CN116997357A - 针对gdf-15的抗体 - Google Patents

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Abstract

本披露涉及与人GDF‑15结合的抗体及其抗原结合片段。这些抗体和片段可用于例如检测人GDF‑15和/或用于治疗与人GDF‑15的过表达相关的癌症或体重减轻、包括恶病质的方法中。

Description

针对GDF-15的抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年3月8日提交的美国临时专利申请63/158,274的优先权，将该申请通过援引以其全文特此并入。
对经由EFS-WEB以电子方式提交的序列表的引用
将以电子方式提交的序列表(名称：GDF15-100-WO-PCT_Seqlisting_ST25；大小：195,622字节；以及创建日期为：2022年3月2日)的内容通过援引以其全文并入本文。
背景技术
生长/分化因子15(GDF-15；也称为巨噬细胞抑制细胞因子(MIC-1)、NSAID活化基因1蛋白(NAG-1)、NSAID调节基因1蛋白(NRG-1)、胎盘TGF-β、胎盘骨形态发生蛋白和前列腺分化因子)是TGFβ超家族的分泌型同源二聚体蛋白。已知GDF-15在炎症、妊娠和体重调节中具有功能性作用。在健康的组织中，GDF-15的表达在胎盘和前列腺上皮中是最高的。然而，GDF-15也在许多实体恶性肿瘤中表达，并且在几种癌症中的表达与患者预后不良相关。
仍然迫切需要可用于治疗癌症的抗体。本披露提供了此类抗GDF-15抗体。
发明内容
本文提供了与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段包含可变重链(VH)互补决定区(CDR)1、VHCDR2、VH CDR3、可变轻链(VL)CDR1、VL CDR2、和VL CDR3，其中该VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2、和VL CDR3包含选自由以下组成的组的序列：(a)分别为SEQ IDNO：3-5、12-14；(b)分别为SEQ ID NO：21-23、30-32；(c)分别为SEQ ID NO：39-41、48-50；(d)分别为SEQ ID NO：57-59、66-68；(e)分别为SEQ ID NO：75-77、84-86；(f)分别为SEQ IDNO：93-95、102-104；(g)分别为SEQ ID NO：111-113、120-122；(h)分别为SEQ ID NO：129-131、138-140；(i)分别为SEQ ID NO：147-149、156-158；(j)分别为SEQ ID NO：165-167、174-176；(k)分别为SEQ ID NO：183-185、192-194；(l)分别为SEQ ID NO：201-203、210-212；(m)分别为SEQ ID NO：219-221、228-230；(n)分别为SEQ ID NO：237-239、246-248；(o)分别为SEQ ID NO：255-257、264-266；(p)分别为SEQ ID NO：273-275、282-284；(q)分别为SEQ ID NO：291-293、300-302；(r)分别为SEQ ID NO：309-311、318-320；(s)分别为SEQ IDNO：327-329、336-338；(t)分别为SEQ ID NO：345-347、354-356；(u)分别为SEQ ID NO：363-365、372-374；(v)分别为SEQ ID NO：381-383、390-392；(w)分别为SEQ ID NO：399-401、408-410；(x)分别为SEQ ID NO：417-419、426-428；(y)分别为SEQ ID NO：435-437、444-446；以及(z)分别为SEQ ID NO：453-455、462-464。
在一些方面，与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段包含AB1170002、AB1170006、AB1170010、AB1170019、AB1170028、AB1170036、AB1170040、AB1170043、AB1170047、AB1170069、AB1170070、AB1170072、AB1170073、AB1170074、AB1170086、AB1170148、AB1170241、AB1170242、AB1170243、AB1170244、AB1170245、AB1170246、AB1170247、AB1170248、AB1170249、或AB1520085的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VLCDR2、和VL CDR3。在一些方面，这些CDR是卡巴特(Kabat)定义的CDR、乔西亚(Chothia)定义的CDR、IMGT定义的CDR、或AbM定义的CDR。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH包含SEQ ID NO：2、20、38、56、74、92、110、128、146、164、182、200、218、236、254、272、290、308、326、344、362、380、398、416、434、或452的氨基酸序列。在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VL包含SEQ ID NO：11、29、47、65、83、101、119、137、155、173、191、209、227、245、263、281、299、317、335、353、371、389、407、425、443、或461的氨基酸序列。
在一些方面，与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段包含VH区和VL，其中VH包含SEQ ID NO：2、20、38、56、74、92、110、128、146、164、182、200、218、236、254、272、290、308、326、344、362、380、398、416、434、或452的氨基酸序列。
在一些方面，一种与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该轻链可变区包含SEQ ID NO：11、29、47、65、83、101、119、137、155、173、191、209、227、245、263、281、299、317、335、353、371、389、407、425、443、或461的氨基酸序列。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH和VL包含选自由以下组成的组的序列：(a)分别为SEQ ID NO：2和11；(b)分别为SEQ ID NO：20和29；(c)分别为SEQ ID NO：38和47；(d)分别为SEQ ID NO：56和65；(e)分别为SEQ ID NO：74和83；(f)分别为SEQ ID NO：92和101；(g)分别为SEQ ID NO：110和119；(h)分别为SEQ ID NO∶128和137；(i)分别为SEQ ID NO：146和155；(j)分别为SEQ ID NO：164和173；(k)分别为SEQ ID NO：182和191；(l)分别为SEQ ID NO：200和209；(m)分别为SEQ ID NO：218和227；(n)分别为SEQID NO：236和245；(o)分别为SEQ ID NO：254和263；(p)分别为SEQ ID NO：272和281；(q)分别为SEQ ID NO：290和299；(r)分别为SEQ ID NO：308和317；(s)分别为SEQ ID NO：326和335；(t)分别为SEQ ID NO：344和353；(u)分别为SEQ ID NO：362和371；(v)分别为SEQ IDNO：380和389；(w)分别为SEQ ID NO：398和407；(x)分别为SEQ ID NO：416和425；(y)分别为SEQ ID NO：434和443；以及(z)分别为SEQ ID NO：452和461。在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含VH和/或VL，该VH包含SEQ ID NO：326的序列，该VL包含SEQ ID NO：335的序列。
在一些方面，与人GDF-15特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段与参考抗体结合相同的表位，该参考抗体包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO：326的序列，该VL包含SEQID NO：335的序列。在一些方面，该表位使用氢/氘交换测定法确定。
在一些方面，与人GDF-15特异性结合的单克隆抗体或抗原结合片段竞争性抑制参考抗体与GDF-15的结合，其中该参考抗体包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO：326的序列，该VL包含SEQ ID NO：335的序列。
在一些方面，单克隆抗体或其抗原结合片段与GDF-15的表位结合，该GDF-15的表位包含成熟GDF-15的氨基酸E25-W32中的氨基酸(SEQ ID NO：485)、成熟GDF-15的氨基酸V33-Q40中的氨基酸(SEQ ID NO：486)、和/或成熟GDF-15的氨基酸I89-L105中的氨基酸(SEQ ID NO：487)。
在一些方面，与人GDF-15特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段抑制GDF-15与GFRAL的相互作用并抑制GDF-15与RET的相互作用。
在一些方面，该抗体或抗原结合片段与食蟹猴GDF-15结合。在一些方面，该抗体或抗原结合片段与小鼠GDF-15结合。在一些方面，该抗体或抗原结合片段与食蟹猴GDF-15和小鼠GDF-15结合。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段能够抑制癌细胞的增殖。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该增殖被抑制至少25％、至少50％、或至少75％。抗体或其抗原结合片段抑制癌细胞的增殖的能力可以通过以下确定：将癌细胞(例如，LNCaP细胞)以5000个细胞/孔的密度铺板在96孔板中，用浓度从400-25nM的抗体或其抗原结合片段处理这些细胞，将这些细胞孵育3天，并基于ATP测量这些细胞的活力，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下相比，在其存在的情况下的较低活力指示该抗体或其抗原结合片段能够抑制这些癌细胞的增殖。在一些方面，该抗体或其抗原结合片段能够活化树突状细胞。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，该活化增加一倍。抗体或其抗原结合片段活化树突状细胞的能力可以通过以下确定：将单核细胞以100万个细胞/mL的密度铺板在6孔板中，用100ng/ml IL-4和100ng/mLGM-CSF处理这些单核细胞6天，向这些孔添加15nM CD40L和10μg/ml的抗GDF15抗体两天，并通过流式细胞术分析这些细胞的CD14和CD1a的表达以确认这些细胞分化为树突状细胞，以及CD83、CD86、连同IL-12p70分泌以测量活化，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下相比，在其存在的情况下的增加的CD83、CD86、或IL-12p70指示该抗体或其抗原结合片段能够活化树突状细胞。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段能够增加T细胞的增殖。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该增加是至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。抗体或其抗原结合片段增加T细胞的增殖的能力可以通过以下确定：将分离的CD3细胞以100，000个细胞/孔的密度铺板在用10μg/ml抗CD3和10μg/ml抗CD28抗体包被的96孔板中，添加浓度从33.3-0.05nM的抗体并使用Cell Titer Glo(普洛麦格公司(Promega))测量这些细胞的增殖，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下相比，在其存在的情况下的较高活力指示该抗体或其抗原结合片段能够抑制T细胞的增殖。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段能够增加Th1细胞的分化。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的分化相比，该增加是至少1.5倍或至少2倍。抗体或其抗原结合片段增加Th1细胞的分化的能力可以通过以下确定：将分离的CD4+T细胞以250,000个细胞/孔的密度铺板在用10mg/mL小鼠抗CD3抗体包被的24孔板中，添加10ug/mL的抗体或其抗原结合片段5天，并通过ELISA分析培养上清液的TNF-α和IFNγ分泌，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下相比，在其存在的情况下TNF-α和IFNγ分泌的水平增加指示该抗体或其抗原结合片段能够增加Th1细胞的分化。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段抑制GDF-15与GFRAL的相互作用。在一些方面，该抗体或其抗原结合片段抑制GDF-15与RET的相互作用。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段与表位结合，该表位包含成熟GDF-15的氨基酸E25-W32中的氨基酸(SEQ ID NO：485)、成熟GDF-15的氨基酸V33-Q40中的氨基酸(SEQID NO：486)、和/或成熟GDF-15的氨基酸I89-L105中的氨基酸(SEQ ID NO：487)。
在一些方面，该抗体或抗原结合片段包含重链，该重链包含含有SEQ ID NO：474的序列的重链恒定结构域。在一些方面，该抗体或抗原结合片段包含轻链，该轻链包含含有SEQ ID NO：475的序列的轻链恒定结构域。
在一些方面，该抗体或抗原结合片段进一步包含重链恒定区。在一些方面，该重链恒定区选自由以下组成的组：人免疫球蛋白IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、以及IgA2重链恒定区。在一些方面，该重链恒定区是人IgG1恒定区。
在一些方面，该抗体或抗原结合片段进一步包含轻链恒定区。在一些方面，该轻链恒定区选自由人免疫球蛋白IgGκ和IgGλ轻链恒定区组成的组。在一些方面，该轻链恒定区是人IgGκ轻链恒定区。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段是IgG抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含已经被工程化以改善半衰期的Fc区。在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含具有YTE突变的Fc区。在一些方面，该抗体或其抗原结合片段包含具有L234F/L235E/P331S三重突变(TM)的Fc区。
在一些方面，该抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。
在一些方面，抗体或抗原结合片段是全长抗体。在一些方面，该抗体或抗原结合片段是抗原结合片段。在一些方面中，该抗原结合片段包含Fab、Fab’、F(ab’)2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、胞内抗体、IgGΔCH2、微抗体、F(ab’)3、四抗体、三抗体、双抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、或scFv-Fc。
在一些方面，该抗体或其抗原结合片段进一步包含可检测的标记。
本文还提供了分离的多核苷酸。在一些方面，分离的多核苷酸包含编码本文提供的抗体或其抗原结合片段的VH或重链的核酸分子。在一些方面，分离的多核苷酸包含编码本文提供的抗体或其抗原结合片段的VL或轻链的核酸分子。
本文还提供了载体。在一些方面，载体包含本文提供的多核苷酸。在一些方面，该载体是分离的。
本文还提供了宿主细胞。在一些方面，宿主细胞包含本文提供的多核苷酸、载体、或载体的组合。在一些方面，该宿主细胞选自由CHO、NS0、PER-C6、HEK-293、和HeLa细胞组成的组。在一些方面，该宿主细胞是分离的。
本文还提供了产生抗体或其抗原结合片段的方法。在一些方面，产生抗体或其抗原结合片段的方法包括培养本文提供的宿主细胞，使得产生该抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该方法进一步包括从培养物分离该抗体或其抗原结合片段。
本文还提供了通过本文提供的方法产生的抗体或其抗原结合片段。
本文还提供了组合物。在一些方面，组合物包含本文提供的抗体或抗原结合片段。在一些方面，该组合物进一步包含药学上可接受的载剂。
本文还提供了使用抗体或其抗原结合片段的方法。在一些方面，治疗受试者中的癌症的方法包括向该受试者施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。在一些方面，该癌症是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、或前列腺癌。在一些方面，该癌症是GDF-15表达性癌症。
在一些方面，抑制癌细胞的增殖的方法包括使这些癌细胞与本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物接触。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该增殖被抑制至少25％、至少50％、或至少75％。在一些方面，这些癌细胞是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、或前列腺癌细胞。
在一些方面，活化树突状细胞的方法包括使这些树突状细胞与本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物接触。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，该抗体或其抗原结合片段使树突状细胞的活化增加一倍。
在一些方面，增加T细胞的增殖的方法包括使T细胞与本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物接触。在一些方面，与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该抗体或其抗原结合片段使T细胞的增殖增加至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。
在一些方面，增加Th1细胞的分化的方法包括使Th1细胞与本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物接触。在一些方面，该抗体或抗原结合片段使Th1细胞的分化增加至少1.5倍或至少2倍。
在一些方面，抑制GDF-15与RET的相互作用的方法包括使该GDF-15和/或该RET与本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物接触。
在一些方面，抑制GDF-15与GFRAL的相互作用的方法包括使该GDF-15和/或该GFRAL与本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物接触。
在本文提供的方法的一些方面，该接触在体外发生。在本文提供的方法的一些方面，该接触在受试者中发生。在一些方面，该受试者患有癌症，任选地其中该癌症是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、或前列腺癌。
在一些方面，治疗受试者中的恶病质的方法包括施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。
在一些方面，抑制受试者中与恶病质相关的肌肉质量的损失的方法包括施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。在一些方面，该肌肉质量的损失伴随脂肪质量的损失。
在一些方面，抑制或减少受试者中与恶病质相关的非自愿的体重减轻的方法包括施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。
在一些方面，抑制受试者中与恶病质相关的器官质量的损失的方法包括施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。在一些方面，该器官是肾、肝、心、或脾。在一些方面，该器官质量的损失伴随肌肉质量的损失、脂肪质量的损失或非自愿的体重减轻。
在一些方面，增加患有恶病质的受试者的食欲的方法包括施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。
在一些方面，降低受试者中的恶病质的发生率和/或严重程度、从而增加能够在受试者中引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量的方法包括向该受试者施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。
在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
在一些方面，治疗受试者中与恶病质相关的肌少症的方法包括向该受试者施用本文提供的抗体或抗原结合片段或组合物。
在一些方面，检测样品中的人GDF-15的方法包括使该样品与本文提供的抗体或抗原结合片段接触。在一些方面，该样品获自受试者。在一些方面，该受试者患有癌症。
附图说明
图1示出了使用标准抗原呈递ELISA，GDF-15抗体与人GDF-15的结合特异性。(参见实例4。)
图2示出了使用标准抗原呈递ELISA，GDF-15抗体与TGFβ1(安迪生物公司(R&DSystems)240-B)的结合不存在。(参见实例4。)
图3示出了使用标准抗原呈递ELISA，GDF-15抗体与BMP7(安迪生物公司354-BP/CF)的结合不存在。(参见实例4。)
图4示出了GDF-15抗体对前列腺细胞的增殖的影响。“241”指示AB1170241。安迪生物公司指示对照抗体A。Iso 1指示阴性对照抗体。(参见实例6。)
图5A、5B和5C示出了GDF-15抗体对单核细胞衍生的树突状细胞中共刺激蛋白的表达的影响。“241”指示AB1170241。安迪生物公司指示对照抗体A。Iso 1指示阴性对照抗体。***指示p<0.005，并且****指示p<0.001。(参见实例7。)
图6示出了GDF-15抗体对T细胞增殖的影响。GDF15(-)示出了在重组hu-GDF15不存在的情况下的增殖的水平，而GDF15(+)示出了在重组hu-GDF15存在的情况下的T细胞的增殖的水平。“241”指示AB1170241。(参见实例8。)
图7A和7B示出了GDF-15抗体逆转GDF-15对T细胞抑制的能力。(参见实例8。)
图8示出了GDF-15抗体逆转GDF-15对Th1分化抑制的能力。(参见实例9。)
图9示出了GDF-15抗体逆转GDF-15对树突状细胞(DC)活化标志物下调的能力。(参见实例10。)
图10示出了证明LL/2模型中树突状细胞和CD8细胞的活化的流式细胞术数据。(参见实例11。)
图11示出了证明MBT2模型中树突状细胞和CD8细胞的活化的流式细胞术数据。(参见实例11。)
图12示出了GDF-15抗体在抗PD-L1难治性LL/2和MBT2同基因肿瘤中证明了抗肿瘤活性，50％的动物示出了出完全的肿瘤消退。(参见实例11。)
图13A和13B示出了使用HDX-MS差异数据的在成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的增加的保护。在图13A中，顶行示出了与图13B中的作图对应的归一化的HDX-MS差异数据(仅显示增加的保护)。与单独的GDF15相比，GDF15-Fab复合物中的黑色/深灰色区受到更多保护。底行示出了指示数据集中表示GDF15蛋白的区是哪些的GDF15肽覆盖。图13B示出了在PDB结构5vz3(GDF15)上作图的归一化的HDX-MS差异数据。与单独的GDF15相比，成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的两个区V33-Q40(SEQ ID NO：486)和I89-L105(黑色/深灰色)(SEQ ID NO：487)受到更多保护，这指示结合。归一化基于具有氘摄取的最大差异(27％，黑白条)的肽。(参见实例12。)
图14A和14B示出了缺少HDX-MS的区。图14A是GDF15肽覆盖图，突出了在与图14B中的作图对应的HDX-MS数据集中未检测到的成熟GDF15蛋白(SEQ ID NO：479)的区(顶行，黑色)。图14B示出了在PDB结构5vz3(GDF15)上作图的HDX-MS数据集中缺少的GDF15区。未检测到肽的区(黑色)主要是N末端和中央胱氨酸结(半胱氨酸侧链示出为棒状)。(参见实例12。)
图15示出了成熟GDF15的受保护区与其GFRAL结合位点重叠。将归一化的HDX-MS差异数据在PDB结构5vz3(GDF15)上作图，并叠加了GFRAL的晶体结构(5vz4)。与单独的成熟GDF15相比，成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的黑色/深灰色区受到更多保护，这指示保护。归一化基于具有氘摄取的最大差异(27％，黑白条)的肽。(参见实例12。)
图16A和16B示出了使用HDX-MS差异数据的在成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的增加的暴露。在图16A中，顶行示出了与图16B中的作图对应的归一化的HDX-MS差异数据(仅显示增加的暴露)。与单独的成熟GDF15相比，一个区H58-L65(Heel结构域)在GDF1 5-AB1170241 Fab复合物中暴露更多。然而，该差异比在图13A和13B中观察到的保护要弱得多。图16B示出了在PDB结构5vz3(GDF15)上作图的归一化的HDX-MS差异暴露数据。与单独的GDF15相比，成熟GDF15-AB1170241Fab复合物中的两个区V33-Q40(SEQ ID NO：486)和I89-L104(黑色/深灰色)(SEQ ID NO：487)受到更多保护，这指示结合。此外，E25-W32延伸(SEQID NO：485)受到弱保护。归一化基于具有氘摄取的最大差异(27％，黑白条)的肽。(参见实例12。)
图17A和17B示出了使用HDX-MS差异数据的在成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的增加的保护。在图17A中，顶行示出了与图17A中的作图对应的归一化的HDX-MS差异数据(仅显示增加的保护)。与单独的成熟GDF15相比，成熟的GDF15-AB1170241Fab复合物中的黑色/深灰色区受到更多保护。底行示出了指示数据集中表示了GDF蛋白的哪些区的GDF15肽覆盖。图17B示出了在PDB结构5vz3(GDF15)上作图的归一化的HDX-MS差异数据。与单独的成熟GDF15相比，成熟GDF15-AB1170241Fab复合物中的两个区V33-Q40(SEQ ID NO：486)和I89-L104(黑色/深灰色)(SEQ ID NO：487)受到更多保护，这指示结合。此外，E25-W32(SEQID NO：485)延伸受到弱保护。归一化基于在该数据集中具有氘摄取的最大差异(23％，黑白条)的肽。(参见实例12。)
图18A和18B示出了缺少HDX-MS的区。图18A是GDF15肽覆盖图，突出了在与图18B中的作图对应的HDX-MS数据集中未检测到的成熟GDF15蛋白的区(顶行，黑色)。图18B示出了在PDB结构5vz3(GDF15)上作图的HDX-MS数据集中缺少的成熟GDF15区。未检测到肽的区(黑色)主要是N末端和中央半胱氨酸结(半胱氨酸侧链示出为棒状)。(参见实例12。)
图19示出了成熟GDF15的受保护区与其GFRAL结合位点重叠。将归一化的HDX-MS差异数据在PDB结构5vz3(GDF15)上作图，并叠加了GFRAL的晶体结构(5vz4)。与单独的GDF15相比，成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的黑色/深灰色区受到更多保护，这指示保护。归一化基于具有氘摄取的最大差异(23％，黑白条)的肽。
(参见实例12。)
图20A和20B示出了使用HDX-MS差异数据的在成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中的增加的暴露。在图20A中，顶行示出了与图20B中的作图对应的归一化的HDX-MS差异数据(仅显示增加的暴露)。与单独的GDF15相比，一个区H58-L65(Heel结构域)在成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物中暴露更多。然而，该差异比在图17A和17B中观察到的保护要弱得多。图20B示出了在PDB结构5vz3(GDF15)上作图的归一化的HDX-MS差异暴露数据。归一化基于具有氘摄取的最大差异(23％，黑白条)的肽。(参见实例12。)
图21总结了在实例12的实验1中使用成熟GDF15蛋白和预形成的成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物获得的表位作图结果。
图22总结了在实例12的实验2中使用成熟GDF15蛋白、预形成的成熟GDF15-AB1170241 Fab复合物、和AB1170241 Fab获得的数据。
具体实施方式
本披露提供了人GDF-15的抗体及其抗原结合片段。
I.定义
如本文所用，术语“GDF-15”或“GDF15”是指哺乳动物GDF-15多肽，这些多肽包括但不限于天然GDF-15多肽和GDF-15多肽的同种型。“GDF-15”涵盖全长、未加工的GDF-15多肽以及细胞内加工产生的GDF-15多肽的形式。如本文所用，术语“人GDF-15”是指包含SEQ IDNO：469的氨基酸序列的多肽；天然存在的SEQ ID NO：469的变体，包括但不限于其中任一D存在于SEQ ID NO：469的位置202处的其变体(即SEQ ID NO：471)；以及SEQ ID NO：469或SEQ ID NO：471的加工形式，包括但不限于缺少其例如来自氨基酸1-29的信号肽的SEQ IDNO：469或SEQ ID NO：471，或缺少信号肽和前结构域两者的SEQ ID NO：469或SEQ ID NO：471(即，包含氨基酸SEQ ID NO：479和SEQ ID NO：480的成熟形式)。“GDF-15多核苷酸”、“GDF-15核苷酸”、或“GDF-15核酸”是指编码任何GDF-15的多核苷酸，包括上述那些。
术语“抗体”意指通过免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点识别并特异性结合靶标(如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质、或前述的组合)的免疫球蛋白分子。如本文所用，术语“抗体”涵盖完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的融合蛋白、以及任何其他经修饰的免疫球蛋白分子，只要这些抗体展现出所希望的生物活性即可。抗体可以是以下五大类别的免疫球蛋白中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(同种型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)，基于它们的重链恒定结构域的特性，分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白具有不同的和熟知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸的或缀合至其他分子如毒素、放射性同位素等。
术语“抗GDF-15抗体”、“GDF-15抗体”和“与GDF-15结合的抗体”是这样的抗体，该抗体能够以足够的亲和力和特异性与GDF-15结合，使得该抗体可用作诊断剂、治疗剂、和/或GDF-15活性的调节剂。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指由B细胞的单个克隆产生并与相同表位结合的抗体。相比之下，术语“多克隆抗体”是指由不同的B细胞产生并与相同抗原的不同表位结合的抗体群体。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分。“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”或“抗原结合区”是指与抗原结合的完整抗体的一部分。抗原结合片段可以含有完整抗体的抗原决定区(例如，互补决定区(CDR))。抗体的抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、线性抗体和单链抗体。抗体的抗原结合片段可以源自任何动物物种，如啮齿动物(例如，小鼠、大鼠或仓鼠)和人，或者可以人工产生。
全抗体典型地由四个多肽组成：重(H)链多肽的两个相同拷贝和轻(L)链多肽的两个相同拷贝。每条重链含有一个N末端可变(VH)区和三个C末端恒定(CHI、CH2和CH3)区，并且每条轻链含有一个N末端可变(VL)区和一个C末端恒定(CL)区。每对轻链和重链的可变区形成抗体的抗原结合位点。VH和VL区具有相同的一般结构，其中每个区包含四个框架区，这些框架区的序列是相对保守的。如本文所用，术语“框架区”是指可变区内的相对保守的氨基酸序列，这些氨基酸序列位于高变区或互补决定区(CDR)之间。每个可变结构域中有四个框架区，这些框架区被命名为FW1、FW2、FW3、和FW4。框架区形成提供可变区的结构框架的β折叠(参见例如，C.A.Janeway等人(编辑)，Immunobiology[免疫生物学]，第5版，GarlandPublishing[加兰出版社]，纽约州纽约市(2001))。三个CDR(称为CDR1、CDR2和CDR3)形成抗体的“高变区”，该高变区负责抗原结合。
术语“VL”和“VL结构域”可互换用于指抗体的轻链可变区。
术语“VH”和“VH结构域”可互换用于指抗体的重链可变区。
术语“卡巴特编号”和类似术语在本领域中是公认的并且是指对抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在一些方面，可以根据卡巴特编号系统来确定CDR(参见例如，Kabat EA和Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci[纽约科学院年鉴]190∶382-391以及Kabat EA等人，(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest[免疫学相关蛋白序列]，第五版，U.S.Department of Health and HumanServices[美国卫生与公共服务部]，NIH公开号91-3242)。使用卡巴特编号系统，抗体重链分子内的CDR典型地存在于氨基酸位置31至35(任选地可包括位置35之后的一个或两个另外的氨基酸(在卡巴特编号方案中称为35A和35B))(CDR1)、氨基酸位置50至65(CDR2)和氨基酸位置95至102(CDR3)。使用卡巴特编号系统，抗体轻链分子内的CDR典型地存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。在一些方面，已根据卡巴特编号方案确定本文所述的抗体的CDR。
相反，乔西亚是指结构环的位置(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196：901-917(1987))。乔西亚CDR-H1环的末端在使用卡巴特编号惯例编号时在H32与H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为卡巴特编号方案将插入放在H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，那么环在32处结束；如果只存在35A，那么环在33处结束；如果35A和35B两者都存在，那么环在34处结束)。AbM高变区代表卡巴特CDR和乔西亚结构环之间的折衷，并且被牛津分子公司(Oxford Molecular)的AbM抗体建模软件使用。
如本文所用，术语“恒定区”或“恒定结构域”是可互换的并且具有其在本领域中常见的含义。恒定区是抗体的一部分，例如轻链和/或重链的羧基末端部分，该部分不直接涉及抗体与抗原的结合，但是可以展现出各种效应子功能，如与Fc受体的相互作用。相对于免疫球蛋白可变结构域，免疫球蛋白分子的恒定区通常具有更保守的氨基酸序列。
如本文所用，术语“重链”在用于指抗体时可以基于恒定结构域的氨基酸序列指任何不同的类型，例如alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)，分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包括IgG亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链氨基酸序列是本领域熟知的。在一些方面，重链是人重链。
如本文所用，术语“轻链”在用于指抗体时可以基于恒定结构域的氨基酸序列指任何不同的类型，例如，kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域熟知的。在一些方面，轻链是人轻链。
术语“嵌合”抗体或其抗原结合片段是指其中氨基酸序列源自两个或更多个物种的抗体或其抗原结合片段。典型地，轻链和重链的可变区对应于源自具有所希望的特异性、亲和力和能力的一个物种的哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗体或其抗原结合片段的可变区，而恒定区同源于源自另一物种(通常为人)的抗体或其抗原结合片段中的序列，以避免在该物种中引起免疫应答。
“人源化”抗体是包含人抗体支架和获得自或源自非人抗体的至少一个CDR的抗体。非人抗体包括从任何非人动物(如例如啮齿动物(例如，小鼠或大鼠))中分离出的抗体。人源化抗体可以包含获得自或源自非人抗体的一个、两个或三个CDR。全人抗体不含有获得自或源自非人动物的任何氨基酸残基。应理解的是，与小鼠抗体或嵌合抗体相比，全人和人源化抗体在人中诱导免疫反应的风险更低(参见，例如，Harding等人，mAbs[单克隆抗体]，2(3)：256-26(2010))。
术语“人”抗体或其抗原结合片段意指具有源自人免疫球蛋白基因座的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，其中这样的抗体或抗原结合片段是使用本领域已知的任何技术制备的。人抗体或其抗原结合片段的定义包括完整抗体或全长抗体及其片段。
“结合亲和力”通常是指分子(例如抗体或其抗原结合片段)的单个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如抗体或其抗原结合片段和抗原)之间的1：1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)表示。亲和力可以以本领域中已知的多种方式测量和/或表示，包括但不限于平衡解离常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD是根据koff/kon的商计算的，而KA是根据kon/koff的商计算的。kon是指例如抗体或其抗原结合片段与抗原的缔合速率常数，并且koff是指例如抗体或其抗原结合片段与抗原的解离速率常数。kon和koff可以通过本领域普通技术人员已知的技术来确定，如或KinExA。
如本文所用，“表位”是本领域中的术语并且是指抗原中抗体或其抗原结合片段可以特异性结合的局部区。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以例如一起来自一个或多个多肽的两个或更多个非连续区(构象性、非线性、不连续或非连续的表位)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合的表位可以通过例如NMR光谱法、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定法、氢/氘交换联合质谱法(例如，液相色谱电喷雾质谱法)、基于阵列的寡肽扫描测定法和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)确定。对于X射线晶体学，可以使用本领域中任何已知的方法来完成结晶(例如，GiegéR等人，(1994)ActaCrystallogr D Biol Crystallogr[晶体学报D辑：生物晶体学]50(Pt 4)：339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem[欧洲生物化学杂志]189：1-23；Chayen NE(1997)Structure[结构]5：1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem[生物化学杂志]251：6300-6303)。抗体/其抗原结合片段：抗原晶体可使用为人熟知的X射线衍射技术进行研究并且可使用计算机软件精细化，如X-PLOR(耶鲁大学(Yale University)，1992，由分子模拟公司(Molecular Simulations，Inc.)分销；参见，例如，Meth Enzymol[酶学方法](1985)第114和115卷，编辑Wyckoff HW等人；U.S.2004/0014194)、以及BUSTER(Bricogne G(1993)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr[晶体学报D辑：生物晶体学]49(Pt 1)：37-60；Bricogne G(1997)Meth Enzymol[酶学方法]276A：361-423，编辑Carter CW；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr[晶体学报D辑：生物晶体学]56(Pt10)：1316-1323)。可以使用本领域技术人员已知的任何方法来完成诱变作图研究。对于诱变技术(包括丙氨酸扫描诱变技术)的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)J Biol Chem[生物化学杂志]270：1388-1394以及Cunningham BC和Wells JA(1989)Science[科学]244：1081-1085。
与参考抗体“结合相同表位”的抗体是指与参考抗体结合相同氨基酸残基的抗体。抗体与参考抗体结合相同表位的能力可以通过氢/氘交换测定(参见，Coales等人，RapidCommun.Mass Spectrom.[质谱学快报]2009；23：639-647)或x射线晶体学来确定。
如本文所用，术语“免疫特异性结合”、“免疫特异性识别”、“特异性结合”和“特异性识别”在抗体或其抗原结合片段的上下文中是类似术语。这些术语指示抗体或其抗原结合片段经由其抗原结合结构域与表位结合并且指示结合需要抗原结合结构域与表位之间有一些互补性。因此，例如，与人GDF-5“特异性结合”的抗体也可以与来自其他物种的GDF-15(例如，食蟹猴和/或小鼠GDF-15)和/或从人等位基因产生的GDF-15蛋白结合，但与不相关的非GDF-15蛋白(例如，TGFβ1或BMP7)的结合程度小于抗体与GDF-15的结合的约10％，如例如通过ELISA测定测量的。
如果抗体优先与给定表位或重叠表位结合，其程度为在一定程度上阻断参考抗体与表位的结合，则该抗体被认为“竞争性抑制”参考抗体与该表位的结合。竞争性抑制可以通过本领域已知的任何方法确定，例如竞争性ELISA测定以及实例4中使用的测定。抗体可被认为将参考抗体与给定表位的结合竞争性抑制至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
术语“核酸序列”旨在涵盖DNA或RNA的聚合物(即，多核苷酸)，该聚合物可以是单链或双链的并且可以含有非天然的或改变的核苷酸。如本文所用，术语“核酸”和“多核苷酸”是指任何长度的核苷酸(核糖核苷酸(RNA)或脱氧核糖核苷酸(DNA))的聚合形式。这些术语是指分子的一级结构，并因此包括双链和单链DNA，以及双链和单链RNA。这些术语包括由核苷酸类似物和修饰的多核苷酸(如但不限于甲基化的多核苷酸和/或加帽的多核苷酸)制成的RNA或DNA类似物作为等同物。核酸典型地经由磷酸键连接以形成核酸序列或多核苷酸，尽管许多其他的连接(例如，硫代磷酸酯、硼代磷酸酯等)是本领域已知的。
“分离的”多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是呈自然界中未发现形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括已经被纯化至它们不再呈自然界中发现形式的程度的那些。在一些方面，分离的抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。如本文所用，“基本上纯的”是指至少50％纯(即，不含污染物)、至少90％纯、至少95％纯、至少98％纯或至少99％纯的材料。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换地使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖已经被天然修饰或通过以下干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或者任何其他操纵或修饰，如与标记组分缀合。该定义还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域已知的其他修饰的多肽。应当理解，由于本披露的多肽是基于抗体的，因此在一些方面，这些多肽可以作为单链或相关链出现。
“同一性百分比”是指两个序列(例如，氨基酸序列或核酸序列)之间的同一性程度。可以通过比对两个序列，引入空位以最大化序列之间的同一性来确定同一性百分比。可以使用本领域已知的程序来产生比对。为了本文的目的，核苷酸序列的比对可以用设为默认参数的blastn程序进行，而氨基酸序列的比对可以用设为默认参数的blastp程序进行(参见万维网上的国家生物技术信息中心(NCBI)，ncbi.nlm.nih.gov)。
如本文所用，术语“宿主细胞”可以是任何类型的细胞，例如原代细胞、培养中的细胞或来自细胞系的细胞。在一些方面，术语“宿主细胞”是指用核酸分子转染的细胞及这样的细胞的后代或潜在后代。这样的细胞的后代可能与用核酸分子转染的亲代细胞不相同，例如这归因于可发生在成功传代或核酸分子整合入宿主细胞基因组中的过程中的突变或环境影响。
如本文所用，“转染”、“转化”或“转导”是指通过使用物理或化学方法将一个或多个外源性多核苷酸引入宿主细胞中。许多转染技术是本领域已知的，并且包括例如，磷酸钙DNA共沉淀(参见，例如，Murray E.J.(编辑)，Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]，第7卷，Gene Transfer and Expression Protocols[基因转移和表达协议]，HumanaPress[胡玛纳出版社](1991))；DEAE-葡聚糖；电穿孔；阳离子脂质体介导的转染；钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston，Nature[自然]，346：776-777(1990))；以及磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人，Mo1.Cell Biol.[分子细胞生物学]，7：2031-2034(1987))。感染性颗粒在合适的包装细胞(其中许多包装细胞是可商购获得的)中生长后，可以将噬菌体或病毒载体引入宿主细胞中。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其形式使得活性成分的生物活性是有效的，并且其不含对将施用该配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。配制品可以是无菌的。
如本文所用，术语“施用(administer、administering、administration)”等是指可用于将药物(例如，抗GDF-15抗体或其抗原结合片段)递送至所希望的生物作用位点的方法。可以与本文所述的药剂和方法一起使用的施用技术可参见例如Goodman和Gilman，ThePharmacological Basis of Therapeutics[治疗学的药理学基础]，现行版本，Pergamon[培格曼出版公司]；以及Remington’s，Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]，现行版本，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.[宾夕法尼亚州伊斯顿麦克出版公司]。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换地使用。该受试者可以是哺乳动物，如非人动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠、小鼠、猴或其他灵长类等)。在一些方面，该受试者是食蟹猴。在一些方面，该受试者是人。
术语“治疗有效量”是指有效治疗受试者的疾病或病症的药物(例如抗GDF-15抗体或其抗原结合片段)的量。
术语如“治疗(treating或treatment或to treat)”或“缓和(alleviating或toalleviate)”是指治愈、减慢已诊断的病理性病症或障碍，减轻已诊断的病理性病症或障碍的症状，和/或停止已诊断的病理性病症或障碍的进展的治疗性措施。因此，需要治疗的那些包括已经诊断患有或怀疑患有该障碍的那些。
如本文所用，术语“癌症”和“癌性”是指哺乳动物的生理病症，其中细胞群的特征在于不受控制的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、母细胞瘤和肉瘤。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、胃肠(道)癌、肾脏癌、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性胶质母细胞瘤、宫颈癌、脑癌、胃部癌、膀胱癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、鳞状细胞头颈癌、肾细胞癌、梅克尔细胞癌、尿路上皮癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、绒毛膜癌、口腔癌、皮肤癌和食管癌。该癌症可以是“表达GDF-15的癌症”或“GDF-15表达性癌症”。此类术语是指包含表达GDF-15的细胞的癌症。
如本文所用，“恶病质”意指与潜在疾病相关的代谢综合征，其特征在于肌肉质量的非自愿损失。恶病质通常伴有非自愿的体重减轻、脂肪质量的损失、厌食、炎症、胰岛素抵抗、疲劳、无力、明显食欲不振、和/或肌肉蛋白分解的增加。恶病质不同于饥饿、与年龄相关的肌肉质量的损失、吸收不良和甲状腺功能亢进。与恶病质相关的潜在疾病包括癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
如本文所用，“肌少症”被理解为主要以骨骼肌质量和肌力的损失为特征的病症。肌少症通常与衰老相关。参见Ruegg和Glass(2011)ANNUAL REV.PHARMACOL.TOXICOL.[药理学和毒理学年度评论]51：373-395。在一种方法中，如果受试者的四肢骨骼肌质量除以该受试者的身高(以米计)的值在年轻人正常平均值以下大于2个标准偏差，则可以在受试者中鉴定出肌少症。(Thomas(2007)同上；还参见Baumgartner等人(1999)MECH.AGEING DEV.[衰老与发育机制]147：755-763)。
如在本披露和权利要求中所用，单数形式“一种/个(a/an)”和“该”包括复数形式，除非在上下文中的其他地方清楚地指出。
应当理解，无论在什么情况下在本文中用语言“包含”描述方面时，还提供了关于“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似方面。在本披露中，“包含(comprises、comprising)”、“含有(containing)”和“具有(having)”等可以意指“包括(includes、including)”等；“基本上由……组成(consisting essentially of或consistsessentially of)”是开放性的，允许超出所叙述的存在，只要所叙述的基本或新颖特征不被超过叙述的存在改变，但是排除现有技术方面。
除非明确声明或从上下文显而易见，如本文所用，术语“或”被理解为包括在内。如本文在短语如“A和/或B”中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”和“B”。同样，如在短语如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下中的每一个：A、B、和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。本文使用术语“或”并不意指替代方案是相互排斥的。
如本文所用，术语“约”包括叙述的数字±10％。因此，“约10”意指9至11。如本领域技术人员所理解的，本文提及的“约”值或参数包括(并描述)针对该值或参数本身的方面。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。
本文提供的任何化合物(例如，抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞)、组合物、或方法可以与本文提供的任何其他化合物、组合物、和方法中一种或多种组合。
II.抗GDF-15抗体
在一些方面，本文提供了与GDF-15(例如，人GDF-15)特异性结合的抗体(例如，单克隆抗体，如小鼠、嵌合、人源化、或人抗体)及其抗原结合片段。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合。在一些方面，抗体或其抗原结合片段与人和食蟹猴GDF-15结合。在一些方面，抗体或其抗原结合片段与人和鼠GDF-15结合。在一些方面，抗体或其抗原结合片段与人、食蟹猴、和鼠GDF-15结合。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合，并包含表1和2中列出的抗体的六个CDR(即，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR)。
表1：VH CDR氨基酸序列
表2：VL CDR氨基酸序列
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合并包含表3中列出的抗体的VH。
表3：可变重链(VH)氨基酸序列
抗体 VH氨基酸序列(SEQ ID NO)
AB1170002 SEQ ID NO：2
AB1170006 SEQ ID NO：20
AB1170010 SEQ ID NO：38
AB1170019 SEQ ID NO：56
AB1170028 SEQ ID NO：74
AB1l70036 SEQ ID NO：92
AB1170040 SEQ ID NO：110
AB1170043 SEQ ID NO：128
AB1170047 SEQ ID NO：146
AB1170069 SEQ ID NO：164
AB1170070 SEQ ID NO：182
AB1170072 SEQ ID NO：200
AB1170073 SEQ ID NO：218
AB1170074 SEQ ID NO：236
AB1170086 SEQ ID NO：254
AB1170148 SEQ ID NO：272
AB1170242 SEQ ID NO：290
AB1170243 SEQ ID NO：308
AB1170241 SEQ ID NO：326
AB1170244 SEQ ID NO：344
AB1170245 SEQ ID NO：362
AB1170246 SEQ ID NO：380
AB1170247 SEQ ID NO：398
AB1170248 SEQ ID NO：416
AB1170249 SEQ ID NO：434
AB1520085 SEQ ID NO：452
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合并包含表4中列出的抗体的VL。
表4：可变轻链(VL)氨基酸序列
/>
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合，并包含表3和4中列出的抗体的VH和VL(即，表3中列出的抗体的VH和表4中列出的相同抗体的VL)。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合并包含表5中列出的抗体的VH框架区。
表5.VH框架氨基酸序列
/>
/>
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合并包含表6中列出的抗体的VL框架区。
表6.VL框架氨基酸序列
/>
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合，并包含表5和6中列出的抗体的四个VH框架区和四个VL框架区(即，表5中列出的抗体的四个VH框架区和表6中列出的相同抗体的VL框架区)。
下文实例中使用的抗体的氨基酸序列总结在表7中。
表7：抗体CDR、可变区、以及VH和VL框架的SEQ ID NO
抗体 H CDR L CDR VH VL VH FW VL FW
AB1170002 3-5 12-14 2 11 6-9 15-18
AB1170006 21-23 30-32 20 29 24-27 33-36
AB1170010 39-41 48-50 38 47 42-45 51-54
AB1170019 57-59 66-68 56 65 60-63 69-72
AB1170028 75-77 84-86 74 83 78-81 87-90
AB1170036 93-95 102-104 92 101 96-99 105-108
AB1170040 111-113 120-122 110 119 114-117 123-126
AB1170043 129-131 138-140 128 137 132-135 141-144
AB1170047 147-149 156-158 146 155 150-153 159-162
AB1170069 165-167 174-176 164 173 168-171 177-180
AB1170070 183-185 192-194 182 191 186-189 195-198
AB1170072 201-203 210-212 200 209 204-207 213-216
AB1170073 219-221 228-230 218 227 222-225 231-234
AB1170074 237-239 246-248 236 245 240-243 249-252
AB1170086 255-257 264-266 254 263 258-261 267-270
AB1170148 273-275 282-284 272 281 276-279 285-288
AB1170242 291-293 300-302 290 299 294-297 303-306
AB1170243 309-311 318-320 308 317 312-315 321-324
AB1170241 327-329 336-338 326 335 330-333 339-342
AB1170244 345-347 354-356 344 353 348-351 357-360
AB1170245 363-365 372-374 362 371 366-369 375-378
AB1170246 381-383 390-392 380 389 384-387 393-396
AB1170247 399-401 408-410 398 407 402-405 411-414
AB1170248 417-419 426-428 416 425 420-423 429-432
AB1170249 435-437 444-446 434 443 438-441 447-450
AB1520085 453-455 462-464 452 461 456-459 465-468
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段通过其单独的VL结构域或其单独的VH结构域，或通过其单独的3个VL CDR或其单独的3个VH CDR来描述。参见例如，Rader C等人，(1998)PNAS[美国国家科学院院刊]95：8910-8915，将其通过援引以其全文并入本文，其描述了通过鉴定分别来自于人轻链或重链文库的互补轻链或重链来进行小鼠抗αvβ3抗体的人源化，产生具有与原始抗体亲和力一样高或更高的亲和力的人源化抗体变体。还参见Clackson T等人，(1991)Nature[自然]352：624-628，将其通过援引以其全文并入本文，其描述了通过使用特定VL结构域(或VH结构域)并筛选文库中的互补可变结构域来产生与特定抗原结合的抗体的方法。筛选产生了特定VH结构域的14个新配偶体和特定VL结构域的13个新配偶体，如通过ELISA所确定，它们是强结合剂。还参见Kim SJ和Hong HJ，(2007)JMicrobiol[微生物学杂志]45：572-577，将其通过援引以其全文并入本文，其描述了通过使用特定VH结构域并筛选文库(例如，人VL文库)中的互补VL结构域来产生与特定抗原结合的抗体的方法；所选择的VL结构域又可以用于指导对另外的互补(例如人)VH结构域的选择。
在一些方面，可以根据乔西亚编号方案确定抗体或其抗原结合片段的CDR，乔西亚编号方案是指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如，Chothia C和Lesk AM，(1987)，J MolBiol[分子生物学杂志]196：901-917；Al-Lazikani B等人，(1997)J Mol Biol[分子生物学杂志]273：927-948；Chothia C等人，(1992)J Mol Biol[分子生物学杂志]227：799-817；Tramontano A等人，(1990)J Mol Biol[分子生物学杂志]215(1)：175-82；以及美国专利号7,709,226)。典型地，当使用卡巴特编号惯例时，乔西亚CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34处，乔西亚CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56处，并且乔西亚CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102处，而乔西亚CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34处，乔西亚CDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56处，并且乔西亚CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97处。乔西亚CDR-H1环的末端在使用卡巴特编号惯例编号时在H32与H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为卡巴特编号方案将插入放在H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，那么环在32处结束；如果只存在35A，那么环在33处结束；如果35A和35B两者都存在，那么环在34处结束)。
在一些方面，本文提供了包含GDF-15抗体的乔西亚VH和VL CDR的抗体及其抗原结合片段。在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含一个或多个CDR，其中乔西亚和卡巴特CDR具有相同的氨基酸序列。在一些方面，本文提供了包含卡巴特CDR和乔西亚CDR的组合的抗体及其抗原结合片段。
在一些方面，可以根据如Lefranc M-P，(1999)The Immunologist[免疫学家]7：132-136和Lefranc M-P等人，(1999)Nucleic Acids Res[核酸研究]27：209-212中所述的IMGT编号系统来确定抗体或其抗原结合片段的CDR。根据IMGT编号方案，VH-CDR1处于位置26至35，VH-CDR2处于位置51至57，VH-CDR3处于位置93至102，VL-CDR1处于位置27至32，VL-CDR2处于位置50至52，并且VL-CDR3处于位置89至97。在一些方面，本文提供了包含GDF-15抗体的IMGT VH和VL CDR的抗体及其抗原结合片段，例如，如在Lefranc M-P(1999)同上和Lefranc M-P等人，(1999)同上中所述。
在一些方面，可以根据MacCallum RM等人，(1996)J Mol Biol[分子生物学杂志]262：732-745确定抗体或其抗原结合片段的CDR。还参见例如Martin A.“Protein Sequenceand Structure Analysis of Antibody Variable Domains[抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析]，”在Antibody Engineering[抗体工程]中，Kontermann和Dübel编辑，第31章，第422-439页，Springer-Verlag，Berlin[柏林斯普林格出版社](2001)。在一些方面，本文提供了包含通过MacCallum RM等人的方法确定的GDF-15抗体的VH和VL CDR的抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，可以根据AbM编号方案确定抗体或其抗原结合片段的CDR，AbM编号方案是指代表卡巴特CDR和乔西亚结构环之间折衷的AbM高变区，并且被牛津分子的AbM抗体建模软件(牛津分子集团有限公司(Oxford Molecular Group，Inc.))使用。在一些方面，本文提供了包含如通过AbM编号方案确定的GDF-15抗体的VH和VL CDR的抗体或抗原结合片段。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少80％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少80％相同的序列。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少85％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少85％相同的序列。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少90％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少90％相同的序列。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少95％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少95％相同的序列。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少96％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少96％相同的序列。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少97％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少97％相同的序列。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少98％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少98％相同的序列。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；并且包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少99％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少99％相同的序列。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少80％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少80％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少85％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少85％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少90％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少90％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR);包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少95％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少95％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少96％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少96％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少97％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少97％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少98％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少98％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少99％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少99％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够将癌细胞的增殖抑制例如至少25％、至少50％、或至少75％。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少80％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少80％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少85％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少85％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少90％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少90％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少95％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少95％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少96％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少96％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少97％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少97％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少98％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少98％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少99％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少99％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，能够活化树突状细胞，例如使树突状细胞的活化增加一倍。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少80％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少80％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少85％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少85％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少90％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少90％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少95％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少95％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VLCDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少96％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少96％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少97％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少97％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少98％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少98％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合；包含本文提供的抗体的六个CDR(例如，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR，或表3中列出的VH和表4中列出的对应VL的卡巴特定义的、乔西亚定义的、IMGT定义的、或AbM定义的CDR)；包含VH和VL，该VH包含与表3中相同抗体的VH序列至少99％相同的序列，该VL包含与表4中相同抗体的VL序列至少99％相同的序列；并且与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，能够使T细胞的增殖增加例如至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。
在一些方面，本文提供了包含重链恒定区和/或轻链恒定区的抗体或其抗原结合片段。关于重链，在一些方面，本文所述的抗体的重链可以是alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。
在一些方面，该重链可包含人alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中所列的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含人gamma(γ)重链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中所列的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含SEQ ID NO：473的氨基酸序列。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中所列的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含SEQ ID NO：474的氨基酸序列。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段的轻链是人κ轻链或人λ轻链。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表4中所列的序列，并且其中轻链的恒定区包含人κ或λ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表4中所列的序列，并且其中轻链的恒定区包含人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表4中所列的氨基酸序列，并且其中轻链的恒定区包含SEQID NO：475的氨基酸序列。
示例性重链和轻链恒定区在表8中提供。
表8.恒定区序列
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在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体包含含有本文所述的任何氨基酸序列的VH结构域和VL结构域，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在一些方面，与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的本文所述的抗体包含含有本文所述的任何氨基酸序列的VH结构域和VL结构域，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。在一些方面，恒定区包含人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，单克隆抗体或片段)可以包含任何合适类别(例如，IgG、IgA、IgD、IgM、和IgE)的恒定区(Fc)，该恒定区已经被修饰以便改善该抗体或抗原结合片段(例如，单克隆抗体或片段)的半衰期。例如，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，单克隆抗体或片段)可以包含Fc，该Fc包含突变，该突变使相对于不具有该突变的相同抗体半衰期得以延长。
Fc区工程化在本领域中被广泛用于延长治疗性抗体的半衰期并避免体内降解。在一些方面，可以修饰IgG抗体或抗原结合片段的Fc区，以便增加IgG分子对新生儿Fc受体(FcRn)的亲和力，从而介导IgG分解代谢并避免IgG分子降解。合适的Fc区氨基酸取代或修饰是本领域已知的并且包括例如三重取代：在位置252处的甲硫氨酸(M)至酪氨酸(Y)取代、在位置254处的丝氨酸(S)至苏氨酸(T)取代、以及在位置256处的苏氨酸(T)至谷氨酸(E)取代，根据如卡巴特中的EU索引进行编号(M252Y/S254T/T256E；称为“YTE”)(参见例如，美国专利7,658,921；美国专利申请公开2014/0302058；和Yu等人，Antimicrob.AgentsChemother.[抗微生物药剂和化疗]，61(1)：e01020-16(2017)，将其中每个文献通过援引以其全文并入本文)。
重链恒定区中的三重突变(TM)L234F/L235E/P331S(根据欧盟编号惯例；Sazinsky等人Proc Natl Acad Sci USA[美国国家科学院院刊]，105∶20167-20172(2008))可显著降低IgG效应子功能。在一些方面，包含三重突变的IgG1序列包含SEQ ID NO：474。
在一些方面，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入Fc区(CH1结构域)的铰链区，使得铰链区中半胱氨酸残基的数目改变(例如增加或减少)，如例如美国专利号5,677,425中所述。可以改变CH1结构域的铰链区中半胱氨酸残基的数目，以例如促进轻链和重链的组装，或改变(例如增加或减少)抗体或其抗原结合片段的稳定性。
在一些方面，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入本文所述的抗体或其抗原结合片段的Fc区(例如，CH2结构域(人IgG1的残基231-340)和/或CH3结构域(人IgG1的残基341-447)和/或铰链区，根据卡巴特编号系统(例如，卡巴特中的EU索引)进行编号)，以增加或降低抗体或其抗原结合片段对效应细胞表面上的Fc受体(例如，活化的Fc受体)的亲和力。Fc区中降低或增加对Fc受体的亲和力的突变以及将此类突变引入Fc受体或其片段中的技术是本领域技术人员已知的。在例如Smith P等人，(2012)PNAS[美国国家科学院院刊]109：6181-6186，美国专利号6,737,056以及国际公开号WO 02/060919、WO 98/23289和WO 97/34631(将其通过援引并入本文)中描述了可以在Fc受体中进行突变以改变抗体或其抗原结合片段对Fc受体的亲和力的实例。
在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选Fc或铰链-Fc结构域片段)中以改变(例如，减少或增加)体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。参见例如，国际公开号WO 02/060919；WO 98/23289；和WO 97/34631；以及美国专利号5,869,046、6，121,022、6,277,375和6,165,745的突变实例，这些突变将改变(例如，减少或增加)体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选Fc或铰链-Fc结构域片段)中以减少体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(例如，Fc或铰链-Fc结构域片段)中以增加体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。在一些方面，根据卡巴特中的EU索引编号(Kabat EA等人，(1991)同上)，抗体或其抗原结合片段可以在第二恒定(CH2)结构域(人IgG1的残基231-340)和/或第三恒定(CH3)结构域(人IgG1的残基341-447)中具有一个或多个氨基酸突变(例如，取代)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含的IgG恒定结构域包含在根据如卡巴特中的EU索引进行编号的位置251-257、285-290、308-314、385-389、和428-436处的氨基酸残基的一个、两个、三个或更多个氨基酸取代。
在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸取代引入IgG恒定结构域的Fc区中，以改变抗体或其抗原结合片段的一个或多个效应子功能。例如，选自根据如卡巴特中的EU索引进行编号的氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基替代，使得该抗体或其抗原结合片段对效应配体的亲和力改变，但保留了亲本抗体的抗原结合能力。对其的亲和力改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。这种方法在美国专利号5,624,821和5,648,260中有进一步详细描述。在一些方面，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他手段)可以减少循环的抗体或其抗原结合片段的Fc受体结合，从而增加肿瘤定位。对于使恒定结构域缺失或失活的突变的描述，参见例如美国专利号5,585,097和8,591，886。在一些方面，可以将一个或多个氨基酸取代引入Fc区以去除Fc区上的潜在糖基化位点，从而可以减少Fc受体结合(参见例如Shields RL等人，(2001)J Biol Chem[生物化学杂志]276：6591-604)。
在一些方面，选自根据如卡巴特中的EU索引进行编号的恒定区中的氨基酸残基322、329和331中的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基替代，使得该抗体或其抗原结合片段具有改变的C1q结合和/或降低的或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。这种方法在美国专利号6,194,551(Idusogie等人)中有进一步详细描述。在一些方面，改变CH2结构域的N末端区中的氨基酸位置231至238内的一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。这种方法在国际公开号WO 94/29351中有进一步描述。在一些方面，通过在以下位置使一个或多个氨基酸突变(例如，引入氨基酸取代)来修饰Fc区以增加或降低抗体或其抗原结合片段介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加或降低抗体或其抗原结合片段对Fcγ受体的亲和力：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、328、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，根据如卡巴特中的EU索引编号。这种方法在国际公开号WO 00/42072中有进一步描述。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含在根据如卡巴特中的EU索引进行编号的位置267、328或其组合处具有突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含具有选自由S267E、L328F及其组合组成的组的突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含具有S267E/L328F突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域。在一些方面，包含具有S267E/L328F突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域的本文所述的抗体或其抗原结合片段对FcγRIIA、FcγRIIB、或FcγRIIA和FcγRIIB具有增加的结合亲和力。
工程化的糖型可用于多种目的，包括但不限于增强或降低效应子功能。在本文所述的抗体或其抗原结合片段中产生工程化糖型的方法包括但不限于以下披露的那些：例如P等人，(1999)Nat Biotechnol[自然生物技术]17：176-180；Davies J等人，(2001)Biotechnol Bioeng[生物技术与生物工程]74：288-294；Shields RL等人，(2002)JBiol Chem[生物化学杂志]277：26733-26740；Shinkawa T等人，(2003)J Biol Chem[生物化学杂志]278：3466-3473；Niwa R等人，(2004)Clin Cancer Res[临床癌症研究]1：6248-6255；Presta LG等人，(2002)Biochem Soc Trans[生化学会会刊]30：487-490；Kanda Y等人，(2007)Glycobiology[糖生物学]17：104-118；美国专利号6,602,684；6,946,292；和7,214,775；美国专利公开号US 2007/0248600；2007/0178551；2008/0060092；和2006/0253928；国际公开号WO 00/61739；WO 01/292246；WO 02/311140；和WO 02/30954；PotillegentTM技术(新泽西州普林斯顿市宝万有限公司(Biowa，Inc.Princeton，N.J.))：以及/>糖基化工程技术(瑞士苏黎世格黎卡特生物技术股份公司(Glycartbiotechnology AG，Zurich，Switzerland))。还参见例如Ferrara C等人，(2006)Biotechnol Bioeng[生物技术与生物工程]93：851-861；国际公开号WO 07/039818；WO 12/130831；WO 99/054342；WO 03/011878；和WO 04/065540。
在一些方面，可以将本文所述的任何恒定区突变或修饰引入本文所述的具有两个重链恒定区的抗体或其抗原结合片段的一个或两个重链恒定区。
在一些方面，本文提供了与本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，AB1170002、AB1170006、AB1170010、AB1170019、AB1170028、AB1170036、AB1170040、AB1170043、AB1170047、AB1170069、AB1170070、AB1170072、AB1170073、AB1170074、AB1170086、AB1170148、AB1170241、AB1170242、AB1170243、AB1170244、AB1170245、AB1170246、AB1170247、AB1170248、AB1170249、或AB1520085)结合相同的GDF-15的表位(例如，人GDF-15的表位)的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文提供了与AB1170241(包含SEQ IDNO：326的VH和SEQ ID NO：335的VL的抗体)结合相同的GDF-15表位的抗体或其抗原结合片段。
竞争结合测定法可用于确定两种抗体是否与重叠表位结合。竞争性结合可以在一种测定法中确定，在该测定法中，测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原(如GDF-15)的特异性结合。已知许多类型的竞争性结合测定法，例如：固相直接或间接放射免疫测定法(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定法(EIA)、夹心竞争测定法(参见Stahli C等人，(1983)Methods Enzymol[酶学方法]9：242-253)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见Kirkland TN等人，(1986)J Immunol[免疫学杂志]137：3614-9)；固相直接标记测定法、固相直接标记夹心测定法(参见Harlow E和Lane D，(1988)Antibodies：A Laboratory Manual[抗体：实验室手册]，Cold Spring Harbor Press[冷泉港出版社])；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel GA等人，(1988)Mol Immunol[分子免疫学]25(1)：7-15)；固相直接生物素-亲和素EIA(Cheung RC等人，(1990)Virology[病毒学]176：546-52)；以及直接标记RIA(Moldenhauer G等人，(1990)Scand J Immunol[斯堪的纳维亚免疫学杂志]32：77-82)。典型地，这样的测定法涉及使用与载有以下任一个的固体表面或细胞结合的纯化抗原(例如GDF-15，如人GDF-15)：未标记的测试免疫球蛋白以及标记的参考免疫球蛋白。竞争性抑制可以通过在测试免疫球蛋白存在的情况下测定与固体表面或细胞结合的标记的量来测量。通常测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争性抗体过量存在时，它将使参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少50％-55％、55％-60％、60％-65％、65％-70％、70％-75％或更高。可以使用标记的抗原或标记的抗体以多种不同形式配置竞争结合测定法。在该测定法的常见形式中，将抗原固定在96孔板上。然后使用放射性标记或酶标记来测量未标记的抗体阻断标记的抗体与抗原结合的能力。对于另外的细节，参见例如，Wagener C等人，(1983)JImmunol[免疫学杂志]130：2308-2315；Wagener C等人，(1984)JImmunol Methods[免疫学方法杂志]68：269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res[癌症研究]50：4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest[免疫学研究]21：523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma[杂交瘤]11：391-407以及Antibodies：A Laboratory Manual[抗体：实验室手册]，Ed Harlow E和Lane D编辑同上，第386-389页。
在一些方面，使用表面等离子体共振例如通过“串联方法”，如Abdiche YN等人，(2009)Analytical Biochem[分析生物化学]386：172-180描述的方法来进行竞争测定法，从而将GDF-15抗原固定在芯片表面，例如CM5传感器芯片上，然后使抗GDF-15抗体在芯片上运行。为了确定抗体或其抗原结合片段是否与本文所述的抗GDF-15抗体竞争，首先使抗GDF-15抗体在芯片表面上运行以达到饱和，然后添加潜在的竞争性抗体。然后可以相对于非竞争性对照确定和定量竞争性抗体或其抗原结合片段的结合。
在一些方面，使用Fortebio Octet竞争结合确定GDF-15抗体或其抗原结合片段竞争性抑制另一GDF-15抗体或其抗原结合片段与GDF-15的结合。
在一些方面，本文提供了竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，20502、20502.1或22213)与GDF-15(例如，人GDF-15)结合的抗体，如使用本领域技术人员已知的或本文所述的测定法(例如，ELISA竞争性测定法、悬浮阵列或表面等离子体共振测定法、或实例4中使用的方法)所确定的。
本文所述的抗体或抗原结合片段(例如，单克隆抗体或片段)可以是或可以获得自人抗体、人源化抗体、非人抗体或嵌合抗体。在一个方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段是全人抗体。在一些方面，与GDF-15特异性结合的如本文所述的抗原结合片段选自由Fab、Fab’、F(ab’)2和scFv组成的组，其中Fab、Fab’、F(ab’)2或scFv包含与GDF-15特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段的重链可变区序列和轻链可变区序列。可以通过本领域技术人员已知的任何技术生产Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv。在一些方面，Fab、Fab’、F(ab’)2或scFv进一步包含延长体内抗体半衰期的部分。该部分也称为“半衰期延长部分”。可以使用本领域技术人员已知的用于延长体内Fab、Fab’、F(ab’)2或scFv的半衰期的任何部分。例如，半衰期延长部分可包括Fc区、聚合物、白蛋白或白蛋白结合蛋白或化合物。聚合物可包括天然或合成的、任选经取代的直链或支链的聚亚烷基、聚亚烯基、聚氧化烯、多糖、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、甲氧基聚乙二醇、乳糖、直链淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。取代基可包括一个或多个羟基、甲基或甲氧基基团。在一些方面，可以通过添加一个或多个用于附接半衰期延长部分的C末端氨基酸来修饰Fab、Fab’、F(ab’)2或scFv。在一些方面，半衰期延长部分是聚乙二醇或人血清白蛋白。在一些方面，Fab、Fab’、F(ab’)2或scFv融合至Fc区。
可以将与GDF-15结合的抗体或其抗原结合片段与可检测标记或物质融合或缀合(例如，共价或非共价连接)。可检测标记或物质的实例包括酶标记，如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)、和锝(99Tc)；发光标记，如鲁米诺；以及荧光标记，如荧光素和若丹明，以及生物素。此类标记的抗体或其抗原结合片段可用于检测GDF-15。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段是分离或纯化的。通常，分离的抗体或其抗原结合片段是基本上不含具有与分离的抗体或其抗原结合片段不同的抗原特异性的其他抗体或其抗原结合片段的抗体或其抗原结合片段。例如，在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段的制剂基本上不含细胞材料和/或化学前体。
III.核酸、载体、宿主细胞、和产生抗体的方法
与GDF-15免疫特异性结合的抗体及其抗原结合片段可以通过本领域已知的用于合成抗体及其抗原结合片段的任何方法，例如通过化学合成或通过重组表达技术来产生。除非另有说明，否则本文所述的方法采用分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交以及本领域技术范围内相关领域的常规技术。这些技术例如在本文引用的参考文献中描述并且在文献中对其进行了充分解释。参见例如，Sambrook J等人，(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，纽约；Ausubel FM等人，Current Protocols in MolecularBiology[当前分子生物学方案]，约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons)(1987年和年度更新)；Current Protocols in Immunology[当前免疫学方案]，约翰·威利父子公司(JohnWiley&Sons)(1987年和年度更新)，Gait(编辑)(1984)Oligonucleotide Synthesis：APractical Approach[寡核苷酸合成：实用方法]，IRL出版社(IRL Press)；Eckstein(编辑)(1991)Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach[寡核苷酸和类似物：实用方法]，IRL出版社(IRL Press)；Birren B等人，(编辑)(1999)Genome Analysis：ALaboratory Manual[基因组分析：实验室手册]，冷泉港实验室出版社(Cold SpringHarbor Laboratory Press)。
在一些方面，本文提供了一种制备与GDF-15免疫特异性结合的抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括培养本文所述的细胞或宿主细胞。在一些方面，本文提供了一种制备与GDF-15免疫特异性结合的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括使用本文所述的细胞或宿主细胞(例如，包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸的细胞或宿主细胞)表达(例如，重组表达)该抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该细胞是分离的细胞。在一些方面，已将外源多核苷酸引入细胞中。在一些方面，该方法进一步包括分离或纯化从细胞、宿主细胞或培养物中获得的抗体或抗原结合片段的步骤。
用于产生多克隆抗体的方法是本领域已知的(参见例如，Short Protocols inMolecular Biology[精编分子生物学实验指南]，(2002)第5版中的第11章，Ausubel FM等人，编辑，约翰·威利父子公司(John Wiley and Sons)，纽约)。
可以使用本领域已知的多种技术来制备单克隆抗体或其抗原结合片段，这些技术包括使用杂交瘤、重组以及噬菌体展示技术、基于酵母的呈递技术、或其组合。例如，可以使用杂交瘤技术产生单克隆抗体或其抗原结合片段，这些杂交瘤技术包括本领域已知的并且例如在以下文献中教导的那些技术：Harlow E和Lane D，Antibodies：A LaboratoryManual[抗体：实验室手册]，(冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor LaboratoryPress)，1988年第2版)；Hammerling GJ等人，在：Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas[单克隆抗体和T细胞杂交瘤]563 681(纽约爱思唯尔出版社(Elsevier，N.Y.)，1981)，或如Kohler G和Milstein C(1975)Nature[自然]256：495中所述。可用于选择和生成本文所述的抗体的基于酵母的呈递方法的实例包括例如WO 2009/036379A2、WO 2010/105256和WO 2012/009568中披露的那些，将其各自通过援引以其全文并入本文。
在一些方面，单克隆抗体或抗原结合片段是由克隆细胞(例如，产生重组抗体或抗原结合片段的杂交瘤或宿主细胞)产生的抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段与GDF-15免疫特异性结合，如例如通过ELISA或本领域或本文提供的实例中已知的其他抗原结合测定法所确定的。在一些方面，单克隆抗体或其抗原结合片段可以是人抗体或其抗原结合片段。在一些方面，单克隆抗体或其抗原结合片段可以是Fab片段或F(ab’)2片段。本文所述的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如通过如Kohler G和Milstein C(1975)Nature[自然]256：495中所述的杂交瘤方法制备，或者可以例如使用如例如本文所述的技术从噬菌体文库中分离。制备克隆细胞系和由其表达的单克隆抗体及其抗原结合片段的其他方法是本领域熟知的(参见例如Short Protocols in Molecular Biology[精编分子生物学实验指南](2002)第5版中第11章，Ausubel FM等人，同上)。
本文所述的抗体的抗原结合片段可以通过本领域技术人员已知的任何技术生成。例如，本文所述的Fab和F(ab’)2片段可以通过使用酶如木瓜蛋白酶(用于产生Fab片段)或胃蛋白酶(用于产生F(ab’)2片段)对免疫球蛋白分子进行蛋白水解切割来产生。Fab片段对应于四聚抗体分子的两条相同臂之一，并且含有与重链的VH和CH1结构域配对的完整轻链。F(ab’)2片段含有四聚抗体分子的两条抗原结合臂，这两条抗原结合臂通过铰链区中的二硫键连接。
进一步地，还可以使用本领域已知的各种噬菌体展示和/或基于酵母的呈递方法来生成本文所述的抗体或其抗原结合片段。在噬菌体展示方法中，将蛋白质展示在噬菌体颗粒的表面上，这些颗粒携带对其进行编码的多核苷酸序列。特别地，编码VH和VL结构域的DNA序列是从动物cDNA文库(例如，受感染组织的人或鼠cDNA文库)来扩增。通过PCR将编码这些VH和VL结构域的DNA与scFv接头重组在一起，并且克隆至噬粒载体中。将该载体以电穿孔转至大肠杆菌(E.coli)中，并且用辅助噬菌体对该大肠杆菌进行感染。这些方法中所使用的噬菌体典型地是包括fd和M13的丝状噬菌体，并且VH和VL结构域通常重组融合至噬菌体基因III或基因VIII。表达与特定抗原结合的抗体或其抗原结合片段的噬菌体可以用抗原来选择或鉴定，例如，使用标记的抗原或结合或捕获至固体表面或珠粒上的抗原。可以用于制备本文所述的抗体或片段的噬菌体展示方法的实例包括在以下文献中披露的那些：Brinkman U等人，(1995)J Immunol Methods[免疫学方法杂志]182：41-50；Ames RS等人，(1995)JImmunol Methods[免疫学方法杂志]184：177-186；Kettleborough CA等人，(1994)Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志]24：952-958；Persic L等人，(1997)Gene[基因]187：9-18；Burton DR和Barbas CF(1994)Advan Immunol[高级免疫学]57：191-280；PCT申请号PCT/GB91/001134；国际公开号WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401和WO 97/13844；以及美国专利号5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108
可以通过任何方式获得人抗体、非人抗体、嵌合抗体或人源化抗体，包括经由体外来源(例如，杂交瘤或重组地产生抗体的细胞系)和体内来源(例如，啮齿动物、人扁桃体)获得。生成抗体的方法是本领域已知的并且描述于例如，和Milstein，Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]，5：511-519(1976)；Harlow和Lane(编辑)，Antibodies：ALaboratory Manual[抗体：实验室手册]，CSH Press[CSH出版社](1988)；以及Janeway等人(编辑)，Immunobiology[免疫生物学]，第5版，加兰出版社(Garland Publishing)，纽约州纽约市(2001)。在一些方面，可以使用转基因动物(例如，小鼠)来生成人抗体或嵌合抗体，其中一个或多个内源性免疫球蛋白基因被一个或多个人免疫球蛋白基因替代。其中内源性抗体基因被人抗体基因有效替代的转基因小鼠的实例包括但不限于美达瑞公司(Medarex)HUMAB-MOUSETM、麒麟集团(Kirin)TC MOUSETM和协和发酵麒麟集团(KyowaKirin)KM-MOUSETM(参见例如，Lonberg，Nat.Biotechnol.[自然生物技术]，23(9)：1117-25(2005)，和Lonberg，Handb.Exp.Pharmacol.[实验药理学手册]，181：69-97(2008))。人源化抗体可以使用本领域已知的任何合适的方法(参见例如，An，Z.(编辑)，TherapeuticMonoclonal Antibodies：From Bench to Clinic[治疗性单克隆抗体：从实验室到临床]，约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons，Inc.)，Hoboken，N.J.(2009))，包括例如将非人CDR移植到人抗体支架上(参见例如，Kashmiri等人，Methods[方法]，36(1)：25-34(2005)；和Hou等人，J.Biochem.[生物化学杂志]，144(1)：115-120(2008))来生成。在一些方面，可以使用描述于例如美国专利申请公开201I/0287485 A1中的方法来产生人源化抗体。
III(a).核酸
本文提供了一种或多种分离的核酸，该一种或多种分离的核酸包含编码与人GDF-15结合的抗体或其抗原结合片段的核酸序列(任选地其中该抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或片段)或其片段(例如，VH和/或VL)。
本文还提供了一种包含编码多肽的核苷酸序列的多核苷酸，该多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：2、20、38、56、74、92、110、128、146、164、182、200、218、236、254、272、290、308、326、344、362、380、398、416、434、和452。在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含与GDF-15免疫特异性结合的多肽。
本文还提供了一种包含编码多肽的核苷酸序列的多核苷酸，该多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：11、29、47、65、83、101、119、137、155、173、191、209、227、245、263、281、299、317、335、353、371、389、407、425、443、和461。在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含与GDF-15免疫特异性结合的多肽。
在一些方面，本文提供了包含编码本文所述的抗体或抗原结合片段的轻链或重链的核苷酸序列的多核苷酸。这些多核苷酸可包含编码重链的核苷酸序列，该重链包含本文所述的抗体的VH FR和CDR(参见例如，表1和5)。这些多核苷酸可包含编码轻链的核苷酸序列，该轻链包含本文所述的抗体的VL FR和CDR(参见例如，表2和6)。
在一些方面，本文提供的多核苷酸或多核苷酸的组合包含编码与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列或核苷酸序列的组合，其中该抗体或其抗原结合片段包含重链，其中该重链包含重链可变结构域和重链恒定区，该重链可变结构域包含表3中所列的氨基酸序列，该重链恒定区包含表8中所列的重链恒定区序列(例如，SEQ ID NO：473或474)。
在一些方面，本文提供的多核苷酸或多核苷酸的组合包含编码与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列或核苷酸序列的组合，其中该抗体或其抗原结合片段包含轻链，其中该轻链包含轻链可变结构域和轻链恒定区，该轻链可变结构域包含表4中所列的氨基酸序列，该轻链恒定区包含表8中所列的轻链恒定区序列(例如，SEQ ID NO：475)。
在一些方面，本文提供的多核苷酸或多核苷酸的组合包含编码与GDF-15(例如，人GDF-15)免疫特异性结合的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列或核苷酸序列的组合，其中该抗体或其抗原结合片段包含(i)重链，其中该重链包含重链可变结构域和重链恒定区，该重链可变结构域包含表3中所列的氨基酸序列，该重链恒定区包含表8中所列的重链恒定区序列(例如，SEQ ID NO：473或474)和(ii)轻链，其中该轻链包含轻链可变结构域和轻链恒定区，该轻链可变结构域包含表4中所列的氨基酸序列，该轻链恒定区包含表8中所列的轻链恒定区序列(例如，SEQ ID NO：475)。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15结合并且由表9中列出的编码VH和/或VL的DNA序列编码。因此，本文还提供了包含核酸的多核苷酸，该核酸包含表9中列出的编码VH和/或VL的序列。
表9：编码VH和VL的DNA序列的SEQ ID NO
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在一些方面，多核苷酸包含含有表9中列出的编码VH的序列的核苷酸和含有编码重链恒定区(例如，SEQ ID NO：473和474)的序列的核苷酸。在一些方面，多核苷酸包含含有表9中列出的编码VL的序列的核苷酸和含有编码轻链恒定区(例如，SEQ ID NO：475)的序列的核苷酸。
本文还提供编码与GDF-15特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，这些多核苷酸例如通过密码子/RNA优化、异源信号序列替代和消除mRNA不稳定元件而得以优化。通过引入密码子变化(例如，由于遗传密码的简并性而编码相同氨基酸的密码子变化)和/或消除mRNA中的抑制区来生成编码与GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段或其结构域(例如，重链、轻链、VH结构域或VL结构域)的优化核酸以进行重组表达的方法可以通过相应地调整例如美国专利号5,965,726、6,174,666、6,291,664、6,414,132和6,794,498中描述的优化方法来进行。
可以使用本领域熟知的方法(例如PCR和其他分子克隆方法)从来自合适的来源(例如杂交瘤)的核酸生成编码本文所述的抗体或其抗原结合片段或其结构域的多核苷酸。例如，使用可与已知序列的3′和5′末端杂交的合成引物进行的PCR扩增可以使用从产生目的抗体的杂交瘤细胞获得的基因组DNA进行。此类PCR扩增方法可以用于获得包含编码抗体或其抗原结合片段的轻链和/或重链的序列的核酸。此类PCR扩增方法可以用于获得包含编码抗体或其抗原结合片段的可变轻链区和/或可变重链区的序列的核酸。可将扩增的核酸克隆到载体中以在宿主细胞中表达并进一步克隆，例如以生成嵌合抗体和人源化抗体或其抗原结合片段。
本文提供的多核苷酸可以例如呈RNA的形式或呈DNA的形式。DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA，并且DNA可以是双链的或单链的。如果是单链的，则DNA可以是编码链或非编码(反义)链。在一些方面，多核苷酸是缺少一个或多个内源性内含子的cDNA或DNA。在一些方面，多核苷酸是非天然存在的多核苷酸。在一些方面，多核苷酸是重组产生的。在一些方面，多核苷酸是分离的。在一些方面，多核苷酸是基本上纯的。在一些方面，多核苷酸是从天然组分中纯化的。
III(b).载体和宿主细胞
本披露进一步提供了一种或多种载体，该一种或多种载体包含一种或多种编码与人GDF-15结合的抗体或其抗原结合片段的核酸序列(任选地其中一种或多种抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或片段)。载体可以是例如质粒、附加体、粘粒、病毒载体(例如，逆转录病毒载体或腺病毒载体)或噬菌体。合适的载体和载体制备的方法是本领域熟知的(参见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning，a Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，第3版，冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press)，纽约冷泉港(Cold Spring Harbor，N.Y.)(2001)，以及Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology[当前分子生物学方案]，格林出版协会(Greene Publishing Associates)和约翰·威利父子公司(JohnWiley&Sons)，纽约州纽约市(1994))。
除了编码与人GDF-15结合的抗体或其抗原结合片段(任选地其中该抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或片段)的核酸序列以外，期望载体包含在宿主细胞中提供编码序列的表达的表达控制序列，如启动子、增强子、多腺苷酸化信号、转录终止子、内部核糖体进入位点(IRES)等。示例性表达控制序列是本领域已知的并且描述于例如Goeddel，GeneExpression Technology：Methods in Enzymology[基因表达技术：酶学方法]，第185卷，学术出版社(Academic Press)，加利福尼亚州圣地亚哥市(San Diego，Calif.)(1990)。
可以将包含编码与人GDF-15结合的抗体或其抗原结合片段(任选地其中一种或多种抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或片段)的一种或多种核酸的一种或多种载体引入能够表达由其编码的多肽的宿主细胞，包括任何合适的原核或真核细胞。因此，本披露提供了包含载体的分离的细胞。可以使用的宿主细胞包括如下那些宿主细胞：这些宿主细胞可容易且可靠地生长、具有相当快的生长速率、具有良好表征的表达系统、并且可以容易且高效地转化或转染。合适的原核细胞的实例包括但不限于来自芽孢杆菌属(Bacillus)(如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和短芽孢杆菌(Bacillus brevis))、埃希氏菌属(Escherichia)(如大肠杆菌)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、沙门氏菌属(Salmonella)、和欧文氏菌属(Erwinia)的细胞。特别有用的原核细胞包括各种大肠杆菌菌株(例如，K12、HB101(ATCC编号33694)、DH5a、DH10、MC1061(ATCC编号53338)、和CC102)。合适的真核细胞是本领域已知的并且包括例如酵母细胞、昆虫细胞、和哺乳动物细胞。在一些方面，该载体在哺乳动物细胞中表达。许多合适的哺乳动物宿主细胞是本领域已知的，并且许多可从美国典型培养物保藏中心(ATCC，马纳萨斯(Manassas)，弗吉尼亚州(VA))获得。合适的哺乳动物细胞的实例包括但不限于中国仓鼠卵巢细胞(CHO)(ATCC编号CCL61)、CHO DHFR细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]，97：4216-4220(1980))、人胚胎肾(HEK)293或293T细胞(ATCC编号CRL1573)和3T3细胞(ATCC编号CCL92)。其他合适的哺乳动物细胞系是猴COS-1(ATCC编号CRL1650)和COS-7细胞系(ATCC编号CRL1651)，以及CV-1细胞系(ATCC编号CCL70)。该哺乳动物细胞理想地是人细胞。例如，该哺乳动物细胞可以是人淋巴或淋巴衍生的细胞系，如前B淋巴细胞来源的细胞系、PER.细胞系(荷兰克鲁塞尔生物制药公司(Crucell Holland B.V.)，荷兰)、或人胚胎肾(HEK)293或293T细胞(ATCC编号CRL1573)。
可以通过转染、转化或转导将编码本文所述的任一种抗体或抗原结合片段(任选地单克隆抗体或片段)中的氨基酸的核酸序列引入到细胞中。
一旦本文所述的抗体或其抗原结合片段已经通过重组表达产生，就可以通过本领域已知的用于免疫球蛋白分子的纯化的任何方法将其纯化，例如，通过色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法(特别是通过对于蛋白质A纯化后的特异性抗原的亲和色谱法)以及尺寸排阻色谱法)、离心、差别溶解度，或者通过用于蛋白的纯化的任何其他标准技术。进一步地，本文所述的抗体或其抗原结合片段可以融合至本文所述的或者本领域中另外已知的异源多肽序列，以便促进纯化。
IV.药物组合物
本文提供了包含如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段的组合物。在一些方面，具有所希望的纯度的抗体或其抗原结合片段存在于包含例如生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂的配制品中(Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学](1990)麦克出版公司(Mack Publishing Co.)，宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton，PA))。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量及浓度下对接受者无毒。适用用于肠胃外施用的配制品包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、和使该配制品与预期接受者的血液等渗的溶质、以及水性和非水性无菌悬浮液，该水性和非水性无菌悬浮液可以包括助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、和防腐剂。
在一些方面，药物组合物包含如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、以及药学上可接受的载剂(参见例如，Gennaro，Remington：The Science and Practice ofPharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus[雷明顿：有事实和比较的药学科学和实践：药品事实+]，第20版(2003)；Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms andDrug Delivery Systems[药物剂型和药物递送系统]，第7版，利平科特威廉姆斯和威尔金斯出版公司(Lippencott Williams and Wilkins)(2004)；Kibbe等人，Handbook ofPharmaceutical Excipients[药用辅料手册]，第3版，医药出版社(PharmaceuticalPress)(2000))。在一些方面，本文所述的药物组合物用作药物。用于体内施用的组合物可以是无菌的。这容易通过例如经无菌滤膜过滤而实现。
本文所述的药物组合物可用于在体内或体外发挥生物学作用。
本文所述的药物组合物可用于治疗癌症。在一些方面，癌症是鳞状细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、胃肠(道)癌、肾脏癌、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性胶质母细胞瘤、宫颈癌、脑癌、胃部癌、膀胱癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、鳞状细胞头颈癌、肾细胞癌、梅克尔细胞癌、尿路上皮癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、绒毛膜癌、口腔癌、皮肤癌或食管癌。在一些方面，该癌症是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、或前列腺癌。该癌症可以是GDF-15表达性癌症。
本文所述的药物组合物可用于抑制癌细胞的增殖。这些癌细胞可以是鳞状细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、胃肠(道)癌、肾脏癌、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性胶质母细胞瘤、宫颈癌、脑癌、胃部癌、膀胱癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、鳞状细胞头颈癌、肾细胞癌、梅克尔细胞癌、尿路上皮癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、绒毛膜癌、口腔癌、皮肤癌或食管癌细胞。在一些方面，这些癌细胞是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、或前列腺癌细胞。这些癌细胞可以是GDF-15表达性癌细胞。
本文所述的药物组合物可用于活化树突状细胞、增加T细胞的增殖、和/或增加Th1细胞的分化。树突状细胞、T细胞、和/或Th1细胞可以在体外。树突状细胞、T细胞、和/或Th1细胞可以在受试者(例如，人受试者)中。在一些方面，该受试者(例如，人受试者)患有癌症。
本文所述的药物组合物可用于治疗恶病质。在一些方面，本文提供的药物组合物用于治疗疾病或病症，如恶病质。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于抑制与恶病质相关的肌肉质量的损失和脂肪质量的损失。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于抑制或减少与恶病质相关的非自愿的体重减轻。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于抑制与恶病质相关的器官质量的损失、肌肉质量的损失、脂肪质量的损失、和非自愿的体重减轻。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。在一些方面，该器官是肾、肝、心、或脾。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于治疗与恶病质相关的肌少症。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于降低恶病质的发生率和/或严重程度，从而增加能够引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于增加患有恶病质的受试者的食欲。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
V.治疗用途和方法
在各个方面，本文提供了使用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物的体外和体内方法。
在一些方面，本文提供了治疗癌症的方法。治疗癌症的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了抑制受试者中的癌细胞的增殖的方法。抑制受试者中的癌细胞的增殖的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。该受试者可以是例如患有癌症的受试者。
在一些方面，本文提供了增加受试者中的树突状细胞的活化的方法。增加受试者中的树突状细胞的活化的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。该受试者可以是例如患有癌症的受试者。
在一些方面，本文提供了增加受试者中的T细胞的增殖的方法。增加受试者中的T细胞的增殖的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。该受试者可以是例如患有癌症的受试者。
在一些方面，本文提供了增加受试者中的Th1细胞的分化的方法。增加受试者中的Th1细胞的分化的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。该受试者可以是例如患有癌症的受试者。
在一些方面，本文提供了治疗恶病质的方法。治疗恶病质的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
在一些方面，本文提供了抑制与恶病质相关的肌肉质量的损失和脂肪质量的损失的方法。抑制与恶病质相关的肌肉质量的损失和脂肪质量的损失的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
在一些方面，本文提供了抑制或减少与恶病质相关的非自愿的体重减轻的方法。抑制或减少与恶病质相关的非自愿的体重减轻的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了抑制与恶病质相关的器官质量的损失、肌肉质量的损失、脂肪质量的损失、和非自愿的体重减轻的方法。抑制与恶病质相关的器官质量的损失、肌肉质量的损失、脂肪质量的损失、和非自愿的体重减轻的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。在一些方面，该器官是肾、肝、心、或脾。
在一些方面，本文提供了治疗与恶病质相关的肌少症的方法。治疗与恶病质相关的肌少症的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了降低恶病质的发生率和/或严重程度、从而增加能够引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量的方法。降低恶病质的发生率和/或严重程度、从而增加能够引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了增加患有恶病质的受试者的食欲的方法。增加患有恶病质的受试者的食欲的方法可包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
如本文提供的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文提供的其药物组合物可通过任何合适的手段施用。
当单独使用或与一种或多种其他另外的治疗剂组合使用时，如本文提供的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段、或如本文提供的其药物组合物的合适的剂量和给药方案将取决于待治疗的疾病、疾病的严重程度和病程、施用途径等因素。
在一些方面，本文提供了用作药物的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在治疗癌症的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在治疗受试者中的癌症的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在治疗恶病质的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在治疗受试者中的恶病质的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，其用于在抑制与恶病质相关的肌肉质量和脂肪质量的损失的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在抑制患者中与恶病质相关的肌肉质量和脂肪质量的损失的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在抑制或减少与恶病质相关的非自愿的体重减轻的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在抑制或减少患者中与恶病质相关的非自愿的体重减轻的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在抑制与恶病质相关的器官质量的损失、肌肉质量的损失、脂肪质量的损失、和非自愿的体重减轻的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在抑制受试者中与恶病质相关的器官质量的损失、肌肉质量的损失、脂肪质量的损失、和非自愿的体重减轻的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在治疗与恶病质相关的肌少症的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在治疗患者中与恶病质相关的肌少症的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在降低恶病质的发生率和/或严重程度、从而增加能够引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在降低恶病质的发生率和/或严重程度、从而增加能够引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在增加患有恶病质的受试者的食欲的方法中使用。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，用于在增加患有恶病质的受试者的食欲的方法中使用，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
VI.检测和诊断用途
本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段可用于使用本领域技术人员已知的经典方法测定生物样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的水平，这些方法包括免疫测定法(如酶联免疫吸附测定法(ELISA))、免疫沉淀法、或蛋白质印迹法。合适的抗体测定标记是本领域已知的，并且包括酶标记，如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)、和锝(99Tc)；发光标记，如鲁米诺；以及荧光标记，如荧光素和若丹明，以及生物素。此类标记可用于标记本文所述的抗体或其抗原结合片段。可替代地，识别本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段的第二抗体或其抗原结合片段可被标记并与抗GDF-15抗体或其抗原结合片段组合使用以检测GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)水平。
测定GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的表达水平旨在包括直接地(例如，通过确定或估计绝对蛋白水平)或相对地(例如，通过与第二生物样品中的与疾病相关的蛋白水平比较)定性或定量测量或估计第一生物样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的水平。可测量或估计第一生物样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)表达水平，并与标准GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)水平比较，该标准取自从没有该障碍的个体获得的第二生物样品，或者通过求取来自没有该障碍的个体群体的水平的平均值而确定。正如本领域将理解的，一旦已知“标准”GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)水平，其可重复用作为比较的标准品。
如本文所用，术语“生物样品”是指从潜在地表达GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的受试者、细胞系、组织、或其他细胞来源获得的任何生物样品。用于从动物(例如，人)获得组织活检物和体液的方法是本领域熟知的。
升高的GDF-15水平与癌症(例如，结直肠癌和非小细胞肺癌)的总体存活率降低相关。因此，本文所述的抗GDF-15抗体可用于预后、诊断、监测和筛选应用，包括熟练的技术人员熟知和标准的并且基于本说明书的体外和体内应用。
本文所述的抗GDF-15抗体及其抗原结合片段可携带可检测的或功能性标记。当使用荧光标记时，可以利用当前可用的显微镜术和荧光激活细胞分选分析(FACS)或本领域已知的两种方法程序的组合来鉴定和定量特异性结合成员。本文所述的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段可携带荧光标记。示例性荧光标记包括例如反应性探针和缀合探针，例如，氨基香豆素(Aminocoumarin)、荧光素和德克萨斯红(Texas red)、Alexa Fluor染料、Cy染料和DyLight染料。抗GDF-15抗体可携带放射性标记，如同位素3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、67Cu、90Y、99Tc、111In、117Lu、121I、124I、125I、131I、198Au、211At、213Bi、225Ac和186Re。当使用放射性标记时，可以利用本领域已知的当前可用的计数程序来鉴定和定量针对GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的抗GDF-15抗体或抗原结合片段的特异性结合。在该标记是酶的情况下，可以通过如本领域已知的目前利用的比色、分光光度、荧光分光光度、安培或气体定量技术中的任何一种来完成检测。这可以通过在允许抗体或其抗原结合片段与GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)之间形成复合物的条件下，使样品或对照样品和与抗GDF-15抗体或其抗原结合片段接触来实现。在样品和对照中检测并比较抗体或其抗原结合片段与GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)之间形成的任何复合物。鉴于本文所述的抗体或其抗原结合片段与人GDF-15的特异性结合，这些抗体或其抗原结合片段可用于特异性检测样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)表达。本文所述的抗体或其抗原结合片段也可用于经由免疫亲和纯化来纯化GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)。
本文还包括一种测定系统，该测定系统可以以测试试剂盒的形式制备，用于定量分析GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的存在程度。该系统或测试试剂盒可以包含标记的组分，例如标记的抗体或抗原结合片段，以及一种或多种另外的免疫化学试剂。有关试剂盒的更多信息，参见例如下文第VII节。
在一些方面，本文提供了体外检测样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的方法，该方法包括使所述样品与抗体或其抗原结合片段接触。在一些方面，本文提供了本文提供的抗体或其抗原结合片段用于体外检测样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的用途。在一些方面，本文提供了一种本文提供的抗体或其抗原结合片段或组合物，用于在检测受试者中或从受试者获得的样品中的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)中使用。在一些方面，本文提供了用作诊断剂的本文提供的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该抗体包含可检测标记。
VII.试剂盒
本文提供了包含本文所述的一种或多种抗体或其抗原结合片段的试剂盒。在一些方面，本文提供了一种药物包装或试剂盒，该药物包装或试剂盒包含填充有本文所述的药物组合物的一种或多种成分，如本文提供的一种或多种抗体或其抗原结合片段的一个或多个容器。任选地，与这样一个或多个容器相关联的可以是由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的公告，该公告反映该机构针对人类施用，对制造、使用或销售的许可。
本文还提供了可在检测方法中使用的试剂盒。在一些方面，试剂盒在一个或多个容器中包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，优选纯化的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文所述的试剂盒含有可以用作对照的基本上分离的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)。在一些方面，本文所述的试剂盒进一步包含不与GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)反应的对照抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文所述的试剂盒含有一种或多种用于检测抗体或其抗原结合片段与GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)结合的要素(例如，抗体或其抗原结合片段可以与可检测底物(如荧光化合物、酶底物、放射性化合物或发光化合物)缀合，或识别第一抗体或其抗原结合片段的第二抗体或其抗原结合片段可与可检测底物缀合)。在一些方面，本文提供的试剂盒可包括重组产生的或化学合成的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)。试剂盒中提供的GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)还可附接到固体支撑体上。在一些方面，以上所述试剂盒的检测装置包括GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)所附接到其上的固体支撑体。这样的试剂盒还可以包括未附接的报告因子标记的抗GDF-15抗体或其抗原结合片段或抗小鼠/大鼠抗体或其抗原结合片段。在这方面，可以通过所述报告子标记的抗体或其抗原结合片段的结合来检测抗体或其抗原结合片段与GDF-15蛋白(例如，人GDF-15蛋白)的结合。
实例
以说明的方式而不是以限制的方式提供本节中的实例。
实例1：用于表达和纯化人、食蟹猴和小鼠GDF-15蛋白的方法
在用于表达人和食蟹猴成熟GDF-15蛋白的构建体的设计中使用的蛋白质序列源自UniProt条目Q99988(人；SEQ ID NO：469)和G7PWZ3(食蟹猴(cyno)；SEQ ID NO：470)。除了野生型人GDF-15蛋白外，还产生了常见变体H202D(MAF＝0.231；SEQ ID NO：471)(Ensembl ENST00000252809.3)。小鼠GDF-15序列源自Uniprot条目Q9Z0J7(SEQ ID NO：472)。
MPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI(SEQ ID NO：469；信号肽(氨基酸1-29)加下划线)
ARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI(SEQ ID NO：479；成熟GDF-15)
ARNGDDCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI(SEQ ID NO：480；成熟GDF-15H202D)
MPGQELKTLNGSQMLLVLLVLLWPPHGGAVSLAEASRASFPGPSDLHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLIQAPEVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAVLPEGLPEACRIHRALFRLSPTASRSRDVTRPLRRQLRLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLVKSSSSRPQLAIHIRPRASRGRRRARARNGDRCPIGPGRCCRIHTVHASIEDIGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFREANMHAQIKMNLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCV(SEQ ID NO：470；信号肽(氨基酸1-29)加下划线)
信号肽(氨基酸1-29)加下划线；H202D加粗并加下划线)
MAPPALQAQPPGGSQLRFLLFLLLLLLLLSWPSQGDALAMIPEQRPSGPESQLNADELRGRFQDLLSRLHANQSREDSNSEPSPDPAVRILSPEVRLGSHGQLLLRVNRASLSQGLPEAYRVHRALLLLTPTARPWDITRPLKRALSLRGPRAPALRLRLTPPPDLAMLPSGGTQLELRLRVAAGRGRRSAHAHPRDSCPLGPGRCCHLETVQATLEDLGWSDWVLSPRQLQLSMCVGECPHLYRSANTHAQIKARLHGLQPDKVPAPCCVPSSYTPVVLMHRTDSGVSLQTYDDLVARGCHCA(SEQ ID NO：472；信号肽(氨基酸1-30)加下划线)
不加标签的人和食蟹猴GDF-15蛋白
将与人和食蟹猴GDF-15(残基197-308)的成熟肽对应的序列克隆到pET-28a(默克公司(Merck))细菌表达载体中。使构建体在BL21(DE3)细胞(生命技术公司(LifeTechnologies))中表达，将其从包涵体中提取，并使用标准技术重新折叠。使用标准技术使蛋白经历阳离子交换和尺寸排阻色谱进行纯化。
哺乳动物表达的带His和FLAG标签的人和食蟹猴GDF-15蛋白
将编码N末端聚组氨酸(聚His)和FLAG标签的成熟人和食蟹猴GDF-15蛋白克隆到pDEST12.2OriP(赛默飞世尔公司(Thermo Fisher))载体中。将构建体在Expi293F细胞(赛默飞世尔公司)中表达，并使用标准固定化金属亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化法从条件培养基中纯化。
带His和FLAG标签的小鼠GDF-15蛋白的克隆、表达和纯化
设计了FLAG和聚His标签紧接弗林蛋白酶切割位点的C末端的全长小鼠GDF-15构建体，并将其克隆到pDES T12.2OriP(赛默飞世尔公司)载体中。将小鼠GDF-15质粒和编码弗林蛋白酶蛋白的质粒共转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中。使用标准固定化金属亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化法从条件培养基中纯化成熟的二聚体小鼠GDF-15蛋白。
人GDF-15前体
将全长人GDF-15(GDF-15前体)Fc融合构建体设计为缺失GDF-15残基190-196(Bauskin等人2010)并具有N末端Fc和聚His标签。将该构建体克隆到pDES T12.2OriP(赛默飞世尔科技公司)中并与互补Fc构建体共转染到CHO细胞中。使用MabSelect PrismA柱(通用医疗集团(GE Healthcare))从条件培养基中纯化二聚体GDF-15前体蛋白。使用TEV蛋白酶切割Fc标签，并使用标准固定化金属亲和色谱和尺寸排阻色谱进一步纯化释放的His-GDF-15前体蛋白。
用于破坏啮齿动物免疫后的耐受性的小鼠GDF-15的毒素融合形式
为了用重组小鼠GDF-15破坏免疫小鼠后的耐受性，将该蛋白质与含有T细胞表位的抗原融合。首先，设计了成熟的小鼠GDF-15(残基189-303)构建体，该构建体在N末端与Fc标签融合，TEV切割位点置于Fc标签与GDF-15之间。将该构建体克隆到pDEST12.2OriP(赛默飞世尔科技公司)中并与互补Fc构建体共转染到CHO细胞中。使用MabSelect PrismA柱从条件培养基中纯化带二聚体Fc标签的GDF-15蛋白，然后使用TEV蛋白酶切割以产生二聚体小鼠GDF-15。将小鼠GDF15与修饰形式的细菌毒素共价融合，该细菌毒素是白喉毒素片段A(DTA)或源自破伤风毒素(TT)的二肽(由Percival-Alwyn等人，2015描述)，以产生免疫原His-TT-小鼠GDF-15和His-DTA-小鼠GDF-15。带His标签的DTA是使用细菌表达系统产生的，带His标签的TT是使用CHO细胞产生的。使用标准固定化金属亲和色谱和尺寸排阻色谱技术纯化抗原。
实例2：通过杂交瘤技术生成抗人GDF-15抗体的方法
免疫
使用重组人GDF-15(hGDF-15)免疫CD1小鼠。使用两组小鼠。对于组1，用不带标签的hGDF-15免疫小鼠，并用带10个组氨酸标签的hGDF-15免疫组2的小鼠。
将重组蛋白稀释在PBS中，用等体积的完全弗氏佐剂乳化，并在两个位点处注射到小鼠中。对于后续的三次注射，将蛋白质在弗氏不完全佐剂中乳化，并如上进行注射。在第24天通过腹膜内注射在PBS中的重组蛋白进行最后一次加强。
在免疫前、第一次免疫后第13天、和第二次免疫后第20天从小鼠获得尾静脉血。通过血清ELISA确定针对人GDF-15的IgG滴度。将具有最高滴度的动物用于杂交瘤生成。
评估针对hGDF-15的小鼠免疫应答
使用标准技术在96孔微量滴定板中通过ELISA确定针对人GDF-15和不相关蛋白对照的血清IgG滴度。使用HRP标记的多克隆山羊抗小鼠IgG特异性二抗(JacksonImmunolabs)检测抗体，并使用TMB底物(西格玛公司(Sigma))使测定显色，随后添加0.5M硫酸以终止反应。然后使用PerkinElmer EnVision 2103多标记板读取器读取这些板。
绘制人GDF-15和不相关蛋白的血清滴定曲线并计算各自的曲线下面积(AUC)。
单克隆小鼠IgG分离
在最后一次加强后四天，无菌地收获淋巴结，并通过机械破坏分离细胞，然后对细胞进行计数。将这些细胞与SP2/0骨髓瘤细胞混合，并使用电融合装置融合。所得融合物与基于甲基纤维素的半固体培养基混合，并铺板到OmniTray板中。半固体培养基包含CloneMatrix和DMEM，该DMEM补充有20％FCS、10％BM Condimed H1、1mM的丙酮酸钠和OPI培养基补充物、2％次黄嘌呤重氮丝氨酸和FITC缀合的山羊抗-大鼠IgG。将半固体培养基中的细胞在5％CO2培养箱中在37℃下培养13天。在该孵育时间段期间，克隆集落从单一祖杂交瘤细胞形成。这些集落分泌IgG，该IgG通过存在于半固体培养基中的FITC缀合的抗IgG截留在集落的附近。当通过ClonePix FL菌落采集器(分子装置公司(Molecular Devices))可视化时，在呈荧光‘光晕’的细胞周围可以观察到所得免疫复合物形成。然后，将这些有光晕的集落挑入96孔微量滴定板。
培养3-5天后，收获挑取的集落的上清液并针对人GDF-15结合进行筛选。
DNA测序和小鼠IgG的纯化
使用磁性寡(dT)颗粒从杂交瘤细胞中提取信使RNA(mRNA)并反转录成cDNA。使用特异于所有小鼠IgG亚类的聚C(poly-C)和恒定区VH或VL引物进行PCR扩增。
小鼠IgG纯化
细胞在24孔板中增殖，并在补充有HyperZero和谷氨酰胺的无血清的HL-1培养基中过量生长。10天后，将上清液转移到96孔主板中，并使用珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)的追踪系统(Minitrack)在ProPlus树脂(Phynexus公司)上从过度生长细胞培养上清液中纯化所有亚类(IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)的小鼠IgG。所捕获的小鼠IgG用100mM HEPES、140mM NaCl pH 3.0洗脱，并且然后用等体积的200mM HEPES pH 8.0中和。在UV-Star 384孔板中，使用吸光度读数仪于280nm下对纯化的IgG进行定量。
小鼠IgG的重新格式化
基本上如Persic等人，1997所述，对小鼠杂交瘤IgG克隆进行分子重新格式化以生成用于每个杂交瘤的表达小鼠VH和VL结构域以及相关小鼠IgG恒定结构域的构建体。将VH结构域克隆到含有小鼠重链恒定结构域和调节元件的相关载体中以便在哺乳动物细胞中表达完整IgG1重链。相似地，将VL结构域克隆到用于表达适当的小鼠轻链(λ或κ)恒定结构域和调节元件的载体中，以便在哺乳动物细胞中表达完整的IgG轻链。为了获得IgG，用重链和轻链IgG载体瞬时转染哺乳动物悬浮CHO细胞。IgG被表达并分泌到培养基中。使用MabSelect SuRe色谱柱(通用医疗生命科学集团(GE Healthcare Lifesciences)，目录号：11003493针对1ml柱；11003495针对5ml柱)和来自通用医疗生命科学集团的AktaXpressTM纯化系统从澄清的上清液纯化IgG。使用PD-10脱盐柱(通用医疗生命科学集团；目录号：17085101)将洗脱的材料缓冲液交换成PBS。使用基于IgG的氨基酸序列的消光系数通过分光光度法确定IgG的浓度(Pace等人，1995)，并使用SDS-PAGE和HP-SEC分析来分析纯化的IgG的纯度。
一组小鼠抗人GDF-15IgG的人源化
基于体外结合和活性数据选择抗人GDF-15小鼠IgG用于人源化，即用最近的人IgG可变结构域替代小鼠可变重链和轻链框架区。
针对IMGT人重链和轻链种系序列分析每个杂交瘤克隆(VH和VL)的氨基酸序列。对于每个抗体V基因，鉴定了与鼠V基因(不包括游标残基和CDR)最接近的单个人V基因序列。此外，对于每个V基因，还鉴定了最接近的单独的框架区(FW1、FW2、FW3和FW4；再次，不包括游标残基和CDR)。对于每个杂交瘤克隆，选择与所选的小鼠种系相比氨基酸改变最少的单个人种系或复合人种系。
在密码子优化后，合成每个人源化V基因序列并进行分子重新格式化以生成如上所述的具有以下修饰的人IgG1 TM抗体。将VH结构域克隆到含有人重链恒定结构域和调节元件的载体中以便在哺乳动物细胞中表达完整的IgG1重链。该恒定区含有三重突变(TM)L234F/L235E/P331S(SEQ ID NO：474)，导致效应子无效的人IgG1。相似地，将VL结构域克隆到用于表达人轻链(κ)恒定结构域和调节元件的载体中，以便在哺乳动物细胞中表达完整的IgG轻链。为了获得IgG，用重链和轻链IgG载体瞬时转染哺乳动物悬浮CHO细胞。IgG被表达并分泌到培养基中。使用MabSelect SuRe色谱柱(通用医疗生命科学集团，目录号：11003493针对1ml柱；11003495针对5ml柱)和来自通用医疗生命科学集团的AktaXpressTM纯化系统从澄清的上清液纯化IgG。使用PD-10脱盐柱(通用医疗生命科学集团；目录号：17085101)将洗脱的材料缓冲液交换成PBS。使用基于IgG的氨基酸序列的消光系数通过分光光度法确定IgG的浓度(Pace等人，1995)，并使用SDS-PAGE和HP-SEC分析来分析纯化的IgG的纯度。
抗体AB1170243在重链CDR2内发生突变，以去除序列NNG内的脱酰胺倾向。在该位置处突变为NQG生成了克隆AB1170241，其在热应激下表现出优异的稳定性。
实例3：通过杂交瘤技术生成抗鼠GDF-15抗体的方法
免疫
使用重组鼠GDF-15(mGDF-15)免疫CD1小鼠。使用两组小鼠。为了在小鼠中破坏耐受性并对小鼠形式的GDF-15生成强大的免疫应答，将T辅助表位掺入免疫原中，如Percival-Alwyn等人(2015)所述。对于组1，用His-TT-mGDF-15免疫小鼠，并用His-DTA-mGDF-15免疫组2的小鼠。如之前所述进行免疫。如上所述，对小鼠杂交瘤IgG克隆进行分子重新格式化，以生成以IgG1(D265A；SEQ ID NO：477)形式表达小鼠VH和VL结构域的构建体。
实例4：分析抗体的方法
筛选与重组GDF-15蛋白特异性结合的杂交瘤IgG
对用人GDF-15免疫生成的上清液和纯化的IgG进行筛选，以鉴定与人、食蟹猴、或小鼠GDF-15特异性结合的IgG。HTRF(均相时间分辨荧光)测定基于在滴定测试抗体与生物素化的人H202DGDF-15变体、食蟹猴GDF-15和小鼠GDF-15结合时可测量的FRET信号的检测。铕穴状化合物(EuK)标记的链霉亲和素和抗人IgG XL665(Cis Bio公司)分别用作充当能量供体和受体的二级检测试剂。在测试抗体结合不存在的情况下，没有可检测的FRET荧光。当测试抗体与GDF-15结合时，导致二级试剂供体/受体对之间的物理接近，这导致FRET。在Envision板读取器上按比率[665nm(受体)/620nm(供体)]测量FRET，并使用PRISM软件(Graphpad)将数据作图。数据呈现于表10中。
以均相测定形式筛选用于与重组人GDF-15蛋白竞争性结合的杂交瘤IgG
来自用人GDF-15免疫的抗体(以来自免疫的粗上清液的形式或以纯化的IgG的形式)是基于它们结合并竞争对照抗GDF-15抗体“抗体A”识别的表位而选择的。使用测量DyLight 650标记的抗体A与铕标记的人GDF-15(蛋白专家公司(Prospec))的结合的HTRF表位竞争测定应用生化表位竞争形式。在抗体A结合不存在的情况下，没有可检测的FRET荧光。当抗体A与GDF-15结合时，导致二级试剂供体/受体对之间的物理接近，这导致FRET。与识别相同或相似表位的抗体竞争将导致FRET信号的剂量依赖性降低。在Envision板读取器上按比率[665nm(受体)/620nm(供体)]测量FRET，并通过使用PRISM软件(Graphpad)将数据曲线拟合到四参数逻辑斯谛方程来确定IC50值。数据呈现于表10和表11中。
表10
IC50值代表几何平均值。
SD＝标准偏差并且n＝实验的数目。
将抗体重新格式化为mIgG1，除了标有*的那些是扩大的杂交瘤克隆。
表11
IC50值代表几何平均值，其中n>1。
也示出了SD＝标准偏差(SD)以及n＝实验的数目。在n＝1的情况下，IC50值是在一个实验中一式两份或一式三份的平均值。
ND＝未进行。
针对旁系同源物的IgG的特异性
使用标准抗原呈递ELISA，筛选纯化的人源化IgG与人GDF-15相对于与相同家族的另外两个成员TGFβ1(安迪生物公司240-B)和BMP7(安迪生物公司354-BP/CF)的结合。人GDF-15、人TGFβ1或人BMP7被吸附到Nunc MaxisorpTM板上。去除过量的未结合的抗原后，将滴定的测试IgG添加至板。在1小时的孵育后，去除未结合的IgG。通过添加与辣根过氧化物酶(HR)酶缀合的抗人IgG抗体并测量其与底物TMB反应的产物在450nm处的吸光度来确定IgG结合的程度。数据呈现在图1-3中并示出了所有测试的抗体都与人GDF-15结合，但不与人TGFβ1或人BMP7结合。
以非均相(DELFIA)测定形式筛选用于与重组小鼠GDF-15蛋白结合的杂交瘤IgG
来自用小鼠GDF-15免疫的抗体(以来自免疫的粗上清液的形式或以纯化的IgG的形式)是基于它们以不同的亲和力/结合强度与固定的小鼠GDF-15结合而分类的。
将小鼠GDF-15固定在高结合、超低体积384孔测定板的表面，在37℃下持续1小时，随后洗涤，然后用过量的不相关蛋白封闭反应位点。进一步洗涤后，允许滴定的测试抗体在37℃下与固定的小鼠GDF-15结合1小时。随后进行大量洗涤以去除未结合的IgG。将铕螯合物标记的抗小鼠IgG(珀金埃尔默公司)用作二级检测试剂，并允许其在37℃下与结合至小鼠GDF-15的测试IgG结合1小时。在更大量的洗涤后，通过添加DELFIA增强溶液(珀金埃尔默公司)产生信号。将板在室温下放置20分钟，然后在Envision板读取器上读取，并通过使用PRISM软件(GraphPad)将数据曲线拟合到四参数逻辑斯谛方程来确定EC50值。AB1520085和AB1170119抗体的数据呈现于表12中。
以均相测定形式筛选用于与重组小鼠GDF-15蛋白竞争性结合的杂交瘤IgG
来自用小鼠GDF-15免疫的抗体(以粗上清液或纯化的IgG的形式)是基于它们结合并竞争所希望的由人抗人GDF-15IgG(AB1170243)识别的表位(基于功能性筛选测定)来选择的。使用测量DyLight 650标记的AB1170243(能量受体)与带Flag标签的小鼠GDF-15的结合的HTRF表位竞争测定应用生化表位竞争形式。使用铕标记的抗Flag(Cis-Bio公司)作为能量供体。在标记的AB1170243结合不存在的情况下，没有可检测的FRET荧光。当AB1170243与小鼠GDF-15结合时，导致二级试剂供体/受体对之间的物理接近，这导致FRET。与识别相同或相似表位的抗体竞争将导致FRET信号的剂量依赖性降低。在Envision板读取器上按比率[665nm(受体)/620nm(供体)]测量FRET，并通过使用PRISM软件(Graphpad)将数据曲线拟合到四参数逻辑斯谛方程来确定IC50值。AB1520085和AB1170119抗体的数据呈现于表12中。
表12
EC50和IC50值代表几何平均值。
SD＝标准偏差并且n＝实验的数目。
ND＝未进行。
实例5：Biacore亲和力分析
表达人源化抗人GDF-15抗体或抗小鼠GDF-15小鼠IgG1的抗原结合片段(Fab)(Spooner等人2015)，并使用Biacore 8K在25℃下测量亲和力。使用带N末端Flag和His标签的成熟重组人GDF-15、人GDF-15H202D变体、小鼠GDF-15、和食蟹猴GDF-15进行实验。使用EZ连接磺基-NHS-LC-生物素(赛默公司(Thermo))对所有物种进行化学生物素化。
使用标准胺偶联技术使在10mM乙酸钠pH 4.5中的4μg/ml浓度的链霉亲和素共价固定于C1芯片表面上。将重组的生物素化的GDF-15种类滴定到在HBS-EP+缓冲液中的链霉亲和素芯片表面上，以实现Fab结合。
将抗GDF-15Fab在HBS-EP+缓冲液pH 7.4中连续稀释(0.0781-10nM，0.195-25nM，0.234-30nM或3.125-200nM)并以50μl/min流过芯片，其中3分钟结合并且10分钟解离。在相同条件下进行多次仅缓冲液注射以允许最终传感图集减去双参考，使用了Biacore 8K评价软件进行分析。芯片表面以50mM NaOH的脉冲充分再生。
在表13-20中提供了选择克隆的Biacore亲和力结果。
表13
表14
表15
表16
表17
表18
*＝无结合
表19
表20
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实例6：GDF-15抗体抑制前列腺癌细胞的增殖
图4中示出的结果证明GDF-15抗体抑制LNCaP前列腺癌细胞的增殖。将LNCaP细胞以5000个细胞/孔的密度铺板在96孔板中，并用400-25nM的在2倍稀释系列中稀释的指示的抗体处理。将细胞孵育3天，并使用Cell Titer Glo(普洛麦格公司)确定活力。
实例7：GDF-15抗体促进moDC上共刺激蛋白的上调
图5A、5B、和5C中示出的结果证明GDF-15抗体促进单核细胞衍生的树突状细胞(moDC)上共刺激蛋白的上调。通过Miltenyi试剂盒(CD14微珠，人目录号130-050-201)分离来自健康供体的单核细胞，并以100万个细胞/mL的密度铺板在6孔板中。将它们用100ng/mlIL-4(安迪生物公司)和100ng/mL GM-CSF(安迪生物公司)处理6天。6天后，将含有或不含有400ng/mL的重组hu-GDF15(蛋白专家公司，目录号CYT-335)的15nM CD40L(恩佐生命科学国际公司(Enzo Life Sciences INT Inc))添加至这些孔和/或10μg/ml抗GDF15抗体。两天后，通过流式细胞术分析细胞中CD14(博奇公司(Biolegend))和CD1a(博奇公司)的表达以确认这些细胞分化为树突状细胞，以及CD83(BD生物科学公司(BD Bioscience))和CD86(BD生物科学公司)的表达以测量活化。通过ELISA测量IL-12p70的分泌。数据呈现为在GDF15不存在的情况下活化的细胞的中值荧光强度(MFI)的百分比。抗GDF15抗体能够将CD83、CD86的表达和IL-12p70的分泌恢复到在GDF15不存在的情况下观察到的表达水平。
实例8：GDF-15抗体逆转GDF15对T细胞增殖的抑制
图6和7A中示出的结果证明抗GDF-15抗体逆转GDF15的抗增殖作用。将CD3细胞通过EasySep人T细胞分离试剂盒(干细胞技术公司(Stemcell Technologies))分离，并以100,000个细胞/孔的密度铺板在用10μg/ml抗CD3(赛默飞世尔科技公司，目录号16-0037)和10μg/ml抗CD28抗体(博奇公司目录号302923，克隆CD28.2)包被的96孔板中。添加400ng/mL的重组hu-GDF15，并以5倍稀释系列添加33.3-0.05nM的抗体。使用Cell Titer Glo(普洛麦格公司)确定细胞活力，如通过相对光单位(RSU)测量的。图7B中的结果证明AB1520085逆转小鼠GDF-15的抗增殖作用。抗体AB1170241和AB1520085恢复了T细胞的完全增殖。
实例9：GDF-15抗体逆转GDF-15对Th1分化的抑制
图8中示出的结果证明GDF-15抗体逆转GDF-15对Th1分化的抑制。通过EasySep人CD4+T细胞分离试剂盒(干细胞技术公司)从健康供体中分离CD4+T细胞。将细胞以250,000个细胞/孔的密度铺板在用10mg/mL小鼠抗人CD3抗体(安迪生物公司)包被的24孔板中。在400ng/mL重组人GDF-15蛋白和/或10ug/mL抗人GDF-15抗体存在的情况下持续5天，通过CellXVivoTM人Th1细胞分化试剂盒(安迪生物公司)使T细胞偏向Th1表型。在第5天，收集培养上清液并通过ELISA分析人TNF-α(安迪生物公司)和人IFNγ(安迪生物公司)的分泌。该图示出了归一化至无重组hu-GDF15时观察到的水平的分泌水平。GDF15抗体AB1170241恢复了细胞因子分泌的全部水平。
实例10：GDF-15抗体逆转GDF-15对DC活化标志物下调
图9中示出的结果证明GDF-15抗体逆转GDF-15对树突状细胞(DC)活化标志物下调。通过Miltenyi试剂盒(CD14微珠，人目录号130-050-201)分离来自健康供体的单核细胞，并以100万个细胞/mL的密度铺板在6孔板中。将它们用100ng/ml IL-4(安迪生物公司，目录号204-IL-050)和100ng/mL GM-CSF(安迪生物公司，目录号215-GM-050)处理6天。6天后，将含有或不含有400ng/mL的重组hu-GDF1 5(蛋白专家公司，目录号CYT-335)的15nMCD40L(恩佐生命科学国际公司，目录号ALX-522-110-C010)和/或10μg/ml抗GDF15抗体添加至这些孔。两天后，通过流式细胞术分析细胞中CD14(博奇公司，目录号367116)和CD1a(博奇公司，目录号300128)的表达以确认这些细胞分化为树突状细胞，以及CD83(BD生物科学公司)和CD86(BD生物科学公司)的表达以测量活化。将数据归一化至在hu-GDF15不存在的情况下活化的样品获得的中值荧光强度(MFI)。抗GDF15抗体AB1170241恢复CD83和CD86的完全表达。
实例11：GDF-15抗体导致肿瘤消退并在抗PD-L1难治性和MBT2同基因肿瘤中具有抗肿瘤活性
图10和12示出的结果证明抗GDF15抗体增加LL/2同基因小鼠模型中的抗原呈递细胞和活化的T细胞。在Balb/c小鼠的侧部皮下注射LL/2细胞(500,000/小鼠)。当它们被随机分配到12只动物/组的治疗组时，允许肿瘤生长至150mm3。各组每周两次用10mg/kg的指示的抗体治疗，持续共4周。使用卡尺每周两次测量肿瘤，并示出所得的肿瘤生长曲线。用10mg/kg的指示的抗体每周两次治疗单独的小鼠群组(n＝6)，持续一周。在第二剂量后24小时收获肿瘤，用GentleMacs解离，并染色用于流式细胞术。使用的抗体是CD45 BV785(博奇公司)、CD11c BV480(BD公司(BectonDickinson))、CD86APCR700(博奇公司)、CD103 PERCP-CY5.5(赛默飞世尔科技公司)、CD8 BUV737(BD公司)、CD69 BUV563(博奇公司)、和IFNγBV711(博奇公司)。DAPI用于活/死门控。所有数据呈现为CD45+细胞的百分比。
图11和12示出的结果证明抗GDF15抗体增加MBT2同基因小鼠模型中的抗原呈递细胞和活化的T细胞。在Balb/c小鼠的侧部皮下注射MBT2细胞(2x106/小鼠)。当它们被随机分配到12只动物/组的治疗组时，允许肿瘤生长至150mm3。各组每周两次用10mg/kg的指示的抗体治疗，持续共4周。使用卡尺每周两次测量肿瘤，并示出所得的肿瘤生长曲线。用10mg/kg的指示的抗体每周两次治疗单独的小鼠群组(n＝6)，持续一周。在第二剂量后24小时收获肿瘤，用GentleMacs解离，并染色用于流式细胞术。使用的抗体是CD45 BV785(博奇公司)、CD11c BV480(BD公司)、CD86 APCR700(博奇公司)、CD103 PERCP-CY5.5(赛默飞世尔科技公司)、CD8 BUV737(BD公司)、CD69 BUV563(博奇公司)、和IFNγ BV711(博奇公司)。DAPI用于活/死门控。所有数据呈现为CD45+细胞的百分比。
实例12：AB1170241表位分析
GDF15的表达和纯化
GDF15蛋白按照如Bigalke等人所述的用于神经秩蛋白的类似方案(Bigalke，Janna M.，等人″Cryo-EM structure of the activated RET signaling complexreveals the importance of its cysteine-rich domain.[活化的RET信号复合物的冷冻电镜结构揭示了其富含半胱氨酸结构域的重要性]″Science advances[科学进展]5：7eaau4202(2019))进行表达和纯化。将成熟GDF15残基(残基Ala-197至Ile-308(SEQ IDNO：479))克隆到pET24a载体中并在25℃下经由自诱导在大肠杆菌BL21(DE3)Star中表达。将所得的包涵体在室温(RT)下过夜溶解在增溶缓冲液(8M尿素，0.1M Na2HPO4，10mM TCEP，50mM Tris-Cl pH 8.5)中，并缓慢滴入重折叠缓冲液(3M尿素，15％(w/v)甘油，75mMNa2HPO4，0.3M NaCl，20mM甘氨酸，4mM半胱氨酸，50mM Tris-HCl，pH 8.5)中。在RT下缓慢搅拌孵育三天。将在缓冲液A(3M尿素，15％(w/v)甘油，75mM Na2HPO4，50mM Tris-HCl，pH 8.5)中洗涤的Ni-琼脂糖凝胶FF添加到重折叠的GDF15中，并在RT下缓慢搅拌孵育过夜。去除树脂并且首先用缓冲液A、然后用缓冲液B(3M尿素，15％(w/v)甘油，75mM Na2HPO4，50mM Tris-HCl，0.3M NaCl，1％Triton X-100，pH 8.5)、以及最后再次用缓冲A洗涤。将树脂转移到柱上并用添加1％缓冲液C(3M尿素，15％(w/v)甘油，75mM Na2HPO4，50mM Tris-HCl，500mM咪唑，pH 8.5)(咪唑的最终浓度，5mM)的缓冲液A洗涤。然后在40％缓冲液A和60％缓冲液C(咪唑的最终浓度，300mM)中洗脱蛋白质。将收集的样品在缓冲液A中稀释至1M尿素的最终浓度和0.4mg/ml的蛋白浓度。将3mM还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mM谷胱甘肽二硫化物(GSSG)添加到蛋白质中，然后在RT下通过TEV蛋白酶伴随缓慢搅拌过夜切除HN标签。第二天，添加尿素粉末至3M尿素的最终浓度。通过离心去除沉淀物，并将材料加载到含有在96％缓冲液A和4％缓冲液C(最终20mM咪唑)中平衡的Ni-琼脂糖凝胶FF的柱上。通过用含有50mM咪唑的缓冲液洗涤树脂来收集切割的二聚体GDF15。通过添加乙酸将pH降低至pH 4。将蛋白质溶液加载到在3M尿素、10％(w/v)甘油、25mM乙酸钠，pH 4(用乙酸调节)中平衡的HiTrap SP柱上。在50％3M尿素、10％(w/v)甘油、25mM乙酸钠、1M NaCl、1M精氨酸-Cl，pH 4(用乙酸调节)中洗脱蛋白。将浓缩的蛋白质加载到在25mM乙酸钠、100mM NaCl，pH 4.0中平衡的Superdex75柱上，并将蛋白质在液氮中快速冷冻。
GDF15-AB1170241 Fab复合物的形成
将GDF1 5和AB1170241 Fab以1.2：1的比率混合，并在4℃下孵育过夜。将混合物在0.025M HEPES pH 7.5和0.150M NaCl中在SEC柱(Superdex 200Increase 10/300GL)上运行。汇集并浓缩含有复合物的级分。
氢氘交换质谱(HDX-MS)
洗脱缓冲液(E-缓冲液)：
在H2O中的0.025M HEPES pH 7.5(汉普顿研究公司(Hampton Research))
在H2O中的0.15M NaCl(汉普顿研究公司)
标记缓冲液(L缓冲液)：
在D2O(剑桥同位素实验室公司(Cambridge Isotope Laboratories Inc))中的0.025M HEPES(西格玛公司)，用pH计测量的值为7.1(对应于非氘化缓冲液的pH 7.5(C0vington，Arthur K.，等人″Use of the glass electrode in deuterium oxide andthe relation between the standardized pD(paD)scale and the operational pH inheavy water.[玻璃电极在氧化氘中的使用以及标准化pD(paD)标度与重水中的工作pH之间的关系]″Analytical Chemistry[分析化学]40(4)：701(1968)))。
在D2O(剑桥同位素实验室公司)中的0.15M NaCl(西格玛公司)
淬灭缓冲液：
2M尿素(西格玛公司)
0.4M TCEP(西格玛公司)
在H2O中pH 2.5
在两个单独的实验中收集氢氘交换质谱(HDX-MS)数据。
实验1(结果总结在图21中)
将在E缓冲液中的GDF15蛋白(9μM)和预形成的GDF15-AB1170241 Fab复合物(11.2μM)在实验开始前解冻并使用0.22μm旋转过滤器(艾美康恩公司(Amicon))过滤。使用CTCPAL样品处理机器人(LEAP技术公司(LEAP Technologies))进行交换反应。通过将3μL的蛋白质样品与57μl的L缓冲液(氘代)在20℃下孵育0.5、1、10和30min的时间来进行反应。
实验2(结果总结在图22中)
将在E缓冲液中的GDF15蛋白(10μM)和预形成的GDF15-AB1170241 Fab复合物(9.6μM)、和AB1170241 Fab(10μM)在实验开始前解冻并使用0.22μm旋转过滤器(艾美康恩公司)过滤。使用CTC PAL样品处理机器人(LEAP技术公司)进行交换反应。通过将3μL的蛋白质样品与57μl的L缓冲液(氘代)在20℃下孵育0.5、1、5和30min的时间来进行反应。
实验1和2(结果总结在图22中)
通过在0℃添加50μL的淬灭溶液(2M尿素，0.4M TCEP pH 2.5)来停止两个实验中的交换反应。随后将样品注射到在线胃蛋白酶消化系统上，并使用BEH胃蛋白酶柱(沃特世公司(Waters))2.1×30mm于在水中的0.3％甲酸中以150μL min-1进行消化。使用2.1×5mm、1.7μm的C18捕集(ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard前置柱，沃特世公司)柱捕集消化的肽，持续3min。使用C18反相柱(ACQUITY UPLC BEH C18柱，1.7μm，2.1×100mm，沃特世公司)以6分钟的5％-40％(vol/vol)乙腈(含有0.1％甲酸)梯度以40μL min-1分离并洗脱脱盐的肽。将所得的肽通过电喷雾电离到以MSE模式获取的SYNAPT XS质谱仪(沃特世公司)上，用于检测和质量测量。使用蛋白质Lynx全球服务器2.0(Protein Lynx Global Server)搜索含有GDF15和AB1170241 Fab序列的蛋白数据库，鉴定来自未标记的蛋白质的肽。每个氘标记的实验至少一式三份进行。通过从非氘化对照样品的平均质量中减去氘标记的样品的平均质量来计算每种肽的相对氘水平。所有质谱都用DynamX 3.0(沃特世公司)加工。使用Pymol(薛定谔公司())将归一化的氢-氘交换数据作图到GDF15(5vz3)的晶体结构上。HDX-MS数据是使用平均氘化水平/氨基酸计算的，如Klein，T.等人，“Structural anddynamic insights into the energetics of activation loop rearrangement inFGFR1 kinase，[FGFR1激酶中活化环重排的能量学的结构和动态见解]”Nat.Commun.[自然通讯]6：7877(2015)中报告的。标记的和未标记的样品之间0.5Da的差异被认为是显著的。
结果
在胃蛋白酶切割GDF15和GDF15-AB1170241 Fab复合物后检测到的序列肽导致在实验1中GDF15序列的肽覆盖为50％，在实验2中为49％。一些肽仅存在于其中一个数据集中，这意味着这些合并的数据集具有56％的总肽覆盖。未检测到的肽主要来源于GDF15蛋白中心和N末端处的半胱氨酸结。已观察到其他半胱氨酸结蛋白的低GDF15降解度。
确定了单独的GDF15与跟AB1170241Fab复合的GDF15之间的氘摄取的差异，并将归一化的摄取数据绘制在图13-19中的GDF15晶体结构(PDB ID：5VZ3)上并总结在表20中。图13、15-17、19和20中的黑色/深灰色区指示与单独的GDF15相比在GDF15-AB1170241 Fab复合物中的GDF15肽受到更多保护，这表明AB1170241 Fab与这些区结合。具有最强保护的成熟GDF15的区是V33-Q40(最强)(SEQ ID NO：486)和I89-L105(SEQ ID NO：487)。在实验2中，E25-W32(SEQ ID NO：485)示出了保护(较弱，在实验1中未检测到)。图16和20示出了GDF15肽的暴露增加的区域。这在GDF15的heel结构域中的α螺旋中见到，但是，该作用较弱。
HDX受保护的区域位于GDF15的延伸指结构域和相邻区上。由于蛋白质是对称的同源二聚体，表位存在于两个亚基中。因此，两个AB1170241拷贝应该有可能同时与同源二聚体结合。
其中一个受保护的区是I89-L105延伸(SEQ ID NO：487)，其构成与GDNF家族受体α样蛋白(GFRAL)相互作用的β-发夹结构。已通过突变研究证明SEQ ID NO：479的I89是GDF15-GFRAL相互作用表面中的关键残基(Hsu，Jer-Yuan，等人″Non-homeostatic bodyweight regulation through a brainstem-restricted receptor for GDF15[通过GDF15的脑干限制性受体进行非稳态体重调节].″Nature[自然]550(7675)：255(2017))。显示最强保护度的GDF15的延伸V33-Q40(SEQ ID NO：486)是GDF15与原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体Ret(RET)之间相互作用表面的一部分(Li，Jie，等人″Cryo-EM analyses reveal thecommon mechanism and diversification in the activation of RET by differentligands[冷冻电镜分析揭示不同配体活化RET的共同机制和多样性].″Elife[电子生命]8：e47650(2019))。受较弱保护的肽E25-W32(SEQ ID NO：486)带有已证明对GDF15-RET相互作用是必需的保守残基W32。总之，HDX-MS数据表明AB1170241表位位于蛋白质表面的两个相邻区并且能够干扰与GFRAL和RET两者的结合。
表21
/>
/>
表22
/>
/>
/>
/>
/>
序列表
<110> 免疫医疗有限责任公司（MEDIMMUNE, LLC）
<120> 针对GDF-15的抗体
<130> GDF15-100-WO-PCT
<150> US 63/158,274
<151> 2021-03-08
<160> 487
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 1
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg ttggattcgt 120
cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gccaacattt ggtggaatga tgataagtac 180
tataactcag ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa caaccaggta 240
ttcctcaaga tctccagtgt ggacactgca gatactgtca catactactg tgctcaagta 300
ggctatgatt ggtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 2
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ser Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Val Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Val Gly Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 3
Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 4
Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 5
Val Gly Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 6
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 6
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 7
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 7
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 8
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Val Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln
20 25 30
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 9
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 10
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 10
gaaattgtgc tcacccagtc tccagcactc atggctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atcacctgca gtgtcagctc aagtataagt tccagcaact tgcactggta ccagcagaag 120
tcagaaacct cccccaaacc ctggatttat ggcacatcca acctggcttc tggagtccct 180
gttcgcttca gtggcagtgg atctgggacc tcttattctc tcacaatcag cagcatggag 240
gctgaagatg ctgccactta ttactgtcaa cagtgcagta gttacccgct cacgttcggt 300
gctgggacca agctggagct gaaa 324
<210> 11
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 11
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Glu Thr Ser Pro Lys Pro Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Cys Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 12
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 12
Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ser Asn Leu His
1 5 10
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 13
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 14
Gln Gln Cys Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 15
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 15
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 16
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Glu Thr Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 17
Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 18
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 19
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 19
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatccta acaatggtgt tactatctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct tttactgtgc tagagaggag 300
ctaactggga atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357
<210> 20
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 20
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Leu Thr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 21
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 22
Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 23
Glu Glu Leu Thr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 24
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 25
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 26
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 26
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys Ala Arg
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<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 27
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 28
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 28
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtcatttag catggtatca gcagaaacag 120
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aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct 240
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser His
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 30
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser His Leu Ala
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<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 31
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 32
Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 33
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 34
Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 35
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 35
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 36
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 37
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 37
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg ttggattcgt 120
cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gccaacattt ggtggaatga tgataagtac 180
tataactcag ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa caaccaggta 240
ttcctcaaga tctccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaagag 300
gtttacgggt ggtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 38
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 38
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ser Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Glu Val Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
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115
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<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 39
Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 40
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 40
Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 41
Glu Val Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 42
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 42
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 43
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 44
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 44
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln
20 25 30
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 45
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 46
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 46
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atcctctcac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 47
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 47
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 48
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 48
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 49
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 50
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 51
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 51
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
20
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 52
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 53
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 53
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 54
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 55
<211> 360
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 55
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatccta acaatggtgg tactttctac 180
aaccagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggag 300
aaactctact ttggccttat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360
<210> 56
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 56
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Lys Leu Tyr Phe Gly Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 57
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 57
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 58
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 58
Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 59
Glu Glu Lys Leu Tyr Phe Gly Leu Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 60
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 61
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 61
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 62
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 62
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 63
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 64
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 64
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagaagg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcatacag ttttctctga agatcaacat cctgcagcct 240
gaagattttg ggaattatta ctgtcaacat cagtatggtt ctcctccgac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ile Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ile Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His Gln Tyr Gly Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 66
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 67
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 67
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 68
Gln His Gln Tyr Gly Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 69
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 69
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 70
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 70
Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 71
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 71
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ile Gln Phe Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ile Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 72
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 72
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 73
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 73
gacgtgaaac tggtggagtc tggggaaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attactagtg gtggtgatta catcttctat 180
gcagacactg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaggaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtac aagagatgat 300
ggttacctct ggtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgca 354
<210> 74
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 74
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Thr Ser Gly Gly Asp Tyr Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Leu Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 75
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 75
Ser Phe Ala Met Ser
1 5
<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 76
Tyr Ile Thr Ser Gly Gly Asp Tyr Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 77
Asp Asp Gly Tyr Leu Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 78
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 78
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 79
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 79
Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 80
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 80
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 81
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 82
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 82
agtattgtga tgacccagac tcccaaattc ctgcctgtat cagcaggaga cagggttacc 60
atgacctgca aggccagtca gaatgtgggt aataatgtag cctggtacca acagaagcca 120
ggacagtctc ctaaactgct gatatactat gcatccaatc gctacactgg agtccctgat 180
cgcttcactg gcagtggatc tgggacagat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggtt 240
gaagacctgg cagtttattt ctgtcagcag cattatagct ctccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
<210> 83
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 83
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Pro Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Val
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln His Tyr Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 84
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn Val Ala
1 5 10
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 85
Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 86
Gln Gln His Tyr Ser Ser Pro Leu Thr
1 5
<210> 87
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 87
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Pro Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 88
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 88
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 89
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 89
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Val Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 90
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 91
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 91
gacgtgaagc tggtggagtc tggggaaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg gtggtgataa catctactat 180
gcagacactg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaggaa caccctgtac 240
ctacaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtac aagagccttg 300
gttgaaaacg cgtactttga ctactggggc caaggcacca ctctcaccgt ctcctca 357
<210> 92
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 92
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Leu Val Glu Asn Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 93
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 94
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 95
Ala Leu Val Glu Asn Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 96
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 96
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 97
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 97
Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 98
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 99
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 100
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 100
gacagtgttc tgacacagtc tcctgcttcc ttacttgtat ctctgggaca gagggccacc 60
atctcctgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctacct atagttacat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccta cctagaatct 180
ggggttcctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacatat tactgtcagc acagtaggga gtttccgtgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 101
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 101
Asp Ser Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Leu Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 102
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 102
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Thr Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 103
Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Ser
1 5
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 104
Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 105
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 105
Asp Ser Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Leu Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys
20
<210> 106
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 106
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 107
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 107
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 108
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 109
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 109
gacgtgaagc tggtggagtc tggggaaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg gtggtgatta catctactat 180
gcagacactg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaggaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtac aagagccttg 300
gttgataacg cgtactttga ctactggggc caaggcacca ctctcaccgt ctcctca 357
<210> 110
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 110
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Leu Val Asp Asn Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 111
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 112
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 113
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 113
Ala Leu Val Asp Asn Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 114
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 114
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 115
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 115
Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 116
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 116
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 117
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 118
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 118
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcctgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctagct atagttacat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccta cctagaattt 180
ggggttcctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacatat tactgtcagc acagtaggga gtttccgtgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 119
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 119
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Phe Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 120
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 120
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 121
Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Phe
1 5
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 122
Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 123
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 123
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys
20
<210> 124
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 124
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 125
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 125
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 126
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 126
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 127
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 127
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagt cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgatc acttctggtt tgggtgtgag ctggattcgt 120
cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 180
tataatccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag aaaccaggta 240
ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcggggg 300
gggtatgatg gttactacga ctactggggc caaggcacca ctctcaccgt ctcctca 357
<210> 128
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 128
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ile Thr Ser
20 25 30
Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 129
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 129
Thr Ser Gly Leu Gly Val Ser
1 5
<210> 130
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 130
His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 131
Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 132
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 132
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ile
20 25 30
<210> 133
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 133
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 134
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 134
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 135
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 136
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 136
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ttgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccaa tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattg 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagacttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 137
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 137
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Asn Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 138
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 138
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Asn Leu Glu
1 5 10 15
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 139
Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser
1 5
<210> 140
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 140
Phe Gln Gly Ser His Val Arg Thr
1 5
<210> 141
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 141
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 142
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 142
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 143
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 143
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 144
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 145
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 145
caggttcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctacgata taaactgggt gaagcagagg 120
cctggacagg gacttgagtg gattggatgg atttatccta gagatggtat ttctaagtac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca catcctccag cacagcgtac 240
atggagctcc acagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc agggacctat 300
gaccccgcct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcaccgtctc ctca 354
<210> 146
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 146
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ile Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Gly Thr Tyr Asp Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 147
Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
<210> 148
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 148
Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ile Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 149
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 149
Thr Tyr Asp Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 150
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 150
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 151
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 151
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 152
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 152
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Gly
20 25 30
<210> 153
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 153
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 154
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 154
gatattgtgc taactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtcagt 60
ctttcctgca gggccagcca aagtattagc tactacctac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaagtat gcttcccagt ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacagat ttcactctca gtatcaacag tgtggagact 240
gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agtaacagct ggccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 155
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 155
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 156
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 156
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Tyr Leu His
1 5 10
<210> 157
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 157
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 158
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 159
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 159
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys
20
<210> 160
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 160
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 161
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 161
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 162
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 162
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 163
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 163
caggttcagc tgcagcagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctacgata taaactgggt gaagcagagg 120
cctggacagg gacttgagtg gattggatgg atttatccta gagatggtat ttctaagtac 180
aatgagaagt tcgagggcaa ggccacattg actgtagaca catcctccag cacagcgtac 240
atggagctcc acagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc agggacctct 300
gaccccgcct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcaccgtctc ctca 354
<210> 164
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 164
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ile Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Gly Thr Ser Asp Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 165
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 165
Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
<210> 166
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 166
Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ile Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 167
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 167
Thr Ser Asp Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 168
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 168
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 169
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 169
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 170
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 170
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Gly
20 25 30
<210> 171
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 171
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 172
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 172
gatattgtgc taactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtcagt 60
ctttcctgca gggccagcca aagtattagc tactacctac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaagtat gcttcccagt ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacagat ttcactctca gtatcaacag tgtggagact 240
gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agtaacagct ggccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 173
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 173
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 174
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 174
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Tyr Leu His
1 5 10
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 175
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 176
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 177
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 177
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys
20
<210> 178
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 178
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 179
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 179
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 180
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 181
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 181
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatcctt acaatggtat tactatctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtcgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcggtct attactgtgc aagagaggag 300
aaactgggaa cctcctttga ctactggggc caaggcacca ctctcaccgt ctcctca 357
<210> 182
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 182
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ile Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Lys Leu Gly Thr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 183
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 183
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 184
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 184
Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ile Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 185
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 185
Glu Glu Lys Leu Gly Thr Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 186
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 186
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 187
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 187
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 188
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 188
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 189
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 189
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 190
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 190
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaatt tagcagatgg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct 240
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttatggta ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 191
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 191
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 192
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 192
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 193
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 193
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 194
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 194
Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 195
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 195
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 196
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 196
Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 197
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 197
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 198
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 198
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 199
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 199
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg ttggattcgt 120
cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gccaacattt ggtggaatga tgataagtac 180
tataactcag ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa caaccaggta 240
ttcctcaaga tctccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaatg 300
gcctactcct ggtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 200
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 200
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ser Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Met Ala Tyr Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 201
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 201
Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 202
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 202
Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 203
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 203
Met Ala Tyr Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 204
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 204
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 205
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 205
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 206
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 206
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln
20 25 30
<210> 207
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 207
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 208
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 208
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatatggat actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagaatattt ctgtcagcaa tataacagct atccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa a 321
<210> 209
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 209
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Met Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 210
Lys Ala Ser Gln Asn Met Asp Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 211
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 211
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 212
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 212
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 213
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 213
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
20
<210> 214
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 214
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 215
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 215
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 216
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 216
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 217
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 217
caggttactc tgaaagagtc tggcccgggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttttggta tgggtgtagg ctggattcgt 120
cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgataagtac 180
tataatccag ccctgaagag tcggctcaca atctccaagg atacctccaa aaaccaggta 240
ttcctcaaga tcgccaatgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaata 300
gcttatgatg gttacttgga ctactggggc caaggcacca cgctcaccgt ctcctca 357
<210> 218
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 218
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Ala Tyr Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 219
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 219
Thr Phe Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 220
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 220
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 221
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 221
Ile Ala Tyr Asp Gly Tyr Leu Asp Tyr
1 5
<210> 222
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 222
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 223
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 223
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 224
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 224
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 225
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 225
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 226
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 226
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actgatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaatcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 227
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 227
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 228
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 228
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asp Val Ala
1 5 10
<210> 229
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 229
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 230
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 230
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 231
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 231
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
20
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 232
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ser Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 233
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 233
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 234
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 234
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 235
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 235
gaggtccagc tgcagcagtc tggacgtgaa ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aactatgtta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctc acaatgatgg tactgaatac 180
agtgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatggtac 300
tacgatggtg gttactttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 236
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 236
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Arg Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro His Asn Asp Gly Thr Glu Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Asp Gly Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 237
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 237
Asn Tyr Val Met His
1 5
<210> 238
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 238
Tyr Ile Asn Pro His Asn Asp Gly Thr Glu Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 239
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 239
Trp Tyr Tyr Asp Gly Gly Tyr Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 240
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 240
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Arg Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 241
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 241
Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 242
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 242
Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 243
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 243
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 244
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 244
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagggtctct 60
ctttcctgca gggccagtca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaagtat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240
gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
<210> 245
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 245
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 246
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 246
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His
1 5 10
<210> 247
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 247
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 248
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 248
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 249
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 249
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys
20
<210> 250
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 250
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 251
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 251
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 252
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 252
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 253
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 253
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagt cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ctggattcgt 120
cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 180
tataacccat ccctggagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag aaaccaggta 240
ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactaca gatactgcca catactactg tgctcggggg 300
gggtatgatg gctactacga ctactggggc caaggcacca ctctcaccgt ctcctca 357
<210> 254
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 254
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 255
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 255
Thr Ser Gly Met Gly Val Ser
1 5
<210> 256
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 256
His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser
1 5 10 15
<210> 257
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 257
Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 258
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 258
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 259
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 259
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 260
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 260
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 261
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 261
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 262
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 262
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccaa tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattg 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagactccac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 263
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 263
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Asn Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ser Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 264
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 264
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Asn Leu Glu
1 5 10 15
<210> 265
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 265
Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser
1 5
<210> 266
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 266
Phe Gln Gly Ser His Val Arg Thr
1 5
<210> 267
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 267
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 268
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 268
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 269
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 269
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ser Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 270
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 270
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 271
<211> 363
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 271
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaggc ctgggacttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga tgcactgggt aaagcagagg 120
cctagacaag gccttgaatg gatcggattg attgatcctt ctgataatta tactaactac 180
aatcaaaact tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca catcctccag cacagcctac 240
atgcagctcg gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc ctcctatgat 300
ggttactcta ccccctctgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 272
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 272
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Asn Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Tyr Asp Gly Tyr Ser Thr Pro Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 273
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 273
Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 274
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 274
Leu Ile Asp Pro Ser Asp Asn Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 275
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 275
Tyr Asp Gly Tyr Ser Thr Pro Ser Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 276
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 276
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 277
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 277
Trp Val Lys Gln Arg Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 278
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 278
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 279
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 279
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 280
<211> 318
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 280
caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 60
atgacttgca gggccagctc aagtgtaaat tacatgcact ggtaccagca gaagccagga 120
tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctaataa tcagcagagt ggaggctgaa 240
gatgctgccg cttattactg ccagcagtgg agtagttacc cacccacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaaa 318
<210> 281
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 281
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Ile Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 282
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 282
Arg Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met His
1 5 10
<210> 283
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 283
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 284
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 284
Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 285
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 285
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 286
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 286
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 287
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 287
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Ile Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 288
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 288
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 289
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 289
caggttcagc tgcaagaatc tggacccggc ctgctgaagc cctctcagac actgtctctg 60
acctgcaccg tgtccggctt ctccctgtct acctatggca tgggcgtcgg ctggatcaga 120
cagcctgctg gcaaaggact ggaatggctg gccaacatct ggtggaacga cgacaagtac 180
tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc atctccaagg acacctccaa gaaccaggtg 240
tccctgaagc tgtcctctgt gaccgctgct gataccgccg tgtactactg tgcccaagag 300
gtgtacggat ggttcgccta ttggggccag ggaaccctag taaccgtctc ctca 354
<210> 290
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 290
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Glu Val Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 291
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 291
Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 292
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 292
Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 293
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 293
Glu Val Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 294
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 294
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 295
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 295
Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 296
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 296
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gln
20 25 30
<210> 297
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 297
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 298
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 298
gacatccaga tgacccagtc tccatccaca ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggcctctca gaacgtgggc accaacgtgg cctggtatca gcagaaacct 120
ggccagcctc ctaaggctct gatctactcc gcctcctacc ggtactctgg cgtgcccgat 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatcagctc cctgcaggcc 240
gaggatgtgg ccgtgtacta ctgccagcag tacaacagct accctctgac ctttggccag 300
ggcaccaagc tcgagataaa a 321
<210> 299
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 299
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 300
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 300
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 301
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 301
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 302
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 302
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 303
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 303
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 304
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 304
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Ala Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 305
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 305
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 306
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 306
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 307
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 307
caggttcagt tggtgcagtc tggctccgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttacc gactacaaca tggactggat ccggcagtcc 120
cctggcaaag gcctggaatg gatcggcgac atcaacccca acaacggcgg caccttctac 180
aaccagaagt tcaaggaccg ggctaccctg accgtggaca agtctacctc taccgcctac 240
atggaactgc ggtccctgag atctgacgac accgccgtgt actactgcgc cagagaggaa 300
aagctgtact tcggcctgat ggactactgg ggccagggaa caacagtaac cgtctcctca 360
<210> 308
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 308
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 309
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 309
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 310
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 310
Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 311
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 311
Glu Glu Lys Leu Tyr Phe Gly Leu Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 312
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 312
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 313
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 313
Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 314
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 314
Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 315
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 315
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 316
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 316
gacatccaga tgacccagtc tccatcctct ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtc gggcctccga gaacatctac tcctacctgg cctggtatca gcagaagcct 120
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ggcaccaagc tcgagataaa a 321
<210> 317
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 317
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ile Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Gln Tyr Gly Ser Pro Pro
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<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 318
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
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<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 319
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 320
Gln His Gln Tyr Gly Ser Pro Pro Thr
1 5
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 321
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 322
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 323
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 323
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ile Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 324
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 324
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 325
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 325
caggttcagt tggtgcagtc tggctccgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttacc gactacaaca tggactggat ccggcagtcc 120
cctggcaaag gcctggaatg gatcggcgac atcaacccca accagggcgg caccttctac 180
aaccagaagt tcaaggaccg ggctaccctg accgtggaca agtctacctc taccgcctac 240
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aagctgtact tcggcctgat ggactactgg ggccagggaa caacagtaac cgtctcctca 360
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 326
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Asn Met Asp Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asp Ile Asn Pro Asn Gln Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
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Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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100 105 110
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115 120
<210> 327
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 327
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 328
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 328
Asp Ile Asn Pro Asn Gln Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 329
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 329
Glu Glu Lys Leu Tyr Phe Gly Leu Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 330
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 330
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 331
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 331
Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
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<210> 332
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 332
Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 333
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 333
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 334
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 334
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ggcaccaagc tcgagataaa a 321
<210> 335
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 335
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
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<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 336
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
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<210> 337
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 337
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 338
Gln His Gln Tyr Gly Ser Pro Pro Thr
1 5
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 339
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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20
<210> 340
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 340
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 341
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 341
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ile Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 342
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 342
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 343
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 343
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<210> 344
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 344
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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35 40 45
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65 70 75 80
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115
<210> 345
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 345
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 346
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 347
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 347
Ala Leu Val Glu Asn Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 348
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 348
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 349
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 349
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 350
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 350
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 351
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 351
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 352
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 352
gactctgtgc tgacccagtc tcctgactct ctggctgtgt ctctgggcga gagagccacc 60
atcaactgca gagcctccaa gtccgtgtcc acctccacct actcctacat gcactggtat 120
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agagtggaag ccgaggacgt gggcgtgtac tactgccagc actccagaga gttcccttgg 300
acctttggcg gaggcaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 353
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 353
Asp Ser Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 354
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 354
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Thr Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 355
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 355
Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Ser
1 5
<210> 356
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 356
Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 357
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 357
Asp Ser Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 358
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 358
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 359
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 359
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 360
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 360
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 361
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 361
gaagtgcagt tggttgaatc tggcggcgga ctggttaagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctccggctt caccttctcc tcttacgcta tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gattggagtg ggtcgcctac atctcctccg gcggagacta catctactac 180
gccgacaccg tgaagggcag attcaccatc tctcgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgaa aaccgaggac accgccgtgt actactgcac aagagccctg 300
gtggacaacg cctacttcga ctattggggc cagggaacaa ccgtaaccgt ctcctca 357
<210> 362
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 362
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 363
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 363
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 364
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 364
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 365
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 365
Ala Leu Val Asp Asn Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 366
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 366
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 367
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 367
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 368
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 368
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 369
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 369
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 370
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 370
gacatcgtgc tgacccagtc tccagactct ctggctgtgt ctctgggcga gagagccacc 60
atcaactgca gagcctccaa gtccgtgtcc acctcctcct actcctacat gcactggtat 120
cagcagaagc ccggccagcc tcctaagctg ctgattaagt acgcctccta cctggaattc 180
ggcgtgccct ctagattctc cggctctggc tctggcaccg actttaccct gacaatctcc 240
agcctgcagc ctgaggatgt ggccacctac tactgccagc actccagaga gttcccttgg 300
acctttggcg gaggcaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 371
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 371
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Phe Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 372
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 372
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 373
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 373
Tyr Ala Ser Tyr Leu Glu Phe
1 5
<210> 374
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 374
Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 375
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 375
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 376
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 376
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 377
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 377
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 378
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 378
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 379
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 379
caagtacagc tgcaagagtc tggacccggc ctgctgaagc cttctcagac cctgtctctg 60
acctgcaccg tgtctggctt ctccctgatc acctctggcc tgggcgtgtc ctggattaga 120
cagcctgctg gcaaaggcct ggaatggctg gctcacatct actgggacga cgacaagcgg 180
tacaacccca gcctgaagtc tcggctgacc atctccaagg acacctccaa gaaccaggtg 240
tccctgaagc tgtcctctgt gaccgctgct gataccgccg tgtactactg tgctagaggc 300
ggctacgacg gctactacga ttattggggc cagggaacaa ccgtaaccgt ctcctca 357
<210> 380
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 380
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Thr Ser
20 25 30
Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 381
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 381
Thr Ser Gly Leu Gly Val Ser
1 5
<210> 382
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 382
His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 383
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 383
Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 384
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 384
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile
20 25 30
<210> 385
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 385
Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 386
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 386
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 387
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 387
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 388
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 388
gacgtggtca tgacacagtc tccactgagc ctgcctgtga cactgggaca gcctgcctcc 60
atctcctgca gatcctctca gtccatcgtg cattccaacg gcaacaccaa cctggaatgg 120
tatctgcaga agcccggcca gtctcctcag ctgctgatct acaaggtgtc caaccggctg 180
tctggcgtgc ccgatagatt ttccggctct ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240
tccagagtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgct tccaaggctc tcacgtgcgg 300
acctttggcc agggcacaaa gctggaaatc aaa 333
<210> 389
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 389
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Asn Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 390
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 390
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Asn Leu Glu
1 5 10 15
<210> 391
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 391
Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser
1 5
<210> 392
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 392
Phe Gln Gly Ser His Val Arg Thr
1 5
<210> 393
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 393
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 394
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 394
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 395
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 395
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 396
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 396
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 397
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 397
caagttcagc tggtgcagtc tggctccgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttccggcta cacctttacc agctacgaca tcaactgggt ccgacaggct 120
cctggacagg gactcgaatg gatcggctgg atctacccca gagatggcat ctccaagtac 180
aacgagaagt tcaagggcag agctaccctg accgtggaca cctctgcttc caccgcctac 240
atggaactgt ccagcctgag atctgaggac accgccgtgt actactgcgc cggcacatac 300
gatcctgcct acttcgatta ttggggccag ggaacaaccg taaccgtctc ctca 354
<210> 398
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 398
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ile Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Thr Tyr Asp Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 399
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 399
Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
<210> 400
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 400
Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ile Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 401
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 401
Thr Tyr Asp Pro Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 402
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 402
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 403
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 403
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 404
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 404
Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly
20 25 30
<210> 405
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 405
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 406
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 406
gaaatcgtgc tgacccagtc tcctgccaca ctgagtgtgt ctccaggcga gagagctacc 60
ctgtcctgta gagcctctca gtccatctcc tactacctgc actggtatca gcagaagccc 120
ggccaggctc ctcggctgct gattaagtac gccagccagt ctatctccgg cgtgcccgat 180
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gaggacttcg gcgtgtacta ctgccagcag tccaactcct ggccttacac ctttggcgga 300
ggcaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 407
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 407
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 408
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 408
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Tyr Leu His
1 5 10
<210> 409
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 409
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 410
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 410
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 411
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 411
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 412
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 412
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 413
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 413
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 414
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 414
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 415
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 415
caagttcagc tggtgcagtc tggctccgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttacc gactacaaca tggactgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gcctggaatg gatcggcgac atcaacccct acaacggcat caccatctac 180
aaccagaagt tcaagggcag agctaccctg accgtggaca agtctacctc caccgcctac 240
atggaactgc ggtccctgag atctgacgac accgccgtgt actactgcgc cagagaggaa 300
aagctgggca cctccttcga ttactggggc cagggaacaa ccgtaaccgt ctcctca 357
<210> 416
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 416
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ile Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Lys Leu Gly Thr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 417
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 417
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 418
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 418
Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Ile Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 419
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 419
Glu Glu Lys Leu Gly Thr Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 420
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 420
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 421
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 421
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 422
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 422
Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 423
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 423
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 424
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 424
gacatccaga tgacccagtc tccatcctct ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtc gggcctccga gaacatctac tccaacctgg cctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggctc ctaagctgct ggtgtacgcc gctaccaatc tggctgatgg cgtgccctct 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatctccag cctgcagcct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcac ttctacggca ccccttggac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 425
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 425
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 426
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 426
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 427
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 427
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 428
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 428
Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 429
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 429
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 430
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 430
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 431
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 431
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 432
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 432
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 433
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 433
caagttcagc tgcaagagtc tggacccggc ctgctgaagc cttctcagac cctgtctctg 60
acctgcaccg tgtctggctt ctccctgtct acctatggca tgggcgtcgg ctggatcaga 120
cagcctctcg gcaaaggact ggaatggctg gccaacatct ggtggaacga cgacaagtac 180
tacaacagcg ccctgaagtc ccggctgacc atctccaagg acacctccaa gaaccaggtg 240
tccctgaagc tgtcctctgt gaccgctgct gataccgccg tgtactactg tgcccagatg 300
gcctacagtt ggttcgccta ttggggccag ggaaccctcg taaccgtctc ctca 354
<210> 434
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 434
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Leu Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Met Ala Tyr Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 435
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 435
Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 436
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 436
Asn Ile Trp Trp Asn Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 437
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 437
Met Ala Tyr Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 438
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 438
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 439
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 439
Trp Ile Arg Gln Pro Leu Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 440
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 440
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gln
20 25 30
<210> 441
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 441
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 442
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 442
gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggccagcca gaacatggac accaacgtgg cctggtatca gcagaagcct 120
ggccagcctc ctaaggctct gatctactcc gcctcctacc ggtactctgg cgtgcccgat 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatcagctc cctgcaggcc 240
gaggatgtgg ccgtgtacta ctgccagcag tacaacagct accccttcac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 443
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 443
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Met Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 444
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 444
Lys Ala Ser Gln Asn Met Asp Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 445
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 445
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 446
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 446
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 447
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 447
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 448
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 448
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Ala Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 449
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 449
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 450
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 450
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 451
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 451
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag cttgtgatgc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacattcact gactattgga tgcactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gatcggagtg attgatactt ctgaaagtta tactagctac 180
aatcaaaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagacg aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagagggggt 300
actacggtag tactcgacta ctggggccaa ggcaccactc tcaccgtctc ctca 354
<210> 452
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 452
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Met Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asp Thr Ser Glu Ser Tyr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Thr Val Val Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 453
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 453
Asp Tyr Trp Met His
1 5
<210> 454
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 454
Val Ile Asp Thr Ser Glu Ser Tyr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 455
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 455
Gly Gly Thr Thr Val Val Leu Asp Tyr
1 5
<210> 456
<211> 30
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 456
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Met Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 457
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 457
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 458
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 458
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 459
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 459
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 460
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 460
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actgctgtag cctggtatca aaagaaacca 120
ggacaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatccaccc ggtacactgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tatagcagct ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaactcaa a 321
<210> 461
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 461
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 462
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 462
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 463
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 463
Ser Ala Ser Thr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 464
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 464
Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 465
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 465
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
20
<210> 466
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 466
Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 467
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 467
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 468
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 468
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 469
<211> 308
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 469
Met Pro Gly Gln Glu Leu Arg Thr Val Asn Gly Ser Gln Met Leu Leu
1 5 10 15
Val Leu Leu Val Leu Ser Trp Leu Pro His Gly Gly Ala Leu Ser Leu
20 25 30
Ala Glu Ala Ser Arg Ala Ser Phe Pro Gly Pro Ser Glu Leu His Ser
35 40 45
Glu Asp Ser Arg Phe Arg Glu Leu Arg Lys Arg Tyr Glu Asp Leu Leu
50 55 60
Thr Arg Leu Arg Ala Asn Gln Ser Trp Glu Asp Ser Asn Thr Asp Leu
65 70 75 80
Val Pro Ala Pro Ala Val Arg Ile Leu Thr Pro Glu Val Arg Leu Gly
85 90 95
Ser Gly Gly His Leu His Leu Arg Ile Ser Arg Ala Ala Leu Pro Glu
100 105 110
Gly Leu Pro Glu Ala Ser Arg Leu His Arg Ala Leu Phe Arg Leu Ser
115 120 125
Pro Thr Ala Ser Arg Ser Trp Asp Val Thr Arg Pro Leu Arg Arg Gln
130 135 140
Leu Ser Leu Ala Arg Pro Gln Ala Pro Ala Leu His Leu Arg Leu Ser
145 150 155 160
Pro Pro Pro Ser Gln Ser Asp Gln Leu Leu Ala Glu Ser Ser Ser Ala
165 170 175
Arg Pro Gln Leu Glu Leu His Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg
180 185 190
Arg Arg Ala Arg Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly
195 200 205
Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly
210 215 220
Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys
225 230 235 240
Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln
245 250 255
Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro
260 265 270
Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr
275 280 285
Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp
290 295 300
Cys His Cys Ile
305
<210> 470
<211> 308
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 470
Met Pro Gly Gln Glu Leu Lys Thr Leu Asn Gly Ser Gln Met Leu Leu
1 5 10 15
Val Leu Leu Val Leu Leu Trp Pro Pro His Gly Gly Ala Val Ser Leu
20 25 30
Ala Glu Ala Ser Arg Ala Ser Phe Pro Gly Pro Ser Asp Leu His Ser
35 40 45
Glu Asp Ser Arg Phe Arg Glu Leu Arg Lys Arg Tyr Glu Asp Leu Leu
50 55 60
Thr Arg Leu Arg Ala Asn Gln Ser Trp Glu Asp Ser Asn Thr Asp Leu
65 70 75 80
Ile Gln Ala Pro Glu Val Arg Ile Leu Thr Pro Glu Val Arg Leu Gly
85 90 95
Ser Gly Gly His Leu His Leu Arg Ile Ser Arg Ala Val Leu Pro Glu
100 105 110
Gly Leu Pro Glu Ala Cys Arg Ile His Arg Ala Leu Phe Arg Leu Ser
115 120 125
Pro Thr Ala Ser Arg Ser Arg Asp Val Thr Arg Pro Leu Arg Arg Gln
130 135 140
Leu Arg Leu Ala Arg Pro Gln Ala Pro Ala Leu His Leu Arg Leu Ser
145 150 155 160
Pro Pro Pro Ser Gln Ser Asp Gln Leu Leu Val Lys Ser Ser Ser Ser
165 170 175
Arg Pro Gln Leu Ala Leu His Leu Arg Pro Arg Ala Ser Arg Gly Arg
180 185 190
Arg Arg Ala Arg Ala Arg Asn Gly Asp Arg Cys Pro Leu Gly Pro Gly
195 200 205
Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val His Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly
210 215 220
Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys
225 230 235 240
Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Glu Ala Asn Met His Ala Gln
245 250 255
Ile Lys Met Asn Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro
260 265 270
Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr
275 280 285
Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp
290 295 300
Cys His Cys Val
305
<210> 471
<211> 308
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 471
Met Pro Gly Gln Glu Leu Arg Thr Val Asn Gly Ser Gln Met Leu Leu
1 5 10 15
Val Leu Leu Val Leu Ser Trp Leu Pro His Gly Gly Ala Leu Ser Leu
20 25 30
Ala Glu Ala Ser Arg Ala Ser Phe Pro Gly Pro Ser Glu Leu His Ser
35 40 45
Glu Asp Ser Arg Phe Arg Glu Leu Arg Lys Arg Tyr Glu Asp Leu Leu
50 55 60
Thr Arg Leu Arg Ala Asn Gln Ser Trp Glu Asp Ser Asn Thr Asp Leu
65 70 75 80
Val Pro Ala Pro Ala Val Arg Ile Leu Thr Pro Glu Val Arg Leu Gly
85 90 95
Ser Gly Gly His Leu His Leu Arg Ile Ser Arg Ala Ala Leu Pro Glu
100 105 110
Gly Leu Pro Glu Ala Ser Arg Leu His Arg Ala Leu Phe Arg Leu Ser
115 120 125
Pro Thr Ala Ser Arg Ser Trp Asp Val Thr Arg Pro Leu Arg Arg Gln
130 135 140
Leu Ser Leu Ala Arg Pro Gln Ala Pro Ala Leu His Leu Arg Leu Ser
145 150 155 160
Pro Pro Pro Ser Gln Ser Asp Gln Leu Leu Ala Glu Ser Ser Ser Ala
165 170 175
Arg Pro Gln Leu Glu Leu His Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg
180 185 190
Arg Arg Ala Arg Ala Arg Asn Gly Asp Asp Cys Pro Leu Gly Pro Gly
195 200 205
Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly
210 215 220
Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys
225 230 235 240
Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln
245 250 255
Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro
260 265 270
Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr
275 280 285
Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp
290 295 300
Cys His Cys Ile
305
<210> 472
<211> 303
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 472
Met Ala Pro Pro Ala Leu Gln Ala Gln Pro Pro Gly Gly Ser Gln Leu
1 5 10 15
Arg Phe Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Trp Pro
20 25 30
Ser Gln Gly Asp Ala Leu Ala Met Pro Glu Gln Arg Pro Ser Gly Pro
35 40 45
Glu Ser Gln Leu Asn Ala Asp Glu Leu Arg Gly Arg Phe Gln Asp Leu
50 55 60
Leu Ser Arg Leu His Ala Asn Gln Ser Arg Glu Asp Ser Asn Ser Glu
65 70 75 80
Pro Ser Pro Asp Pro Ala Val Arg Ile Leu Ser Pro Glu Val Arg Leu
85 90 95
Gly Ser His Gly Gln Leu Leu Leu Arg Val Asn Arg Ala Ser Leu Ser
100 105 110
Gln Gly Leu Pro Glu Ala Tyr Arg Val His Arg Ala Leu Leu Leu Leu
115 120 125
Thr Pro Thr Ala Arg Pro Trp Asp Ile Thr Arg Pro Leu Lys Arg Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Arg Gly Pro Arg Ala Pro Ala Leu Arg Leu Arg Leu Thr
145 150 155 160
Pro Pro Pro Asp Leu Ala Met Leu Pro Ser Gly Gly Thr Gln Leu Glu
165 170 175
Leu Arg Leu Arg Val Ala Ala Gly Arg Gly Arg Arg Ser Ala His Ala
180 185 190
His Pro Arg Asp Ser Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys His Leu
195 200 205
Glu Thr Val Gln Ala Thr Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ser Asp Trp Val
210 215 220
Leu Ser Pro Arg Gln Leu Gln Leu Ser Met Cys Val Gly Glu Cys Pro
225 230 235 240
His Leu Tyr Arg Ser Ala Asn Thr His Ala Gln Ile Lys Ala Arg Leu
245 250 255
His Gly Leu Gln Pro Asp Lys Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ser
260 265 270
Ser Tyr Thr Pro Val Val Leu Met His Arg Thr Asp Ser Gly Val Ser
275 280 285
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Val Ala Arg Gly Cys His Cys Ala
290 295 300
<210> 473
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG1（重）
<400> 473
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 474
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG1 TM F同种异型（重）
<400> 474
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 475
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人κ（轻）
<400> 475
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 476
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠IgG1（重）
<400> 476
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Ile Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 477
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠D265A IgG1（重）
<400> 477
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Ala Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Ile Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 478
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠κ（轻）
<400> 478
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 479
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 成熟GDF-15
<400> 479
Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
1 5 10 15
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
20 25 30
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
35 40 45
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
50 55 60
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
65 70 75 80
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
85 90 95
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 480
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 成熟GDF-15 H202D
<400> 480
Ala Arg Asn Gly Asp Asp Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
1 5 10 15
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
20 25 30
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
35 40 45
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
50 55 60
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
65 70 75 80
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
85 90 95
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 481
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG1 TM F同种异型（重）
<400> 481
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgaca gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaatt cgagggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagcct ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 482
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人κ（轻）
<400> 482
cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 483
<211> 972
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠D265A IgG1（重）
<400> 483
gccaaaacga cacccccttc cgtgtaccct ctggcccctg gctctgccgc ccagaccaac 60
tccatggtca cactgggctg cctggtcaag ggctacttcc ctgagcctgt gaccgtgacc 120
tggaactccg gctccctgtc ctccggcgtg cataccttcc ctgccgtgct gcagtccgac 180
ctgtacaccc tgtccagctc cgtgaccgtg ccttcctcca cctggccttc ccagaccgtg 240
acatgcaacg tggcccaccc tgccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 300
gattgtggtt gtaagccttg catatgcaca gtcccagaag tatcatccgt ctttatcttc 360
cctcctaagc ctaaggacgt gctgaccatc accctgacac ctaaggtcac atgcgtggtg 420
gtggccatct ccaaggacga tcctgaggtg cagttcagtt ggttcgtgga cgacgtggag 480
gtccacaccg ctcagaccaa gcctcgggaa gagcagatca actccacctt cagatccgtg 540
tccgagctgc ctatcatgca ccaggactgg ctgaacggca aagagttcaa gtgcagagtc 600
aacagcgccg ccttccctgc tcccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 660
aaggctccac aggtgtacac cattccacct cctaaagagc agatggccaa ggacaaggtg 720
tccctgacct gcatgatcac cgatttcttc cctgaggaca tcaccgtgga gtggcagtgg 780
aacggccagc ctgccgagaa ctacaagaat acccagccca tcatggacac cgacggctcc 840
tacttcgtgt actccaagct gaacgtgcag aagtccaact gggaggccgg caacaccttc 900
acctgtagcg tgctgcacga gggcctgcac aaccaccaca ccgagaagtc cctgtcccac 960
tcccccggca ag 972
<210> 484
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠κ（轻）
<400> 484
cgggctgatg ctgcaccaac cgtgtccatc ttccctccct cctccgagca gctgacctct 60
ggcggcgctt ccgtcgtctg cttcctgaac aacttctacc ccaaggacat caacgtgaag 120
tggaagatcg acggctccga gcggcagaac ggcgtgctga actcctggac cgaccaggac 180
tccaaggaca gcacctactc catgtcctcc accctgaccc tgaccaagga cgagtacgag 240
cggcacaact cctacacctg cgaggccacc cacaagacct ccacctcccc catcgtgaag 300
tccttcaacc ggaacgagtg c 321
<210> 485
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 485
Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
1 5
<210> 486
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 486
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln
1 5
<210> 487
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 487
Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu
1 5 10 15
Leu

Claims (73)

1.一种与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含可变重链(VH)互补决定区(CDR)1、VH CDR2、VH CDR3、可变轻链(VL)CDR1、VL CDR2、和VL CDR3，其中该VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、和VL CDR3包含选自由以下组成的组的序列：(a)分别为SEQ ID NO：327-329、336-338；(b)分别为SEQ ID NO：3-5、12-14；(c)分别为SEQ ID NO：21-23、30-32；(d)分别为SEQ ID NO：39-41、48-50；(e)分别为SEQID NO：57-59、66-68；(f)分别为SEQ ID NO：75-77、84-86；(g)分别为SEQ ID NO：93-95、102-104；(h)分别为SEQ ID NO：111-113、120-122；(i)分别为SEQ ID NO：129-131、138-140；(j)分别为SEQ ID NO：147-149、156-158；(k)分别为SEQ ID NO：165-167、174-176；(l)分别为SEQ ID NO：183-185、192-194；(m)分别为SEQ ID NO：201-203、210-212；(n)分别为SEQ ID NO：219-221、228-230；(o)分别为SEQ ID NO：237-239、246-248；(p)分别为SEQ IDNO：255-257、264-266；(q)分别为SEQ ID NO：273-275、282-284；(r)分别为SEQ ID NO：291-293、300-302；(s)分别为SEQ ID NO：309-311、318-320；(t)分别为SEQ ID NO：345-347、354-356；(u)分别为SEQ ID NO：363-365、372-374；(v)分别为SEQ ID NO：381-383、390-392；(w)分别为SEQ ID NO：399-401、408-410；(x)分别为SEQ ID NO：417-419、426-428；(y)分别为SEQ ID NO：435-437、444-446；以及(z)分别为SEQ ID NO：453-455、462-464。
2.一种与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含AB1170241、AB1170002、AB1170006、AB1170010、AB1170019、AB1170028、AB1170036、AB1170040、AB1170043、AB1170047、AB1170069、AB1170070、AB1170072、AB1170073、AB1170074、AB1170086、AB1170148、AB1170244、AB1170242、AB1170243、AB1170245、AB1170246、AB1170247、AB1170248、AB1170249、或AB1520085的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、和VL CDR3。
3.如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中这些CDR是卡巴特定义的CDR、乔西亚定义的CDR、IMGT定义的CDR、或AbM定义的CDR。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH包含SEQ ID NO：326、2、20、38、56、74、92、110、128、146、164、182、200、218、236、254、272、290、308、344、362、380、398、416、434、或452的氨基酸序列。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VL包含SEQ ID NO：335、11、29、47、65、83、101、119、137、155、173、191、209、227、245、263、281、299、317、353、371、389、407、425、443、或461的氨基酸序列。
6.一种与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH区和VL，其中VH包含SEQ ID NO：326、2、20、38、56、74、92、110、128、146、164、182、200、218、236、254、272、290、308、344、362、380、398、416、434、或452的氨基酸序列。
7.一种与人GDF-15特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该轻链可变区包含SEQ ID NO：335、11、29、47、65、83、101、119、137、155、173、191、209、227、245、263、281、299、317、353、371、389、407、425、443、或461的氨基酸序列。
8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中该VH和VL包含选自由以下组成的组的序列：(a)分别为SEQ ID NO：326和335；(b)分别为SEQ ID NO：2和11；(c)分别为SEQ ID NO：20和29；(d)分别为SEQ IDNO：38和47；(e)分别为SEQ ID NO：56和65；(f)分别为SEQ ID NO：74和83；(g)分别为SEQ IDNO：92和101；(h)分别为SEQ ID NO：110和119；(i)分别为SEQ ID NO：128和137；(j)分别为SEQ ID NO：146和155；(k)分别为SEQ ID NO：164和173；(l)分别为SEQ ID NO：182和191；(m)分别为SEQ ID NO：200和209；(n)分别为SEQ ID NO：218和227；(o)分别为SEQ ID NO：236和245；(p)分别为SEQ ID NO：254和263；(q)分别为SEQ ID NO：272和281；(r)分别为SEQID NO：290和299；(s)分别为SEQ ID NO：308和317；(t)分别为SEQ ID NO：344和353；(u)分别为SEQ ID NO：362和371；(v)分别为SEQ ID NO：380和389；(w)分别为SEQ ID NO：398和407；(x)分别为SEQ ID NO：416和425；(y)分别为SEQ ID NO：434和443；以及(z)分别为SEQID NO：452和461。
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含VH和/或VL，该VH包含SEQ ID NO：326的序列，该VL包含SEQ ID NO：335的序列。
10.一种与人GDF-15特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中该单克隆抗体或其抗原结合片段与参考抗体结合相同的表位，该参考抗体包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO：326的序列，该VL包含SEQ ID NO：335的序列，任选地其中该表位使用氢/氘交换测定法确定。
11.一种与人GDF-15特异性结合的单克隆抗体或抗原结合片段，其中该单克隆抗体或其抗原结合片段竞争性抑制参考抗体与GDF-15的结合，其中该参考抗体包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO：326的序列，该VL包含SEQ ID NO：335的序列。
12.一种与GDF-15的表位结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，该GDF-15的表位包含GDF-15的氨基酸E25-W32中的氨基酸(SEQ ID NO：485)、GDF-15的氨基酸V33-Q40中的氨基酸(SEQ ID NO：486)、和/或GDF-15的氨基酸I89-L105中的氨基酸(SEQ ID NO：487)。
13.一种与人GDF-15特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中该单克隆抗体或其抗原结合片段抑制GDF-15与GFRAL的相互作用并抑制GDF-15与RET的相互作用。
14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段与食蟹猴GDF-15和/或小鼠GDF-15结合。
15.如权利要求1-14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该抗体或其抗原结合片段能够抑制癌细胞的增殖，任选地其中该增殖被抑制至少25％、至少50％、或至少75％。
16.如权利要求1-15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段能够活化树突状细胞，任选地其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，活化增加一倍。
17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段能够增加T细胞的增殖，任选地其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该增加是至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。
18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段能够增加Th1细胞的分化，任选地其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的分化相比，该增加是至少1.5倍或至少2倍。
19.如权利要求1-18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段抑制GDF-15与GFRAL的相互作用。
20.如权利要求1-19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段抑制GDF-15与RET的相互作用。
21.如权利要求1-20中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与表位结合，该表位包含GDF-15的氨基酸E25-W32中的氨基酸(SEQ ID NO：485)、GDF-15的氨基酸V33-Q40中的氨基酸(SEQ ID NO：486)、和/或GDF-15的氨基酸I89-L105中的氨基酸(SEQ ID NO：487)。
22.如权利要求1-21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含重链，该重链包含含有SEQ ID NO：474的序列的重链恒定结构域。
23.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含轻链，该轻链包含含有SEQ ID NO：475的序列的轻链恒定结构域。
24.如权利要求1-21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段进一步包含重链恒定区。
25.如权利要求24所述的抗体或其抗原结合片段，其中该重链恒定区选自由以下组成的组：人免疫球蛋白IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、以及IgA2重链恒定区。
26.如权利要求25所述的抗体或其抗原结合片段，其中该重链恒定区是人IgG1恒定区。
27.如权利要求1-21和24-26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段进一步包含轻链恒定区。
28.如权利要求27所述的抗体或其抗原结合片段，其中该轻链恒定区选自由人免疫球蛋白IgGκ和IgGλ轻链恒定区组成的组。
29.如权利要求28所述的抗体或其抗原结合片段，其中该轻链恒定区是人IgGκ轻链恒定区。
30.如权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段是IgG抗体或其抗原结合片段。
31.如权利要求1-30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含已经被工程化以改善半衰期的Fc区。
32.如权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含具有YTE突变的Fc区。
33.如权利要求1-32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含具有L234F/L235E/P331S三重突变(TM)的Fc区。
34.如权利要求1-33中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。
35.如权利要求1-34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是全长抗体。
36.如权利要求1-35中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是抗原结合片段。
37.如权利要求36所述的抗原结合片段，其中该抗原结合片段包含Fab、Fab’、F(ab’)2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、胞内抗体、IgGΔCH2、微抗体、F(ab’)3、四抗体、三抗体、双抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、或scFv-Fc。
38.如权利要求1-37中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段进一步包含可检测标记。
39.一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包含编码如权利要求1-38中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的VH或重链的核酸分子。
40.一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包含编码如权利要求1-38中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的VL或轻链的核酸分子。
41.一种载体，该载体包含如权利要求39和/或权利要求40所述的多核苷酸。
42.一种宿主细胞，该宿主细胞包含如权利要求39和/或40所述的多核苷酸、如权利要求41所述的载体、或第一载体和第二载体，该第一载体包含如权利要求39所述的多核苷酸，该第二载体包含如权利要求40所述的多核苷酸。
43.如权利要求42所述的宿主细胞，其中该宿主细胞选自由CHO、NS0、PER-C6、HEK-293、和HeLa细胞组成的组。
44.如权利要求42或43所述的宿主细胞，其中该宿主细胞是分离的。
45.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括培养如权利要求42-44中任一项所述的宿主细胞，使得产生该抗体或其抗原结合片段，任选地其中该方法进一步包括从培养物分离该抗体或其抗原结合片段。
46.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段通过如权利要求45所述的方法产生。
47.一种组合物，该组合物包含如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及任选地药学上可接受的载剂。
48.一种治疗受试者中的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求40所述的组合物。
49.如权利要求48所述的方法，其中该癌症是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、或前列腺癌。
50.如权利要求48或49所述的方法，其中该癌症是GDF-15表达性癌症。
51.一种抑制癌细胞的增殖的方法，该方法包括使这些癌细胞与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物接触。
52.如权利要求51所述的方法，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该增殖被抑制至少25％、至少50％、或至少75％。
53.如权利要求51或52所述的方法，其中这些癌细胞是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝癌(肝细胞癌(HCC))、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、或前列腺癌。
54.一种活化树突状细胞的方法，该方法包括使这些树突状细胞与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物接触。
55.如权利要求54所述的方法，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的活化相比，该抗体或其抗原结合片段使树突状细胞的活化增加一倍。
56.一种增加T细胞的增殖的方法，该方法包括使这些T细胞与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物接触。
57.如权利要求56所述的方法，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的增殖相比，该抗体或其抗原结合片段使T细胞的增殖增加至少25％、至少30％、至少35％、或至少40％。
58.一种增加Th1细胞的分化的方法，该方法包括使这些Th1细胞与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物接触。
59.如权利要求58所述的方法，其中与在该抗体或其抗原结合片段不存在的情况下的分化相比，该抗体或抗原结合片段使Th1细胞的分化增加至少1.5倍或至少2倍。
60.一种抑制GDF-15与RET的相互作用的方法，该方法包括使该GDF-15和/或RET与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物接触。
61.一种抑制GDF-15与GFRAL的相互作用的方法，该方法包括使该GDF-15和/或GFRAL与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物接触。
62.如权利要求51-61中任一项所述的方法，其中该接触在体外发生。
63.如权利要求51-61中任一项所述的方法，其中该接触在受试者中发生。
64.如权利要求63所述的方法，其中该受试者患有癌症，任选地其中该癌症是结直肠癌(CRC)、胃(胃部)癌、肝细胞癌(HCC)、肾细胞癌(RCC)、膀胱癌、食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、或前列腺癌。
65.一种治疗受试者中的恶病质、抑制与恶病质相关的肌肉质量的损失、抑制或减少与恶病质相关的非自愿的体重减轻、抑制与恶病质相关的器官质量的损失、或增加患有恶病质的受试者的食欲的方法，该方法包括向该受试者施用如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物。
66.如权利要求65所述的方法，其中该肌肉质量的损失伴随脂肪质量的损失。
67.如权利要求65所述的方法，其中该器官是肾、肝、心、或脾。
68.如权利要求65或67所述的方法，其中该器官质量的损失伴随肌肉质量的损失、脂肪质量的损失或非自愿的体重减轻。
69.一种降低受试者中的恶病质的发生率和/或严重程度、从而增加能够在受试者中引起恶病质的抗癌剂的最大耐受剂量的方法，该方法包括向该受试者施用如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物。
70.如权利要求65-69中任一项所述的方法，其中该恶病质与选自由以下组成的组的潜在疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、慢性肾脏病、COPD、AIDS、多发性硬化、类风湿性关节炎、脓毒症、和结核病。
71.一种治疗受试者中与恶病质相关的肌少症的方法，该方法包括向该受试者施用如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求47所述的组合物。
72.一种用于检测样品中的人GDF-15的方法，该方法包括使所述样品与如权利要求1-38和46中任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触，任选地其中所述样品获自受试者。
73.如权利要求72所述的方法，其中该受试者患有癌症。
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