℓ이상 강하한 증례는 총 51명 중 49명으로 96.08%로 혈당강하에 효과가 있음을 확인하였다.

또한, 시험자를 대상으로 투약 전후의 증상을 확인한 결과 역시 치료 후 대부분은 치료 전에 비해 전형적인 증상인 목마름, 과다식욕. 과뇨 현상이 없어졌으며, 특히 무려감 등이 현저하게 개선되었음을 확인하였으며, 본 발명에 따른 시험약물은 제 2형 당뇨병에 명확한 치료 효과(혈당강하작용)와 당뇨로 인한 삼다일무 증상의 개선효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

[건강 보조식품 조성물 제형예 1] 드링크제

실시예의 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물 100 mg, 액상 올리고당 25 g을 혼합한 후 정제수 200 ㎖을 가하여 80 ㎖씩 비닐팩에 충진하여 130℃에서 4 내지 5초간 멸균시켜 액제를 제조한다.

[약학 조성물 제형예 1] 정제

실시예의 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물 100 mg, 옥수수 전분 100 mg, 유당 50 mg, 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

[약학 조성물 제형예 2] 캅셀제

실시예의 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물 100 mg, 결정성 셀룰로오스 3 mg, 락토오스 14.8 mg, 마그네슘 스테아레이트 0.2 mg을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하 여 캡슐제를 제조한다.

도 1은 본 발명에 따른 추출물의 장기투여에 대한 췌장 조직의 독성여부를 확인한 결과이고,

(A: 고용량군, B: 중용량군, C: 저용량군, D: 대조군)

도 2는 본 발명에 따른 추출물의 장기투여에 대한 간 조직의 독성여부를 확인한 결과이다.

(A: 고용량군, B: 중용량군, C: 저용량군, D: 대조군)

Claims

여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물, 지골피 1 : 상백피 1 내지 10 : 귀전우 1 내지 10 : 갈근 1 내지 10 : 황정 1 내지 10 : 백출 1 내지 5 : 맥문동 1 내지 5 : 산수유 1 내지 5 : 인삼 1 내지 5인 중량 조성비의 열수 추출물로 구성되는 복합생약 추출물, 및 비수리 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 1항에 있어서,

상기 복합생약 추출물은 여주 에탄올 추출물, 동충하초 추출물 및 열수 추출물의 혼합 비율이 4 : 1 내지 4 : 2 내지 5의 중량비인 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 1항에 있어서,

상기 복합생약 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 2항에 있어서,

상기 여주 추출물은 에탄올 추출물로 감압건조 후 분말로 수득되는 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
삭제
제 1항에 있어서,

상기 비수리 추출물의 발효물은 비수리 추출물 20 내지 40 중량%에 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 균주를 접종시켜 고체발효시킨 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 1항에 있어서,

상기 비수리 추출물의 발효물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 20 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 6항에 있어서,

상기 비수리 추출물은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출 후, 에탄올 비등점(78.3℃) 이상으로 고온 살균하여 수득되는 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 1항에 있어서,

상기 당뇨병은 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.
제 1항에 있어서,

상기 당뇨 합병증은 신경 합병증, 당뇨성 망막증, 신부전증, 성기능 장애, 피부질환, 고혈압, 동맥 경화증, 뇌졸증, 심장병 또는 괴저인 것을 특징으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물.