KR20240003869A - 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의한 건강 이상 개선용 조성물 - Google Patents

왕벚나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의한 건강 이상 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬 독성 완화용 조성물에 관한 것으로, 식품 및 의약품의 용도로서 활용 가능하다.

Description

왕벚나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의한 건강 이상 개선용 조성물{A COMPOSITION FOR IMPROVING HEALTH PROBLEMS CAUSED BY ENDOCRINE DISRUPTORS COMPRISING PRUNUS YEDONESIS EXTRACT}
본 발명은 환경호르몬에 의해 유발되는 건강 이상 개선을 위한 조성물에 관한 것으로, 식품 및 화장품 등 다양한 용도로서 활용 가능하다.
환경호르몬은 학술용어로 환경성 내분비계 교란물질(endocrine disruptors)이라고 하는데, 환경으로 방출된 유해한 화학물질이 생체 내에 유입되어 호르몬 작용을 방해하거나 교란시키는 물질을 총칭한다.
내분비계 장애물질이란 생명체의 내부에 들어가 내분비계의 정상적인 기능을 방해하거나 혼란시키는 화학물질로 내분비계 교란물질(Endocrine Disruptors)을 통칭한다.
환경호르몬은 인체의 내분비계에 작용하여 여성호르몬과 같은 작용을 일으켜 호르몬 분비를 차단, 과잉, 과소 분비토록 하여 불임, 성기능 장애, 정자수 감소 등 생식기능이상을 초래할 수 있다.
환경호르몬은 생체 호르몬과는 달리 쉽게 분해되지 않고 환경 및 체내에 수년간 잔류하며, 인체 등 생물체의 지방 및 조직에 농축되는 성질이 있다고 보고되고 있다
환경호르몬은 화학구조가 생체 호르몬과 비슷하여 몸속에서 마치 천연 호르몬인 것처럼 작용하는 경우가 많으며, 이와 같은 '모방(mimic)'을 통해 진짜 호르몬처럼 몸속의 세포 물질과 결합하여 비정상적인 생리작용을 한다.
환경호르몬으로 현재까지 약 87,000 여종이 알려져 있고, 이 중 인체에 독성을 보이는 환경호르몬은 약 67종이며, 대표적 맹독성 환경호르몬 물질로는 다이옥신류, 프탈레이트 가소제류, 비스페놀 등이 있다.
환경호르몬은 우리 몸의 지방조직 등에 침투한 뒤 잔류성 유기화학물질을 서서히 방출하면서 인슐린 저항성을 유발하므로, 이를 통해 지질대사 이상 등의 대사증후군뿐만 아니라 면역질환을 야기하거나, 세포 내 ROS(활성산소종) 발생을 상승시킴으로써 암, 당뇨, 고혈압, 불임 등 다양한 현대성인병 발생과 연관될 수 있다.
최근 내분비 교란물질에 의해 유발되는 질환에 대한 관심이 증가하고 있으며, 이를 개선하기 위한 다양한 연구가 수행되고 있다.
한편, 벚나무(Prunus serrulata L. var. spontanea Max. wils.)는 우리나라의 남부지방, 중부지방, 북부지방의 산지 해발 100~1,560 m 의 촌락부근에 자생하는 낙엽교목으로 높이는 20 m 안팎으로 4-5월에 잎보다 꽃이 먼저 피고 흰색 또는 홍색의 꽃은 나무 전체를 뒤덮어 꽃덩어리를 이룬다.
벚나무는 다방면에 이용되며 특히, 독립수, 군식용, 녹음수 및 가로수에 적합하다.
벚나무의 품종은 매우 다양하며 왕벚나무, 올벚나무, 산벚나무, 가는잎벚나무, 개벚나무, 잔털 벚나무, 털벚나무, 카네이션 벚나무 및 일엽 벚나무 등이 있으며, 특히, 가로수로 이용되는 벚나무의 대부분을 차지하고 있는 품종인 왕벚나무(Prunus yedoensis Matsumura)는 제주도 한라산 기슭이 원산지로 수형과 꽃이 아름다워 전국에 식재하고 있으며, 일본으로 건너가 재배되고 있는 낙엽활엽교목이다.
왕벚나무(Prunus yedoensis Matsum)는 장미과(Rosaceae) 벚나무속(Prunus L.)에 속하는 식물로 높이가 15m에 달하는 낙엽교목으로서 수피가 평활하며 어린가지에 잔털이 약간 있다.
왕벚나무는 대부분 북반구 온대 지역에서 자라며, 우리나라에도 전국 산지에 20여종이 있으며, 열매는 식용을 하기도 하고, 민간 의학에서는 각기병, 수종, 유선염, 치통과 통경제 등으로 사용하였다.
왕벚나무의 줄기 및 수피는 기침, 담마진, 우육체 등의 민간약으로 이용되어 왔으며, 줄기의 수피에는 항알레르기 효과가 있다는 보고가 있으나, 아직까지 환경호르몬의 독성에 의해 야기되는 건강 이상과의 연관성은 알려진 바 없다.
본 발명자들은 왕벚나무 추출물이 내분비 교란물질에 의해 유발되는 대사 이상 및 호르몬 유사 작용을 효과적으로 완화시키고 이로 인해 유발되는 각종 증상을 완화시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 생체 안전성이 우수하고, 환경호르몬에 의해 야기되는 건강 문제를 효과적으로 개선하는 천연 식물 유래의 기능성 식의약품을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬 독성 완화용 식품 조성물이 제공된다.
일 실시예에 있어서, 상기 추출물은 왕벚나무 수피 또는 가지로부터 수득할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 식품 조성물은 상기 환경호르몬에 의한 과민 피부상태를 완화활 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 식품 조성물은 환경호르몬 유발 활성산소종을 억제할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 환경호르몬은 비스페놀류, 파라벤류, 또는 프탈레이트류일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 건강 이상 예방 또는 개선용 식품 조성물이 제공된다.
일 실시예에 있어서, 상기 식품 조성물은 환경호르몬에 의한 내분비계 장애를 회복시킬 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 피부염 개선용 화장료 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 내분비계 장애 예방 및 치료용 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 포함하여 생체 안전성이 우수할 뿐만 아니라 내분비 교란물질에 의한 건강 상태 이상을 개선함으로써 건강기능식품뿐만 아니라 이로 인해 유발되는 질환의 치료 용도로서 유용하게 활용할 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 왕벚나무 추출물의 세포 독성을 평가한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 왕벚나무 추출물의 β-Hexosaminidase 분비 억제 활성을 평가한 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 왕벚나무 추출물의 IL-4 분비 억제 활성을 평가한 결과이다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다.
또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.
이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.
본 발명의 일 측면은 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬 독성 완화용 식품 조성물을 제공한다.
상기 환경호르몬은 신체의 정상적인 내분비 즉 호르몬 기능에 영향을 주는 체외 화학물질을 지칭하는 것으로, 내분비계의 정상적 기능을 방해하여 다양한 건강 문제를 야기할 수 있다.
구체적으로, 상기 환경호르몬은 비스페놀류(BPA, BPF, BPS), 파라벤류(메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤), 프탈레이트류(DEHP, DBP, BBP, DEP, DNOP, DIDP, DINP) 일 수 있으나, 생체 내에서 호르몬 유사 작용을 통해 건강 이상을 일으킬 수 있으면 특별히 제한되는 것은 아니다
BPA 등 환경호르몬은 체내에서 활성산소종을 증가시키는데, 상기 활성산소종은 동맥경화, 중풍, 심근 경색, 기미, 주근깨, 잔주름, 암, 백혈병, 교원병(collagen disease, 피부, 관절, 혈관 등 신체의 결합조직에 이상이 생기는 모든 질병), 남성의 생식 기능 저하 등을 일으킬 수 있다.
뿐만 아니라, 상기 환경호르몬은 체내 지방을 축적시키는데, 이로 인해 지방의 과도한 축적에 따른 모든 질병, 예컨대 비만, 동맥경화, 지방간 등의 원인이 될 수 있으며, 세포 형태를 비이상적으로 변화시키는 원인이 된다.
또한, 최근에는 환경호르몬에 의해 피부염이나 건선 등 다양한 피부 질환을 유발하는 것으로 밝혀진 바 있다.
상기 환경호르몬은 같은 작용기전에 의해 유사한 독성을 일으킨다고 알려져 있으므로, 상기 식품 조성물은 BPA 외에도 할로겐화된 방향족 탄화수소류의 환경호르몬에 의한 독성 억제용으로도 사용될 수 있으며, 비스페놀 A 외의 다른 종류의 환경호르몬의 해독 및 독성 발현의 억제에도 효과를 미칠 수 있다.
상기 왕벚나무의 생리활성에 대한 연구가 일부 진행된 바 있으나, 환경호르몬에 의한 생체 기능 교란과 관련된 기전이나 효과는 현재까지 알려진 바 없으며, 본 발명자들은 상기 왕벚나무 추출물의 환경호르몬에 의해 유발된 독성 완화 효과를 규명하고자 하였다.
상기 식품 조성물은 상기 환경호르몬에 의한 과민 피부상태를 완화할 수 있다.
상기 과민 피부상태는 미약한 자극이나 이물질에 대해 면역기능이 비정상적으로 과민하게 반응하여 유발되는 아토피 피부염이나 건선 등의 증상을 의미하며, 상기 식품 조성물은 상기 환경호르몬에 의해 야기되는 면역기능 이상을 회복시킴으로써 과민 피부상태를 개선할 수 있다.
피부 건선 부위에서 환경호르몬 수용체인 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 및 관련 유전자의 발현의 증가가 확인된 바 있으며, 왕벚나무 추출물의 다양한 유효성분은 상기 비정상적인 생체 반응을 완화시킬 수 있다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬 유발 활성산소종을 억제할 수 있다.
“항산화”는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉 진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 다양한 요인들로 인하여 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포 손상 및 병리적 질환을 유발할 수 있다.
산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래하게 되고, 노화의 직접적인 원인이 되기도 한다.
따라서, 상기 활성산소종을 제거하거나 감소시킴으로써 항산화 효과를 얻어 노화를 방지하고 건강을 유지할 수 있다.
상기 활성산소종(Reactive Oxygen Species, ROS)은 지방세포의 분화를 유도하거나 세포 주변 대식세포를 자극하기 때문에 당뇨와 같은 대사성 질환의 원인이 될 수 있으며, 상기 조성물은 활성산소종의 발생을 효과적으로 억제함으로써 환경호르몬에 의해 유발될 수 있는 대사증후군의 예방 또는 개선할 수 있다.
따라서, 상기 식품 조성물은 환경호르몬 관련 대사 이상, 예컨대 지질대사 이상 개선을 위한 건강기능식품으로도 사용될 수 있다.
상기 “유효성분으로 포함하는”은 투여하고자 하는 개체에 대한 의도하는 효과를 제공하기에 충분한 양을 포함하는 것을 의미하며, 상기 왕벚나무 추출물은 생체 안전성이 우수하므로 당업자가 양적 상한을 적절히 조정할 수 있다.
상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다.
예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다.
상기 왕벚나무 추출물은 수피 또는 가지로부터 수득할 수 있다.
상기 추출물은 왕벚나무 원료를 건조 후 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득할 수 있고, 바람직하게는 수피 또는 가지를 추출 원료로서 사용할 수 있다.
상기 추출물은 물, 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 핵산, 디클로로메탄 또는 이들의 혼합 용매로 추출될 수 있고, 바람직하게는 30 내지 70%(w/w) 농도의 에탄올에 의해 추출될 수 있다.
상기 원료에 포함된 유효성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으므로, 용매에 따른 생리 활성 물질의 선택성을 고려하여 달리할 수 있다.
상기 추출물은 추출 원료를 물로 수세한 후 건조 및 분쇄하여, 원료 중량의 8 내지 12배에 달하는 부피의 용매로 약 1 내지 24시간 동안 환류 순환 추출, 가압 추출, 초음파 추출 등 통상적인 방법으로 추출 및 여과하여 제조할 수 있다.
상기 추출물은 감압 증류 또는 동결 건조 등과 같은 추가적인 공정에 의해 분말 상태로 수득할 수 있다.
상기 추출물은 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 건강 이상 예방 또는 개선용 식품 조성물이 제공된다.
상기 “건강 이상”은 환경호르몬의 작용에 의해 신체에서 유발되는 비정상적인 증상을 포괄하는 것으로, 예컨대, 대사 이상, 면역과민, 피부 질환, 면역 기능 저하 등일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, 상기 식품 조성물은 환경호르몬에 의한 면역기능 저하를 억제할 수 있다.
상기 “면역(immunity)”은 생물체 내에서 병원체와 종양 세포 등을 탐지한 후 무력화하여 질병으로부터 생명체를 보호하는 기작을 의미하는 것으로, 상기 “면역 증진(Immunostimulation)”은 암 및 염증 등과 같은 다양한 질환에 대한 신체 방어 기전을 보강하는 일련의 치료학적 또는 예방학적 전략을 모두 포함할 수 있다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬에 의한 대사 이상을 완화시키고, 환경호르몬에 의해 야기될 수 있는 면역기능 저하를 억제할 수 있다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬에 의해 야기되는 건강 이상 개선을 위한 건강기능식품으로서 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, 상기 기능성은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미할 수 있다.
상기 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 식품 첨가물은 다른 규정이 없는 한 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 적합성 여부를 판단할 수 있다.
상기 식품 첨가물 공전에 기재된 품목은 예컨대 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류를 들 수 있다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬 독성 완화를 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있으며, 예컨대, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 보조 식품, 식품 첨가제 등에 사용될 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품은 환경호르몬 독성 완화를 목적으로 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조 및 가공될 수 있다.
구체적으로 상기 정제 형태의 건강기능식품은 왕벚나무 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와의 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축 성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수 있으며, 필요에 따라 적당한 제피제로 제피할 수도 있다.
상기 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질캅셀제는 통상의 경질캅셀에 왕벚나무 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물 또는 그의 입상물 또는 제피한 입상물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질캅셀제는 왕벚나무 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물을 젤라틴 등 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 솔비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
상기 환 형태의 건강기능식품은 왕벚나무 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 적당한 제피제로 제피를, 또는 전분, 탈크 또는 적당한 물질로 환의를 입힐 수도 있다.
상기 과립형태의 건강기능식품은 왕벚나무 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
또한, 상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 피부염 개선용 화장료 조성물이 제공된다.
상기 왕벚나무 추출물은 면역과민반응에 의해 유발되는 다양한 종류의 피부염을 완화시킬 수 있으므로, 피부염 개선을 위한 화장품 원료로서 사용될 수도 있다.
상기 피부염은 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 지루성 피부염, 피부 소양증, 주부습진, 홍피증 또는 건선일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며 환경호르몬에 의해 유발될 수 있는 피부 상태 이상 증상이라면 특별히 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.
구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 추출물이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 추출물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.
다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 내분비계 장애 예방 및 치료용 약학 조성물이 제공된다.
상기 내분비계 장애는 인체에 유입된 환경호르몬이 생식, 성장 등에 관여하는 내분비계에 작용하여 생체호르몬의 정상적인 작용을 방해함으로써 야기되는 건강 이상을 포괄하는 것으로, 예컨대, 면역과민, 면역력 저하, 대사 증후군, 환경호르몬에 의한 피부염이나 건선 등을 포함할 수 있으나 환경호르몬에 의해 야기되는 질병이라면 특별히 제한되는 것은 아니다.
상기 “예방”은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 염증에 의해 발생되는 증상이 상기 조성물을 사용 하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.
상기 “치료”는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다.
목적하는 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 경구적 전달, 비경구적 전달의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 전신 또는 국소 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 적절한 투여 형태를 제공하도록 적합한 양의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체와 함께 제형화될 수 있다.
상기 조성물은 약학 조성물의 제조에 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화하여 사용할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있고, 상기 고형제제는 상기 천연 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 혼합하여 조제할 수 있다. 또한, 상기 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있고, 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 외에 여러 가지 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 사용될 수 있다.
상기 비수성용제, 현탁제는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르가 사용될 수 있다. 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양이 대상체에 투여될 수 있다. 상기 “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 바람직하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.
실시예 1 : 왕벚나무 껍질 50% 에탄올 추출물 제조(HR2107-BaT-50E)
왕벚나무 나무껍질 건조물에 50%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 100℃에서 4시간 동안 가열하여 추출한 다음 여과하였다.
상기 여과물은 농축기를 이용하여 10 내지 15brix로 농축한 후 동결 건조하여 실험의 시료로 사용하였다.
실시예 2 : 왕벚나무 껍질 70% 에탄올 추출물 제조(HR2107-BaT-70E)
왕벚나무 껍질 건조물에 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 100℃에서 4시간 동안 가열하여 추출한 다음 여과하였다.
상기 여과물은 농축기를 이용하여 10 내지 15brix로 농축한 후 동결 건조하여 실험의 시료로 사용하였다.
실시예 3 : 왕벚나무 가지 50% 에탄올 추출물 제조(HR2107-Br-50E)
왕벚나무 가지 건조물을 분쇄하고 50%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 100℃에서 4시간 동안 가열하여 추출한 다음 여과하였다.
상기 여과물은 농축기를 이용하여 10 내지 15brix로 농축한 후 동결 건조하여 실험의 시료로 사용하였다.
실험예 1 : 독성 평가(MTT assay)
상기 실시예의 세포 독성을 RBL-2H3(mast cell)를 이용하여 확인하였다.
살아있는 세포 내 미토콘드리아의 탈수소효소에 의해 Tetrazolium salt(WST-1)에서 formazan으로 변화하는 것을 이용하여, 생성된 formazan의 농도를 spectrophotometer로 측정함으로써 세포 생존률을 측정하였다.
Ez-cytox(Dozen, Korea)을 이용하여 프로토콜에 따라 MTT assay를 수행하였다.
RBL-2H3 및 HaCaT 세포를 5 x 103 cells/100μL로 96 well에 분주한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다.
농도별(10, 100, 1000 μg/mL)로 시료를 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 10% MTT 시약이 포함된 배지로 교체하고 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 450nm 파장에서 microplate reader(Epoch, Biotek)로 측정하였다.
각 시료에 대한 세포생존율에 의한 독성 평가는 3회 반복하여 측정하였으며, 그에 대한 평균값과 표준편차를 산출하였다.
도 1을 참조하면, 실시예 1 내지 3의 시료는 소정의 농도 범위에서 세포 독성이 나타나지 않았다.
실험예 2 : β-Hexosaminidase 정량 시험
RBL-2H3(Rat Basophil Leukemia) 세포는 10%(v/v) FBS(Fetal Bovin Serum, Hyclone USA) 및 100units/mL 페니실린/스트렙토마이신(Hyclone, USA)이 함유된 DMEM(Dulbecco modified of Eagle medium, Hyclone,USA) 배지를 사용하여, 37℃, 5% CO2 존재하의 배양기(Thermo, Forma, Germany)에서 배양하였다.
RBL-2H3 세포를 5 x 105 cells/mL이 되도록 희석한 후, 희석한 세포에 IgE를 20ng/mL이 되도록 처리하였다.
24 well plate 플레이트에 각 well 당 500μL씩 분주한 후, 하루 동안 방치하여 세포를 감작시켰다.
500μL의 Siraganian buffer(119mM NaCl, 5mM KCl, 5.6mM 글루코오스, 0.4mM MgCl2, 25mM PIPES, 40mM NaOH, 1mM CaCl2, 0.1% BSA, pH 7.2)로 세정하였다.
각 well에 140μL의 Siraganian buffer, 20μL의 실시예의 시료 및 20μL의 DEHP를 처리한 후 30분 동안 반응시켰다.
양성 대조군으로는 PP2(Src kinase inhibitor)를 사용하였다.
반응 후, 1μg/mL의 DNP-HSA를 20μL 첨가하고 1시간 동안 추가 반응시켰다. 1시간 후, 상층액을 50μL 취해 96 well plate로 옮기고, 1mM p-NAG(4-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide) 50μL를 첨가하여 2시간 동안 반응시켰다.
0.1M 카보네이트 버퍼(carbonate buffer) 100μL를 넣고 반응을 종결시킨 다음 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
실험에서 얻어진 통계적 유의성은 GraphPad Prism 8.0(Graph Pad software, San Diego, CA, USA) package program을 이용하여 실험군 당 평균과 표준편차로 표시하였고, Student's t-test와 one way analysis of varance(ANOVA)test를 실시한 유의성을 검정하였다.
도 2A를 참조하면, 실시예 1을 처리한 경우 환경호르몬으로 유발된 시험군에서 베타-헥소사미니다아제 분비가 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 100μg/mL에서 약 59%, 200μg/mL에서 약 64% 억제되었다.
도 2B를 참조하면, 실시예 2를 처리한 경우 환경호르몬으로 유발된 시험군에서 베타-헥소사미니다아제 분비가 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 100μg/mL에서 약 55%, 200μg/mL에서 약 62% 억제되었다.
도 2C를 참조하면, 실시예 3을 처리한 경우 환경호르몬으로 유발된 시험군에서 베타-헥소사미니다아제 분비가 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 100μg/mL에서 약 50%, 200μg/mL에서 약 53% 억제되었다.
상기 결과는 실시예의 시료가 환경호르몬에 의해 증가된 β-hexosaminidase 분비 억제에 효과가 있으며, 환경호르몬에 의해 유발된 과민 피부상태를 완화할 수 있음을 시사한다.
실험예 3 : IL-4 분비량 평가
RBL-2H3 비만세포를 24-well plate에 5x105 cells/mL 분주한 후 24 시간 배양하였다.
새로운 MEM 배지에 100μM 비스페놀 A(BPA) 및 시료를 농도별로 처리하고 1시간 배양 후 칼슘운반체 A23187(1μM)을 처리하여 30분 동안 배양하였다.
양성대조군으로는 PP2(Src kinase inhibitor)를 사용하였다.
IL-4 ELISA kit를 사용하여 cytokine 함량을 측정한 후 ELISA reader를 사용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
실험에서 얻어진 통계적 유의성은 GraphPad Prism 8.0(Graph Pad software, San Diego, CA, USA) package program을 이용하여 실험군 당 평균과 표준편차로 표시하였고, Student's t-test와 one way analysis of varance(ANOVA)test를 실시한 유의성을 검정하였다.
도 3A를 참조하면, 실시예 1을 처리한 경우 환경호르몬으로 유발된 시험군에서 IL-4 분비는 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 100μg/mL에서 약 50%, 200μg/mL에서 약 63% 억제되었다.
도 3B를 참조하면, 실시예 2을 처리한 경우 환경호르몬으로 유발된 시험군에서 IL-4 분비는 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 100μg/mL에서 약 49%, 200μg/mL에서 약 62% 억제되었다.
상기 결과는 환경호르몬에 의해 면역과민반응이 증진될 수 있으며, 실시예의 시료가 상기 면역과민반응을 제어하여 이로 인해 유발될 수 있는 아토피 피부염, 천식, 과민증후군 증상을 개선할 수 있음을 시사한다.
실험예 4 : 환경호르몬 유도 ROS 생성 억제능 평가
3T3-L1 지방세포 분화를 10일 동안 진행하여 BPA에 의한 ROS 생성과 실시예의 ROS 생성 억제 효능을 평가하였다.
분화된 지방세포에 0.2% NBT 용액을 처리하여 24°C에서 90분 동안 반응 시켰으며 생성된 formazan을 50% acetic acid로 용출하여 593nm에서 흡광도를 측정하였다.
분화된 지방세포를 10 μM H2DCFDA를 처리하여 24°C에서 30분 동안 반응 시켰으며 FACS Calibur 유세포 분석기(BD Biosciences)를 사용하여 형광값(excitation and emission wavelength is 488 and 545 nm, respectively)을 측정하였다.
데이터 분석은 Cell Quest 소프트웨어 6.0(BD Biosciences)을 사용하여 10,000개 세포를 기반으로 분석하였다.
ROS 생산은 NBT 및 DCFDA assay을 사용하여 측정하였으며 지질 축적 억제 효능평가와 동일한 실험 그룹으로 나누었다.
NBT assay에서 ROS 생성은 MI 대조군(31.31±1.46%)에 비해 BPA 처리군(69.51±1.14%)에서 유의하게 증가하였다.
반면, 실시예의 시료를 함께 처리한 경우 ROS 생성이 유의적으로 억제되었다(표 1).
구분 ROS 생성(NBT assay)
100μg/mL 200μg/mL
실시예 1 39.9 37.7
실시예 2 41.2 37.0
실시예 3 42.5 38.5
표1을 참조하면, 100 및 200 μg/mL의 실시예는 BPA 처리군 대비 ROS 생성을 억제하였다.
상기 결과는 실시예의 시료가 환경호르몬에 대한 방어 효과를 가지며, 환경호르몬에 의해 유발된 활성산소종을 효과적으로 억제할 수 있음을 시사한다.
실험예 5 : 환경호르몬에 의한 유도 지질 축적 억제능 평가
모든 시료는 분화 초기단계에서 MI 또는 MDI 처리군과 비교하여 3T3-L1 지방세포의 세포생존율은 변화되지 않았다.
지방세포분화 초기 단계(1, 3, 6, 12, 24 및 48시간)에서 PPARγ및 C/EBPα와 같은 마스터 ATF의 단백질 발현 수준의 변화를 측정한 결과 PPARγ및 C/EBPα의 발현 수준은 MI 처리에 비해 BPA 처리 후 유의하게 증가하였으며, 분화 48시간에서는 더욱 확실하게 나타났다.
특히, BPA를 처리함에 따라 대조군에 비하여 세포내 리피드 드롭(lipid drop) 축적량이 증가하고, 세포의 형태(morphology)가 변하였는데, 대조군의 경우 섬유아세포 형태가 많이 보이는 반면, BPA를 처리한 군에서는 섬유아세포의 형태보다 둥그런 형태의 세포가 관찰되었다.
한편, GW9662는 PPARγligand-binding domain에 대한 경쟁적 결합에서 길항제로 알려져 있다.
PPARγ의 단백질 발현은 BPA 및 로시글리타존(rosiglitazone) 처리군에서 각각 MDI 처리군과 비교하여 29.42±2.26%, 37.18±10.92%로 나타났다.
반면, BPA 및 rosiglitazone과 함께 GW9662가 처리된 실험군에서 각각 11.82±3.94%와 15.82±6.25%로 나타나 PPARγ의 단백질 발현이 억제되었다.
상기 결과는 BPA가 PPARγ의 단백질 발현을 유도하여 비만 효과를 유발함을 시사한다.
또한, BPA로 유도된 ATF의 단백질 발현에 대한 억제효능을 평가하기 위해 3T3-L1 세포를 분화 48시간에 분석하였다.
분석 결과, PPARγ및 C/EBPα의 단백질 발현은 BPA 처리군에서 각각 2.71±0.44%, 56.29±7.47%로 MI 처리군(각각 7.32±0.44%, 24.14 ± 10.87%)과 비교하여 유의적으로 높게 나타났다.
반면 실시예의 시료(100 및 200 μg/mL)는 초기 지방세포분화에서 PPARγ및 C/EBPα 단백질 발현을 유의적으로 감소시켰다.
실시예의 BPA 유도 지질 축적 및 항비만 효과를 평가하기 위해 ORO 염색 분석을 사용하였다.
3T3-L1 지방전구세포를 1 x 106/well 세포의 밀도로 배양하였으며, 10일 동안 지방 생성 유도 호르몬 칵테일 및 CNE로 분화시켰다.
분화된 지방세포를 PBS로 2회 세척한 후, 24℃에서 1시간 동안 10% 포름알데히드(formaldehyde)에 고정시켰다.
고정된 세포를 60%(w/w) isopropanol로 세척하고 완전히 건조시켰으며, 미리 제조해 둔 Oil Red O working solution(ORO : DDW=6:4)으로 세포 내 축적된 지방 성분들을 24℃에서 1시간 동안 염색하였다.
증류수를 이용하여 세포를 3 내지 4회 세척 후, 세포 내 축적된 지방 성분과 결합한 ORO는 100% isopropanol을 이용하여 모두 용출시킨 후 microplate reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.
실시예의 시료가 3T3-L1 지방세포에 미치는 영향을 측정하기 전에 분화 10일차에 XTT assay를 이용하여 세포 생존율의 변화를 확인하였다.
그 결과 모든 샘플 처리군에서 MI 또는 MDI 처리군과 비교하여 3T3-L1 지방세포의 세포생존율은 변화하지 않았다.
로시글리타존(rosiglitazone) 및 BPA 처리군에서는 세포 내 지질 축적이 각각 64.97±7.30% 및 61.1±5.51%로 증가하였다.
반면, BPA로 유도된 지질 축적은 실시예(100 μg/mL, 200 μg/mL) 처리군에서 감소하였다(표 2).
구분 Relative lipid accumulation (%)
100μg/mL 200μg/mL
실시예 1 39.7 31.7
실시예 2 40.2 34.8
실시예 3 41.5 33.6
상기 결과는 BPA가 PPARγ발현의 유도를 통해 지방세포 분화 및 ATF의 발현을 유도하며, 실시예의 시료가 이를 억제하여 이상 지질 대사를 억제 및 개선시킬 수 있음을 시사한다.
실험예 6 : 환경호르몬에 의한 면역력 저하 개선 효능 평가
환경호르몬에 의한 면역력 저하 개선 효능을 알아보기 위해 분화된 지방세포에 환경호르몬(BPA)을 처리한 후 TNF-a 및 IL-6 생성량을 측정한 결과, BPA 처리군의 TNF-a 생성량은 MI 대조군에 비해 7574 pg/mL 감소한 반면, 실시예의 시료를 동시에 처리한 실험군의 TNF-a 생성량 감소는 낮은 수준으로 나타났다(표 3).
구분 TNF-a 생성 감소량 (pg/mL)
100μg/mL 200μg/mL
실시예 1 990 682
실시예 2 1026 732
실시예 3 1052 715
상기 결과는 BPA 처리에 따라 세포 내 TNF-a 생성이 현저히 감소하고 면역 기능이 저하하는 반면, 상기 실시예의 시료는 환경호르몬의 독성을 완화하여 면역력 저하를 효과적으로 억제할 수 있음을 시사한다.
실험예 7 : 내분비계 장애성 시험(Immature Uterotrophic assay)
내분비계 장애성 시험(Immature Uterotrophic assay)을 실시하여 실시예 시료의 생체 내(in vivo) BPA 독성방어효과를 평가하였다.
실험동물로는 생후 18일의 미성숙 랫트(immature rat, 한림실험동물로부터 구입)를 이용하였으며, 식이로는 AIN-76A 식이를 조제하여 투여하였다.
시험 중 측정된 시험동물의 체중 등에 관한 자료의 통계학적 분석을 위하여 일-방향(one - way) ANOVA를 실시하여 p=0.05 수준에서 군간 유의성을 검정하였고 유의성이 인정되면, 듀넷의 t-검정(Dunnett's t-test)을 실행하여 대조군과 시험군간의 통계학적 유의성을 검정하였다(p<0.05).
실험동물인 생후 18일의 미숙한 랫트(immature rat)에 3일 동안 BPA와 상기 실시예의 시료를 피하경로로 동시에 처치한 후, 마지막 투여일로부터 24시간 후에 체중을 측정한 후에 경추탈골하였다.
부검 시, 자궁에 있는 액체나, 지방을 깨끗이 분리한 다음, 무게를 측정하고, 10 % 포르말린에 고정한 다음 통상적인 방법을 거쳐 조직표본을 작성하고 병리 조직학적 검사를 실시하였다.
현미경(BH-8, Olympus, JAPAN)을 통해 전광 상피(luminal epithelium)의 높이를 측정하고, 질상피 세포를 관찰하였다.
실시예의 시료를 농도별로 미성숙 암컷 랫트에 3일간 피하 투여한 결과, 시험 전 기간 동안 체중증가율은 정상적으로 나타났다.
반면, 랫트의 자궁 실증량은 BPA 단독투여군에서 정상에 비해 157%나 증가하였고, 질의 경우 87% 증가하였으나, BPA와 실시예의 시료를 같이 투여한 경우 중량의 감소 경향이 관찰되었다(표 4).
구분 중량 증가율(100μg/mL)
자궁(%) 질(%)
실시예 1 73.5 32.7
실시예 2 76.2 31.2
실시예 3 75.1 34.5
대조군(BPA 투여군) 157.2 87.3
또한, 질과 자궁의 상대 중량 장기무게의 경우 실시예의 시료 투여시 농도 의존적으로 BPA에 대한 억제효과가 있는 경향이 나타났으며 통계상 유의적인 변화가 확인되었다.
조직병리학적 결과, 자궁상피세포와 질상피세포를 관찰시 무처치군에 비해 BPA 투여군에서 상피세포의 두께가 증가하였으며, 실시예의 시료를 동시에 노출시켰을 때, 농도 의존적으로 BPA에 의한 자궁과 질 모두 상피세포 증식효과를 억제하는 것으로 나타났다.
상기 결과는 실시예의 시료가 랫트에서 BPA 독성을 감소시킴으로써 BPA 독성으로 인한 자궁과 질의 상피세포의 이상 증식을 방어할 수 있음을 시사한다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬 독성 완화용 식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 왕벚나무 수피 또는 가지로부터 수득한 것인, 식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 환경호르몬에 의한 과민 피부상태를 완화하는, 식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    환경호르몬 유발 활성산소종을 억제하는, 식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 환경호르몬은 비스페놀류, 파라벤류, 또는 프탈레이트류인, 식품 조성물.
  6. 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 건강 이상 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    환경호르몬에 의한 내분비계 장애를 회복시키는, 식품 조성물.
  8. 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 피부염 개선용 화장료 조성물.
  9. 왕벚나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬에 의한 내분비계 장애 예방 및 치료용 약학 조성물.
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