BR112015014768B1 - Anticorpos anti-gdf15, seu método de produção, seu uso, e composição farmacêutica compreendendo os mesmos - Google Patents

Abstract

ANTICORPOS ANTI-GDF15, SEU MÉTODO DE PRODUÇÃO, SEU USO, ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA. São divulgados anticorpos monoclonais que se ligam a e inibem a atividade de GDF15 de humano. Os anticorpos podem ser usados para tratar perda de peso corporal, incluindo caquexia, associada à sobre-expressão de GDF15 de humano.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica o benefício de e prioridade em relação a Pedido de Patente Provisória dos E.U.A. No. 61/827,325, depositado a 24 de maio, 2013, e Pedido de Patente Provisória dos E.U.A. 61/745,508, depositado a 21 de dezembro, 2012, a divulgação inteira de cada um dos quais é incorporada por referência aqui na sua totalidade.

ÁREA DA INVENÇÃO

[0002] A área da invenção é biologia molecular, imunologia,caquexia e distúrbios tipo caquexia, e oncologia. Mais particularmente, a área é anticorpos terapêuticos.

ANTECEDENTES

[0003] A perda de peso involuntária pode ser categorizada em três etiologias principais que incluem caquexia, sarcopenia e inanição. A caquexia é uma síndrome metabólica incapacitante associada a numerosas doenças, incluindo câncer, AIDS, insuficiência cardíaca crônica (também conhecida como insuficiência cardíaca congestiva), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença crônica do rim, tuberculose, sepsia e outras formas de inflamação sistêmica. A caquexia varia nas suas manifestações, mas envolve geralmente perda involuntária de massa muscular esquelética e alguma forma de doença subjacente (Evans et al. (2008) CLIN. NUTR. 27:793-799). A caquexia é um distúrbio devastador envolvendo perda de peso involuntária e pode estar associada a inflamação sistêmica e/ou uma resposta inflamatória aguda. Thomas (2007) CLIN. NUTRITION 26:389-399. A perda de massa gorda bem como massa isenta de gorduras, tal como massa muscular, é frequentemente uma característica clínica proeminente da caquexia. Em muitos mas não todos os casos, a caquexia progride através de etapas que foram designadas pré-caquexia, caquexia e caquexia refratária (Fearon et al. (2011) LANCET ONC. 12:489-495). Dois processos diferentes, mas por vezes sobrepostos, parecem conduzir o desenvolvimento e progresso da caquexia: (a) processos metabólicos que atuam diretamente no músculo, reduzindo sua massa e função; e (b) ingestão de alimentos reduzida, que leva a perda de gordura e músculo (Tsai et al. (2012) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE 3:239-243).

[0004] Embora a caquexia seja uma síndrome complexa eincompletamente entendida é claro que GDF15 (também conhecido como MIC-1, PLAB, PDF e NAG-1), um membro da superfamília de TGF-β, é um mediador importante da caquexia em várias doenças (Tsai et al., supra). Pelo menos alguns tumores sobre-expressam e secretam GDF15, e níveis de GDF15 no soro elevados foram associados a vários cânceres (Johnen et al. (2007) NAT. MED. 13:1333-1340; Bauskin et al. (2006) CANCER RES. 66:4983-4986). Anticorpos monoclonais contra GDF15 foram reconhecidos como potenciais agentes terapêuticos anticaquexia. Ver, p.ex., Patente dos E.U.A. No. 8,192,735.

[0005] A perda de peso resultando da caquexia está associada afraco prognóstico em várias doenças (Evans et al., supra), e a caquexia e suas consequências são consideradas como sendo a causa direta de morte em cerca de 20 % das mortes por câncer (Tisdale (2002) NAT. REV. CANCER 2:862-871). A caquexia é infrequentemente revertida por intervenção nutricional, e correntemente esta síndrome é raramente tratada com terapia com fármacos (Evans et al., supra).

[0006] A sarcopenia é uma condição clínica relacionada com a caquexia que é caracterizada por perda de massa muscular esquelética e força muscular. A diminuição na massa muscular pode levar a deficiência funcional, com perda de peso, probabilidade aumentada de quedas, e perda de autonomia. A função respiratória pode ser também prejudicada com uma capacidade vital reduzida. Durante o estresse metabólico, a proteína muscular é rapidamente mobilizada de modo a proporcionar ao sistema imune, fígado e intestinos aminoácidos, particularmente glutamina. A sarcopenia é frequentemente uma doença dos idosos; no entanto, o seu desenvolvimento pode estar também associado a desuso muscular e subnutrição, e pode coincidir com caquexia. A sarcopenia pode ser diagnosticada com base em observações funcionais tais como peso muscular baixo e velocidade de marcha baixa. Ver, p.ex., Muscaritoli et al. (2010) CLIN. NUTRITION 29:154-159.

[0007] A inanição resulta tipicamente em uma perda de massa gorda e não gorda corporal devido a regime alimentar e/ou ingestão nutricional inadequados (Thomas (2007) supra). Os efeitos da inanição são frequentemente revertidos por melhoria do regime alimentar e ingestão nutricional, por exemplo, proteínas.

[0008] Anticorpos ocorrendo naturalmente são proteínas multiméricas que contêm quatro cadeias de polipeptídeos (FIG. 1). Duas das cadeias de polipeptídeos são chamadas cadeias pesadas (cadeias H), e duas das cadeias de polipeptídeos são chamadas cadeias leves (cadeias L). As cadeias pesadas e leves da imunoglobulina estão conectadas por uma ligação intercadeia de dissulfeto. As cadeias pesadas da imunoglobulina estão conectadas por ligações intercadeias de dissulfeto. Uma cadeia leve consiste em uma região variável (VL na FIG. 1) e uma região constante (CL na FIG. 1). A cadeia pesada consiste em uma região variável (VH na FIG. 1) e pelo menos três regiões constantes (CH1, CH2 e CH3 na FIG. 1). As regiões variáveis determinam a especificidade do anticorpo. Cada região variável compreende três regiões hipervariáveis também conhecidas como regiões determinadoras da complementaridade (CDRs) flanqueadas por quatro regiões framework (FRs) relativamente conservadas. As três CDRs, referidas como CDR1, CDR2, e CDR3, contribuem para a especificidade de ligação do anticorpo. Os anticorpos ocorrendo naturalmente têm sido usados como material de início para anticorpos manipulados, tais como anticorpos quiméricos e anticorpos humanizados.

[0009] Existe uma necessidade não atendida significativa de agentes terapêuticos eficazes para tratamento de caquexia e sarcopenia, incluindo anticorpos monoclonais se dirigindo a GDF15. Tais agentes terapêuticos têm o potencial de desempenharem um papel importante no tratamento de vários cânceres e outras doenças potencialmente fatais.

SUMÁRIO

[0010] A invenção é baseada, em parte, na descoberta de uma família de anticorpos que se ligam especificamente a GDF15 de humano (hGDF15). Os anticorpos contêm locais de ligação a GDF15 com base nas CDRs dos anticorpos. Os anticorpos podem ser usados como agentes terapêuticos. Quando usados como agentes terapêuticos, os anticorpos são manipulados, p.ex., humanizados, para reduzir ou eliminar uma resposta imune quando administrados a um paciente humano.

[0011] Os anticorpos divulgados previnem ou inibem a atividade de (i.e., neutralizam) hGDF15. Quando administrados a um mamífero, os anticorpos podem inibir a perda de massa muscular, por exemplo, a perda de massa muscular associada a uma doença subjacente. A doença subjacente pode ser selecionada do grupo consistindo em câncer, insuficiência cardíaca crônica, doença crônica do rim, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepsia, e tuberculose. Em algumas formas de realização, a perda de massa muscular pode ser acompanhada por uma perda de massa gorda. Os anticorpos divulgados podem ser também usados para inibirem a perda de peso involuntária em um mamífero. Em algumas formas de realização, os anticorpos divulgados podem ser também usados para inibirem a perda de massa dos órgãos. Adicionalmente é divulgado um método de tratamento de caquexia e/ou sarcopenia em um mamífero compreendendo administração de uma quantidade eficaz de um de pelo menos um dos anticorpos divulgados a um mamífero com sua necessidade.

[0012] É também divulgado um método para estabelecimento de um nível de estado estacionário de GDF15 de humano recombinante (rhGDF15) maduro no plasma ou soro em um mamífero compreendendo administração de uma proteína de fusão rhGDF15-Fc de imunoglobulina (Fc-rhGDF15) ao mamífero. A Fc-rhGDF15 pode ser um GDF15 de humano recombinante maduro com Fc de camundongo (mFc-rhGDF15). Em algumas formas de realização, o mamífero é um roedor, p.ex., um camundongo.

[0013] Em outro aspeto é divulgado um método de tratamento da obesidade em um mamífero, por exemplo, um humano, compreendendo administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de Fc-rhGDF15, p.ex., um GDF15 de humano recombinante maduro com Fc de humano (hFc-rhGDF15), ao mamífero com sua necessidade. São também divulgadas composições farmacêuticas compreendendo uma proteína de fusão Fc-rhGDF15 e um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0014] Estes e outros aspetos e vantagens da invenção se tornarão aparentes após consideração das seguintes figuras, descrição detalhada, e reivindicações. Como usado aqui, o termo "incluindo" significa sem limitação, e os exemplos citados são não limitantes. Como usado aqui, "anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11" significa anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11, ou suas variantes humanizadas.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0015] A invenção pode ser agora completamente entendida com referência aos seguintes desenhos.

[0016] A FIG. 1 (técnica prévia) é uma representação esquemática de um anticorpo ocorrendo naturalmente típico.

[0017] A FIG. 2 é um gráfico representando resultados de uma experiência para medir níveis no soro de hGDF15 em camundongos ingênuos ou camundongos transportando tumores de xenoenxerto de humano (Chago, RPMI7951, PC3, TOV21G, HT-1080, K-562,LS1034), como determinado por ELISA.

[0018] A FIG. 3 é uma representação gráfica representando resultados de uma experiência para determinar a farmacocinética (PK) no plasma de rhGDF15 clivado administrado por injeção subcutânea (1 μg/g) em camundongos ICR-SCID ingênuos, como determinado por ELISA.

[0019] A FIG. 4 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade caquética da proteína rhGDF15 clivada (■) e controle negativo (PBS (•)) para induzir perda de peso corporal em camundongos imunoincompetentes, ICR-SCID. As setas indicam doses subcutâneas de 1 μg/g de rhGDF15.

[0020] As FIGS. 5A e 5B são gráficos resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade caquética de mFc-rhGDF15 (um Fc de camundongo fundido com o terminal amino de um GDF15 de humano recombinante maduro; ■), rFc-rmGDF15 (um Fc de coelho fundido com o terminal amino de um GDF15 de camundongo recombinante maduro; ▲), e controle negativo (PBS; •) para induzir perda de peso corporal em camundongos Balb/C imunocompetentes (FIG. 5A) e camundongos CB17-SCID imunoincompetentes (FIG. 5B). As setas indicam doses subcutâneas de 1 μg/g de proteína recombinante.

[0021] As FIGS. 6A-6E são gráficos resumindo resultados de uma experiência para demonstrar a atividade caquética de mFc-rhGDF15 (■) e controle negativo (PBS; •) para induzir perda de peso corporal em camundongos ICR-SCID imunoincompetentes (FIG. 6A; as setas indicam doses subcutâneas de 1 μg/g de mFc-rhGDF15); para induzir perda de tecido adiposo ou massa gorda gonadal (FIG. 6B); para induzir perda de massa muscular do músculo gastrocnêmio (FIG. 6C; Massa Gastroc); e para aumentar a expressão de mRNA de marcadores moleculares da degradação muscular (mMuRF1 (FIG. 6D) e mAtrogina (FIG. 6E)).

[0022] A FIG. 7 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade caquética de mFc-rhGDF15 (■) e controle negativo (PBS; •) para induzir perda de peso corporal em camundongos Balb/C nus imunoincompetentes. As setas indicam doses subcutâneas de 1,33 μg/g de mFc-rhGDF15.

[0023] A FIG. 8 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir níveis no soro de mFc-rhGDF15 em camundongos doseados com a proteína recombinante. A presença de mFc-rhGDF15 foi determinada por transferência de Western. Duas bandas positivas correspondendo a mFc-rhGDF15 e rhGDF15 (de acordo com o tamanho molecular apropriado) foram quantificadas por Licor. Foi calculada a percentagem de rhGDF15 versus mFc-rhGDF15 liberto.

[0024] A FIG. 9A é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade caquética de mFc-rhGDF15 (0,1 μg/g (■), 0,01 μg/g (Δ)) e controle negativo (mIgG 0,1 μg/g (•)) para induzir perda de peso corporal em camundongos ICR-SCID imunoincompetentes. As setas indicam a dose intraperitoneal da proteína recombinante. A FIG. 9B é um gráfico representando o nível total de rhGDF15 no plasma de camundongos doseados com mFc- rhGDF15 (0,1 μg/g ( ), 0,01 μg/g (■)) cinco dias pós-dose, como determinado por ELISA.

[0025] A FIG. 10 é um alinhamento de sequências mostrando a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da imunoglobulina completa dos anticorpos 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, e 17B11. As sequências de aminoácidos para cada anticorpo estão alinhadas umas contra as outras, e CDR1, CDR2, e CDR3 estão identificadas em caixas. As sequências não encaixotadas representam sequências framework (FR). O posicionamento do alinhamento (intervalos) é baseado na numeração de Kabat, ao invés de um algoritmo de alinhamento tal como Clustal. A numeração acima das sequências representa a numeração de Kabat.

[0026] A FIG. 11 é um alinhamento de sequências mostrando as sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 para cada uma das sequências da região variável da cadeia pesada da imunoglobulina na FIG. 10.

[0027] A FIG. 12 é um alinhamento de sequências mostrando a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da imunoglobulina completa dos anticorpos 01G06, 03G05, 04F08,06C11, 08G01, 14F11, e 17B11. As sequências de aminoácidos para cada anticorpo estão alinhadas umas contra as outras, e CDR1, CDR2, e CDR3 estão identificadas em caixas. As sequências não encaixotadas representam sequências framework (FR). O posicionamento do alinhamento (intervalos) é baseado na numeração de Kabat, ao invés de um algoritmo de alinhamento tal como Clustal. A numeração acima das sequências representa a numeração de Kabat.

[0028] A FIG. 13 é um alinhamento de sequências mostrando as sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 para cada uma das sequências da região variável da cadeia leve da imunoglobulina na FIG. 12.

[0029] A FIG. 14 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 01G06 (■), 03G05 (▲), 04F08 (▼), 06C11 (O), 14F11 (O), e 17B11 (□), e um controle de IgG de murino (•; mIgG) doseados a 10 mg/kg em um modelo caquético de mFc-rhGDF15 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0030] A FIG. 15 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 01G06 (▲), 03G05 (O), 04F08 (V), 06C11(^), 08G01 (■), 14F11 (♦), e 17B11 (*), e um controle de IgG de murino (•; mIgG), doseados a 10 mg/kg em um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080 em camundongos ICR-SCID. As setas indicam injeção intraperitoneal de anticorpo a cada três dias.

[0031] As FIGS. 16A-16E são gráficos resumindo resultados de uma experiência para demonstrar a atividade anticaquética do anticorpo anti-GDF15 01G06 (■), doseado a 10 mg/kg, em camundongos imunoincompetentes (ICR-SCID) transportando um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080. O tratamento com o anticorpo 01G06 reverteu a perda de peso corporal (FIG. 16A); induziu um aumento significativo no consumo de alimentos durante até três dias pós-dose (FIG. 16B); induziu um ganho de massa gorda gonadal (FIG. 16C); induziu um ganho de massa muscular do músculo gastrocnêmio (FIG. 16D); e diminuiu a expressão de mRNA de marcadores moleculares da degradação muscular (mMuRF1 e mAtrogina (FIG. 16E)) em comparação com controle negativo (IgG de murino (•)). Na FIG. 16A, a seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0032] As FIGS. 17A-17B são gráficos resumindo resultados de uma experiência para demonstrar a atividade anticaquética do anticorpo anti-GDF15 01G06 (■), doseado a 2 mg/kg, em camundongos imunoincompetentes (ICR-SCID) transportando um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080. O tratamento com o anticorpo 01G06 reverteu a perda de peso corporal em comparação com IgG de murino (•) (FIG. 17A); e induziu um ganho de massa dos órgãos (fígado, coração, baço, rim) e induziu um ganho de massa dos tecidos (gonadais e gastrocnêmios) (FIG. 17B) em comparação com controle negativo (IgG de murino) e linha de base (dia 1). As setas na FIG. 17A indicam injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0033] A FIG. 18 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 01G06 (■), 03G05 (▲), 04F08 (X), 06C11(Φ), 08G01 (o), 14F11 ( ), e 17B11 (Δ), e um controle de IgG de murino (•) doseados a 10 mg/kg em um modelo de xenoenxerto tumoral de leucemia K-562 em camundongos imunoincompetentes (CB17SCRFMF). As setas indicam injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0034] A FIG. 19 é um alinhamento de sequências mostrando a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da imunoglobulina completa da região variável de 01G06 quimérico denotada como Ch01G06 Quimérica; regiões variáveis da cadeia pesada de 01G06 humanizado denotadas como Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, e Hu01G06 IGHV1-69 F2; 06C11 quimérica denotada como Ch06C11 Quimérica; regiões variáveis da cadeia pesada de 06C11 humanizado denotadas como HE LM 06C11 IGHV2-70, e Hu06C11 IGHV2-5; 14F11 quimérica denotada como Ch14F11 Quimérica; e regiões variáveis da cadeia pesada de 14F11 humanizado denotadas como Sh14F11 IGHV2-5 e Sh14F11 IGHV2-70. As sequências de aminoácidos para cada anticorpo estão alinhadas umas contra as outras, e CDR1, CDR2, e CDR3 estão identificadas em caixas. As sequências não encaixotadas representam sequências framework (FR). O posicionamento do alinhamento (intervalos) é baseado na numeração de Kabat, ao invés de um algoritmo de alinhamento tal como Clustal. A numeração acima das sequências representa a numeração de Kabat.

[0035] A FIG. 20 é um alinhamento de sequências mostrando as sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 para cada uma das sequências da região variável da cadeia pesada da imunoglobulina na FIG. 19.

[0036] A FIG. 21 é um alinhamento de sequências mostrando a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da imunoglobulina completa da região variável de 01G06 quimérico denotada como Ch01G06 Quimérica; regiões variáveis da cadeia leve de 01G06 humanizado denotadas como Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, e Hu01G06 IGKV1-39 F2; 06C11 quimérica denotado como Ch06C11 Quimérica; região variável da cadeia leve de 06C11 humanizado denotada como Sh06C11 IGKV1-16; 14F11 quimérica denotada como Ch14F11 Quimérica; e região variável da cadeia leve de 14F11 humanizado denotada como Hu14F11 IGKV1-16. As sequências de aminoácidos para cada anticorpo estão alinhadas umas contra as outras, e CDR1, CDR2, e CDR3 estão identificadas em caixas. As sequências não encaixotadas representam sequências framework (FR). O posicionamento do alinhamento (intervalos) é baseado na numeração de Kabat, ao invés de um algoritmo de alinhamento tal como Clustal. A numeração acima das sequências representa a numeração de Kabat.

[0037] A FIG. 22 é um alinhamento de sequências mostrando as sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 para cada uma das sequências da região variável da cadeia leve da imunoglobulina na FIG. 21.

[0038] A FIG. 23 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 01G06 (■), Hu01G06-46 (▲), e Hu01G06-52 (*), e um controle de IgG de murino (•) doseados a 2 mg/kg em um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0039] A FIG. 24 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 06C11 (♦), Hu06C11-27 ( ), e Hu06C11-30 (▲), e um controle de IgG de murino (•) doseados a 2 mg/kg em um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0040] A FIG. 25 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 14F11 (▲), Hu14F11-39 ( ), e Hu14F11-47 (♦), e um controle de IgG de murino (•) doseados a 2 mg/kg em um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0041] A FIG. 26 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 Hu01G06-122 (▼), Hu01G06-127 ( ), Hu01G06-135 (◊), Hu01G06-138 (■), e Hu01G06-146 (♦), e um controle de IgG de humano (•) doseados a 2 mg/kg em um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0042] A FIG. 27 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora caquética dos anticorpos anti-GDF15 Hu01G06-122 (▼), Hu01G06-127 ( ), Hu01G06-135 (◊), Hu01G06-138 (■), e Hu01G06-146 (♦), e um controle de IgG de humano (•) doseados a 2 mg/kg em um modelo caquético de mFc- rhGDF15 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intraperitoneal de anticorpo.

[0043] A FIG. 28 é um gráfico resumindo resultados de uma experiência para medir a atividade inibidora da resposta a dose caquética dos anticorpos anti-GDF15 Hu01G06-127 doseado a 20 mg/kg ( ), 2 mg/kg (Δ), e 0,2 mg/kg (V); Hu01G06-135 a 20 mg/kg (■), 2 mg/kg (▲), e 0,2 mg/kg (▼), e um controle de IgG de humano a 20 mg/kg (•) em um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080 em camundongos ICR-SCID. A seta indica injeção intravenosa de anticorpo.

[0044] As FIGS. 29A-29C são gráficos resumindo resultados de uma experiência para demonstrar a atividade anticaquética dos anticorpos anti-GDF15 Hu01G06-127 (■), doseados a 10 mg/kg, em camundongos imunoincompetentes (ICR-SCID) transportando um modelo de xenoenxerto tumoral de fibrossarcoma HT-1080. O tratamento com o anticorpo Hu01G06-127 reverteu a perda de peso corporal (FIG. 29A); induziu um ganho de massa gorda gonadal (FIG. 29B); e induziu um ganho de massa muscular do músculo gastrocnêmio (FIG. 29 C) em comparação com controle negativo (hIgG (•); FIG. 29A) similar a níveis encontrados em camundongos não transportando tumor (FICTÍCIO (▲); FIG. 29A). As setas na FIG. 29A indicam injeção intraperitoneal de anticorpo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0045] Os anticorpos anti-GDF15 divulgados aqui são baseados nos locais de ligação ao antigênio de certos anticorpos monoclonais que foram selecionados com base na ligação e neutralização de GDF15 de humano (hGDF15). Os anticorpos contêm sequências de CDR de regiões variáveis da imunoglobulina que definem um local de ligação para hGDF15.

[0046] Em virtude da atividade de neutralização destes anticorpos,eles são úteis para tratamento de caquexia e/ou sarcopenia. Para uso como agentes terapêuticos, os anticorpos podem ser manipulados para minimizarem ou eliminarem uma resposta imune quando administrados a um paciente humano. Várias características e aspetos da invenção são discutidos em mais detalhe em baixo.

[0047] Como usado aqui, "caquexia" significa uma syndrome metabólica associada a doença subjacente e caracterizada por perda involuntária de massa muscular. A caquexia é frequentemente acompanhada por peso de peso involuntária, perda de massa gorda, anorexia, inflamação, resistência à insulina, fatiga, fraqueza, perda significativa de apetite, e/ou desagregação da proteína muscular aumentada. A caquexia é diferente de inanição, perda relacionada com a idade de massa muscular, má absorção, e hipertiroidismo. Doenças subjacentes associadas à caquexia incluem câncer, insuficiência cardíaca crônica, doença crônica do rim, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepsia, e tuberculose.

[0048] Como usado aqui, "sarcopenia" é entendida como sendo uma condição caracterizada principalmente por perda de massa muscular esquelética e força muscular. A sarcopenia está frequentemente associada ao envelhecimento. Ver, Ruegg e Glass (2011) ANNUAL REV. PHARMACOL. TOXICOL. 51:373-395. Em uma abordagem, a sarcopenia pode ser identificada em um sujeito se um valor da massa muscular esquelética apendicular de um sujeito dividido pela altura do sujeito em metros estiver mais do que dois desvios padrão abaixo da média normal jovem. (Thomas (2007) supra; ver também Baumgartner et al. (1999) MECH. AGEING DEV. 147:755763).

[0049] Como usado aqui, a não ser que de outro modo indicado,"anticorpo" significa um anticorpo intacto (p.ex., um anticorpo monoclonal intacto) ou fragmento de ligação ao antigênio do anticorpo, incluindo um anticorpo intacto ou fragmento de ligação ao antigênio que foi modificado ou manipulado, ou que é um anticorpo humano. Exemplos de anticorpos que foram modificados ou manipulados são anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, e anticorpos multiespecíficos (p.ex., anticorpos biespecíficos). Exemplos de fragmentos de ligação ao antigênio incluem Fab, Fab', F(ab')2, Fv, anticorpos de cadeia única (p.ex., scFv), minicorpos e diacorpos.

I. Anticorpos Que Se Ligam a GDF15

[0050] Os anticorpos divulgados aqui compreendem: (a) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a estrutura CDRH1-CDRH2-CDRH3 e (b) uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a estrutura CDRL1-CDRL2- CDRL3, em que a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve definem em conjunto um único local de ligação para ligação à proteína hGDF15.

[0051] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a estrutura CDRH1-CDRH2-CDRH3 e (b) uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina, em que a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve definem em conjunto um único local de ligação para ligação a hGDF15. Uma CDRH1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 (01G06, 08G01, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:2 (03G05), SEQ ID NO:3 (04F08), SEQ ID NO:4 (06C11, Ch06C11 Quimérico, HE LM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:5 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), e SEQ ID NO:6 (17B11); uma CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:7 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:8 (03G05), SEQ ID NO:9 (04F08, 06C11, Ch06C11 Quimérico, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:10 (08G01), SEQ ID NO:11 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), SEQ ID NO:12 (17B11), SEQ ID NO:13 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:236 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:237 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:238 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO:239 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e SEQ ID NO:14 (HE LM 06C11 IGHV2-70); e uma CDRH3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:15 (01G06, 08G01, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:16 (03G05), SEQ ID NO:17 (04F08), SEQ ID NO:18 (06C11, Ch06C11 Quimérico, HE LM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:19 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), e SEQ ID NO:20 (17B11). Ao longo desta especificação, uma SEQ ID NO. particular é seguida entre parêntesis pelo anticorpo que foi a origem dessa sequência. Por exemplo, "SEQ ID NO:2 (03G05)" significa que SEQ ID NO:2 provem do anticorpo 03G05.

[0052] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:7 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).

[0053] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:2 (03G05), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:8 (03G05), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:16 (03G05).

[0054] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:3 (04F08), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9 (04F08), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:17 (04F08).

[0055] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:4 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Hu06C11 IGHV2-5), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Hu06C11 IGHV2-5), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Hu06C11 IGHV2-5).

[0056] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (08G01), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10 (08G01), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (08G01).

[0057] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:5 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:11 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2- 70).

[0058] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:6 (17B11), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:12 (17B11), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:20 (17B11).

[0059] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).

[0060] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:236 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).

[0061] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:237 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).

[0062] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:238 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).

[0063] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:239 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).

[0064] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:4 (HE LM 06C11 IGHV2-70), uma CDRH2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14 (HE LM 06C11 IGHV2-70), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:18 (HE LM 06C11 IGHV2-70).

[0065] Preferencialmente, as sequências de CDRH1, CDRH2, e CDRH3 estão interpostas entre sequências FR da imunoglobulina completamente humanas ou humanizadas.

[0066] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende (a) uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a estrutura CDRL1-CDRL2-CDRL3, e (b) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina, em que a região variável da cadeia leve da imunoglobulina e a região variável da cadeia pesada da imunoglobulina definem em conjunto um único local de ligação para ligação a hGDF15. Uma CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:21 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1- 39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:22 (03G05), SEQ ID NO:23 (04F08, 06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16, 14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), SEQ ID NO:24 (08G01), e SEQ ID NO:25 (17B11); uma CDRL2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:26 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1- 39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:27 (03G05), SEQ ID NO:28 (04F08, 06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:29 (08G01), SEQ ID NO:30 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), e SEQ ID NO:31 (17B11); e uma CDRL3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:32 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, 08G01, Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:33 (03G05), SEQ ID NO:34 (04F08), SEQ ID NO:35 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:36 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), e SEQ ID NO:37 (17B11).

[0067] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[0068] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).

[0069] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:22 (03G05), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:27 (03G05), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:33 (03G05).

[0070] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 (04F08), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28 (04F08), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:34 (04F08).

[0071] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:35 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16).

[0072] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:24 (08G01), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:29 (08G01), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32 (08G01).

[0073] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:23 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:30 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:36 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16).

[0074] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:25 (17B11), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:31 (17B11), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 (17B11).

[0075] Preferencialmente, as sequências de CDRL1, CDRL2, e CDRL3 estão interpostas entre sequências FR da imunoglobulina completamente humanas ou humanizadas.

[0076] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a estrutura CDRH1-CDRH2-CDRH3 e (b) uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a estrutura CDRL1-CDRL2-CDRL3, em que a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve definem em conjunto um único local de ligação para ligação a hGDF15. A CDRH1 é uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 (01G06, 08G01, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:2 (03G05), SEQ ID NO:3 (04F08), SEQ ID NO:4 (06C11, Ch06C11 Quimérico, HE LM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:5 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), e SEQ ID NO:6 (17B11); a CDRH2 é uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:7 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:8 (03G05), SEQ ID NO:9 (04F08, 06C11, Ch06C11 Quimérico, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:10 (08G01), SEQ ID NO:11 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), SEQ ID NO:12 (17B11), SEQ ID NO:13 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:236 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:237 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:238 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO:239 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e SEQ ID NO:14 (HE LM 06C11 IGHV2-70); e a CDRH3 é uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:15 (01G06, 08G01, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:16 (03G05), SEQ ID NO:17 (04F08), SEQ ID NO:18 (06C11, Ch06C11 Quimérico, HE LM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:19 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), e SEQ ID NO:20 (17B11). A CDRL1 é uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:21 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:22 (03G05), SEQ ID NO:23 (04F08, 06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16, 14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), SEQ ID NO:24 (08G01), e SEQ ID NO:25 (17B11); a CDRL2 é uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:26 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1- 39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:27 (03G05), SEQ ID NO:28 (04F08, 06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:29 (08G01), SEQ ID NO:30 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), e SEQ ID NO:31 (17B11); e a CDRL3 é uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:32 (01G06, Ch01G06 Quimérico, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, 08G01, Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:33 (03G05), SEQ ID NO:34 (04F08), SEQ ID NO:35 (06C11, Ch06C11 Quimérico, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:36 (14F11, Ch14F11 Quimérico, Hu14F11 IGKV1-16), e SEQ ID NO:37 (17B11).

[0077] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 e SEQ ID NO:38 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), uma CDRH2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:236 e SEQ ID NO:240 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Hu01G06 IGHV1-18 F1); e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[0078] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 e SEQ ID NO:38 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), uma CDRH2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:237 e SEQ ID NO:241 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Hu01G06 IGHV1-18 F2); e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).

[0079] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 e SEQ ID NO:234 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), uma CDRH2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:238 e SEQ ID NO:241 (Hu01G06 IGHV1- 69 F1), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Hu01G06 IGHV1-69 F1); e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (Hu01G06 IGHV1-39 F1), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (Hu01G06 IGHV1-39 F1), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32 (Hu01G06 IGHV1-39 F1).

[0080] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 e SEQ ID NO:234 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:239 e SEQ ID NO:240 (Hu01G06 IGHV1- 69 F2), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Hu01G06 IGHV1-69 F2); e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (Hu01G06 IGHV1-39 F1), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (Hu01G06 IGHV1-39 F1), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32 (Hu01G06 IGHV1-39 F1).

[0081] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:1 e SEQ ID NO:234 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), uma CDRH2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:239 e SEQ ID NO:240 (Hu01G06 IGHV1- 69 F2), e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15 (Hu01G06 IGHV1-69 F2); e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma CDRL1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:21 (Hu01G06 IGHV1-39 F2), uma CDRL2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26 (Hu01G06 IGHV1-39 F2), e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:244 (Hu01G06 IGHV1-39 F2).

[0082] Os anticorpos divulgados aqui compreendem uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina. Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:40 (01G06, Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:42 (03G05), SEQ ID NO:44 (04F08), SEQ ID NO:46 (06C11, Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:48 (08G01), SEQ ID NO:50 (14F11, Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:52 (17B11), SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:250 (Hu01G06 IGHV1- 69 F1), SEQ ID NO:252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO:70 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:72 (Sh14F11 IGHV2-5), e SEQ ID NO:74 (Sh14F11 IGHV2-70); e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina.

[0083] Em outras formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:76 (01G06, Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:78 (03G05), SEQ ID NO:80 (04F08), SEQ ID NO:82 (06C11, Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:84 (08G01), SEQ ID NO:86 (14F11, Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:88 (17B11), SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I ou Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO:96 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), e SEQ ID NO:98 (Hu14F11 IGKV1- 16), e uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina.

[0084] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:40 (01G06, Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:42 (03G05), SEQ ID NO:44 (04F08), SEQ ID NO:46 (06C11, Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:48 (08G01), SEQ ID NO:50 (14F11, Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:52 (17B11), SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO:252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO:70 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:72 (Sh14F11 IGHV2-5), e SEQ ID NO:74 (Sh14F11 IGHV2-70), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:76 (01G06, Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:78 (03G05), SEQ ID NO:80 (04F08), SEQ ID NO:82 (06C11, Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:84 (08G01), SEQ ID NO:86 (14F11, Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:88 (17B11), SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I ou Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO:96 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), e SEQ ID NO:98 (Hu14F11 IGKV1-16).

[0085] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 (01G06, Ch01G06 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (01G06, Ch01G06 Quimérico).

[0086] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:42 (03G05), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:78 (03G05).

[0087] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:44 (04F08), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80 (04F08).

[0088] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46 (06C11), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82 (06C11).

[0089] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:48 (08G01), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:84 (08G01).

[0090] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50 (14F11), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:86 (14F11).

[0091] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52 (17B11), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:88 (17B11).

[0092] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0093] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0094] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0095] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0096] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0097] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0098] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[0099] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 (Ch01G06 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00100] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00101] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00102] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00103] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00104] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00105] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00106] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00107] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 (Ch01G06 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00108] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00109] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00110] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00111] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00112] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00113] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00114] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00115] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 (Ch01G06 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00116] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00117] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00118] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00119] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00120] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00121] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00122] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00123] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[00124] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).

[00125] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[00126] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[00127] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).

[00128] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82 (Ch06C11 Quimérico).

[00129] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:70 (Hu01G06 IGHV2-5), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82 (Ch06C11 Quimérico).

[00130] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46 (Ch06C11 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:96 (Sh06C11 IGKV1-16).

[00131] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:96 (Sh06C11 IGKV1-16).

[00132] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:70 (Hu01G06 IGHV2-5), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:96 (Sh06C11 IGKV1-16).

[00133] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:72 (Sh14F11 IGHV2-5), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:86 (Ch14F11 Quimérico).

[00134] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:74 (Sh14F11 IGHV2-70), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:86 (Ch14F11 Quimérico).

[00135] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50 (Ch14F11 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:98 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00136] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:72 (Sh14F11 IGHV2-5), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:98 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00137] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:74 (Sh14F11 IGHV2-70), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:98 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00138] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46 (Ch06C11 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80 (04F08).

[00139] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50 (Ch14F11 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:80 (04F08).

[00140] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:44 (04F08), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82 (Ch06C11 Quimérico).

[00141] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:50 (Ch14F11 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82 (Ch06C11 Quimérico).

[00142] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:44 (04F08), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:86 (Ch14F11 Quimérico).

[00143] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46 (Ch06C11 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:86 (Ch14F11 Quimérico).

[00144] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:48 (08G01), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76 (Ch01G06 Quimérico).

[00145] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40 (Ch01G06 Quimérico), e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:84 (08G01).

[00146] Em certas formas de realização, os anticorpos divulgados aqui compreendem uma cadeia pesada da imunoglobulina e uma cadeia leve da imunoglobulina. Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:100 (01G06), SEQ ID NO:104 (03G05), SEQ ID NO:108 (04F08), SEQ ID NO:112 (06C11), SEQ ID NO:116 (08G01), SEQ ID NO:120 (14F11), SEQ ID NO:124 (17B11), SEQ ID NO:176 (Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:178 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO:180 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO:182 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO:184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO:186 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO:188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:190 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:256 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:258 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:260 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO:262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:192 (Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:194 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO:196 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:198 (Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:200 (Sh14F11 IGHV2-5), e SEQ ID NO:202 (Sh14F11 IGHV2-70); e uma cadeia leve da imunoglobulina.

[00147] Em outras formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia leve da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:102 (01G06), SEQ ID NO:106 (03G05), SEQ ID NO:110 (04F08), SEQ ID NO:114 (06C11), SEQ ID NO:118 (08G01), SEQ ID NO:122 (14F11), SEQ ID NO:126 (17B11), SEQ ID NO:204 (Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:206 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I ou Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO:264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:212 (Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:214 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:216 (Ch14F11 Quimérico), e SEQ ID NO:218 (Hu14F11 IGKV1-16), e uma cadeia pesada da imunoglobulina.

[00148] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende (i) uma cadeia pesada da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:100 (01G06), SEQ ID NO:104 (03G05), SEQ ID NO:108 (04F08), SEQ ID NO:112 (06C11), SEQ ID NO:116 (08G01), SEQ ID NO:120 (14F11), SEQ ID NO:124 (17B11), SEQ ID NO:176 (Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:178 (Hu01G06 IGHV1- 18), SEQ ID NO:180 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO:182 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO:184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO:186 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO:188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:190 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:256 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:258 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:260 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO:262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:192 (Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:194 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO:196 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:198 (Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:200 (Sh14F11 IGHV2-5), e SEQ ID NO:202 (Sh14F11 IGHV2-70), e (ii) uma cadeia leve da imunoglobulina selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO:102 (01G06), SEQ ID NO:106 (03G05), SEQ ID NO:110 (04F08), SEQ ID NO:114 (06C11), SEQ ID NO:118 (08G01), SEQ ID NO:122 (14F11), SEQ ID NO:126 (17B11), SEQ ID NO:204 (Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:206 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I ou Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO:264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:212 (Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:214 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO:216 (Ch14F11 Quimérico), e SEQ ID NO:218 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00149] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:176 (Ch01G06 Quimérico), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:204 (Ch01G06 Quimérico).

[00150] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:192 (Ch06C11 Quimérico), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:212 (Ch06C11 Quimérico).

[00151] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:198 (Ch14F11 Quimérico), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:216 (Ch14F11 Quimérico).

[00152] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:178 (Hu01G06 IGHV1-18), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:206 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00153] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:180 (Hu01G06 IGHV1-69), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:206 (Hu01G06 IGKV1-39).

[00154] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00155] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).

[00156] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00157] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).

[00158] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:256 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[00159] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:258 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).

[00160] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:260 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[00161] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).

[00162] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).

[00163] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:194 (HE LM 06C11 IGHV2-70), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:214 (Sh06C11 IGKV1-16).

[00164] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:196 (Hu06C11 IGHV2-5), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:214 (Sh06C11 IGKV1-16).

[00165] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:200 (Sh14F11 IGHV2-5), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:218 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00166] Em algumas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:202 (Sh14F11 IGHV2-70), e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:218 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00167] Em certas formas de realização, um anticorpo isolado que se liga a hGDF15 compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, ou 99 % idêntica à região variável inteira ou à sequência FR de SEQ ID NO:40 (01G06, Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:42 (03G05), SEQ ID NO:44 (04F08), SEQ ID NO:46 (06C11, Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:48 (08G01), SEQ ID NO:50 (14F11, Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:52 (17B11), SEQ ID NO:54 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO:56 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO:58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO:60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO:62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO:64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO:66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO:246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO:248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO:250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO:252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO:68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO:70 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO:72 (Sh14F11 IGHV2-5), e SEQ ID NO:74 (Sh14F11 IGHV2-70).

[00168] Em certas formas de realização, um anticorpo isolado que se liga a hGDF15 compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, ou 99 % idêntica à região variável inteira ou à sequência FR de SEQ ID NO:76 (01G06, Ch01G06 Quimérico), SEQ ID NO:78 (03G05), SEQ ID NO:80 (04F08), SEQ ID NO:82 (06C11, Ch06C11 Quimérico), SEQ ID NO:84 (08G01), SEQ ID NO:86 (14F11, Ch14F11 Quimérico), SEQ ID NO:88 (17B11), SEQ ID NO:90 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO:92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I ou Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO:94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO:254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO:96 (Sh06C11 IGKV1-16), e SEQ ID NO:98 (Hu14F11 IGKV1-16).

[00169] A identidade de sequência pode ser determinada de vários modos que estão dentro da perícia de uma pessoa perita na técnica, p.ex., usando software de computador publicamente disponível tal como software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). As análises BLAST (Ferramenta de Pesquisa de Alinhamentos Locais Básicos) usando o algoritmo empregue pelos programas blastp, blastn, blastx, tblastn e tblastx (Karlin et al., (1990) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 87:2264-2268; Altschul, (1993) J. MOL. EVOL. 36:290-300; Altschul et al., (1997) NUCLEIC ACIDS RES. 25:3389-3402, incorporados por referência aqui) são ajustadas para pesquisa de similaridade de sequência. Para uma discussão de questões básicas na procura de bases de dados de sequências ver Altschul et al., (1994) NATURE GENETICS 6:119-129, que é completamente incorporado por referência aqui. Aqueles peritos na técnica conseguem determinar parâmetros apropriados para medição do alinhamento, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar alinhamento máximo sobre o comprimento completo das sequências sendo comparadas. Os parâmetros de procura para o histograma, descrições, alinhamentos, expectativa (i.e., o limiar de significância estatística para registro de correspondências contra sequências das bases de dados), limiar de exclusão, matriz e filtro são as definições padrão. A matriz de pontuação padrão usada pelo blastp, blastx, tblastn e tblastx é a matriz BLOSUM62 (Henikoff et al., (1992) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 89:10915-10919, completamente incorporado por referência aqui). Quatro parâmetros de blastn podem ser ajustados como se segue: Q=10 (penalidade para criação de intervalos); R=10 (penalidade para extensão de intervalos); wink=1 (gera entradas de palavras em cada posição wink.sup.th ao longo da query); e gapw=16 (define a largura da janela dentro da qual os alinhamentos com intervalos são gerados). As definições dos parâmetros de Blastp equivalentes podem ser Q=9; R=2; wink=1; e gapw=32. As procuras podem ser também conduzidas usando o parâmetro de Opção Avançada de BLAST do NCBI (National Center for Biotechnology Information) (p.ex.: -G, Custo para abrir intervalo [Inteiro]: padrão = 5 para nucleotídeos/ 11 para proteínas; -E, Custo para prolongar intervalo [Inteiro]: padrão = 2 para nucleotídeos/ 1 para proteínas; -q, Penalidade para não correspondência de nucleotídeos [Inteiro]: padrão = -3; -r, recompensa por correspondência de nucleotídeos [Inteiro]: padrão = 1; -e, valor esperado [Real]: padrão = 10; -W, tamanho das palavras [Inteiro]: padrão = 11 para nucleotídeos/ 28 para megablast/ 3 para proteínas; - y, Quedas (X) para extensões de blast em bits: padrão = 20 para blastn/ 7 para outros; -X, valor da queda de X para alinhamento com intervalos (em bits): padrão = 15 para todos os programas, não aplicável a blastn; e -Z, valor da queda de X final para alinhamento com intervalos (em bits): 50 para blastn, 25 para outros). ClustalW para alinhamentos de proteínas par a par pode ser também usado (os parâmetros padrão podem incluir, p.ex., matriz Blosum62 e Penalidade de Abertura de Intervalos = 10 e a Penalidade de Extensão de Intervalos = 0,1). Uma comparação Bestfit entre sequências, disponível na versão de pacote GCG 10.0, usa parâmetros de ADN GAP=50 (penalidade de criação de intervalos) e LEN=3 (penalidade de extensão de intervalos). As definições equivalentes em comparações de proteínas Bestfit são GAP=8 e LEN=2.

[00170] Em cada uma das formas de realização anteriores é contemplado aqui que sequências da região variável da cadeia pesada e/ou sequências da região variável da cadeia leve da imunoglobulina que se ligam em conjunto a GDF15 de humano podem conter alterações de aminoácidos (p.ex., pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, ou 10 substituições, deleções, ou adições de aminoácidos) nas regiões framework das regiões variáveis da cadeia pesada e/ou leve.

[00171] Em algumas formas de realização, o anticorpo se liga a hGDF15 com uma KD de 300 pM, 250 pM, 200 pM, 190 pM, 180 pM, 170 pM, 160 pM, 150 pM, 140 pM, 130 pM, 120 pM, 110 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, ou 10 pM, ou mais baixa. A não ser que de outro modo especificado, os valores de KD são determinados por métodos de ressonância de plasmon de superfície ou interferometria de biocamada sob as condições descritas nos Exemplos 8, 14, e 15.

[00172] Em algumas formas de realização, um anticorpo monoclonal se liga ao mesmo epítopo em hGDF15 (p.ex., hGDF15 maduro ou rhGDF15 clivado) ligado por um ou mais dos anticorpos divulgados aqui (p.ex., anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11). Em algumas formas de realização, um anticorpo monoclonal compete quanto à ligação a hGDF15 com um ou mais dos anticorpos divulgados aqui (p.ex., anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11).

[00173] Ensaios de competição para determinação se um anticorpo se liga ao mesmo epítopo que, ou compete quanto à ligação com, um anticorpo anti-GDF15 divulgado aqui são conhecidos na técnica. Ensaios de competição exemplares incluem imunoensaios (p.ex., ensaios ELISA, ensaios RIA), análise por ressonância de plasmon de superfície (p.ex., usando um instrumento BIAcore™), interferometria de biocamada e citometria de fluxo.

[00174] Tipicamente, um ensaio de competição envolve o uso de um antigênio (p.ex., uma proteína hGDF15 ou seu fragmento) ligado a uma superfície sólida ou expresso à superfície de uma célula, um anticorpo antiligação de GDF15 de teste e um anticorpo de referência (p.ex., anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11). O anticorpo de referência está marcado e o anticorpo de teste não está marcado. A inibição competitiva é medida por determinação da quantidade de anticorpo de referência marcado ligado à superfície sólida ou células na presença do anticorpo de teste. Usualmente, o anticorpo de teste está presente em excesso (p.ex., 1x, 5x, 10x, 20x ou 100x). Os anticorpos identificados por ensaio de competição (i.e., anticorpos competitivos) incluem anticorpos se ligando ao mesmo epítopo, ou epítopos similares (p.ex., sobrepostos), como o anticorpo de referência, e anticorpos se ligando a um epítopo adjacente suficientemente próximo do epítopo ligado pelo anticorpo de referência para que ocorra impedimento estérico.

[00175] Em um ensaio de competição exemplar, um anticorpo anti- GDF15 de referência (p.ex., anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11) é biotinilado usando reagentes comercialmente disponíveis. O anticorpo de referência biotinilado é misturado com diluições em série do anticorpo de teste ou anticorpo de referência não marcado (controle de autocompetição) resultando em uma mistura de várias razões molares (p.ex., 1x, 5x, 10x, 20x ou 100x) de anticorpo de teste (ou anticorpo de referência não marcado) em relação a anticorpo de referência marcado. A mistura de anticorpos é adicionada a uma placa de ELISA revestida por polipeptídeo hGDF15. A placa é depois lavada, e peroxidase de rábano-silvestre (HRP)-estreptavidina é adicionado à placa como o reagente de detecção. A quantidade de anticorpo de referência ligado ao antigênio alvo é detectada após adição de um substrato cromogênico (p.ex., TMB (3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina) ou ABTS (2,2”-azino-di-(3- etilbenzotiazolina-6-sulfonato)), que é conhecido na técnica. As leituras de densidade ótica (unidades de OD) são medidas usando um espectrômetro SpectraMax® M2 (Molecular Devices). As unidades de OD correspondendo a percentagem de inibição zero são determinadas a partir de poços sem qualquer anticorpo competitivo. As unidades de OD correspondendo a inibição de 100 %, i.e., o fundo do ensaio são determinadas a partir de poços sem qualquer anticorpo de referência marcado ou anticorpo de teste. A percentagem de inibição de anticorpo de referência marcado para GDF15 pelo anticorpo de teste (ou pelo anticorpo de referência não marcado) a cada concentração é calculada como se segue: % de inibição = (1- (unidades de OD - inibição de 100 %)/(inibição de 0 % - inibição de 100 %))*100. As pessoas peritas na técnica apreciarão que o ensaio de competição pode ser realizado usando vários sistemas de detecção conhecidos na técnica.

[00176] Um ensaio de competição pode ser conduzido em ambas as direções para assegurar que a presença do marcador não interfere ou de outro modo inibe a ligação. Por exemplo, na primeira direção, o anticorpo de referência está marcado e o anticorpo de teste não está marcado, e, na segunda direção, o anticorpo de teste está marcado e o anticorpo de referência não está marcado.

[00177] Um anticorpo de teste compete com o anticorpo de referência quanto à ligação específica ao antigênio se um excesso de um anticorpo (p.ex., 1x, 5x, 10x, 20x ou 100x) inibir a ligação do outro anticorpo, p.ex., pelo menos 50 %, 75 %, 90 %, 95 % ou 99 %, como medido em um ensaio de ligação competitiva.

[00178] Dois anticorpos se ligam ao mesmo epítopo se essencialmente todas as mutações de aminoácidos no antigênio que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro. Dois anticorpos se ligam a epítopos sobrepostos se somente um subconjunto das mutações de aminoácidos que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzir ou eliminar a ligação do outro.

II. Produção de Anticorpos

[00179] Métodos para produção de anticorpos, tais como aqueles divulgados aqui, são conhecidos na técnica. Por exemplo, as moléculas de DNA codificando regiões variáveis da cadeia leve e/ou regiões variáveis da cadeia pesada podem ser quimicamente sintetizadas usando a informação de sequências proporcionada aqui. As moléculas de ADN sintéticas podem ser ligadas a outras sequências de nucleotídeos apropriadas, incluindo, p.ex., sequências de codificação da região constante, e sequências de controle da expressão, para produzir constructos de expressão de genes convencionais codificando os anticorpos desejados. A produção de constructos de genes definidos está dentro da perícia de rotina na técnica. Alternativamente, as sequências proporcionadas aqui podem ser clonadas a partir de hibridomas por técnicas de hibridação ou técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) convencionais, usando sondas de ácido nucleico sintéticas cujas sequências são baseadas em informação de sequências proporcionada aqui, ou informação de sequências da técnica prévia considerando genes codificando as cadeias pesadas e leves de anticorpos de murino em células de hibridoma.

[00180] Ácidos nucleicos codificando anticorpos desejados podem ser incorporados (ligados) em vetores de expressão, que podem ser introduzidos em células hospedeiras através de técnicas de transfecção ou transformação convencionais. Células hospedeiras exemplares são células de E. coli, células do ovário de hamster chinês (CHO), células do rim embriônico de humano 293 (HEK293), células HeLa, células do rim de hamster bebê (BHK), células do rim de macaco (COS), células do carcinoma hepatocelular de humano (p.ex., Hep G2), e células do mieloma que de outro modo não produzem proteína de IgG. As células hospedeiras transformadas podem ser cultivadas sob condições que permitem que as células hospedeiras expressem os genes que codificam as regiões variáveis da cadeia leve e/ou pesada da imunoglobulina.

[00181] As condições de expressão e purificação específicas irão variar dependendo do sistema de expressão empregue. Por exemplo, se um gene é para ser expresso em E. coli, é em primeiro lugar clonado em um vetor de expressão por posicionamento do gene manipulado a jusante de um promotor bacteriano adequado, p.ex., Trp ou Tac, e uma sequência sinal procariótica. A proteína secretada expressa se acumula em corpos refráteis ou de inclusão, e pode ser coletada após disrupção das células por prensa francesa ou sonicação. Os corpos refráteis são depois solubilizados, e as proteínas redobradas e clivadas por métodos conhecidos na técnica.

[00182] Se o gene manipulado for para ser expresso em células hospedeiras eucarióticas, p.ex., células CHO, é em primeiro lugar introduzido em um vetor de expressão contendo um promotor eucariótico adequado, um sinal de secreção, uma sequência de poli A, e um códon de paragem. Opcionalmente, o vetor ou constructo de genes pode conter intensificadores e íntrons. Este vetor de expressão contém opcionalmente sequências codificando toda ou parte de uma região constante, permitindo que uma cadeia pesada ou leve inteira, ou uma parte, seja expressa. O constructo de genes pode ser introduzido em células hospedeiras eucarióticas usando técnicas convencionais. As células hospedeiras expressam fragmentos VL ou VH, heterodímeros VL-VH, polipéptidos de cadeia única VH-VL ou VL-VH, cadeias pesadas e leves completas da imunoglobulina, ou suas porções, cada uma das quais pode ser estar anexada a uma fração tendo outra função (p.ex., citotoxicidade). Em algumas formas de realização, uma célula hospedeira é transfectada com um único vetor expressando um polipeptídeo expressando uma cadeia pesada (p.ex., uma região variável da cadeia pesada) ou uma cadeia leve (p.ex., uma região variável da cadeia leve) inteira, ou parte. Em algumas formas de realização, uma célula hospedeira é transfectada com um único vetor codificando (a) um polipeptídeo compreendendo uma região variável da cadeia pesada e um polipeptídeo compreendendo uma região variável da cadeia leve, ou (b) uma cadeia pesada inteira da imunoglobulina e uma cadeia leve inteira da imunoglobulina. Em algumas formas de realização, uma célula hospedeira é cotransfectada com mais do que um vetor de expressão (p.ex., um vetor de expressão expressando um polipeptídeo compreendendo uma cadeia pesada ou região variável da cadeia pesada inteira, ou parte, e outro vetor de expressão expressando um polipeptídeo compreendendo uma cadeia leve ou região variável da cadeia leve inteira, ou parte).

[00183] Um polipeptídeo compreendendo uma região variável da cadeia pesada ou uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina pode ser produzido por crescimento (cultivo) de uma célula hospedeira transfectada com um vetor de expressão codificando uma tal região variável, sob condições que permitam expressão do polipeptídeo. Após expressão, o polipeptídeo pode ser coletado e purificado ou isolado usando técnicas conhecidas na técnica, p.ex., marcadores de afinidade tais como marcadores de glutationa-S- transferase (GST) ou histidina.

[00184] Um anticorpo monoclonal que se liga a hGDF15, ou um fragmento de ligação ao antigênio do anticorpo, pode ser produzido por crescimento (cultivo) de uma célula hospedeira transfectada com: (a) um vetor de expressão que codifica uma cadeia pesada completa ou parcial da imunoglobulina, e um vetor de expressão separado que codifica uma cadeia leve da completa ou parcial da imunoglobulina; ou (b) um único vetor de expressão que codifica ambas as cadeias (p.ex., cadeias pesadas e leves completas ou parciais), sob condições que permitam expressão de ambas as cadeias. O anticorpo intacto (ou fragmento de ligação ao antigênio) pode ser coletado e purificado ou isolado usando técnicas conhecidas na técnica, p.ex., Proteína A, Proteína G, marcadores de afinidade tais como marcadores de glutationa-S-transferase (GST) ou histidina. Está dentro da perícia ordinária na técnica expressar a cadeia pesada e a cadeia leve a partir de um único vetor de expressão ou a partir de dois vetores de expressão separados.

III. Modificações de Anticorpos

[00185] Métodos para redução ou eliminação da antigenicidade de anticorpos e fragmentos de anticorpos são conhecidos na técnica. Quando os anticorpos são para ser administrados a um humano, os anticorpos são preferencialmente "humanizados" para reduzir ou eliminar a antigenicidade em humanos. Preferencialmente, cada anticorpo humanizado tem a mesma ou substancialmente a mesma afinidade para o antigênio do que o anticorpo de camundongo não humanizado do qual foi derivado.

[00186] Em uma abordagem de humanização são criadas proteínas quiméricas nas quais as regiões constantes da imunoglobulina de camundongo são substituídas por regiões constantes da imunoglobulina de humano. Ver, p.ex., Morrison et al.,1984, PROC. NAT. ACAD. SCI. 81:6851-6855, Neuberger et al., 1984, NATURE 312:604-608; Patentes dos E.U.A. Nos. 6,893,625 (Robinson); 5,500,362 (Robinson); e 4,816,567 (Cabilly).

[00187] Em uma abordagem conhecida como enxertia de CDR, as CDRs das regiões variáveis da cadeia leve e pesada são enxertadas em frameworks de outra espécie. Por exemplo, CDRs de murino podem ser enxertadas em FRs de humano. Em algumas formas de realização, as CDRs das regiões variáveis da cadeia leve e pesada de um anticorpo anti-GDF15 são enxertadas em FRs de humano ou FRs de humano de consenso. Para criar FRs de humano de consenso, FRs de várias sequências de aminoácidos da cadeia pesada ou cadeia leve de humano são alinhadas para se identificar uma sequência de aminoácidos de consenso. A enxertia de CDR é descrita nas Patentes dos E.U.A. Nos. 7,022,500 (Queen); 6,982,321 (Winter); 6,180,370 (Queen); 6,054,297 (Carter); 5,693,762 (Queen); 5,859,205 (Adair); 5,693,761 (Queen); 5,565,332 (Hoogenboom); 5,585,089 (Queen); 5,530,101 (Queen); Jones et al. (1986) NATURE 321: 522-525; Riechmann et al. (1988) NATURE 332: 323-327; Verhoeyen et al. (1988) SCIENCE 239: 1534-1536; e Winter (1998) FEBS LETT 430: 92-94.

[00188] Em uma abordagem chamada "SUPERHUMANIZATION™", sequências de CDR de humano são escolhidas a partir de genes da linha germinativa de humano, com base na similaridade estrutural das CDRs de humano com aquelas do anticorpo de camundongo a ser humanizado. Ver, p.ex., Patente dos E.U.A. No. 6,881,557 (Foote); e Tan et al., 2002, J. IMMUNOL. 169:1119-1125.

[00189] Outros métodos para reduzir a imunogenicidade incluem "reformulação", "hiperquimerização", e "folheamento/recapeamento". Ver, p.ex., Vaswami et al., 1998, ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA, & IMMUNOL. 81:105; Roguska et al., 1996, PROT. ENGINEER 9:895904; e Patente dos E.U.A. No. 6,072,035 (Hardman). Na abordagem de folheamento/recapeamento, os resíduos de aminoácidos acessíveis à superfície no anticorpo de murino são substituídos por resíduos de aminoácidos mais frequentemente encontrados nas mesmas posições em um anticorpo de humano. Este tipo de recapeamento de anticorpos é descrito, p.ex., na Patente dos E.U.A. No. 5,639,641 (Pedersen).

[00190] Outra abordagem para converter um anticorpo de camundongo em uma forma adequada para uso médico em humanos é conhecida como tecnologia ACTIVMABTM (Vaccinex, Inc., Rochester, NI), que envolve um vetor baseado no vírus vaccínia para expressar anticorpos em células de mamíferos. Se diz que níveis elevados da diversidade combinatorial de cadeias pesadas e leves de IgG são produzidos. Ver, p.ex., Patentes dos E.U.A. Nos. 6,706,477 (Zauderer); 6,800,442 (Zauderer); e 6,872,518 (Zauderer).

[00191] Outra abordagem para converter um anticorpo de camundongo em uma forma adequada para uso em humanos é a tecnologia comercialmente praticada pela KaloBios Pharmaceuticals, Inc. (Palo Alto, CA). Esta tecnologia envolve o uso de uma biblioteca "aceitadora" humana patenteada para produzir uma biblioteca "focada em epítopos" para seleção de anticorpos.

[00192] Outra abordagem para modificar um anticorpo de camundongo em uma forma adequada para uso médico em humanos é a tecnologia HUMAN ENGINEERINGTM, que é comercialmente praticada pela XOMA (US) LLC. Ver, p.ex., Publicação PCT No. WO 93/11794 e Patentes dos E.U.A. Nos. 5,766,886 (Studnicka); 5,770,196 (Studnicka); 5,821,123 (Studnicka); e 5,869,619 (Studnicka).

[00193] Qualquer abordagem adequada, incluindo qualquer uma das abordagens acima, pode ser usada para reduzir ou eliminar a imunogenicidade humana de um anticorpo.

[00194] Adicionalmente é possível criar anticorpos completamente humanos em camundongos. mAbs completamente humanos não tendo quaisquer sequências de não humano podem ser preparados a partir de camundongos transgênicos com imunoglobulina de humano por técnicas referenciadas em, p.ex., Lonberg et al., NATURE 368:856-859, 1994; Fishwild et al., NATURE BIOTECHNOLOGY 14:845-851, 1996; e Mendez et al., NATURE GENETICS 15:146-156, 1997. mAbs completamente humanos podem ser também preparados e otimizados a partir de bibliotecas de exibição de fagos por técnicas referenciadas em, p.ex., Knappik et al., J. MOL. BIOL. 296:57-86, 2000; e Krebs et al., J. Immunol. Meth. 254:67-84 2001.

IV. Usos Terapêuticos

[00195] Os anticorpos divulgados aqui podem ser usados para tratar uma variedade de distúrbios, por exemplo, caquexia e/ou sarcopenia. Em algumas formas de realização, os anticorpos divulgados aqui (p.ex., 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11) são usados para inibirem a perda de massa muscular, por exemplo, a perda de massa muscular associada a uma doença subjacente. Doenças subjacentes associadas à caquexia incluem, mas não estão limitadas a, câncer, insuficiência cardíaca crônica, doença crônica do rim, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepsia, e tuberculose. Em algumas formas de realização, os anticorpos divulgados inibem a perda de massa muscular em pelo menos 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 %, ou 100 %.

[00196] Em algumas formas de realização, uma perda de massa muscular é acompanhada por uma perda de massa gorda. Os anticorpos divulgados aqui (p.ex., 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11) podem inibir a perda de massa gorda em pelo menos 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 %, ou 100 %.

[00197] Em outras formas de realização, os anticorpos divulgados aqui (p.ex., 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11) são usados para tratarem uma ou mais características acompanhando caquexia e/ou sarcopenia, p.ex., perda de peso corporal involuntária. Em algumas formas de realização, os anticorpos revertem a perda de peso corporal involuntária em pelo menos 2 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, ou 35 %.

[00198] Em outra forma de realização, os anticorpos divulgados aqui (p.ex., 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11) são usados para inibirem a perda de massa dos órgãos, por exemplo, perda de massa dos órgãos associada a uma doença subjacente. Doenças subjacentes associadas à caquexia incluem, mas não estão limitadas a, câncer, insuficiência cardíaca crônica, doença crônica do rim, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepsia, e tuberculose. Em algumas formas de realização, os anticorpos divulgados inibem a perda de massa dos órgãos em pelo menos 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 %, ou 100 %. Em algumas formas de realização é observada perda de massa dos órgãos no coração, fígado, rim, e/ou baço. Em algumas formas de realização, a perda de massa dos órgãos é acompanhada por uma perda de massa muscular, uma perda de massa gorda e/ou perda de peso involuntária.

[00199] O anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11 pode ser usado em terapia. Por exemplo, o anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11 pode ser usado para tratar caquexia e/ou sarcopenia. O uso do anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11 para tratar caquexia e/oi sarcopenia em um mamífero compreende administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo.

[00200] Podem ocorrer sarcopenia, distúrbios musculares devastadores e perda de peso muscular significativa na ausência de caquexia, apetite diminuído ou perda de peso corporal. Em certas formas de realização, portanto, um ou mais dos anticorpos anti-GDF da invenção (por exemplo, o anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, ou 17B11) podem ser usados para tratar um sujeito sofrendo de, ou que foi diagnosticado com, sarcopenia, um distúrbio muscular devastador e/ou perda de peso muscular significativa, quer ou não o sujeito tenha, ou tenha sido diagnosticado com, caquexia ou apetite diminuído. Um tal método compreende administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais anticorpos da invenção ao sujeito com sua necessidade.

[00201] As proteínas de fusão Fc-rhGDF15 divulgadas aqui podem ser usadas para tratar a obesidade. Em algumas formas de realização, as proteínas de fusão hFc-rhGDF15 divulgadas aqui são usadas para inibirem o ganho de peso ou para reduzirem o peso corporal em pelo menos 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % ou 50 %. O uso de uma proteína de fusão hFc-hGDF15 para tratar a obesidade em um mamífero compreende administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz da proteína de fusão.

[00202] Como usado aqui, "tratar, "tratando" e "tratamento" significam o tratamento de uma doença em um mamífero, p.ex., em um humano. Isto inclui: (a) inibição da doença, i.e., suspensão do seu desenvolvimento; e (b) atenuação da doença, i.e., causar regressão do estado da doença.

[00203] Geralmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um componente ativo (p.ex., um anticorpo ou uma proteína de fusão) está na gama de 0,1 mg/kg a 100 mg/kg, p.ex., 1 mg/kg a 100 mg/kg, p.ex., 1 mg/kg a 10 mg/kg, p.ex., 2,0 mg/kg a 10 mg/kg. A quantidade administrada dependerá de variáveis tais como o tipo e extensão da doença ou indicação a ser tratada, a saúde global do paciente, a potência in vivo do anticorpo ou proteína de fusão, a formulação farmacêutica, a meia-vida no soro do anticorpo ou proteína de fusão, e a rota de administração. A dosagem inicial pode ser aumentada para além do nível superior de modo a se alcançar rapidamente o nível no sangue ou tecidos desejado. Alternativamente, a dosagem inicial pode ser mais pequena do que o ótimo, e a dosagem pode ser progressivamente aumentada no decurso do tratamento. A dosagem a humanos pode ser otimizada, p.ex., em um estudo de escalonamento da dose de Fase I convencional desenhado para operar de 0,5 mg/kg a 20 mg/kg. A frequência da dosagem pode variar, dependendo de fatores tais como rota de administração, quantidade de dosagem, meia-vida no soro do anticorpo ou proteína de fusão, e a doença sendo tratada. Frequências de dosagem exemplares são uma vez por dia, uma vez por semana e uma vez a cada duas semanas. Em algumas formas de realização, a dosagem é uma vez a cada duas semanas. Uma rota de administração preferencial é parenteral, p.ex., infusão intravenosa. A formulação de fármacos baseados em anticorpos monoclonais e fármacos baseados em proteínas de fusão está dentro da perícia ordinária na técnica. Em algumas formas de realização, o anticorpo ou proteína de fusão é liofilizado, e depois reconstituído em salino tamponado, aquando da administração. A quantidade eficaz de um segundo agente ativo, por exemplo, um agente anticancerígeno ou os outros agentes discutidos em baixo, seguirá também os princípios discutidos aqui anteriormente e será escolhida de modo a provocar o benefício terapêutico requerido no paciente.

[00204] Para uso terapêutico, um anticorpo é preferencialmente combinado com um transportador farmaceuticamente aceitável. Como usado aqui, "transportador farmaceuticamente aceitável" significa tampões, transportadores, e excipientes adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica excessivas, ou outro problema ou complicação, proporcional a uma razão benefício/risco razoável. O(s) transportador(es) deve(m) ser "aceitável(eis)" no sentido de ser(em) compatível(eis) com os outros ingredientes das formulações e não ser(em) prejudicial(ais) para o recipiente. Transportadores farmaceuticamente aceitáveis incluem tampões, solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes isotônicos e de atraso da absorção, e similares, que sejam compatíveis com administração farmacêutica. O uso de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é conhecido na técnica.

[00205] Composições farmacêuticas contendo anticorpos ou proteínas de fusão, tais como aqueles divulgados aqui, podem ser apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer método adequado. Uma composição farmacêutica deve ser formulada para ser compatível com sua rota de administração pretendida. Exemplos de rotas de administração são administração intravenosa (IV), intradérmica, por inalação, transdérmica, tópica, transmucosal, e retal. Uma rota de administração preferencial para anticorpos monoclonais é infusão IV. Formulações úteis podem ser preparadas por métodos conhecidos na técnica farmacêutica. Por exemplo ver Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. (Mack Publishing Company, 1990). Componentes de formulação adequados para administração parenteral incluem um diluente estéril tal como água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietileno glicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tais como álcool de benzila ou parabenos de metila; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes tais como EDTA; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos; e agentes para o ajuste da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose.

[00206] Para administração intravenosa, transportadores adequados incluem salino fisiológico, água bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, NJ) ou salino tamponado com fosfato (PBS). O transportador deve ser estável sob as condições de fabricação e armazenagem, e deve ser preservado contra microrganismos. O transportador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido), e suas misturas adequadas.

[00207] As formulações farmacêuticas são preferencialmente estéreis. A esterilização pode ser alcançada, por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis. Onde a composição é liofilizada pode ser conduzida esterilização por filtração antes das ou após as liofilização e reconstituição.

[00208] Adicionalmente à via de GDF15 (i.e., MIC- 1/PLAB/PDF/NAG-1), outras citocinas implicadas na caquexia incluem Ativina A e IL-6. Níveis de ativina aumentados foram associados a caquexia associada a cânceres e tumores gonadais. Ver, p.ex., Marino et al. (2013) CYTOKINE & GROWTH FACTOR REV. 24:477-484. A ativina A é um membro da família de TGF-beta, e é um ligando do receptor da ativina tipo 2, AtRIIB. Ver, p.ex., Zhou et al. (2010) CELL 142:531-543. Se mostrou que os níveis em circulação de IL-6 se correlacionam com perda de peso em pacientes com câncer, bem como com sobrevivência reduzida. Ver, p.ex., Fearon et al. (2012) CELL METABOLISM 16:153-166.

[00209] Conformemente, em certas formas de realização da presente invenção, um ou mais inibidores de Ativina-A ou do receptor da Ativina-A, AtRIIB, IL-6 ou do receptor de IL-6 (IL-6R), podem ser administrados em combinação com (por exemplo, administrados ao mesmo tempo do que, administrados antes de, ou administrados após) um anticorpo da presente invenção que inibe a atividade de GDF-15. Inibidores exemplares de Ativina A ou AtRIIB incluem, por exemplo, um anticorpo anti-Ativina-A ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um anticorpo anti-AtRIIB ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um inibidor de pequena molécula de Ativina-A, um inibidor de pequena molécula de AtRIIB, e um receptor "engodo" de AtRIIB, tal como um receptor de AtRIIB solúvel e uma fusão do receptor de AtRIIB solúvel com uma molécula de Fc (AtRIIB-Fc). Ver, por exemplo, Zhou et al. (2010), supra. Inibidores adequados de IL-6 ou IL-6R incluem um anticorpo anti-IL-6 ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um anticorpo anti-IL-6R ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um inibidor de pequena molécula de IL-6, um inibidor de pequena molécula de IL-6R, e um receptor "engodo" de IL-6R, tal como um receptor de IL-6 solúvel e uma fusão do receptor de IL-6 solúvel com uma molécula de Fc (IL6R-Fc). Ver, p.ex., Enomoto et al. (2004) BIOCHEM. AND BIOPHYS. RES. COMM. 323:1096-1102; Argiles et al. (2011) EUR. J. PHARMACOL. 668:S81-S86; Tuca et al. (2013) ONCOLOGY/HEMATOLOGY 88:625-636. Inibidores adequados de IL-6 ou IL-6R podem incluir, por exemplo, Tocilizumab (Actemra®, Hoffmann-LaRoche), um anticorpo monoclonal anti-IL-6R humanizado aprovado para tratamento da artrite reumatoide, e Sarilumab/REGN88 (Regeneron), um anticorpo anti-IL6R humanizado em desenvolvimento clínico para tratamento da artrite reumatoide; e Selumetinib/AZD6244 (AstraZeneca), um inibidor alostérico de MEK, que se mostrou que inibe a produção de IL-6. Prado et al. (2012) BRITISH J. CANCER 106:1583-1586.

[00210] TNFα e IL-1 são citocinas conhecidas como estando envolvidas na mediação da resposta pró-inflamatória, que estão também implicadas na depleção muscular, anorexia e caquexia. Níveis em circulação de TNFα aumentados parecem inibir a miogênese. TNFα, também conhecido como "caquetina", estimula a secreção de interleucina-1 e está implicado na indução da caquexia. IL-1 é um potente desencadeador da resposta inflamatória de fase aguda, e se mostrou que a infusão de IL-1 pode levar a perda de peso e perda de apetite notáveis. Se mostrou que IL-1 contribui para o início de caquexia cancerígena em camundongos transportando um adenocarcinoma de cólon-26 de murino (Strassmann et al. (1993) J. IMMUNOL. 150:2341). Ver também, Mathys e Billiau (1997) NUTRITION 13:763-770; Fong et al. (1989) AM. J. PHYSIOL. - REGULATORY, INTEGRATIVE AND COMPARATIVE PHYSIOL., 256:R659-R665. Assim, inibidores de TNFα e inibidores de IL-1 que são usados no tratamento da artrite reumatoide podem ser também úteis no tratamento da caquexia.

[00211] Conformemente, em certas formas de realização da presente invenção, um ou mais inibidores de TNFα ou IL-1 podem ser administrados em combinação com (por exemplo, administrados ao mesmo tempo do que, administrados antes de, ou administrados após) um anticorpo da presente invenção que inibe a atividade de GDF-15. Inibidores adequados de TNFα ou IL-1 incluem um anticorpo anti- TNFα ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um anticorpo anti- IL-1 ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um inibidor de pequena molécula de TNFα ou IL-1, e um receptor "engodo" de TNFα ou IL-1, tal como um receptor de TNFα ou IL-1 solúvel e uma fusão da forma solúvel de TNFα ou IL1 com uma molécula de Fc. Inibidores adequados de TNFα incluem, por exemplo, etanercept (Enbrel®, Pfizer/Amgen), infliximab (Remicade®, Janssen Biotech), adalimumab (Humira®, Abbvie), golimumab (Simponi®, Johnson and Johnson/Merck), e certolizumab pegol (Cimzia®, UCB). Inibidores de IL-1 adequados incluem, por exemplo, anticorpo Xilonix® que se dirige a IL-1α (XBiotech), anikinra (Kinaret®, Amgen), canakinumab (Ilaris®, Novartis), e rilonacept (Arcalyst®, Regeneron). Em certas formas de realização, o inibidor de TNFα ou inibidor de IL-1, que é tipicamente administrado sistemicamente para o tratamento da artrite reumatoide, pode ser administrado localmente e diretamente ao local tumoral.

[00212] A miostatina, também conhecida como GDF-8, é um membro da família de TGF-β de peptídeos que é um regulador negativo da massa muscular, como mostrado por massa muscular aumentada em mamíferos deficientes em miostatina. A miostatina é um ligando do receptor da ativina de tipo 2, AtRIIB. Conformemente, em certas formas de realização da presente invenção, um ou mais inibidores da miostatina ou seu receptor podem ser administrados em combinação com (por exemplo, administrados ao mesmo tempo do que, administrados antes de, ou administrados após) um anticorpo da invenção que inibe a atividade de GDF-15. Inibidores adequados da miostatina ou AtRIIB incluem um anticorpo antimiostatina ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um anticorpo anti-AtRIIB ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um inibidor de pequena molécula da miostatina, um inibidor de pequena molécula de AtRIIB, e um receptor "engodo" de GDF-8, tal como um receptor de AtRIIB solúvel e uma fusão do receptor da forma solúvel de AtRIIB com uma molécula de Fc. Ver, p.ex., Lokireddy et al. (2012) BIOCHEM. J. 446(1):23-26. Inibidores da miostatina que podem ser adequados para a presente invenção incluem REGN1033 (Regeneron); ver Bauerlein et al. (2013) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE: Resumos da 7a Cachexia Conference, Kobe/Osaka, Japão, 9-11 dezembro, 2013, Resumo 4-06; LY2495655 (Lilly), um anticorpo antimiostatina humanizado em desenvolvimento clínico pela Eli Lilly; ver também "A PHASE 2 STUDY OF LY2495655 IN PARTICIPANTS WITH PANCREATIC CANCER", disponível na world wide web em clinicaltrials.gov/ct2/NCT01505530; identificador NML: NCT01505530; ACE-031 (Acceleron Pharma); e stamulumab (Pfizer).

[00213] Agentes tais como Grelina ou miméticos da grelina, ou outros secretágogos do hormônio de crescimento (GHS) que são capazes de ativar o receptor de GHS (GHS-R1a), também conhecidos como o receptor da grelina, podem ser úteis para ingestão de alimentos e peso corporal crescentes em humanos. Ver Guillory et al. (2013) em VITAMINS AND HORMONES vol. 92, cap.3; e Steinman e DeBoer (2013) VITAMINS AND HORMONES vol. 92, cap. 8. Miméticos da grelina adequados incluem anamorelina (Helsinn, Lugano, CH); Ver Temel et al. (2013) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE: Resumos da 7a Cachexia Conference, Kobe/Osaka, Japão, 9-11 dezembro, 2013, Resumo 5-01. Outras moléculas de GHS adequadas podem ser identificadas, por exemplo, usando o ensaio de competição de Grelina com receptor do secretágogo do hormônio de crescimento descrito nas Publicações PCT Nos. WO2011/117254 e WO2012/113103.

[00214] Agonistas do receptor do androgênio, incluindo pequenas moléculas e outros moduladores do receptor do androgênio seletivos (SARMs), podem ser usados no tratamento da caquexia e/ou sarcopenia. Ver, p.ex., Mohler et al. (2009) J. MED. CHEM. 52:35973617; Nagata et al. (2011) BIOORGANIC AND MED. CHEM. LETTERS 21:1744-1747; e Chen et al. (2005) MOL. INTERV. 5:173188. Idealmente, os SARMs devem atuar como agonistas completos, como a testosterona, em tecidos alvo anabólicos, tais como músculo e osso, mas devem demonstrar somente atividades do receptor do androgênio parciais ou puras em tecido da próstata. Ver, p.ex., Bovee et al. (2010) J. STEROID BIOCHEM. & MOL. BIOL. 118:85-92. SARMs adequados podem ser identificados, por exemplo, por uso dos métodos e ensaios descritos em Zhang et al. (2006) BIOORG. MED. CHEM. LETT. 16:5763-5766; e Zhang et al. (2007) BIOORG. MED. CHEM. LETT. 17:439-443. SARMs adequados incluem, por exemplo, GTx-024 (enobosarm, Ostarine®, GTx, Inc.), um SARM em desenvolvimento clínico de fase II pela GTx, Inc. Ver também, Dalton et al. (2011) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE 2:153-161. Outros SARMs adequados incluem 2-(2,2,2)-trifluoroetil-benzimidazóis (Ng et al. (2007) BIOORG. MED. CHEM. LETT. 17:1784-1787) e JNJ- 26146900 (Allan et al. (2007) J. STEROID BIOCHEM. & MOL. BIOL. 103:76-83).

[00215] Bloqueadores do receptor e-adrenérgico, ou beta- bloqueadores, foram estudados quanto ao seu efeito no peso corporal em sujeitos caquéxicos, e foram associados à reversão parcial da caquexia em pacientes com insuficiência cardíaca congestiva. Ver, p.ex., Hryniewicz et al. (2003) J. CARDIAC FAILURE 9:464-468. O beta-bloqueador MT-102 (PsiOxus Therapeutics, Ltd.) foi avaliado em um ensaio clínico de fase 2 para sujeitos com caquexia cancerígena. Ver Coats et al. (2011) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE 2:201207.

[00216] Camundongos nocaute em termos do receptor da melanocortina com um defeito genético na sinalização da melanocortina exibem um fenótipo oposto àquela da caquexia: apetite aumentado, massa corporal magra aumentada, e metabolismo diminuído. Assim, o antagonismo da melanocortina tem emergido como um potencial tratamento para caquexia associada a doença crônica (DeBoer e Marks (2006) TRENDS IN ENDOCRINOLOGY AND METABOLISM 17:199-204). Conformemente, em certas formas de realização da presente invenção, um ou mais inibidores de um peptídeo da melanocortina ou um receptor da melanocortina podem ser administrados em combinação (por exemplo, administrados ao mesmo tempo do que, administrados antes de, ou administrados após) com um anticorpo da invenção que inibe a atividade de GDF-15. Inibidores adequados de melanocortinas ou receptores da melanocortina incluem um anticorpo antipeptídeo da melanocortina ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um anticorpo antirreceptor da melanocortina ou um seu fragmento de ligação ao antigênio, um inibidor de pequena molécula de um peptídeo da melanocortina, um inibidor de pequena molécula de um receptor da melanocortina, e um receptor "engodo" de um receptor da melanocortina, tal como um receptor da melanocortina solúvel e uma fusão de um receptor da melanocortina solúvel com uma molécula de Fc. Inibidores do receptor da melanocortina adequados incluem, por exemplo, o peptídeo relacionado com Agourti antagonista do receptor da melanocortina (AgRP(83-132)), que se demonstrou que previne sintomas relacionados com a caquexia em um modelo de camundongo de caquexia relacionada com câncer (Joppa et al. (2007) PEPTIDES 28:636-642).

[00217] Agentes anticancerígenos, especialmente aqueles que podem causar caquexia e níveis de DGF-15 elevados, tais como cisplatina, podem ser administrados em métodos da presente invenção em combinação com (por exemplo, administrados ao mesmo tempo do que, administrados antes de, ou administrados após) um anticorpo anti-GDF-15 da invenção. Muitos pacientes com câncer são enfraquecidos por ciclos duros de radio- e/ou quimioterapia, que podem limitar a capacidade do paciente de tolerar tais terapias, e consequentemente restringir o regime de dosagem. Certos agentes cancerígenos eles próprios, tais como fluorouracil, Adriamicina, metotrexato e cisplatina, podem contribuir para a caquexia, por exemplo por indução de graves complicações gastrointestinais. Ver, p.ex., Inui (2002) CANCER J. FOR CLINICIANS 52:72-91. Pelos métodos da presente invenção, nos quais um agente anticancerígeno é administrado em combinação com um anticorpo anti-GDF-15 da invenção, é possível diminuir a incidência e/ou gravidade da caquexia, e em última instância aumentar a dose tolerada máxima de um tal agente anticancerígeno. Conformemente, a eficácia do tratamento com agentes anticancerígenos que podem causar caquexia pode ser melhorada por redução da incidência da caquexia como um efeito adverso limitante da dose, e permitindo administração de doses mais elevadas de um dado agente anticancerígeno.

[00218] Assim, a presente invenção inclui composições farmacêuticas compreendendo um anticorpo anti-GDF-15 da presente invenção em combinação com um agente selecionado do grupo consistindo em: um inibidor da Ativina-A, um inibidor de AtRIIB, um inibidor de IL-6 ou um inibidor de IL-6R, uma grelina, um mimético da grelina ou um agonista de GHS-R1a, um SARM, um inibidor de TNFα, um inibidor de IL-1α, um inibidor da miostatina, um beta-bloqueador, um inibidor do peptídeo da melanocortina, um inibidor do receptor da melanocortina, e um agente anticancerígeno. A presente invenção inclui também métodos de tratamento, prevenção ou minimização da caquexia e/ou sarcopenia em um mamífero compreendendo administração a um mamífero com sua necessidade de uma composição ou composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-GDF-15 da invenção em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor da Ativina-A, um inibidor de AtRIIB, um inibidor de IL-6 ou um inibidor de IL-6R, uma grelina, um mimético da grelina ou um agonista de GHS-R1a, um SARM, um inibidor de TNFα, um inibidor de IL-1α, um inibidor da miostatina, um beta-bloqueador, um inibidor do peptídeo da melanocortina, ou um inibidor do receptor da melanocortina.

[00219] Em outra forma de realização, a invenção compreende um método de inibição da perda de massa muscular associada a uma doença adjacente compreendendo administração a um mamífero com sua necessidade de uma composição ou composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-GDF-15 da invenção em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor da Ativina-A, um inibidor de AtRIIB, um inibidor de IL-6 ou um inibidor de IL-6R, uma grelina, um mimético da grelina ou um agonista de GHS-R1a, um SARM, um inibidor de TNFα, um inibidor de IL-1α, um inibidor da miostatina, um beta-bloqueador, um inibidor do peptídeo da melanocortina, ou um inibidor do receptor da melanocortina para prevenir ou reduzir perda de massa muscular. A doença subjacente pode ser selecionada do grupo consistindo em câncer, insuficiência cardíaca crônica, doença crônica do rim, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepsia, e tuberculose. Adicionalmente, em certas formas de realização, a perda de massa muscular é acompanhada por uma perda de massa gorda.

[00220] Ainda em formas de realização adicionais, a presente invenção compreende um método de inibição ou redução da perda de peso involuntária em um mamífero compreendendo administração a um mamífero com sua necessidade de uma composição farmacêutica ou composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-GDF-15 da invenção em combinação com uma quantidade eficaz de um inibidor da Ativina-A, um inibidor de AtRIIB, um inibidor de IL-6 ou um inibidor de IL-6R, uma grelina, um mimético da grelina ou um agonista de GHS-R1a, um SARM, um inibidor de TNFα, um inibidor de IL-1α, um inibidor da miostatina, um beta- bloqueador, um inibidor do peptídeo da melanocortina, ou um inibidor do receptor da melanocortina.

[00221] Certos agentes anticancerígenos, tais como cisplatina, têm um ou mais efeitos adversos indesejáveis que envolvem causa ou aumento de uma ou mais síndromes tais como caquexia, sarcopenia, desgaste muscular, desgaste ósseo ou perda de peso corporal involuntária. Conformemente, em certas formas de realização, a presente invenção compreende um método de tratamento do câncer, enquanto previne, minimiza ou reduz a ocorrência, frequência ou gravidade da caquexia, sarcopenia, ou desgaste muscular, desgaste ósseo ou perda involuntária de peso corporal em um mamífero, compreendendo administração a um mamífero com sua necessidade de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-GDF-15 da presente invenção em combinação com um ou mais agentes anticancerígenos. Em formas de realização particulares, a invenção compreende um método de tratamento do câncer, enquanto previne, minimiza ou reduz a ocorrência, frequência ou gravidade da caquexia, sarcopenia ou desgaste muscular, desgaste ósseo ou perda involuntária de peso corporal em um mamífero, compreendendo administração a um mamífero com sua necessidade de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-GDF-15 da invenção em combinação com um ou mais agentes anticancerígenos conhecidos como causando ou aumentado a ocorrência, frequência ou gravidade da caquexia, sarcopenia, ou desgaste muscular, desgaste ósseo ou perda involuntária de peso corporal em um mamífero.

EXEMPLOS

[00222] Os seguintes Exemplos são meramente ilustrativos e não se destinam a limitar o escopo ou conteúdo da invenção de qualquer modo.

Exemplo 1: Níveis no Soro de GDF15 de Humano em Modelos de Tumor de Xenoenxerto de Camundongo

[00223] Em este exemplo, a quantidade de hGDF15 no soro de camundongos transportando vários tumores de xenoenxerto foi medida. Foi coletado soro de três camundongos para cada um dos seguintes modelos de xenoenxerto tumoral: Chago, RPMI7951, PC3, TOV21G, HT-1080, K-562, e LS1034. Foi também coletado soro de três camundongos ingênuos como um controle. Os níveis no soro de GDF15 de humano foram determinados por ELISA (R&D Systems, No. da Cat DY957E). Os camundongos transportando tumores de xenoenxerto de humano que induzem a caquexia tiveram níveis no soro de hGDF15 acima de 2 ng/mL, enquanto os camundongos transportando tumores de xenoenxerto de humano que não induzem a caquexia tiveram níveis no soro de hGDF15 abaixo de 1 ng/mL (FIG. 2). Os camundongos ingênuos não tiveram hGDF15 detectável (controle). Estes resultados indicam que um nível no soro de aproximadamente 2 ng/mL de GDF15 é um limiar para indução da caquexia em este modelo de camundongo. Níveis similares de hGDF15 foram também observados no plasma quando determinados por ELISA.

Exemplo 2: Modelo da Caquexia de Camundongo Não Transportando Tumores

[00224] Um modelo da caquexia de camundongo não transportando tumores existente é baseado na injeção de rhGDF15 maduro em um camundongo (Johnen et al. (1997) NAT. MED. 13:1333-1340). rhGDF15 maduro corresponde aos aminoácidos 197 a 308 da proteína hGDF15. rhGDF15 maduro pode ser produzido na levedura Pichia pastoris como descrito em Fairlie et al. (2000) GENE 254:67-76. rhGDF15 clivado corresponde aos aminoácidos 197 a 308 da proteína hGDF15 liberta de uma proteína de fusão Fc-rhGDF15. Nas FIGS. 3-4 descritas em baixo foi produzido rhGDF15 clivado por digestão enzimática da proteína de fusão mFc-rhGDF15 com Fator Xa, e subsequente purificação, antes da injeção em camundongos.

[00225] Para investigar a meia-vida de rhGDF15 clivado foi coletado plasma de um grupo de três camundongos após dose única de rhGDF15 clivado (1 μg/g) em diferentes momentos temporais (2, 5, 8, 11, e 23 horas). Os níveis no plasma de GDF15 de humano foram determinados por ELISA (R&D Systems, No. da Cat DY957E). Como mostrado na FIG. 3, o rhGDF15 clivado foi rapidamente eliminado do plasma após injeção. Onze horas pós-injeção, a quantidade de rhGDF15 clivado no plasma estava abaixo de 10 ng/mL, e, no espaço de 23 horas, o rhGDF15 clivado foi quase completamente eliminado do plasma.

[00226] A rápida eliminação de rhGDF15 clivado em camundongos não transportando tumores foi adicionalmente investigada. Camundongos ICR-SCID fêmeas com oito semanas de idade foram randomizados em dois grupos de dez camundongos cada um. Os camundongos foram subcutaneamente doseados no flanco a cada oito horas durante três dias (um total de nove doses) com um dos seguintes tratamentos: PBS (controle) ou rhGDF15 clivado a 1 μg/g. O peso corporal foi medido diariamente. As análises estatísticas foram realizadas usando um ANOVA de duas vias.

[00227] Como mostrado na FIG. 4, o rhGDF15 clivado induziu perda de peso corporal. Após nove doses ao longo de um período de três dias, a percentagem de peso corporal caiu para 88 % ao dia 4 (p<0,001), mas aproximadamente 24 horas após a última dose os camundongos começaram a ganhar peso. Ao dia 6, o último dia da experiência, a percentagem de peso corporal aumentou para 94,8 por cento (p<0,001). Estes resultados indicam que a perda de peso induzida por rhGDF15 clivado não é sustentada ao longo de longos períodos de tempo. A atividade observada com rhGDF15 clivado descrita aqui foi similar àquela observada com rhGDF15 maduro no modelo de camundongo existente (Johnen et al., supra).

[00228] O modelo para a caquexia de camundongo não transportando tumores existente se baseia na injeção de grandes quantidades de rhGDF15 maduro distribuído em múltiplas doses por dia para induzir perda muscular e perda de peso corporal (Johnen et al., supra). Parece que, se for usado rhGDF15 maduro ou rhGDF15 clivado, os camundongos não sustêm perda de peso muscular ou perda de peso corporal durante longos períodos sem dosagem contínua. Isto limita a utilidade de tais modelos. Além do mais, a dosagem repetida requer manuseamento frequente destes camundongos, o que introduz estresse que pode comprometer a confiabilidade de medições da perda de peso corporal. Por exemplo, como mostrado na FIG. 4, os camundongos tratados com múltiplas doses de PBS demonstraram uma queda do peso corporal devido ao estresse de dosagem e manuseamento repetidos.

Exemplo 3: Proteínas de Fusão de GDF15

[00229] Tendo em vista as grandes quantidades de rhGDF15 maduro (ou rhGDF15 clivado) e a intensidade laboral requerida para induzir modelos da caquexia de camundongo não transportando tumores (bem como as limitações resultantes destes modelos) investigámos formas alternativas de rhGDF15 para induzir um fenótipo caquético em camundongos. Este Exemplo descreve a construção e produção de duas proteínas de fusão consistindo em GDF15 e um fragmento de Fc da imunoglobulina, designadas mFc-rhGDF15 (Fc de IgG1 de camundongo fundido com o terminal amino de GDF15 maduro de humano) e rFc-rmGDF15 (Fc de IgG1 de coelho fundido com o terminal amino de GDF15 maduro de camundongo). As proteínas de fusão de GDF15 foram desenhadas usando métodos conhecidos na técnica. As sequências de DNA de mFc-rhGDF15 foram construídas a partir de fragmentos usando PCR por sobreposição-extensão para incluírem (na seguinte ordem): Local de restrição de HindlII 5', sequência de consenso de Kozak, sequência sinal amino-terminal, Fc de IgG1 de camundongo, local de clivagem de Fator Xa, um ligante de polipeptídeo (GGGGS) (SEQ ID NO: 139), hGDF15 maduro, códon de paragem, e um local de restrição de EcoRI 3'. As sequências de aminoácidos de rFc-rmGDF15 foram convertidas em sequências de DNA de códon otimizado e sintetizadas para incluírem (na seguinte ordem): Local de restrição de HindIII 5', sequência de consenso de Kozak, sequência sinal amino-terminal, Fc de IgG1 de coelho, um ligante de polipeptídeo (GGGG) (SEQ ID NO: 265), GDF15 maduro de camundongo, códon de paragem, e um local de restrição de EcoRI 3'.

[00230] As proteínas de fusão de GDF15 foram subclonadas no vetor de expressão de mamíferos pEE14.4 (Lonza, Basel, Suíça) através de locais HindIII e EcoRI usando clonagem por PCR In- FusionTM (Clontech, Mountain View, CA). As proteínas de fusão de GDF15 foram estavelmente expressas em células CHOK1SV usando o GS SystemTM (Lonza Biologics) de modo a produzir grandes quantidades de proteína purificada. Cada vetor de expressão foi linearizado e transfectado em células CHOK1SV. Os clones estáveis foram selecionados na presença de sulfoximina metionina. As proteínas secretadas produzidas por linhas de células estavelmente transfectadas CHOK1SV foram purificadas por cromatografia por Proteína A e exclusão de tamanhos.

[00231] A sequência de ácido nucleico e a sequência da proteína codificada definindo a proteína de fusão Fc de IgG1 de camundongo- GDF15 maduro de humano (mFc-rhGDF15) são mostradas em baixo. mFc-rhGDF15 contém Fc de IgG1 de camundongo a partir dos aminoácidos 1-222, local de clivagem do Fator Xa a partir dos aminoácidos 223-228, uma sequência ligante artificial dos aminoácidos a partir 229-233, e hGDF15 maduro a partir dos aminoácidos 234-345.

[00232] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Proteína de Fusão Fc de IgG1 de Camundongo - GDF15 Maduro de Humano (mFc-rhGDF15) (SEQ ID NO:219) 1 gggtgtaaac cctgcatctg cacggtgccg gaggtgtcct ccgtctttat cttccctccc 61 aaacccaagg atgtgctgac aatcactttg actccaaaag tcacatgcgt agtcgtggac 121 atctcgaaag acgacccgga agtgcagttc tcgtggtttg ttgatgatgt agaagtgcat 181 accgctcaaa cccagccgag ggaagaacag tttaacagca cgtttaggag tgtgtcggaa 241 ctgcccatta tgcaccagga ttggcttaat gggaaggagt tcaaatgtcg cgtgaatagt 301 gcggcgttcc cagcccctat tgaaaagact atttccaaaa cgaagggtcg gcccaaagct 361 ccccaagtat acacaatccc tccgccgaaa gaacaaatgg caaaagacaa agtgagtttg 421 acgtgcatga tcacggactt tttcccggag gatatcaccg tcgaatggca atggaatggg 481 caacctgccg aaaactacaa gaatacacaa cccattatgg ataccgatgg atcgtatttc 541 gtctactcaa agttgaacgt acagaagtca aattgggagg cagggaatac gttcacttgc 601 agtgttttgc acgaaggcct ccataaccac catacggaaa agtcactgtc gcactccccg 661 ggaaaaatcg agggcagaat ggatggtgga ggagggtcgg cgcgcaacgg ggaccactgt 721 ccgctcgggc ccgggcgttg ctgccgtctg cacacggtcc gcgcgtcgct ggaagacctg 781 ggctgggccg attgggtgct gtcgccacgg gaggtgcaag tgaccatgtg catcggcgcg 841 tgcccgagcc agttccgggc ggcaaacatg cacgcgcaga tcaagacgag cctgcaccgc 901 ctgaagcccg acacggtgcc agcgccctgc tgcgtgcccg ccagctacaa tcccatggtg 961 ctcattcaaa agaccgacac cggggtgtcg ctccagacct atgatgactt gttagccaaa 1021 gactgccact gcata

[00233] Sequência da Proteína Definindo a Proteína de Fusão Fc de IgG1 de Camundongo - GDF15 Maduro de Humano (mFc- rhGDF15) (SEQ ID NO:220) 1 gckpcictvp evssvfifpp kpkdvltitl tpkvtcvvvd iskddpevqf swfvddvevh 61 taqtqpreeq fnstfrsvse lpimhqdwln gkefkcrvns aafpapiekt isktkgrpka 121 pqvytipppk eqmakdkvsl tcmitdffpe ditvewqwng qpaenykntq pimdtdgsyf 181 vysklnvqks nweagntftc svlheglhnh htekslshsp gkiegrmdgg ggsarngdhc 241 plgpgrccrl htvrasledl gwadwvlspr evqvtmciga cpsqfraanm haqiktslhr 301 lkpdtvpapc cvpasynpmv liqktdtgvs lqtyddllak dchci

[00234] A sequência de ácido nucleico e a sequência da proteína codificada definindo a proteína de fusão Fc de IgG1 de coelho-GDF15 maduro de camundongo (rFc-rmGDF15) são mostradas em baixo. rFc- rmGDF15 contém Fc de IgG1 de coelho a partir dos aminoácidos 1222, uma sequência ligante artificial a partir dos aminoácidos 224-227, e GDF15 maduro de camundongo a partir dos aminoácidos 228-342.

[00235] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Proteína de Fusão Fc de IgG1 de Coelho - GDF15 Maduro de Camundongo (rFc- rmGDF15) (SEQ ID NO:221) 1 tcgaaaccca cttgccctcc tccggagctg ttgggcggac cctccgtgtt tatctttccc 61 ccgaagccga aagataccct tatgatctca cggacgccgg aggtcacttg cgtagtagtg 121 gatgtgtcgg aggatgaccc cgaagtccag ttcacctggt atatcaataa cgagcaagtg 181 aggacagcga ggcccccact tagggagcag cagttcaact ccacaattcg ggtcgtcagc 241 actttgccca tcgctcatga ggactggctc cgcggaaaag agttcaagtg taaggtgcat 301 aacaaggcat tgccagcgcc tattgaaaag acaatctcga aggcgcgagg gcagccgctc 361 gagcccaaag tgtatacgat gggacccccg agggaagaat tgtcgtcgcg ctcagtaagc 421 cttacgtgca tgattaacgg tttctaccct agcgacatca gcgtagagtg ggaaaagaat 481 ggaaaggcgg aggataacta caagacgact cccgcggtgc tggattcgga tgggtcgtac 541 tttctgtata gcaaattgtc agtcccgacc tcagaatggc agaggggtga cgtgttcacg 601 tgctccgtga tgcacgaagc acttcacaat cactacaccc agaaatcaat ctcgcggtcc 661 ccaggcaaag gtggaggagg gtcggctcac gcccaccctc gcgattcgtg tccgctgggg 721 cctggtagat gctgtcatct cgagacagtc caggccacgc tggaggacct cgggtggtca 781 gactgggtcc tgtccccacg acaactgcag ctttcgatgt gcgtggggga atgtccgcac 841 ttgtacagat cggcgaatac ccacgctcag attaaggcac gactccatgg tttgcagcca 901 gataaagtcc ccgcaccttg ctgtgtcccc agctcatata ctcctgtcgt actcatgcat 961 cggacagaca gcggcgtgtc gcttcaaacg tatgacgacc tcgtagcgag aggatgtcat 1021 tgcgcc

[00236] Sequência da Proteína Definindo a Proteína de Fusão Fc de IgG1 de Coelho - GDF15 Maduro de Camundongo (rFc-rmGDF15) (SEQ ID NO:222) 1 skptcpppel lggpsvfifp pkpkdtlmis rtpevtcvvv dvseddpevq ftwyinneqv 61 rtarpplreq qfnstirvvs tlpiahedwl rgkefkckvh nkalpapiek tiskargqpl 121 epkvytmgpp reelssrsvs ltcmingfyp sdisvewekn gkaednyktt pavldsdgsy 181 flysklsvpt sewqrgdvft csvmhealhn hytqksisrs pgkggggsah ahprdscplg 241 pgrcchletv qatledlgws dwvlsprqlq lsmcvgecph lyrsanthaq ikarlhglqp 301 dkvpapccvp ssytpvvlmh rtdsgvslqt yddlvargch ca

[00237] As seguintes sequências representam sequências da proteína exemplares para proteínas de fusão Fc de IgG1 de humano- GDF15 maduro de humano (hFc-rhGDF15). hFc-rhGDF15 Xa consiste em Fc de IgG1 de humano a partir dos aminácidos 1-227, local de clivagem do Fator Xa a partir dos aminoácidos 228-233, uma sequência ligante artificial a partir dos aminoácidos 234-238, e hGDF15 maduro a partir dos aminoácidos 239-350. hFc-rhGDF15 consiste em Fc de IgG1 de humano a partir dos aminoácidos 1-227, uma sequência ligante artificial a partir dos aminoácidos 228-232, e hGDF15 maduro a partir dos aminoácidos 233-344.

[00238] Sequência da Proteína Definindo a Proteína de Fusão Fc de IgG1 de Humano - GDF15 Maduro de Humano com Local de Clivagem de Xa (hFc-hGDF15 Xa) (SEQ ID NO:223) 1 dkthtcppcp apellggpsv flfppkpkdt lmisrtpevt cvvvdvshed pevkfnwyvd 61 gvevhnaktk preeqynsty rvvsvltvlh qdwlngkeyk ckvsnkalpa piektiskak 121 gqprepqvyt lppsreemtk nqvsltclvk gfypsdiave wesngqpenn ykttppvlds 181 dgsfflyskl tvdksrwqqg nvfscsvmhe alhnhytqks lslspgkieg rmdggggsar 241 ngdhcplgpg rccrlhtvra sledlgwadw vlsprevqvt mcigacpsqf raanmhaqik 301 tslhrlkpdt vpapccvpas ynpmvliqkt dtgvslqtyd dllakdchci

[00239] Sequência da Proteína Definindo a Proteína de Fusão Fc de IgG1 de Humano - GDF15 Maduro de Humano com (hFc-hGDF15) (SEQ ID NO:224) 1 dkthtcppcp apellggpsv flfppkpkdt lmisrtpevt cvvvdvshed pevkfnwyvd 61 gvevhnaktk preeqynsty rvvsvltvlh qdwlngkeyk ckvsnkalpa piektiskak 121 gqprepqvyt lppsreemtk nqvsltclvk gfypsdiave wesngqpenn ykttppvlds 181 dgsfflyskl tvdksrwqqg nvfscsvmhe alhnhytqks lslspgkggg gsarngdhcp 241 lgpgrccrlh tvrasledlg wadwvlspre vqvtmcigac psqfraanmh aqiktslhrl 301 kpdtvpapcc vpasynpmvl iqktdtgvsl qtyddllakd chci

Exemplo 4: Modelo da Caquexia Induzido por Fc-rhGDF15

[00240] Este Exemplo descreve a geração de um modelo da caquexia induzido por Fc-GDF15 em camundongos. Camundongos imunocompetentes (Balb/C) e imunoincompetentes (CB17-Scid) foram randomizados em três grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: PBS (controle), mFc- rhGDF15 (como descrito no Exemplo 3), ou rFc-rmGDF15 (como descrito no Exemplo 3) a 1 μg/g. Camundongos fêmeas com oito semanas de idade foram doseados subcutaneamente no flanco durante três dias (Balb/C) ou uma vez (CB17-Scid). O peso corporal foi medido diariamente.

[00241] Como mostrado nas FIG. 5A e FIG. 5B, a administração de mFc-rhGDF15 ou rFc-rmGDF15 induziu perda de peso corporal em camundongos imunocompetentes (FIG. 5A) e camundongos imunoincompetentes (FIG. 5B). Estes resultados indicam que um nível de estado estável de rhGDF15 ativo foi alcançado, porque, independentemente da dose (uma vs. três doses), tanto mFc-rhGDF15 como rFc-rmGDF15 induziram perda de peso sustentada ao longo do decurso de tempo medido (7 dias).

[00242] As proteínas de fusão, mFc-rhGDF15 e rFc-rmGDF15, foram adicionalmente testadas em estirpes de camundongos imunocompetentes (C57BL6, Swiss Webster) e imunoincompetentes (ICR-SCID). Em cada estirpe de camundongo testada, a administração de mFc-rhGDF15 ou rFc-rmGDF15 induziu caquexia, como medido pela perda de peso corporal. Foram obtidos resultados similares independentemente de se mFc-rhGDF15 foi doseada subcutânea ou intraperitonealmente.

[00243] Foi também investigado se mFc-rhGDF15 induzia perda de peso independentemente da idade dos camundongos tratados com proteína de fusão. Camundongos fêmeas Swiss Webster (imunocompetentes) de diferentes idades (7, 13 e 25 semanas de idade) foram divididos em dois grupos de dez e tratados com três doses por dia de mFc-rhGDF15 ou PBS (0,8 μg/g, camundongos com 7 semanas de idade; 0,6 μg/g, camundongos com 13 semanas de idade; ou 0,4 μg/g, camundongos com 25 semanas de idade). Foi observada perda de peso induzida por mFc-rhGDF15 em todas as três populações de idades de camundongos. Em cada população de idades, os camundongos perderam aproximadamente 10 % do seu peso corporal após tratamento com mFc-rhGDF15 medido aos dez dias pós-tratamento.

[00244] Em outra experiência, a indução da caquexia por mFc- rhGDF15 foi investigada por medição da perda de peso corporal, da perda de massa muscular, da perda de massa gorda, e dos níveis de expressão de dois marcadores moleculares da degradação muscular (i.e., mMuRF1 e mAtrogina). MuRF1 e Atrogina são E3-ubiquitina ligases que estão sobrerreguladas em múltiplos modelos de atrofia muscular e caquexia (Glass, D. (2010) CURR. OPIN. CLIN. NUTR. MET. CARE 13:225-229).

[00245] Camundongos ICR-SCID fêmeas com oito semanas de idade foram aleatoriamente divididos em dez grupos de dez camundongos cada um. Cinco grupos (dez camundongos cada um) foram subcutaneamente doseados no flanco com PBS (controle) e cinco grupos (dez camundongos cada um) foram subcutaneamente doseados no flanco com mFc-rhGDF15 a 1,6 μg/g no dia um. O peso corporal foi medido diariamente durante até 17 dias. Um grupo de controle e um grupo de tratamento foram sacrificados em diferentes momentos temporais (0, 1, 3, 7 e 16 dias pós-dose). A gordura gonadal e os músculos gastrocnêmios foram cirurgicamente removidos de cada grupo de camundongos no momento de sacrifício indicado, e pesados. Os tecidos foram rapidamente congelados em nitrogênio líquido, e RNA foi isolado das amostras de músculo gastrocnêmio. Os níveis de mRNA de mMuRF1 e mAtrogina foram medidos por qRT- PCR em amostras correspondendo aos grupos coletados após 1, 7, e 16 dias pós-dose. As análises estatísticas foram realizadas usando um ANOVA de duas vias.

[00246] Como mostrado na FIG. 6A, a mFc-rhGDF15 induziu perda de peso corporal em camundongos ICR-SCID. A percentagem de peso corporal foi 79,4 por cento quando medida após 16 dias após uma dose de mFc-rhGDF15 (p<0,001). A mFc-rhGDF15 induziu também perda de gordura (tecido adiposo), como observado pela perda de gordura gonadal (FIG. 6B; p<0,01 ao dia 7 e p<0,001 ao dia 16) e perda de músculo, como observado pela perda de músculo gastrocnêmio (FIG. 6C; p<0,05 aos dias 1 e 3, e p<0,0001 aos dias 7 e 16). A administração de mFc-rhGDF15 elevou também a expressão de genes de duas enzimas associadas à degradação muscular e caquexia, mMuRF1 (FIG. 6D; p<0,001 aos dias 1, 7, e 16) e mAtrogina (FIG. 6E; p<0,001 aos dias 1 e 7, e p<0,01 ao dia 16).

[00247] Estes resultados indicam que mFc-rhGDF15 induz caquexia em camundongos.

Exemplo 5: mFc-rhGDF15 Induz Caquexia com uma Meia-Vida de GDF15 no Soro Mais Longa

[00248] Em este Exemplo, os níveis de hGDF15 no soro foram medidos após administração de mFc-rhGDF15, para se determinar a meia-vida de rhGDF15 em este modelo. Camundongos Balb/C fêmeas com oito semanas de idade foram aleatoriamente divididos em dois grupos de doze camundongos cada um. Os camundongos foram subcutaneamente doseados no flanco a doze oito horas durante três dias (um total de seis doses) com um dos seguintes tratamentos: PBS (controle) ou mFc-rhGDF15 a 1,33 μg/g. O peso corporal foi medido diariamente. Como mostrado na FIG. 7, mFc-rhGDF15 induziu perda de peso corporal sustentada durante pelo menos uma semana após a injeção final.

[00249] Em esta experiência, os níveis no soro de hGDF15 foram medidos 0,2, 5, e 8 dias após a última dose de mFc-rhGDF15. Os camundongos foram sacrificados no momento indicado, e os soros foram coletados. Os níveis no soro de GDF15 de humano foram determinados por ELISA (R&D Systems, No. da Cat DY957E). A Tabela 1 proporciona os níveis no soro (μg/mL) para cada camundongo no estudo.Tabela 1

[00250] Os resultados na Tabela 1 revelam que níveis sustentados, fortes de hGDF15 estão presentes no soro pelo menos oito dias após a última dose de mFc-rhGDF15.

[00251] Amostras de soro do dia 0,2 e dia 5 após a última dose foram também analisadas por transferência de Western (gel redutor; transferência com um anticorpo contra hGDF15 (R&D Systems, No da Cat. AF957)) e quantificadas por Licor para determinar a estabilidade de mFc-rhGDF15 no soro. Inesperadamente foram observadas duas bandas. A banda superior tinha aproximadamente 40 kDa, e pareceu ser mFc-rhGDF15. A banda inferior tinha aproximadamente 15 kDa, e pareceu ser rhGDF15 maduro clivado. Isto indicou que rhGDF15 maduro foi liberto de mFc-rhGDF15 no soro. A quantificação das duas bandas mostrou que cerca de 90 % do rhGDF15 presente no soro estava na forma de mFc-rhGDF15, com cerca de 10 % do rhGDF15 total no soro estando presente como a forma madura clivada (FIG. 8). A quantificação mostrou uma ligeira diminuição em mFc-rhGDF15 nas amostras de soro coletadas cinco dias após a última dose, mas, surpreendentemente, um nível constante de rhGDF15 maduro permaneceu no soro. A razão de rhGDF15 maduro em relação a mFc- rhGDF15 aumentou ligeiramente ao longo do tempo, como um resultado de uma diminuição em mFc-rhGDF15 no soro. Foram observados resultados similares quando rFc-rmGDF15 foi injetada em camundongos.

[00252] Os resultados apresentados nas FIGS. 7-8 e Tabela 1 foram inesperados. A expectativa era que muito pouco, se algum, rhGDF15 maduro seria clivado (liberto) da mFc-rhGDF15 pelo dia 0,2, e que qualquer rhGDF15 clivado seria rapidamente eliminado do soro, como havia sido previamente observado. Por exemplo, na FIG. 4, uma série de nove doses a 1 μg/g por dose (para um total de 9 μg/g) de rhGDF15 clivado foi requerida para induzir perda de peso corporal significativa em camundongos. Estes camundongos ganharam peso quase imediatamente quando a dosagem parou. Em contraste, uma única dose de mFc-rhGDF15 a 0,1 μg/g foi suficiente para induzir perda de peso corporal significativa durante pelo menos oito dias (FIG. 9A; dez camundongos ICR-SCID intraperitonealmente doseados com 0,1 μg/g no dia 1). Os dados na Tabela 1 revelaram que os níveis no soro de rhGDF15 foram estáveis durante pelo menos oito dias, quando rhGDF15 foi administrado como uma proteína de fusão mFc-rhGDF15.

[00253] Para determinar a fonte de atividade resultando em perda de peso corporal sustentada investigámos se a atividade de rhGDF15 observada era atribuível à proteína de fusão mFc-rhGDF15, à forma de rhGDF15 madura liberta, ou ambas. Como mostrado na FIG. 9A, uma baixa dose de mFc-rhGDF15 (0,1 μg/g) resultou em perda de peso corporal continuando durante pelo menos oito dias. Uma dose mais baixa de mFc-rhGDF15 (0,01 μg/g) induziu também perda de peso corporal, mas o efeito não foi sustentado durante mais do que 3 dias pós-dose.

[00254] Em esta experiência foi coletado plasma de três camundongos cada um doseado com 0,1 μg/g ou 0,01 μg/g aos 5 dias pós-dose. rhGDF15 total foi medido por ELISA como descrito acima. Os níveis no plasma de rhGDF15 total nos camundongos doseados com 0,1 μg/g foram acima de 70 ng/mL, consistente com a observação de que estes camundongos tinham perda de peso significativa (FIG. 9B). Os níveis no plasma de rhGDF15 total em camundongos doseados com 0,01 μg/g foram aproximadamente 3,3 ng/mL, mas foi observado que estes camundongos estavam ganhando peso (FIG. 9A e FIG. 9B). Como descrito na FIG. 2, o limiar para hGDF15 para induzir caquexia em camundongos transportando tumores é aproximadamente 2 ng/mL. Assim, se ambas as formas de rhGDF15 estiverem ativas (i.e., mFc-rhGDF15 e rhGDF15 maduro liberto), então estes camundongos deveriam estar perdendo peso, não ganhando peso (i.e., 3,3 ng/mL de rhGDF15 total está acima do limiar de aproximadamente 2 ng/mL de hGDF15).

[00255] Para determinar que forma era a forma ativa (i.e., ou mFc- rhGDF15 ou rhGDF15 maduro liberto) considerámos os dados da FIG. 8 que mostraram que aproximadamente 90 % do rhGDF15 total no soro estava na forma de mFc-rhGDF15, e o restante 10 % era a forma madura liberta. Com base em esta extrapolação, aproximadamente 3,0 ng/mL de rhGDF15 no plasma estava na forma de mFc-rhGDF15 (i.e., 90 % de 3,3 ng/mL). Mais uma vez, se mFc-rhGDF15 estivesse ativa, estes camundongos estariam perdendo peso, não ganhando peso, porque 3,3 ng/mL de mFc-rhGDF15 está acima do limiar de aproximadamente 2 ng/mL de hGDF15. Os camundongos doseados com 0,1 μg/g de mFc-rhGDF15 serviram como um controle interno, porque estes camundongos tinham perda de peso corporal sustentada indicando que pelo menos uma das duas formas tem de estar ativa. Um cálculo de 10 % para 70 ng/mL de rhGDF15 total em estes camundongos é 7 ng/mL de rhGDF15 maduro liberto. Esta quantidade é consistente com a indução da perda de peso corporal observada e o limiar observado na FIG. 2. Assim, os dados indicam que a mFc- rhGDF15 não é uma forma ativa da proteína, e somente o rhGDF15 maduro está ativo. Estes resultados foram inesperados, porque: (a) não existia razão para prever que a proteína de fusão com Fc (mFc- rhGDF15) estaria inativa; e (b) não existia razão para prever que a proteína de fusão com Fc libertaria rhGDF15 maduro à taxa observada.

[00256] Estes resultados indicam que mFc-rhGDF15 sustém um fenótipo caquético por liberação lenta de rhGDF15 maduro no soro. Estes resultados indicam adicionalmente que um nível de estado estável de rhGDF15 maduro no plasma ou soro pode ser alcançado em um camundongo não transportando tumores por administração de mFc-rhGDF15 ao camundongo. Portanto, a administração de mFc- rhGDF15 a camundongos não transportando tumores é particularmente útil como um modelo da caquexia de camundongo com uma perda de massa muscular, perda de massa gorda, e perda de peso corporal robustas e sustentadas (ver FIGS. 6A-C).

Exemplo 6: Anticorpos Anti-GDF15

[00257] Este Exemplo descreve a produção de anticorpos monoclonais anti-GDF15. Imunizações, fusões, e rastreios primários foram conduzidos usando métodos convencionais seguindo o protocolo de Imunização Repetitiva de Múltiplos Locais (RIMMS). Cinco camundongos AJ e cinco camundongos Balb/c foram imunizados com GDF15 de humano recombinante marcado com 6XHis (SEQ ID NO: 266) (His-rhGDF15) (R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN). Dois camundongos Balb/c com soros exibindo a atividade anti-GDF15 mais elevada por Ensaio de Imunoabsorção Ligada a Enzima (ELISA) foram escolhidos para fusão subsequente. Baços e linfonodos dos camundongos adequados foram coletados. As células B foram coletadas e fundidas com uma linha de mieloma. Os produtos de fusão foram diluídos em série em quarenta placas de 96 poços até à quase clonalidade. Dois camundongos AJ com soros exibindo a atividade anti-GDF15 mais elevada por ELISA)foram escolhidos para fusão subsequente. Baços e linfonodos dos camundongos adequados foram coletados. As células B foram coletadas e fundidas com uma linha de mieloma. Os produtos de fusão foram diluídos em série em quarenta placas de 96 poços até à quase clonalidade.

[00258] Aproximadamente 3.840 sobrenadantes das fusões de células foram rastreados por ELISA quanto a ligação a rhGDF15. Um total de 172 sobrenadantes contendo anticorpos contra GDF15 foi adicionalmente caracterizado in vitro. Um painel de hibridomas foi selecionado, subclonado e expandido. Os anticorpos foram expressos e subsequentemente purificados por cromatografia de afinidade em resina de Proteína G, sob condições padrão.

Exemplo 7: Análise da Sequência de Anticorpos

[00259] O isotipo da cadeia leve e o isotipo da cadeia pesada de cada anticorpo monoclonal no Exemplo 6 foram determinado usando o Kit de Isotipagem de Anticorpos Monoclonais de Camundongo IsoStrip™ de acordo com as instruções do vendedor do kit (Roche Applied Science, Indianapolis, IN). Se descobriu que todos os anticorpos tinham cadeia leve kappa, e cadeia pesada de IgG1 ou IgG2b.

[00260] As regiões variáveis da cadeia leve e pesada dos anticorpos monoclonais de camundongo foram sequenciadas usando 5' RACE (Amplificação Rápida de Extremidades de cADN). O RNA total foi extraído de cada linha de células do hibridoma monoclonal usando o kit RNeasy ® Miniprep de acordo com as instruções do vendedor do kit (Qiagen, Valencia, CA). Foi gerado cDNA da primeira fita de comprimento total contendo extremidades 5' usando o Kit de Amplificação de cDNA SMARTerTM RACE (Clontech, Mountain View, CA) de acordo com as instruções do vendedor do kit para 5' RACE.

[00261] As regiões variáveis da cadeia leve (kappa) e pesada (IgG1 ou IgG2b) foram amplificadas por PCR usando Polimerase KOD Hot Start (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ) de acordo com as instruções do vendedor do kit. Para amplificação das extremidades 5' do cDNA em conjunto com o Kit de Amplificação de cDNA SMARTer TM RACE, o iniciador A da Mistura de Iniciadores Universal (Clontech), uma mistura de: 5’ CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT 3’ (SEQ ID NO:233) e 5’ CTAATACGACTCACTATAGGGC 3’ (SEQ ID NO:225), foi usado como o iniciador 5’. As regiões variáveis da cadeia pesada foram amplificadas usando os iniciadores 5’ acima e um iniciador específico da região constante de IgG1 3’, 5’ TATGCAAGGCTTACAACCACA 3’ (SEQ ID NO:226), ou um iniciador específico da região constante de IgG2b 3’, 5’ AGGACAGGGGTTGATTGTTGA 3’ (SEQ ID NO:227). As regiões variáveis da cadeia kappa foram primeiramente amplificadas com os iniciadores 5' acima e um iniciador específico da região constante kappa 3', 5’ CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT 3’ (SEQ ID NO:228). As cadeias leves foram sujeitas a uma segunda ronda, aninhada, de PCR usando o iniciador 5' Iniciador A Universal Aninhado A (Clontech), 5’ AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT 3’ (SEQ ID NO:229) e um iniciador específico da região constante kappa 3' aninhado, 5’ CGACTGAGGCACCTCCAGATGTT 3’ (SEQ ID NO:230). Os produtos de PCR individuais foram ou purificados usando o kit de Purificação por PCR Qiaquick® ou isolados por eletroforese em gel de agarose e purificados usando o kit de Purificação em Geral Qiaquick® de acordo com as instruções do vendedor do kit (Qiagen). Os produtos de PCR foram subsequentemente clonados no plasmídeo pCR®4Blunt usando a Clonagem por PCR Zero Blunt® TOPO® de acordo com as instruções do vendedor do kit (Invitrogen) e transformados em bactérias DH5-α (Invitrogen) através de técnicas de biologia molecular padrão. O DNA do plasmídeo isolado dos clones bacterianos transformados foi sequenciado usando os iniciadores M13 Direto (5’ GTAAAACGACGGCCAGT 3’) (SEQ ID NO:231) e M13 Reverso (5’ CAGGAAACAGCTATGACC 3’) (SEQ ID NO:232) pela Beckman Genomics (Danvers, MA), usando métodos de sequenciação de dideoxi DNA padrão para identificar a sequência das sequências da região variável. As sequências foram analisadas usando software Vector NTI (Invitrogen) e o servidor web IMGT/V-Quest (imgt.cines.fr) para identificar e confirmar as sequências da região variável.

[00262] As sequências de ácido nucleico codificando e as sequências da proteína definindo regiões variáveis dos anticorpos monoclonais de murino são mostradas em baixo (as sequências de peptídeo sinal aminoterminais não são mostradas). As sequências de CDR (definição de Kabat) estão indicadas por negrito e sublinhado nas sequências de aminoácidos.

[00263] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 01G06 (SEQ ID NO:39) 1 gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 61 ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 121 catggaaaga gccttgagtg gattggacaa attaatccta acaatggtgg tattttcttc 181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccaa tacagccttc 241 atggaggtcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca 301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca

[00264] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 01G06 (SEQ ID NO:40) 1 evllqqsgpe Ivkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss

[00265] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 01G06 (SEQ ID NO:75) 1 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 61 atcacatgtc gaacaagtga gaatcttcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct 241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagta gtccttacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaataaa a

[00266] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 01G06 (SEQ ID NO:76) 1 diqmtqspas Isasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleik

[00267] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 03G05 (SEQ ID NO:41) 1 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 61 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga ttcactgggt gaaccagagg 121 cctggacaag gccttgagtg gattggagac attaatccta gcaacggccg tagtaagtat 181 aatgagaagt tcaagaacaa ggccacaatg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac 241 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagaggtt 301 ctggatggtg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca .

[00268] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 03G05 (SEQ ID NO:42) 1 qvqlqqpgae Ivkpgasvkl sckasgytft sywihwvnqr pgqglewigd inpsngrsky 61 nekfknkatm tadkssntay mqlssltsed savyycarev Idgamdywgq gtsvtvss

[00269] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 03G05 (SEQ ID NO:77) 1 gacattgtgt tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 61 atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gaactggttc 121 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggctcc 181 ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 241 cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg 301 acgttcggtg gaggctccaa gctggaaatc aaa

[00270] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 03G05 (SEQ ID NO:78) 1 divltqspas lavslgqrat iscrasesvd nygisfmnwf qqkpgqppkl liyaasnqgs 61 gvparfsgsg sgtdfslnih pmeeddtamy fcqqskevpw tfgggsklei k

[00271] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 04F08 (SEQ ID NO:43) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtgac ctggattcgt 121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa caaccaggta 241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaacg 301 gggtatagta acttgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca

[00272] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 04F08 (SEQ ID NO:44) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvtwir qpsgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt iskdtsnnqv flkitsvdta dtatyycaqt gysnlfaywg qgtlvtvsa

[00273] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 04F08 (SEQ ID NO:79) 1 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 61 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaatta 121 ggacaatctc ctaaaacact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 241 gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgtacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaataaa a

[00274] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 04F08 (SEQ ID NO:80) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkl gqspktliys asyrysgvpd 61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsypytfgg gtkleik

[00275] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 06C11 (SEQ ID NO:45) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgaac acttatggta tgggtgtgag ctggattcgt 121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atgcctccaa caaccgggtc 241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaaga 301 ggttatgatg attactgggg ttactggggc caagggactc tggtcactat ctctgca

[00276] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 06C11 (SEQ ID NO:46) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisa

[00277] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 06C11 (SEQ ID NO:81) 1 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 61 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtttca acagaaacca 121 ggtcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcttacc ggtacagtgg agtccctgat 181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcattctca ccatcagcaa tgtgcagtct 241 gaagacctgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atcctctcac gttcggtgct 301 gggaccaagc tggagctgaa a

[00278] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 06C11 (SEQ ID NO:82) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd 61 rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfcqq ynnypltfga gtklelk

[00279] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 08G01 (SEQ ID NO:47) 1 gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag gtggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 61 ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 121 catggaaaga gccttgagtg gattggagag attaatccta acaatggtgg tactttctac 181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 241 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca 301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca

[00280] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 08G01 (SEQ ID NO:48) 1 evllqqsgpe vvkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewige inpnnggtfy 61 nqkfkgkatl tvdkssstay melrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss

[00281] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 08G01 (SEQ ID NO:83) 1 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 61 atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct 241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagtt ctccttacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaataaa a

[00282] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 08G01 (SEQ ID NO:84) 1 diqmtqspas Isasvgetvt itcrasgnih nylawyqqkq gkspqllvyn aktladgvps 61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleik

[00283] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 14F11 (SEQ ID NO:49) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctgga atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg ctggattcgt 121 cagccttcag gaaagggtct agagtggctg gcagacattt ggtgggatga cgataagtac 181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag caatgaggta 241 ttcctcaaga tcgccattgt ggacactgca gatactgcca cttactactg tgctcgaaga 301 ggtcactact ctgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca

[00284] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 14F11 (SEQ ID NO:50) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvss

[00285] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 14F11 (SEQ ID NO:85) 1 gacattgtaa tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 61 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 121 gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg ccatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 241 gaagacttgg cagaatattt ctgtcagcaa tataacagct atcctcacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaatgaa a

[00286] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 14F11 (SEQ ID NO:86) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd 61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsyphtfgg gtklemk

[00287] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 17B11 (SEQ ID NO:51) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ttggattcgt 121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacaatg actgggatga tgacaagcgc 181 tataagtcat ccctgaagag ccggctcaca atatccaagg atacctccag aaaccaggta 241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaaga 301 gttgggggat tagagggcta ttttgattac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 361 tca

[00288] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada do Anticorpo 17B11 (SEQ ID NO:52) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tsgmgvswir qpsgkglewl ahndwdddkr 61 yksslksrlt iskdtsrnqv flkitsvdta dtatyycarr vgglegyfdy wgqgttltvs 121 s

[00289] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 17B11 (SEQ ID NO:87) 1 gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 61 atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctaggt ttagttatat gcactggttc 121 caacagaaac caggacaggc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct 181 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 241 cctgtggagg gggaggatac tgcaacatat tactgtcagc acagttggga gattccgtac 301 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa

[00290] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa do Anticorpo 17B11 (SEQ ID NO:88) 1 divltqspas lavslgqrat iscrasqsvs tsrfsymhwf qqkpgqapkl likyasnles 61 gvparfsgsg sgtdftlnih pvegedtaty ycqhsweipy tfgggtklei k

[00291] As sequências de aminoácidos definindo as regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina para os anticorpos produzidos no Exemplo 6 estão alinhadas na FIG. 10. As sequências de péptido sinal aminoterminais (para expressão/secreção) não são mostradas. As CDR1, CDR 2, e CDR3 (definição de Kabat) estão identificadas por caixas. A FIG. 11 mostra um alinhamento das sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 separadas para cada anticorpo.

[00292] As sequências de aminoácidos definindo as regiões variáveis da cadeia leve da imunoglobulina dos anticorpos no Exemplo 6 estão alinhadas na FIG. 12. As sequências de péptido sinal aminoterminais (para expressão/secreção) não são mostradas. As CDR1, CDR 2 e CDR3 estão identificadas por caixas. A FIG. 13 mostra um alinhamento das sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 separadas para cada anticorpo.

[00293] A Tabela 2 mostra a SEQ ID NO. de cada sequência discutida em este Exemplo.Tabela 2

[00294] As sequências de CDR da cadeia pesada de anticorpos monoclonais de camundongo (definições de Kabat, Chothia, e IMGT) são mostradas na Tabela 3.Tabela 3

[00295] As sequências de CDR da cadeia leve Kappa de anticorpos monoclonais de camundongo (definições de Kabat, Chothia, e IMGT) são mostradas na Tabela 4.Tabela 4

[00296] Para criar as sequências dos anticorpos da cadeia pesada ou kappa completas, cada sequência variável acima é combinada com a sua respectiva região constante. Por exemplo, uma cadeia pesada completa compreende uma sequência pesada variável seguida pela sequência constante da cadeia pesada de IgG1 ou IgG2b de murino, e uma cadeia kappa completa compreende uma sequência kappa variável seguida pela sequência constante da cadeia leve kappa de murino.

[00297] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Constante da Cadeia Pesada de IgG1 de Murino (SEQ ID NO:165) 1 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 61 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 121 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 181 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 241 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 301 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 361 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 421 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 481 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 541 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 601 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 661 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 721 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 781 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 841 tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 901 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 961 tctcctggta aa

[00298] Sequência da Proteína Definindo a Região Constante da Cadeia Pesada de IgG1 de Murino (SEQ ID NO:166) 1 akttppsvyp lapgsaaqtn smvtlgclvk gyfpepvtvt wnsgslssgv htfpavlqsd 61 lytlsssvtv psstwpsetv tcnvahpass tkvdkkivpr dcgckpcict vpevssvfif 121 ppkpkdvlti tltpkvtcvv vdiskddpev qfswfvddve vhtaqtqpre eqfnstfrsv 181 selpimhqdw lngkefkcrv nsaafpapie ktisktkgrp kapqvytipp pkeqmakdkv 241 sltcmitdff peditvewqw ngqpaenykn tqpimdtdgs yfvysklnvq ksnweagntf 301 tcsvlheglh nhhtekslsh spgk

[00299] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Constante da Cadeia Pesada de IgG2b de Murino (SEQ ID NO:167) 1 gccaaaacaa cacccccatc agtctatcca ctggcccctg ggtgtggaga tacaactggt 61 tcctccgtga ctctgggatg cctggtcaag ggctacttcc ctgagtcagt gactgtgact 121 tggaactctg gatccctgtc cagcagtgtg cacaccttcc cagctctcct gcagtctgga 181 ctctacacta tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggccaag tcagaccgtc 241 acctgcagcg ttgctcaccc agccagcagc accacggtgg acaaaaaact tgagcccagc 301 gggcccattt caacaatcaa cccctgtcct ccatgcaagg agtgtcacaa atgcccagct 361 cctaacctcg agggtggacc atccgtcttc atcttccctc caaatatcaa ggatgtactc 421 atgatctccc tgacacccaa ggtcacgtgt gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca 481 gacgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac gtggaagtac acacagctca gacacaaacc 541 catagagagg attacaacag tactatccgg gtggtcagca ccctccccat ccagcaccag 601 gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc aaggtcaaca acaaagacct cccatcaccc 661 atcgagagaa ccatctcaaa aattaaaggg ctagtcagag ctccacaagt atacatcttg 721 ccgccaccag cagagcagtt gtccaggaaa gatgtcagtc tcacttgcct ggtcgtgggc 781 ttcaaccctg gagacatcag tgtggagtgg accagcaatg ggcatacaga ggagaactac 841 aaggacaccg caccagtcct agactctgac ggttcttact tcatatatag caagctcaat 901 atgaaaacaa gcaagtggga gaaaacagat tccttctcat gcaacgtgag acacgagggt 961 ctgaaaaatt actacctgaa gaagaccatc tcccggtctc cgggtaaa

[00300] Sequência da Proteína Definindo a Região Constante da Cadeia Pesada de IgG2b de Murino (SEQ ID NO:168) 1 akttppsvyp lapgcgdttg ssvtlgclvk gyfpesvtvt wnsgslsssv htfpallqsg 61 lytmsssvtv psstwpsqtv tcsvahpass ttvdkkleps gpistinpcp pckechkcpa 121 pnleggpsvf ifppnikdvl misltpkvtc vvvdvseddp dvqiswfvnn vevhtaqtqt 181 hredynstir lvrapqvyil vvstlpiqhq dwmsgkefkc kvnnkdlpsp iertiskikg 241 pppaeqlsrk gsyfiyskln dvsltclvvg fnpgdisvew tsnghteeny kdtapvldsd 301 mktskwektd sfscnvrheg lknyylkkti srspgk

[00301] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Constante da Cadeia Leve Kappa de Murino (SEQ ID NO:169) 1 cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct 61 ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag 121 tggaagattg atggcagtga acgacaaaat ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac 181 agcaaagaca gcacctacag catgagcagc accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa 241 cgacataaca gctatacctg tgaggccact cacaagacat caacttcacc cattgtcaag 301 agcttcaaca ggaatgagtg t

[00302] Sequência da Proteína Definindo a Região Constante da Cadeia Leve Kappa de Murino (SEQ ID NO:170) 1 radaaptvsi fppsseqlts ggasvvcfln nfypkdinvk wkidgserqn gvlnswtdqd 61 skdstysmss tltltkdeye rhnsytceat hktstspivk sfnrnec

[00303] As seguintes sequências representam as sequências da cadeia pesada e leve de comprimento total reais ou contempladas (i.e., contendo ambas as sequências das regiões variáveis e constantes) para cada anticorpo descrito em este Exemplo. As sequências sinal para secreção apropriada dos anticorpos (p.ex., sequências sinal na extremidade 5’ das sequências de DNA ou na extremidade aminoterminal das sequências da proteína) não são mostradas nas sequências da cadeia pesada e leve de comprimento total divulgadas aqui e não estão incluídas na proteína secretada final. Os códons de paragem para terminação da tradução requeridos na extremidade 3’ das sequências de DNA não são também mostrados. Está dentro da perícia ordinária na técnica selecionar uma sequência sinal e/ou um códon de paragem para expressão das sequências da cadeia pesada e cadeia leve da imunoglobulina de comprimento total divulgadas. É também contemplado que as sequências da região variável podem ser ligadas a outras sequências da região constante para produzirem cadeias pesadas e leves da imunoglobulina de comprimento total.

[00304] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 01G06 (SEQ ID NO:99) 1 gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 61 ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 121 catggaaaga gccttgagtg gattggacaa attaatccta acaatggtgg tattttcttc 181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccaa tacagccttc 241 atggaggtcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca 301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 361 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 421 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 481 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 541 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 601 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 661 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 721 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 781 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 841 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 901 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 961 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1021 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1081 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1141 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 1201 tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1261 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1321 tctcctggta aa

[00305] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 01G06 (SEQ ID NO:100) 1 evllqqsgpe lvkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss 121 akttppsvyp lapgsaaqtn smvtlgclvk gyfpepvtvt wnsgslssgv htfpavlqsd 181 lytlsssvtv psstwpsetv tcnvahpass tkvdkkivpr dcgckpcict vpevssvfif 241 ppkpkdvlti tltpkvtcvv vdiskddpev qfswfvddve vhtaqtqpre eqfnstfrsv 301 selpimhqdw lngkefkcrv nsaafpapie ktisktkgrp kapqvytipp pkeqmakdkv 361 sltcmitdff peditvewqw ngqpaenykn tqpimdtdgs yfvysklnvq ksnweagntf 421 tcsvlheglh nhhtekslsh spgk

[00306] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 01G06 (SEQ ID NO:101) 1 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 61 atcacatgtc gaacaagtga gaatcttcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct 241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagta gtccttacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt

[00307] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 01G06 (SEQ ID NO:102) 1 diqmtqspas lsasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleikrad aaptvsifpp 121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec

[00308] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 03G05 (SEQ ID NO:103) 1 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 61 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga ttcactgggt gaaccagagg 121 cctggacaag gccttgagtg gattggagac attaatccta gcaacggccg tagtaagtat 181 aatgagaagt tcaagaacaa ggccacaatg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac 241 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagaggtt 301 ctggatggtg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctcagccaaa 361 acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg 421 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac 481 tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac 541 actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc 601 aacgttgccc acccggccag cagcaccaag gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt 661 ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca 721 aagcccaagg atgtgctcac cattactctg actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac 781 atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac 841 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa 901 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt 961 gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct 1021 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg 1081 acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg 1141 cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc 1201 gtctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc 1261 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct 1321 ggtaaa

[00309] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 03G05 (SEQ ID NO:104) 1 qvqlqqpgae lvkpgasvkl sckasgytft sywihwvnqr pgqglewigd inpsngrsky 61 nekfknkatm tadkssntay mqlssltsed savyycarev ldgamdywgq gtsvtvssak 121 ttppsvypla pgsaaqtnsm vtlgclvkgy fpepvtvtwn sgslssgvht fpavlqsdly 181 tlsssvtvps stwpsetvtc nvahpasstk vdkkivprdc gckpcictvp evssvfifpp 241 kpkdvltitl tpkvtcvvvd iskddpevqf swfvddvevh taqtqpreeq fnstfrsvse 301 lpimhqdwln gkefkcrvns aafpapiekt isktkgrpka pqvytipppk eqmakdkvsl 361 tcmitdffpe ditvewqwng qpaenykntq pimdtdgsyf vysklnvqks nweagntftc 421 svlheglhnh htekslshsp gk

[00310] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 03G05 (SEQ ID NO:105) 1 gacattgtgt tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 61 atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gaactggttc 121 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggctcc 181 ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 241 cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg 301 acgttcggtg gaggctccaa gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 361 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 421 aacaacttct tgaacgacaa accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag 481 aatggcgtcc cagcatgagc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta 541 agcaccctca ctgtgaggcc cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac 601 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgt

[00311] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 03G05 (SEQ ID NO:106) 1 divltqspas lavslgqrat iscrasesvd nygisfmnwf qqkpgqppkl liyaasnqgs 61 gvparfsgsg sgtdfslnih pmeeddtamy fcqqskevpw tfgggsklei kradaaptvs 121 ifppsseqlt sggasvvcfl nnfypkdinv kwkidgserq ngvlnswtdq dskdstysms 181 stltltkdey erhnsytcea thktstspiv ksfnrnec

[00312] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 04F08 (SEQ ID NO:107) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtgac ctggattcgt 121 cagccttcag tgacaagcgc gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga 181 tataacccat caaccaggta ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa 241 ttcctcaaga tgctcaaacg tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg 301 gggtatagta ctctgcagcc acttgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt 361 aaaacgacac aactaactcc ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca 421 atggtgaccc agtgacctgg tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac 481 aactctggat gtctgacctc ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca 541 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc 601 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat 661 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc 721 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta 781 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg 841 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt 901 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 961 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 1021 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt 1081 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat 1141 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac 1201 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc 1261 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 1321 cctggtaaa

[00313] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 04F08 (SEQ ID NO:108) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvtwir qpsgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt iskdtsnnqv flkitsvdta dtatyycaqt gysnlfaywg qgtlvtvsaa 121 kttppsvypl apgsaaqtns mvtlgclvkg yfpepvtvtw nsgslssgvh tfpavlqsdl 181 ytlsssvtvp sstwpsetvt cnvahpasst kvdkkivprd cgckpcictv pevssvfifp 241 pkpkdvltit ltpkvtcvvv diskddpevq fswfvddvev htaqtqpree qfnstfrsvs 301 elpimhqdwl ngkefkcrvn saafpapiek tisktkgrpk apqvytippp keqmakdkvs 361 ltcmitdffp editvewqwn gqpaenyknt qpimdtdgsy fvysklnvqk snweagntft 421 csvlheglhn hhtekslshs pgk

[00314] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 04F08 (SEQ ID NO:109) 1 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 61 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaatta 121 ggacaatctc ctaaaacact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 241 gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgtacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt

[00315] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 04F08 (SEQ ID NO:110) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkl gqspktliys asyrysgvpd 61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsypytfgg gtkleikrad aaptvsifpp 121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec

[00316] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 06C11 (SEQ ID NO:111) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgaac acttatggta tgggtgtgag ctggattcgt 121 cagccttcag tgacaagcgc gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga 181 tataacccat caaccgggtc ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atgcctccaa 241 ttcctcaaga tgctcaaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg 301 ggttatgatg ctctgcagcc attactgggg ttactggggc caagggactc tggtcactat 361 aaaacgacac aactaactcc ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca 421 atggtgaccc agtgacctgg tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac 481 aactctggat gtctgacctc ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca 541 tacactctga gaccgtcacc gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga 601 tgcaacgttg gcccagggat cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt 661 tgtggttgta catcttcccc agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt 721 ccaaagccca tgttgtggta aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg 781 gacatcagca tgtggaggtg aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga 841 cacacagctc ctcagtcagt agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg 901 gaacttccca cagggtcaac tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg 961 agtgcagctt cagaccgaag tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg 1021 gctccacagg taaagtcagt tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga 1081 ctgacctgca gcagtggaat tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg 1141 gggcagccag tggctcttac cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga 1201 ttcgtctaca tactttcacc gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa 1261 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 1321 cctggtaaa

[00317] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 06C11 (SEQ ID NO:112) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisaa 121 kttppsvypl apgsaaqtns mvtlgclvkg yfpepvtvtw nsgslssgvh tfpavlqsdl 181 ytlsssvtvp sstwpsetvt cnvahpasst kvdkkivprd cgckpcictv pevssvfifp 241 pkpkdvltit ltpkvtcvvv diskddpevq fswfvddvev htaqtqpree qfnstfrsvs 301 elpimhqdwl ngkefkcrvn saafpapiek tisktkgrpk apqvytippp keqmakdkvs 361 ltcmitdffp editvewqwn gqpaenyknt qpimdtdgsy fvysklnvqk snweagntft 421 csvlheglhn hhtekslshs pgk

[00318] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 06C11 (SEQ ID NO:113) 1 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 61 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtttca acagaaacca 121 ggtcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcttacc ggtacagtgg agtccctgat 181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcattctca ccatcagcaa tgtgcagtct 241 gaagacctgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atcctctcac gttcggtgct 301 gggaccaagc tggagctgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt

[00319] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 06C11 (SEQ ID NO:114) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd 61 rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfcqq ynnypltfga gtklelkrad aaptvsifpp 121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec

[00320] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG2b) de 08G01 (SEQ ID NO:115) 1 gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag gtggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 61 ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc 121 catggaaaga gccttgagtg gattggagag attaatccta acaatggtgg tactttctac 181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 241 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca 301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 361 gccaaaacaa cacccccatc agtctatcca ctggcccctg ggtgtggaga tacaactggt 421 tcctccgtga ctctgggatg cctggtcaag ggctacttcc ctgagtcagt gactgtgact 481 tggaactctg gatccctgtc cagcagtgtg cacaccttcc cagctctcct gcagtctgga 541 ctctacacta tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggccaag tcagaccgtc 601 acctgcagcg ttgctcaccc agccagcagc accacggtgg acaaaaaact tgagcccagc 661 gggcccattt caacaatcaa cccctgtcct ccatgcaagg agtgtcacaa atgcccagct 721 cctaacctcg agggtggacc atccgtcttc atcttccctc caaatatcaa ggatgtactc 781 atgatctccc tgacacccaa ggtcacgtgt gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca 841 gacgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac gtggaagtac acacagctca gacacaaacc 901 catagagagg attacaacag tactatccgg gtggtcagca ccctccccat ccagcaccag 961 gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc aaggtcaaca acaaagacct cccatcaccc 1021 atcgagagaa ccatctcaaa aattaaaggg ctagtcagag ctccacaagt atacatcttg 1081 ccgccaccag cagagcagtt gtccaggaaa gatgtcagtc tcacttgcct ggtcgtgggc 1141 ttcaaccctg gagacatcag tgtggagtgg accagcaatg ggcatacaga ggagaactac 1201 aaggacaccg caccagtcct agactctgac ggttcttact tcatatatag caagctcaat 1261 atgaaaacaa gcaagtggga gaaaacagat tccttctcat gcaacgtgag acacgagggt 1321 ctgaaaaatt actacctgaa gaagaccatc tcccggtctc cgggtaaa

[00321] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG2b) de 08G01 (SEQ ID NO:116) 1 evllqqsgpe vvkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewige inpnnggtfy 61 nqkfkgkatl tvdkssstay melrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss 121 akttppsvyp lapgcgdttg ssvtlgclvk gyfpesvtvt wnsgslsssv htfpallqsg 181 lytmsssvtv psstwpsqtv tcsvahpass ttvdkkleps gpistinpcp pckechkcpa 241 pnleggpsvf ifppnikdvl misltpkvtc vvvdvseddp dvqiswfvnn vevhtaqtqt 301 hredynstir vvstlpiqhq dwmsgkefkc kvnnkdlpsp iertiskikg lvrapqvyil 361 pppaeqlsrk dvsltclvvg fnpgdisvew tsnghteeny kdtapvldsd gsyfiyskln 421 mktskwektd sfscnvrheg lknyylkkti srspgk

[00322] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 08G01 (SEQ ID NO:117) 1 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 61 atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct 241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagtt ctccttacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt

[00323] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 08G01 (SEQ ID NO:118) 1 diqmtqspas lsasvgetvt itcrasgnih nylawyqqkq gkspqllvyn aktladgvps 61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleikrad aaptvsifpp 121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec

[00324] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 14F11 (SEQ ID NO:119) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctgga atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg ctggattcgt 121 cagccttcag gaaagggtct agagtggctg gcagacattt ggtgggatga cgataagtac 181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag caatgaggta 241 ttcctcaaga tcgccattgt ggacactgca gatactgcca cttactactg tgctcgaaga 301 ggtcactact ctgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc 361 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc 421 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg 481 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc 541 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc 601 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat 661 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc 721 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta 781 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg 841 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt 901 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 961 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 1021 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt 1081 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat 1141 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac 1201 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc 1261 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 1321 cctggtaaa

[00325] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 14F11 (SEQ ID NO:120) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvssa 121 kttppsvypl tfpavlqsdl apgsaaqtns mvtlgclvkg yfpepvtvtw nsgslssgvh 181 ytlsssvtvp pevssvfifp sstwpsetvt cnvahpasst kvdkkivprd cgckpcictv 241 pkpkdvltit qfnstfrsvs ltpkvtcvvv diskddpevq fswfvddvev htaqtqpree 301 elpimhqdwl keqmakdkvs ngkefkcrvn saafpapiek tisktkgrpk apqvytippp 361 ltcmitdffp snweagntft editvewqwn gqpaenyknt qpimdtdgsy fvysklnvqk 421 csvlheglhn hhtekslshs pgk

[00326] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 14F11 (SEQ ID NO:121) 1 gacattgtaa tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 61 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 121 gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg ccatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 241 gaagacttgg cagaatattt ctgtcagcaa tataacagct atcctcacac gttcggaggg 301 gggaccaagc tggaaatgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt

[00327] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 14F11 (SEQ ID NO:122) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd 61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsyphtfgg gtklemkrad aaptvsifpp 121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec

[00328] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 17B11 (SEQ ID NO:123) 1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ttggattcgt 121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacaatg actgggatga tgacaagcgc 181 tataagtcat ccctgaagag ccggctcaca atatccaagg atacctccag aaaccaggta 241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaaga 301 gttgggggat tagagggcta ttttgattac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 361 tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 421 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 481 acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 541 gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 601 gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 661 agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 721 ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 781 gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 841 gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 901 gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 961 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1021 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1081 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1141 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1201 tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1261 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1321 cactctcctg gtaaa

[00329] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Pesada de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada e Região Constante de IgG1) de 17B11 (SEQ ID NO:124) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tsgmgvswir qpsgkglewl ahndwdddkr 61 yksslksrlt iskdtsrnqv flkitsvdta dtatyycarr vgglegyfdy wgqgttltvs 121 sakttppsvy plapgsaaqt nsmvtlgclv kgyfpepvtv twnsgslssg vhtfpavlqs 181 dlytlsssvt vpsstwpset vtcnvahpas stkvdkkivp rdcgckpcic tvpevssvfi 241 fppkpkdvlt itltpkvtcv vvdiskddpe vqfswfvddv evhtaqtqpr eeqfnstfrs 301 vselpimhqd wlngkefkcr vnsaafpapi ektisktkgr pkapqvytip ppkeqmakdk 361 vsltcmitdf fpeditvewq wngqpaenyk ntqpimdtdg syfvysklnv qksnweagnt 421 ftcsvlhegl hnhhteksls hspgk

[00330] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 17B11 (SEQ ID NO:125) 1 gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 61 atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctaggt ttagttatat gcactggttc 121 caacagaaac caggacaggc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct 181 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 241 cctgtggagg gggaggatac tgcaacatat tactgtcagc acagttggga gattccgtac 301 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 361 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 421 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 481 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 541 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 601 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgt

[00331] Sequência da Proteína Definindo a Sequência da Cadeia Leve de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa e Região Constante) de 17B11 (SEQ ID NO:126) 1 divltqspas lavslgqrat iscrasqsvs tsrfsymhwf qqkpgqapkl likyasnles 61 gvparfsgsg sgtdftlnih pvegedtaty ycqhsweipy tfgggtklei kradaaptvs 121 ifppsseqlt sggasvvcfl nnfypkdinv kwkidgserq ngvlnswtdq dskdstysms 181 stltltkdey erhnsytcea thktstspiv ksfnrnec

[00332] A Tabela 5 mostra a correspondência entre as sequências de comprimento total dos anticorpos discutidos em este Exemplo com aquelas apresentadas na Listagem de Sequências.Tabela 5

Exemplo 8: Afinidades de Ligação

[00333] As afinidades de ligação e cinética de ligação de anticorpos a GDF15 de humano recombinante marcado com 6X His (SEQ ID NO: 266) (His-rhGDF15 (R&D Systems, Inc.)), GDF15 de humano recombinante não marcado (rhGDF15 (Peprotech, Rocky Hill, NJ), e GDF15 de humano recombinante produzido como Fc de camundongo fundido com GDF15 (mFc-rhGDF15) ou uma versão na qual o Fc foi enzimaticamente removido (rhGDF15 clivado) foram medidas por ressonância de plasmon de superfície, usando um instrumento Biacore® T100 (GE Healthcare, Piscataway, NJ).

[00334] IgGs anticamundongo de coelho (GE Healthcare) foram imobilizadas em chips sensores CM4 com dextrana carboximetilada (GE Healthcare) por acoplamento de amina, de acordo com um protocolo padrão. As análises foram realizadas a 37 °C usando PBS contendo tensioativo P20 a 0,05 % como tampão de operação. Os anticorpos foram capturados em células de fluxo individuais a um caudal de 10 μL/minuto. O tempo de injeção foi variado para cada anticorpo para originar uma Rmáx entre 30 e 60 RU. Fc de camundongo a 250 μg/mL (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) foi injetado a 30 μL/minuto durante 120 segundos para bloquear a ligação não específica de anticorpos de captura à porção de Fc de camundongo da proteína GDF15 recombinante quando necessário. O tampão, mFc-rhGDF15, rhGDF15 clivado, His-rhGDF15, ou rhGDF15 diluído em tampão de operação foi sequencialmente injetado sobre uma superfície de referência (nenhum anticorpo capturado) e a superfície ativa (anticorpo a ser testado) durante 240 segundos a 60 μL/min. A fase de dissociação foi monitorizada durante até 1500 segundos. A superfície foi depois regenerada com duas injeções de 60 segundos de Glicina-HCl a 10 mM, pH 1,7, a um caudal de 30 μL/minuto. A gama de concentrações de GDF15 testada foi 30 nM a 0,625 nM.

[00335] Os parâmetros cinéticos foram determinados usando a função cinética do software BIAevalutation (GE Healthcare) com subtração de dupla referência. Os parâmetros cinéticos para cada anticorpo, ka (constante da taxa de associação), kd (constante da taxa de dissociação) e KD (constante de dissociação no equilíbrio) foram determinados. Os valores cinéticos dos anticorpos monoclonais em mFc-rhGDF15, rhGDF15 clivado, His-rhGDF15, ou rhGDF15 estão resumidos nas Tabelas 6, 7, 8, e 9, respectivamente.Tabela 6 Ligação do Anticorpo a mFc-rhGDF15

[00336] Os dados na Tabela 6 demonstram que os anticorpos se ligam a mFc-rhGDF15 com uma KDde cerca de 250 pM ou menos, 200 pM ou menos, 150 pM ou menos, 100 pM ou menos, 75 pM ou menos, ou 50 pM ou menos.

[00337] Os valores cinéticos dos anticorpos monoclonais em rhGDF15 clivado estão resumidos na Tabela 7.Tabela 7 Ligação do Anticorpo a rhGDF15 Clivado

[00338] Os dados na Tabela 7 demonstram que os anticorpos 01G06, 06C11 e 14F11 se ligam a rhGDF15 clivado com uma KD de cerca de 200 pM ou menos, 150 pM ou menos, ou 100 pM ou menos.

[00339] Os valores cinéticos dos anticorpos monoclonais em His- rhGDF15 estão resumidos na Tabela 8.Tabela 8 Ligação do Anticorpo a His-rhGDF15

[00340] Os dados na Tabela 8 demonstram que os anticorpos 01G06, 06C11 e 14F11 se ligam a His-rhGDF15 com uma KD de cerca de 150 pM ou menos, 100 pM ou menos, 75 pM ou menos, ou 50 pM ou menos.

[00341] Os valores cinéticos dos anticorpos monoclonais em rhGDF15 estão resumidos na Tabela 9.Tabela 9Ligação do Anticorpo a rhGDF15

[00342] Os dados na Tabela 9 demonstram que os anticorpos 01G06, 06C11 e 14F11 se ligam a rhGDF15 com uma KD de cerca de 250 pM ou menos, 200 pM ou menos, 150 pM ou menos, 100 pM ou menos, 75 pM ou menos, ou 50 pM ou menos.

Exemplo 9: Reversão da Caquexia em um Modelo Induzido por mFc-rhGDF15

[00343] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) pelo anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 14F11, ou 17B11 em um modelo de caquexia induzido por mFc-rhGDF15. mFc-rhGDF15 (2 μg/g) foi subcutaneamente administrada no flanco de camundongos ICR-SCID com 8 semanas de idade. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram randomizados em sete grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de murino, 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 14F11, ou 17B11 a 10 mg/kg. O tratamento foi administrado uma vez por injeção intraperitoneal. O tratamento com o anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 14F11, ou 17B11 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 14 e Tabela 10).Tabela 10

[00344] Os dados na FIG. 14 e Tabela 10 indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia em um modelo de camundongo induzido por mFc-rhGDF15 (i.e., um modelo de camundongo não transportando tumores).

Exemplo 10: Reversão da Caquexia em um Modelo de Tumor de Xenoenxerto HT-1080

[00345] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) pelo anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11 ou 17B11 em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080. Células HT-1080 foram cultivadas em cultura a 37oC em uma atmosfera contendo CO2 a 5% usando Meio Essencial Mínimo de Eagle (ATCC, No. do Catálogo 302003) contendo FBS a 10 %. As células subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos ICR-SCID fêmeas com 8 semanas de idade com 5 x 106 células por camundongo em matrigel a 50 %. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram randomizados em oito grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de murino, 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11 ou 17B11 a 10 mg/kg. O tratamento foi administrado a cada três dias por injeção intraperitoneal. O tratamento com o anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11 ou 17B11 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 15 e Tabela 11).Tabela 11

[00346] Os dados na FIG. 15 e Tabela 11 indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

[00347] Estudos adicionais foram conduzidos com o anticorpo 01G06 para demonstrar a reversão da caquexia em este modelo de camundongo. Células HT-1080 foram cultivadas e subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos ICR-SCID com 8 semanas de idade como descrito acima. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram randomizados em dois grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de murino ou 01G06 a 10 mg/kg. O tratamento foi administrado uma vez por injeção intraperitoneal. Como mostrado na FIG. 16A, o tratamento com anticorpo 01G06 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de 100 % (p<0,001) (FIG. 16A).

[00348] O consumo de alimentos foi determinado por pesagem do fornecimento de alimentos dado aos camundongos diariamente (FIG. 16B). Foi observado um aumento significativo no consumo de alimentos no grupo tratado com 01G06 durante os primeiros três dias pós-tratamento. Após esse tempo, não foi observada mudança significativa em comparação com o grupo de controle (mIgG).

[00349] O consumo de água foi determinado por pesagem do fornecimento de água dado aos camundongos diariamente. Não foi observada mudança significativa no consumo de água entre grupos.

[00350] Em esta experiência, um grupo de dez camundongos foi sacrificado aquando da dose (linha de base ou peso corporal a 93 %, sem tratamento) e no final do estudo (sete dias pós-dose, ou mIgG ou 01G06). A gordura gonadal e os músculos gastrocnêmios foram cirurgicamente removidos e pesados como descrito acima no Exemplo 4 e os tecidos foram rapidamente congelados em nitrogênio líquido. O RNA foi isolado das amostras de músculo gastrocnêmios para determinar os níveis de mRNA de mMuRF1 e mAtrogina por RT-PCR, como descrito no Exemplo 4.

[00351] Como mostrado na FIG. 16C foi observada uma redução significativa na massa gorda gonadal sete dias pós-dose com mIgG, mas não no grupo tratado com o anticorpo 01G06. Adicionalmente, os camundongos tratados com mIgG exibiram perda de músculo gastrocnêmio significativa em comparação com o grupo da linha de base, enquanto o grupo de camundongos tratado com anticorpo 01G06 não (FIG. 16D). Adicionalmente, os níveis de marcadores da degradação muscular, mMuRF1 e mAtrogina, foram significativamente mais elevados no grupo com mIgG em comparação com o grupo com 01G06 (FIG. 16E).

[00352] Estes resultados indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia medida pela perda de massa muscular, pela perda de gordura e perda de peso involuntária em um modelo de tumor de xenoenxerto HT-1080.

Exemplo 11: Reversão da Caquexia em um Modelo de Tumor de Xenoenxerto HT-1080

[00353] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) pelo anticorpo 01G06 em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080. Células HT-1080 foram cultivadas em cultura a 37 oC em uma atmosfera contendo CO2 a 5 % usando Meio Essencial Mínimo de Eagle (ATCC, No. do Catálogo 30-2003) contendo FBS a 10 %. As células subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos ICR-SCID fêmeas com 8 semanas de idade com 5 x 106 células por camundongo em matrigel a 50 %. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 80 %, os camundongos foram randomizados em dois grupos de cinco camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de murino, 01G06 doseado a 2 mg/kg ao dia 1 e dia 7. O tratamento foi administrado por injeção intraperitoneal. O tratamento com anticorpo 01G06 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 17A e Tabela 12).Tabela 12

[00354] Os dados nas FIGs. 17A-B e Tabela 12 indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

[00355] Em esta experiência, um grupo de cinco camundongos foi sacrificado aquando da dosagem (linha de base ou perda de peso corporal a 80 %, sem tratamento) e no final do estudo (sete dias pós- dose, ou mIgG ou 01G06). A massa do fígado, coração, baço, rim, gonadal e os músculos gastrocnêmios foram cirurgicamente removidos e pesados. Como mostrado na FIG. 17B foi observada uma perda significativa na massa do fígado, coração, baço, rim, gordura gonadal e músculos gastrocnêmios sete dias pós-dose com mIgG, mas não no grupo tratado com o anticorpo 01G06. Adicionalmente, os camundongos tratados com o anticorpo 01G06 exibiram ganho no fígado e músculo gonadal significativo em comparação com o grupo de linha de base (FIG. 17B).

[00356] Estes resultados indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia medida pela perda de massa de órgãos-chave, perda de massa muscular, perda de gordura e perda de peso involuntária em um modelo de tumor de xenoenxerto HT-1080.

Exemplo 12: Reversão da Caquexia em um Modelo de Tumor de Xenoenxerto K-562

[00357] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) pelo anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11 ou 17B11 em um modelo de xenoenxerto de leucemia K-562. Células K-562 foram cultivadas em cultura a 37oC em uma atmosfera contendo CO2 a 5 % usando Meio de Dulbecco Modificado por Iscove (No. do Catálogo da ATCC 302005) contendo FBS a 10 %. As células subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos CB17SCRFMF fêmeas com 8 semanas de idade com 2,5 x 106 células por camundongo em matrigel a 50 %. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram aleatoriamente distribuídos em oito grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de murino, 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11 ou 17B11 a 10 mg/kg. O tratamento foi administrado a cada três dias por injeção intraperitoneal. O tratamento com o anticorpo 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11 ou 17B11 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 18 e Tabela 13).Tabela 13

[00358] Os dados na FIG. 18 e Tabela 13 indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia em um modelo de tumor de xenoenxerto K-562.

Exemplo 13: Modelos de Tumor de Xenoenxerto Adicionais

[00359] O anticorpo 01G06 foi testado em modelos de tumor de xenoenxerto adicionais incluindo o modelo de xenoenxerto dos ovários TOV-21G e o modelo de xenoenxerto do cólon LS1034. Em cada modelo, o anticorpo 01G06 reverteu a perda de peso corporal em comparação com um controle de PBS (p<0,001 para o modelo TOV- 21G e p<0,01 para o modelo LS1034).

Exemplo 14: Humanização de Anticorpos Anti-GDF15

[00360] Este Exemplo descreve a humanização e quimerização de três anticorpos de murino, designados 01G06, 06C11, e 14F11, e a caracterização dos anticorpos humanizados resultantes. Os anticorpos anti-GDF15 humanizados foram desenhados, maturados por afinidade por mutagênese de CDR dirigida, e otimizados usando métodos conhecidos na técnica. As sequências de aminoácidos foram convertidas em sequências de DNA de códon otimizado e sintetizadas para incluírem (na seguinte ordem): local de restrição de HindlII 5', sequência de consenso de Kozak, sequência sinal aminoterminal, região variável humanizada, região constante de IgG1 ou Kappa de humano, códon de paragem, e um local de restrição de EcoRI 3'.

[00361] Cadeias pesadas (IgG1 de humano) e leves (Kappa de humano) de 01G06, 06C11, e 14F11 quiméricos (região variável de murino e região constante de humano) foram também construídas Para gerar anticorpos quiméricos, as regiões variáveis de murino foram fundidas com a região constante de humano, e sequências de DNA com códon otimizado foram sintetizadas, incluindo (na seguinte ordem): local de restrição de HindIII 5', sequência consenso de Kozak, sequência sinal aminoterminal, região variável de camundongo, região constante de IgG1 ou Kappa de humano, códon de paragem, e local de restrição de EcoRI 3'.

[00362] As cadeias pesadas humanizadas e quiméricas foram subclonadas em pEE14.4 (Lonza, Basel, Suíça) através de locais HindIII e EcoRI usando clonagem por PCR In-FusionTM (Clontech, Mountain View, CA). As cadeias leves Kappa humanizadas e quiméricas foram subclonadas em pEE14.4 (Lonza Biologics) através de locais HindIII e EcoRI usando clonagem por PCR In-FusionTM.

[00363] Cadeias de anticorpo humanizadas ou cadeias de anticorpo quiméricas foram transientemente transfectadas em células 293T para produzir anticorpo. O anticorpo foi ou purificado ou usado em sobrenadantes de meios de cultura de células para subsequente análise in vitro. A ligação dos anticorpos quiméricos e humanizados a GDF15 de humano foi medida como descrito em baixo. Os resultados estão resumidos nas Tabelas 24-27.

[00364] Cada uma das combinações possíveis das regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina e cadeia leve da imunoglobulina de 01G06 quiméricas ou humanizadas é apresentada em baixo na Tabela 14. Tabela 14

[00365] Cada uma das combinações possíveis das regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina e cadeia leve da imunoglobulina de 06C11 quiméricas ou humanizadas é apresentada em baixo na Tabela 15.Tabela 15

[00366] Cada uma das combinações possíveis das regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina e cadeia leve da imunoglobulina de 14F11 quiméricas ou humanizadas é apresentada em baixo na Tabela 16.Tabela 16

[00367] Cada uma das combinações possíveis das regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina e cadeia leve da imunoglobulina de 04F08, 06C11, e 14F11 quiméricas é apresentada em baixo na Tabela 17.Tabela 17

[00368] Cada uma das combinações possíveis das regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina e cadeia leve da imunoglobulina de 01G06 quiméricas e 08G01 quiméricas é apresentada em baixo na Tabela 18.Tabela 18

[00369] As sequências de ácido nucleico e as sequências da proteína codificada definindo regiões variáveis dos anticorpos 01G06, 06C11, e 14F11 quiméricos e humanizados são resumidas em baixo (as sequências de peptídeo sinal aminoterminais não são mostradas). As sequências de CDR (definição de Kabat) são mostradas em negrito e estão sublinhadas nas sequências de aminoácidos.

[00370] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Ch01G06 Quimérico (SEQ ID NO:127) 1 gaagtgttgt tgcagcagtc agggccggag ttggtaaaac cgggagcgtc ggtgaaaatc 61 ccgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggattgggt gaaacagtcg 121 catgggaaat cgcttgaatg gattggtcag atcaatccga ataatggagg aatcttcttt 181 aatcagaagt ttaaaggaaa agcgacgctt acagtcgata agtcgtcgaa cacggcgttc 241 atggaagtac ggtcgcttac gtcggaagat acggcggtct attactgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggactattgg ggacaaggga cgtcggtcac ggtatcgtcg

[00371] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Ch01G06 Quimérico (SEQ ID NO:40) 1 evllqqsgpe Ivkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss

[00372] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 (SEQ ID NO:53) 1 caagtgcaac ttgtgcagtc gggtgcggaa gtcaaaaagc cgggagcgtc ggtgaaagta 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggactgggt acgacaggca 121 ccggggaaat cgttggaatg gatcggacag attaatccga acaatggggg aattttcttt 181 aatcagaaat tcaaaggacg ggcgacgttg acggtcgata catcgacgaa tacggcgtat 241 atggaattga ggtcgcttcg ctcggacgat acggcggtct attactgcgc cagggaggcg 301 atcacgacgg taggggcgat ggattattgg ggacagggga cgcttgtgac ggtatcgtcg

[00373] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 (SEQ ID NO:54) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgratl tvdtstntay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00374] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 (SEQ ID NO:55) 1 caagtccagc ttgtccagtc gggagcggaa gtgaagaaac cggggtcgtc ggtcaaagta 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggattgggt acgacaggct 121 ccgggaaaat cattggaatg gattggacag attaatccga ataatggggg tatcttcttt 181 aatcaaaagt ttaaagggag ggcgacgttg acggtggaca aatcgacaaa tacggcgtat 241 atggaattgt cgtcgcttcg gtcggaggac acggcggtgt attactgcgc gagggaggcg 301 atcacgacgg tcggggcgat ggattattgg ggacagggaa cgcttgtgac ggtatcgtcg

[00375] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 (SEQ ID NO:56) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgratl tvdkstntay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00376] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L (SEQ ID NO:57) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt 181 aatcagaaat tcaaaggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg

[00377] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L (SEQ ID NO:58) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfkgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00378] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S (SEQ ID NO:59) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg

[00379] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S (SEQ ID NO:60) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpnnggiff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00380] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q (SEQ ID NO:61) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg

[00381] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q (SEQ ID NO:62) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00382] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L (SEQ ID NO:63) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc 181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg

[00383] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L (SEQ ID NO:64) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00384] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L (SEQ ID NO:65) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc 181 aatcagaagt ttcaggggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg

[00385] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L (SEQ ID NO:66) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfqgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00386] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F1 (SEQ ID NO:245) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccgt acaatcacct gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg

[00387] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F1 (SEQ ID NO:246) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpynhliff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00388] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F2 (SEQ ID NO:247) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggact gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg

[00389] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F2 (SEQ ID NO:248) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpnngliff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00390] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F1 (SEQ ID NO:249) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatgggct gatctttttc 181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg

[00391] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F1 (SEQ ID NO:250) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnngliff 61 nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00392] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F2 (SEQ ID NO:251) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccgt acaatcacct gatctttttc 181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg

[00393] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F2 (SEQ ID NO:252) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpynhliff 61 nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss

[00394] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Ch06C11 Quimérico (SEQ ID NO:129) 1 caggtgacac tcaaagaatc aggacccgga atccttcagc ccagccagac cttgtcgctg 61 acttgttcgt tctccggttt cagcctgaat acttatggga tgggtgtgtc atggatcagg 121 caaccgtccg ggaaaggatt ggagtggctc gcgcacatct actgggacga tgacaaacgc 181 tacaatcctt cgctgaagag ccgattgacg atttccaagg atgcctcgaa caaccgggta 241 tttcttaaga tcacgtcggt cgatacggca gacacggcga cctattactg cgcccaaaga 301 gggtacgatg actattgggg atattggggc caggggacac tcgtcacaat ttcagct

[00395] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Ch06C11 Quimérico (SEQ ID NO:46) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisa

[00396] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de HE LM 06C11 IGHV2-70 (SEQ ID NO:67) 1 caggtgactt tgaaagaatc cggtcccgca ttggtaaagc caacccagac acttacgctc 61 acatgtacat tttccggatt cagcttgaac acttacggga tgggagtgtc gtggattcgg 121 caacctccgg ggaaggctct ggagtggctg gcgcacatct actgggatga tgacaaaagg 181 tataacccct cacttaaaac gagactgacg atctcgaagg acacaagcaa gaatcaggtc 241 gtcctcacga ttacgaatgt agacccggtg gatactgccg tctattactg cgcgcaacgc 301 gggtatgatg actactgggg atattggggt cagggcaccc tcgtgaccat ctcgtca

[00397] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de HE LM 06C11 IGHV2-70 (SEQ ID NO:68) 1 qvtlkesgpa lvkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkalewl ahiywdddkr 61 ynpslktrlt iskdtsknqv vltitnvdpv dtavyycaqr gyddywgywg qgtlvtiss

[00398] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu06C11 IGHV2-5 (SEQ ID NO:69) 1 caagtaacgc tcaaggagtc cggacccacc ttggtgaagc cgacgcagac cttgactctt 61 acgtgcactt tctcggggtt ttcactgaat acgtacggga tgggtgtctc atggatcagg 121 caacctccgg ggaaaggatt ggaatggctg gcgcacatct actgggatga cgataagaga 181 tataacccaa gcctcaagtc gcggctcacc attacaaaag atacatcgaa aaatcaggtc 241 gtacttacta tcacgaacat ggaccccgtg gacacagcaa catattactg tgcccagcgc 301 ggctatgacg attattgggg ttactgggga cagggaacac tggtcacggt gtccagc

[00399] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu06C11 IGHV2-5 (SEQ ID NO:70) 1 qvtlkesgpt Ivkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt itkdtsknqv vltitnmdpv dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtvss

[00400] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Hu06C11 IGHV2-5 (SEQ ID NO:131) 1 caggtcacgc tgaaagagtc aggtcccgga atccttcaac cttcgcagac attgtcactc 61 acatgttcct tctccgggtt ctcgctctcg acttatggca tgggtgtagg atggattcgg 121 cagcccagcg ggaaggggct tgagtggttg gcggatatct ggtgggacga cgacaaatac 181 tacaatccga gcctgaagtc ccgcctcacc atttcgaaag atacgtcatc aaacgaagtc 241 tttttgaaga tcgccatcgt ggacacggcg gatacagcga cgtattactg cgccagaagg 301 ggacactaca gcgcaatgga ttattgggga caggggacct cggtgactgt gtcgtcc

[00401] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Ch14F11 Quimérico (SEQ ID NO:50) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvss

[00402] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-5 (SEQ ID NO:71) 1 cagatcactt tgaaagaaag cggaccgacc ttggtcaagc ccacacaaac cctcacgctc 61 acgtgtacat tttcggggtt ctcgctttca acttacggga tgggagtagg gtggattcgc 121 cagccgcctg gtaaagcgtt ggagtggctt gcagacatct ggtgggacga cgataagtac 181 tataatccct cgctcaagtc cagactgacc atcacgaaag atacgagcaa gaaccaggtc 241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccagtg gatacggcta catattactg cgccaggcgg 301 ggtcactact cagcgatgga ttattggggc cagggaacac tggtaacggt gtcgtcc

[00403] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-5 (SEQ ID NO:72) 1 qitlkesgpt lvkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt itkdtsknqv vltmtnmdpv dtatyycarr ghysamdywg qgtlvtvss

[00404] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-70 (SEQ ID NO:73) 1 caagtgactc tcaaggagtc cggacccgcc ctggtcaaac caacgcagac actgacgctc 61 acatgcacct tcagcggatt ttcgttgtca acgtacggca tgggtgtggg gtggattcgc 121 cagcctccgg ggaaagccct tgaatggttg gcggacatct ggtgggatga tgacaagtac 181 tataatccct cacttaagtc acggttgacg atctcgaaag acaccagcaa gaaccaggta 241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccggtc gatacagcgg tctactattg tgctagaagg 301 ggacactact ccgcaatgga ttattggggt caggggacgc tcgtaaccgt gtcgtcg

[00405] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-70 (SEQ ID NO:74) 1 qvtlkesgpa Ivkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt iskdtsknqv vltmtnmdpv dtavyycarr ghysamdywg qgtlvtvss

[00406] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Ch01G06 Quimérico (SEQ ID NO:133) 1 gacatccaaa tgacccagtc acccgcgagc ctttcggcgt cggtcggaga aacggtcacg 61 atcacgtgcc ggacatcaga gaatctccat aactacctcg cgtggtatca acagaagcag 121 gggaagtcgc cccagttgct tgtatacgat gcgaaaacgt tggcggatgg ggtgccgtcc 181 agattctcgg gatcgggctc ggggacgcag tactcgctca agatcaattc gctgcagccg 241 gaggactttg ggtcgtacta ttgtcagcat ttttggtcat caccgtatac atttggaggt 301 ggaacgaaac ttgagattaa g

[00407] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Ch01G06 Quimérico (SEQ ID NO:76) 1 diqmtqspas lsasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleik

[00408] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 (SEQ ID NO:89) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaagtcac cgaaactcct tgtctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa g

[00409] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 (SEQ ID NO:90) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspkllvyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik

[00410] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I (também referida aqui como Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 F1; SEQ ID NO:91) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa g

[00411] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I (também referida aqui como Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 F1; SEQ ID NO:92) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik

[00412] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 V48I (SEQ ID NO:93) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa g

[00413] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 V48I (SEQ ID NO:94) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik

[00414] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 F1 (também referida aqui como Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I; SEQ ID NO:91) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaaggccc agtgccgtcg cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg 181 agattctcgg gctccagccc gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc 241 gaggactttg cgacgtacta atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa g ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac

[00415] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 F1 (também referida aqui como Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I; SEQ ID NO:92) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik

[00416] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 F2 (SEQ ID NO:253) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgg acccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa g

[00417] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu01G06 IGKV1-39 F2 (SEQ ID NO:254) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsdpytfgq gtkleik

[00418] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Ch06C11 Quimérico (SEQ ID NO:135) 1 gatatcgtca tgacccagtc ccagaagttc atgtcaactt cagtgggaga cagagtgtcc 61 gtcacatgta aagcctcgca aaatgtggga accaacgtag cgtggttcca gcagaaacct 121 ggccaatcac cgaaggcact gatctactcg gccagctata ggtactcggg agtaccagat 181 cggtttacgg ggtcggggag cgggacggac tttatcctca ctatttccaa tgtccagtcg 241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataacaact atcccctcac gtttggtgct 301 ggtacaaaat tggagttgaa g

[00419] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Ch06C11 Quimérico (SEQ ID NO:82) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd 61 rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfcqq ynnypltfga gtklelk

[00420] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Sh06C11 IGKV1-16 (SEQ ID NO:95) 1 gacatccaaa tgacccaatc gccctcctcc ctctccgcat cagtagggga ccgcgtcaca 61 attacttgca aagcgtcgca gaacgtcgga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc 121 ggaaaagctc cgaagagctt gatctactcg gcctcatata ggtattcggg tgtgccgagc 181 cggtttagcg ggtcggggtc aggtactgat ttcacgctca caatttcatc gttgcagcca 241 gaagatttcg ccacatatta ctgtcagcag tacaacaatt accctctgac gttcggccag 301 ggaaccaaac ttgagatcaa g

[00421] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Sh06C11 IGKV1-16 (SEQ ID NO:96) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkapksliys asyrysgvps 61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyycqq ynnypltfgq gtkleik

[00422] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Ch14F11 (SEQ ID NO:137) 1 gacatcgtga tgacacagtc acagaaattc atgtccacat ccgtcggtga tagagtatcc 61 gtcacgtgta aggcctcgca aaacgtagga actaatgtgg cgtggtatca acagaagcca 121 ggacagtcac ccaaagcact catctacagc ccctcatatc ggtacagcgg ggtgccggac 181 aggttcacgg gatcggggag cgggaccgat tttacactga ccatttcgaa tgtccagtcg 241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataactcgt accctcacac gtttggaggt 301 ggcactaagt tggagatgaa a

[00423] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Ch14F11 Quimérico (SEQ ID NO:86) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd 61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsyphtfgg gtklemk

[00424] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu14F11 IGKV1-16 (SEQ ID NO:97) 1 gatatccaga tgacacagtc accctcgtcg ctctcagctt ccgtaggcga cagggtcact 61 attacgtgta aagcatcaca gaacgtcgga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc 121 gggaagagcc ccaaagcgct tatctactcc ccgtcgtatc ggtattccgg tgtgccaagc 181 agattttcgg ggtcaggttc gggaactgac tttaccctga ccatctcgtc cctccaaccg 241 gaagatttcg ccacgtactt ctgccagcag tacaacagct atcctcacac attcggacaa 301 gggacaaagt tggagattaa a

[00425] Sequência da Proteína Definindo a Região Variável da Cadeia Kappa de Hu14F11 IGKV1-16 (SEQ ID NO:98) 1 diqmtqspss Isasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkspkaliys psyrysgvps 61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyfcqq ynsyphtfgq gtkleik

[00426] As sequências de aminoácidos definindo as regiões variáveis da cadeia pesada da imunoglobulina para os anticorpos produzidos no Exemplo 13 estão alinhadas na FIG. 19. As sequências de péptido sinal aminoterminais (para expressão/secreção apropriadas) não estão apresentadas. As CDR1, CDR 2, e a CDR3 (definição de Kabat) estão identificadas por caixas. A FIG. 20 mostra um alinhamento das sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 separadas para cada uma das sequências da região variável mostradas na FIG. 19.

[00427] As sequências de aminoácidos definindo as regiões variáveis da cadeia leve da imunoglobulina para os anticorpos no Exemplo 13 estão alinhadas na FIG. 21. As sequências de péptido sinal aminoterminais (para expressão/secreção apropriadas) não estão apresentadas. As CDR1, CDR 2 e CDR3 estão identificadas por caixas. A FIG. 22 mostra um alinhamento das sequências de CDR1, CDR2, e CDR3 separadas para cada uma das sequências da região variável mostradas na FIG. 21.

[00428] A Tabela 19 é um gráfico de concordância mostrando a SEQ ID NO. de cada sequência discutida em este Exemplo.Tabela 19

[00429] As sequências de CDR da cadeia pesada de anticorpos monoclonais humanizados (definições de Kabat, Chothia, e IMGT) são mostradas na Tabela 20.Tabela 20

[00430] As sequências de CDR da cadeia leve Kappa de anticorpos monoclonais humanizados (definições de Kabat, Chothia, e IMGT) são mostradas na Tabela 21.Tabela 21

[00431] Para criar as sequências de anticorpo de cadeia pesada ou kappa quiméricas e humanizadas completas, cada sequência variável acima é combinada com sua respectiva região constante de humano. Por exemplo, uma cadeia pesada completa compreende uma sequência variável pesada seguida por uma sequência constante da cadeia pesada de IgG1 de humano. Uma cadeia kappa completa compreende uma sequência variável kappa seguida por uma sequência constante da cadeia leve kappa de humano.

[00432] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Constante da Cadeia Pesada de IgG1 de Humano (SEQ ID NO:171) 1 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 61 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 121 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 181 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 241 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 301 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 361 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 421 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 481 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 541 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 601 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 661 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 721 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 781 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 841 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 901 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 961 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00433] Sequência da Proteína Definindo a Região Constante da Cadeia Pesada de IgG1 de Humano (SEQ ID NO:172) 1 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 61 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 121 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 181 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 241 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 301 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00434] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Região Constante da Cadeia Leve Kappa de Humano (SEQ ID NO:173) 1 cgcacagttg ctgcccccag cgtgttcatt ttcccaccta gcgatgagca gctgaaaagc 61 ggtactgcct ctgtcgtatg cttgctcaac aacttttacc cacgtgaggc taaggtgcag 121 tggaaagtgg ataatgcact tcaatctgga aacagtcaag agtccgtgac agaacaggac 181 agcaaagact caacttattc actctcttcc accctgactc tgtccaaggc agactatgaa 241 aaacacaagg tatacgcctg cgaggttaca caccagggtt tgtctagtcc tgtcaccaag 301 tccttcaata ggggcgaatg t

[00435] Sequência da Proteína Definindo a Região Constante da Cadeia Leve Kappa de Humano (SEQ ID NO:174) 1 rtvaapsvfi fppsdeqlks gtasvvclln nfypreakvq wkvdnalqsg nsqesvteqd 61 skdstyslss tltlskadye khkvyacevt hqglsspvtk sfnrgec

[00436] As seguintes sequências representam as sequências da cadeia pesada e leve de comprimento total reais ou contempladas (i.e., contendo ambas as sequências das regiões variáveis e constantes) para cada anticorpo descrito em este Exemplo. As sequências sinal para secreção apropriada dos anticorpos (p.ex., sequências sinal na extremidade 5’ das sequências de DNA ou na extremidade aminoterminal das sequências da proteína) não são mostradas nas sequências da cadeia pesada e leve de comprimento total divulgadas aqui e não estão incluídas na proteína secretada final. Os códons de paragem para terminação da tradução requeridos na extremidade 3’ das sequências de DNA não são também mostrados. Está dentro da perícia ordinária na técnica selecionar uma sequência sinal e/ou um códon de paragem para expressão das sequências da cadeia pesada e cadeia leve da imunoglobulina de comprimento total divulgadas. É também contemplado que as sequências da região variável podem ser ligadas a outras sequências da região constante para produzirem cadeias pesadas e leves da imunoglobulina de comprimento total.

[00437] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Ch01G06 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:175) 1 gaagtgttgt tgcagcagtc agggccggag ttggtaaaac cgggagcgtc ggtgaaaatc 61 ccgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggattgggt gaaacagtcg 121 catgggaaat cgcttgaatg gattggtcag atcaatccga ataatggagg aatcttcttt 181 aatcagaagt ttaaaggaaa agcgacgctt acagtcgata agtcgtcgaa cacggcgttc 241 atggaagtac ggtcgcttac gtcggaagat acggcggtct attactgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggactattgg ggacaaggga cgtcggtcac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00438] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Ch01G06 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:176) 1 evllqqsgpe lvkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00439] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:177) 1 caagtgcaac ttgtgcagtc gggtgcggaa gtcaaaaagc cgggagcgtc ggtgaaagta 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggactgggt acgacaggca 121 ccggggaaat cgttggaatg gatcggacag attaatccga acaatggggg aattttcttt 181 aatcagaaat tcaaaggacg ggcgacgttg acggtcgata catcgacgaa tacggcgtat 241 atggaattga cagggaggcg ggtcgcttcg ctcggacgat acggcggtct attactgcgc 301 atcacgacgg ggtatcgtcg taggggcgat ggattattgg ggacagggga cgcttgtgac 361 gcctcaacaa tacatccggg aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag 421 ggcactgcag aaccgtgagc cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt 481 tggaacagtg gcaaagctct gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct 541 ggcctgtact cactcagacc cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg 601 tacatctgta ggtggaaccc atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg 661 aagagctgcg tctgggcggt acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact 721 cccagcgtct tagaacaccc ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag 781 gaggtgacat gttcaactgg gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa 841 tacgttgatg gcagtataat gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga 901 agtacatacc caacggcaaa gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct 961 gaatacaaat gactattagt gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa 1021 aaggcaaagg tagagaggaa ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag 1081 atgacaaaga cagcgacatc accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc 1141 gccgttgagt ccccccagtg gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac 1201 ctggatagtg gtcccgctgg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa 1261 cagcagggta ccactacacc acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00440] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:178) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgratl tvdtstntay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00441] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:179) 1 caagtccagc ttgtccagtc gggagcggaa gtgaagaaac cggggtcgtc ggtcaaagta 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggattgggt acgacaggct 121 ccgggaaaat cattggaatg gattggacag attaatccga ataatggggg tatcttcttt 181 aatcaaaagt ttaaagggag ggcgacgttg acggtggaca aatcgacaaa tacggcgtat 241 atggaattgt cgtcgcttcg gtcggaggac acggcggtgt attactgcgc gagggaggcg 301 atcacgacgg tcggggcgat ggattattgg ggacagggaa cgcttgtgac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00442] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:180) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgratl tvdkstntay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00443] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:181) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt 181 aatcagaaat tcaaaggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00444] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:182) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfkgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00445] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:183) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00446] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:184) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpnnggiff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00447] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:185) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00448] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:186) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00449] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:187) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc 181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00450] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:188) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00451] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:189) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc 181 aatcagaagt ttcaggggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00452] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:190) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff 61 nqkfqgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00453] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:255) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccgt acaatcacct gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00454] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:256) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpynhliff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00455] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:257) 1 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc 61 tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg 121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggact gatcttcttt 181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat 241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00456] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:258) 1 qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpnngliff 61 nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00457] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:259) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatgggct gatctttttc 181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00458] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:260) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnngliff 61 nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00459] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:261) 1 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg 61 tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg 121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccgt acaatcacct gatctttttc 181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat 241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg 301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg 361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg 421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc 481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct 541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc 601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc 661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt 721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc 781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg 841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat 901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa 961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt 1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa 1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc 1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg 1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg 1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc 1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag

[00460] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:262) 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpynhliff 61 nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss 121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 361 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

[00461] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Ch06C11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:191) 1 caggtgacac tcaaagaatc aggacccgga atccttcagc ccagccagac cttgtcgctg 61 acttgttcgt tctccggttt cagcctgaat acttatggga tgggtgtgtc atggatcagg 121 caaccgtccg ggaaaggatt ggagtggctc gcgcacatct actgggacga tgacaaacgc 181 tacaatcctt cgctgaagag ccgattgacg atttccaagg atgcctcgaa caaccgggta 241 tttcttaaga tcacgtcggt cgatacggca gacacggcga cctattactg cgcccaaaga 301 gggtacgatg actattgggg atattggggc caggggacac tcgtcacaat ttcagctgcc 361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc 421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg 481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc 541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac 601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag 661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc 721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag 781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac 841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt 901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa 961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag 1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg 1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg 1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag 1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag 1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag

[00462] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Ch06C11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:192) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisaa 121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg 181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp 241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns 301 tyrvvsvltv lhqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem 361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq 421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk

[00463] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de HE LM 06C11 IGHV2-70 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:193) 1 caggtgactt tgaaagaatc cggtcccgca ttggtaaagc caacccagac acttacgctc 61 acatgtacat tttccggatt cagcttgaac acttacggga tgggagtgtc gtggattcgg 121 caacctccgg ggaaggctct ggagtggctg gcgcacatct actgggatga tgacaaaagg 181 tataacccct cacttaaaac gagactgacg atctcgaagg acacaagcaa gaatcaggtc 241 gtcctcacga ttacgaatgt agacccggtg gatactgccg tctattactg cgcgcaacgc 301 gggtatgatg actactgggg atattggggt cagggcaccc tcgtgaccat ctcgtcagcc 361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc 421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg 481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc 541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac 601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag 661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc 721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag 781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac 841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt 901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa 961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag 1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg 1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg 1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag 1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag 1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag

[00464] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de HE LM 06C11 IGHV2-70 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:194) 1 qvtlkesgpa lvkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkalewl ahiywdddkr 61 ynpslktrlt iskdtsknqv vltitnvdpv dtavyycaqr gyddywgywg qgtlvtissa 121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg 181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp 241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns 301 tyrvvsvltv lhqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem 361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq 421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk

[00465] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Hu06C11 IGHV2-5 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:195) 1 caagtaacgc tcaaggagtc cggacccacc ttggtgaagc cgacgcagac cttgactctt 61 acgtgcactt tctcggggtt ttcactgaat acgtacggga tgggtgtctc atggatcagg 121 caacctccgg ggaaaggatt ggaatggctg gcgcacatct actgggatga cgataagaga 181 tataacccaa gcctcaagtc gcggctcacc attacaaaag atacatcgaa aaatcaggtc 241 gtacttacta tcacgaacat ggaccccgtg gacacagcaa catattactg tgcccagcgc 301 ggctatgacg attattgggg ttactgggga cagggaacac tggtcacggt gtccagcgcc 361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc 421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg 481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc 541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac 601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag 661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc 721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag 781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac 841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt 901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa 961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag 1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg 1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg 1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag 1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag 1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag

[00466] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Hu06C11 IGHV2-5 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:196) 1 qvtlkesgpt lvkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkglewl ahiywdddkr 61 ynpslksrlt itkdtsknqv vltitnmdpv dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtvssa 121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg 181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp 241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns 301 tyrvvsvltv lhqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem 361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq 421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk

[00467] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Ch14F11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:197) 1 caggtcacgc tgaaagagtc aggtcccgga atccttcaac cttcgcagac attgtcactc 61 acatgttcct tctccgggtt ctcgctctcg acttatggca tgggtgtagg atggattcgg 121 cagcccagcg ggaaggggct tgagtggttg gcggatatct ggtgggacga cgacaaatac 181 tacaatccga gcctgaagtc ccgcctcacc atttcgaaag atacgtcatc aaacgaagtc 241 tttttgaaga tcgccatcgt ggacacggcg gatacagcga cgtattactg cgccagaagg 301 ggacactaca gcgcaatgga ttattgggga caggggacct cggtgactgt gtcgtccgcc 361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc 421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg 481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc 541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac 601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag 661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc 721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag 781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac 841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt 901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa 961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag 1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg 1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg 1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag 1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag 1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag

[00468] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Ch14F11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:198) 1 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvssa 121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg 181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp 241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns 301 tyrvvsvltv lhqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem 361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq 421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk

[00469] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-5 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:199) 1 cagatcactt tgaaagaaag cggaccgacc ttggtcaagc ccacacaaac cctcacgctc 61 acgtgtacat tttcggggtt ctcgctttca acttacggga tgggagtagg gtggattcgc 121 cagccgcctg gtaaagcgtt ggagtggctt gcagacatct ggtgggacga cgataagtac 181 tataatccct cgctcaagtc cagactgacc atcacgaaag atacgagcaa gaaccaggtc 241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccagtg gatacggcta catattactg cgccaggcgg 301 ggtcactact cagcgatgga ttattggggc cagggaacac tggtaacggt gtcgtccgcc 361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc 421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg 481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc 541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac 601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag 661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc 721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag 781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac 841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt 901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa 961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag 1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg 1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg 1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag 1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag 1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag

[00470] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-5 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:200) 1 qitlkesgpt lvkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt itkdtsknqv vltmtnmdpv dtatyycarr ghysamdywg qgtlvtvssa 121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg 181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp 241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns 301 tyrvvsvltv lhqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem 361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq 421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk

[00471] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-70 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:201) 1 caagtgactc tcaaggagtc cggacccgcc ctggtcaaac caacgcagac actgacgctc 61 acatgcacct tcagcggatt ttcgttgtca acgtacggca tgggtgtggg gtggattcgc 121 cagcctccgg ggaaagccct tgaatggttg gcggacatct ggtgggatga tgacaagtac 181 tataatccct cacttaagtc acggttgacg atctcgaaag acaccagcaa gaaccaggta 241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccggtc gatacagcgg tctactattg tgctagaagg 301 ggacactact ccgcaatgga ttattggggt caggggacgc tcgtaaccgt gtcgtcggcc 361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc 421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg 481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc 541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac 601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag 661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc 721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag 781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac 841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt 901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa 961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag 1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg 1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg 1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag 1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag 1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag

[00472] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-70 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:202) 1 qvtlkesgpa lvkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky 61 ynpslksrlt iskdtsknqv vltmtnmdpv dtavyycarr ghysamdywg qgtlvtvssa 121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg 181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp 241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns 301 tyrvvsvltv lhqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem 361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq 421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk

[00473] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Ch01G06 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:203) 1 gacatccaaa tgacccagtc acccgcgagc ctttcggcgt cggtcggaga aacggtcacg 61 atcacgtgcc ggacatcaga gaatctccat aactacctcg cgtggtatca acagaagcag 121 gggaagtcgc cccagttgct tgtatacgat gcgaaaacgt tggcggatgg ggtgccgtcc 181 agattctcgg gatcgggctc ggggacgcag tactcgctca agatcaattc gctgcagccg 241 gaggactttg ggtcgtacta ttgtcagcat ttttggtcat caccgtatac atttggaggt 301 ggaacgaaac ttgagattaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00474] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Ch01G06 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:204) 1 diqmtqspas lsasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00475] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:205) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaagtcac cgaaactcct tgtctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00476] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:206) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspkllvyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00477] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (também referida aqui como a Cadeia Leve de Hu01G06 IGFV1-39 F1 de comprimento total; SEQ ID NO:207) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00478] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (também referida aqui como a Cadeia Leve de Hu01G06 IGFV1-39 F1 de comprimento total; SEQ ID NO:207) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00479] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:209) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00480] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:210) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00481] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (também referida aqui como a Cadeia Leve de Hu01G06 IGFV1-39 S43A V48I de Comprimento Total; SEQ ID NO:207) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00482] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (também referida aqui como a Cadeia Leve de Hu01G06 IGFV1-39 S43A V48I de Comprimento Total; SEQ ID NO:208) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00483] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:263) 1 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca 61 attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc 121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg 181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc 241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgg acccctacac atttgggcag 301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00484] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Hu01G06 IGKV1-39 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:264) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps 61 rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsdpytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00485] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Ch06C11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:211) 1 gatatcgtca tgacccagtc ccagaagttc atgtcaactt cagtgggaga cagagtgtcc 61 gtcacatgta aagcctcgca aaatgtggga accaacgtag cgtggttcca gcagaaacct 121 ggccaatcac cgaaggcact gatctactcg gccagctata ggtactcggg agtaccagat 181 cggtttacgg ggtcggggag cgggacggac tttatcctca ctatttccaa tgtccagtcg 241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataacaact atcccctcac gtttggtgct 301 ggtacaaaat tggagttgaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00486] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Ch06C11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:212) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd 61 rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfcqq ynnypltfga gtklelkrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00487] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Sh06C11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:213) 1 gacatccaaa tgacccaatc gccctcctcc ctctccgcat cagtagggga ccgcgtcaca 61 attacttgca aagcgtcgca gaacgtcgga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc 121 ggaaaagctc cgaagagctt gatctactcg gcctcatata ggtattcggg tgtgccgagc 181 cggtttagcg ggtcggggtc aggtactgat ttcacgctca caatttcatc gttgcagcca 241 gaagatttcg ccacatatta ctgtcagcag tacaacaatt accctctgac gttcggccag 301 ggaaccaaac ttgagatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00488] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Sh06C11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:214) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkapksliys asyrysgvps 61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyycqq ynnypltfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00489] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Ch14F11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:215) 1 gacatcgtga tgacacagtc acagaaattc atgtccacat ccgtcggtga tagagtatcc 61 gtcacgtgta aggcctcgca aaacgtagga actaatgtgg cgtggtatca acagaagcca 121 ggacagtcac ccaaagcact catctacagc ccctcatatc ggtacagcgg ggtgccggac 181 aggttcacgg gatcggggag cgggaccgat tttacactga ccatttcgaa tgtccagtcg 241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataactcgt accctcacac gtttggaggt 301 ggcactaagt tggagatgaa acgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00490] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Ch14F11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:216) 1 divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd 61 rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsyphtfgg gtklemkrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00491] Sequência de Ácido Nucleico Codificando a Cadeia Leve de Hu14F11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:217) 1 gatatccaga tgacacagtc accctcgtcg ctctcagctt ccgtaggcga cagggtcact 61 attacgtgta aagcatcaca gaacgtcgga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc 121 gggaagagcc ccaaagcgct tatctactcc ccgtcgtatc ggtattccgg tgtgccaagc 181 agattttcgg ggtcaggttc gggaactgac tttaccctga ccatctcgtc cctccaaccg 241 gaagatttcg ccacgtactt ctgccagcag tacaacagct atcctcacac attcggacaa 301 gggacaaagt tggagattaa acgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct 361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac 421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa 481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact 541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt 601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt

[00492] Sequência da Proteína Definindo a Cadeia Leve de Hu14F11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:218) 1 diqmtqspss lsasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkspkaliys psyrysgvps 61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyfcqq ynsyphtfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

[00493] A Tabela 22 é um gráfico de concordância mostrando a SEQ ID NO. de cada sequência discutida em este Exemplo. Tabela 22

[00494] A Tabela 23 em baixo mostra anticorpos contendo cadeias pesadas e leves da imunoglobulina quiméricas e combinações exemplares das cadeias pesadas e leves da imunoglobulina quiméricas ou humanizadas de comprimento total.Tabela 23

[00495] Os constructos de anticorpos contendo as cadeias pesadas e leves quiméricas de comprimento total são designados em baixo: 01G06 Quimérico (Hu01G06-1) = Cadeia Pesada de Ch01G06 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:176) mais Cadeia Leve de Ch01G06 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:204) 01G06 Quimérico (Hu06C11-1) = Cadeia Pesada de Ch06C11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:192) mais Cadeia Leve de Ch06C11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:212) 14F11 Quimérico (Hu14F11-1) = Cadeia Pesada de Ch14F11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada de Camundongo e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:198) mais Cadeia Leve de Ch14F11 Quimérico de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa de Camundongo e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:216)

[00496] Quinze dos possíveis constructos de anticorpos contendo as cadeias pesadas e leves da imunoglobulina de comprimento total contendo regiões variáveis humanizadas são designados em baixo: Hu01G06-46 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:178) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:206) Hu01G06-52 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:180) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:206) Hu01G06-107 = Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:184) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:210) Hu01G06-108 = Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:188) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:210) Hu01G06-112 = Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:184) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 S43A V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:208) Hu01G06-113 = Cadeia Pesada de Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:188) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 S43A V48I de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:208) Hu01G06-122 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:256) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:208) Hu01G06-127 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-18 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:258) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:264) Hu01G06-135 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:260) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:208) Hu01G06-138 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:262) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 F1 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:208) Hu01G06-146 = Cadeia Pesada de Hu01G06 IGHV1-69 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:262) mais Cadeia Leve de Hu01G06 IGHV1-39 F2 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:264) Hu01G06-27 = Cadeia Pesada de HE LM 06C11 IGHV2-70 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:194) mais Cadeia Leve de Sh06C11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:214) Hu01G06-30 = Cadeia Pesada de Hu06C11 IGHV2-5 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:196) mais Cadeia Leve de Sh06C11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:214) Hu01G06-39 = Cadeia Pesada de Sh14F11 IGHV2-5 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:200) mais Cadeia Leve de Hu14F11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:218) Hu01G06-47 = Cadeia Pesada de Sh14F11-IGHV2-70 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Pesada Humanizada e Região Constante de IgG1 de Humano) (SEQ ID NO:202) mais Cadeia Leve de Hu14F11 IGKV1-16 de Comprimento Total (Região Variável da Cadeia Kappa Humanizada e Região Constante Kappa de Humano) (SEQ ID NO:218) Exemplo 15: Afinidades de Ligação de Anticorpos Monoclonais Anti-GDF15 Humanizados e Quiméricos

[00497] As afinidades de ligação e cinética da ligação de anticorpos quiméricos e humanizados a mFc-rhGDF15 foram medidas por ressonância de plasmon de superfície, usando um instrumento BIAcore® T100 (GE Healthcare, Piscataway, NJ).

[00498] IgGs anti-humanas de cabra (específicas quanto ao fragmento Fc, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) foram imobilizadas em chips sensores CM4 com dextrana carboximetilada por acoplamento de amida, de acordo com um protocolo padrão. As análises foram realizadas a 37 °C usando PBS contendo tensioativo P20 a 0,05 % como tampão de operação. Os anticorpos foram capturados em células de fluxo individuais a um caudal de 10 μL/minuto. O tempo de injeção foi variado para cada anticorpo para originar uma Rmáx entre 30 e 60 RU. O tampão ou mFc-rhGDF15 diluído em tampão de operação foi sequencialmente injetado sobre uma superfície de referência (nenhum anticorpo capturado) e a superfície ativa (anticorpo a ser testado) durante 240 segundos a 60 μL/min. A fase de dissociação foi monitorizada durante até 1200 segundos. A superfície foi depois regenerada com duas injeções de 60 segundos de Glicina-HCl a 10 mM, pH 2,25, a um caudal de 30 μL/minuto. A gama de concentrações de GDF15 testada foi 20 nM a 0,625 nM.

[00499] Os parâmetros cinéticos foram determinados usando a função cinética do software BIAevalutation (GE Healthcare) com subtração de dupla referência. Os parâmetros cinéticos para cada anticorpo, ka (constante da taxa de associação), kd (constante da taxa de dissociação) e KD (constante de dissociação no equilíbrio) foram determinados. Os valores cinéticos de anticorpos monoclonais purificados em mFc-rhGDF15 estão resumidos na Tabela 24.Tabela 24

[00500] Os resultados na Tabela 24 demonstram que os anticorpos quiméricos e cada um dos humanizados têm taxas de associação (ka) rápidas, taxas de dissociação (kd) muito lentas e afinidades (KD) muito elevadas. Em particular, os anticorpos têm afinidades variando de cerca de 65 pM a cerca de 200 pM.

[00501] Os valores cinéticos de 01G06 quimérico (Hu01G06-1), dois anticorpos monoclonais 01G06 humanizados líderes iniciais (Hu01G06-46 e -52), e variantes do anticorpo monoclonal 01G03 humanizado otimizadas quanto à sequência Hu01G06-100 até -114 (em sobrenadante) em mFc-rhGDF15 estão resumidos na Tabela 25.Tabela 25

[00502] Os resu otimizados quanto tados na Tabela 25 demonstram que os an à sequência, Hu01G06-100 até -11 ticorpos 4, têm afinidades de ligação variando de cerca de 89 pM a cerca de 160 pM.

[00503] As afinidades de ligação e cinética de ligação de mFc- rhGDF15 com variantes de anticorpo monoclonal pesados com 14F11 quimérico (Hu14F11-1), 14F11 leve quimérico com 06C11 pesado quimérico (Hu14F11-23), e 06C11 leve quimérico com 14F11 pesado quimérico (Hu14F11-24) (em sobrenadante) foram medidas usando interferometria de biocamada (BLI) em um instrumento Octet™ QK (ForteBio, Inc., Menlo Park, CA). A análise de Octeto foi realizada a 30°C usando Tampão 1X Kinetics (ForteBio, Inc.) como tampão de ensaio. Biossensores de Captura de Fc de IgG anti-humana (AHC) (ForteBio, Inc.) foram usados para capturar anticorpos humanos nos sensores. Os sensores foram saturados em tampão de ensaio durante pelo 300 segundos antes do ensaio. Os anticorpos foram carregados em sensores por imersão dos sensores em solução de sobrenadante de anticorpo durante 220 segundos, o que resultou tipicamente em níveis de captura de 1,5-2 nm. A linha de base foi estabelecida por imersão dos sensores em tampão de ensaio 1x durante 200 segundos. De seguida, a associação foi monitorizada durante 220 segundos em proteína mFc-rhGDF15 a 400 nM, e a dissociação foi seguida durante 600 segundos somente em tampão.

[00504] Os parâmetros cinéticos para Hu14F11-1, Hu14F11-23, e Hu14F11-24 foram determinados usando a função cinética do Software de Análise ForteBio Versão 7.0. Os parâmetros cinéticos do anticorpo, ka, kd, e KD foram determinados.

[00505] Os valores cinéticos de variantes de anticorpo monoclonal pesado Hu14F11-1, Hu14F11-23, e Hu14F11-24 (em sobrenadante) em mFc-rhGDF15 estão resumidos na Tabela 26.Tabela 26

[00506] Os resultados na Tabela 26 demonstram que Hu14F11-23 e Hu14F11-24 (i.e., anticorpos que consistem em uma cadeia (pesada ou leve) de 06C11 quimérico misturada com uma cadeia (pesada ou leve) de 14F11 quimérico) retêm ligação a GDF15. Em particular, estes anticorpos têm elevadas afinidades variando de cerca de 180 pM a cerca de 310 pM.

Exemplo 16: Afinidades de Ligação de Anticorpos Monoclonais Anti-GDF15 Maturados por Afinidade

[00507] As afinidades de ligação e cinética da ligação de anticorpos quiméricos e humanizados a mFc-rhGDF15, rhGDF15 clivado, GDF15 de camundongo recombinante maduro com Fc de coelho (rFc- rmGDF15), e GDF15 de macaco cinomolgo recombinante maduro com Fc de camundongo (mFc-rcGDF15) foram medidas por ressonância de plasmon de superfície, usando um instrumento BIAcore® T100 (GE Healthcare, Piscataway, NJ).

[00508] IgGs anti-humanas de cabra (específicas quanto ao fragmento Fc, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) foram imobilizadas em chips sensores CM4 com dextrana carboximetilada por acoplamento de amida, de acordo com um protocolo padrão. As análises foram realizadas a 37°C usando PBS contendo tensioativo P20 a 0,05 % como tampão de operação. Os anticorpos foram capturados em células de fluxo individuais a um caudal de 10 μL/minuto. O tempo de injeção foi variado para cada anticorpo para originar uma Rmáx entre 30 e 60 RU. O tampão, mFc-rhGDF15, rhGDF15 clivado, rFc-rmGDF15, ou mFc-rcGDF15 diluído em tampão de operação foi sequencialmente injetado sobre uma superfície de referência (nenhum anticorpo capturado) e a superfície ativa (anticorpo a ser testado) durante 240 segundos a 60 μL/min. A fase de dissociação foi monitorizada durante até 1500 segundos. A superfície foi depois regenerada com duas injeções de 60 segundos de Glicina- HCl a 10 mM, pH 2,25, a um caudal de 30 μL/minuto. A gama de concentrações de GDF15 para cada proteína GDF15 foi 5 nM a 0,3125 nM (diluições de duas vezes).

[00509] Os parâmetros cinéticos foram determinados usando a função cinética do software BIAevalutation (GE Healthcare) com subtração de dupla referência. Os parâmetros cinéticos para cada anticorpo, ka (constante da taxa de associação), kd (constante da taxa de dissociação) e KD (constante de dissociação no equilíbrio) foram determinados. Os valores cinéticos de anticorpos monoclonais purificados em mFc-rhGDF15, GDF15 de humano maduro, rFc- rmGDF15, e mFc-rcGDF15 estão resumidos na Tabela 27.Tabela 27

[00510] Os resultados na Tabela 27 demonstram que os anticorpos quiméricos e cada um dos humanizados têm taxas de associação (ka) rápidas, taxas de dissociação (kd) muito lentas e afinidades (KD) muito elevadas. Em particular, os anticorpos têm afinidades variando de menos do que 5 pM (p.ex., cerca de 4,5 pM) a cerca de 65 pM.

Exemplo 17: Reversão da Caquexia em um Modelo de Xenoenxerto de Fibrossarcoma HT-1080

[00511] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) pelos anticorpos 01G06, 06C11, 14F11 humanizados em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080. Células HT-1080 foram cultivadas em cultura a 37 °C e subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos ICR-SCID com 8 semanas de idade como descrito acima no Exemplo 10. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram aleatoriamente divididos em grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de murino, 01G06, 06C11, 14F11, e suas respectivas versões humanizadas a 2 mg/kg. O tratamento foi administrado uma vez por dia por injeção intraperitoneal. O tratamento com anticorpos com 01G06, Hu01G06-46 e Hu01G06-52 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de 100 % (p<0,001) (FIG. 23). A análise estatística foi realizada usando ANOVA. Os resultados para a reversão do peso corporal por dia no modelo HT- 1080 são mostrados na FIG. 23 e Tabela 28, respectivamente.Tabela 28

[00512] Os dados na FIG. 23 e Tabela 28 indicaram que os anticorpos 01G06, Hu01G06-46 e Hu01G06-52 conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

[00513] O tratamento com anticorpos com 06C11, Hu06C11-27, e Hu06C11-30 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 24). A análise estatística foi realizada usando ANOVA. Os resultados para a reversão do peso corporal no modelo HT-1080 são mostrados na FIG. 24 e Tabela 29.Tabela 29

[00514] Os dados na FIG. 24 e Tabela 29 indicam que os anticorpos 06C11, Hu06C11-27, e Hu06C11-30 conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

[00515] O tratamento com anticorpos com 14F11, Hu14F11-39, e Hu14F11-47 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 25). A análise estatística foi realizada usando ANOVA. Os resultados para a reversão do peso corporal no modelo HT-1080 são mostrados na FIG. 25 e Tabela 30.Tabela 30

[00516] Os dados na FIG. 25 e Tabela 30 indicaram que os anticorpos 14F11, Hu14F11-39, e Hu14F11-47 conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

[00517] O tratamento com anticorpos com anticorpos 01G06 humanizados (i.e., anticorpos Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 e Hu01G06-146) resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 26). A análise estatística foi realizada usando ANOVA. Tratamento com IgG de humano (hIgG) foi usado como um controle. Os resultados para a reversão dos pesos corporais no modelo HT- 1080 são mostrados na FIG. 26 e Tabela 31.Tabela 31

[00518] Os dados na FIG. 26 e Tabela 31 indicaram que os anticorpos anti-GDF15 humanizados Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 e Hu01G06-146 conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

Exemplo 18: Reversão da Caquexia em um Modelo Induzido por mFc-rhGDF15

[00519] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) por anticorpos 01G06 humanizados (i.e., anticorpo Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06- 135, Hu01G06-138, ou Hu01G06-146) em um modelo de caquexia induzido por mFc-rhGDF15. mFc-rhGDF15 (1 μg/g) foi subcutaneamente administrada no flanco de camundongos ICR-SCID com 8 semanas de idade. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram aleatoriamente divididos em seis grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de humano (hIgG), Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 ou Hu01G06-146 a 2 mg/kg. O tratamento foi administrado uma vez por injeção intraperitoneal. O tratamento com o anticorpo Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 ou Hu01G06-146 resultou em aumento do peso corporal em relação ao peso inicial de cerca de 100 % (p<0,001) (FIG. 27 e Tabela 32).Tabela 32

[00520] Os dados na FIG. 27 e Tabela 32 indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter a caquexia em um modelo de camundongo induzido por mFc-rhGDF15 (i.e., um modelo de camundongo não transportando tumores).

[00521] Estes resultados indicam que os anticorpos anti-GDF15 humanizados conseguem reverter a caquexia em um modelo de caquexia induzido por mFc-rhGDF15.

Exemplo 19: Reversão de Resposta à Dose da Caquexia em um Modelo de Xenoenxerto de Fibrossarcoma HT-1080

[00522] Este Exemplo demonstra a reversão de resposta à dose da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal) pelos anticorpos Hu01G06-127 e Hu01G06-135 humanizados em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080. Células HT-1080 foram cultivadas em cultura a 37 °C e subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos ICR-SCID com 8 semanas de idade como descrito acima no Exemplo 10. O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 93 %, os camundongos foram aleatoriamente divididos em grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de humano (hIgG; 20 mg/kg), Hu01G06-127 (20 mg/kg, 2 mg/kg, ou 0,2 mg/kg) e Hu01G06-135 (20 mg/kg, 2 mg/kg, ou 0,2 mg/kg). O tratamento foi administrado uma vez por dia por injeção intravenosa. O tratamento com Hu01G06-127 e Hu01G06-135 a 20 mg/kg resultou em aumento do peso corporal acima do peso inicial de 108 % (p<0,001) (FIG. 28). O tratamento com Hu01G06-127 e Hu01G06-135 a 2 mg/kg resultou em diminuição do peso corporal limitada em comparação com controle (hIgG) a partir do peso inicial de 88-85 % (p<0,001) (FIG. 28). A análise estatística foi realizada usando ANOVA. Os resultados para mudanças do peso corporal no final do estudo no modelo HT-1080 são mostrados na FIG. 28 e Tabela 33.Tabela 33

[00523] Os dados na FIG. 28 e 1 Fabela 33 indicaram que os anticorpos Hu01G06-127 e Hu01G06-135 conseguem reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080 de um modo dependente da dose.

Exemplo 20: Reversão da perda muscular e gordura em um Modelo de Tumor de Xenoenxerto HT-1080

[00524] Este Exemplo demonstra a reversão da caquexia (como indicado pela perda de peso corporal, perda de massa muscular e perda de massa gorda) pelo anticorpo 01G06 em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080. Células HT-1080 foram cultivadas em cultura a 37oC em uma atmosfera contendo CO2 a 5% usando Meio Essencial Mínimo de Eagle (ATCC, No. do Catálogo 302003) contendo FBS a 10%. As células subcutaneamente inoculadas no flanco de camundongos ICR-SCID fêmeas com 8 semanas de idade com 5 x 106 células por camundongo em matrigel a 50%. Uma coorte de camundongos ICR-SCID fêmeas de 8 semanas de idade com o mesmo peso corporal foi selecionada para inoculação subcutânea no flanco com matrigel, como um braço de controle não tumoral (FICTÍCIO). O peso corporal foi medido diariamente. Quando o peso corporal alcançou 91 % nos camundongos transportando tumores, os camundongos foram aleatoriamente divididos em dois grupos de dez camundongos cada um. Cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: controle de IgG de humano (hIgG) ou Hu01G06-127 10 mg/kg ao dia 1, dia 3 e dia 6. O tratamento foi administrado por injeção intraperitoneal. O tratamento com o anticorpo Hu01G06-127 resultou em aumento do peso corporal até 105 % do peso inicial em comparação com camundongos de controle não transportando tumores (FICTÍCIO; p<0,001) (FIG. 29A e Tabela 34).Tabela 34

[00525] Os dados na FIG. 29A e Tabela 34 indicam que o anticorpo anti-GDF15 divulgado consegue reverter a caquexia em um modelo de xenoenxerto de fibrossarcoma HT-1080.

[00526] Em esta experiência, um grupo de dez camundongos foi sacrificado aquando da dosagem (linha de base ou perda de peso corporal a 91 %, sem tratamento) e no final do estudo (oito dias pós- dose, ou hIgG ou Hu01G06-127 bem como camundongos de controle não tumoral FICTÍCIO). A massa gonadal e os músculos gastrocnêmios foram cirurgicamente removidos e pesados. Como mostrado na FIG. 29B foi observada perda de massa gorda gonadal significativa sete dias pós-dose com hIgG, mas não no grupo tratado com anticorpo Hu01G06-127 em comparação com controle da linha de base (91 % de perda de peso corporal). Além do mais, o tratamento com Hu01G06-127 não só preveniu perda de gordura adicional (em comparação com grupo da linha de base), mas foi também capaz de restaurar os níveis normais de gordura gonadal (em comparação com controle não tumoral FICTÍCIO) (FIG. 29B). Adicionalmente foi observada perda de massa muscular gastrocnêmia significativa sete dias pós-dose com hIgG, mas não no grupo tratado com anticorpo Hu01G06-127 em comparação com controle da linha de base (91 % de perda de peso corporal) (FIG. 29C). O tratamento com Hu01G06- 127 não só preveniu perda muscular adicional (comparar com grupo da linha de base), mas foi também capaz de restaurar os níveis normais de músculo gastrocnêmio (em comparação com controle não tumoral FICTÍCIO) (FIG. 29C).

[00527] Estes resultados indicam que os anticorpos anti-GDF15 divulgados conseguem reverter completamente a caquexia medida pela perda de massa muscular, perda de gordura e perda de peso involuntária em um modelo de tumor de xenoenxerto HT-1080.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

[00528] A divulgação inteira de cada um dos documentos de patentes e artigos científicos referidos aqui é incorporada por referência para todos os propósitos.

EQUIVALENTES

[00529] A invenção pode ser incorporada em outras formas específicas sem divergir do seu espírito ou suas características essenciais. As formas de realização anteriores são, portanto, para serem consideradas em todos os aspetos ilustrativas ao invés de limitantes da invenção descrita aqui. O escopo da invenção é assim indicado pelas reivindicações anexas ao invés de pela descrição anterior, e todas as mudanças que provenham do significado e do alcance de equivalência das reivindicações se destinam a estar englobadas nele.

Claims (11)

1. Anticorpo isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga a GDF15 de humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina selecionadas do grupo consistindo em: (a) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:250, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92; (b) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:248, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:254; (c) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:40, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:76; (d) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90; (e) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:90; (f) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:246, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92; (g) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:252, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:92; e (h) uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:252, e uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:254.

2. Anticorpo isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga a GDF15 de humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada da imunoglobulina e uma cadeia leve da imunoglobulina selecionadas do grupo consistindo em: (a) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:260, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208; (b) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:258, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:264; (c) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:176, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:204; (d) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:178, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:206; (e) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:180, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:206; (f) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:256, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208; (g) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:262, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208; e (h) uma cadeia pesada da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:262, e uma cadeia leve da imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:264.

3. Método de produção de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo mesmo como definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) cultivo da célula hospedeira sob condições tais que a célula hospedeira expresse um polipeptídeo ou polipeptídeos compreendendo a cadeia pesada da imunoglobulina e a cadeia leve da imunoglobulina, produzindo deste modo o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo; e (b) purificação do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo.

4. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que é um ou mais dentre: (a) um anticorpo monoclonal; (b) um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado, ou um anticorpo humano; (c) um anticorpo do isotipo IgG1, IgG2 ou IgG3 humano; (d) um anticorpo biespecífico; ou (e) um Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv, um anticorpo de cadeia única, um minibody ou um diabody.

5. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 4, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de caquexia e/ou sarcopenia em um mamífero.

6. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o uso compreende adicionalmente administração de um segundo agente ao mamífero com sua necessidade, em que o segundo agente é selecionado do grupo consistindo em um inibidor de Ativina-A, um inibidor de ActRIIB, um inibidor de IL-6, um inibidor de IL-6R, um inibidor dos peptídeos da melanocortina, um inibidor dos recpetores da melanocortina, uma grelina, um mimético da grelina, um agonista de GHS-R1a, um SARM, um inibidor de TNFα, um inibidor de IL-1α, um inibidor da miostatina, um bloqueador beta e um agente anticancerígeno.

7. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, ou 4, caracterizado pelo fato de que é para uso na (i) inibição da perda de massa muscular associada a uma doença subjacente, opcionalmente em que a perda de massa muscular é acompanhada por uma perda de massa gorda; (ii) inibição ou redução da perda de peso involuntária em um mamífero; (iii) inibição da perda de massa dos órgãos associada a uma doença subjacente, opcionalmente em que o órgão é rim, fígado, coração ou baço, ainda opcionalmente em que a perda de massa dos órgãos é acompanhada por uma perda de massa muscular, uma perda de massa gorda ou perda de peso involuntária; ou (iv) aumento da dose tolerada máxima de um agente anticancerígeno em um mamífero, opcionalmente em que o agente anticancerígeno causa caquexia no mamífero, ainda opcionalmente em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é administrado em combinação com o agente anticancerígeno; em que a doença subjacente em (i) e (iii) é opcionalmente selecionada do grupo que consiste em câncer, insuficiência cardíaca crônica, Insuficiência renal crônica, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepse e tuberculose.

8. Uso de um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou 6, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de uma composição farmacêutica para tratar cachexia e/ou sarcopenia em um mamífero.

9. Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a composição é para administração com um segundo agente selecionado do grupo consistindo em um inibidor de Ativina-A, um inibidor de ActRIIB, um inibidor de IL-6, um inibidor de IL-6R, um inibidor dos peptídeos da melanocortina, um inibidor dos receptores da melanocortina, uma grelina, um mimético da grelina, um agonista de GHS-R1a, um SARM, um inibidor de TNFα, um inibidor de IL-1α, um inibidor da miostatina, um bloqueador beta e um agente anticancerígeno.

10. Uso de um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 4, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de uma composição farmacêutica para: (i) inibição da perda de massa muscular associada a uma doença subjacente, opcionalmente em que a perda de massa muscular é acompanhada por uma perda de massa gorda; (ii) inibição ou redução da perda de peso involuntária em um mamífero; (iii) inibição da perda de massa dos órgãos associada a uma doença subjacente, opcionalmente em que o órgão é rim, fígado, coração ou baço, ainda opcionalmente em que a perda de massa dos órgãos é acompanhada por uma perda de massa muscular, uma perda de massa gorda ou perda de peso involuntária; ou (iv) aumento da dose tolerada máxima de um agente anticancerígeno em um mamífero, opcionalmente em que o agente anticancerígeno causa caquexia no mamífero, ainda opcionalmente em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é administrado em combinação com o agente anticancerígeno; em que a doença subjacente em (i) e (iii) é opcionalmente selecionada do grupo que consiste em câncer, insuficiência cardíaca crônica, insuficiência renal crônica, COPD, AIDS, esclerose múltipla, artrite reumatoide, sepse e tuberculose.

11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 4, e um veículo farmaceuticamente aceitável do mesmo.