CN105073133B - 抗gdf15抗体 - Google Patents

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Abstract

在此披露了结合人GDF15并且抑制人GDF15的活性的单克隆抗体。这些抗体可以用来治疗与人GDF15过表达相关联的体重损失，包括恶病质。

Description

抗GDF15抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年5月24日提交的美国临时专利申请号61/827,325和2012年12月21日提交的美国临时专利申请号61/745,508的权益和优先权，这些临时专利申请中的每一个的整个披露内容通过引用全部结合在此。
发明领域
本发明的领域是分子生物学、免疫学、恶病质和恶病质样病症以及肿瘤学。更具体地说，领域是治疗性抗体。
背景
不自主重量损失可以分成三种主要病因，这三种主要病因包括恶病质、肌少症(sarcopenia)和饥饿。恶病质是与众多疾病相关联的衰弱性代谢综合征，这些疾病包括癌症、AIDS、慢性心力衰竭(又称为充血性心力衰竭)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性肾脏疾病、结核病、脓毒症以及全身性炎症的其他形式。恶病质在其表现形式上有所不同，但通常涉及骨骼肌质量不自主损失和一些基础性疾病形式(艾凡(Evans)等人(2008)临床营养学杂志(CLIN.NUTR.)27:793-799)。恶病质是涉及不自主重量损失的消耗性病症并且可以与全身性炎症和/或急性炎症反应相关联。托马斯(Thomas)(2007)临床营养学杂志(CLIN.NUTRITION)26:389-399。脂肪质量以及非脂肪质量如肌肉质量的损失常常是恶病质的显著临床特征。在许多但并非所有情况下，恶病质进展通过命名为恶病质前期、恶病质和顽固性恶病质的阶段(费伦(Fearon)等人(2011)柳叶刀肿瘤学杂志(LANCET ONC.)12:489-495)。两种不同但有时重叠的过程似乎驱动恶病质的发展和进展：(a)直接作用于肌肉使肌肉质量和功能下降的代谢过程；和(b)导致脂肪和肌肉损失的食物摄取减少(蔡(Tsai)等人(2012)恶病质肌少症杂志(J.CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE)3:239-243)。
虽然恶病质是复杂的并且尚未被完全了解的综合征，但清楚的是TGF-β超家族的一员GDF15(又称为MIC-1、PLAB、PDF和NAG-1)是不同疾病中的恶病质的重要介导物(蔡等人，同上)。至少一些肿瘤过表达并分泌GDF15，并且升高的血清GDF15水平与不同癌症相关联(约能(Johnen)等人(2007)自然医学杂志(NAT.MED.)13:1333-1340；鲍斯肯(Bauskin)等人(2006)癌症研究杂志(CANCER RES)66:4983-4986)。对抗GDF15的单克隆抗体被认为是潜在的抗恶病质治疗剂。参见，例如美国专利号8,192,735。
由恶病质引起的重量损失是与不同疾病中的不良预后相关联(艾凡等人，同上)，并且恶病质和其后果被认为是约20％癌症死亡中的直接死亡原因(蒂斯代尔(Tisdale)(2002)自然评论：癌症杂志(NAT.REV.CANCER)2:862-871)。恶病质很少通过营养介入来逆转，并且当前很少用药物疗法来治疗这种综合征(艾凡等人，同上)。
肌少症是与恶病质相关的临床病状，其特征在于骨骼肌质量和肌肉强度损失。肌肉质量减小可以导致功能损伤(有强度损失)、跌倒的可能性增加以及自主性损失。随着肺活量下降，呼吸功能也会受到损伤。在代谢应激过程中，肌肉蛋白被迅速地调动以便为免疫系统、肝脏和肠提供氨基酸，具体是谷氨酰胺。肌少症常常是老年人的疾病；然而，它的发展还可以与肌肉废用(muscle disuse)和营养不良相关联，并且可以与恶病质同时发生。可以基于功能观察结果如低肌肉重量和低步速来诊断肌少症。参见，例如莫斯卡瑞特利(Muscaritoli)等人(2010)临床营养学杂志29:154-159。
饥饿典型地由于不适当饮食和/或营养摄取而引起身体脂肪和非脂肪质量损失(托马斯(2007)同上)。饥饿的影响常常通过改善饮食和营养例如蛋白质摄取来逆转。
天然存在的抗体是含有四个多肽链的多聚体蛋白质(图1)。这些多肽链中有两个被称为重链(H链)，并且这些多肽链中有两个被称为轻链(L链)。这些免疫球蛋白重链和轻链是通过一种链间二硫键来连接的。这些免疫球蛋白重链是通过链间二硫键来连接的。轻链由一个可变区(图1中的VL)和一个恒定区(图1中的CL)组成。该重链由一个可变区(图1中的VH)和至少三个恒定区(图1中的CH1、CH2和CH3)组成。这些可变区决定了抗体的特异性。每个可变区包含三个高变区，这三个高变区又称为两侧有四个相对保守构架区(FR)的互补决定区(CDR)。这三个CDR(称为CDR1、CDR2和CDR3)促成了抗体结合特异性。天然存在的抗体已经被用作用于工程化的抗体如嵌合抗体和人源化抗体的起始材料。
存在对用于治疗恶病质和肌少症的有效治疗剂(包括靶向GDF15的单克隆抗体)的显著未满足的需要。此类治疗剂具有在治疗不同癌症和其他威胁生命的疾病中起重要作用的潜力。
发明概述
本发明部分地基于一个特异性结合人GDF15(hGDF15)的抗体家族的发现。这些抗体含有基于抗体CDR的hGDF15结合位点。这些抗体可以用作治疗剂。当用作治疗剂时，这些抗体被工程化例如人源化，以便降低或消除向人患者给予时产生的免疫应答。
这些披露的抗体阻止或抑制hGDF15的活性(即，中和hGDF15)。当向哺乳动物给予时，这些抗体可以抑制肌肉质量损失，例如与一种基础性疾病相关联的肌肉质量损失。该基础性疾病可以是选自下组，该组由以下各项组成：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。在一些实施例中，肌肉质量损失可以伴随有脂肪质量损失。这些披露的抗体还可以用来在哺乳动物中抑制不自主重量损失。在一些实施例中，这些披露的抗体还可以用来抑制器官质量损失。此外，披露了一种在哺乳动物中治疗恶病质和/或肌少症的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予有效量的至少一种所披露的抗体中的一种。
还披露了一种用于在哺乳动物中在血浆或血清中建立成熟重组人GDF15(rhGDF15)的稳态水平的方法，该方法包括向该哺乳动物给予一种rhGDF15-免疫球蛋白Fc(Fc-rhGDF15)融合蛋白。该Fc-rhGDF15可以是一种小鼠Fc成熟重组人GDF15(mFc-rhGDF15)。在一些实施例中，该哺乳动物是一种啮齿动物，例如小鼠。
另一方面，披露了一种在哺乳动物(例如，人)中治疗肥胖症的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予治疗有效量的Fc-rhGDF15，例如一种人Fc成熟重组人GDF15(hFc-rhGDF15)。还披露了包含一种Fc-rhGDF15融合蛋白和一种药学上可接受的载体的药物组合物。
在考虑了下列附图、详细说明和权利要求书之后，本发明的这些和其他方面以及优点将变得清楚。如在此所使用，“包括”意指没有限制，并且引用的实例是非限制性的。如在此所使用，“抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11”意指抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11或其人源化变体。
附图说明
参考下列附图可以更完全地理解本发明。
图1(现有技术)是一种典型的天然存在的抗体的示意性图示。
图2是表示如通过ELISA所确定的来自如下实验的结果的图：在初次接受试验的小鼠或带有人异种移植物肿瘤(Chago、RPMI7951、PC3、TOV21G、HT-1080、K-562、LS1034)的小鼠中测量hGDF15血清水平。
图3是表示如通过ELISA所确定的来自如下实验的结果的绘图：在初次接受试验的ICR-SCID小鼠中确定由皮下注射(1μg/g)给予的裂解rhGDF15的血浆药物代谢动力学(PK)。
图4是概括来自如下实验的结果的图：在对免疫无能的小鼠ICR-SCID中测量裂解rhGDF15蛋白(■)和阴性对照(PBS(●))的诱导体重损失的恶病质活性。箭头指示1μg/g的rhGDF15的皮下剂量。
图5A和图5B是概括来自如下实验的结果的图：在对免疫有能力的Balb/C小鼠(图5A)和对免疫无能的CB17-SCID小鼠(图5B)中测量mFc-rhGDF15(融合到成熟重组人GDF15的氨基末端上的小鼠Fc；■)、rFc-rmGDF15(融合到成熟重组小鼠GDF15的氨基末端上的兔Fc；▲)和阴性对照(PBS；●)的诱导体重损失的恶病质活性。箭头指示1μg/g的重组蛋白的皮下剂量。
图6A-6E是概括来自如下实验的结果的图：在对免疫无能的ICR-SCID小鼠中表现出mFc-rhGDF15(■)和阴性对照(PBS；●)的诱导体重损失的恶病质活性(图6A；箭头指示1μg/g的mFc-rhGDF15的皮下剂量)；诱导脂肪组织或性腺脂肪质量损失的恶病质活性(图6B)；诱导腓肠肌的肌肉质量损失的恶病质活性(图6C；腓肠肌质量)；并且增加肌肉降解分子标志物(mMuRF1(图6D)和mAtrogin(图6E))的mRNA表达的恶病质活性。
图7是概括来自如下实验的结果的图：在对免疫无能的Balb/C裸鼠中测量mFc-rhGDF15(■)和阴性对照(PBS；●)的诱导体重损失的恶病质活性。箭头指示1.33μg/g的mFc-rhGDF15的皮下剂量。
图8是概括来自如下实验的结果的图：在用重组蛋白进行给药的小鼠中测量mFc-rhGDF15的血清水平。通过蛋白质印迹来确定mFc-rhGDF15的存在。通过里科尔(Licor)来定量对应于mFc-rhGDF15和rhGDF15的两个阳性带(根据适当的分子尺寸)。计算释放的rhGDF15与mFc-rhGDF15的百分比。
图9A是概括来自如下实验的结果的图：在对免疫无能的ICR-SCID小鼠中测量mFc-rhGDF15(0.1μg/g(■)，0.01μg/g(Δ))和阴性对照(mIgG0.1μg/g(●))的诱导体重损失的恶病质活性。箭头指示重组蛋白的腹膜内剂量。图9B是表示如通过ELISA所确定的在给药之后5天在用mFc-rhGDF15(0.1μg/g(□)，0.01μg/g(■))进行给药的小鼠的血浆中的rhGDF15总水平的图。
图10是示出抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11以及17B11的完整免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列的序列比对。彼此比对每种抗体的氨基酸序列，并且CDR1、CDR2和CDR3用方框标识。未加以方框的序列表示构架(FR)序列。比对定位(空位(gap))是基于卡巴特(Kabat)编号，而不是比对算法如Clustal。对以上这些序列进行编号表示进行卡巴特编号。
图11是示出图10中的每个免疫球蛋白重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3序列的序列比对。
图12是示出抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11以及17B11的完整免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列的序列比对。彼此比对每种抗体的氨基酸序列，并且CDR1、CDR2和CDR3用方框标识。未加以方框的序列表示构架(FR)序列。比对定位(空位)是基于卡巴特编号，而不是比对算法如Clustal。对以上这些序列进行编号表示进行卡巴特编号。
图13是示出图12中的每个免疫球蛋白轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3序列的序列比对。
图14是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在mFc-rhGDF15恶病质模型中测量以10mg/kg进行给药的抗GDF15抗体01G06(■)、03G05(▲)、04F08(▼)、06C11(◇)、14F11(
Figure BDA0000784036400000051
)和17B11(□)以及鼠IgG对照(●；mIgG)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图15是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型中测量以10mg/kg进行给药的抗GDF15抗体01G06(▲)、03G05(◇)、04F08(▽)、06C11(□)、08G01(■)、14F11(◆)和17B11(
Figure BDA0000784036400000052
)以及鼠IgG对照(●；mIgG)的恶病质抑制活性。箭头指示每三天腹膜内注射抗体。
图16A-16E是概括来自如下实验的结果的图：在带有HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型的对免疫无能的小鼠(ICR-SCID)中表现出以10mg/kg进行给药的抗GDF15抗体01G06(■)的抗恶病质活性。与阴性对照(鼠IgG(●))相比，使用抗体01G06的处理使体重损失逆转(图16A)；诱导食物消耗显著增加持续到给药之后3天(图16B)；诱导性腺脂肪质量增加(图16C)；诱导腓肠肌的肌肉质量增加(图16D)；并且使肌肉降解分子标志物(mMuRF1和mAtrogin(图16E))的mRNA表达减少。在图16A中，箭头指示腹膜内注射抗体。
图17A-17B是概括来自如下实验的结果的图：在带有HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型的对免疫无能的小鼠(ICR-SCID)中表现出以2mg/kg进行给药的抗GDF15抗体01G06(■)的抗恶病质活性。与鼠IgG(●)相比，使用抗体01G06的处理使体重损失逆转(图17A)；并且与阴性对照(鼠IgG)和基线(第1天)相比，诱导器官质量(肝脏、心脏、脾脏、肾脏)增加并且诱导组织质量(性腺和腓肠肌)增加(图17B)。图17A中的箭头指示腹膜内注射抗体。
图18是概括来自如下实验的结果的图：在对免疫无能(CB17SCRFMF)的小鼠中在K-562白血病肿瘤异种移植物模型中测量以10mg/kg进行给药的抗GDF15抗体01G06(■)、03G05(▲)、04F08(X)、06C11(◆)、08G01(○)、14F11(□)和17B11(Δ)以及鼠IgG对照(●)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图19是示出嵌合01G06可变区(指代为Ch01G06嵌合物)；人源化01G06重链可变区(指代为Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L、Sh01G06 IGHV1-69T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1和Hu01G06 IGHV1-69 F2)；嵌合06C11(指代为Ch06C11嵌合物)；人源化06C11重链可变区(指代为HE LM 06C11 IGHV2-70和Hu06C11 IGHV2-5)；嵌合14F11(指代为Ch14F11嵌合物)；以及人源化14F11重链可变区(指代为Sh14F11 IGHV2-5和Sh14F11IGHV2-70)的完整免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列的序列比对。彼此比对每种抗体的氨基酸序列，并且CDR1、CDR2和CDR3用方框标识。未加以方框的序列表示构架(FR)序列。比对定位(空位)是基于卡巴特编号，而不是比对算法如Clustal。对以上这些序列进行编号表示进行卡巴特编号。
图20是示出图19中的每个免疫球蛋白重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3序列的序列比对。
图21是示出嵌合01G06(指代为Ch01G06嵌合物)；人源化01G06轻链可变区(指代为Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、Hu01G06IGKV1-39 F1和Hu01G06 IGKV1-39 F2)；嵌合06C11(指代为Ch06C11嵌合物)；人源化06C11轻链可变区(指代为Sh06C11 IGKV1-16)；嵌合14F11(指代为Ch14F11嵌合物)；以及人源化14F11轻链可变区(指代为Hu14F11 IGKV1-16)的完整免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列的序列比对。彼此比对每种抗体的氨基酸序列，并且CDR1、CDR2和CDR3用方框标识。未加以方框的序列表示构架(FR)序列。比对定位(空位)是基于卡巴特编号，而不是比对算法如Clustal。对以上这些序列进行编号表示进行卡巴特编号。
图22是示出图21中的每个免疫球蛋白轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3序列的序列比对。
图23是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型中测量以2mg/kg进行给药的抗GDF15抗体01G06(■)、Hu01G06-46(▲)和Hu01G06-52(*)以及鼠IgG对照(●)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图24是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型中测量以2mg/kg进行给药的抗GDF15抗体06C11(◆)、Hu06C11-27(□)和Hu06C11-30(▲)以及鼠IgG对照(●)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图25是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型中测量以2mg/kg进行给药的抗GDF15抗体14F11(▲)、Hu14F11-39(□)和Hu14F11-47(◆)以及鼠IgG对照(●)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图26是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型中测量以2mg/kg进行给药的抗GDF15抗体Hu01G06-122(▼)、Hu01G06-127(□)、Hu01G06-135(◇)、Hu01G06-138(■)和Hu01G06-146(*)以及人IgG对照(●)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图27是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在mFc-rhGDF15恶病质模型中测量以2mg/kg进行给药的抗GDF15抗体Hu01G06-122(▼)、Hu01G06-127(□)、Hu01G06-135(◇)、Hu01G06-138(■)和Hu01G06-146(*)以及人IgG对照(●)的恶病质抑制活性。箭头指示腹膜内注射抗体。
图28是概括来自如下实验的结果的图：在ICR-SCID小鼠中在HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型中测量以20mg/kg(□)、2mg/kg(Δ)和0.2mg/kg(▽)进行给药的抗GDF15抗体Hu01G06-127；以20mg/kg(■)、2mg/kg(▲)和0.2mg/kg(▼)进行给药的Hu01G06-135以及以20mg/kg(●)进行给药的人IgG对照的恶病质抑制活性。箭头指示静脉内注射抗体。
图29A-29C是概括来自如下实验的结果的图：在带有HT-1080纤维肉瘤肿瘤异种移植物模型的对免疫无能的小鼠(ICR-SCID)中表现出以10mg/kg进行给药的抗GDF15抗体Hu01G06-127(■)的抗恶病质活性。与类似于存在于不带肿瘤的小鼠中的水平(SHAM(▲)；图29A)的阴性对照(hIgG(●)；图29A)相比，使用抗体Hu01G06-127的处理使体重损失逆转(图29A)；诱导性腺脂肪质量增加(图29B)；并且诱导腓肠肌的肌肉质量增加(图29C)。图29A中的箭头指示腹膜内注射抗体。
详细说明
在此披露的这些抗GDF15抗体是基于某些单克隆抗体的抗原结合位点，这些单克隆抗体是基于结合和中和人GDF15(hGDF15)而选择的。这些抗体含有为hGDF15限定结合位点的免疫球蛋白可变区CDR序列。
凭借这些抗体的中和活性，它们是有用于治疗恶病质和/或肌少症。为了用作治疗剂，这些抗体可以被工程化以最小化或消除向人患者给予时产生的免疫应答。以下更详细地讨论了本发明的不同特征和方面。
如在此所使用，“恶病质”意指与基础性疾病相关联并且特征在于肌肉质量不自主损失的代谢综合征。恶病质常常伴随有不自主重量损失、脂肪质量损失、厌食、炎症、胰岛素抗性、疲劳、虚弱、显著的食欲不振和/或肌肉蛋白分解增加。恶病质与饥饿、年龄相关的肌肉质量损失、吸收不良以及甲状腺功能亢进不同。与恶病质相关联的基础性疾病包括癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。
如在此所使用，“肌少症”被理解成主要特征在于骨骼肌质量和肌肉强度损失的病状。肌少症通常与衰老相关联。参见，茹艾格(Ruegg)和格拉斯(Glass)(2011)药理学与毒理学年评(ANNUAL REV.PHARMACOL.TOXICOL.)51:373-395。在一种方法中，如果受试者的四肢骨骼肌肉质量除以该受试者的高度(以米计)的值在年轻人正常平均值以下大于2个标准偏差，可以在受试者中鉴定出肌少症。(托马斯(2007)同上；还参见鲍姆加特纳(Baumgartner)等人(1999)衰老与发育机制杂志(MECH.AGEING DEV.)147:755-763)。
如在此所使用，除非另外指出，否则“抗体”意指完整的抗体(例如，完整的单克隆抗体)或抗体的抗原结合片段，包括修饰或工程化、或作为人抗体的完整抗体或抗原结合片段。修饰或工程化的抗体的实例是嵌合抗体、人源化抗体和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。抗原结合片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、单链抗体(例如，scFv)、微型抗体(minibody)以及双抗体。
I.结合GDF15的抗体
在此披露的这些抗体包含：(a)一个包括结构CDRH1-CDRH2-CDRH3的免疫球蛋白重链可变区和(b)一个包括结构CDRL1-CDRL2-CDRL3的免疫球蛋白轻链可变区，其中该重链可变区和该轻链可变区在一起限定用于结合hGDF15蛋白的单一结合位点。
在一些实施例中，该抗体包含：(a)一个包括结构CDRH1-CDRH2-CDRH3的免疫球蛋白重链可变区和(b)一个免疫球蛋白轻链可变区，其中该重链可变区和该轻链可变区在一起限定用于结合hGDF15的单一结合位点。CDRH1包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:1(01G06、08G01、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69LK64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQID NO:2(03G05)、SEQ ID NO:3(04F08)、SEQ ID NO:4(06C11、Ch06C11嵌合物、HE LM 06C11IGHV2-70、Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:5(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)以及SEQ ID NO:6(17B11)；CDRH2包括选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:7(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-69 T30SI69L)、SEQ ID NO:8(03G05)、SEQ IDNO:9(04F08、06C11、Ch06C11嵌合物、Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:10(08G01)、SEQ IDNO:11(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)、SEQ ID NO:12(17B11)、SEQ ID NO:13(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69LK64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:236(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQID NO:237(Hu01G06 IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:238(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ ID NO:239(Hu01G06 IGHV1-69 F2)以及SEQ ID NO:14(HE LM 06C11 IGHV2-70)；并且CDRH3包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:15(01G06、08G01、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-18 M69LK64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L、Sh01G06IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:16(03G05)、SEQ ID NO:17(04F08)、SEQID NO:18(06C11、Ch06C11嵌合物、HE LM 06C11 IGHV2-70、Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:19(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)以及SEQ ID NO:20(17B11)。贯穿本说明书，一个具体SEQ ID NO.后跟的括号里是作为该序列起源的抗体。例如，“SEQ ID NO:2(03G05)”意指来自抗体03G05的SEQ ID NO:2。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:7(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-69 T30SI69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06IGHV1-69 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:2(03G05)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:8(03G05)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:16(03G05)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:3(04F08)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:9(04F08)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:17(04F08)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:4(06C11、Ch06C11嵌合物、Hu06C11 IGHV2-5)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:9(06C11、Ch06C11嵌合物、Hu06C11IGHV2-5)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:18(06C11、Ch06C11嵌合物、Hu06C11 IGHV2-5)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(08G01)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:10(08G01)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(08G01)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:5(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:11(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:19(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:6(17B11)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:12(17B11)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:20(17B11)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:13(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69LK64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:236(Hu01G06 IGHV1-18 F1)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:237(Hu01G06 IGHV1-18 F2)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:238(Hu01G06 IGHV1-69 F1)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:1(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:239(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含SEQ ID NO:4(HE LM 06C11 IGHV2-70)的氨基酸序列；一个CDRH2，该CDRH2包含SEQ ID NO:14(HE LM 06C11 IGHV2-70)的氨基酸序列；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:18(HE LM 06C11 IGHV2-70)的氨基酸序列。
优选地，该CDRH1、CDRH2和CDRH3序列被插入完全人或人源化的免疫球蛋白FR序列之间。
在一些实施例中，该抗体包含：(a)一个包括结构CDRL1-CDRL2-CDRL3的免疫球蛋白轻链可变区和(b)一个免疫球蛋白重链可变区，其中该免疫球蛋白轻链可变区和该免疫球蛋白重链可变区在一起限定用于结合hGDF15的单一结合位点。CDRL1包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:21(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:22(03G05)、SEQ ID NO:23(04F08、06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16、14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:24(08G01)以及SEQ ID NO:25(17B11)；CDRL2包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ IDNO:26(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06IGKV1-39 V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:27(03G05)、SEQ ID NO:28(04F08、06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:29(08G01)、SEQ ID NO:30(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16) 以及SEQ ID NO:31(17B11)；并且CDRL3包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:32(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、08G01、Hu01G06 IGKV1-39 F1)、SEQ ID NO:244(Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:33(03G05)、SEQ ID NO:34(04F08)、SEQ ID NO:35(06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:36(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)以及SEQ ID NO:37(17B11)。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:32(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:244(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:22(03G05)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:27(03G05)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:33(03G05)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:23(04F08)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:28(04F08)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:34(04F08)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:23(06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:28(06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11IGKV1-16)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:35(06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:24(08G01)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:29(08G01)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:32(08G01)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:23(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:30(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11IGKV1-16)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:36(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:25(17B11)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:31(17B11)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:37(17B11)的氨基酸序列。
优选地，该CDRL1、CDRL2和CDRL3序列被插入完全人或人源化的免疫球蛋白FR序列之间。
在一些实施例中，该抗体包含：(a)一个包括结构CDRH1-CDRH2-CDRH3的免疫球蛋白重链可变区和(b)一个包括结构CDRL1-CDRL2-CDRL3的免疫球蛋白轻链可变区，其中该重链可变区和该轻链可变区在一起限定用于结合hGDF15的单一结合位点。该CDRH1是选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:1(01G06、08G01、Ch01G06嵌合物、Hu01G06IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64QG44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L、Sh01G06 IGHV1-69T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18 F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:2(03G05)、SEQ ID NO:3(04F08)、SEQ ID NO:4(06C11、Ch06C11嵌合物、HE LM 06C11 IGHV2-70、Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:5(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)以及SEQ ID NO:6(17B11)；该CDRH2是选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:7(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06 IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)、SEQ ID NO:8(03G05)、SEQ ID NO:9(04F08、06C11、Ch06C11嵌合物、Hu06C11 IGHV2-5)、SEQID NO:10(08G01)、SEQ ID NO:11(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11IGHV2-70)、SEQ ID NO:12(17B11)、SEQ ID NO:13(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:236(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQ ID NO:237(Hu01G06 IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:238(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ ID NO:239(Hu01G06 IGHV1-69 F2)以及SEQ ID NO:14(HELM 06C11 IGHV2-70)；并且该CDRH3是选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ IDNO:15(01G06、08G01、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGHV1-18、Hu01G06 IGHV1-69、Sh01G06IGHV1-18 M69L、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S、Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q、Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L、Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L、Hu01G06 IGHV1-18F1、Hu01G06 IGHV1-18 F2、Hu01G06 IGHV1-69 F1、Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:16(03G05)、SEQ ID NO:17(04F08)、SEQ ID NO:18(06C11、Ch06C11嵌合物、HE LM 06C11IGHV2-70、Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:19(14F11、Ch14F11嵌合物、Sh14F11 IGHV2-5、Sh14F11 IGHV2-70)以及SEQ ID NO:20(17B11)。该CDRL1是选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:21(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:22(03G05)、SEQ ID NO:23(04F08、06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16、14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:24(08G01)以及SEQ ID NO:25(17B11)；该CDRL2是选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:26(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39V48I、Hu01G06 IGKV1-39 F1、Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:27(03G05)、SEQ ID NO:28(04F08、06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:29(08G01)、SEQ ID NO:30(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)以及SEQ ID NO:31(17B11)；并且该CDRL3是选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:32(01G06、Ch01G06嵌合物、Hu01G06 IGKV1-39、Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I、Hu01G06 IGKV1-39 V48I、08G01、Hu01G06 IGKV1-39 F1)、SEQ ID NO:244(Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:33(03G05)、SEQ ID NO:34(04F08)、SEQ ID NO:35(06C11、Ch06C11嵌合物、Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ IDNO:36(14F11、Ch14F11嵌合物、Hu14F11 IGKV1-16)以及SEQ ID NO:37(17B11)。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:38(Hu01G06 IGHV1-18 F1)组成；一个CDRH2，该CDRH2包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:236和SEQ ID NO:240(Hu01G06 IGHV1-18 F1)组成；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Hu01G06 IGHV1-18 F1)的氨基酸序列；该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:32(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:38(Hu01G06 IGHV1-18 F2)组成；一个CDRH2，该CDRH2包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:237和SEQ ID NO:241(Hu01G06 IGHV1-18 F2)组成；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Hu01G06 IGHV1-18 F2)的氨基酸序列；该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:244(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:234(Hu01G06 IGHV1-69 F1)组成；一个CDRH2，该CDRH2包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:238和SEQ ID NO:241(Hu01G06 IGHV1-69 F1)组成；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Hu01G06 IGHV1-69 F1)的氨基酸序列；该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(Hu01G06 IGKV1-39F1)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:32(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:234(Hu01G06 IGHV1-69 F2)组成；一个CDRH2，该CDRH2包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:239和SEQ ID NO:240(Hu01G06 IGHV1-69 F2)组成；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(Hu01G06 IGKV1-39F1)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:32(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:234(Hu01G06 IGHV1-69 F2)组成；一个CDRH2，该CDRH2包含选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:239和SEQ ID NO:240(Hu01G06 IGHV1-69 F2)组成；以及一个CDRH3，该CDRH3包含SEQ ID NO:15(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1包含SEQ ID NO:21(Hu01G06 IGKV1-39F2)的氨基酸序列；一个CDRL2，该CDRL2包含SEQ ID NO:26(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列；以及一个CDRL3，该CDRL3包含SEQ ID NO:244(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在此披露的这些抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区。在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:40(01G06、Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:42(03G05)、SEQ ID NO:44(04F08)、SEQ ID NO:46(06C11、Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:48(08G01)、SEQ ID NO:50(14F11、Ch14F11嵌合物)、SEQ IDNO:52(17B11)、SEQ ID NO:54(Hu01G06 IGHV1-18)、SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)、SEQ ID NO:58(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)、SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64QG44S)、SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)、SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69T30S I69L)、SEQ ID NO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:246(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQ ID NO:248(Hu01G06 IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:250(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ ID NO:252(Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:68(HE LM06C11 IGHV2-70)、SEQ ID NO:70(Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:72(Sh14F11 IGHV2-5)以及SEQ ID NO:74(Sh14F11 IGHV2-70)。
在其他实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区和一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:76(01G06、Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:78(03G05)、SEQ ID NO:80(04F08)、SEQ ID NO:82(06C11、Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:84(08G01)、SEQ ID NO:86(14F11、Ch14F11嵌合物)、SEQ IDNO:88(17B11)、SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)、SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39S43A V48I或Hu01G06 IGKV1-39 F1)、SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)、SEQ IDNO:96(Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:254(Hu01G06 IGKV1-39 F2)以及SEQ ID NO:98(Hu14F11 IGKV1-16)。
在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:40(01G06、Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:42(03G05)、SEQ ID NO:44(04F08)、SEQ ID NO:46(06C11、Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:48(08G01)、SEQ ID NO:50(14F11、Ch14F11嵌合物)、SEQ IDNO:52(17B11)、SEQ ID NO:54(Hu01G06 IGHV1-18)、SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)、SEQ ID NO:58(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)、SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64QG44S)、SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)、SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69T30S I69L)、SEQ ID NO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:246(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQ ID NO:248(Hu01G06 IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:250(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ ID NO:252(Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:68(HE LM06C11 IGHV2-70)、SEQ ID NO:70(Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:72(Sh14F11 IGHV2-5)以及SEQ ID NO:74(Sh14F11 IGHV2-70)，该免疫球蛋白轻链可变区选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:76(01G06、Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:78(03G05)、SEQ ID NO:80(04F08)、SEQ ID NO:82(06C11、Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:84(08G01)、SEQ ID NO:86(14F11、Ch14F11嵌合物)、SEQ ID NO:88(17B11)、SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)、SEQID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I或Hu01G06 IGKV1-39 F1)、SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)、SEQ ID NO:96(Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:254(Hu01G06IGKV1-39 F2)以及SEQ ID NO:98(Hu14F11 IGKV1-16)。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:40(01G06、Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(01G06、Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:42(03G05)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:78(03G05)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:44(04F08)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:80(04F08)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:46(06C11)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:82(06C11)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:48(08G01)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:84(08G01)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:50(14F11)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:86(14F11)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:52(17B11)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:88(17B11)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:54(Hu01G06 IGHV1-18)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:58(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:40(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:54(Hu01G06 IGHV1-18)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:58(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:40(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:54(Hu01G06 IGHV1-18)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:58(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43AV48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43AV48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:40(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:54(Hu01G06 IGHV1-18)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:58(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:246(Hu01G06 IGHV1-18 F1)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:248(Hu01G06 IGHV1-18 F2)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:254(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:250(Hu01G06 IGHV1-69 F1)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:252(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:252(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:254(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:68(HE LM 06C11 IGHV2-70)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:82(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:70(Hu06C11 IGHV2-5) 的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:82(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:46(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:96(Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:68(HE LM 06C11 IGHV2-70)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:96(Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:70(Hu06C11 IGHV2-5)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:96(Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:72(Sh14F11 IGHV2-5)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:86(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:74(Sh14F11 IGHV2-70)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:86(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:50(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:98(Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:72(Sh14F11 IGHV2-5)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:98(Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:74(Sh14F11 IGHV2-70)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:98(Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:46(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:80(04F08)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:50(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:80(04F08)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:44(04F08)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:82(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:50(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:82(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:44(04F08)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:86(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:46(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:86(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:48(08G01)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:76(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:40(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:84(08G01)的氨基酸序列。
在某些实施例中，在此披露的这些抗体包含一个免疫球蛋白重链和一个免疫球蛋白轻链。在一些实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白重链和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白重链选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:100(01G06)、SEQ ID NO:104(03G05)、SEQ ID NO:108(04F08)、SEQ ID NO:112(06C11)、SEQ ID NO:116(08G01)、SEQ IDNO:120(14F11)、SEQ ID NO:124(17B11)、SEQ ID NO:176(Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:178(Hu01G06 IGHV1-18)、SEQ ID NO:180(Hu01G06 IGHV1-69)、SEQ ID NO:182(Sh01G06IGHV1-18 M69L)、SEQ ID NO:184(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)、SEQ ID NO:186(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)、SEQ ID NO:188(Sh01G06 IGHV1-69T30S I69L)、SEQ IDNO:190(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:256(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQ ID NO:258(Hu01G06 IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:260(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ IDNO:262(Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:192(Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:194(HE LM06C11 IGHV2-70)、SEQ ID NO:196(Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:198(Ch14F11嵌合物)、SEQ ID NO:200(Sh14F11 IGHV2-5)以及SEQ ID NO:202(Sh14F11 IGHV2-70)。
在其他实施例中，该抗体包含一个免疫球蛋白轻链和一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白轻链选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:102(01G06)、SEQ ID NO:106(03G05)、SEQ ID NO:110(04F08)、SEQ ID NO:114(06C11)、SEQ ID NO:118(08G01)、SEQ IDNO:122(14F11)、SEQ ID NO:126(17B11)、SEQ ID NO:204(Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:206(Hu01G06 IGKV1-39)、SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I或Hu01G06 IGKV1-39F1)、SEQ ID NO:210(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)、SEQ ID NO:264(Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:212(Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:214(Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:216(Ch14F11嵌合物)以及SEQ ID NO:218(Hu14F11 IGKV1-16)。
在一些实施例中，该抗体包含(i)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:100(01G06)、SEQ ID NO:104(03G05)、SEQ ID NO:108(04F08)、SEQ ID NO:112(06C11)、SEQ ID NO:116(08G01)、SEQ ID NO:120(14F11)、SEQ IDNO:124(17B11)、SEQ ID NO:176(Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:178(Hu01G06 IGHV1-18)、SEQ ID NO:180(Hu01G06 IGHV1-69)、SEQ ID NO:182(Sh01G06 IGHV1-18 M69L)、SEQ IDNO:184(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)、SEQ ID NO:186(Sh01G06 IGHV1-18 M69LK64Q)、SEQ ID NO:188(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)、SEQ ID NO:190(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:256(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQ ID NO:258(Hu01G06IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:260(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ ID NO:262(Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:192(Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:194(HE LM 06C11 IGHV2-70)、SEQID NO:196(Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:198(Ch14F11嵌合物)、SEQ ID NO:200(Sh14F11IGHV2-5)以及SEQ ID NO:202(Sh14F11 IGHV2-70)，和(ii)一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:102(01G06)、SEQ ID NO:106(03G05)、SEQ ID NO:110(04F08)、SEQ ID NO:114(06C11)、SEQ ID NO:118(08G01)、SEQ IDNO:122(14F11)、SEQ ID NO:126(17B11)、SEQ ID NO:204(Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:206(Hu01G06 IGKV1-39)、SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I或Hu01G06 IGKV1-39F1)、SEQ ID NO:210(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)、SEQ ID NO:264(Hu01G06 IGKV1-39 F2)、SEQ ID NO:212(Ch06C11嵌合物)、SEQ ID NO:214(Sh06C11 IGKV1-16)、SEQ ID NO:216(Ch14F11嵌合物)以及SEQ ID NO:218(Hu14F11 IGKV1-16)。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:176(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:204(Ch01G06嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:192(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:212(Ch06C11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:198(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:216(Ch14F11嵌合物)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:178(Hu01G06 IGHV1-18)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:206(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:180(Hu01G06 IGHV1-69)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:206(Hu01G06 IGKV1-39)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:184(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:210(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:188(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:210(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:184(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:188(Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:256(Hu01G06 IGHV1-18 F1)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:258(Hu01G06 IGHV1-18 F2)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:264(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:260(Hu01G06 IGHV1-69 F1)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:262(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208(Hu01G06 IGKV1-39 F1)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:262(Hu01G06 IGHV1-69 F2)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:264(Hu01G06 IGKV1-39 F2)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:194(HE LM 06C11 IGHV2-70)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:214(Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:196(Hu06C11 IGHV2-5)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:214(Sh06C11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:200(Sh14F11 IGHV2-5)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:218(Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在一些实施例中，该抗体包含：一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQID NO:202(Sh14F11 IGHV2-70)的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:218(Hu14F11 IGKV1-16)的氨基酸序列。
在某些实施例中，结合hGDF15的分离的抗体包含一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含与以下序列的整个可变区或FR序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列：SEQ ID NO:40(01G06、Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:42(03G05)、SEQ ID NO:44(04F08)、SEQ ID NO:46(06C11、Ch06C11嵌合物)、SEQID NO:48(08G01)、SEQ ID NO:50(14F11、Ch14F11嵌合物)、SEQ ID NO:52(17B11)、SEQ IDNO:54(Hu01G06 IGHV1-18)、SEQ ID NO:56(Hu01G06 IGHV1-69)、SEQ ID NO:58(Sh01G06IGHV1-18 M69L)、SEQ ID NO:60(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S)、SEQ ID NO:62(Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q)、SEQ ID NO:64(Sh01G06 IGHV1-69T30S I69L)、SEQ IDNO:66(Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L)、SEQ ID NO:246(Hu01G06 IGHV1-18 F1)、SEQID NO:248(Hu01G06 IGHV1-18 F2)、SEQ ID NO:250(Hu01G06 IGHV1-69 F1)、SEQ ID NO:252(Hu01G06 IGHV1-69 F2)、SEQ ID NO:68(HE LM 06C11 IGHV2-70)、SEQ ID NO:70(Hu06C11 IGHV2-5)、SEQ ID NO:72(Sh14F11 IGHV2-5)以及SEQ ID NO:74(Sh14F11IGHV2-70)。
在某些实施例中，结合hGDF15的分离的抗体包含一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含与以下序列的整个可变区或FR序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列：SEQ ID NO:76(01G06、Ch01G06嵌合物)、SEQ ID NO:78(03G05)、SEQ ID NO:80(04F08)、SEQ ID NO:82(06C11、Ch06C11嵌合物)、SEQID NO:84(08G01)、SEQ ID NO:86(14F11、Ch14F11嵌合物)、SEQ ID NO:88(17B11)、SEQ IDNO:90(Hu01G06 IGKV1-39)、SEQ ID NO:92(Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I或Hu01G06IGKV1-39 F1)、SEQ ID NO:94(Hu01G06 IGKV1-39 V48I)、SEQ ID NO:254(Hu01G06 IGKV1-39F2)、SEQ ID NO:96(Sh06C11 IGKV1-16)以及SEQ ID NO:98(Hu14F11 IGKV1-16)。
可以用本领域技术人员技能范围内的不同方式来确定序列一致性，例如，使用公开可获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。使用程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx所采用的算法而进行的BLAST(基本局部比对搜索工具)分析(卡林(Karlin)等人，(1990)美国科学院院刊(PROC.NATL.ACAD.SCI.USA)87:2264-2268；阿尔丘尔(Altschul)，(1993)分子进化杂志(J.MOL.EVOL.)36:290-300；阿尔丘尔等人，(1997)核酸研究杂志(NUCLEIC ACIDS RES.)25:3389-3402，这些参考文献通过引用结合在此)被定制用于序列相似性搜索。对于搜索序列数据库中的基本问题的讨论，参见阿尔丘尔等人，(1994)，自然遗传学杂志(NATURE GENETICS)6:119-129，该参考文献通过引用全部结合在此。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括为了在被比较的序列的全长上实现最大比对所需要的任何算法。用于直方图、说明、比对、期望(即，用于报告针对数据库序列的匹配的统计显著性阈值)、截断、矩阵以及过滤的搜索参数是处于默认设置的。由blastp、blastx、tblastn和tblastx所使用的默认的打分矩阵是BLOSUM62矩阵(Henikoff(赫尼科夫)等人，(1992)，美国科学院院刊，89:10915-10919，该参考文献通过引用全部结合在此)。可以将4个blastn参数调整如下：Q＝10(空位产生罚分)；R＝10(空位延伸罚分)；wink＝1(查询过程中在每个第wink位上产生字命中(word hit))；并且gapw＝16(设置在其内产生空位比对的窗口宽度)。等效的Blastp参数设置可以是Q＝9；R＝2；wink＝1；并且gapw＝32。还可以使用NCBI(国家生物技术信息中心)BLAST高级选项参数(例如：-G，开放空位的成本[整数]：对于核苷酸默认值＝5/对于蛋白质默认值是11；-E，延伸空位的成本[整数]：对于核苷酸默认值＝2/对于蛋白质默认值是1；-q，核苷酸错配罚分[整数]：默认值＝-3；-r，核苷酸匹配奖分[整数]：默认值＝1；-e，期望值[实数]：默认值＝10；-W，字长[整数]：对于核苷酸默认值＝11/28for megablast/对于蛋白质默认值是3；-y，对于blast延伸的位下降(Dropoff)(X)：对于blastn默认值＝20/对于其他默认值是7；-X，对于空位比对的X下降值(以位计)：对于所有程序默认值＝15，不可适用于blastn；以及-Z，对于空位比对的最终X下降值(以位计)：对于blastn默认值是50，对于其他默认值是25)进行搜索。还可以使用对于成对蛋白质比对的ClustalW(默认参数可以包括，例如，Blosum62矩阵并且空位开放罚分＝10并且空位延伸罚分＝0.1)。在GCG程序包10.0版本中可获得的序列之间的Bestfit比较使用了DNA参数GAP＝50(空位产生罚分)和LEN＝3(空位延伸罚分)。Bestfit蛋白质比较中的等效设置是GAP＝8和LEN＝2。
在前述实施例中的每一个中，在此考虑到，一起结合人GDF15的免疫球蛋白重链可变区序列和/或轻链可变区序列可以在该重链可变区和/或轻链可变区的构架区中含有氨基酸改变(例如，至少1、2、3、4、5或10个氨基酸置换、缺失或添加)。
在一些实施例中，该抗体结合hGDF15，其中KD是约300pM、250pM、200pM、190pM、180pM、170pM、160pM、150pM、140pM、130pM、120pM、110pM、100pM、90pM、80pM、70pM、60pM、50pM、40pM、30pM、20pM或10pM或更低。除非另外说明，否则在实例8、14和15中所描述的条件下通过表面等离子体共振方法或生物层干涉测量法来确定KD值。
在一些实施例中，单克隆抗体在hGDF15(例如，成熟hGDF15或裂解的rhGDF15)上结合由在此披露的一种或多种抗体(例如，抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)结合的相同表位。在一些实施例中，单克隆抗体与在此披露的一种或多种抗体(例如，抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)竞争结合hGDF15。
用于确定抗体是否结合与在此披露的抗GDF15抗体相同的表位、或与在此披露的抗GDF15抗体竞争结合的竞争测定是本领域中已知的。示例性竞争测定包括免疫测定(例如，ELISA测定、RIA测定)、表面等离子体共振分析(例如，使用一种BIAcoreTM仪器)、生物层干涉测量法以及流式细胞术。
典型地，竞争测定涉及使用结合固体表面或在细胞表面上表达的抗原(例如，hGDF15蛋白或其片段)、测试抗GDF15结合抗体和参考抗体(例如，抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)。该参考抗体是标记的并且该测试抗体是未标记的。在测试抗体存在下，通过确定结合固体表面或细胞的标记的参考抗体的量来测量竞争性抑制。通常，存在过量的(例如，1x、5x、10x、20x或100x)测试抗体。通过竞争测定(即，竞争抗体)鉴定的抗体包括结合与参考抗体相同的表位或类似(例如，重叠)的表位的抗体和结合与参考抗体所结合的表位足够接近发生位阻的邻近表位的抗体。
在一个示例性竞争测定中，使用商业上可获得的试剂对参考抗GDF15抗体(例如，抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)进行生物素化。使该生物素化的参考抗体与测试抗体或未标记的参考抗体(自身竞争对照)的一系列稀释物混合，从而产生测试抗体(或未标记的参考抗体)与标记的参考抗体的不同摩尔比(例如，1x、5x、10x、20x或100x)的混合物。将该抗体混合物添加到hGDF15多肽涂覆的ELISA板上。然后洗涤该板，并且作为检测试剂将辣根过氧化物酶(HRP)-链霉抗生物素蛋白添加到该板上。在添加本领域中已知的显色底物(例如，TMB(3,3’,5,5’-四甲基联苯胺)或ABTS(2,2”-连氮基-二-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))之后，检测结合靶抗原的标记的参考抗体的量。使用一种
Figure BDA0000784036400000321
M2分光光度计(美谷分子仪器公司(Molecular Devices))来测量光密度读数(OD单位)。从不具有任何竞争抗体的孔中确定对应于零抑制百分比的OD单位。从不具有任何标记的参考抗体或测试抗体的孔中确定对应于100％抑制的OD单位(即，测定背景)。在每个浓度下由测试抗体(或未标记的参考抗体)得到的标记的参考抗体对GDF15的抑制百分比计算如下：％抑制＝(1-(OD单位-100％抑制)/(0％抑制-100％抑制))*100。本领域技术人员将了解，可以使用本领域中已知的不同检测系统来进行竞争测定。
可以在这两个方向上进行竞争测定以确保该标记的存在不干扰或以另外的方式抑制结合。例如，在第一方向上，该参考抗体是标记的并且该测试抗体是未标记的，并且在第二方向上，该测试抗体是标记的并且该参考抗体是未标记的。
如在竞争结合测定中所测量，如果过量的一种抗体(例如，1x、5x、10x、20x或100x)使另一种抗体的结合抑制例如至少50％、75％、90％、95％或99％，测试抗体与参考抗体竞争特异性结合抗原。
如果在抗原中降低或消除一种抗体的结合的基本上所有的氨基酸突变降低或消除另一种抗体的结合，则两种抗体结合相同表位。如果仅有一个亚组的降低或消除一种抗体的结合的氨基酸突变降低或消除另一种抗体的结合，则两种抗体结合重叠表位。
II.抗体的产生
用于产生抗体的方法如在此披露的那些是本领域中已知的。例如，编码轻链可变区和/或重链可变区的DNA分子可以使用在此提供的序列信息进行化学合成。合成的DNA分子可以连接到其他适当的核苷酸序列(包括，例如恒定区编码序列和表达控制序列)上，以便产生编码所希望的抗体的常规基因表达构建体。所定义的基因构建体的产生是在本领域内的惯常技术之内。可替代地，在此提供的这些序列可以使用合成核酸探针，通过常规杂交技术或聚合酶链式反应(PCR)技术来从杂交瘤中进行克隆，这些合成核酸探针的序列是基于在此提供的序列信息，或有关编码杂交瘤细胞中的鼠抗体的重链和轻链的基因的现有技术序列信息。
编码所希望的抗体的核酸可以合并(连接)到表达载体中，这些表达载体可以通过常规转染或转化技术引入到宿主细胞中。示例性宿主细胞是大肠杆菌(E.coli)细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾293(HEK 293)细胞、海拉(HeLa)细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)以及不另外地产生IgG蛋白的骨髓瘤细胞。经转化的宿主细胞可以在容许这些宿主细胞表达编码这些免疫球蛋白轻链可变区和/或重链可变区的基因的条件下进行生长。
具体的表达和纯化条件将取决于所采用的表达系统而变化。例如，如果一个基因有待在大肠杆菌中表达，则首先通过将该工程化的基因定位于一个适合的细菌启动子(例如，Trp或Tac)和一个原核生物信号序列的下游而将它克隆到一个表达载体中。该表达的分泌性蛋白以折射体或包涵体形式积累，并且可以在通过弗氏压碎器或超声处理破裂细胞之后进行收获。然后将这些折射体溶解，并且通过本领域中已知的方法重新折叠并且裂解这些蛋白。
如果该工程化的基因有待在真核生物宿主细胞(例如，CHO细胞)中表达，则首先将它插入到一个含有适合的真核生物启动子、分泌信号、poly A序列以及终止密码子的表达载体中。任选地，该载体或基因构建体可以含有增强子和内含子。这个表达载体任选地含有编码一个恒定区的所有或部分的序列，从而使一个重链或轻链的全部或一部分能够得以表达。该基因构建体可以使用常规技术引入到真核生物宿主细胞中。这些宿主细胞表达VL或VH片段、VL-VH异二聚体、VH-VL或VL-VH单链多肽、完整的重免疫球蛋白链或轻免疫球蛋白链或其部分，它们中的每一个都可以被附接到具有另一种功能(例如，细胞毒性)的部分上。在一些实施例中，用表达一种多肽的单一载体(single vector)转染宿主细胞，该多肽表达一个重链(例如，一个重链可变区)或一个轻链(例如，一个轻链可变区)的全部或部分。在一些实施例中，用单一载体转染宿主细胞，该单一载体编码(a)包含一个重链可变区的多肽和包含一个轻链可变区的多肽，或(b)一个整个的免疫球蛋白重链和一个整个的免疫球蛋白轻链。在一些实施例中，用多于一个表达载体(例如，一个表达包含一个重链或重链可变区的全部或部分的一种多肽的表达载体和另一个表达包含一个轻链或轻链可变区的全部或部分的一种多肽的表达载体)共转染宿主细胞。
包含一个免疫球蛋白重链可变区或轻链可变区的多肽可以在容许该多肽表达的条件下，通过生长(培养)用编码这样一个可变区的表达载体转染的宿主细胞来产生。表达之后，可以使用本领域中已知的技术例如，亲和标签像谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签或组氨酸标签来收获并且纯化或分离该多肽。
结合hGDF15的单克隆抗体或该抗体的抗原结合片段可以通过生长(培养)用以下各项转染的宿主细胞来产生：(a)编码完整或部分的免疫球蛋白重链的表达载体和编码完整或部分的免疫球蛋白轻链的单独表达载体；或(b)在容许这两个链表达的条件下编码这两个链(例如，完整或部分的重链和轻链)的单一表达载体。可以使用本领域中已知的技术例如，蛋白A(Protein A)、蛋白G(Protein G)、亲和标签像谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签或组氨酸标签来收获并且纯化或分离该完整抗体(或抗原结合片段)。从单一表达载体或从两个单独的表达载体中表达该重链和该轻链是处于本领域技术人员的能力范围之内。
III.抗体修饰
用于降低或消除抗体和抗体片段的抗原性的方法是本领域中已知的。当这些抗体有待向人给予时，这些抗体优选地是“人源化的”以降低或消除人体内的抗原性。优选地，每种人源化抗体具有与其来源的非人源化小鼠抗体相同或基本上相同的抗原亲和力。
在一种人源化方法中，产生了嵌合蛋白，其中小鼠免疫球蛋白恒定区被人免疫球蛋白恒定区替代。参见，例如莫里森(Morrison)等人，1984，美国科学院院刊81:6851-6855；纽伯格(Neuberger)等人，1984，自然杂志(NATURE)312:604-608；美国专利号6,893,625(罗宾逊(Robinson))；5,500,362(罗宾逊)和4,816,567(卡必利(Cabilly))。
在称为CDR移植的一种方法中，将这些轻链可变区和重链可变区的CDR移植到来自另一个物种的构架中。例如，可以将鼠CDR移植到人FR中。在一些实施例中，将抗GDF15抗体的轻链可变区和重链可变区的CDR移植到人FR或共有人FR(consensus human FR)上。为了产生共有人FR，将来自若干人重链或轻链氨基酸序列的FR进行比对以鉴定共有氨基酸序列。CDR移植描述于美国专利号7,022,500(奎因(Queen))；6,982,321(温特(Winter))；6,180,370(奎因)；6,054,297(卡特(Carter))；5,693,762(奎因)；5,859,205(亚岱尔(Adair))；5,693,761(奎因)；5,565,332(霍根布姆(Hoogenboom))；5,585,089(奎因)；5,530,101(奎因)；琼斯(Jones)等人(1986)自然杂志321:522-525；瑞彻曼(Riechmann)等人(1988)自然杂志332:323-327；维赫文(Verhoeyen)等人(1988)科学杂志239:1534-1536；以及温特(1998)欧洲生化学会联合会快报(FEBS LETT)430:92-94中。
在称为“SUPERHUMANIZATIONTM”的一种方法中，人CDR序列是基于这些人CDR与有待人源化的小鼠抗体的那些CDR的结构相似性而从人胚系基因中选择的。参见，例如美国专利号6,881,557(富特(Foote))；和塔恩(Tan)等人，2002，免疫学(J.IMMUNOL.)169:1119-1125。
降低免疫原性的其他方法包括“重塑(reshaping)”、“超嵌合(hyperchimerization)”以及“镶面/表面重修(veneering/resurfacing)”。参见，例如瓦斯瓦米(Vaswami)等人，1998，过敏、哮喘和免疫学年鉴(ANNALS OF ALLERGY,ASTHMA,&IMMUNOL.)81:105；罗古丝卡(Roguska)等人，1996，PROT.ENGINEER 9:895-904；以及美国专利号6,072,035(哈德曼(Hardman))。在该镶面/表面重修方法中，该鼠抗体中的易接近表面的氨基酸残基被人抗体中相同位置上的更通常发现的氨基酸残基替代。这种类型的抗体表面重修描述于例如美国专利号5,639,641(佩德森(Pedersen))中。
用于将小鼠抗体转化成适合人体内的医学用途的形式的另一种方法称为ACTIVMABTM技术(Vaccinex公司，纽约州，罗彻斯特(Vaccinex，Inc.，Rochester，NY))，该技术涉及一种在哺乳动物细胞中表达抗体的基于牛痘病毒的载体。据说要产生IgG重链和轻链的高水平的组合多样性。参见，例如美国专利号6,706,477(扎尔德尔(Zauderer))；6,800,442(扎尔德尔)；以及6,872,518(扎尔德尔)。
用于将小鼠抗体转化成适合在人体内使用的形式的另一种方法是由KaloBios制药公司(KaloBios Pharmaceuticals，Inc.)(加利福尼亚州，帕洛阿尔托((Palo Alto，CA))商业上运作的技术。这种技术涉及使用一个专利性的人“受体”文库来产生用于抗体选择的一个“表位聚焦”文库。
用于将小鼠抗体修饰成适合人体内的医学用途的形式的另一种方法是由XOMA(US)LLC公司(XOMA(US)LLC)商业上运作的HUMAN ENGINEERINGTM技术。参见，例如，PCT公开号WO 93/11794和美国专利号5,766,886(斯图德尼奇卡(Studnicka))；5,770,196(斯图德尼奇卡)；5,821,123(斯图德尼奇卡)以及5,869,619(斯图德尼奇卡)。
任何适合的方法(包括任何以上的方法)可以用来降低或消除抗体的人免疫原性。
另外，可能在小鼠中产生完全人抗体。可以通过在例如朗伯格(Lonberg)等人，自然杂志368:856-859，1994；费什瓦尔德(Fishwild)等人，自然生物技术杂志(NATUREBIOTECHNOLOGY)14:845-851，1996；以及曼德斯(Mendez)等人，自然遗传学杂志15:146-156，1997中引用的技术来从人免疫球蛋白转基因小鼠中制备缺乏任何非人序列的完全人mAb。还可以通过在例如克纳皮克(Knappik)等人，分子生物学杂志(J.MOL.BIOL.)296:57-86，2000和克雷布斯(Krebs)等人，免疫学方法杂志(J.Immunol.Meth.)254:67-842001中引用的技术来从噬菌体展示文库中制备并且优化完全人mAb。
IV.治疗用途
在此披露的这些抗体可以用来治疗各种病症，例如恶病质和/或肌少症。在一些实施例中，在此披露的这些抗体(例如，01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)用来抑制肌肉质量损失，例如与基础性疾病相关联的肌肉质量损失。与恶病质相关联的基础性疾病包括，但不限于癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。在一些实施例中，所披露的抗体使肌肉质量损失抑制至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。
在一些实施例中，肌肉质量损失伴随有脂肪质量损失。在此披露的这些抗体(例如，01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)可以使脂肪质量损失抑制至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。
在其他实施例中，在此披露的这些抗体(例如，01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)用来治疗伴随恶病质和/或肌少症的一个或多个特征，例如不自主体重损失。在一些实施例中，这些抗体使不自主体重损失恢复至少2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％或35％。
在另一个实施例中，在此披露的这些抗体(例如，01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)用来抑制器官质量损失，例如与基础性疾病相关联的器官质量损失。与恶病质相关联的基础性疾病包括，但不限于癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。在一些实施例中，所披露的抗体使器官质量损失抑制至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在一些实施例中，在心脏、肝脏、肾脏和/或脾脏中观察到器官质量损失。在一些实施例中，器官质量损失伴随有肌肉质量损失、脂肪质量损失和/或不自主重量损失。
抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11可以用于疗法中。例如，抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11可以用来治疗恶病质和/或肌少症。在哺乳动物中使用抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11来治疗恶病质和/或肌少症包括向该哺乳动物给予治疗有效量的该抗体。
肌少症、肌肉消耗性病症和显著肌肉重量损失可以在不存在恶病质、食欲下降或体重损失的情况下发生。因此，在某些实施例中，本发明的一种或多种抗GDF抗体(例如，抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11)可以用来治疗遭受或已经诊断具有肌少症、肌肉消耗性病症和/或显著肌肉重量损失的受试者，无论该受试者是否患有或已经诊断具有恶病质或食欲下降。这样一种方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的本发明的一种或多种抗体。
在此披露的Fc-rhGDF15融合蛋白可以用来治疗肥胖症。在一些实施例中，在此披露的hFc-rhGDF15融合蛋白用来抑制重量增加或用来使体重降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％。在哺乳动物中使用一种hFc-hGDF15融合蛋白来治疗肥胖症包括向该哺乳动物给予治疗有效量的该融合蛋白。
如在此所使用，“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”意指在哺乳动物中例如在人体内治疗疾病。这包括：(a)抑制该疾病，即使其发展停止；并且(b)减轻该疾病，即引起疾病状态消退。
通常，活性组分(例如，抗体或融合蛋白)的治疗有效量是在0.1mg/kg至100mg/kg的范围内，例如1mg/kg至100mg/kg，例如1mg/kg至10mg/kg，例如2.0mg/kg至10mg/kg。所给予的量将取决于多个变量，如有待治疗的疾病或指征的类型和程度、患者的总体健康、抗体或融合蛋白的体内效能、药物配制品、抗体或融合蛋白的血清半衰期以及给予途径。可以使初始剂量增加超过上限水平以便快速实现所希望的血液水平或组织水平。可替代地，该初始剂量可以比最佳值更低，并且可以在治疗过程中渐进地增加剂量。可以例如在设计以从0.5mg/kg至20mg/kg进行的常规阶段I剂量逐步提高研究中优化人剂量。给药频率可以取决于多个因素如给予途径、剂量、抗体或融合蛋白的血清半衰期以及被治疗的疾病而变化。示例性的给药频率是每天一次、每周一次和每两周一次。在一些实施例中，给药是每两周一次。优选的给予途径是肠胃外的，例如静脉内输注。配制基于单克隆抗体的药物和基于融合蛋白的药物是处于本领域技术人员的能力范围之内。在一些实施例中，该抗体或融合蛋白是冻干的，并且然后在给予时在缓冲盐水中复原。第二活性剂(例如，抗癌剂或以下讨论的其他试剂)的有效量也将遵循上文讨论的原理并且将被选择以便在患者中引起所希望的治疗益处。
对于治疗用途，抗体优选地与一种药学上可接受的载体组合。如在此所使用，“药学上可接受的载体”意指适合用于与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的获益/风险比相称的缓冲液、载体以及赋形剂。在与这些配制品的其他成分相容的意义上，该一种或多种载体应该是“可接受的”，并且不会对受体有害。药学上可接受的载体包括与药物给予相容的缓冲液、溶剂、分散介质、涂层、等渗剂以及吸收延迟剂等。使用此类介质和试剂用于药物活性的物质是本领域中已知的。
含有如在此披露的那些的抗体或融合蛋白的药物组合物可以按剂量单位形式呈现，并且可以通过任何适合的方法来制备。药物组合物应该被配制成与其预期的给予途径相容。给予途径的实例是静脉内(IV)、皮内、吸入、经皮、局部、经粘膜以及直肠给予。用于单克隆抗体的优选给予途径是IV输注。有用的配制品可以通过制药领域中已知的方法来制备。例如，参见雷明顿的药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第18版，(Mack出版公司(Mack Publishing Company)，1990)。适合用于肠胃外给予的配制品组分包括无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如EDTA；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或葡萄糖。
对于静脉内给予，适合的载体包括生理盐水、抑菌水、克列莫佛(Cremophor)ELTM(BASF，新泽西州派西派尼市(Parsippany，NJ))或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。该载体应该在制造和储存的条件下是稳定的，并且应该抗微生物保存。该载体可以是包含以下物质的一种溶剂或分散介质：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)以及其适合的混合物。
药物配制品优选地是无菌的。灭菌可以例如通过经由无菌滤膜的过滤来完成。在该组合物是冻干的情况下，过滤灭菌可以在冻干和复原之前或之后进行。
除了GDF15(即，MIC-1/PLAB/PDF/NAG-1)途径之外，涉及恶病质的其他细胞因子包括活化素A和IL-6。增加的活化素水平与癌症相关的恶病质和性腺肿瘤相关联。参见，例如马里诺(Marino)等人(2013)细胞因子和生长因子综述(CYTOKINE & GROWTH FACTOR REV.)24:477-484。活化素A是TGF-β家族的成员，并且是活化素类型2受体ActRIIB的配体。参见，例如周(Zhou)等人(2010)细胞杂志(CELL)142:531-543。已经显示IL-6的循环水平与癌症患者中的重量损失相关，以及与存活率降低相关。参见，例如费伦(Fearon)等人(2012)细胞代谢杂志(CELL METABOLISM)16:153-166。
因此，在本发明的某些实施例中，可以与抑制GDF-15活性的本发明的一种抗体组合给予(例如，同时给予、在之前给予或在之后给予)活化素-A或活化素-A受体ActRIIB、IL-6或IL-6受体(IL-6R)的一种或多种抑制剂。活化素A或ActRIIB的示例性抑制剂包括，例如抗活化素-A抗体或其抗原结合片段、抗ActRIIB抗体或其抗原结合片段、活化素-A的小分子抑制剂、ActRIIB的小分子抑制剂以及ActRIIB的‘诱饵’受体，如可溶性ActRIIB受体和该可溶性ActRIIB受体与Fc分子的融合物(ActRIIB-Fc)。参见，例如周等人(2010)，同上。IL-6或IL-6R的示例性抑制剂包括抗IL-6抗体或其抗原结合片段、抗IL-6R抗体或其抗原结合片段、IL-6的小分子抑制剂、IL-6R的小分子抑制剂以及IL-6R的‘诱饵’受体，如可溶性IL-6受体和该可溶性IL-6受体与Fc分子的融合物(IL6R-Fc)。参见，例如榎本(Enomoto)等人(2004)生物化学与生物物理研究通讯(BIOCHEM.AND BIOPHYS.RES.COMM.)323:1096-1102；阿基里斯(Argiles)等人(2011)欧洲药理学杂志(EUR.J.PHARMACOL.)668:S81-S86；图卡(Tuca)等人(2013)血液与肿瘤学杂志(ONCOLOGY/HEMATOLOGY)88:625-636。适合的IL-6或IL-6R的抑制剂可以包括例如托珠单抗(Tocilizumab)(雅美罗
Figure BDA0000784036400000381
(
Figure BDA0000784036400000382
)，霍夫曼-拉-罗氏公司(Hoffmann-LaRoche))(批准用于治疗类风湿关节炎的一种人源化抗IL-6R单克隆抗体)和赛诺菲单抗药(Sarilumab)/REGN88(瑞泽恩公司(Regeneron))(处于临床开发用于治疗类风湿关节炎的一种人源化抗IL6R抗体)以及司美替尼(Selumetinib)/AZD6244(阿斯特捷利康公司(AstraZeneca))(已经显示抑制IL-6产生的一种MEK的变构抑制剂)。普拉多(Prado)等人(2012)英国癌症杂志(BRITISH J.CANCER)106:1583-1586。
TNFα和IL-1是已知涉及介导促炎性反应的细胞因子，这些细胞因子还涉及肌肉减少、厌食和恶病质。增加的TNFα循环水平表现出抑制肌生成。TNFα(又称为“恶液质素”)刺激白细胞介素-1分泌并且涉及诱导恶病质。IL-1是急性期炎性反应的有效触发物，并且已经显示输注IL-1可以导致显著的重量损失和食欲损失。已经显示IL-1在带有鼠结肠-26腺癌的小鼠中促成癌症恶病质开始(斯特莱斯曼(Strassmann)等人(1993)免疫学杂志(J.IMMUNOL.)150:2341)。还参见，马泰斯(Mathys)和比利奥(Billiau)(1997)营养杂志(NUTRITION)13:763-770；方(Fong)等人(1989)美国生理学杂志-调节和综合比较生理(AM.J.PHYSIOL.-REGULATORY,INTEGRATIVE AND COMPARATIVE PHYSIOL.)，256:R659-R665。因此，用于治疗类风湿关节炎的TNFα抑制剂和IL-1抑制剂还可以有用于治疗恶病质。
因此，在本发明的某些实施例中，可以与抑制GDF-15活性的本发明的一种抗体组合给予(例如，同时给予、在之前给予或在之后给予)TNFα或IL-1的一种或多种抑制剂。TNFα或IL-1的适合的抑制剂包括抗TNFα抗体或其抗原结合片段、抗IL-1抗体或其抗原结合片段、TNFα或IL-1的小分子抑制剂以及TNFα或IL-1的‘诱饵’受体，如可溶性TNFα或IL-1受体和该TNFα或IL-1可溶性形式与Fc分子的融合物。适合的TNFα的抑制剂包括，例如依那西普(etanercept)(恩博
Figure BDA0000784036400000391
(
Figure BDA0000784036400000392
)，辉瑞公司(Pfizer)/安进公司(Amgen))、英利昔单抗(infliximab)(类克
Figure BDA0000784036400000393
(
Figure BDA0000784036400000394
)，杨森生物技术公司(Janssen Biotech))、阿达木单抗(adalimumab)(修美乐
Figure BDA0000784036400000395
(
Figure BDA0000784036400000396
)，艾伯维公司(Abbvie))、戈利木单抗(golimumab)(欣普尼
Figure BDA0000784036400000399
(
Figure BDA00007840364000003910
)，强生公司(Johnson and Johnson)/默克公司(Merck))以及聚乙二醇化赛妥珠单抗(certolizumab pegol)(
Figure BDA0000784036400000397
，优时比公司(UCB))。适合的IL-1抑制剂包括，例如靶向IL-1α的
Figure BDA0000784036400000398
抗体(XBiotech公司(XBiotech))、阿那白滞素(anikinra)(
Figure BDA00007840364000003911
，安进公司)、卡那单抗(canakinumab)(伊拉瑞斯
Figure BDA00007840364000003913
(
Figure BDA00007840364000003912
)，诺华公司(Novartis))以及列洛西普(rilonacept)(
Figure BDA00007840364000003914
，瑞泽恩公司)。在某些实施例中，典型地全身性给予用于治疗类风湿关节炎的TNFα抑制剂或IL-1抑制剂可以局部地并直接地向肿瘤部位给予。
如通过在缺乏肌肉生成抑制素的哺乳动物中肌肉质量增加所示，肌肉生成抑制素(又称为GDF-8)是肌肉质量的负调节剂的肽的TGF-β家族成员。肌肉生成抑制素是活化素类型2受体ActRIIB的配体。因此，在本发明的某些实施例中，可以与抑制GDF-15活性的本发明的一种抗体组合给予(例如，同时给予、在之前给予或在之后给予)肌肉生成抑制素或它的受体的一种或多种抑制剂。适合的肌肉生成抑制素或ActRIIB的抑制剂包括抗肌肉生成抑制素抗体或其抗原结合片段、抗ActRIIB抗体或其抗原结合片段、肌肉生成抑制素的小分子抑制剂、ActRIIB的小分子抑制剂以及GDF-8的‘诱饵’受体，如可溶性ActRIIB和该ActRIIB可溶性形式与Fc分子的融合物。参见，例如洛克瑞蒂(Lokireddy)等人(2012)生物化学杂志(BIOCHEM.J.)446(1):23-26。可以适合用于本发明的肌肉生成抑制素包括REGN1033(瑞泽恩公司)；参见鲍尔莱因(Bauerlein)等人(2013)恶病质肌少症肌肉杂志(J.CACHEXIASARCOPENIA MUSCLE)：第7次恶病质会议摘要，神户/大阪(Kobe/Osaka)，日本，2013年12月9-11日，摘要4-06；LY2495655(礼来(Lilly))，由礼来公司(Eli Lilly)临床开发的一种人源化抗肌肉生成抑制素抗体；还参见在clinicaltrials.gov/ct2/NCT01505530万维网上可获得的“在患有胰腺癌的参与者中进行的LY2495655的第2期研究(A PHASE 2STUDY OFLY2495655IN PARTICIPANTS WITH PANCREATIC CANCER)”；NML鉴定剂：NCT01505530；ACE-031(Acceleron制药公司(Acceleron Pharma))以及斯他莫鲁(stamulumab)(辉瑞公司)。
如葛瑞林(Ghrelin)或生长素释放肽模拟物的试剂或其他能够激活GHS受体(GHS-R1a)(又称为生长素释放肽受体)的生长激素促分泌素(GHS)可以在人体内有用于增加食物摄取和体重。参见盖尔利(Guillory)等人(2013)在维生素和激素杂志(VITAMINS ANDHORMONES)第92卷，第3章中所述；以及斯泰因曼(Steinman)和德波尔(DeBoer)(2013)维生素和激素杂志第92卷，第8章。适合的生长素释放肽模拟物包括阿拉莫林(anamorelin)(赫尔森公司(Helsinn)，卢加诺(Lugano)，CH)；参见泰梅尔(Temel)等人(2013)恶病质肌少症肌肉杂志：第7次恶病质会议摘要，神户/大阪，日本，2013年12月9-11日，摘要5-01。可以例如使用描述于PCT公开号WO 2011/117254和WO 2012/113103中的生长激素促分泌素受体葛瑞林竞争测定来鉴定其他适合的GHS分子。
雄激素受体的激动剂(包括小分子和其他选择性雄激素受体调节剂(SARM))可以有用于治疗恶病质和/或肌少症。参见，例如莫勒(Mohler)等人(2009)医药化学杂志(J.MED.CHEM.)52:3597-3617；永田(Nagata)等人(2011)生物有机化学与医药化学通讯(BIOORGANIC AND MED.CHEM.LETTERS)21:1744-1747；以及陈(Chen)等人(2005)分子介入杂志(MOL.INTERV.)5:173-188。理想地，SARM应该在合成代谢靶组织如肌肉和骨中充当完全激动剂，像睾酮一样，但应该在前列腺组织上仅表现出部分或纯粹的雄激素受体拮抗活性。参见，例如博韦(Bovee)等人(2010)类固醇生物化学与分子生物学杂志(J.STEROIDBIOCHEM.& MOL.BIOL.)118:85-92。可以例如通过使用描述于张(Zhang)等人(2006)生物有机化学与医药化学通讯16:5763-5766和张等人(2007)生物有机化学与医药化学通讯17:439-443中的方法和测定来鉴定适合的SARM。适合的SARM包括例如GTx-024(enobosarm，奥司他韦
Figure BDA0000784036400000412
(
Figure BDA0000784036400000411
)，GTx公司)，由GTx公司II期临床开发的一种SARM。还参见，道尔顿(Dalton)等人(2011)恶病质肌少症肌肉杂志(CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE)2:153-161。其他适合的SARM包括2-(2,2,2)-三氟乙基-苯并咪唑(纳格(Ng)等人(2007)生物有机化学与医药化学通讯17:1784-1787)和JNJ-26146900(艾伦(Allan)等人(2007)类固醇生物化学与分子生物学杂志103:76-83)。
已经在恶病质受试者中研究了β-肾上腺素能受体阻断剂或β-阻断剂对体重的影响，并且在患有充血性心力衰竭的患者中这些阻断剂与恶病质部分逆转相关联。参见，例如日尼安维奇(Hryniewicz)等人(2003)心力衰竭杂志(J.CARDIAC FAILURE)9:464-468。已经在第2期临床试验中针对患有癌症恶病质的受试者对β-阻断剂MT-102(PsiOxus治疗有限公司)进行评估。参见，科茨(Coats)等人(2011)恶病质肌少症肌肉杂志2:201-207。
在黑皮质素信号传导中具有遗传缺陷的黑皮质素受体-敲除小鼠表现出与恶病质的表型相反的表型：食欲增加、瘦体重增加以及代谢减少。因此，黑皮质素拮抗已经成为与慢性疾病相关联的恶病质的潜在治疗(德波尔和马克斯(Marks)(2006)内分泌学和代谢趋势杂志(TRENDS IN ENDOCRINOLOGY AND METABOLISM)17:199-204)。因此，在本发明的某些实施例中，可以与抑制GDF-15活性的本发明的一种抗体组合给予(例如，同时给予、在之前给予或在之后给予)黑皮质素肽或黑皮质素受体的一种或多种抑制剂。黑皮质素或黑皮质素受体的适合的抑制剂包括抗黑皮质素肽抗体或其抗原结合片段、抗黑皮质素受体抗体或其抗原结合片段、黑皮质素肽的小分子抑制剂、黑皮质素受体的小分子抑制剂以及黑皮质素受体的‘诱饵’受体，如可溶性黑皮质素受体和可溶性黑皮质素受体与Fc分子的融合物。适合的黑皮质素受体抑制剂包括，例如在癌症相关的恶病质的小鼠模型中表现出预防恶病质相关的症状的黑皮质素受体拮抗剂刺豚鼠相关肽(agouri-related peptide)(AgRP(83-132))(乔帕(Joppa)等人(2007)肽杂志(PEPTIDES)28:636-642)。
尤其是可以引起恶病质并升高GDF-15水平的那些如顺铂(cisplatin)的抗癌剂可以与本发明的一种抗GDF-15抗体组合(例如，同时给予、在之前给予或在之后给予)用于本发明的方法中。许多癌症患者由于放射疗法和/或化学疗法的严酷进程而变得虚弱，这可以限制患者耐受此类疗法的能力，并且因此限制给药方案。某些癌症试剂自身如氟尿嘧啶(fluorouracil)、阿霉素(Adriamycin)、甲氨蝶呤(methotrexate)以及顺铂可以例如通过诱导严重的肠胃并发症而促成恶病质。参见，例如艾优尼(Inui)(2002)临床肿瘤杂志(CANCER J.FOR CLINICIANS)52:72-91。通过其中与本发明的一种抗GDF-15抗体组合给予一种抗癌剂的本发明的这些方法，可能降低恶病质的发病率和/或严重性，并且最终增加这样一种抗癌剂的最大耐受剂量。因此，可以通过降低作为剂量限制性不良作用的恶病质的发病率，并且通过允许给予更高剂量的给定抗癌剂来提高使用可以引起恶病质的抗癌剂进行治疗的功效。
因此，本发明包括药物组合物，这些药物组合物包含与选自下组的一种试剂组合的本发明的抗GDF-15抗体，该组由以下各项组成：活化素-A的抑制剂、ActRIIB的抑制剂、IL-6的抑制剂或IL-6R的抑制剂、生长素释放肽、生长素释放肽模拟物或GHS-R1a激动剂、SARM、TNFα抑制剂、IL-1α抑制剂、肌肉生成抑制素抑制剂、β-阻断剂、黑皮质素肽抑制剂、黑皮质素受体抑制剂以及抗癌剂。本发明还包括在哺乳动物中治疗、预防或最小化恶病质和/或肌少症的方法，这些方法包括向有需要的哺乳动物给予一种药物组合物或多种药物组合物，该一种药物组合物或多种药物组合物包含与有效量的以下物质组合的有效量的本发明的抗GDF-15抗体：活化素-A的抑制剂、ActRIIB的抑制剂、IL-6的抑制剂或IL-6R的抑制剂、生长素释放肽、生长素释放肽模拟物或GHS-R1a激动剂、SARM、TNFα抑制剂、IL-1α抑制剂、肌肉生成抑制素抑制剂、β-阻断剂、黑皮质素肽抑制剂或黑皮质素受体抑制剂。
在另一个实施例中，本发明包括一种抑制与基础性疾病相关联的肌肉质量损失的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予一种药物组合物或多种药物组合物以预防或减少肌肉质量损失，该一种药物组合物或多种药物组合物包含与有效量的以下物质组合的有效量的本发明的抗GDF-15抗体：活化素-A的抑制剂、ActRIIB的抑制剂、IL-6的抑制剂或IL-6R的抑制剂、生长素释放肽、生长素释放肽模拟物或GHS-R1a激动剂、SARM、TNFα抑制剂、IL-1α抑制剂、肌肉生成抑制素抑制剂、β-阻断剂、黑皮质素肽抑制剂或黑皮质素受体抑制剂。该基础性疾病可以是选自下组，该组由以下各项组成：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。另外，在某些实施例中，该肌肉质量损失伴随有脂肪质量损失。
在又另外的实施例中，本发明包括一种在哺乳动物中抑制或减少不自主重量损失的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予一种药物组合物或多种药物组合物，该一种药物组合物或多种药物组合物包含与有效量的以下物质组合的有效量的本发明的抗GDF-15抗体：活化素-A的抑制剂、ActRIIB的抑制剂、IL-6的抑制剂或IL-6R的抑制剂、生长素释放肽、生长素释放肽模拟物或GHS-R1a激动剂、SARM、TNFα抑制剂、IL-1α抑制剂、肌肉生成抑制素抑制剂、β-阻断剂、黑皮质素肽抑制剂或黑皮质素受体抑制剂。
某些抗癌剂如顺铂具有一种或多种不希望的不良作用，该一种或多种不希望的不良作用涉及引起或增加一种或多种综合征如恶病质、肌少症、肌肉消耗、骨消耗或不自主体重损失。因此，在某些实施例中，本发明包括一种在哺乳动物中治疗癌症，同时预防、最小化或降低恶病质、肌少症或肌肉消耗、骨消耗或体重不自主损失的出现、频率或严重性的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予一种药物组合物，该药物组合物包含有效量的与一种或多种抗癌剂组合的本发明的抗GDF-15抗体。在具体实施例中，本发明包括一种在哺乳动物中治疗癌症，同时预防、最小化或降低恶病质、肌少症或肌肉消耗、骨消耗或体重不自主损失的出现、频率或严重性的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予一种药物组合物，该药物组合物包含有效量的与一种或多种已知在哺乳动物中引起或增加恶病质、肌少症、或肌肉消耗、骨消耗或体重不自主损失的出现、频率或严重性的抗癌剂组合的本发明的抗GDF-15抗体。
实例
下列实例仅是说明性的，并且不意图以任何方式限制本发明的范围或内容。
实例1：小鼠异种移植物肿瘤模型中的人GDF15血清水平
在本实例中，测量了带有不同异种移植物肿瘤的小鼠的血清中的hGDF15的量。针对下列肿瘤异种移植物模型中的每一种，从三个小鼠中收集血清：Chago、RPMI7951、PC3、TOV21G、HT-1080、K-562以及LS1034。还从三个初次接受试验的小鼠中收集血清作为对照。通过ELISA(安迪生物科技公司(R&D Systems)，目录号DY957E)来确定人GDF15血清水平。带有诱导恶病质的人异种移植物肿瘤的小鼠具有高于2ng/mL的hGDF15血清水平，而带有不会诱导恶病质的人异种移植物肿瘤的小鼠具有低于1ng/mL的hGDF15血清水平(图2)。初次接受试验的小鼠不具有可检测的hGDF15(对照)。这些结果表明近似2ng/mL GDF15血清水平是在本小鼠模型中诱导恶病质的阈值。当通过ELISA来确定时，在血浆中也观察到类似的hGDF15水平。
实例2：恶病质的不带有肿瘤的小鼠模型
恶病质的现有不带有肿瘤的小鼠模型是基于将成熟rhGDF15注射到小鼠中(约能(Johnen)等人(1997)自然医学(NAT.MED.)13:1333-1340)。成熟rhGDF15对应于hGDF15蛋白的氨基酸197至308。如在费尔利(Fairlie)等人(2000)基因杂志(GENE)254:67-76中所述，可以在酵母毕赤酵母(Pichia pastoris)中产生成熟rhGDF15。裂解的rhGDF15对应于从一种Fc-rhGDF15融合蛋白中释放的hGDF15蛋白的氨基酸197至308。在以下描述的图3-4中，在小鼠中注射之前，通过用因子Xa酶消化mFc-rhGDF15融合蛋白来产生裂解的rhGDF15并且随后纯化。
为了研究裂解的rhGDF15的半衰期，在不同时间点(2小时、5小时、8小时、11小时和23小时)在单一剂量的裂解rhGDF15(1μg/g)之后从一组3个小鼠中收集血浆。通过ELISA(安迪生物科技公司，目录号DY957E)来确定人GDF15血浆水平。如在图3中所示，在注射之后，裂解的rhGDF15快速地从血浆中清除。注射之后11小时，血浆中的裂解的rhGDF15的量低于10ng/mL，并且在23小时内，裂解的rhGDF15几乎完全从血浆中清除。
进一步研究了不带有肿瘤的小鼠中的裂解的rhGDF15的快速清除。将8周龄雌性ICR-SCID小鼠随机分成2组，每组10个小鼠。每8小时对小鼠向肋部进行皮下给药持续3天(总共9次剂量)，伴随下列处理中的一种：PBS(对照)或裂解的rhGDF15以1μg/g。每天测量体重。使用双因素ANOVA进行统计分析。
如在图4中所示，裂解的rhGDF15诱导体重损失。经过3天时间的9次给药之后，体重百分比在第4天下降到88％(p<0.001)，但在最后一次给药之后近似24小时，小鼠开始重量增加。在第6天，实验的最后一天，体重百分比增加到94.8％(p<0.001)。这些结果表明由裂解的rhGDF15诱导的重量损失不会持续很长的时间段。在此描述的使用裂解的rhGDF15观察到的活性类似于在现有小鼠模型中使用成熟rhGDF15观察到的活性(约能等人，同上)。
用于恶病质的现有不带有肿瘤的小鼠模型依赖于每天注射大量的以多次剂量递送的成熟rhGDF15，以便诱导肌肉损失和体重损失(约能等人，同上)。可以看出，如果使用成熟rhGDF15或裂解的rhGDF15，在没有连续给药的情况下小鼠不会持续肌肉重量损失或体重损失很长的时间段。这限制了此类模型的有用性。此外，重复给药要求频繁处理这些小鼠，这会引起可以损害体重损失测量结果可靠性的应激。例如，在图4中所示，用多次剂量的PBS处理的小鼠由于重复给药和处理的应激而表现出体重下降。
实例3：GDF15融合蛋白
鉴于诱导不带有肿瘤的恶病质小鼠模型所要求的大量成熟rhGDF15(或裂解的rhGDF15)和劳动强度(以及这些模型产生的限制)，我们研究了在小鼠中诱导恶病质表型的rhGDF15的替代形式。本实例描述了由GDF15和一种免疫球蛋白Fc片段组成的两种融合蛋白的构建和产生，这两种融合蛋白命名mFc-rhGDF15(融合到成熟人GDF15的氨基末端上的小鼠IgG1 Fc)和rFc-rmGDF15(融合到成熟小鼠GDF15的氨基末端上的兔IgG1 Fc)。使用本领域中已知的方法来设计这些GDF15融合蛋白。使用重叠延伸PCR从片段中构建mFc-rhGDF15DNA序列以便包括(按下列顺序)：5’HindIII限制位点、Kozak共有序列、氨基末端信号序列、小鼠IgG1 Fc、因子Xa裂解位点、多肽联接子(GGGGS)(SEQ ID NO:139)、成熟hGDF15、终止密码子以及3’EcoRI限制位点。将rFc-rmGDF15氨基酸序列转化成密码子优化的DNA序列并且合成以便包括(按下列顺序)：5’HindIII限制位点、Kozak共有序列、氨基末端信号序列、兔IgG1 Fc、多肽联接子(GGGG)(SEQ ID NO:265)、成熟小鼠GDF15、终止密码子以及3’EcoRI限制位点。
使用In-FusionTM PCR克隆(Clontech公司(Clontech)，芒廷维尤(MountainView)，加利福尼亚州(CA))，经由HindIII和EcoRI位点将GDF15融合蛋白亚克隆到哺乳动物表达载体pEE14.4(龙沙公司(Lonza)，巴塞尔(Basel)，瑞士(Switzerland))中。使用GSSystemTM(龙沙生物医药股份有限公司(Lonza Biologics))在CHOK1SV细胞中稳定地表达GDF15融合蛋白，以便产生大量纯化的蛋白质。将每个表达载体线性化并且转染到CHOK1SV细胞中。在甲硫氨酸磺亚胺存在下选择稳定的克隆。由CHOK1SV稳定转染的细胞系产生的分泌性蛋白通过蛋白A和尺寸排阻色谱法来纯化。
以下显示定义小鼠IgG1 Fc-成熟人GDF15融合蛋白(mFc-rhGDF15)的核酸序列和编码蛋白序列。mFc-rhGDF15含有来自氨基酸1-222的小鼠IgG1 Fc、来自氨基酸223-228的因子Xa裂解位点、来自氨基酸229-233的人工联接子序列以及来自氨基酸234-345的成熟hGDF15。
编码小鼠IgG1 Fc-成熟人GDF15融合蛋白(mFc-rhGDF15)的核酸序列(SEQ ID NO:219)
Figure BDA0000784036400000451
Figure BDA0000784036400000461
定义小鼠IgG1 Fc-成熟人GDF15融合蛋白(mFc-rhGDF15)的蛋白质序列(SEQ IDNO:220)
Figure BDA0000784036400000462
以下显示定义兔IgG1 Fc-成熟小鼠GDF15融合蛋白(rFc-rmGDF15)的核酸序列和编码蛋白序列。rFc-rmGDF15含有来自氨基酸1-223的兔IgG1Fc、来自氨基酸224-227的人工联接子序列以及来自氨基酸228-342的成熟小鼠GDF15。
编码兔IgG1 Fc-成熟小鼠GDF15融合蛋白(rFc-rmGDF15)的核酸序列(SEQ ID NO:221)
Figure BDA0000784036400000463
定义兔IgG1 Fc-成熟小鼠GDF15融合蛋白(rFc-rmGDF15)的蛋白质序列(SEQ IDNO:222)
Figure BDA0000784036400000464
Figure BDA0000784036400000471
下列序列表示用于人IgG1 Fc-成熟人GDF15融合蛋白(hFc-rhGDF15)的示例性蛋白质序列。hFc-rhGDF15 Xa由来自氨基酸1-227的人IgG1 Fc、来自氨基酸228-233的因子Xa裂解位点、来自氨基酸234-238的人工联接子序列以及来自氨基酸239-350的成熟hGDF15组成。hFc-rhGDF15由来自氨基酸1-227的人IgG1 Fc、来自氨基酸228-232的人工联接子序列以及来自氨基酸233-344的成熟hGDF15组成。
定义具有Xa裂解位点的人IgG1 Fc-成熟人GDF15融合蛋白(hFc-hGDF15 Xa)的蛋 白质序列(SEQ ID NO:223)
Figure BDA0000784036400000472
定义人IgG1 Fc-成熟人GDF15融合蛋白(hFc-hGDF15)的蛋白质序列(SEQ ID NO:224)
Figure BDA0000784036400000473
实例4：Fc-rhGDF15诱导的恶病质模型
本实例描述了在小鼠中产生Fc-GDF15-诱导的恶病质模型。将对免疫有能力(Balb/C)和对免疫无能(CB17-Scid)小鼠随机分成3组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：PBS(对照)、以1μg/g的mFc-rhGDF15(如在实例3中所述)或rFc-rmGDF15(如在实例3中所述)。进入肋部对8周龄雌性小鼠进行皮下给药持续3天(Balb/C)或一次(CB17-Scid)。每天测量体重。
如在图5A和图5B中所示，在对免疫有能力的小鼠(图5A)和对免疫无能的小鼠(图5B)中mFc-rhGDF15或rFc-rmGDF15的给予诱导了体重损失。这些结果表明实现了活性rhGDF15的稳态水平，因为无论剂量(一次剂量与三次剂量)，mFc-rhGDF15和rFc-rmGDF15两者都在测量的时间过程(7天)中诱导持续的重量损失。
在另外的对免疫有能力(C57BL6，瑞士韦伯斯特(Swiss Webster))和对免疫无能(ICR-SCID)的小鼠品系中，进一步测试融合蛋白mFc-rhGDF15和rFc-rmGDF15。在每个测试的小鼠品系中，如通过体重损失所测量，mFc-rhGDF15或rFc-rmGDF15的给予诱导了恶病质。无论是否皮下或腹膜内给药mFc-rhGDF15，都获得类似结果。
还研究了是否无论用融合蛋白处理的小鼠年龄，mFc-rhGDF15都诱导重量损失。将具有不同年龄(7周龄、13周龄和25周龄)的瑞士韦伯斯特(对免疫有能力)雌性小鼠分成2组，每组10个小鼠，并且使用每天三次剂量的mFc-rhGDF15或PBS(0.8μg/g，7周龄小鼠；0.6μg/g，13周龄小鼠；或0.4μg/g，25周龄小鼠)进行处理。在所有三个小鼠年龄群体中都观察到mFc-rhGDF15诱导的重量损失。在每个年龄群体中，在用mFc-rhGDF15处理之后小鼠损失其体重的近似10％，该结果是在处理之后10天测量的。
在另一个实验中，通过测量体重损失、肌肉质量损失、脂肪质量损失以及指示肌肉降解的两种分子标志物(即，mMuRF1和mAtrogin)的表达水平来研究mFc-rhGDF15诱导恶病质。MuRF1和Atrogin是在多个肌肉萎缩和恶病质模型中被上调的E3-泛素连接酶(格拉斯D.(Glass,D.)(2010)临床营养和代谢护理的最新观点(CURR.OPIN.CLIN.NUTR.MET.CARE)13:225-229)。
将8周龄雌性ICR-SCID小鼠随机分成10组，每组10个小鼠。用PBS(对照)在肋部对5组(每组10个小鼠)进行皮下给药，并且在第1天以1.6μg/g用mFc-rhGDF15在肋部对5组(每组10个小鼠)进行皮下给药。每天测量体重，持续高达17天。在不同时间点下(在给药之后0天、1天、3天、7天和16天)处死一个对照组和一个处理组。在指定的处死时间下，从每组小鼠中手术去除性腺脂肪和腓肠肌，并且称重。在液氮中急速冷冻组织，并且从腓肠肌样品中分离RNA。通过对应于在给药之后1天、7天和16天后收集的组的样品中的qRT-PCR来测量mMuRF1和mAtrogin mRNA的水平。使用双因素ANOVA进行统计分析。
如在图6A中所示，在ICR-SCID小鼠中mFc-rhGDF15诱导体重损失。当在一次剂量的mFc-rhGDF15之后16天后测量时，体重百分比是79.4％(p<0.001)。mFc-rhGDF15还诱导脂肪(脂肪组织)损失，如通过性腺脂肪损失所观察(图6B；在第7天p<0.01并且在第16天p<0.001)和肌肉损失，如通过腓肠肌损失所观察(图6C；在第1天和第3天p<0.05，并且在第7天和第16天p<0.0001)。mFc-rhGDF15的给予还使与肌肉降解和恶病质相关联的两种酶mMuRF1(图6D；在第1天、第7天和第16天p<0.001)和mAtrogin(图6E；在第1天和第7天p<0.001，并且在第16天p<0.01)的基因表达提高。
这些结果表明在小鼠中mFc-rhGDF15诱导恶病质。
实例5：mFc-rhGDF15诱导恶病质同时在血清中具有更长的GDF15半衰期
在本实例中，在给予mFc-rhGDF15之后测量血清hGDF15水平以确定rhGDF15在本模型中的半衰期。将8周龄雌性Balb/C裸鼠随机分成2组，每组12个小鼠。每12小时对小鼠在肋部进行皮下给药持续3天(总共6次剂量)，伴随下列处理中的一种：PBS(对照)或mFc-rhGDF15以1.33μg/g。每天测量体重。如在图7中所示，在最后一次注射之后，mFc-rhGDF15诱导了持续的体重损失至少一周。
在本实验中，在最后一次剂量的mFc-rhGDF15之后0.2天、5天和8天测量hGDF15血清水平。在指定时间下处死小鼠，并且收集血清。通过ELISA(安迪生物科技公司，目录号DY957E)来确定人GDF15血清水平。
表1提供了研究中的每个小鼠的血清水平(μg/mL)。
表1
Figure BDA0000784036400000491
表1中的结果显示在最后一次剂量的mFc-rhGDF15之后至少8天，在血清中存在持续强的hGDF15水平。
还通过蛋白质印迹(还原凝胶；用对抗hGDF15的抗体进行印迹(安迪生物科技公司，目录号AF957))对来自最后一次给药之后第0.2天和第5天的血清样品进行分析并且通过里科尔(Licor)来定量，以便确定mFc-rhGDF15在血清中的稳定性。出乎意料地，观察到两条带。上面那条带是近似40kDa，并且可认为是mFc-rhGDF15。下面那条带是近似15kDa，并且可认为是裂解的成熟rhGDF15。这表明在血清中rhGDF15从mFc-rhGDF15中释放出来。两条带的定量显示存在于血清中的约90％的rhGDF15是呈mFc-rhGDF15形式，其中在血清中约10％的总rhGDF15呈裂解的成熟形式存在(图8)。定量显示在最后一次给药之后5天收集的血清样品中mFc-rhGDF15稍有减少，但出人意料地，在血清中保持恒定水平的成熟rhGDF15。成熟rhGDF15与mFc-rhGDF15的比率随时间推移稍有增加，因为血清中的mFc-rhGDF15减少。当将rFc-rmGDF15注射到小鼠中时，观察到类似结果。
呈现于图7-8和表1中的结果是出乎意料的。预期是到第0.2天非常少(如果有的话)的成熟rhGDF15将从mFc-rhGDF15中裂解(释放)出来，并且任何裂解的rhGDF15将快速地从血清中清除，如先前所观察。例如，在图4中，要求以每次剂量1μg/g的一系列9次剂量(总共9μg/g)的裂解的rhGDF15在小鼠中诱导显著的体重损失。当给药停止时，这些小鼠几乎立即重量增加。相比之下，以0.1μg/g的单一剂量的mFc-rhGDF15足以诱导显著的体重损失持续至少8天(图9A；在第1天用0.1μg/g对10个ICR-SCID小鼠进行腹膜内给药)。表1中的数据显示当呈mFc-rhGDF15融合蛋白形式给予rhGDF15时，rhGDF15血清水平可稳定持续至少8天。
为了确定引起持续体重损失的活性来源，我们研究了所观察到的rhGDF15活性是否可归因于mFc-rhGDF15融合蛋白、释放的成熟rhGDF15形式或这两者。如在图9A中所示，低剂量的mFc-rhGDF15(0.1μg/g)引起体重损失继续持续至少8天。更低剂量的mFc-rhGDF15(0.01μg/g)也诱导体重损失，但作用不能持续给药之后长于3天。
在本实验中，在给药之后5天从三个小鼠中收集血浆，这三个小鼠各自用0.1μg/g或0.01μg/g进行给药。如上所述，通过ELISA测量总rhGDF15。用0.1μg/g进行给药的小鼠中的总rhGDF15血浆水平是高于70ng/mL，与这些小鼠具有显著重量损失的观察结果一致(图9B)。用0.01μg/g进行给药的小鼠中的总rhGDF15血浆水平是近似3.3ng/mL，但观察到这些小鼠重量增加(图9A和图9B)。如在图2中所述，hGDF15在带有肿瘤的小鼠中诱导恶病质的阈值是近似2ng/mL。因此，如果rhGDF15的这两种形式是有活性的(即，mFc-rhGDF15和释放的成熟rhGDF15)，则这些小鼠应该是重量损失，不是重量增加(即，3.3ng/mL总rhGDF15高于近似2ng/mL hGDF15的阈值)。
为了确定何种形式是活性形式(即，或者mFc-rhGDF15或者释放的成熟rhGDF15)，我们认为在血清中显示近似90％的总rhGDF15的来自图8的数据是呈mFc-rhGDF15形式，并且剩余的10％是释放的成熟形式。基于这种外推法，血浆中的近似3.0ng/mL的rhGDF15是呈mFc-rhGDF15形式(即，90％的3.3ng/mL)。再次，如果mFc-rhGDF15是有活性的，这些小鼠将是重量损失，不是重量增加，因为3.3ng/mL mFc-rhGDF15高于近似2ng/mL hGDF15的阈值。用0.1μg/g mFc-rhGDF15进行给药的小鼠充当内部对照，因为这些小鼠具有持续的体重损失，从而表明这两种形式中的至少一种必须是有活性的。这些小鼠中的70ng/mL总rhGDF15的10％计算结果是7ng/mL释放的成熟rhGDF15。这个量与诱导所观察的体重损失和在图2中观察到的阈值一致。因此，数据表明mFc-rhGDF15不是蛋白质的活性形式，并且仅成熟的rhGDF15是有活性的。这些结果是出乎意料的，因为：(a)没有理由预测Fc融合蛋白(mFc-rhGDF15)将是无活性的；并且(b)没有理由预测Fc融合蛋白将在所观察的速率下释放成熟rhGDF15。
这些结果表明mFc-rhGDF15通过将成熟rhGDF15缓慢释放到血清中来维持恶病质表型。这些结果进一步表明可以通过向小鼠给予mFc-rhGDF15而在不带有肿瘤的小鼠中实现血浆或血清中的成熟rhGDF15的稳态水平。因此，向不带有肿瘤的小鼠给予mFc-rhGDF15是特别有用作为具有稳固持续的肌肉质量损失、脂肪质量损失和体重损失的恶病质小鼠模型(参见图6A-6C)。
实例6：抗GDF15抗体
本实例描述了抗GDF15单克隆抗体的产生。根据多位点重复免疫(RIMMS)方案使用常规方法来进行免疫、融合和初次筛选。用6XHis(SEQ ID NO:266)标记的重组人GDF15(His-rhGDF15)(安迪生物科技公司，明尼阿波利斯(Minneapolis)，MN)对5个AJ小鼠和5个Balb/c小鼠进行免疫。选择两个具有通过酶联免疫吸附测定(ELISA)展示出最高抗GDF15活性的血清的Balb/c小鼠用于随后的融合。从适当的小鼠中收获脾脏和淋巴结。收获B细胞并且与骨髓瘤系融合。融合产物被连续稀释到40个96孔板上以接近克隆性。选择两个具有通过ELISA展示出最高抗GDF15活性的血清的AJ小鼠用于随后的融合。从适当的小鼠中收获脾脏和淋巴结。收获B细胞并且与骨髓瘤系融合。融合产物被连续稀释到40个96孔板上以接近克隆性。
通过ELISA从细胞融合物中筛选出近似3,840种上清液用于结合rhGDF15。在体外进一步表征含有对抗GDF15的抗体的总共172种上清液。选择一组杂交瘤，对其进行亚克隆并且扩增(expand)。表达抗体，并且随后通过在标准条件下在蛋白G树脂上的亲和色谱法来进行纯化。
实例7：抗体序列分析
根据试剂盒供应商的说明书(罗氏应用科学公司(Roche Applied Science)，印第安纳州，印第安纳波利斯(Indianapolis，IN))，使用IsoStripTM小鼠单克隆抗体同种型试剂盒来确定实例6中的每个单克隆抗体的轻链同种型和重链同种型。发现所有抗体是κ轻链和IgG1或IgG2b重链。
使用5'RACE(cDNA末端快速扩增)对小鼠单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区进行测序。根据试剂盒供应商的说明书(凯杰公司(Qiagen)，加利福尼亚州，巴伦西亚)(Valencia，CA)，使用
Figure BDA0000784036400000511
小量制备试剂盒从每个单克隆杂交瘤细胞系中提取总RNA。根据用于5'RACE的试剂盒供应商的说明书，使用SMARTerTM RACE cDNA扩增试剂盒(Clontech公司，芒廷维尤，加利福尼亚州)来产生含有5'末端的全长第一链cDNA。
根据试剂盒供应商的说明书，使用KOD热启动聚合酶(KOD Hot StartPolymerase)(EMD化学药品公司(EMD Chemicals)，新泽西州，吉布斯镇(Gibbstown，NJ))来通过PCR扩增轻(κ)和重(IgG1或IgG2b)链的可变区。为了与SMARTer TM RACE cDNA扩增试剂盒结合扩增5’cDNA末端，使用通用引物混合物A引物(Clontech公司)(5’CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT 3’(SEQ ID NO:233)和5’CTAATACGACTCACTATAGGGC 3’(SEQ ID NO:225)的混合物作为5’引物。使用以上5’引物和3’IgG1恒定区特异性引物5’TATGCAAGGCTTACAACCACA 3’(SEQ ID NO:226)或3’IgG2b恒定区特异性引物5’AGGACAGGGGTTGATTGTTGA 3’(SEQ ID NO:227)来扩增重链可变区。首先用以上5’引物和3’κ恒定区特异性引物5’CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT 3’(SEQ ID NO:228)来扩增κ链可变区。使用嵌套式通用引物A(Clontech公司)5’引物5’AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT 3’(SEQ IDNO:229)和嵌套式3’κ恒定区特异性引物5’CGACTGAGGCACCTCCAGATGTT 3’(SEQ ID NO:230)来使轻链受到第二轮嵌套式PCR。使用
Figure BDA0000784036400000522
PCR纯化试剂盒来纯化单个PCR产物或通过琼脂糖凝胶电泳来分离单个PCR产物，并且根据试剂盒供应商的说明书(凯杰公司)使用
Figure BDA0000784036400000524
凝胶纯化试剂盒来进行纯化。根据试剂盒供应商的说明书(英杰生命技术有限公司(Invitrogen))，使用Zero
Figure BDA0000784036400000525
PCR克隆随后将PCR产物克隆到
Figure BDA0000784036400000523
4Blunt质粒中，并且通过标准分子生物学技术转化到DH5-α细菌中(英杰生命技术有限公司)。使用贝克曼基因公司(Beckman Genomics)(丹弗斯(Danvers)，MA)的M13正向引物(5’GTAAAACGACGGCCAGT 3’)(SEQ ID NO:231)和M13反向引物(5’CAGGAAACAGCTATGACC 3’)(SEQ ID NO:232)，使用鉴定可变区序列的序列的标准双脱氧DNA测序对从转化的细菌克隆中分离的质粒DNA进行测序。使用Vector NTI软件(英杰生命技术有限公司)和IMGT/V-Quest网络服务器(imgt.cines.fr)对这些序列进行分析，以便鉴定并确定可变区序列。
以下示出编码鼠单克隆抗体的可变区的核酸序列和定义鼠单克隆抗体的可变区的蛋白质序列(氨基末端信号肽序列未示出)。CDR序列(卡巴特定义)用粗体指示并且在氨基酸序列中加下划线。
编码01G06抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:39)
Figure BDA0000784036400000521
Figure BDA0000784036400000531
定义01G06抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:40)
1 evllqqsgpe lvkpgasvki pckasgytft
Figure BDA0000784036400000536
wvkqs hgkslewig
Figure BDA0000784036400000537
61
Figure BDA0000784036400000538
katl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycar
Figure BDA0000784036400000539
w gqgtsvtvss
编码01G06抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:75)
Figure BDA0000784036400000532
定义01G06抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:76)
1 diqmtqspas lsasvgetvt itc
Figure BDA00007840364000005310
wyqqkq gkspqllvy
Figure BDA00007840364000005311
gvps
61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyyc
Figure BDA00007840364000005312
fgg gtkleik
编码03G05抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:41)
Figure BDA0000784036400000533
定义03G05抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:42)
1 qvqlqqpgae lvkpgasvkl sckasgytft
Figure BDA00007840364000005313
wvnqr pgqglewig
Figure BDA00007840364000005314
61
Figure BDA00007840364000005315
katm tadkssntay mqlssltsed savyycar
Figure BDA00007840364000005316
wgq gtsvtvss
编码03G05抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:77)
Figure BDA0000784036400000534
定义03G05抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:78)
1 divltqspas lavslgqrat isc
Figure BDA00007840364000005317
wf qqkpgqppkl liy
Figure BDA00007840364000005318
61 gvparfsgsg sgtdfslnih pmeeddtamy fc
Figure BDA00007840364000005319
fgggsklei k
编码04F08抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:43)
Figure BDA0000784036400000535
定义04F08抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:44)
1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls
Figure BDA0000784036400000545
wir qpsgkglewl a
Figure BDA0000784036400000546
61
Figure BDA0000784036400000547
rlt iskdtsnnqv flkitsvdta dtatyycaq
Figure BDA0000784036400000548
wg qgtlvtvsa
编码04F08抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:79)
Figure BDA0000784036400000541
定义04F08抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:80)
1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtc
Figure BDA0000784036400000549
wyqqkl gqspktliy
Figure BDA00007840364000005410
gvpd
61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfc
Figure BDA00007840364000005411
fgg gtkleik
编码06C11抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:45)
Figure BDA0000784036400000542
定义06C11抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:46)
1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln
Figure BDA00007840364000005412
wir qpsgkglewl a
Figure BDA00007840364000005413
61
Figure BDA00007840364000005414
rlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaq
Figure BDA00007840364000005415
wg qgtlvtisa
编码06C11抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:81)
Figure BDA0000784036400000543
定义06C11抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:82)
1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtc
Figure BDA00007840364000005416
wfqqkp gqspkaliy
Figure BDA00007840364000005417
gvpd
61 rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfc
Figure BDA00007840364000005418
fga gtklelk
编码08G01抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:47)
Figure BDA0000784036400000544
定义08G01抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:48)
1 evllqqsgpe vvkpgasvki pckasgytft
Figure BDA00007840364000005419
wvkqs hgkslewig
Figure BDA00007840364000005420
61
Figure BDA00007840364000005421
katl tvdkssstay melrsltsed tavyycar
Figure BDA00007840364000005422
w gqgtsvtvss
编码08G01抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:83)
Figure BDA0000784036400000551
定义08G01抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:84)
1 diqmtqspas lsasvgetvt itc
Figure BDA0000784036400000556
wyqqkq gkspqllvy
Figure BDA0000784036400000557
gvps
61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyyc
Figure BDA0000784036400000558
fgg gtkleik
编码14F11抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:49)
Figure BDA0000784036400000552
定义14F11抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:50)
1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls
Figure BDA0000784036400000559
wir qpsgkglewl a
Figure BDA00007840364000005510
61
Figure BDA00007840364000005511
rlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycar
Figure BDA00007840364000005512
wg qgtsvtvss
编码14F11抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:85)
Figure BDA0000784036400000553
定义14F11抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:86)
1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtc
Figure BDA00007840364000005513
wyqqkp gqspkaliy
Figure BDA00007840364000005514
gvpd
61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfc
Figure BDA00007840364000005515
fgg gtklemk
编码17B11抗体的重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:51)
Figure BDA0000784036400000554
定义17B11抗体的重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:52)
1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls
Figure BDA00007840364000005516
wir qpsgkglewl a
Figure BDA00007840364000005517
61
Figure BDA00007840364000005518
rlt iskdtsrnqv flkitsvdta dtatyycar
Figure BDA00007840364000005519
wgqgttltvs
121 s
编码17B11抗体的κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:87)
Figure BDA0000784036400000555
Figure BDA0000784036400000561
定义17B11抗体的κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:88)
1 divltqspas lavslgqrat isc
Figure BDA0000784036400000562
wf qqkpgqapkl lik
Figure BDA0000784036400000563
61 gvparfsgsg sgtdftlnih pvegedtaty yc
Figure BDA0000784036400000564
fgggtklei k
定义实例6中产生的这些抗体的免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列在图 10中进行了比对。 氨基末端信号肽序列 (用于表达/分泌) 未示出。CDR1、CDR2和CDR3(卡巴特定义) 用方框指示。 图11示出每种抗体的单独CDR1、CDR2和CDR3序列的比对。
定义实例6中的这些抗体的免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列在图12中进行了比对。 氨基末端信号肽序列 (用于表达/分泌) 未示出。CDR1、CDR2和CDR3用方框指示。 图13示出每种抗体的单独CDR1、CDR2和CDR3序列的比对。
表2示出在本实例中所讨论的每个序列的SEQ ID NO.。
表2
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
39 <u>01G06</u>重链可变区—核酸
40 <u>01G06</u>重链可变区—蛋白质
75 <u>01G06</u>轻(κ)链可变区—核酸
76 <u>01G06</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
1 <u>01G06</u>重链CDR<sub>1</sub>
7 <u>01G06</u>重链CDR<sub>2</sub>
15 <u>01G06</u>重链CDR<sub>3</sub>
21 <u>01G06</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 <u>01G06</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 <u>01G06</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
表2续
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
41 <u>03G05</u>重链可变区—核酸
42 <u>03G05</u>重链可变区—蛋白质
77 <u>03G05</u>轻(κ)链可变区—核酸
78 <u>03G05</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
2 <u>03G05</u>重链CDR<sub>1</sub>
8 <u>03G05</u>重链CDR<sub>2</sub>
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
16 <u>03G05</u>重链CDR<sub>3</sub>
22 <u>03G05</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
27 <u>03G05</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
33 <u>03G05</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
43 <u>04F08</u>重链可变区—核酸
44 <u>04F08</u>重链可变区—蛋白质
79 <u>04F08</u>轻(κ)链可变区—核酸
80 <u>04F08</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
3 <u>04F08</u>重链CDR<sub>1</sub>
9 <u>04F08</u>重链CDR<sub>2</sub>
17 <u>04F08</u>重链CDR<sub>3</sub>
23 <u>04F08</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
28 <u>04F08</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
34 <u>04F08</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
45 <u>06C11</u>重链可变区—核酸
46 <u>06C11</u>重链可变区—蛋白质
81 <u>06C11</u>轻(κ)链可变区—核酸
82 <u>06C11</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
4 <u>06C11</u>重链CDR<sub>1</sub>
9 <u>06C11</u>重链CDR<sub>2</sub>
18 <u>06C11</u>重链CDR<sub>3</sub>
23 <u>06C11</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
28 <u>06C11</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
35 <u>06C11</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
47 <u>08G01</u>重链可变区—核酸
48 <u>08G01</u>重链可变区—蛋白质
83 <u>08G01</u>轻(κ)链可变区—核酸
84 <u>08G01</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
1 <u>08G01</u>重链CDR<sub>1</sub>
10 <u>08G01</u>重链CDR<sub>2</sub>
15 <u>08G01</u>重链CDR<sub>3</sub>
24 <u>08G01</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
29 <u>08G01</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 <u>08G01</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
49 <u>14F11</u>重链可变区—核酸
50 <u>14F11</u>重链可变区—蛋白质
表2续
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
85 <u>14F11</u>轻(κ)链可变区—核酸
86 <u>14F11</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
5 <u>14F11</u>重链CDR<sub>1</sub>
11 <u>14F11</u>重链CDR<sub>2</sub>
19 <u>14F11</u>重链CDR<sub>3</sub>
23 <u>14F11</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
30 <u>14F11</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
36 <u>14F11</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
51 <u>17B11</u>重链可变区—核酸
52 <u>17B11</u>重链可变区—蛋白质
87 <u>17B11</u>轻(κ)链可变区—核酸
88 <u>17B11</u>轻(κ)链可变区—蛋白质
6 <u>17B11</u>重链CDR<sub>1</sub>
12 <u>17B11</u>重链CDR<sub>2</sub>
20 <u>17B11</u>重链CDR<sub>3</sub>
25 <u>17B11</u>轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
31 <u>17B11</u>轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
37 <u>17B11</u>轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
小鼠单克隆抗体重链CDR序列(卡巴特、乔西亚(Chothia)以及IMGT定义)示于表3中。
表3
Figure BDA0000784036400000581
Figure BDA0000784036400000591
表3续
Figure BDA0000784036400000592
Figure BDA0000784036400000601
小鼠单克隆抗体κ轻链CDR序列(卡巴特、乔西亚以及IMGT定义)示于表4中。
表4
Figure BDA0000784036400000602
Figure BDA0000784036400000611
为了产生完整重链或κ链抗体序列，将以上的每个可变序列与其对应的恒定区组合。例如，完整重链包含一个随后是鼠IgG1或IgG2b重链恒定序列的重可变序列，并且完整κ链包含一个随后是鼠κ轻链恒定序列的κ可变序列。
编码鼠IgG1重链恒定区的核酸序列(SEQ ID NO:165)
Figure BDA0000784036400000612
定义鼠IgG1重链恒定区的蛋白质序列(SEQ ID NO:166)
Figure BDA0000784036400000613
编码鼠IgG2b重链恒定区的核酸序列(SEQ ID NO:167)
Figure BDA0000784036400000614
Figure BDA0000784036400000621
定义鼠IgG2b重链恒定区的蛋白质序列(SEQ ID NO:168)
Figure BDA0000784036400000622
编码鼠κ轻链恒定区的核酸序列(SEQ ID NO:169)
Figure BDA0000784036400000623
定义鼠κ轻链恒定区的蛋白质序列(SEQ ID NO:170)
1 radaaptvsi fppsseqlts ggasvvcfln nfypkdinvk wkidgserqn gvlnswtdqd
61 skdstysmss tltltkdeye rhnsytceat hktstspivk sfnrnec
下列序列表示在本实例中描述的每种抗体的实际的或考虑到的全长重链和轻链序列(即，含有可变区序列和恒定区序列这两者)。用于适当分泌抗体的信号序列(例如，在DNA序列的5’末端或蛋白质序列的氨基末端上的信号序列)未示于在此披露的全长重链和轻链序列中，并且不被包括在最终的分泌性蛋白质中。还未示出的是在DNA序列的3’末端上所要求的用于终止翻译的终止密码子。选择用于表达披露的全长免疫球蛋白重链和轻链序列的信号序列和/或终止密码子是在本领域技术人员的技术之内。还考虑到，这些可变区序列可以连接到其他恒定区序列上以产生活性的全长免疫球蛋白重链和轻链。
编码01G06的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:99)
Figure BDA0000784036400000624
Figure BDA0000784036400000631
定义01G06的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:100)
Figure BDA0000784036400000632
编码01G06的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:101)
Figure BDA0000784036400000633
定义01G06的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:102)
Figure BDA0000784036400000641
编码03G05的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:103)
Figure BDA0000784036400000642
定义03G05的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:104)
Figure BDA0000784036400000643
编码03G05的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:105)
Figure BDA0000784036400000644
Figure BDA0000784036400000651
定义03G05的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:106)
Figure BDA0000784036400000652
编码04F08的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:107)
Figure BDA0000784036400000653
定义04F08的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:108)
Figure BDA0000784036400000654
Figure BDA0000784036400000661
编码04F08的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:109)
Figure BDA0000784036400000662
定义04F08的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:110)
Figure BDA0000784036400000663
编码06C11的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:111)
Figure BDA0000784036400000664
Figure BDA0000784036400000671
定义06C11的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:112)
Figure BDA0000784036400000672
编码06C11的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:113)
Figure BDA0000784036400000673
定义06C11的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:114)
Figure BDA0000784036400000674
编码08G01的全长重链序列(重链可变区和IgG2b恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:115)
Figure BDA0000784036400000675
Figure BDA0000784036400000681
定义08G01的全长重链序列(重链可变区和IgG2b恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:116)
Figure BDA0000784036400000682
编码08G01的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:117)
Figure BDA0000784036400000683
定义08G01的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:118)
Figure BDA0000784036400000684
编码14F11的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:119)
Figure BDA0000784036400000691
定义14F11的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:120)
Figure BDA0000784036400000692
编码14F11的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:121)
Figure BDA0000784036400000693
Figure BDA0000784036400000701
定义14F11的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:122)
Figure BDA0000784036400000702
编码17B11的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:123)
Figure BDA0000784036400000703
定义17B11的全长重链序列(重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:124)
Figure BDA0000784036400000704
421 ftcsvlhegl hnhhteksls hspgk
编码17B11的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:125)
Figure BDA0000784036400000711
定义17B11的全长轻链序列(κ链可变区和恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:126)
Figure BDA0000784036400000712
表5示出在本实例中所讨论的这些抗体的全长序列与呈现于序列表中的那些全长序列之间的对应性。
表5
SEQ ID NO. 核酸或蛋白质
99 01G06-重可变+IgG1恒定—核酸
100 01G06-重可变+IgG1恒定—蛋白质
101 01G06-κ可变+恒定—核酸
102 01G06-κ可变+恒定—蛋白质
103 03G05重可变+IgG1恒定—核酸
104 03G05重可变+IgG1恒定—蛋白质
105 03G05κ可变+恒定—核酸
106 03G05κ可变+恒定—蛋白质
107 04F08重可变+IgG1恒定—核酸
108 04F08重可变+IgG1恒定—蛋白质
109 04F08κ可变+恒定—核酸
110 04F08κ可变+恒定—蛋白质
111 06C11重可变+IgG1恒定—核酸
112 06C11重可变+IgG1恒定—蛋白质
113 06C11κ可变+恒定—核酸
SEQ ID NO. 核酸或蛋白质
114 06C11κ可变+恒定—蛋白质
115 08G01重可变+IgG2b恒定—核酸
116 08G01重可变+IgG2b恒定—蛋白质
117 08G01κ可变+恒定—核酸
118 08G01κ可变+恒定—蛋白质
119 14F11重可变+IgG1恒定—核酸
120 14F11重可变+IgG1恒定—蛋白质
121 14F11κ可变+恒定—核酸
122 14F11κ可变+恒定—蛋白质
123 17B11重可变+IgG1恒定—核酸
124 17B11重可变+IgG1恒定—蛋白质
125 17B11κ可变+恒定—核酸
126 17B11κ可变+恒定—蛋白质
实例8：结合亲和性
使用
Figure BDA0000784036400000721
T100仪器(GE医疗保健公司(GE Healthcare)，皮斯卡塔韦(Piscataway)，NJ)，通过表面等离子体共振来测量抗体对6X His标记的(SEQ ID NO:266)重组人GDF15(His-rhGDF15(安迪生物科技公司))、未标记的重组人GDF15(rhGDF15(派普泰克公司(Peprotech)，滚石山(Rocky Hill)，NJ)以及作为融合到人GDF15上的小鼠Fc(mFc-rhGDF15)或其中Fc被酶促去除的形式(裂解的rhGDF15)而产生的重组人GDF15的结合亲和性和结合动力学。
根据标准说明书，通过胺偶联将兔抗小鼠IgG(GE医疗保健公司)固定在羧甲基化葡聚糖CM4传感器芯片(GE医疗保健公司)上。使用含有0.05％表面活性剂P20的PBS作为运行缓冲液，在37℃下进行分析。在10微升/分钟的流速下，在单个流动细胞中捕获这些抗体。对于每种抗体注射时间不同，以便产生30RU与60RU之间的Rmax。当需要时，在30微升/分钟下注射250μg/mL小鼠Fc(Jackson ImmunoResearch公司(Jackson ImmunoResearch)，格罗夫西(West Grove)，PA)持续120秒以阻断捕获抗体非特异性结合重组GDF15蛋白的小鼠Fc蛋白。在60微升/分钟下，在参考表面(无捕获的抗体)和活性表面(有待测试的抗体)上依次注射缓冲液、稀释在运行缓冲液中的mFc-rhGDF15、裂解的rhGDF15、His-rhGDF15或rhGDF15持续240秒。监测解离相持续到1500秒。然后在30微升/分钟的流速下，用两次60秒的10mM甘氨酸-HCl(pH 1.7)注射来再生该表面。所测试的GDF15浓度范围是30nM至0.625nM。
使用扣除两倍参考的BIAevaluation软件(GE医疗保健公司)的动力学函数来确定动力学参数。确定每种抗体的动力学参数ka(结合速率常数)、kd(解离速率常数)以及KD(平衡解离常数)。单克隆抗体对mFc-rhGDF15、裂解的rhGDF15、His-rhGDF15或rhGDF15的动力学值对应地概括于表6、表7、表8和表9中。
表6
结合mFc-rhGDF15的抗体
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
01G06 5.6E+06 7.0E-04 2.1E-10 7
03G05 1.0E+07 6.4E-04 6.9E-11 3
04F08 3.6E+06 6.4E-04 1.9E-10 3
06C11 4.5E+06 6.8E-04 1.7E-10 5
08G01 6.0E+06 1.1E-03 1.9E-10 4
14F11 1.7E+06 3.3E-04 2.2E-10 4
17B11 3.7E+06 5.1E-04 1.4E-10 3
表6中的数据表现出抗体结合mFc-rhGDF15，其中KD是约250pM或更少、200pM或更少、150pM或更少、100pM或更少、75pM或更少或50pM或更少。
单克隆抗体对裂解的rhGDF15的动力学值概括于表7中。
表7
结合裂解的rhGDF15的抗体
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
01G06 7.5E+06 8.6E-04 1.1E-10 1
06C11 1.2E+07 2.0E-03 1.7E-10 2
14F11 5.7E+06 6.0E-04 1.1E-10 1
表7中的数据表现出抗体01G06、06C11和14F11结合裂解的rhGDF15，其中KD是约200pM或更少、150pM或更少或100pM或更少。
单克隆抗体对His-rhGDF15的动力学值概括于表8中。
表8
结合His-rhGDF15的抗体
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
01G06 1.4E+07 1.1E-03 8.1E-11 2
06C11 2.9E+07 1.5E-03 5.1E-11 2
14F11 4.4E+06 4.2E-04 9.6E-11 1
表8中的数据表现出抗体01G06、06C11和14F11结合His-rhGDF15，其中KD是约150pM或更少、100pM或更少、75pM或更少或50pM或更少。
单克隆抗体对rhGDF15的动力学值概括于表9中。
表9
结合rhGDF15的抗体
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
01G06 2.1E+07 1.9E-03 9.3E-11 1
06C11 2.2E+07 4.6E-03 2.1E-10 1
14F11 3.1E+07 2.2E-03 7.1E-11 1
表9中的数据表现出抗体1G06、06C11和14F11结合rhGDF15，其中KD是约250pM或更少、200pM或更少、150pM或更少、100pM或更少、75pM或更少或50pM或更少。
实例9：mFc-rhGDF15诱导的模型中的恶病质逆转
本实例表现出在mFc-rhGDF15诱导的恶病质模型中由抗体01G06、03G05、04F08、06C11、14F11或17B11引起的恶病质逆转(如通过体重损失所指示)。将mFc-rhGDF15(2μg/g)皮下给予到8周龄雌性ICR-SCID小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到93％时，将小鼠随机分成7组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：鼠IgG对照、以10mg/kg的01G06、03G05、04F08、06C11、14F11或17B11。通过腹膜内注射给予处理一次。用抗体01G06、03G05、04F08、06C11、14F11或17B11进行处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图14和表10)。
表10
Figure BDA0000784036400000741
图14和表10中的数据表明披露的抗GDF15抗体可以在mFc-rhGDF15诱导的小鼠模型(即，不带有肿瘤的小鼠模型)中使恶病质逆转。
实例10：HT-1080异种移植物肿瘤模型中的恶病质逆转
本实例表现出在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中由抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11引起的恶病质逆转(如通过体重损失所指示)。使用含有10％FBS的伊格尔最低基础培养基(Eagle's Minimum Essential Medium)(ATCC，目录号30-2003)，使HT-1080细胞在含有5％CO2的大气中在37℃下在培养中生长。以50％基质胶中5×106个细胞/小鼠，将细胞皮下接种到8周龄雌性ICR SCID小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到93％时，将小鼠随机分成8组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：鼠IgG对照、以10mg/kg的01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11。通过腹膜内注射来每三天给予处理。用抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11进行处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图15和表11)。
表11
Figure BDA0000784036400000751
图15和表11中的数据表明披露的抗GDF15抗体可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质逆转。
用抗体01G06进行另外的研究以便在本小鼠模型中表现出恶病质逆转。如上所述，使HT-1080细胞生长并且皮下接种到8周龄雌性ICR SCID小鼠的肋部中。当体重达到93％时，将小鼠随机分成2组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：鼠IgG对照或以10mg/kg的01G06。通过腹膜内注射给予处理一次。如在图16A中所示，用抗体01G06进行处理引起体重对于初始重量而增加或100％(p<0.001)(图16A)。
通过称重每日给予小鼠的食物供应来确定食物消耗(图16B)。在01G06处理的组中观察到食物消耗显著增加，持续处理之后的前三天。在此之后，与对照组(mIgG)相比没有观察到显著变化。
通过称重每日给予小鼠的供水来确定耗水量。在两组之间没有观察到耗水量显著变化。
在本实验中，在给药(基线或93％体重，没有处理)时和在研究结束时(给药之后7天，或者mIgG或者01G06)处死一组10个小鼠。如上在实例4中所述，手术去除性腺脂肪和腓肠肌并称重，并且在液氮中急速冷冻组织。如在实例4中所述，从腓肠肌样品中分离RNA以便通过RT-PCR来确定mMuRF1和mAtrogin mRNA的水平。
如在图16C中所示，在使用mIgG给药之后7天观察到性腺脂肪质量显著减少，但在用抗体01G06处理的组中没有观察到性腺脂肪质量显著减少。另外，用mIgG处理的小鼠与基线组相比显示出显著的腓肠肌损失，而用抗体01G06处理的组没有显示出显著的腓肠肌损失(图16D)。此外，与01G06组相比，在mIgG组中肌肉降解标志物mMuRF1和mAtrogin的水平显著更高(图16E)。
这些结果表明所披露的抗GDF15抗体可以由肌肉质量损失、脂肪损失和不自主重量损失所测量在HT-1080异种移植物肿瘤模型中使恶病质逆转。
实例11：HT-1080异种移植物肿瘤模型中的恶病质逆转
本实例表现出在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中由抗体01G06引起的恶病质逆转(如通过体重损失所指示)。使用含有10％FBS的伊格尔最低基础培养基(Eagle'sMinimum Essential Medium)(ATCC，目录号30-2003)，使HT-1080细胞在含有5％CO2的大气中在37℃下在培养中生长。以50％基质胶中5×106个细胞/小鼠，将细胞皮下接种到8周龄雌性ICR SCID小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到80％时，将小鼠随机分成2组，每组5个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：鼠IgG对照、在第1天和第7天以2mg/kg给予01G06。通过腹膜内注射来给予处理。用抗体01G06进行处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图17A和表12)。
表12
Figure BDA0000784036400000761
图17A-17B和表12中的数据表明披露的抗GDF15抗体可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质逆转。
在本实验中，在给药(基线或80％体重损失，没有处理)时和在研究结束时(给药之后7天，或者mIgG或者01G06)处死一组5个小鼠。手术去除肝脏、心脏、脾脏、肾脏、性腺脂肪以及腓肠肌并且称重。如在图17B中所示，在使用mIgG给药之后7天观察到肝脏、心脏、脾脏、肾脏、性腺脂肪以及腓肠肌质量显著损失，但在用抗体01G06处理的组中没有观察到这些质量显著损失。另外，与基线组相比，用抗体01G06处理的小鼠显示出显著的肝脏和性腺肌肉增加(图17B)。
这些结果表明所披露的抗GDF15抗体可以由重要器官质量损失、肌肉质量损失、脂肪损失以及不自主重量损失所测量在HT-1080异种移植物肿瘤模型中使恶病质逆转。
实例12：K-562异种移植物肿瘤模型中的恶病质逆转
本实例表现出在K-562白血病异种移植物模型中由抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11引起的恶病质逆转(如通过体重损失所指示)。使用含有10％FBS的伊斯科夫改良达尔伯克培养基(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)(ATCC，目录号30-2005)，使K-562细胞在含有5％CO2的大气中在37℃下在培养中生长。以50％基质胶中2.5×106个细胞/小鼠，将细胞皮下接种到8周龄雌性CB17SCRFMF小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到93％时，将小鼠随机分布到8个组中，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：鼠IgG对照、以10mg/kg的01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11。通过腹膜内注射来每三天给予处理。用抗体01G06、03G05、04F08、06C11、08G01、14F11或17B11进行处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图18和表13)。
表13
Figure BDA0000784036400000771
图18和表13中的数据表明披露的抗GDF15抗体可以在K-562异种移植物肿瘤模型中使恶病质逆转。
实例13：另外的异种移植物肿瘤模型
在另外的肿瘤异种移植物模型中测试抗体01G06，这些另外的肿瘤异种移植物模型包括TOV-21G卵巢异种移植物模型和LS1034结肠异种移植物模型。在每种模型中，与PBS对照相比抗体01G06使体重损失逆转(对于TOV-21G模型p<0.001并且对于LS1034模型p<0.01)。
实例14：抗GDF15抗体的人源化
本实例描述了三种鼠抗体(命名为01G06、06C11和14F11)的人源化和嵌合以及所得到的人源化抗体的表征。对这些人源化抗GDF15抗体进行命名，通过靶向的CDR诱变使其亲和性成熟，并且使用本领域中已知的方法进行优化。将氨基酸序列转化成密码子优化的DNA序列并且合成以便包括(按下列顺序)：5’HindIII限制位点、Kozak共有序列、氨基末端信号序列、人源化可变区、人IgG1或κ恒定区、终止密码子以及3’EcoRI限制位点。
还构建了嵌合的(鼠可变区和人恒定区)01G06、06C11和14F11重(人IgG1)链和轻(人κ)链。为了产生嵌合抗体，将鼠可变区融合到人恒定区上，并且合成密码子优化的DNA序列从而包括(按下列顺序)：5’HindIII限制位点、Kozak共有序列、氨基末端信号序列、小鼠可变区、人IgG1或κ恒定区、终止密码子以及3’EcoRI限制位点。
使用In-FusionTM PCR克隆(Clontech公司，加利福尼亚州，山景城)，经由HindIII和EcoRI位点将这些人源化重链和嵌合重链亚克隆到pEE6.4(龙沙公司，巴塞尔，瑞士)中。使用In-FusionTM PCR克隆，经由HindIII和EcoRI位点，将这些人源化κ轻链和嵌合κ轻链亚克隆到pEE14.4(龙沙公司)中。
将人源化抗体链或嵌合抗体链瞬时转染到293T细胞中以产生抗体。对抗体进行纯化或使抗体用于细胞培养基上清液中以用于随后的体外分析。如下所述测量嵌合抗体和人源化抗体对人GDF15的结合。结果概括于表24-27中。
嵌合或人源化的01G06免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的每个可能的组合列于以下表14中。
表14
Figure BDA0000784036400000781
表14续
Figure BDA0000784036400000782
Figure BDA0000784036400000791
Figure BDA0000784036400000801
表14续
Figure BDA0000784036400000802
Figure BDA0000784036400000811
嵌合或人源化的06C11免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的每个可能的组合列于以下表15中。
表15
Figure BDA0000784036400000812
嵌合或人源化的14F11免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的每个可能的组合列于以下表16中。
表16
Figure BDA0000784036400000813
Figure BDA0000784036400000821
嵌合的04F08、06C11和14F11免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的每个可能的组合列于以下表17中。
表17
Figure BDA0000784036400000822
嵌合01G06和嵌合08G01免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区的每个可能的组合列于以下表18中。
表18
Figure BDA0000784036400000823
Figure BDA0000784036400000831
定义嵌合和人源化的01G06、06C11和14F11抗体的可变区的核酸序列和编码蛋白序列概括在以下(氨基末端信号肽序列未示出)。CDR序列(卡巴特定义)用粗体示出并且在氨基酸序列中加下划线。
编码Ch01G06嵌合重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:127)
Figure BDA0000784036400000832
定义Ch01G06嵌合重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:40)
1 evllqqsgpe lvkpgasvki pckasgytft
Figure BDA0000784036400000836
wvkqs hgkslewig
Figure BDA0000784036400000837
61
Figure BDA0000784036400000838
katl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycar
Figure BDA0000784036400000839
w gqgtsvtvss
编码Hu01G06 IGHV1-18重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:53)
Figure BDA0000784036400000833
定义Hu01G06 IGHV1-18重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:54)
1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft
Figure BDA00007840364000008310
wvrqa pgkslewig
Figure BDA00007840364000008311
61
Figure BDA00007840364000008312
ratl tvdtstntay melrslrsdd tavyycar
Figure BDA00007840364000008313
w gqgtlvtvss
编码Hu01G06 IGHV1-69重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:55)
Figure BDA0000784036400000835
定义Hu01G06 IGHV1-69重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:56)
1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytft
Figure BDA00007840364000008314
wvrqa pgkslewig
Figure BDA00007840364000008315
61
Figure BDA00007840364000008316
ratl tvdkstntay melsslrsed tavyycar
Figure BDA00007840364000008317
w gqgtlvtvss
编码Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:57)
Figure BDA0000784036400000834
Figure BDA0000784036400000841
定义Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:58)
1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft
Figure BDA0000784036400000845
wvrqa pgqglewmg
Figure BDA0000784036400000846
61
Figure BDA0000784036400000847
rvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycar
Figure BDA0000784036400000848
w gqgtlvtvss
编码Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:59)
Figure BDA0000784036400000842
定义Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:60)
1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft
Figure BDA0000784036400000849
wvrqa pgqslewmg
Figure BDA00007840364000008410
61
Figure BDA00007840364000008411
rvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycar
Figure BDA00007840364000008412
w gqgtlvtvss
编码 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:61)
Figure BDA0000784036400000843
定义Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:62)
1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft
Figure BDA00007840364000008413
wvrqa pgqglewmg
Figure BDA00007840364000008414
61
Figure BDA00007840364000008415
rvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycar
Figure BDA00007840364000008416
w gqgtlvtvss
编码Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:63)
Figure BDA0000784036400000844
定义Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:64)
1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs
Figure BDA00007840364000008417
wvrqa pgqglewmg
Figure BDA00007840364000008418
61
Figure BDA00007840364000008419
rvtl tadkststay melsslrsed tavyycar
Figure BDA00007840364000008420
w gqgtlvtvss
编码Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:65)
Figure BDA0000784036400000851
定义Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:66)
1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs
Figure BDA0000784036400000855
wvrqa pgqglewmg
Figure BDA0000784036400000856
61
Figure BDA0000784036400000857
rvtl tadkststay melsslrsed tavyycar
Figure BDA0000784036400000858
w gqgtlvtvss
编码Hu01G06 IGHV1-18 F1重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:245)
Figure BDA0000784036400000852
定义Hu01G06 IGHV1-18 F1重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:246)
1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft
Figure BDA0000784036400000859
wvrqa pgqslewmg
Figure BDA00007840364000008510
61
Figure BDA00007840364000008511
rvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycar
Figure BDA00007840364000008512
w gqgtlvtvss
编码Hu01G06 IGHV1-18 F2重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:247)
Figure BDA0000784036400000854
定义Hu01G06 IGHV1-18 F2重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:248)
1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft
Figure BDA00007840364000008513
wvrqa pgqslewmg
Figure BDA00007840364000008514
61
Figure BDA00007840364000008515
rvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycar
Figure BDA00007840364000008516
w gqgtlvtvss
编码Hu01G06 IGHV1-69 F1重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:249)
Figure BDA0000784036400000853
定义Hu01G06 IGHV1-69 F1重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:250)
1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs
Figure BDA00007840364000008517
wvrqa pgqglewmg
Figure BDA00007840364000008518
61
Figure BDA0000784036400000865
rvtl tadkststay melsslrsed tavyycar
Figure BDA0000784036400000866
w gqgtlvtvss
编码Hu01G06 IGHV 1-69 F2重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:251)
Figure BDA0000784036400000861
定义Hu01G06 IGHV1-69 F2重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:252)
1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs
Figure BDA0000784036400000867
wvrqa pgqglewmg
Figure BDA0000784036400000868
61
Figure BDA0000784036400000869
rvtl tadkststay melsslrsed tavyycar
Figure BDA00007840364000008610
gqgtlvtvss
编码Ch06C11嵌合重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:129)
Figure BDA0000784036400000862
定义Ch06C11嵌合重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:46)
1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln
Figure BDA00007840364000008611
wir qpsgkglewl a
Figure BDA00007840364000008612
61
Figure BDA00007840364000008613
rlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaq
Figure BDA00007840364000008614
wg qgtlvtisa
编码HE LM 06C11 IGHV2-70重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:67)
Figure BDA0000784036400000863
定义HE LM 06C11 IGHV2-70重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:68)
1 qvtlkesgpa lvkptqtltl tctfsgfsln
Figure BDA00007840364000008615
wir qppgkalewl a
Figure BDA00007840364000008616
61
Figure BDA00007840364000008617
rlt iskdtsknqv vltitnvdpv dtavyycaq
Figure BDA00007840364000008618
wg qgtlvtiss
编码Hu06C11 IGHV2-5重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:69)
Figure BDA0000784036400000864
定义Hu06C11 IGHV2-5重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:70)
1 qvtlkesgpt lvkptqtltl tctfsgfsln
Figure BDA00007840364000008619
wir qppgkglewl a
Figure BDA00007840364000008620
61
Figure BDA00007840364000008621
rlt itkdtsknqv vltitnmdpv dtatyycaqr
Figure BDA00007840364000008622
wg qgtlvtvss编码Ch14F11嵌合重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:131)
Figure BDA0000784036400000871
定义Ch14F11嵌合重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:50)
1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls
Figure BDA0000784036400000876
wir qpsgkglewl a
Figure BDA0000784036400000877
61
Figure BDA0000784036400000878
rlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycar
Figure BDA0000784036400000879
wg qgtsvtvss
编码Sh14F11 IGHV2-5重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:71)
Figure BDA0000784036400000872
定义Sh14F11 IGHV2-5重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:72)
1 qitlkesgpt lvkptqtltl tctfsgfsls
Figure BDA00007840364000008710
wir qppgkalewl a
Figure BDA00007840364000008711
61
Figure BDA00007840364000008712
rlt itkdtsknqv vltmtnmdpv dtatyycar
Figure BDA00007840364000008713
wg qgtlvtvss编码Sh14F11 IGHV2-70重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:73)
Figure BDA0000784036400000873
定义Sh14F11 IGHV2-70重链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:74)
1 qvtlkesgpa lvkptqtltl tctfsgfsls
Figure BDA00007840364000008714
wir qppgkalewl a
Figure BDA00007840364000008715
61
Figure BDA00007840364000008716
rlt iskdtsknqv vltmtnmdpv dtavyycar
Figure BDA00007840364000008717
wg qgtlvtvss编码Ch01G06嵌合κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:133)
Figure BDA0000784036400000874
定义Ch01G06嵌合κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:76)
1 diqmtqspas lsasvgetvt itc
Figure BDA00007840364000008718
wyqqkq gkspqllvy
Figure BDA00007840364000008719
gvps
61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyyc
Figure BDA00007840364000008720
fgg gtkleik
编码Hu01G06 IGKV1-39κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:89)
Figure BDA0000784036400000875
Figure BDA0000784036400000881
定义Hu01G06 IGKV1-39κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:90)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA0000784036400000885
wyqqkp gkspkllvy
Figure BDA0000784036400000886
gvps
61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyyc
Figure BDA0000784036400000887
fgq gtkleik
编码Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48Iκ链可变区的核酸序列(在此又称为Hu01G06 IGKV1-39 F1κ链可变区；SEQ ID NO:91)
Figure BDA0000784036400000882
定义Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48Iκ链可变区的蛋白质序列(在此又称为Hu01G06 IGKV1-39 F1κ链可变区；SEQ ID NO:92)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA0000784036400000888
wyqqkp gkapklliy
Figure BDA0000784036400000889
gvps
61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyyc
Figure BDA00007840364000008810
fgq gtkleik
编码Hu01G06 IGKV1-39 V48Iκ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:93)
Figure BDA0000784036400000883
定义Hu01G06 IGKV1-39 V48Iκ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:94)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA00007840364000008811
wyqqkp gkspklliy
Figure BDA00007840364000008812
gvps
61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyyc
Figure BDA00007840364000008813
fgq gtkleik
编码Hu01G06 IGKV1-39 F1κ链可变区的核酸序列(在此又称为Hu01G06 IGKV1-39S43A V48Iκ链可变区；SEQ ID NO:91)
Figure BDA0000784036400000884
定义Hu01G06 IGKV1-39 F1κ链可变区的蛋白质序列(在此又称为Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48Iκ链可变区；SEQ ID NO:92)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA00007840364000008814
wyqqkp gkapklliy
Figure BDA00007840364000008815
gvps
61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyyc
Figure BDA00007840364000008816
fgq gtkleik
编码Hu01G06 IGKV1-39 F2κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:253)
Figure BDA0000784036400000891
定义Hu01G06 IGKV1-39 F2κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:254)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA0000784036400000896
wyqqkp gkspklliy
Figure BDA0000784036400000897
gvps
61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyyc
Figure BDA0000784036400000898
fgq gtkleik
编码Ch06C11嵌合κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:135)
Figure BDA0000784036400000892
定义Ch06C11嵌合κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:82)
1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtc
Figure BDA0000784036400000899
wfqqkp gqspkaliy
Figure BDA00007840364000008910
gvpd
61 rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfc
Figure BDA00007840364000008911
fga gtklelk
编码Sh06C11 IGKV1-16κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:95)
Figure BDA0000784036400000893
定义Sh06C11 IGKV1-16κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:96)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA00007840364000008912
wfqqkp gkapksliy
Figure BDA00007840364000008913
gvps
61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyyc
Figure BDA00007840364000008914
fgq gtkleik
编码Ch14F11嵌合κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:137)
Figure BDA0000784036400000894
定义Ch14F11嵌合κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:86)
1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtc
Figure BDA00007840364000008915
wyqqkp gqspkaliy
Figure BDA00007840364000008916
gvpd
61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfc
Figure BDA00007840364000008917
fgg gtklemk
编码Hu14F11 IGKV1-16κ链可变区的核酸序列(SEQ ID NO:97)
Figure BDA0000784036400000895
Figure BDA0000784036400000901
定义Hu14F11 IGKV1-16κ链可变区的蛋白质序列(SEQ ID NO:98)
1 diqmtqspss lsasvgdrvt itc
Figure BDA0000784036400000902
wfqqkp gkspkaliy
Figure BDA0000784036400000903
gvps
61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyfc
Figure BDA0000784036400000904
fgq gtkleik
定义实例13中产生的这些抗体的免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列在图19中进行了比对。氨基末端信号肽序列(用于适当的表达/分泌)未示出。CDR1、CDR2和CDR3(卡巴特定义)用方框指示。图20示出在图19中所示的每个可变区序列的单独CDR1、CDR2和CDR3序列的比对。
定义实例13中的这些抗体的免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列在图21中进行了比对。氨基末端信号肽序列(用于适当的表达/分泌)未示出。CDR1、CDR2和CDR3用方框指示。图22示出在图21中所示的每个可变区序列的单独CDR1、CDR2和CDR3序列的比对。
表19是示出在本实例中所讨论的每个序列的SEQ ID NO.的索引表。
表19
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
127 Ch01G06嵌合重链可变区—核酸
40 Ch01G06嵌合重链可变区—蛋白质
1 Ch01G06嵌合重链CDR<sub>1</sub>
7 Ch01G06嵌合重链CDR<sub>2</sub>
15 Ch01G06嵌合重链CDR<sub>3</sub>
53 Hu01G06 IGHV1-18重链可变区—核酸
54 Hu01G06 IGHV1-18重链可变区—蛋白质
1 Hu01G06 IGHV1-18重链CDR<sub>1</sub>
7 Hu01G06 IGHV1-18重链CDR<sub>2</sub>
15 Hu01G06 IGHV1-18重链CDR<sub>3</sub>
55 Hu01G06 IGHV1-69重链可变区—核酸
56 Hu01G06 IGHV1-69重链可变区—蛋白质
1 Hu01G06 IGHV1-69重链CDR<sub>1</sub>
7 Hu01G06 IGHV1-69重链CDR<sub>2</sub>
15 Hu01G06 IGHV1-69重链CDR<sub>3</sub>
57 Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链可变区—核酸
58 Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链可变区—蛋白质
1 Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链CDR<sub>1</sub>
7 Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链CDR<sub>2</sub>
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
15 Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链CDR<sub>3</sub>
表19续
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
59 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链可变区—核酸
60 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链可变区—蛋白质
1 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链CDR<sub>1</sub>
13 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链CDR<sub>2</sub>
15 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链CDR<sub>3</sub>
61 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链可变区—核酸
62 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链可变区—蛋白质
1 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链CDR<sub>1</sub>
13 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链CDR<sub>2</sub>
15 Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链CDR<sub>3</sub>
63 Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链可变区—核酸
64 Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链可变区—蛋白质
1 Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链CDR<sub>1</sub>
7 Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链CDR<sub>2</sub>
15 Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链CDR<sub>3</sub>
65 Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链可变区—核酸
66 Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链可变区—蛋白质
1 Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链CDR<sub>1</sub>
13 Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链CDR<sub>2</sub>
15 Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链CDR<sub>3</sub>
245 Hu01G06 IGHV1-18 F1重链可变区—核酸
246 Hu01G06 IGHV1-18 F1重链可变区—蛋白质
1 Hu01G06 IGHV1-18 F1重链CDR<sub>1</sub>
236 Hu01G06 IGHV1-18 F1重链CDR<sub>2</sub>
15 Hu01G06 IGHV1-18 F1重链CDR<sub>3</sub>
247 Hu01G06 IGHV1-18 F2重链可变区—核酸
248 Hu01G06 IGHV1-18 F2重链可变区—蛋白质
1 Hu01G06 IGHV1-18 F2重链CDR<sub>1</sub>
237 Hu01G06 IGHV1-18 F2重链CDR<sub>2</sub>
15 Hu01G06 IGHV1-18 F2重链CDR<sub>3</sub>
259 Hu01G06 IGHV1-69 F1重链可变区—核酸
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
250 Hu01G06 IGHV1-69 F1重链可变区—蛋白质
1 Hu01G06 IGHV1-69 F1重链CDR<sub>1</sub>
238 Hu01G06 IGHV1-69 F1重链CDR<sub>2</sub>
15 Hu01G06 IGHV1-69 F1重链CDR<sub>3</sub>
251 Hu01G06 IGHV1-69 F2重链可变区—核酸
252 Hu01G06 IGHV1-69 F2重链可变区—蛋白质
1 Hu01G06 IGHV1-69 F2重链CDR<sub>1</sub>
239 Hu01G06 IGHV1-69 F2重链CDR<sub>2</sub>
15 Hu01G06 IGHV1-69 F2重链CDR<sub>3</sub>
129 Ch06C11嵌合重链可变区—核酸
46 Ch06C11嵌合重链可变区—蛋白质
4 Ch06C11嵌合重链CDR<sub>1</sub>
9 Ch06C11嵌合重链CDR<sub>2</sub>
18 Ch06C11嵌合重链CDR<sub>3</sub>
表19续
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
67 HE LM 06C11 IGHV2-70重链可变区—核酸
68 HE LM 06C11 IGHV2-70重链可变区—蛋白质
4 HE LM 06C11 IGHV2-70重链CDR<sub>1</sub>
14 HE LM 06C11 IGHV2-70重链CDR<sub>2</sub>
18 HE LM 06C11 IGHV2-70重链CDR<sub>3</sub>
69 Hu06C11 IGHV2-5重链可变区—核酸
70 Hu06C11 IGHV2-5重链可变区—蛋白质
4 Hu06C11 IGHV2-5重链CDR<sub>1</sub>
9 Hu06C11 IGHV2-5重链CDR<sub>2</sub>
18 Hu06C11 IGHV2-5重链CDR<sub>3</sub>
131 Ch14F11嵌合重链可变区—核酸
50 Ch14F11嵌合重链可变区—蛋白质
5 Ch14F11嵌合重链CDR<sub>1</sub>
11 Ch14F11嵌合重链CDR<sub>2</sub>
19 Ch14F11嵌合重链CDR<sub>3</sub>
71 Sh14F11 IGHV2-5重链可变区—核酸
72 Sh14F11 IGHV2-5重链可变区—蛋白质
5 Sh14F11 IGHV2-5重链CDR<sub>1</sub>
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
11 Sh14F11 IGHV2-5重链CDR<sub>2</sub>
19 Sh14F11 IGHV2-5重链CDR<sub>3</sub>
73 Sh14F11 IGHV2-70重链可变区—核酸
74 Sh14F11 IGHV2-70重链可变区—蛋白质
5 Sh14F11 IGHV2-70重链CDR<sub>1</sub>
11 Sh14F11 IGHV2-70重链CDR<sub>2</sub>
19 Sh14F11 IGHV2-70重链CDR<sub>3</sub>
133 Ch01G06嵌合轻(κ)链可变区—核酸
76 Ch01G06嵌合轻(κ)链可变区—蛋白质
21 Ch01G06嵌合轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 Ch01G06嵌合轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 Ch01G06嵌合轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
89 Hu01G06 IGKV1-39轻(κ)链可变区—核酸
90 Hu01G06 IGKV1-39轻(κ)链可变区—蛋白质
21 Hu01G06 IGKV1-39轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 Hu01G06 IGKV1-39轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 Hu01G06 IGKV1-39轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
91 Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻(κ)链可变区—核酸
92 Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻(κ)链可变区—蛋白质
21 Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
93 Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻(κ)链可变区—核酸
94 Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻(κ)链可变区—蛋白质
21 Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
表19续
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
91 Hu01G06 IGKV1-39 F1轻(κ)链可变区—核酸
92 Hu01G06 IGKV1-39 F1轻(κ)链可变区—蛋白质
21 Hu01G06 IGKV1-39 F1轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 Hu01G06 IGKV1-39 F1轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
32 Hu01G06 IGKV1-39 F1轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
SEQ.ID NO. 核酸或蛋白质
253 Hu01G06 IGKV1-39 F2轻(κ)链可变区—核酸
254 Hu01G06 IGKV1-39 F2轻(κ)链可变区—蛋白质
21 Hu01G06 IGKV1-39 F2轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
26 Hu01G06 IGKV1-39 F2轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
244 Hu01G06 IGKV1-39 F2轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
135 Ch06C11嵌合轻(κ)链可变区—核酸
82 Ch06C11嵌合轻(κ)链可变区—蛋白质
23 Ch06C11嵌合轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
28 Ch06C11嵌合轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
35 Ch06C11嵌合轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
95 Sh06C11 IGKV1-16轻(κ)链可变区—核酸
96 Sh06C11 IGKV1-16轻(κ)链可变区—蛋白质
23 Sh06C11 IGKV1-16轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
28 Sh06C11 IGKV1-16轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
35 Sh06C11 IGKV1-16轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
137 Ch14F11嵌合轻(κ)链可变区—核酸
86 Ch14F11嵌合轻(κ)链可变区—蛋白质
23 Ch14F11嵌合轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
30 Ch14F11嵌合轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
36 Ch14F11嵌合轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
97 Hu14F11 IGKV1-16轻(κ)链可变区—核酸
98 Hu14F11 IGKV1-16轻(κ)链可变区—蛋白质
23 Hu14F11 IGKV1-16轻(κ)链CDR<sub>1</sub>
30 Hu14F11 IGKV1-16轻(κ)链CDR<sub>2</sub>
36 Hu14F11 IGKV1-16轻(κ)链CDR<sub>3</sub>
人源化单克隆抗体重链CDR序列(卡巴特、乔西亚以及IMGT定义)示于表20中。
表20
Figure BDA0000784036400000941
Figure BDA0000784036400000951
Figure BDA0000784036400000961
表20续
Figure BDA0000784036400000962
Figure BDA0000784036400000971
表20续
Figure BDA0000784036400000972
Figure BDA0000784036400000981
人源化单克隆抗体κ轻链CDR序列(卡巴特、乔西亚以及IMGT定义)示于表21中。
表21
Figure BDA0000784036400000982
Figure BDA0000784036400000991
Figure BDA0000784036400001001
为了产生完整的嵌合和人源化的重链或κ链抗体序列，将以上的每个可变序列与其对应的人恒定区组合。例如，完整的重链包含一个随后是人IgG1重链恒定序列的重可变序列。完整的κ链包含一个随后是人κ轻链恒定序列的κ可变序列。
编码人IgG1重链恒定区的核酸序列(SEQ ID NO:171)
Figure BDA0000784036400001011
定义人IgG1重链恒定区的蛋白质序列(SEQ ID NO:172)
Figure BDA0000784036400001012
编码人κ轻链恒定区的核酸序列(SEQ ID NO:173)
Figure BDA0000784036400001013
定义人κ轻链恒定区的蛋白质序列(SEQ ID NO:174)
1 rtvaapsvfi fppsdeqlks gtasvvclln nfypreakvq wkvdnalqsg nsqesvteqd
61 skdstyslss tltlskadye khkvyacevt hqglsspvtk sfnrgec
下列序列表示在本实例中描述的每种抗体的实际的或考虑到的全长重链和轻链序列(即，含有可变区序列和恒定区序列这两者)。用于适当分泌抗体的信号序列(例如，在DNA序列的5’末端或蛋白质序列的氨基末端上的信号序列)未示于在此披露的全长重链和轻链序列中，并且不被包括在最终分泌的蛋白质中。还未示出的是在DNA序列的3’末端上所要求的用于终止翻译的终止密码子。选择用于表达披露的全长免疫球蛋白重链和轻链序列的信号序列和/或终止密码子是在本领域技术人员的技术之内。还考虑到，这些可变区序列可以连接至其他恒定区序列以产生活性的全长免疫球蛋白重链和轻链。
编码全长Ch01G06嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序列(SEQID NO:175)
Figure BDA0000784036400001021
定义全长Ch01G06嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQID NO:176)
Figure BDA0000784036400001022
编码全长Hu01G06 IGHV1-18重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序 列(SEQ ID NO:177)
Figure BDA0000784036400001023
Figure BDA0000784036400001031
定义全长Hu01G06 IGHV1-18重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质 序列(SEQ ID NO:178)
Figure BDA0000784036400001033
编码全长Hu01G06 IGHV1-69重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序 列(SEQ ID NO:179)
Figure BDA0000784036400001032
Figure BDA0000784036400001041
定义全长Hu01G06 IGHV1-69重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质 序列(SEQ ID NO:180)
Figure BDA0000784036400001042
编码全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核 酸序列(SEQ ID NO:181)
Figure BDA0000784036400001043
定义全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋 白质序列(SEQ ID NO:182)
Figure BDA0000784036400001044
Figure BDA0000784036400001051
编码全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链(人源化重链可变区和人IgG1 恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:183)
Figure BDA0000784036400001052
定义全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链(人源化重链可变区和人IgG1 恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:184)
Figure BDA0000784036400001053
编码全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定 区)的核酸序列(SEQ ID NO:185)
Figure BDA0000784036400001061
定义全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定 区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:186)
Figure BDA0000784036400001062
编码全长Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定 区)的核酸序列(SEQ ID NO:187)
Figure BDA0000784036400001063
Figure BDA0000784036400001071
定义全长Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定 区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:188)
Figure BDA0000784036400001072
编码全长Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链(人源化重链可变区和人IgG1 恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:189)
Figure BDA0000784036400001073
Figure BDA0000784036400001081
定义全长Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L重链(人源化重链可变区和人IgG1 恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:190)
Figure BDA0000784036400001082
编码全长Hu01G06 IGHV1-18 F1重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸 序列(SEQ ID NO:255)
Figure BDA0000784036400001083
定义全长Hu01G06 IGHV1-18 F1重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白 质序列(SEQ ID NO:256)
Figure BDA0000784036400001084
Figure BDA0000784036400001091
编码全长Hu01G06 IGHV1-18 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸 序列(SEQ ID NO:257)
Figure BDA0000784036400001092
定义全长Hu01G06 IGHV1-18 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白 质序列(SEQ ID NO:258)
Figure BDA0000784036400001093
编码全长Hu01G06 IGHV1-69 F1重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸 序列(SEQ ID NO:259)
Figure BDA0000784036400001094
Figure BDA0000784036400001101
定义全长Hu01G06 IGHV1-69 F1重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白 质序列(SEQ ID NO:260)
Figure BDA0000784036400001102
编码全长Hu01G06 IGHV1-69 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸 序列(SEQ ID NO:261)
Figure BDA0000784036400001103
Figure BDA0000784036400001111
定义全长Hu01G06 IGHV1-69 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白 质序列(SEQ ID NO:262)
Figure BDA0000784036400001112
编码全长Ch06C11嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序列(SEQID NO:191)
Figure BDA0000784036400001113
定义全长Ch06C11嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQID NO:192)
Figure BDA0000784036400001121
编码全长HE LM 06C11 IGHV2-70重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核 酸序列(SEQ ID NO:193)
Figure BDA0000784036400001122
定义全长HE LM 06C11 IGHV2-70重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋 白质序列(SEQ ID NO:194)
Figure BDA0000784036400001123
Figure BDA0000784036400001131
编码全长Hu06C11 IGHV2-5重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:195)
Figure BDA0000784036400001132
定义全长Hu06C11 IGHV2-5重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质序 列(SEQ ID NO:196)
Figure BDA0000784036400001133
编码全长Ch14F11嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序列(SEQID NO:197)
Figure BDA0000784036400001134
Figure BDA0000784036400001141
定义全长Ch14F11嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质序列(SEQID NO:198)
Figure BDA0000784036400001142
编码全长Sh14F11 IGHV2-5重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:199)
Figure BDA0000784036400001143
Figure BDA0000784036400001151
定义全长Sh14F11 IGHV2-5重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质序 列(SEQ ID NO:200)
Figure BDA0000784036400001152
编码全长Sh14F11 IGHV2-70重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的核酸序 列(SEQ ID NO:201)
Figure BDA0000784036400001153
定义全长Sh14F11 IGHV2-70重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)的蛋白质 序列(SEQ ID NO:202)
Figure BDA0000784036400001165
编码全长Ch01G06嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ IDNO:203)
Figure BDA0000784036400001161
定义全长Ch01G06嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:204)
Figure BDA0000784036400001162
编码全长Hu01G06 IGKV1-39轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:205)
Figure BDA0000784036400001163
定义全长Hu01G06 IGKV1-39轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:206)
Figure BDA0000784036400001164
Figure BDA0000784036400001171
编码全长Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的 核酸序列(在此又称为全长Hu01G06 IGFV1-39 F1轻链；SEQ ID NO:207)
Figure BDA0000784036400001172
定义全长Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的 蛋白质序列(在此又称为全长Hu01G06 IGFV1-39 F1轻链；SEQ ID NO:208)
Figure BDA0000784036400001173
编码全长Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序 列(SEQ ID NO:209)
Figure BDA0000784036400001174
定义全长Hu01G06 IGKV1-39 V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质 序列(SEQ ID NO:210)
Figure BDA0000784036400001175
编码全长Hu01G06 IGKV1-39 F1轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(在此又称为全长Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻链；SEQ ID NO:207)
Figure BDA0000784036400001181
定义全长Hu01G06 IGKV1-39 F1轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序 列(在此又称为全长Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I轻链；SEQ ID NO:208)
Figure BDA0000784036400001182
编码全长Hu01G06 IGKV1-39 F2轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:263)
Figure BDA0000784036400001183
定义全长Hu01G06 IGKV1-39 F2轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序 列(SEQ ID NO:264)
Figure BDA0000784036400001184
编码全长Ch06C11嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ IDNO:211)
Figure BDA0000784036400001185
Figure BDA0000784036400001191
定义全长Ch06C11嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:212)
Figure BDA0000784036400001192
编码全长Sh06C11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:213)
Figure BDA0000784036400001193
定义全长Sh06C11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:214)
Figure BDA0000784036400001194
编码全长Ch14F11嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ IDNO:215)
Figure BDA0000784036400001195
Figure BDA0000784036400001201
定义全长Ch14F11嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序列(SEQ IDNO:216)
Figure BDA0000784036400001202
编码全长Hu14F11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的核酸序列(SEQ ID NO:217)
Figure BDA0000784036400001203
定义全长Hu14F11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)的蛋白质序列(SEQ ID NO:218)
Figure BDA0000784036400001204
表22是示出在本实例中所讨论的每个序列的SEQ ID NO.的索引表。
表22
Figure BDA0000784036400001205
Figure BDA0000784036400001211
表22续
Figure BDA0000784036400001212
Figure BDA0000784036400001221
表22续
Figure BDA0000784036400001222
以下表23示出了含有嵌合免疫球蛋白重链和轻链以及全长嵌合或人源化的免疫球蛋白重链和轻链的示例性组合的抗体。
表23
Figure BDA0000784036400001223
Figure BDA0000784036400001231
表23续
Figure BDA0000784036400001232
Figure BDA0000784036400001241
表23续
Figure BDA0000784036400001243
Figure BDA0000784036400001251
表23续
Figure BDA0000784036400001252
Figure BDA0000784036400001261
以下对含有全长嵌合重链和轻链的抗体构建体进行了命名：
嵌合01G06(Hu01G06-1)＝全长Ch01G06嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:176)加上全长Ch01G06嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ IDNO:204)
嵌合06C11(Hu06C11-1)＝全长Ch06C11嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:192)加上全长Ch06C11嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ IDNO:212)
嵌合14F11(Hu14F11-1)＝全长Ch14F11嵌合重链(小鼠重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:198)加上全长Ch14F11嵌合轻链(小鼠κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ IDNO:216)
以下对含有全长免疫球蛋白重链和轻链的15种可能的抗体构建体进行了命名，这些全长免疫球蛋白重链和轻链含有人源化可变区：
Hu01G06-46＝全长Hu01G06 IGHV1-18重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:178)加上全长Hu01G06 IGKV1-39轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQID NO:206)
Hu01G06-52＝全长Hu01G06 IGHV1-69重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:180)加上全长Hu01G06 IGKV1-39轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQID NO:206)
Hu01G06-107＝全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:184)加上全长Hu01G06IGKV1-39 V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:210)
Hu01G06-108＝全长Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:188)加上全长Hu01G06 IGKV1-39V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:210)
Hu01G06-112＝全长Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:184)加上全长Hu01G06IGKV1-39 S43A V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:208)
Hu01G06-113＝全长Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:188)加上全长Hu01G06 IGKV1-39S43A V48I轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:208)
Hu01G06-122＝全长Hu01G06 IGHV1-18 F1重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:256)加上全长Hu01G06 IGKV1-39 F1轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:208)
Hu01G06-127＝全长Hu01G06 IGHV1-18 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:258)加上全长Hu01G06 IGKV1-39 F2轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:264)
Hu01G06-135＝全长Hu01G06 IGHV1-69 F1重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:260)加上全长Hu01G06 IGKV1-39 F1轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:208)
Hu01G06-138＝全长Hu01G06 IGHV1-69 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:262)加上全长Hu01G06 IGKV1-39 F1轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:208)
Hu01G06-146＝全长Hu01G06 IGHV1-69 F2重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:262)加上全长Hu01G06 IGKV1-39 F2轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:264)
Hu06C11-27＝全长HE LM 06C11 IGHV2-70重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:194)加上全长Sh06C11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQ ID NO:214)
Hu06C11-30＝全长Hu06C11 IGHV2-5重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:196)加上全长Sh06C11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQID NO:214)
Hu14F11-39＝全长Sh14F11 IGHV2-5重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:200)加上全长Hu14F11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQID NO:218)
Hu14F11-47＝全长Sh14F11-IGHV2-70重链(人源化重链可变区和人IgG1恒定区)(SEQ ID NO:202)加上全长Hu14F11 IGKV1-16轻链(人源化κ链可变区和人κ恒定区)(SEQID NO:218)
实例15：人源化和嵌合的抗GDF15单克隆抗体的结合亲和性
使用
Figure BDA0000784036400001281
T100仪器(GE医疗保健公司，皮斯卡塔韦，NJ)，通过表面等离子体共振来测量嵌合和人源化的抗体对mFc-rhGDF15的结合亲和性和结合动力学。
根据标准方案，通过胺偶联将山羊抗人IgG(Fc片段特异性的，JacksonImmunoResearch公司，格罗夫西，PA)固定在羧甲基化葡聚糖CM4传感器芯片上。使用含有0.05％表面活性剂P20的PBS作为运行缓冲液，在37℃下进行分析。在10微升/分钟的流速下，在单个流动细胞中捕获这些抗体。对于每种抗体注射时间不同，以便产生30RU与60RU之间的Rmax。在60微升/分钟下，在参考表面(无捕获的抗体)和活性表面(有待测试的抗体)上依次注射缓冲液或稀释在运行缓冲液中的mFc-rhGDF15持续240秒。监测解离相持续到1200秒。然后在30微升/分钟的流速下，用两次60秒的10mM甘氨酸-HCl(pH 2.25)注射来再生该表面。所测试的GDF15浓度范围是20nM至0.625nM。
使用扣除两倍参考的BIAevaluation软件(GE医疗保健公司)的动力学函数来确定动力学参数。确定每种抗体的动力学参数ka(结合速率常数)、kd(解离速率常数)以及KD(平衡解离常数)。纯化的单克隆抗体对mFc-rhGDF15的动力学值概括于表24中。
表24
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
Hu01G06-1 4.2E+06 6.4E-04 1.6E-10 8
Hu01G06-46 3.6E+06 3.8E-04 1.1E-10 11
Hu01G06-52 3.6E+06 3.6E-04 9.9E-11 10
Hu06C11-1 5.3E+06 8.4E-04 1.8E-10 2
Hu06C11-27 4.7E+06 8.2E-04 1.8E-10 2
Hu06C11-30 4.8E+06 8.7E-04 1.8E-10 2
Hu14F11-1 3.0E+06 4.6E-04 1.6E-10 2
Hu14F11-39 3.0E+06 1.9E-04 6.6E-11 2
Hu14F11-47 3.3E+06 1.8E-04 6.5E-11 2
表24中的结果表现出嵌合的和每个人源化的抗体具有快速的结合速率(ka)、非常慢的解离速率(kd)以及非常高的亲和性(KD)。具体来说，这些抗体具有从约65pM至约200pM范围内的亲和性。
嵌合01G06(Hu01G06-1)、两种初始前导人源化01G06单克隆抗体(Hu01G06-46和Hu01G06-52)以及序列优化的人源化01G06单克隆抗体变体Hu01G06-100至Hu01G06-114(在上清液中)对mFc-rhGDF15的动力学值概括于表25中。
表25
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
Hu01G06-1 4.9E+06 7.1E-04 1.4E-10 3
Hu01G06-46 4.1E+06 4.3E-04 1.0E-10 3
Hu01G06-52 5.0E+06 4.4E-04 8.9E-11 3
Hu01G06-100 4.1E+06 6.2E-04 1.5E-10 3
Hu01G06-101 4.4E+06 6.3E-04 1.4E-10 3
Hu01G06-102 4.4E+06 4.6E-04 1.1E-10 3
Hu01G06-103 4.4E+06 4.7E-04 1.1E-10 3
Hu01G06-104 4.5E+06 5.2E-04 1.2E-10 3
Hu01G06-105 4.3E+06 5.6E-04 1.3E-10 3
Hu01G06-106 4.3E+06 7.0E-04 1.6E-10 3
Hu01G06-107 4.1E+06 4.7E-04 1.2E-10 3
Hu01G06-108 4.2E+06 4.6E-04 1.2E-10 3
Hu01G06-109 4.6E+06 5.6E-04 1.3E-10 4
Hu01G06-110 4.3E+06 5.8E-04 1.4E-10 4
Hu01G06-111 4.3E+06 6.6E-04 1.6E-10 3
Hu01G06-112 4.7E+06 5.3E-04 1.2E-10 3
Hu01G06-113 4.5E+06 4.8E-04 1.1E-10 3
Hu01G06-114 4.5E+06 5.4E-04 1.3E-10 3
表25中的结果表现出序列优化的抗体Hu01G06-100至Hu01G06-114具有从约89pM至约160pM范围内的结合亲和性。
在OctetTMQK仪器(ForteBio公司，门洛帕克(Menlo Park)，CA)上，使用生物层干涉测量法(BLI)来测量mFc-rhGDF15与嵌合14F11(Hu14F11-1)、具有嵌合重06C11的嵌合轻14F11(Hu14F11-23)以及具有嵌合重14F11的嵌合轻06C11(Hu14F11-24)重单克隆抗体变体(在上清液中)的结合亲和性和结合动力学。使用1X动力学缓冲液(ForteBio公司)作为测定缓冲液，在30℃下进行Octet分析。抗人IgG Fc捕获(AHC)生物传感器(ForteBio公司)用来捕获来到传感器上的人抗体。在测定之前，将传感器在测定缓冲液中饱和300秒。通过将传感器浸入抗体上清液溶液中持续220秒而将抗体负载到传感器上，这典型地引起1.5-2nm的捕获水平。通过将传感器浸入到1x测定缓冲液中持续200秒来建立基线。接下来，在400nMmFc-rhGDF15蛋白中监测结合持续220秒，并且接着在单独的缓冲液中解离持续600秒。
使用ForteBio分析软件7.0版本的动力学函数来确定Hu14F11-1、Hu14F11-23和Hu14F11-24的动力学参数。确定了抗体的动力学参数ka、kd和KD。
Hu14F11-1、Hu14F11-23和Hu14F11-24重单克隆抗体变体(在上清液中)对mFc-rhGDF15的动力学值概括于表26中。
表26
抗体 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) n
Hu14F11-1 6.3E+05 1.9E-05 3.2E-11 3
Hu14F11-23 3.4E+05 6.2E-05 1.8E-10 1
Hu14F11-24 7.1E+05 2.2E-04 3.1E-10 1
表26中的结果表现出Hu14F11-23和Hu14F11-24(即，由与一个嵌合14F11链(重或轻)混合的一个嵌合06C11链(重或轻)组成的抗体)保留结合GDF15。具体来说，这些抗体具有从约180pM至约310pM范围内的高亲和性。
实例16：亲和性成熟的人源化抗GDF15单克隆抗体的结合亲和性
使用
Figure BDA0000784036400001302
T100仪器(GE医疗保健公司，皮斯卡塔韦，NJ)，通过表面等离子体共振来测量嵌合和人源化的抗体对mFc-rhGDF15、裂解的rhGDF15、兔Fc成熟重组小鼠GDF15(rFc-rmGDF15)以及小鼠Fc成熟重组食蟹猴GDF15(mFc-rcGDF15)的结合亲和性和结合动力学。
根据标准方案，通过胺偶联将山羊抗人IgG(Fc片段特异性的，JacksonImmunoResearch公司，格罗夫西，PA)固定在羧甲基化葡聚糖CM4传感器芯片上。使用含有0.05％表面活性剂P20的PBS作为运行缓冲液，在37℃下进行分析。在10微升/分钟的流速下，在单个流动细胞中捕获这些抗体。对于每种抗体注射时间不同，以便产生30RU与60RU之间的Rmax。在60微升/分钟下，在参考表面(无捕获的抗体)和活性表面(有待测试的抗体)上依次注射缓冲液、稀释在运行缓冲液中的mFc-rhGDF15、裂解的rhGDF15、rFc-rmGDF15或mFc-rcGDF15持续240秒。监测解离相持续到1500秒。然后在30微升/分钟的流速下，用两次60秒的10mM甘氨酸-HCl(pH 2.25)注射来再生该表面。对于每种GDF15蛋白所测试的GDF15浓度是5nM至0.3125nM(两倍稀释物)。
使用扣除两倍参考的BIAevaluation软件(GE医疗保健公司)的动力学函数来确定动力学参数。确定每种抗体的动力学参数ka(结合速率常数)、kd(解离速率常数)以及KD(平衡解离常数)。纯化的单克隆抗体对mFc-rhGDF15、成熟人GDF15、rFc-rmGDF15以及mFc-rcGDF15的动力学值概括于表27中。
表27
Figure BDA0000784036400001301
Figure BDA0000784036400001311
表27中的结果表现出嵌合的和每个人源化的抗体具有快速的结合速率(ka)、非常慢的解离速率(kd)以及非常高的亲和性(KD)。具体来说，这些抗体具有从小于5pM(例如，约4.5pM)至约65pM范围内的亲和性。实例17：HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中的恶病质逆转
本实例表现出在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中由人源化01G06、06C11、14F11抗体引起的恶病质逆转(如通过体重损失所指示)。如上在实例10中所述，使HT-1080细胞在37℃下在培养中生长并且皮下接种到8周龄雌性ICR-SCID小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到93％时，将小鼠随机分成多个组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：鼠IgG对照、以2mg/kg的01G06、06C11、14F11以及它们对应的人源化形式。通过腹膜内注射来一天一次给予处理。用01G06、Hu01G06-46和Hu01G06-52进行抗体处理引起体重对于初始重量而增加或100％(p<0.001)(图23)。使用ANOVA进行统计分析。在HT-1080模型中对于在一定天数时体重逆转的结果各自示于图23和表28中。
表28
Figure BDA0000784036400001312
图23和表28中的数据表明抗体01G06、Hu01G06-46和Hu01G06-52可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质逆转。
用06C11、Hu06C11-27和Hu06C11-30进行抗体处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图24)。使用ANOVA进行统计分析。对于在HT-1080模型中体重逆转的结果示于图24和表29中。
表29
Figure BDA0000784036400001321
图24和表29中的数据表明抗体06C11、Hu06C11-27和Hu06C11-30可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质逆转。
用14F11、Hu14F11-39和Hu14F11-47进行抗体处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图25)。使用ANOVA进行统计分析。对于在HT-1080模型中体重逆转的结果示于图25和表30中。
表30
Figure BDA0000784036400001322
图25和表30中的数据表明抗体14F11、Hu14F11-39和Hu14F11-47可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质逆转。
用人源化01G06抗体(即，抗体Hu01G06-122、Hu01G06-127、Hu01G06-135、Hu01G06-138以及Hu01G06-146)进行抗体处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图26)。使用ANOVA进行统计分析。使用人IgG(hIgG)进行的处理用作对照。对于在HT-1080模型中体重逆转的结果示于图26和表31中。
表31
Figure BDA0000784036400001323
图26和表31中的数据表明人源化抗GDF15抗体Hu01G06-122、Hu01G06-127、Hu01G06-135、Hu01G06-138以及Hu01G06-146可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质逆转。
实例18：mFc-rhGDF15诱导的模型中的恶病质逆转
本实例表现出在mFc-rhGDF15诱导的恶病质模型中由人源化01G06抗体(即，抗体Hu01G06-122、Hu01G06-127、Hu01G06-135、Hu01G06-138或Hu01G06-146)引起的恶病质逆转(如通过体重损失所指示)。将mFc-rhGDF15(1μg/g)皮下给予到8周龄雌性ICR-SCID小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到93％时，将小鼠随机分成6组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：人IgG对照(hIgG)、以2mg/kg的Hu01G06-122、Hu01G06-127、Hu01G06-135、Hu01G06-138或Hu01G06-146。通过腹膜内注射给予处理一次。用抗体Hu01G06-122、Hu01G06-127、Hu01G06-135、Hu01G06-138或Hu01G06-146进行处理引起体重相对于初始重量增加或约100％(p<0.001)(图27和表32)。
表32
Figure BDA0000784036400001331
图27和表32中的数据表明披露的抗GDF15抗体可以在mFc-rhGDF15诱导的小鼠模型(即，不带有肿瘤的小鼠模型)中使恶病质逆转。
这些结果表明人源化抗GDF15抗体可以在mFc-rhGDF15诱导的恶病质模型中使恶病质逆转。
实例19：HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中的恶病质剂量反应逆转
本实例表现出在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中由人源化Hu01G06-127和Hu01G06-135抗体引起的恶病质剂量反应逆转(如通过体重损失所指示)。如上在实例10中所述，使HT-1080细胞在37℃下在培养中生长并且皮下接种到8周龄雌性ICR-SCID小鼠的肋部中。每天测量体重。当体重达到93％时，将小鼠随机分成多个组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：人IgG对照(hIgG；20mg/kg)、Hu01G06-127(20mg/kg、2mg/kg或0.2mg/kg)以及Hu01G06-135(20mg/kg、2mg/kg或0.2mg/kg)。通过静脉内注射来一天一次给予处理。用20mg/kg下的Hu01G06-127和Hu01G06-135进行抗体处理引起体重增加超过初始重量或108％(p<0.001)(图28)。用2mg/kg下的Hu01G06-127和Hu01G06-135进行抗体处理引起与对照(hIgG)相比体重从初始重量有限地下降或88％-85％(p<0.001)(图28)。使用ANOVA进行统计分析。对于在HT-1080模型中研究结束时体重变化的结果示于图28和表33中。
表33
Figure BDA0000784036400001341
图28和表33中的数据表明抗体Hu01G06-127和Hu01G06-135可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中以剂量依赖性方式使恶病质逆转。
实例20：HT-1080异种移植物肿瘤模型中的肌肉和脂肪损失逆转
本实例表现出在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中由抗体01G06引起的恶病质逆转(如通过体重损失、肌肉质量损失和脂肪质量损失所指示)。使用含有10％FBS的伊格尔最低基础培养基(ATCC，目录号30-2003)，使HT-1080细胞在含有5％CO2的大气中在37℃下在培养中生长。以50％基质胶中5×106个细胞/小鼠，将细胞皮下接种到8周龄雌性ICRSCID小鼠的肋部中。选择具有相同体重的一组10个8周龄雌性ICR SCID小鼠的同龄组用于以基质胶进行向肋部的皮下接种，作为非肿瘤(SHAM)对照分支。每天测量体重。当在带有肿瘤的小鼠中体重达到91％时，将小鼠随机分成2组，每组10个小鼠。每个组接受下列处理中的一种：在第1天、第3天和第6天人IgG对照(hIgG)或Hu01G06-12710mg/kg。通过腹膜内注射来给予处理。用抗体Hu01G06-127进行处理引起与不带有肿瘤的对照小鼠相比体重增加到初始重量的105％(SHAM；p<0.001)(图29A和表34)。
表34
Figure BDA0000784036400001342
图29A和表34中的数据表明披露的抗GDF15抗体可以在HT-1080纤维肉瘤异种移植物模型中使恶病质完全逆转。
在本实验中，在给药(基线或91％体重损失，没有处理)时和在研究结束时(给药之后8天，或者hIgG或者Hu01G06-127以及SHAM非肿瘤对照小鼠)处死一组10个小鼠。手术去除性腺脂肪和腓肠肌并且称重。如在图29B中所示，与基线对照(91％体重损失)相比，在使用hIgG给药之后7天观察到显著的性腺脂肪质量损失，但在用抗体Hu01G06-127处理的组中没有观察到显著的性腺脂肪质量损失。此外，用Hu01G06-127处理不仅预防进一步脂肪损失(与基线组相比)，而且能够恢复性腺脂肪的正常水平(与SHAM非肿瘤对照相比)(图29B)。另外，与基线对照(91％体重损失)相比，在使用hIgG给药之后7天观察到显著的腓肠肌质量损失，但在用抗体Hu01G06-127处理的组中没有观察到显著的腓肠肌质量损失(图29C)。用Hu01G06-127处理不仅预防进一步肌肉损失(与基线组相比)，而且能够恢复腓肠肌的正常水平(与SHAM非肿瘤对照相比)(图29C)。
这些结果表明所披露的抗GDF15抗体可以由肌肉质量损失、脂肪损失和不自主重量驻极化损失所测量在HT-1080异种移植物肿瘤模型中使恶病质完全逆转。
引入参考
出于所有的目的，在此所提到的每个专利文件和科学论文的整个披露内容均通过引用结合在此。
等同方案
可以按其他具体形式实施本发明而不背离本发明的精神或本质特征。因此，上述的实施例被认为在所有方面是用作说明的而不是对在此所描述的本发明进行限制。因此，本发明的范围是由所附的权利要求书而不是通过上述的说明来指明的，并且在权利要求书的等效性的含义和范围之内的所有变化均旨在涵盖于其中。
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Claims (56)

1.一种结合人GDF15的分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体包含选自下组的一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该组由以下各项组成：
(a)(i)按照卡巴特定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:238的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；或者
(ii)按照乔西亚定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:234的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:241的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；
(b)(i)按照卡巴特定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:237的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:244的氨基酸序列组成；或者
(ii)按照乔西亚定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:241的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:244的氨基酸序列组成；
(c)(i)按照卡巴特定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；或者
(ii)按照乔西亚定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:143的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；
(d)(i)按照卡巴特定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:236的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；或者
(ii)按照乔西亚定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:240的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；
(e)(i)按照卡巴特定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:239的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；或者
(ii)按照乔西亚定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:234的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:240的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成；
(f)(i)按照卡巴特定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:239的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:244的氨基酸序列组成；或者
(ii)按照乔西亚定义，一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含：一个CDRH1，该CDRH1由SEQ ID NO:234的氨基酸序列组成；一个CDRH2，该CDRH2由SEQ ID NO:240的氨基酸序列组成；以及一个CDRH3，该CDRH3由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成；以及一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：一个CDRL1，该CDRL1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；一个CDRL2，该CDRL2由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成；以及一个CDRL3，该CDRL3由SEQ ID NO:244的氨基酸序列组成。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中这些CDR序列被插入人构架序列或人源化构架序列之间。
3.一种分离的核酸，包含编码如权利要求1所述的免疫球蛋白重链可变区的一个核苷酸序列。
4.一种分离的核酸，包含编码如权利要求1所述的免疫球蛋白轻链可变区的一个核苷酸序列。
5.一种表达载体，包含如权利要求3所述的核酸。
6.一种表达载体，包含如权利要求4所述的核酸。
7.如权利要求6所述的表达载体，进一步包含如权利要求3所述的核酸。
8.一种宿主细胞，包含如权利要求5所述的表达载体。
9.一种宿主细胞，包含如权利要求6所述的表达载体。
10.一种宿主细胞，包含如权利要求7所述的表达载体。
11.如权利要求9所述的宿主细胞，进一步包含如权利要求5所述的表达载体。
12.一种产生包含一个免疫球蛋白重链可变区或一个免疫球蛋白轻链可变区的多肽的方法，该方法包括：
(a)在使得如权利要求8或9所述的宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链可变区或该免疫球蛋白轻链可变区的多肽的条件下，使该宿主细胞生长；以及
(b)纯化包含该免疫球蛋白重链可变区或该免疫球蛋白轻链可变区的多肽。
13.一种产生结合人GDF15的抗体或该抗体的抗原结合片段的方法，该方法包括：
(a)在使得如权利要求10或11所述的宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链可变区和/或该免疫球蛋白轻链可变区的一种或多种多肽的条件下，使该宿主细胞生长从而产生该抗体或该抗体的抗原结合片段；以及
(b)纯化该抗体或该抗体的抗原结合片段。
14.一种结合人GDF15的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含选自下组的一个免疫球蛋白重链可变区和一个免疫球蛋白轻链可变区，该组由以下各项组成：
(a)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:250的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列；
(b)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:248的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:254的氨基酸序列；
(c)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列；
(d)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列；
(e)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:246的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列；
(f)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:252的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列；
(g)一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:252的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:254的氨基酸序列。
15.一种结合人GDF15的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：一个免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO:250的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。
16.一种分离的核酸，包含编码如权利要求14所述的免疫球蛋白重链可变区的一个核苷酸序列。
17.一种分离的核酸，包含编码如权利要求14所述的免疫球蛋白轻链可变区的一个核苷酸序列。
18.一种表达载体，包含如权利要求16所述的核酸。
19.一种表达载体，包含如权利要求17所述的核酸。
20.如权利要求19所述的表达载体，进一步包含如权利要求16所述的核酸。
21.一种宿主细胞，包含如权利要求18所述的表达载体。
22.一种宿主细胞，包含如权利要求19所述的表达载体。
23.一种宿主细胞，包含如权利要求20所述的表达载体。
24.如权利要求22所述的宿主细胞，进一步包含如权利要求18所述的表达载体。
25.一种产生包含一个免疫球蛋白重链可变区或一个免疫球蛋白轻链可变区的多肽的方法，该方法包括：
(a)在使得如权利要求21或22所述的宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链可变区或该免疫球蛋白轻链可变区的多肽的条件下，使该宿主细胞生长；以及
(b)纯化包含该免疫球蛋白重链可变区或该免疫球蛋白轻链可变区的多肽。
26.一种产生结合人GDF15的抗体或该抗体的抗原结合片段的方法，该方法包括：
(a)在使得如权利要求23或24所述的宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链可变区和/或该免疫球蛋白轻链可变区的一种或多种多肽的条件下，使该宿主细胞生长从而产生该抗体或该抗体的抗原结合片段；以及
(b)纯化该抗体或该抗体的抗原结合片段。
27.一种结合人GDF15的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含选自下组的一个免疫球蛋白重链和一个免疫球蛋白轻链，该组由以下各项组成：
(a)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:260的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列；
(b)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:264的氨基酸序列；
(c)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列；
(d)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列；
(e)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:256的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列；
(f)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列；
(g)一个免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列；和一个免疫球蛋白轻链，该免疫球蛋白轻链包含SEQ ID NO:264的氨基酸序列。
28.一种分离的核酸，包含编码如权利要求27所述的免疫球蛋白重链的一个核苷酸序列。
29.一种分离的核酸，包含编码如权利要求27所述的免疫球蛋白轻链的一个核苷酸序列。
30.一种表达载体，包含如权利要求28所述的核酸。
31.一种表达载体，包含如权利要求29所述的核酸。
32.如权利要求31所述的表达载体，进一步包含如权利要求28所述的核酸。
33.一种宿主细胞，包含如权利要求30所述的表达载体。
34.一种宿主细胞，包含如权利要求31所述的表达载体。
35.一种宿主细胞，包含如权利要求32所述的表达载体。
36.如权利要求34所述的宿主细胞，进一步包含如权利要求30所述的表达载体。
37.一种产生包含一个免疫球蛋白重链或一个免疫球蛋白轻链的多肽的方法，该方法包括：
(a)在使得如权利要求33或34所述的宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链或该免疫球蛋白轻链的多肽的条件下，使该宿主细胞生长；以及
(b)纯化包含该免疫球蛋白重链或该免疫球蛋白轻链的多肽。
38.一种产生结合人GDF15的抗体或该抗体的抗原结合片段的方法，该方法包括：
(a)在使得如权利要求35或36所述的宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链和/或该免疫球蛋白轻链的一种或多种多肽的条件下，使该宿主细胞生长从而产生该抗体或该抗体的抗原结合片段；以及
(b)纯化该抗体或该抗体的抗原结合片段。
39.如权利要求1、2、14、15或27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体是以下中的一种或多种：
(a)单克隆抗体；
(b)嵌合抗体、人源化抗体或人抗体；
(c)人IgG1、IgG2或IgG4同种型抗体；
(d)双特异性抗体；或
(e)Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、单链抗体、微型抗体或双抗体。
40.一种分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体与如权利要求1、2、14、15、27、39或40中任一项所述的抗体竞争结合人GDF15。
41.一种分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段结合人GDF15上与如权利要求1、2、14、15、27或39中任一项所述的抗体相同的表位。
42.如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于一种在哺乳动物中治疗恶病质的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予有效量的所述的药物。
43.如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于抑制与基础性疾病相关联的肌肉质量损失的方法，该方法包括给予有效量的所述的药物以预防或减少肌肉质量损失。
44.如权利要求43所述的用途，其中该基础性疾病是选自下组，该组由以下各项组成：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。
45.如权利要求43所述的用途，其中该肌肉质量损失伴随有脂肪质量损失。
46.如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于一种在哺乳动物中抑制或减少不自主重量损失的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予有效量的所述的药物。
47.如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于一种抑制与基础性疾病相关联的器官质量损失的方法，该方法包括给予有效量的所述的药物以预防或减少器官质量损失。
48.如权利要求47所述的用途，其中该基础性疾病是选自下组，该组由以下各项组成：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏疾病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿关节炎、脓毒症以及结核病。
49.如权利要求47所述的用途，其中该器官是肾脏、肝脏、心脏或脾脏。
50.如权利要求47所述的用途，其中该器官质量损失伴随有肌肉质量损失、脂肪质量损失或不自主重量损失。
51.如权利要求42所述的用途，进一步包括向有需要的哺乳动物给予一种第二试剂，其中该第二试剂是选自下组，该组由以下各项组成：活化素-A的抑制剂、ActRIIB的抑制剂、IL-6的抑制剂、IL-6R的抑制剂、黑皮质素肽抑制剂、黑皮质素受体抑制剂、生长素释放肽、生长素释放肽模拟物、GHS-R1a激动剂、SARM、TNFα抑制剂、IL-1α抑制剂、肌肉生成抑制素抑制剂、β-阻断剂以及抗癌剂。
52.如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于一种在哺乳动物中治疗肌少症的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予有效量的所述的药物。
53.如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于一种在哺乳动物中增加抗癌剂的最大耐受剂量的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予有效量的所述的药物。
54.如权利要求53所述的用途，其中该抗癌剂在该哺乳动物中引起恶病质。
55.如权利要求54所述的用途，其中与该抗癌剂组合来给予该抗体或其抗原结合片段。
56.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1、2、14、15、27、39、40或41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和一种药学上可接受的载体。
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