EA038645B1 - Антитела к gdf15 - Google Patents

Антитела к gdf15 Download PDF

Info

Publication number
EA038645B1
EA038645B1 EA201591198A EA201591198A EA038645B1 EA 038645 B1 EA038645 B1 EA 038645B1 EA 201591198 A EA201591198 A EA 201591198A EA 201591198 A EA201591198 A EA 201591198A EA 038645 B1 EA038645 B1 EA 038645B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
variable region
chain variable
Prior art date
Application number
EA201591198A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201591198A1 (ru
Inventor
Лорена Лернер
Сандра Эббот
Айлинь Бай
Тин Чен
Мария Изабель Чиу
Цин Лю
Лаура Полинг
Няньцзюнь Тао
Солли Вейлер
Чжиган Вэн
Уилльям М. Уинстон
Джено Гьюрис
Original Assignee
Авео Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Авео Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Авео Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201591198A1 publication Critical patent/EA201591198A1/ru
Publication of EA038645B1 publication Critical patent/EA038645B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Раскрыты моноклональные антитела, которые связываются с GDF15 человека и ингибируют его активность. Антитела можно применять для лечения потери веса тела, в том числе кахексии, связанной со сверхэкспрессией GDF15 человека.

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка заявляет право и приоритет по предварительной заявке на патент США № 61/827325, поданной 24 мая 2013 г., и предварительной заявке на патент США № 61/745508, поданной 21 декабря
2012 г., полное раскрытие каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к области молекулярной биологии, иммунологии, к кахексии и нарушениям, подобным кахексии, и к онкологии. Более конкретно, оно относится к области терапевтических антител.
Уровень техники настоящего изобретения
Непреднамеренная потеря веса может быть классифицирована по этиологии на три основные формы, включающие кахексию, саркопению и голодание. Кахексия представляет собой истощающий метаболический синдром, связанный с многочисленными заболеваниями, включая рак, AIDS, хроническую сердечную недостаточность (также известную как застойная сердечная недостаточность), хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), хроническое заболевание почек, туберкулез, сепсис и другие формы системного воспаления. Кахексия варьирует в своих проявлениях, но в целом включает непреднамеренную потерю массы скелетных мышц и некоторые формы основного заболевания (Evans et al. (2008) Clin. Nutr. 27:793-799). Кахексия представляет собой состояние истощения, включающее непреднамеренную потерю веса, и может быть связана с системным воспалением и/или острым воспалительным ответом. Thomas (2007) CLIN. NUTRITION 26:389-399. Потеря массы жировой ткани, а также массы тканей помимо жировой, такой как мышечная масса, часто является заметным клиническим признаком кахексии. Во многих, но не во всех случаях кахексия протекает через стадии, которые были определены как прекахексия, кахексия и рефрактерная кахексия (Fearon et al. (2011) Lancet Onc. 12:489-495). Два разных, но иногда перекрывающихся процесса могут стимулировать развитие и прогрессирование кахексии: (а) метаболические процессы, которые действуют непосредственно на мышцы, уменьшая их массу и функцию, и (b) уменьшенное потребление пищи, что приводит к потере как жира, так и мышц (Tsai et al. (2012) J. Cachexia Sarcopenia Muscle 3:239-243).
Несмотря на то, что кахексия представляет собой сложный и не до конца понятный синдром, очевидно, что GDF15 (также известный как MIC-1, PLAB, PDF и NAG-1), член суперсемейства TGF-β, является важным медиатором кахексии при различных заболеваниях (Tsai et al., выше). По меньшей мере некоторые опухоли сверхэкспрессируют и секретируют GDF15, и повышенный уровень GDF15 в сыворотке связывают с различными видами рака (Johnen et al. (2007) Nat. Med. 13: 1333-1340; Bauskin et al. (2006) Cancer Res. 66:4983-4986). Моноклональные антитела к GDF15 рассматривают в качестве потенциальных терапевтических средств против кахексии. См., например, патент США № 8192735.
Потеря веса в результате кахексии связана с плохим прогнозом при различных заболеваниях (Evans et al., выше), и кахексия и ее последствия считаются непосредственной причиной смерти приблизительно в 20% случаев смерти от рака (Tisdale (2002) Nat. Rev. Cancer 2: 862-871). Регрессия кахексии нечасто вызывается корректировкой питания, и в настоящее время этот синдром редко лечат с помощью лекарственной терапии (Evans et al., выше).
Саркопения представляет собой клиническое состояние, связанное с кахексией, которое характеризуется потерей массы скелетных мышц и мышечной силы. Снижение мышечной массы может привести к нарушению функции с потерей силы, повышенной вероятностью падения и потери возможности самостоятельного передвижения. Дыхательная функция также может быть нарушаться со снижением жизненной емкости. Во время метаболического стресса мышечный белок быстро мобилизуется для обеспечения иммунной системы, печени и кишечника аминокислотами, в особенности, глутамином. Саркопения часто является заболеванием пожилых людей, однако ее развитие также может быть связано с отсутствием нагрузки на мышцы и недоеданием и может совпадать с кахексией. Саркопения может быть диагностирована на основе наблюдений функциональных признаков, таких как пониженный вес мышц и пониженная скорость ходьбы. См., например, Muscaritoli et al. (2010) CLIN. NUTRITION 29:154-159.
Голодание, как правило, приводит к потере жировой массы и массы помимо жировой в организме из-за неполноценного рациона и/или усвоения пищи (Thomas (2007) выше). Эффекты голодания часто обращаются вспять посредством улучшения рациона и питания, например, количества белка, усвоения.
Антитела природного происхождения представляют собой мультимерные белки, содержащие четыре полипептидные цепи (фиг. 1). Две из полипептидных цепей называются тяжелыми цепями (Н-цепи), а две из полипептидных цепей называются легкими цепями (L-цепи). Тяжелые и легкие цепи иммуноглобулина соединены межцепочечной дисульфидной связью. Тяжелые цепи иммуноглобулина соединены межцепочечными дисульфидными связями. Легкая цепь состоит из одной вариабельной области (VL на фиг. 1) и одной константной области (CL на фиг. 1). Тяжелая цепь состоит из одной вариабельной области (VH на фиг. 1) и по меньшей мере трех константных областей (CH1, CH2 и CH3 на фиг. 1). Вариабельные области определяют специфичность антитела. Каждая вариабельная область содержит три гипервариабельных участка, также известных как участки, определяющие комплементарность (CDR), фланкированных четырьмя относительно консервативными каркасными областями (FR). Три CDR, называемые CDRj,
- 1 038645
CDR2 и CDR3, способствуют специфичности связывания антитела. Антитела природного происхождения применяли в качестве исходного материала для сконструированных антител, таких как химерные антитела и гуманизированные антитела.
Существует значительная неудовлетворенная потребность в эффективных терапевтических средствах для лечения кахексии и саркопении, включая моноклональные антитела, направленные на GDF15. Такие терапевтические средства потенциально играют важную роль при лечении различных видов рака и других заболеваний, угрожающих жизни.
Краткое описание настоящего изобретения
Настоящее изобретение отчасти основано на открытии семейства антител, которые специфически связываются с GDF15 человека (hGDF15). Антитела содержат hGDF15-связывающие участки на основе CDR антител. Антитела могут быть применены в качестве терапевтических средств. Для применения в качестве терапевтических средств антитела конструируют, например гуманизируют, для уменьшения или устранения иммунного ответа при введении пациенту-человеку.
Раскрытые антитела предотвращают или ингибируют активность (т.е. нейтрализуют) hGDF15. При введении млекопитающему антитела могут ингибировать потерю мышечной массы, например, потерю мышечной массы, связанную с основным заболеванием. Основное заболевание может быть выбрано из группы, состоящей из рака, хронической сердечной недостаточности, хронического заболевания почек, COPD, AIDS, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, сепсиса и туберкулеза. В некоторых вариантах осуществления потеря мышечной массы может сопровождаться потерей массы жировой ткани. Раскрытые антитела также могут быть применены для ингибирования непреднамеренной потери веса у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления раскрытые антитела могут быть также применены для ингибирования потери массы органа. Кроме того, раскрыт способ лечения кахексии и/или саркопении у млекопитающего, включающий введение эффективного количества одного из по меньшей мере одного из описанных антител млекопитающему, которое нуждается в этом.
Также раскрыт способ установления устойчивого уровня зрелого рекомбинантного GDF15 человека (rhGDF15) в плазме или сыворотке у млекопитающего, включающий введение слитого белка rhGDF15-Fc иммуноглобулина (Fc-rhGDF15) млекопитающему. Fc-rhGDF15 может представлять собой Fc мыши и зрелого рекомбинантного GDF15 человека (mFc-rhGDF15). В некоторых вариантах осуществления млекопитающее является грызуном, например мышью.
В другом аспекте раскрыт способ лечения ожирения у млекопитающего, например, человека, включающий введение терапевтически эффективного количества Fc-rhGDF15, например, Fc человека и зрелого рекомбинантного GDF15 человека (hFc-rhGDF15) млекопитающему, которое нуждается в этом. Также раскрыты фармацевтические композиции, содержащие слитый белок Fc-rhGDF15 и фармацевтически приемлемый носитель.
Эти и другие аспекты и преимущества настоящего изобретения станут очевидными при рассмотрении следующих фигур, подробного описания и формулы изобретения. Применяемое в данном документе включая означает без ограничения, а приведенные примеры не являются неограничивающими. Применяемое в данном документе антитело 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 означает антитело 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 или их гуманизированные варианты.
Описание графических материалов
Настоящее изобретение может быть более полно понято с учетом следующих графических материалов.
На фиг. 1 (известный уровень техники) представлено схематическое изображение типичного антитела природного происхождения.
На фиг. 2 представлен график с результатами эксперимента по измерению уровней hGDF15 в сыворотке у ранее не подвергавшихся воздействию мышей или мышей, несущих ксенотрансплантаты опухолей человека (Chago, RPMI7951, РС3, TOV21G, НТ-1080, K-562, LS1034), как определено с помощью анализа ELISA.
На фиг. 3 представлен график с результатами эксперимента по определению фармакокинетических параметров (PK) в плазме для отщепленного rhGDF15, введенного путем подкожной инъекции (1 мкг/г) ранее не подвергавшимся воздействию мышам ICR-SCID, как определено с помощью ELISA.
На фиг. 4 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по измерению кахектической активности отщепленного белка rhGDF 15 () и отрицательного контроля (PBS (·)) в отношении индукции потерю веса тела у иммунонекомпетентных мышей, ICR-SCID. Стрелками указаны подкожные дозы 1 мкг/г rhGDF15.
На фиг. 5А и 5В представлены графики, обобщающие результаты эксперимента по измерению кахектической активности mFc-rhGDF15 (Fc мыши, слитый с аминоконцом зрелого рекомбинантного GDF15 человека; ), rFc-rmGDF15 (Fc кролика, слитый с аминоконцом зрелого рекомбинантного GDF15 мыши; А) и отрицательного контроля (PBS; ·) в отношении индукции потери веса тела у иммунонекомпетентных мышей Balb/C (фиг. 5А) и иммунонекомпетентных мышей CB17-SCID (фиг. 5В). Стрелки указывают подкожные дозы 1 мкг/г рекомбинантного белка.
На фиг. 6А-6Е представлены графики, обобщающие результаты эксперимента для демонстрации
- 2 038645 кахектической активности mFc-rhGDF15 (и)и отрицательного контроля (PBS; ·) индуцировать потерю веса тела у иммунонекомпетентных мышей ICR-SCID (фиг. 6А; стрелки указывают подкожные дозы mFc-rhGDF15 1 мкг/г); индуцировать потерю жировой ткани или массы жировой ткани гонад (фиг. 6В); индуцировать потерю мышечной массы икроножной мышцы (фиг. 6С; икроножная масса) и увеличивать экспрессию мРНК молекулярных маркеров деградации мышц (mMuRF1 (фиг. 6D) и атрогина мыши (фиг. 6Е)).
На фиг. 7 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по измерению кахектической активности mFc-rhGDF15 () и отрицательного контроля (PBS; ·) в отношении индукции потери веса тела у иммунонекомпетентных голых мышей Balb/C. Стрелками указаны подкожные дозы 1,33 мкг/г mFc-rhGDF15.
На фиг. 8 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по измерению уровней mFcrhGDF15 в сыворотке у мышей, которым вводили дозу рекомбинантного белка. Присутствие mFcrhGDF15 определяли с помощью вестерн-блоттинга. Две положительные полосы, соответствующие mFcrhGDF15 и rhGDF15 (в соответствии с соответствующим размером молекул) количественно анализировали с помощью прибора Licor. Рассчитывали процентное соотношение высвобождаемого rhGDF 15 и mFc-rhGDF15.
На фиг. 9А представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению кахектической активности mFc-rhGDF 15 (0,1 мкг/г (), 0,01 мкг/г (Δ)) и отрицательного контроля (mIgG; 0,1 мкг/г (·)) в отношении индукции потери веса тела у иммунонекомпетентных мышей ICR-SCID. Стрелкой указана интраперитонеальная доза рекомбинантного белка. На фиг. 9В представлен график, показывающий общий уровень rhGDF15 в плазме у мышей, которым вводили mFc-rhGDF 15 (0,1 мкг/г, 0,01 мкг/г ()) через пять дней после введения дозы, как определено с помощью ELISA.
На фиг. 10 представлено выравнивание последовательности, демонстрирующее полную аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина для антител 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 и 17В11. Аминокислотные последовательности для каждого антитела выровнены друг относительно друга, и CDRi, CDR2 и CDR3 выделены рамками. Последовательности за пределами рамок представляют собой последовательности каркасных участков (FR). Определение положений при выравнивании (гэпы) основано на нумерации по Kabat, а не на алгоритме выравнивания, таком как Clustal. Нумерация над последовательностями представляет собой нумерацию по Kabat.
На фиг. 11 представлено выравнивание последовательности, демонстрирующее последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 для каждой из последовательностей вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина на фиг. 10.
На фиг. 12 представлено выравнивание последовательности, демонстрирующее полную аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина для антител 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 и 17В11. Аминокислотные последовательности для каждого антитела выровнены друг относительно друга, и CDR1, CDR2 и CDR3 приведены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой последовательности каркасных участков (FR). Определение положений при выравнивании (гэпы) основано на нумерации по Kabat, а не на алгоритме выравнивания, таком как Clustal. Нумерация над последовательностями представляет собой нумерацию по Kabat.
На фиг. 13 представлено выравнивание последовательностей, демонстрирующее последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 для каждой из последовательностей вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина на фиг. 12.
На фиг. 14 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по измерению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 01G06 (), 03G05 (A), 04F08 (▼), 06С11 (о), 14F11 (/ )и 17В11 (□) и контрольного IgG мыши (·; mIgG) в дозе 10 мг/кг в модели кахексии с использованием mFc-rhGDF15 на мышах ICR-SCID. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 15 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по измерению ингибиторной активности в отношении кахексии 01G06 (a), 03G05 (О), 04F08 (V),06C11(ei), 08G01 (), 14F11 (♦) и 17В11 (*) антител к GDF15 и контрольного IgG мыши (·; mIgG) в дозе 10 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы с опухоли НТ-1080 на мышах ICR-SCID. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела каждые три дня.
На фиг. 16А-16Е представлены графики, обобщающие результаты эксперимента для демонстрации антикахектической активности антитела к GDF15 01G06 () в дозе 10 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на иммунонекомпетентных мышах (ICR-SCID), несущих опухоль НТ-1080. Обработка антителом 01G06 обращала вспять потерю веса тела (фиг. 16А), приводила к значительному увеличению потребления пищи в течение до трех дней после введения дозы (фиг. 16В), индуцировала прирост массы жировой ткани гонад (фиг. 16С), индуцировала прирост мышечной массы икроножной мышцы (фиг. 16D) и снижала экспрессию мРНК молекулярных маркеров деградации мышц (mMuRF1 и атрогина мыши (фиг. 16Е)) по сравнению с отрицательным контролем (IgG мыши (·)). На фиг. 16А стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 17А-17В представлены графики, обобщающие результаты эксперимента для демонстрации антикахектической активности антитела к GDF15 01G06 () в дозе 2 мг/кг в ксенотрансплантатной моде- 3 038645 ли фибросаркомы на иммунонекомпетентных мышах (ICR-SCID), несущих опухоль НТ-1080. Обработка антителом 01G06 обращала вспять потерю веса тела по сравнению с IgG мыши (·) (фиг. 17А); и индуцировала прирост массы органа (печени, сердца, селезенки, почки); и индуцировала прирост массы ткани (ткани гонад и икроножной мышцы) (фиг. 17В) по сравнению с отрицательным контролем (IgG мыши) и исходным уровнем (день 1). На фиг. 17А стрелками указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 18 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 01G06 (), 03G05 (a), 04F08(X), 06С11(4), 08G01 (о), 14F11 и 17В11 (Δ) и контрольного IgG мыши (·) в дозе 10 мг/кг в ксенотрансплантатной модели лейкоза на иммунонекомпетентных мышах (CB17SCRFMF), несущих опухоль K-562. Стрелками указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 19 представлено выравнивание последовательности, демонстрирующее аминокислотную последовательность полной вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина химерного 01G06, обозначенной как химерное Ch01G06; вариабельных областей тяжелых цепей гуманизированного 01G06, обозначенных как Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV169 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1 и Hu01G06 IGHV1-69 F2; химерного 06С11, обозначенного как химерное Ch06C11; вариабельных областей тяжелой цепи гуманизированного 06С11, обозначенных как НЕ LM 06C11 IGHV2-70 и Hu06C11 IGHV2-5; химерного 14F11, обозначенного как химерное Ch14F11, и вариабельных областей тяжелой цепи гуманизированного 14F11, обозначенных как Sh14F11 IGHV2-5 и Sh14F11 IGHV2-70. Аминокислотные последовательности для каждого антитела выровнены друг относительно друга, и CDR1, CDR2 и CDR3 приведены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой последовательности каркасных участков (FR). Определение положений при выравнивании (гэпы) основано на нумерации по Kabat, а не на алгоритме выравнивания, таком как Clustal. Нумерация над последовательностями представляет собой нумерацию по Kabat.
На фиг. 20 представлено выравнивание последовательности, демонстрирующее последовательности CDRi, CDR2 и CDR3 для каждой из последовательностей вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина на фиг. 19.
На фиг. 21 представлено выравнивание последовательности, демонстрирующее аминокислотную последовательность полной вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина химерного 01G06, обозначенной как химерное Ch01G06; вариабельных областей легкой цепи гуманизированного 01G06, обозначенных как Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1 и Hu01G06 IGKV1-39 F2; химерного 06С11, обозначенного как химерное Ch06C11; вариабельной области легкой цепи гуманизированного 06С11, обозначенной как Sh06C11 IGKV1-16; химерного 14F11, обозначенного как химерное Ch14F11, и вариабельной области легкой цепи гуманизированного 14F11, обозначенной как Hu14F11 IGKV1-16. Аминокислотные последовательности для каждого антитела выровнены друг относительно друга, и CDR1, CDR2 и CDR3 приведены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой последовательности каркасных участков (FR). Определение положений при выравнивании (гэпы) основано на нумерации по Kabat, а не на алгоритме выравнивания, таком как Clustal. Нумерация над последовательностями представляет собой нумерацию по Kabat.
На фиг. 22 представлено выравнивание последовательностей, демонстрирующее последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 для каждой из последовательностей вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина на фиг. 21.
На фиг. 23 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 01G06 (), Hu01G06-46 (А)и Hu01G06-52 (*) и контрольного IgG мыши (·) в дозе 2 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на мышах ICR-SCID, несущих опухоль НТ-1080. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 24 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 06С11 (♦), Hu06C11-27 и Hu06C11-30 (А) и контрольного IgG мыши (·) в дозе 2 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на мышах ICR-SCID, несущих опухоль НТ-1080. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 25 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 14F11 (a), Hu14F11-39 и Hu14F11-47 (♦) и контрольного IgG мыши (·) в дозе 2 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на мышах ICRSCID, несущих опухоль НТ-1080. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 26 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 Hu01G06-122 (▼), Hu01G06-127, Hu01G06135 (>), Hu01G06-138 () и Hu01G06-146(*) и контрольного IgG человека (·) в дозе 2 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на мышах ICR-SCID, несущих опухоль НТ-1080. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 27 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 Hu01G06-122 (▼), Hu01G06-127, Hu01G06- 4 038645
135 (0), Hu01G06-138 () и Hu01G06-146 (*) и контрольного IgG человека (·) в дозе 2 мг/кг в модели кахексии с использованием mFc-rhGDF15 на мышах ICR-SCID. Стрелкой указана интраперитонеальная инъекция антитела.
На фиг. 28 представлен график, обобщающий результаты эксперимента по определению доза-ответ для ингибиторной активности в отношении кахексии у антител к GDF15 Hu01G06-127 в дозе 20 мг/кг, 2 мг/кг (Δ) и 0,2 мг/кг (V);Hu01G06-135 в дозе 20 мг/кг (), 2 мг/кг (А) и 0,2 мг/кг (▼) и контрольного IgG человека в дозе 20 мг/кг (·) в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на мышах ICR-SCID, несущих опухоль НТ-1080. Стрелкой указана внутривенная инъекция антитела.
На фиг. 29А-29С представлены графики, обобщающие результаты эксперимента для демонстрации антикахектической активности антител к GDF15 Hu01G06-127 () в дозе 10 мг/кг в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы на иммунонекомпетентных мышах (ICR-SCID), несущих опухоль НТ-1080. Обработка антителом Hu01G06-127 обращала вспять потерю веса тела (фиг. 29А), индуцировала прирост массы жировой ткани гонад (фиг. 29В) и индуцировала прирост мышечной массы икроножной мышцы (фиг. 29C) по сравнению с отрицательным контролем (hIgG (*);фиг. 29А) на уровнях, аналогичных обнаруженным у мышей без опухоли (имитация инокуляции (а); фиг. 29А). На фиг. 29А стрелками указана интраперитонеальная инъекция антитела.
Подробное описание
Антитела к GDF15, раскрытые в данном документе, имеют в своей основе антигенсвязывающие участки некоторых моноклональных антител, которые были выбраны на основе связывания и нейтрализации GDF15 человека (hGDF15). Антитела содержат последовательности CDR вариабельной области иммуноглобулина, которые определяют участок связывания с hGDF15.
В силу нейтрализующей активности этих антител, они полезны для лечения кахексии и/или саркопении. Для применения в качестве терапевтических средств антитела можно конструировать так, чтобы минимизировать или устранить иммунный ответ при введении пациенту-человеку. Различные признаки и аспекты настоящего изобретения обсуждаются более подробно ниже.
Применяемое в данном документе выражение кахексия означает метаболический синдром, связанный с основным заболеванием и характеризующийся непреднамеренной потерей мышечной массы. Кахексия часто сопровождается непреднамеренной потерей веса, потерей массы жировой ткани, анорексией, воспалением, инсулинорезистентностью, усталостью, слабостью, значительным снижением аппетита и/или повышенным распадом мышечного белка. Кахексия отличается от голодания, возрастной потери мышечной массы, мальабсорбции и гипертиреоза. Основные заболевания, связанные с кахексией, включают рак, хроническую сердечную недостаточность, хроническое заболевание почек, COPD, AIDS, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, сепсис и туберкулез.
Применяемое в данном документе выражение саркопения следует понимать как состояние, характеризующееся в первую очередь потерей массы скелетных мышц и мышечной силы. Саркопения часто связана со старением. См., Ruegg and Glass (2011) Annual Rev. Pharmacol. Toxicol. 51: 373-395. В одном подходе саркопения может быть идентифицирована у субъекта, если значение аппендикулярной массы скелетных мышц субъекта, деленное на рост субъекта в метрах, ниже среднего значения для нормального молодого субъекта более чем на два стандартных отклонения. (Thomas (2007), выше; см. также Baumgartner et al. (1999) МЕСН. AGEING Dev. 147: 755-763).
Применяемое в данном документе, если не указано иное, выражение антитело означает интактное антитело (например, интактное моноклональное антитело) или антигенсвязывающий фрагмент антитела, включая интактное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые были модифицированы или сконструированы, или которые являются антителом человека. Примерами антител, которые были модифицированы или сконструированы, являются химерные антитела, гуманизированные антитела и полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела). Примеры антигенсвязывающих фрагментов включают Fab, Fab', F(ab')2, Fv, одноцепочечные антитела (например, scFv), минитела и диатела.
I. Антитела, связывающиеся с GDF15
Антитела, раскрытые в данном документе, содержат: (а) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDRH1-CDRH2-CDRH3, и (b) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDRL1-CDRL2-CDRL3, где вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи совместно определяют один участок связывания для связывания с белком hGDF15.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDRH1-CDRH2-CDRH3, и (b) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, где вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи совместно определяют один участок связывания для связывания с hGDF15. CDRHi содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (01G06, 08G01, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 2 (03G05), SEQ ID NO: 3 (04F08), SEQ ID NO: 4 (06C11, химерное Ch06C11, HE LM
- 5 038645
06C11IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 5 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70) и SEQ ID NO: 6 (17B11); CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO: 8 (03G05), SEQ ID NO: 9 (04F08, 06C11, химерное Ch06C11, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 10 (08G01), SEQ ID NO: 11 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 12 (17B11), SEQ ID NO: 13 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 236 (Hu01G06 IGHV1-18 Fl), SEQ ID NO: 237 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 238 (Hu01G06 IGHV1-69 Fl), SEQ ID NO: 239 (Hu01G06 IGHV1-69 F2) и SEQ ID NO: 14 (HE LM 06C11 IGHV2-70); и CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (01G06, 08G01, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV169, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 Fl, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 16 (03G05), SEQ ID NO: 17 (04F08), SEQ ID NO: 18 (06C11, химерное Ch06C11, HE LM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 19 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70) и SEQ ID NO: 20 (17B11). В данном описании за конкретным SEQ ID NO следует в скобках антитело, которое является источником этой последовательности. Например, SEQ ID NO: 2 (03G05) означает, что SEQ ID NO: 2 происходит из антитела 03G05.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-69 T30SI69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV169, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 (03G05), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 (03G05), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 (03G05).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 (04F08), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 (04F08), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17 (04F08).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 (06С11, химерное Ch06C11, Hu06C11 IGHV2-5), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 (06С11, химерное Ch06C11, Hu06C11 GHV2-5), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 (06С11, химерное Ch06C11, Hu06C11 IGHV2-5).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (08G01), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 (08G01), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (08G01).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, SM4F11 IGHV2-70), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV270), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 (17В11), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 (17В11), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 (17В11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L) и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S,
- 6 038645
Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 Fl, Hu01G06
IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 Fl, Hu01G06 IGHV1-69 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 Fl, Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 236 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRHi, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 Fl, Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 237 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 Fl, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 Fl, Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 238 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 Fl, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 Fl, Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 239 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 Fl, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 (НЕ LM 06C11 IGHV2-70), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 (НЕ LM 06C11 IGHV2-70), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 (НЕ LM 06C11 IGHV2-70).
Предпочтительно последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 размещены между последовательностями FR полностью человеческого или гуманизированного иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит (а) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDRL1-CDRL2-CDRL3, и (b) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, где вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи совместно определяют один участок связывания для связывания с hGDF15. CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 22 (03G05), SEQ ID NO: 23 (04F08, 06C11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16, 14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 24 (08G01) и SEQ ID NO: 25 (17B11); CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 27 (03G05), SEQ ID NO: 28 (04F08, 06C11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 29 (08G01), SEQ ID NO: 30 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16) и SEQ ID NO: 31 (17B11); и CDRL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, 08G01, Hu01G06 IGKV1-39 Fl), SEQ ID NO: 244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 33 (03G05), SEQ ID NO: 34 (04F08), SEQ ID NO: 35 (06C11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 36 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16) и SEQ ID NO: 37 (17B11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39
- 7 038645
V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A
V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39,
Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22 (03G05), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27 (03G05), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33 (03G05).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 (04F08), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 (04F08), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34 (04F08).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRLi, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 (06С11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 (06С11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35 (06С11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24 (08G01), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29 (08G01), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (08G01).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 (17В11), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31 (17B11), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37 (17В11).
Предпочтительно последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 расположены между последовательностями FR полностью человеческого или гуманизированного иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDRH1-CDRH2-CDRH3, и (b) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDRL1-CDRL2-CDRL3, где вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи совместно определяют один участок связывания для связывания с белком hGDF15. CDRH1 представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (01G06, 08G01, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 2 (03G05), SEQ ID NO: 3 (04F08), SEQ ID NO: 4 (06C11, химерное Ch06C11, HE LM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 5 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70) и SEQ ID NO: 6 (17B11); CDRH2 представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV1-69, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO: 8 (03G05), SEQ ID NO: 9 (04F08, 06C11, химерное Ch06C11, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 10 (08G01), SEQ ID NO: 11 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 12 (17B11), SEQ ID NO: 13 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 236 (Hu01G06 IGHV1-18 Fl), SEQ ID NO: 237 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 238 (Hu01G06 IGHV1-69 Fl), SEQ ID NO: 239 (Hu01G06 IGHV1-69 F2) и SEQ ID NO: 14 (HE LM 06C11 IGHV2-70); и CDRH3 представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (01G06, 08G01, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGHV1-18, Hu01G06 IGHV169, Sh01G06 IGHV1-18 M69L, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S, Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q,
- 8 038645
Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L, Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L, Hu01G06 IGHV1-18 F1, Hu01G06 IGHV1-18 F2, Hu01G06 IGHV1-69 F1, Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 16 (03G05), SEQ ID NO: 17 (04F08), SEQ ID NO: 18 (06C11, химерное Ch06C11, HELM 06C11 IGHV2-70, Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 19 (14F11, химерное Ch14F11, Sh14F11 IGHV2-5, Sh14F11 IGHV2-70) и SEQ ID NO: 20 (17B11). CDRLi представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 22 (03G05), SEQ ID NO: 23 (04F08, 06C11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16, 14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 24 (08G01) и SEQ ID NO: 25 (17B11); CDRL2 представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, Hu01G06 IGKV1-39 F1, Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 27 (03G05), SEQ ID NO: 28 (04F08, 06C11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 29 (08G01), SEQ ID NO: 30 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16) и SEQ ID NO: 31 (17B11); и CDRL3 представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32 (01G06, химерное Ch01G06, Hu01G06 IGKV1-39, Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I, Hu01G06 IGKV1-39 V48I, 08G01, Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO: 244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 33 (03G05), SEQ ID NO: 34 (04F08), SEQ ID NO: 35 (06C11, химерное Ch06C11, Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 36 (14F11, химерное Ch14F11, Hu14F11 IGKV1-16) и SEQ ID NO: 37 (17B11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 38 (Hu01G06 IGHV1-18 Fl), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 236 и SEQ ID NO: 240 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Hu01G06 IGHV1-18 F1); и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 38 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 237 и SEQ ID NO: 241 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Hu01G06 IGHV1-18 F2); и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRLi, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 234 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 238 и SEQ ID NO: 241 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Hu01G06 IGHV1-69 F1); и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SeQ ID NO: 234 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 239 и SEQ ID NO: 240 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Hu01G06 IGHV1-69 F2); и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (Hu01G06 IGKV1-39 F1), и CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 234 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 239 и SEQ ID NO: 240 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (Hu01G06 IGHV1-69 F2); и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (Hu01G06 IGKV1-39 F2),
- 9 038645
CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), и
CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
Антитела, раскрытые в данном документе, содержат вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40 (01G06, химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 42 (03G05), SEQ ID NO: 44 (04F08), SEQ ID NO: 46 (06C11, химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 48 (08G01), SEQ ID NO: 50 (14F11, химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 52 (17B11), SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV169 T30S I69L), SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 246 (Hu01G06 IGHV118 F1), SEQ ID NO: 248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO: 252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 70 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 72 (Sh14F11 IGHV2-5) и SEQ ID NO: 74 (Sh14F11 IGHV2-70) и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина.
В других вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 76 (01G06, химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 78 (03G05), SEQ ID NO: 80 (04F08), SEQ ID NO: 82 (06C11, химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 84 (08G01), SEQ ID NO: 86 (14F11, химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 88 (17B11), SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I или Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO: 96 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2) и SEQ ID NO: 98 (Hu14F11 IGKV1-16); и вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40 (01G06, химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 42 (03G05), SEQ ID NO: 44 (04F08), SEQ ID NO: 46 (06C11, химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 48 (08G01), SEQ ID NO: 50 (14F11, химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 52 (17B11), SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO: 248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO: 252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 70 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 72 (Sh14F11 IGHV2-5) и SEQ ID NO: 74 (Sh14F11 IGHV2-70); и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 76 (01G06, химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 78 (03G05), SEQ ID NO: 80 (04F08), SEQ ID NO: 82 (06C11, химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 84 (08G01), SEQ ID NO: 86 (14F11, химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 88 (17B11), SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I или Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO: 96 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2) и SEQ ID NO: 98 (Hu14F11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 (01G06, химерное Ch01G06), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (01G06, химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42 (03G05), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78 (03G05).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 (04F08), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80 (04F08).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46 (06C11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82 (06C11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 (08G01), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84 (08G01).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50 (14F11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ
- 10 038645
ID NO: 86 (14F11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 (17В11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ
ID NO: 88 (17В11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV118), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV169), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV118 M69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q G44S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV169 T30S I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV169 T30S K64Q I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 (химерное Ch01G06), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV118), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV169), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV118 M69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q G44S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV169 T30S I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
- 11 038645
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV169 T30S K64Q I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV1-39).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 (химерное Ch01G06), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV118), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV169), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV118 M69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q G44S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV169 T30S I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV169 T30S K64Q I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 (химерное Ch01G06), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV118), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV169), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV118 M69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q G44S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV118 M69L K64Q), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV1- 12 038645
T30S I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV169 T30S K64Q I69L), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68 (НЕ LM 06C11 IGHV2-70), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82 (химерное Ch06C11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 (HuO6C11 IGHV25), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82 (химерное Ch06C11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46 (химерное Ch06C11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96 (Sh06C11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68 (НЕ LM 06C11 IGHV2-70), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96 (Sh06C11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 (HuO6C11 IGHV25), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96 (Sh06C11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 (Sh14F11 IGHV25), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86 (химерное Ch14F11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74 (Sh14F11 IGHV270), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86 (химерное Ch14F11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50 (химерное Ch14F11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 (Hu14F11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 (Sh14F11 IGHV25), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 (Hu14F11 IGKV1-16).
- 13 038645
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74 (Sh14F11 IGHV270), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 (Hu14F11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46 (химерное Ch06C11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80 (04F08).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50 (химерное Ch14F11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80 (04F08).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 (04F08), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82 (химерное Ch06C11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50 (химерное Ch14F11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82 (химерное Ch06C11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 (04F08), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86 (химерное Ch14F11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46 (химерное Ch06C11), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86 (химерное Ch14F11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 (08G01), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 (химерное Ch01G06), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84 (08G01).
В некоторых вариантах осуществления антитела, раскрытые в данном документе, содержат тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 100 (01G06), SEQ ID NO: 104 (03G05), SEQ ID NO: 108 (04F08), SEQ ID NO: 112 (06С11), SEQ ID NO: 116 (08G01), SEQ ID NO: 120 (14F11), SEQ ID NO: 124 (17B11), SEQ ID NO: 176 (химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 178 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO: 180 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO: 182 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO: 184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO: 186 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO: 188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO: 190 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 256 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO: 258 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 260 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO: 262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 192 (химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 194 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 196 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 198 (химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 200 (Sh14F11 IGHV2-5) и SEQ ID NO: 202 (Sh14F11 IGHV2-70); и легкую цепь иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 102 (01G06), SEQ ID NO: 106 (03G05), SEQ ID NO: 110 (04F08), SEQ ID NO: 114 (06C11), SEQ ID NO: 118 (08G01), SEQ ID NO: 122 (14F11), SEQ ID NO: 126 (17B11), SEQ ID NO: 204 (химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 206 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO: 208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I или Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO: 210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO: 264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 212 (химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 214 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 216 (химерное Ch14F11) и SEQ ID NO: 218 (Hu14F11 IGKV1-16), и тяжелую цепь иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит (i) тяжелую цепь иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 100 (01G06), SEQ ID NO: 104 (03G05), SEQ ID NO: 108 (04F08), SEQ ID NO: 112 (06C11), SEQ ID NO: 116 (08G01), SEQ ID NO: 120 (14F11), SEQ ID NO: 124 (17B11), SEQ ID NO: 176 (химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 178 (Hu01G06 IGHV1-18), SEQ ID NO: 180 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO: 182 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO: 184 (Sh01G06 IGHV1-18
- 14 038645
M69L K64Q G44S), SEQ ID NO: 186 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO: 188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO: 190 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 256 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO: 258 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 260 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO: 262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 192 (химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 194 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 196 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 198 (химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 200 (Sh14F11 IGHV2-5) и SEQ ID NO: 202 (Sh14F11 IGHV2-70); и (ii) легкую цепь иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 102 (01G06), SEQ ID NO: 106 (03G05), SEQ ID NO: 110 (04F08), SEQ ID NO: 114 (06С11), SEQ ID NO: 118 (08G01), SEQ ID NO: 122 (14F11), SEQ ID NO: 126 (17B11), SEQ ID NO: 204 (химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 206 (Hu01G06 IGKV1-39), SEQ ID NO: 208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I или Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO: 210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO: 264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 212 (химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 214 (Sh06C11 IGKV1-16), SEQ ID NO: 216 (химерное Ch14F11) и SEQ ID NO: 218 (Hu14F11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176 (химерное Ch01G06), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204 (химерное Ch01G06).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192 (химерное Ch06C11), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 212 (химерное Ch06C11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 198 (химерное Ch14F11), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216 (химерное Ch14F11).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178 (Hu01G06 IGHV1-18), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206 (Hu01G06 IGKV139).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180 (Hu01G06 IGHV1-69), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206 (Hu01G06 IGKV139).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 258 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 260 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208 (Hu01G06 IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и легкую цепь
- 15 038645 иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208 (Hu01G06
IGKV1-39 F1).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 262 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264 (Hu01G06 IGKV1-39 F2).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 194 (НЕ LM 06C11 IGHV2-70), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 214 (Sh06C11 IGKV116).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 196 (Hu06C11 IGHV2-5), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 214 (Sh06C11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 200 (Sh14F11 IGHV2-5), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 218 (Hu14F11 IGKV1-16).
В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 202 (Sh14F11 IGHV2-70), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 218 (Hu14F11 IGKV116).
В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывается с hGDF15, содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентична полной вариабельной области или последовательности FR с SEQ ID NO: 40 (01G06, химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 42 (03G05), SEQ ID NO: 44 (04F08), SEQ ID NO: 46 (06C11, химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 48 (08G01), SEQ ID NO: 50 (14F11, химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 52 (17B11), SEQ ID NO: 54 (Hu01G06 IGHV118), SEQ ID NO: 56 (Hu01G06 IGHV1-69), SEQ ID NO: 58 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L), SEQ ID NO: 60 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q G44S), SEQ ID NO: 62 (Sh01G06 IGHV1-18 M69L K64Q), SEQ ID NO: 64 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S I69L), SEQ ID NO: 66 (Sh01G06 IGHV1-69 T30S K64Q I69L), SEQ ID NO: 246 (Hu01G06 IGHV1-18 F1), SEQ ID NO: 248 (Hu01G06 IGHV1-18 F2), SEQ ID NO: 250 (Hu01G06 IGHV1-69 F1), SEQ ID NO: 252 (Hu01G06 IGHV1-69 F2), SEQ ID NO: 68 (HE LM 06C11 IGHV2-70), SEQ ID NO: 70 (Hu06C11 IGHV2-5), SEQ ID NO: 72 (Sh14F11 IGHV2-5) и SEQ ID NO: 74 (Sh14F11 IGHV270).
В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывается с hGDF15, содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентична полной вариабельной области или последовательности FR с SEQ ID NO: 76 (01G06, химерное Ch01G06), SEQ ID NO: 78 (03G05), SEQ ID NO: 80 (04F08), SEQ ID NO: 82 (06C11, химерное Ch06C11), SEQ ID NO: 84 (08G01), SEQ ID NO: 86 (14F11, химерное Ch14F11), SEQ ID NO: 88 (17B11), SEQ ID NO: 90 (Hu01G06 IGKV139), SEQ ID NO: 92 (Hu01G06 IGKV1-39 S43A V48I или Hu01G06 IGKV1-39 F1), SEQ ID NO: 94 (Hu01G06 IGKV1-39 V48I), SEQ ID NO: 254 (Hu01G06 IGKV1-39 F2), SEQ ID NO: 96 (Sh06C11 IGKV116) и SEQ ID NO: 98 (Hu14F11 IGKV1-16).
Идентичность последовательности может быть определена различными способами, которые находятся в пределах квалификации специалиста в данной области техники, например, с применением общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программы BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). BLAST-анализ (поисковый инструмент основного локального выравнивания) использует алгоритм, применяемый в программах blastp, blastn, blastx, tblastn и tblastx (Karlin et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268; Altschul, (1993) J. Mol. Evol. 36: 290-300; Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, включенные в данный документ посредством ссылки), приспособленных для поиска сходства последовательностей. Для обсуждения основных вопросов по поиску в базах данных последовательностей см. Altschul et al., (1994) Nature Genetics 6:119-129, который полностью включен в данный документ посредством ссылки. Специалисты в данной области могут определить подходящие параметры для измерения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Параметры поиска для гистограммы, описаний, выравниваний, ожидания (т.е. пороговое значение для статистической значимости регистрируемых совпадений с последовательностями в базе данных), отсечка, матрица и фильтр являются настройками по умолчанию. Используемая по умолчанию матрица оценивания, применяемая в blastp, blastx, tblastn и tblastx, представляет собой матрицу BLOSUM62 (Henikoff et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919, полностью включенный в данный документ посредством ссылки). Четыре параметра blastn могут быть настроены следующим образом: Q=10 (штраф за открытие гэпа); R=10 (штраф за продолжение гэпа); wink=1 (генерирует совпадения слов в каждом положении wink.sup.th вдоль последовательности запроса), а также gapw=16 (устанавливает ширину окна, в котором
- 16 038645 генерируются выравнивания с гэпами). Эквивалентными настройками параметров Blastp могут быть Q=9; R=2; wink=1 и gapw=32. Поисковые запросы также можно проводить с применением параметра Advanced Option в BLAST от NCBI (Национального центра биотехнологической информации) (например: -G, цена за открытие гэпа [целое число]: по умолчанию = 5 для нуклеотидов/11 для белков; -Е, цена за продолжение гэпа [целое число]: по умолчанию = 2 для нуклеотидов/1 для белков; -q, штраф за несовпадение нуклеотидов [целое число]: по умолчанию = -3; -r, вознаграждение за совпадение нуклеотидов [целое число]: по умолчанию = 1; -е, ожидаемое значение [действительное число]: по умолчанию = 10; W, размер слова [целое число]: по умолчанию = 11 для нуклеотидов/28 для megablast/3 для белков; -у, возврат (X) для blast-продолжений в битах: по умолчанию = 20 для blastn/7 для других; -X, X значение возврата для выравнивания с гэпами (в битах): по умолчанию =15 для всех программ, не применимо в blastn; и -Z, конечное значение возврата X для выравнивания с гэпами (в битах): 50 для blastn, 25 для других). Также может быть применена ClustalW для парных выравниваний белков (параметры по умолчанию могут включать, например, матрицу Blosum62, и штраф за открытие гэпа = 10 и штраф за продолжение гэпа = 0,1). Сравнение Bestfit между последовательностями, доступное в пакете GCG версии 10.0, использует параметры для ДНК GAP=50 (штраф за создание гэпа) и LEN=3 (штраф за продолжение гэпа). Эквивалентными параметрами в сравнении белков BestFit являются GAP=8 и LEN=2.
В каждом из вышеупомянутых вариантов осуществления в данном документе предполагается, что последовательности вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина и/или последовательности вариабельной области легкой цепи, которые вместе связываются с GDF15 человека, могут содержать изменения аминокислот (например, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или 10 аминокислотных замен, делеций или добавлений) в каркасных участках вариабельных областей тяжелой и/или легкой цепей.
В некоторых вариантах осуществления антитела связываются с hGDF15 с KD, составляющей приблизительно 300, 250, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, или 10 пМ, или ниже. Если не указано иное, значения KD определены методами поверхностного плазмонного резонанса или биослойной интерферометрии в условиях, описанных в примерах 8, 14 и 15.
В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело связывается с тем же эпитопом на hGDF15 (например, зрелом hGDF15 или отщепленном rhGDF15), с которым связывается одно или несколько из антител, раскрытых в данном документе (например, антител 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11). В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело конкурирует с одним или несколькими антителами, раскрытыми в данном документе (например, антителами 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11), за связывание с hGDFl5.
Конкурентные анализы для определения того, связывается ли антитело с тем же эпитопом, что и антитело к GDF15, или конкурирует за связывание с антителом к GDF15, раскрытым в данном документе, известны из уровня техники. Иллюстративные конкурентные анализы включают иммунологические анализы (например, анализы ELISA, анализы RIA), анализ поверхностного плазмонного резонанса (например, с помощью инструмента BIAcore™), биослойную интерферометрию и проточную цитометрию.
Как правило, конкурентный анализ предполагает применение антигена (например, белка hGDF15 или его фрагмента), связанного с твердой поверхностью или экспрессируемого на клеточной поверхности, тестируемого GDF15 -связывающего антитела к GDF15 и эталонного антитела (например, антитела 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11). Эталонное антитело метят, а тестируемое антитело остается немеченым. Конкурентное ингибирование измеряют путем определения количества меченого эталонного антитела, связавшегося с твердой поверхностью или клетками в присутствии тестируемого антитела. Обычно тестируемое антитело присутствует в избытке (например, в 1-кратном, 5кратном, 10-кратном, 20-кратном или 100-кратном). Антитела, идентифицированные с помощью конкурентного анализа (т.е. конкурирующие антитела), включают антитела, связывающиеся с тем же эпитопом или с подобными (например, перекрывающимися) эпитопами, что и эталонное антитело, и антитела, связывающиеся с соседним эпитопом, достаточно близким к эпитопу, с которым связывается эталонное антитело, чтобы возникало стерическое несоответствие.
В иллюстративном конкурентном анализе эталонное антитело к GDF15 (например, антитело 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11) биотинилировали с применением коммерчески доступных реагентов. Биотинилированные эталонные антитела смешивали с серийными разведениями тестируемого антитела или немеченого эталонного антитела (контроль для определения самоконкуренции) и получали смесь с различными молярным соотношениями (например, 1-кратным, 5-кратным, 10-кратным, 20-кратным или 100-кратным) тестируемого антитела (или немеченого эталонного антитела) и меченого эталонного антитела. Смесь антител добавляли в планшет для ELISA, покрытый полипептидом hGDF15. Затем планшет промывали и добавляли в планшет пероксидазу хрена (HRP), конъюгированную со стрептавидином, в качестве реагента для выявления. Количество меченого эталонного антитела, связанного с антигеном-мишенью, определяли после добавления хромогенного субстрата (например, ТМВ (3,3',5,5'тетраметилбензидин) или ABTS (2,2-азино-ди-(3-этилбензтиазолин-6-сульфонат)), которые известны из уровня техники. Показания оптической плотности (единицы OD) измеряли с помощью спектрометра SpectraMax® M2 (Molecular Devices). Единицы OD, соответствующие нулевому проценту ингибирова
- 17 038645 ния, определяли в лунках без какого-либо конкурирующего антитела. Единицы OD, соответствующие 100% ингибированию, т.е. исходный уровень для анализа, определяли в лунках без меченого эталонного антитела или без тестируемого антитела. Процентное ингибирование меченого эталонного антитела к GDF15 тестируемым антителом (или немеченым эталонным антителом) в каждой концентрации рассчитывали следующим образом: % ингибирование = (1- (единиц OD - 100% ингибирование)/(0% ингибирование -100% ингибирование))* 100. Специалистам в данной области будет понятно, что конкурентный анализ может быть осуществлен с применением различных систем выявления, известных в данной области.
Конкурентный анализ может быть проведен в обоих направлениях, чтобы гарантировать, что присутствие метки не мешает или иным образом не ингибирует связывание. Например, в первом направлении метят эталонное антитело, а тестируемое антитело остается немеченым, и во втором направлении метят тестируемое антитело, а эталонное антитело остается немеченым.
Тестируемое антитело конкурирует с эталонным антителом за специфическое связывание с антигеном, если избыток одного антитела (например, 1-кратный, 5-кратный, 10-кратный, 20-кратный или 100кратный) ингибирует связывание другого антитела, например, по меньшей мере на 50, 75, 90, 95 или 99%, что измеряют в конкурентном анализе связывания.
Два антитела связываются с тем же эпитопом, если, по сути, все аминокислотные мутации в антигене, которые снижают или устраняют связывание одного антитела, уменьшают или устраняют связывание другого. Два антитела связываются с перекрывающимися эпитопами, если только подмножество аминокислотных мутаций, которые уменьшают или устраняют связывание одного антитела, уменьшают или устраняют связывание другого.
II. Получение антител
Способы получения антител, таких как раскрытые в данном документе,известны в уровне техники. Например, молекулы ДНК, кодирующие вариабельные области легкой цепи и/или вариабельные области тяжелой цепи, можно химически синтезировать с использованием информации о последовательности, приведенной в данном документе. Синтетические молекулы ДНК можно лигировать с другими соответствующими нуклеотидными последовательностями, в том числе, например, последовательностями, кодирующими константную область, и последовательностями для контроля экспрессии, с получением общепринятых конструкций для экспрессии генов, кодирующих необходимые антитела. Получение определенных генных конструкций находится в пределах компетенции специалиста в данной области техники. Кроме того, последовательности, представленные в данном документе, можно клонировать из гибридом с помощью обычных методик гибридизации или методик на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением синтетических зондов нуклеиновой кислоты, последовательности которых основаны на информации о последовательности, представленной в данном документе, или информации о последовательности из предшествующего уровня техники, что касается генов, кодирующих тяжелые и легкие цепи антител мыши в клетках гибридом.
Нуклеиновые кислоты, кодирующие необходимые антитела, можно внедрять (лигировать) в векторы экспрессии, которые можно вводить в клетки-хозяева с помощью общепринятых методик трансфекции или трансформации. Иллюстративные клетки-хозяева представляют собой клетки Е. coli, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки эмбриональной почки человека 293 (НЕК 293), клетки HeLa, клетки почки новорожденного хомяка (BHK), клетки почки обезьяны (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) и клетки миеломы, которые в ином случае не продуцируют белок IgG. Трансформированные клетки-хозяева можно выращивать в условиях, которые позволяют клеткам-хозяевам экспрессировать гены, которые кодируют вариабельные области легкой и/или тяжелой цепей иммуноглобулина.
Условия специфической экспрессии и очистки будут меняться в зависимости от задействованной системы экспрессии. Например, если ген должен экспрессироваться в Е. coli, его сначала клонируют в вектор экспрессии путем помещения сконструированного гена ниже подходящего бактериального промотора, например, Trp или Тас, и прокариотической сигнальной последовательности. Экспрессируемый секретируемый белок накапливается в плотных телах или включениях и может быть собран после разрушения клеток с помощью френч-пресса или ультразвука. Плотные тела затем солюбилизируют, а белки подвергают рефолдингу и расщеплению способами, известными в уровне техники.
Если сконструированный ген должен экспрессироваться в эукариотических клетках-хозяевах, например, клетках СНО, то сначала его встраивают в вектор экспрессии, содержащий подходящий эукариотический промотор, сигнал секреции, поли(А)-последовательность и стоп-кодон. Необязательно вектор или генная конструкция может содержать энхансеры и интроны. Такой вектор экспрессии необязательно содержит последовательности, кодирующие полную константную область или ее часть, что позволяет экспрессировать полную тяжелую или легкую цепь или ее часть. Генную конструкцию можно вводить в эукариотические клетки-хозяева с применением общепринятых методик. Клетки-хозяева экспрессируют VL или VH фрагменты, гетеродимеры VL-VH, одноцепочечные полипептиды VH-VL или VLVH, полные тяжелые или легкие цепи иммуноглобулина или их части, причем каждую из них можно присоединять к фрагменту, имеющему другую функцию (например, цитотоксичность). В некоторых вариан
- 18 038645 тах осуществления клетку-хозяина трансфицируют одним вектором, экспрессирующим полипептид, с экспрессией полной тяжелой цепи или ее части (например, вариабельной области тяжелой цепи) или полной легкой цепи или ее части (например, вариабельной области легкой цепи). В некоторых вариантах осуществления клетку-хозяина трансфицируют одним вектором, кодирующим (а) полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, и полипептид, содержащий вариабельную область легкой цепи; или (b) полную тяжелую цепь иммуноглобулина и полную легкую цепь иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления клетку-хозяина подвергают совместной трансфекции более чем одним вектором экспрессии (например, одним вектором экспрессии, экспрессирующим полипептид, содержащий полную тяжелую цепь или ее часть или полную вариабельную область тяжелой цепи или ее часть, и другим вектором экспрессии, экспрессирующим полипептид, содержащий полную легкую цепь или ее часть или полную вариабельную область легкой цепи или ее часть).
Полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, можно получать путем выращивания (культивирования) клетки-хозяина, трансфицированной вектором экспрессии, кодирующим такую вариабельную область, при условиях, которые допускают экспрессию полипептида. После экспрессии полипептид можно собирать и очищать или выделять с помощью методик, известных в уровне техники, например аффинных меток, таких как глутатион-S-mрансферазные (GST) или гистидиновые метки.
Моноклональное антитело, которое связывается с hGDF15, или антигенсвязывающий фрагмент антитела можно получить путем выращивания (культивирования) клетки-хозяина, трансфицированной: (а) вектором экспрессии, кодирующим полную тяжелую цепь иммуноглобулина или ее часть, и отдельным вектором экспрессии, кодирующим полную легкую цепь иммуноглобулина или ее часть; или (b) одним вектором экспрессии, кодирующим обе цепи (например, полные легкую и тяжелую цепи или их части), при условиях, которые допускают экспрессию обеих цепей. Интактное антитело (или антигенсвязывающий фрагмент) можно собирать и очищать или выделять с помощью методик, известных в данной области, например, белка А, белка G, аффинных меток, таких как глутатион-S-трансферазные (GST) или гистидиновые метки. Экспрессия тяжелой цепи и легкой цепи из одного вектора экспрессии или из двух отдельных векторов экспрессии находится в пределах квалификации специалиста в данной области техники.
III. Модификации антител
Способы уменьшения или исключения антигенности антител и фрагментов антител известны в уровне техники. Если антитела следует вводить человеку, антитела предпочтительно гуманизируют для уменьшения или исключения антигенности у людей. Предпочтительно каждое гуманизированное антитело имеет такую же или практически такую же аффинность к антигену, что и негуманизированное антитело мыши, из которого оно было получено.
В одном подходе гуманизации создают химерные белки, в которых константные области иммуноглобулина мыши замещают на константные области иммуноглобулина человека. См., например, Morrison et al., 1984, Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851-6855, Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608; патенты США №№ 6893625 (Robinson), 5500362 (Robinson) и 4816567 (Cabilly).
В подходе, известном как пересадка CDR, CDR вариабельных областей легкой и тяжелой цепей пересаживают в каркасные области от другого вида. Например, мышиные CDR можно пересаживать в человеческие FR. В некоторых вариантах осуществления CDR вариабельных областей легкой и тяжелой цепей антитела к GDF15 пересаживают в FR человека или консенсусные FR человека. Чтобы создать консенсусные FR человека, FR из нескольких аминокислотных последовательностей тяжелой цепи или легкой цепи человека выравнивают для определения консенсусной аминокислотной последовательности. Пересадки CDR описаны в патентах США №№ 7022500 (Queen), 6982321 (Winter), 6180370 (Queen), 6054297 (Carter), 5693762 (Queen), 5859205 (Adair), 5693761 (Queen), 5565332 (Hoogenboom), 5585089 (Queen), 5530101 (Queen); Jones et al. (1986) Nature 321: 522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332: 323327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239: 1534-1536; и Winter (1998) FEBS Lett 430: 92-94.
В подходе, называемом SUPERHUMANIZATION™, последовательности CDR человека выбирают из генов зародышевой линии человека на основе структурного сходства CDR человека с таковыми у антитела мыши, которое нужно гуманизировать. См., например, патент США № 6881557 (Foote); и Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-1125.
Другие способы снижения иммуногенности включают реконструирование, гиперхимеризацию и рекомбинацию/изменение поверхностных остатков. См., например, Vaswami et al., 1998, Annals of Allergy, Asthma, & Immunol. 81:105; Roguska et al., 1996, Prot. Engineer 9:895-904; и патент США № 6072035 (Hardman). В подходе рекомбинации/изменения поверхностных остатков доступные поверхностные аминокислотные остатки в антителе мыши замещают аминокислотными остатками, которые чаще обнаруживают в тех же положениях в антителе человека. Этот тип изменения поверхностных остатков антител описан, например, в патенте США № 5639641 (Pedersen).
Другой подход для преобразования антител мыши в форму, подходящую для медицинского применения у людей, известен как технология ACTIVMAB™ (Vaccinex, Inc, Рочестер, Нью-Йорк), которая
- 19 038645 включает вектор, основанный на вирусе коровьей оспы, для экспрессии антител в клетках млекопитающих. Как утверждается, при этом получают высокие уровни комбинаторного разнообразия тяжелых и легких цепей IgG. См., например, патенты США № 6706477 (Zauderer), 6800442 (Zauderer) и 6872518 (Zauderer).
Другим подходом для преобразования антитела мыши в форму, подходящую для применения у людей, является технология, которая коммерчески применяется на практике в KaloBios Pharmaceuticals, Inc (Пало-Альто, Калифорния). Эта технология включает применение частной библиотеки акцепторов человека для получения эпитоп-сфокусированной библиотеки для отбора антител.
Другим подходом для модификации антитела мыши в форму, подходящую для применения у людей, является технология HUMAN ENGINEERING™, которая коммерчески применяется на практике в ХОМА (US), LLC. См., например, публикацию РСТ № WO 93/11794 и патенты США №№ 5766886 (Studnicka), 5770196 (Studnicka), 5821123 (Studnicka) и 5869619 (Studnicka).
Любой подходящий подход, в том числе любой из вышеперечисленных подходов, можно применять для снижения или исключения иммуногенности антитела у человека.
Кроме того, можно создавать полностью человеческие антитела на мышах.
Полностью человеческие mAb, лишенные каких-либо последовательностей, отличных от человеческих, могут быть получены из трансгенных мышей с генами иммуноглобулина человека с помощью методик, упомянутых, например, в Lonberg et al., Nature 368:856-859, 1994; Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-851, 1996; и Mendez et al., Nature Genetics 15:146-156, 1997. Полностью человеческие mAb также могут быть получены и оптимизированы из библиотек фагового дисплея с помощью методик, упомянутых, например, в Knappik et al., J. Mol. Biol. 296:57-86, 2000 и Krebs et al., J. Immunol. Meth. 254:67-84 2001).
IV. Терапевтические применения
Антитела, раскрытые в данном документе, могут быть применены при лечении различных нарушений, например, кахексии и/или саркопении. В некоторых вариантах осуществления антитела, раскрытые в данном документе (например, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11), применяют для ингибирования потери мышечной массы, например потери мышечной массы, связанной с основным заболеванием. Основные заболевания, связанные с кахексией, включают без ограничения рак, хроническую сердечную недостаточность, хроническое заболевание почек, COPD, AIDS, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, сепсис и туберкулез. В некоторых вариантах осуществления раскрытые антитела ингибируют потерю мышечной массы по меньшей мере на 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99 или 100%.
В некоторых вариантах осуществления потеря мышечной массы сопровождается потерей массы жировой ткани. Антитела, раскрытые в данном документе (например, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11), могут ингибировать потерю массы жировой ткани по меньшей мере на 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99 или 100%.
В других вариантах осуществления антитела, раскрытые в данном документе (например, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11), применяют при лечении одного или нескольких признаков, сопровождающих кахексию и/или саркопению, например, непреднамеренной потери массы тела. В некоторых вариантах осуществления антитела обращают вспять непреднамеренную потерю веса тела по меньшей мере на 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30 или 35%.
В другом варианте осуществления антитела, раскрытые в данном документе (например, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11), применяют для ингибирования потери массы органа, например, потери массы органа, связанной с основным заболеванием. Основные заболевания, связанные с кахексией, включают, без ограничения, рак, хроническую сердечную недостаточность, хроническое заболевание почек, COPD, AIDS, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, сепсис и туберкулез. В некоторых вариантах осуществления раскрытые антитела ингибируют потерю массы органа по меньшей мере на 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99 или 100%. В некоторых вариантах осуществления потеря массы органа наблюдается в сердце, печени, почке и/или селезенке. В некоторых вариантах осуществления потеря массы органа сопровождается потерей мышечной массы, потерей массы жировой ткани и/или непреднамеренной потерей веса.
Антитело 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 можно применять в терапии. Например, антитело 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 можно применять для лечения кахексии и/или саркопении. Применение антитела 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 для лечения кахексии и/или саркопении у млекопитающего включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела.
Саркопения, нарушения трофики мышц и значительная потеря мышечного веса могут происходить в отсутствие кахексии, пониженного аппетита или снижения веса тела. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к GDF по настоящему изобретению (например, антитело 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11) можно применять для лечения субъекта, страдающего от саркопении, нарушения трофики мышц и/или значительной потери мышечного веса, или субъекта, у которого была диагностирована саркопения, нарушение трофики мышц и/или значительная потеря мышечного веса, независимо от того, имеет ли субъект, кахексию или снижение аппетита, или
- 20 038645 они были у него диагностированы, или нет. Такой способ включает введение терапевтически эффективного количества одного или нескольких антител по настоящему изобретению субъекту, который нуждается в этом.
Слитые белки Fc-rhGDF15, раскрытые в данном документе, могут быть применены при лечении ожирения. В некоторых вариантах осуществления слитые белки hFc-rhGDF15, раскрытые в данном документе, применяют для ингибирования набора веса или для уменьшения веса тела по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50%. Применение слитого белка hFc-hGDF15 для лечения ожирения у млекопитающего включает введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества слитого белка.
Применяемые в данном документе выражения лечить, осуществлять лечение и лечение означают лечение заболевания у млекопитающего, например у человека. Это включает в себя: (а) ингибирование заболевания, т.е. купирование его развития, и (и) облегчение заболевания, т.е. обеспечение регрессии болезненного состояния.
Обычно терапевтически эффективное количество активного компонента (например, антитела или слитого белка) находится в диапазоне от 0,1 до 100 мг/кг, например от 1 до 100 мг/кг, например от 1 до 10 мг/кг, например от 2,0 до 10 мг/кг. Вводимое количество будет зависеть от таких переменных, как тип и степень заболевания, или симптома, который нужно лечить, от общего состояния здоровья пациента, активности антитела или слитого белка in vivo, фармацевтического состава, периода полувыведения антитела или слитого белка из крови и пути введения. Начальная доза может повышаться за пределы верхнего уровня для того, чтобы быстро достичь желаемого уровня в крови или ткани. Кроме того, начальная доза может быть меньше оптимума, и дозу можно постепенно увеличивать в течение курса лечения. Дозу для человека можно оптимизировать, например, в стандартном исследовании с увеличением дозы из Фазы I, разработанном для серии опытов от 0,5 до 20 мг/кг. Частота доз может варьировать в зависимости от таких факторов, как путь введения, размер дозы, период полувыведения антитела или слитого белка из крови и болезнь, подлежащая лечению. Иллюстративные частоты доз составляют раз в день, раз в неделю и раз в две недели. В некоторых вариантах осуществления дозирование осуществляется один раз в две недели. Предпочтительным путем введения является парентеральный, например, внутривенная инфузия. Состав лекарственных препаратов на основе моноклонального антитела и лекарственных препаратов на основе слитого белка находится в пределах обычной практики в данной области. В некоторых вариантах осуществления антитело или слитый белок лиофилизируют, а затем восстанавливают в забуференном физиологическом растворе во время введения. Эффективное количество второго активного средства, например, противоопухолевого средства или других средств, обсуждаемых ниже, также будет соответствовать принципам, которые обсуждались выше, и будет выбрано таким образом, чтобы добиться требуемого терапевтического благоприятного воздействия у пациента.
Для терапевтического применения антитело предпочтительно комбинируют с фармацевтически приемлемым носителем. Применяемое в данном документе выражение фармацевтически приемлемый носитель означает буферы, носители и наполнители, подходящие для применения при контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соизмеримых с разумным соотношением польза/риск. Носитель(носители) должен(должны) быть приемлемым(приемлемыми) в смысле совместимости с другими ингредиентами составов и не быть вредным(вредными) для реципиента. Фармацевтически приемлемые носители включают буферы, растворители, дисперсионные среды, покрытия, изотонические и замедляющие абсорбцию средства и т.п., которые совместимы с фармацевтическим введением. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ известно в данной области техники.
Фармацевтические композиции, содержащие антитела или слитые белки, такие как раскрытые в данном документе, могут присутствовать в форме единичной дозы и могут быть получены любым подходящим способом. Фармацевтическая композиция должна быть составлена таким образом, чтобы быть совместимой с предполагаемым путем ее введения. Примерами путей введения являются внутривенное (IV), внутрикожное, ингаляционное, трансдермальное, местное, трансмукозальное и ректальное введение. Предпочтительным путем введения моноклональных антител является IV инфузия. Подходящие составы можно получать способами, известными в фармацевтической области. Например, см. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990). Компоненты состава, подходящие для парентерального введения, включают стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабен; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатообразующие средства, такие как EDTA; буферы, такие как ацетатные, цитратные или фосфатные, и средства для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза.
Подходящие носители для внутривенного введения включают физиологический раствор, бактериостатическую воду, Cremophor ELTM (BASF, Парсиппани, Нью-Джерси) или фосфатно-солевой буфер (PBS). Носитель должен быть стабильным при условиях производства и хранения, а также должен быть защищен от микроорганизмов. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содер- 21 038645 жащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль) и их подходящие смеси.
Фармацевтические составы предпочтительно являются стерильными. Стерилизация может выполняться, например, путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны. Если композицию лиофилизируют, стерилизацию фильтрованием можно проводить до или после лиофилизации и восстановления.
Другие цитокины, участвующие в развитии кахексии наряду с путем GDF15 (т.е. MIC1/PLAB/PDF/NAG-1), включают активин А и IL-6. Была выявлена связь повышенных уровней активина со связанной с раком кахексией и опухолями половых желез. См., например, Marino et al. (2013) CYTOKINE & GROWTH FACTOR REV. 24:477-484. Активин А является членом семейства TGF-бета и лигандом активинового рецептора 2 типа, ActRIIB. См., например, Zhou et al. (2010) CELL 142:531-543. Было продемонстрировано, что уровни циркулирующего IL-6 коррелируют с потерей веса у онкологических больных, а также со снижением выживаемости. См., например, Fearon et al. (2012) CELL METABOLISM 16:153-166.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько ингибиторов активина А или рецептора активина А, ActRIIB, IL-6 или рецептора IL-6 (IL-6R) могут быть введены в комбинации с (например, введены одновременно, введены до или введены после) антителом по настоящему изобретению, которое ингибирует активность GDF-15. Иллюстративные ингибиторы активина А или ActRIIB включают, например, антитело к активину А или его антигенсвязывающий фрагмент, антитело к ActRIIB или его антигенсвязывающий фрагмент, малую молекулу-ингибитор активина А, малую молекулу-ингибитор ActRIIB и рецептор-ловушку для ActRIIB, такой как растворимый рецептор ActRIIB, и слитый белок на основе растворимого рецептора ActRIIB и молекулы Fc (ActRIIBFc). См., например, Zhou et al. (2010), выше. Подходящие ингибиторы IL-6 или IL-6R включают антитело к IL-6 или его антигенсвязывающий фрагмент, антитело к IL-6R или его антигенсвязывающий фрагмент, малую молекулу-ингибитор IL-6, малую молекулу ингибитор-IL-6R и рецептор-ловушку для IL-6R, такой как растворимый рецептор IL-6, и слитый белок на основе растворимого рецептора IL-6 и молекулы Fc (IL6R-Fc). См., например, Enomoto et al. (2004) BIOCHEM. AND BIOPHYS. RES. COMM. 323:1096-1102; Argiles et al. (2011) EUR. J. PHARMACOL. 668:S81-S86; Tuca et al. (2013) ONCOLOGY/HEMATOLOGY 88:625-636. Подходящие ингибиторы IL-6 или IL-6R могут включать, например, тоцилизумаб (Actemra®, Hoffmann-LaRoche), гуманизированное моноклональное антитело к IL-6R, одобренное для лечения ревматоидного артрита; и сарилумаб/REGN88 (Regeneron), гуманизированное антитело к IL6R в клинической разработке для лечения ревматоидного артрита; и селуметиниб/AZD6244 (AstraZeneca), аллостерический ингибитор MEK, который продемонстрировал ингибирование выработки IL-6. Prado et al. (2012) BRITISH J. CANCER 106:1583-1586.
TNFa и IL-1 являются цитокинами, которые, как известно, включены в опосредование провоспалительного ответа, и которые также вовлечены в истощение мышц, анорексию и кахексию. Оказывается, что повышенные уровни циркулирующего TNFa ингибируют миогенез. TNFa, также известный как кахектин, стимулирует секрецию интерлейкина-1 и вовлечен в индукцию кахексии. IL-1 является мощным триггером острой фазы воспалительного ответа, и было продемонстрировано, что инфузия IL-1 может привести к заметной потере веса и потери аппетита. Было продемонстрировано, что IL-1 вносит вклад в инициирование связанной с раком кахексии у мышей с аденокарциномой толстой кишки-26 мыши (Strassmann et al. (1993) J. IMMUNOL. 150:2341). См. также, Mathys and Billiau (1997) NUTRITION 13:763-770; Fong et al. (1989) AM. J. PHYSIOL. - REGULATORY, INTEGRATIVE AND COMPARATIVE PHYSIOL., 256:R659-R665. Таким образом, ингибиторы TNFa и ингибиторы IL-1, применяемые при лечении ревматоидного артрита, также могут быть полезны при лечении кахексии.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько ингибиторов TNFa или IL-1 могут быть введены в комбинации с (например, введены одновременно, введены до или введены после) антителом по настоящему изобретению, которое ингибирует активность GDF-15. Подходящие ингибиторы TNFa или IL-1 включают антитело к TNFa или его антигенсвязывающий фрагмент, антитело к IL-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, малую молекулу-ингибитор TNFa или IL-1, и рецептор-ловушку для TNFa или IL-1, такой как растворимый рецептор TNFa или IL-1, и слитый белок на основе растворимой формы TNFa или IL-1 и молекулы Fc. Подходящие ингибиторы TNFa включают, например, этанерцепт (Enbrel®, Pfizer/Amgen), инфликсимаб (Remicade®, Janssen Biotech), адалимумаб (Humira®, Abbvie), голимумаб (Simponi®, Johnson and Johnson/Merck) и цертолизумаб пегол (Cimzia®, UCB). Подходящие ингибиторы IL-1 включают, например, антитело Xilonix® к IL-1a (XBiotech), анакинру (Kinaret®, Amgen), канакинумаб (Ilaris®, Novartis) и рилонацепт (Arcalyst®, Regeneron). В некоторых вариантах осуществления ингибитор TNFa или ингибитор IL-1, которые, как правило, вводят системно при лечении ревматоидного артрита, можно вводить местно и непосредственно в опухоль.
Миостатин, также известный как GDF-8, является членом семейства пептидов TGF-β и отрицательным регулятором мышечной массы, что продемонстрировано увеличением мышечной массы у млекопи- 22 038645 тающих с дефицитом миостатина. Миостатин является лигандом активинового рецептора 2 типа, ActRIIB. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько ингибиторов миостатина или его рецептора могут быть введены в комбинации с (например, введены одновременно, введены до или введены после) антителом по настоящему изобретению, которое ингибирует активность GDF-15. Подходящие ингибиторы миостатина или ActRIIB включают антитело к миостатину или его антигенсвязывающий фрагмент, антитело к ActRIIB или его антигенсвязывающий фрагмент, малую молекулу-ингибитор миостатина, малую молекулу ингибитора ActRIIB и рецепторловушку для GDF-8, такой как растворимый ActRIIB, и слитый белок на основе растворимого ActRIIB и молекулы Fc. См., например, Lokireddy et al. (2012) BIOCHEM. J. 446(1):23-26. Ингибиторы миостатина, которые могут быть подходящими для настоящего изобретению, включают REGN1033 (Regeneron); см. Bauerlein et al. (2013) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE: тезисы докладов 7-й конференции по кахексии, Кобе/Осака, Япония, 9-11 декабря 2013 г., тезис 4-06; LY2495655 (Lilly), гуманизированное антитело к миостатину в клинической разработке Eli Lilly; см. также A PHASE 2 STUDY OF LY2495655 IN PARTICIPANTS WITH PANCREATIC CANCER, доступна на www.clinicaltrials.gov/ct2/NCT01505530; идентификатор NML: NCT01505530; АСЕ-031 (Acceleron Pharma); и стамулумаб (Pfizer).
Такие средства, как грелин или миметики грелина, или другие стимуляторы секреции гормона роста (GHS), которые способны активировать рецептор GHS (GHS-R1a), также известный как грелиновый рецептор, могут быть полезны для увеличения потребления пищи и веса тела у человека. См. Guillory et al. (2013) в VITAMINS AND HORMONES vol. 92, chap.3; и Steinman и DeBoer (2013) VITAMINS AND HORMONES vol. 92, chap. 8. Подходящие миметики грелина включают анаморелин (Helsinn, Лугано, Швейцария); см. Temel et al. (2013) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE: тезисы докладов 7-й конференции по кахексии, Кобе/Осака, Япония, 9-11 декабря 2013 г., тезис 5-01. Другие подходящие молекулы GHS могут быть идентифицированы, например, с помощью конкурентного анализа с рецептором для стимулятора секреции гормона роста и грелином, описанного в публикациях РСТ №№ WO 2011/117254 и WO 2012/113103.
Агонисты андрогенового рецептора, включая малые молекулы и другие селективные модуляторы андрогенового рецептора (SARM), могут быть полезны для лечения кахексии и/или саркопении. См., например, Mohler et al. (2009) J. MED. Chem. 52:3597-3617; Nagata et al. (2011) BIOORGANIC AND MED. CHEM. LETTERS 21:1744-1747; и Chen et al. (2005) MOL. INTERV. 5: 173-188. В идеальном случае SARM должны действовать как полноценные агонисты, подобно тестостерону, в анаболических тканяхмишенях, таких как мышцы и кости, но должны демонстрировать только частичную или чистую антагонистическую активность в отношении андрогенового рецептора в ткани предстательной железы. См., например, Bovee et al. (2010) J. STEROID BIOCHEM. & MOL. BIOL. 118:85-92. Подходящие SARM могут быть идентифицированы, например, с применением способов и анализов, описанных в Zhang et al. (2006) BIOORG. MED. CHEM. LETT. 16:5763-5766; и Zhang et al. (2007) Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:439443. Подходящие SARM включают, например, GTx-024 (энобосарм, Ostarine®, GTx, Inc.), SARM в фазе II клинической разработки от компании GTx, Inc. См. также Dalton et al. (2011) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE 2:153-161. Другие подходящие SARM включают 2-(2,2,2)-трифторэтил-бензимидазолы (Ng et al. (2007) BlOORG. MED. CHEM. LETT. 17:1784-1787) и JNJ-26146900 (Allan et al. (2007) J. STEROID BlOCHEM. & MOL. BIOL. 103:76-83).
Блокаторы β-адренергических рецепторов или бета-блокаторы были изучены в отношении их влияния на вес тела у субъектов с кахексией, и их связывают с частичной регрессией кахексии у больных с застойной сердечной недостаточностью. См., например, Hryniewicz et al. (2003) J. CARDIAC FAILURE 9:464-468. Бета-блокатор МТ-102 (PsiOxus Therapeutics, Ltd.) прошел испытания в фазе 2 клинического исследования у пациентов с опухолевой кахексией. См. Coats et al. (2011) J. CACHEXIA SARCOPENIA MUSCLE 2:201-207.
Нокаутные по меланокортиновому рецептору мыши с генетическим дефектом в пути передачи сигнала с использованием меланокортина демонстрируют фенотип, противоположный кахексии: повышенный аппетит, увеличение мышечной массы тела и снижение обмена веществ. Таким образом, антагонизм меланокортина выявил способ потенциального лечения кахексии, связанной с хроническим заболеванием (DeBoer и Marks (2006) TRENDS IN ENDOCRINOLOGY AND METABOLISM 17:199-204). Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько ингибиторов пептида меланокортина или меланокортинового рецептора могут быть введены в комбинации (например, введены одновременно, введены до или введены после) с антителом по настоящему изобретению, которое ингибирует активность GDF-15. Подходящие ингибиторы меланокортинов или меланокортиновых рецепторов включают антитело к пептиду меланокортина или его антигенсвязывающий фрагмент, антитело к меланокортиновому рецептору или его антигенсвязывающий фрагмент, малую молекулу-ингибитор пептида меланокортина, малую молекулу-ингибитор меланокортинового рецептора и рецептор-ловушку для меланокортинового рецептора, такой как растворимый меланокортиновый рецептор, и слитый белок на основе растворимого меланокортинового рецептора и молекулы Fc. Подходящие ингибиторы меланокортиновых рецепторов включают, например, антагонист меланокортинового рецеп- 23 038645 тора - пептид, родственный белку агути, (AgRP(83-132)), который продемонстрировал предотвращение симптомов, связанных кахексией в мышиной модели кахексии, связанной с раком (Joppa et al. (2007)
PEPTIDES 28: 636-642).
Противоопухолевые средства, особенно те, которые могут вызывать кахексию и повышать уровни GDF-15, такие как цисплатин, могут быть применены в способах по настоящему изобретению в комбинации с (например, введены одновременно, введены до или введены после) антителом к GDF-15 по настоящему изобретению. Многие пациенты с раком ослаблены в результате жестких курсов радио- и/или химиотерапии, что может ограничить способность пациента переносить такие способы терапии и, следовательно, ограничить схему приема. Некоторые противоопухолевые средства, такие как фторурацил, адриамицин, метотрексат и цисплатин, сами по себе способствуют развитию кахексии, например, индуцируя тяжелые желудочно-кишечные осложнения. См., например, Inui (2002) CANCER J. FOR CLINICIANS 52:72-91. Способами по настоящему изобретению, в которых противоопухолевое средство вводят в комбинации с антителом к GDF-15 по настоящему изобретению, можно снизить частоту случаев возникновения и/или тяжесть кахексии и, в конечном счете, повысить максимальную переносимую дозу такого противоопухолевого средства. Соответственно, эффективность лечения противоопухолевыми средствами, которые могут вызывать кахексию, можно улучшить за счет снижения частоты возникновения кахексии в качестве ограничивающего дозу неблагоприятного эффекта, и за счет обеспечения возможности введения более высоких доз данного противоопухолевого средства.
Таким образом, настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие антитело к GDF-15 по настоящему изобретению в комбинации со средством, выбранным из группы, состоящей из: ингибитора активина А, ингибитора ActRIIB, ингибитора IL-6 или ингибитора IL-6R, грелина, миметика грелина или агониста GHS-R1a, SARM, ингибитора TNFa, ингибитора IL-1a, ингибитора миостатина, бета-блокатора, ингибитора пептида меланокортина, ингибитора меланокортинового рецептора и противоопухолевого средства. Настоящее изобретение также включает способы лечения, профилактики или минимизации развития кахексии и/или саркопении у млекопитающего, включающие введение млекопитающему, которое нуждается в этом, фармацевтической композиции или композиций, содержащих эффективное количество антитела к GDF-15 по настоящему изобретению в комбинации с эффективным количеством ингибитора активина А, ингибитора ActRIIB, ингибитора IL-6 или ингибитора IL-6R, грелина, миметика грелина или агониста GHS-R1a, SARM, ингибитора TNFa, ингибитора IL-1a, ингибитора миостатина, бета-блокатора, ингибитора пептида меланокортина, ингибитора меланокортинового рецептора.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение включает способ ингибирования потери мышечной массы, связанной с основным заболеванием, включающий введение млекопитающему, которое нуждается в этом, фармацевтической композиции или композиций, содержащих эффективное количество антитела к GDF-15 по настоящему изобретению в комбинации с эффективным количеством ингибитора активина А, ингибитора ActRIIB, ингибитора IL-6 или ингибитора IL-6R, грелина, грелин миметика или агониста GHS-R1a, SARM, ингибитора TNFa, ингибитора IL-1a, ингибитора миостатина, бетаблокатора, ингибитора пептида меланокортина, ингибитора рецептора меланокортина для предотвращения или уменьшения потери мышечной массы. Основное заболевание может быть выбрано из группы, состоящей из рака, хронической сердечной недостаточности, хронического заболевания почек, COPD, AIDS, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, сепсиса и туберкулеза. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления потеря мышечной массы сопровождается потерей массы жировой ткани.
В следующих вариантах осуществления настоящее изобретение включает способ ингибирования или снижения непреднамеренной потери веса у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, которое нуждается в этом, фармацевтической композиции или фармацевтических композиций, содержащих эффективное количество антитела к GDF-15 по настоящему изобретению в комбинации с эффективным количеством ингибитора активина А, ингибитора ActRIIB, ингибитора IL-6 или ингибитора IL-6R, грелина, миметика грелина или агониста GHS-R1a, SARM, ингибитора TNFa, ингибитора IL1a, ингибитора миостатина, бета-блокатора, ингибитора пептида меланокортина, ингибитора меланокортинового рецептора.
Некоторые противоопухолевые средства, такие как цисплатин, характеризуются одним или несколькими нежелательными побочными эффектами, которые влекут за собой возникновение или усугубление одного или нескольких синдромов, таких как кахексия, саркопения, мышечная атрофия, атрофии кости или непреднамеренная потеря веса тела. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способ лечения рака, при предотвращении, сведению к минимуму или уменьшении частоты возникновения, частоты случаев или тяжести кахексии, саркопении или мышечной атрофии, атрофии кости или непреднамеренной потери веса тела у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, которое нуждается в этом, фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество антитела к GDF-15 по настоящему изобретению в комбинации с одним или несколькими противоопухолевыми средствами. В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение включает способ лечения рака, при предотвращении, сведению к минимуму или уменьшении частоты
- 24 038645 возникновения, частоты случаев или тяжести кахексии, саркопении или мышечной атрофии, атрофии кости или непреднамеренной потери веса тела у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, которое нуждается в этом, фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество антитела к GDF-15 по настоящему изобретению в комбинации с одним или несколькими противоопухолевыми средствами, которые, как известно, вызывают или повышают частоту возникновение, частоту случаев или тяжесть кахексии, саркопении или мышечной атрофии, атрофии кости или непреднамеренной потери веса тела у млекопитающего.
Примеры
Следующие примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения объема или содержания настоящего изобретения любым образом.
Пример 1. Уровни GDF15 человека в сыворотке в ксенотрансплантатных моделях опухолей на мышах
В этом примере определяли количество hGDF15 в сыворотке мышей, несущих различные ксенотрансплантаты опухолей. Собирали сыворотку у трех мышей для каждой из следующих ксенотрансплантатных моделей опухолей: Chago, RPMI7951, РС3, TOV21G, НТ-1080, K-562 и LS1034. Также собирали сыворотку у трех ранее не подвергавшихся воздействию мышей в качестве контроля. Уровни GDF15 человека в сыворотке определяли с помощью ELISA (R&D Systems, № по каталогу DY957E). Мыши, несущие ксенотрансплантаты опухолей человека, которые индуцируют кахексию, имели уровни hGDF15 в сыворотке выше 2 нг/мл, в то время как мыши, несущие ксенотрансплантаты опухолей человека, которые не индуцируют кахексию, имели уровни hGDF15 в сыворотке ниже 1 нг/мл (фиг. 2). У ранее не подвергавшихся воздействию мышей hGDF15 не обнаружили (контроль). Эти результаты указывают на то, что уровень GDF15 в сыворотке примерно 2 нг/мл является пороговым для индукции кахексии в этой модели на мышах. Аналогичные уровни hGDF15 также наблюдали в плазме при определении с помощью ELISA.
Пример 2. Модель кахексии на мышах, не несущих опухоли
Существующая модель кахексии на мышах, не несущих опухоли, основана на инъекции зрелого rhGDF15 мышам (Johnen et al. (1997) Nat. Med. 13:1333-1340). Зрелый rhGDF15 соответствует аминокислотам от 197 до 308 белка hGDF15. Зрелый rhGDF15 может быть получен в дрожжах Pichia pastoris, как описано в Fairlie et al. (2000) Gene 254:67-76). Отщепленный rhGDF15 соответствует аминокислотам от 197 до 308 белка hGDF15, высвобождаемого из слитого белка Fc-rhGDF15. На фиг. 3-4, описанных ниже, отщепленный rhGDF15 получали путем ферментативного расщепления слитого белка mFc-rhGDF15 с помощью фактора Ха и последующей очистки перед инъекцией мышам.
Для исследования периода полувыведения отщепленного rhGDF15 собирали плазму у группы из трех мышей после однократной дозы отщепленного rhGDF15 (1 мкг/г) в различные моменты времени (2, 5, 8, 11 и 23 часа). Уровни GDF15 человека в плазме определяли с помощью ELISA (R&D Systems, № по каталогу DY957E). Как представлено на фиг. 3, отщепленный rhGDF15 быстро выводился из плазмы после инъекции. Через 11 ч после инъекции количество отщепленного rhGDF 15 в плазме было ниже 10 нг/мл и в течение 23 ч отщепленный rhGDF15 почти полностью выводился из плазмы.
Быстрое выведение отщепленного rhGDF15 у мышей, не несущих опухоли, дополнительно исследовали. Самок мышей ICR-SCID в возрасте восьми недель распределяли случайным образом в две группы по десять мышей в каждой. Мышам вводили дозу подкожно в бок каждые восемь часов в течение трех дней (в общей сложности девять доз) в ходе одного из следующих видов обработки: PBS (контроль) или отщепленный rhGDF 15 при 1 мкг/г. Вес тела измеряли ежедневно. Статистические анализы проводили с применением двухфакторного ANOVA.
Как представлено на фиг. 4, отщепленный rhGDF15 индуцировал потерю веса тела. После девяти доз в течение периода трех дней вес тела в процентах снизился до 88% на 4 день (р <0,001), но приблизительно через 24 ч после последней дозы мыши начали набирать вес. На 6 день, последний день эксперимента, вес тела в процентах увеличился до 94,8 процента (р <0,001). Эти результаты указывают на то, что потеря веса, индуцированная отщепленным rhGDF15, не сохраняется в течение длительных периодов времени. Активность, наблюдаемая у отщепленного rhGDF15, описанная в данном документе, была аналогична той, которую наблюдали у зрелого rhGDF15 в существующей модели на мышах (Johnen et al., выше).
Существующая модель кахексии на мышах, не несущих опухоли, опирается на инъекцию больших количеств зрелого rhGDF15, доставляемого в виде нескольких доз в день для индукции потери мышечной массы и потери веса тела (Johnen et al., выше). По-видимому, в случае применения зрелого rhGDF15 или отщепленного rhGDF15 без постоянного введения доз у мышей не сохраняется потеря мышечной массы или потеря веса тела в течение длительных периодов времени. Это ограничивает полезность таких моделей. Более того, повторное введение доз требует частых манипуляций с этими мышами, что ведет к стрессу, который может поставить под угрозу надежность измерений потери веса тела. Например, как представлено на фиг. 4, мыши, обработанные несколькими дозами PBS, продемонстрировали снижение веса тела из-за стресса, обусловленного повторным введением доз и манипуляциями.
- 25 038645
Пример 3. Слитые белки GDF15
Ввиду больших количеств зрелого rhGDF15 (или отщепленного rhGDF15) и интенсивности труда, необходимых для индукции кахексии в модели на мышах, не несущих опухоли (а также ввиду обусловленных этим ограничений таких моделей), были исследованы альтернативные формы rhGDF15 для индукции фенотипа кахексии у мышей.
В этом примере описано конструирование и получение двух слитых белков, состоящих из GDF15 и Fc-фрагмента иммуноглобулина, обозначенных как mFc-rhGDF15 (Fc IgG1 мыши, слитый с аминоконцом зрелого GDF15 человека) и rFc-rmGDF15 (Fc IgG1 кролика, слитый с аминоконцом зрелого GDF15 мыши). Слитые белки GDF15 разрабатывали с применением способов, известных в данной области техники. Из фрагментов с применением ПЦР с перекрывающимися праймерами конструировали последовательности ДНК для mFc-rhGDF15, содержащие (в следующем порядке): 5'-сайт рестрикции для HindIII, консенсусную последовательность Козак, участки, кодирующие аминоконцевую сигнальную последовательность, Fc IgG1 мыши, сайт расщепления для фактора Ха, полипептидный линкер (GGGGS) (SEQ ID NO: 139) и зрелый hGDF15, стоп-кодон и 3'-сайт рестрикции для EcoRI. Аминокислотные последовательности rFc-rmGDF15 преобразовывали в последовательности ДНК с оптимизированными кодонами и синтезировали содержащими (в следующем порядке): 5'-сайт рестрикции для HindIII, консенсусную последовательность Козак, участки, кодирующие аминоконцевую сигнальную последовательность, Fc IgG1 кролика, полипептидный линкер (GGGG) (SEQ ID NO: 265) и зрелый GDF15 мыши, стопкодон и 3'-сайт рестрикции для EcoRI.
Слитые белки GDF15 субклонировали в вектор экспрессии у млекопитающих рЕЕ14.4 (Lonza, Базель, Швейцария) по сайтам HindIII и EcoRI с применением набора для клонирования продуктов ПЦР InFusion™ (Clontech, Маунтин-Вью, Калифорния). Слитые белки GDF15 стабильно экспрессировали в клетках CHOK1SV с применением GS System (Lonza Biologics) для получения больших количеств очищенного белка. Каждый вектор экспрессии линеаризовали и трансфицировали в клетки CHOK1SV. Стабильные клоны отбирали в присутствии сульфоксимина метионина. Секретируемые белки, продуцируемые стабильно трансфицированными клеточными линиями CHOK1SV, очищали с помощью белка А и гель-хроматографии.
Последовательность нуклеиновой кислоты и кодируемая последовательность белка, определяющая слитый белок Fc IgG1 мыши-зрелый GDF15 человека (mFc-rhGDF15), представлены ниже. mFc-rhGDF15 содержит Fc IgG1 мыши из аминокислот 1-222, сайт расщепления для фактора Ха из аминокислот 223228, искусственную последовательность линкера из аминокислот 229-233 и зрелый hGDF15 из аминокислот 234-345.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок Fc IgG1 мыши-зрелый GDF15 человека (mFc-rhGDF15) (SEQ ID NO: 219) gggtgtaaac cctgcatctg cacggtgccg gaggtgtcct ccgtctttat cttccctccc 61 aaacccaagg atgtgctgac aatcactttg actccaaaag tcacatgcgt agtcgtggac
121 atctcgaaag acgacccgga agtgcagttc tcgtggtttg ttgatgatgt agaagtgcat
181 accgctcaaa cccagccgag ggaagaacag tttaacagca cgtttaggag tgtgtcggaa
1241 ctgcccatta tgcaccagga ttggcttaat gggaaggagt tcaaatgtcg cgtgaatagt
301 gcggcgttcc cagcccctat tgaaaagact atttccaaaa cgaagggtcg gcccaaagct
361 ccccaagtat acacaatccc tccgccgaaa gaacaaatgg caaaagacaa agtgagtttg
421 acgtgcatga tcacggactt tttcccggag gatatcaccg tcgaatggca atggaatggg
481 caacctgccg aaaactacaa gaatacacaa cccattatgg ataccgatgg atcgtatttc
541 gtctactcaa agttgaacgt acagaagtca aattgggagg cagggaatac gttcacttgc
601 agtgttttgc acgaaggcct ccataaccac catacggaaa agtcactgtc gcactccccg
661 ggaaaaatcg agggcagaat ggatggtgga ggagggtcgg cgcgcaacgg ggaccactgt
721 ccgctcgggc ccgggcgttg ctgccgtctg cacacggtcc gcgcgtcgct ggaagacctg
781 ggctgggccg attgggtgct gtcgccacgg gaggtgcaag tgaccatgtg catcggcgcg
841 tgcccgagcc agttccgggc ggcaaacatg cacgcgcaga tcaagacgag cctgcaccgc
901 ctgaagcccg acacggtgcc agcgccctgc tgcgtgcccg ccagctacaa tcccatggtg
961 ctcattcaaa agaccgacac cggggtgtcg ctccagacct atgatgactt gttagccaaa
1021 gactgccact gcata
Последовательность белка, определяющая слитый белок Fc IgG1 мыши-зрелый GDF15 человека (mFc-rhGDF15) (SEQ ID NO: 220) gckpcictvp evssvfifpp kpkdvltitl tpkvtcvvvd iskddpevqf swfvddvevh 61 taqtqpreeq fnstfrsvse Ipimhqdwln gkefkcrvns aafpapiekt isktkgrpka 121 pqvytipppk eqmakdkvsl tcmitdffpe ditvewqwng qpaenykntq pimdtdgsyf 181 vysklnvqks nweagntftc svlheglhnh htekslshsp gkiegrmdgg ggsarngdhc 241 plgpgrccrl htvrasledl gwadwvlspr evqvtmciga cpsqfraanm haqiktslhr 301 Ikpdtvpapc cvpasynpmv liqktdtgvs Iqtyddllak dchci
Последовательность нуклеиновой кислоты и кодируемая последовательность белка, определяющая слитый белок Fc IgG1 кролика-зрелый GDF15 мыши (rFc-rmGDF15), представлены ниже. rFc-rmGDF15 содержит Fc IgG1 кролика из аминокислот 1-223, искусственную последовательность линкера из аминокислот 224-227 и зрелый GDF15 мыши из аминокислот 228-342.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок Fc IgG1 кролика-зрелый GDF15 мыши (rFc-rmGDF15) (SEQ ID NO: 221)
- 26 038645 tcgaaaccca cttgccctcc tccggagctg ttgggcggac cctccgtgtt tatctttccc ccgaagccga aagataccct tatgatctca cggacgccgg aggtcacttg cgtagtagtg
121 gatgtgtcgg aggatgaccc cgaagtccag ttcacctggt atatcaataa cgagcaagtg
181 aggacagcga ggcccccact tagggagcag cagttcaact ccacaattcg ggtcgtcagc
1241 actttgccca tcgctcatga ggactggctc cgcggaaaag agttcaagtg taaggtgcat
301 aacaaggcat tgccagcgcc tattgaaaag acaatctcga aggcgcgagg gcagccgctc
361 gagcccaaag tgtatacgat gggacccccg agggaagaat tgtcgtcgcg ctcagtaagc
421 cttacgtgca tgattaacgg tttctaccct agcgacatca gcgtagagtg ggaaaagaat
481 ggaaaggcgg aggataacta caagacgact cccgcggtgc tggattcgga tgggtcgtac
541 tttctgtata gcaaattgtc agtcccgacc tcagaatggc agaggggtga cgtgttcacg
601 tgctccgtga tgcacgaagc acttcacaat cactacaccc agaaatcaat ctcgcggtcc
661 ccaggcaaag gtggaggagg gtcggctcac gcccaccctc gcgattcgtg tccgctgggg
721 cctggtagat gctgtcatct cgagacagtc caggccacgc tggaggacct cgggtggtca
781 gactgggtcc tgtccccacg acaactgcag ctttcgatgt gcgtggggga atgtccgcac
841 ttgtacagat cggcgaatac ccacgctcag attaaggcac gactccatgg tttgcagcca
901 gataaagtcc ccgcaccttg ctgtgtcccc agctcatata ctcctgtcgt actcatgcat
961 cggacagaca gcggcgtgtc gcttcaaacg tatgacgacc tcgtagcgag aggatgtcat
1021 tgcgcc
Последовательность белка, определяющая слитый белок Fc IgG1 кролика-зрелый GDF15 мыши (rFc-rmGDF15) (SEQ ID NO: 222) skptcpppel Iggpsvfifp pkpkdtlmis rtpevtcvvv dvseddpevq ftwyinneqv rtarpplreq qfnstirvvs tlpiahedwl rgkefkckvh nkalpapiek tiskargqpl
121 epkvytmgpp reelssrsvs Itcmingfyp sdisvewekn gkaednyktt pavldsdgsy
181 flysklsvpt sewqrgdvft csvmhealhn hytqksisrs pgkggggsah ahprdscplg
241 pgrcchletv qatledlgws dwvlsprqlq Ismcvgecph lyrsanthaq ikarlhglqp
301 dkvpapccvp ssytpvvlmh rtdsgvslqt yddlvargch ca
Следующие последовательности представляют иллюстративные последовательности белка для слитых белков Fc IgG1 человека-зрелый GDF15 человека (hFc-rhGDF15). hFc-rhGDF15 Ха состоит из Fc IgG1 человека из аминокислот 1-227, сайта расщепления для фактора Ха из аминокислот 228-233, искусственной последовательности линкера из аминокислот 234-238 и зрелого hGDF15 из аминокислот 239350. hFc-rhGDF15 состоит из Fc IgG1 человека из аминокислот 1-227, искусственной последовательности линкера из аминокислот 228-232 и зрелого hGDF15 из аминокислот 233-344.
Последовательность белка, определяющая слитый белок Fc IgG1 человека-зрелый GDF15 человека с сайтом расщепления для Ха (hFc-hGDF15 Ха) (SEQ ID NO: 223) dkthtcppcp apellggpsv flfppkpkdt Imisrtpevt cvvvdvshed pevkfnwyvd gvevhnaktk preeqynsty rvvsvltvlh qdwlngkeyk ckvsnkalpa piektiskak
121 gqprepqvyt Ippsreemtk nqvsltclvk gfypsdiave wesngqpenn ykttppvlds
181 dgsfflyskl tvdksrwqqg nvfscsvmhe alhnhytqks Islspgkieg rmdggggsar
241 ngdhcplgpg rccrlhtvra sledlgwadw vlsprevqvt mcigacpsqf raanmhaqik
301 tslhrlkpdt vpapccvpas ynpmvliqkt dtgvslqtyd dllakdchci
Последовательность белка, определяющая слитый белок Fc IgG1 человека-зрелый GDF15 человека (hFc-hGDF15) (SEQ ID NO: 224) dkthtcppcp apellggpsv flfppkpkdt Imisrtpevt cvvvdvshed pevkfnwyvd gvevhnaktk preeqynsty rvvsvltvlh qdwlngkeyk ckvsnkalpa piektiskak
121 gqprepqvyt Ippsreemtk nqvsltclvk gfypsdiave wesngqpenn ykttppvlds
181 dgsfflyskl tvdksrwqqg nvfscsvmhe alhnhytqks Islspgkggg gsarngdhcp
241 Igpgrccrlh tvrasledlg wadwvlspre vqvtmcigac psqfraanmh aqiktslhrl
301 kpdtvpapcc vpasynpmvl iqktdtgvsl qtyddllakd chci
Пример 4. Модель кахексии, индуцированной Fc-rhGDF15
В этом примере описано создание модели кахексии, индуцированной Fc-GDF15, на мышах. Иммунокомпетентных (Balb/C) и иммунонекомпетентных мышей (CB17-Scid) распределяли случайным образом в три группы по десять мышей в каждой. Каждая группа получила один из следующих видов обработки: PBS (контроль), mFc-rhGDF15 (как описано в примере 3) или rFc-rmGDF15 (как описано в примере 3) в дозе 1 мкг/г. Самкам мышей в возрасте восемь недель вводили дозу подкожно в бок в течение трех дней (Balb/C) или один раз (CB17-Scid). Вес тела измеряли ежедневно.
Как представлено на фиг. 5А и 5В, введение mFc-rhGDF15 или rFc-rmGDF15 индуцировало потерю веса тела у иммунокомпетентных мышей (фиг. 5А) и иммунонекомпетентных мышей (фиг. 5В). Эти результаты указывают на то, что был достигнут устойчивый уровень активного rhGDF15, потому что независимо от дозы (одна в сравнении с тремя дозами) как mFc-rhGDF15, так и rFc-rmGDF15 индуцировали устойчивую потерю веса на протяжении периода измерений (7 дней).
Слитые белки, mFc-rhGDF15 и rFc-rmGDF15, дополнительно испытывали на иммунокомпетентных (C57BL6, Swiss Webster) и иммунонекомпетентных (ICR-SCID) линиях мышей. В каждой испытуемой линии мышей введение mFc-rhGDF15 или rFc-rmGDF15 индуцировало кахексию, что определяли по потере веса тела. Аналогичные результаты были получены независимо от того, вводили дозу mFc-rhGDF15 подкожно или интраперитонеально.
Также проводили исследование относительно того, насколько потеря веса, индуцированная mFcrhGDF15, зависит от возраста мышей, обработанных слитым белком. Самок мышей линии Swiss Webster (иммунокомпетентных) разных возрастов (7, 13 и 25 недель) разделяли на две группы по десять особей и обрабатывали тремя дозами в день mFc-rhGDF15 или PBS (0,8 мкг/г, мыши в возрасте 7 недель; 0,6 мкг/г,
- 27 038645 мыши в возрасте 13 недель; или 0,4 мкг/г, мыши в возрасте 25 недель). Потерю веса, индуцированную mFc-rhGDF15, наблюдали во всех трех возрастных популяциях мышей. В каждой возрастной популяции мыши теряли примерно 10% от своего веса тела после обработки mFc-rhGDF15, что определяли через десять дней после обработки.
В другом эксперименте индукцию кахексии с помощью mFc-rhGDF15 исследовали путем определения потери веса тела, потери мышечной массы, потери массы жировой ткани и уровней экспрессии двух молекулярных маркеров, являющихся индикаторами деградации мышц (т.е. mMuRF1 и атрогина мыши). MuRF1 и атрогин являются ЕЗ-убиквитинлигазами с повышенной экспрессией в нескольких моделях атрофии мышц и кахексии (Glass, D. (2010) Curr. Opin. Clin. Nutr. Met. Care 13: 225-229).
Самок мышей ICR-SCID в возрасте восьми недель разделяли случайным образом на десять групп по десять мышей в каждой. В пяти группах (по десять мышей в каждой) вводили дозу PBS (контроль) подкожно в бок, и в пяти группах (по десять мышей в каждой) вводили дозу 1,6 мкг/г mFc-rhGDF15 подкожно в бок в первый день. Вес тела измеряли ежедневно в течение до 17 дней. Одну контрольную группу и одну группу обработки умерщвляли в различные моменты времени (0, 1, 3, 7 и 16 дней после введения дозы). Жировую массу гонад и икроножные мышцы удаляли хирургическим путем у мышей из каждой группы в указанное время умерщвления и взвешивали. Ткани быстро замораживали в жидком азоте, и выделяли РНК из образцов икроножной мышцы. С помощью qRT-PCR измеряли уровни мРНК mMuRF1 и атрогина мыши в образцах от соответствующих групп, собранных через 1, 7 и 16 дней после введения дозы. Статистические анализы проводили с применением двухфакторного ANOVA.
Как представлено на фиг. 6А, mFc-rhGDF15 индуцировал потерю веса тела у мышей ICR-SCID. Вес тела в процентах составлял 79,4% при измерении через 16 дней после одной дозы mFc-rhGDF15 (p <0,001). mFc-rhGDF15 также индуцировал потерю жировой массы (жировой ткани), что наблюдали как потерю массы жировой ткани гонад (фиг. 6В; р <0,01 на 7 день и р <0,001 на 16 день) и потерю мышечной массы, что наблюдали как потерю массы икроножной мышцы (фиг. 6С; р <0,05 на 1 и 3 день и р <0,0001 на 7 и 16 день). Введение mFc-rhGDF15 также повышало экспрессию генов двух ферментов, ассоциированных с деградацией мышц и кахексией, mMuRF1 (фиг. 6D; р <0,001 на 1, 7 и 16 день) и атрогина мыши (фиг. 6Е; р<0,001 на 1 и 7 день и р<0,01 на 16 день).
Эти результаты указывают на то, что mFc-rhGDF 15 индуцирует кахексию у мышей.
Пример 5. mFc-rhGDF15 индуцирует кахексию с более длительным периодом полувыведения GDF15 из сыворотки
В этом примере определяли уровни hGDF15 в сыворотке после введения mFc-rhGDF15 для установления периода полувыведения rhGDF15 в этой модели. Самок голых мышей линии Balb/C в возрасте восьми недель разделяли случайным образом на две группы по двенадцать мышей в каждой. Мышам вводили дозу подкожно в бок каждые двенадцать часов в течение трех дней (в общей сложности шесть доз) в ходе одного из следующих видов обработки: PBS (контроль) или mFc-rhGDF15 в дозе 1,33 мкг/г. Вес тела измеряли ежедневно. Как представлено на фиг. 7, mFc-rhGDF15 индуцировал устойчивую потерю веса тела в течение по меньшей мере одной недели после последней инъекции.
В этом эксперименте уровни hGDF15 в сыворотке измеряли на 0,2, 5 и 8 день после введения последней дозы mFc-rhGDF15. Мышей умерщвляли в указанное время, и собирали сыворотку. Уровни GDF15 человека в сыворотке определяли с помощью ELISA (R&D Systems, № по каталогу DY957E). В табл. 1 представлены уровни в сыворотке (мкг/мл) в исследовании для каждой мыши.
Таблица 1
День после введения последней дозы № мыши Обработка GDF15 в сыворотке (мкг/мл); ELISA
Средство мкг/г
0,2 1 mFc-rhGDF 15 1,33 10,02
0,2 2 mFc-rhGDF 15 1,33 9,54
0,2 3 mFc-rhGDF 15 1,33 9,36
5 4 mFc-rhGDF 15 1,33 8,24
5 5 mFc-rhGDF 15 1,33 8,01
5 6 mFc-rhGDF 15 1,33 6,59
8 7 mFc-rhGDF 15 1,33 5,60
8 8 mFc-rhGDF 15 1,33 5,52
8 9 mFc-rhGDF 15 1,33 5,57
Результаты, приведенные в табл. 1, показывают, что высокие, устойчивые уровни hGDF15 присутствуют в сыворотке по меньшей мере через восемь дней после приема последней дозы mFc-rhGDF15.
Образцы сыворотки, полученные на 0,2 день и 5 день после введения последней дозы, также анализировали методом Вестерн-блоттинга (восстанавливающий гель; блотирование с антителом к hGDF15 (R&D Systems, № по каталогу AF957)) и количественно определяли с помощью Licor для установления стабильности mFc-rhGDF15 в сыворотке. Неожиданно наблюдали две полосы. Верхняя полоса составляла примерно 40 кДа и, по-видимому, соответствовала mFc-rhGDF15. Нижняя полоса составляла примерно 15 кДа и, по-видимому, соответствовала отщепленному зрелому rhGDF 15. Это указывало на то, что в
- 28 038645 сыворотке зрелый rhGDF15 высвобождался из mFc-rhGDF15. Количественное определение двух полос показало, что приблизительно 90% rhGDF15, присутствующего в сыворотке, находилось в форме mFcrhGDF15, и приблизительно 10% общего rhGDF15 в сыворотке присутствовало в отщепленной зрелой форме (фиг. 8). Количественное определение показало небольшое снижение уровня mFc-rhGDF15 в образцах сыворотки, собранных через пять дней после введения последней дозы, но, на удивление, в сыворотке сохранялся постоянный уровень зрелого rhGDF15. Соотношение зрелого rhGDF 15 и mFc-rhGDF15 немного увеличивалось с течением времени в результате снижения уровня mFc-rhGDF15 в сыворотке. Аналогичные результаты наблюдали при инъекции rFc-rmGDF15 мышам.
Результаты, представленные на фиг. 7-8 и в табл. 1, были неожиданными. Ожидалось, что очень малое количество зрелого rhGDF15 будет отщепляться (высвобождаться) от mFc-rhGDF15 в 0,2 день, если вообще таковое будет наблюдаться, и весь отщепленный rhGDF15 будет быстро выводиться из сыворотки, как наблюдали ранее.
Например, на фиг. 4 требовалась серия из девяти доз по 1 мкг/г на дозу (в общей сложности 9 мкг/г) отщепленного rhGDF15 для индукции значительной потери веса тела у мышей. Такие мыши набирали вес практически сразу после прекращения введения доз. В отличие от этого, одной дозы mFc-rhGDF15 в 0,1 мкг/г было достаточно для индукции значительной потери веса тела на протяжении по меньшей мере восьми дней (фиг. 9А; десять мышей ICR-SCID, которым вводили интраперитонеально дозу 0,1 мкг/г в 1 день). Результаты, приведенные в табл. 1, показывают, что уровни rhGDF15 в сыворотке были стабильными в течение по меньшей мере восьми дней, если rhGDF15 вводили в виде слитого белка mFcrhGDF15.
Для определения источника активности, ведущей к устойчивой потере веса тела, провели исследования, чтобы связать наблюдаемую активность rhGDF15 со слитым белком mFc-rhGDF15, с высвобожденной зрелой формой rhGDF15 или с обоими. Как представлено на фиг. 9А, низкая доза mFc-rhGDF 15 (0,1 мкг/г) приводила к потере веса тела, продолжавшейся в течение по меньшей мере восьми дней. Более низкая доза mFc-rhGDF15 (0,01 мкг/г) также индуцировала потерю веса тела, но эффект не сохранялся в течение более чем 3 дней после введения дозы.
В этом эксперименте плазму собирали у трех мышей, каждой из которых вводили дозу 0,1 мкг/г или 0,01 мкг/г через 5 дней после введения дозы. Общее содержание rhGDF15 определяли с помощью ELISA, как описано выше. Общие уровни rhGDF15 в плазме мышей, которым вводили дозу 0,1 мкг/г, составляли более 70 нг/мл, что согласуется с наблюдением, что эти мыши характеризовались значительной потерей веса (фиг. 9В). Общие уровни rhGDF15 в плазме мышей, которым вводили дозу 0,01 мкг/г, составляли приблизительно 3,3 нг/мл, но было замечено, что эти мыши набирали вес (фиг. 9А и фиг. 9В). Как представлено на фиг. 2, пороговый уровень hGDF15 для индукции кахексии у мышей, несущих опухоль, составляет примерно 2 нг/мл. Таким образом, если обе формы rhGDF15 проявляли активность (т.е. mFc-rhGDF15 и высвобожденный зрелый rhGDF15), то эти мыши должны были терять вес, но не набирать вес (т.е. общее содержание rhGDF15 3,3 нг/мл превышает пороговое значение для hGDF15, составляющее примерно 2 нг/мл).
Для определения того, какая форма представляла собой активную форму (т.е. mFc-rhGDF 15 или высвобожденный зрелый rhGDF15), были рассмотрены данные на фиг. 8, которые показали, что примерно 90% общего rhGDF15 в сыворотке находилось в форме mFc-rhGDF15, а остальные 10% находились в высвобожденной зрелой форме. На основании этой экстраполяции определили, что примерно 3,0 нг/мл rhGDF15 (т.е. 90% от 3,3 нг/мл) в плазме присутствовало в форме mFc-rhGDF15. Опять-таки, если mFcrhGDF15 проявлял активность, эти мыши должны были терять вес, а не набирать вес, потому что содержание mFc-rhGDF15 3,3 нг/мл превышает пороговое значение для hGDF15, составляющее примерно 2 нг/мл. Мыши, которым вводили дозу 0,1 мкг/г mFc-rhGDF15, служили в качестве внутреннего контроля, поскольку эти мыши характеризовались устойчивой потерей веса тела, что указывало на то, что по меньшей мере одна из двух форм должна быть активной. Расчет 10% от 70 нг/мл общего содержания rhGDF15 у этих мышей дает 7 нг/мл высвобожденного зрелого rhGDF15. Такое количество соответствует индукции наблюдаемой потери веса тела и пороговому значению, наблюдаемому на фиг. 2. Таким образом, данные свидетельствуют о том, что mFc-rhGDF15 не является активной формой белка, а только зрелый rhGDF15 является активным. Такие результаты были неожиданными, потому что: (а) не было никаких оснований, чтобы предсказать, что слитый белок с Fc (mFc-rhGDF15) будет неактивным; и (b) не было никаких оснований, чтобы предсказать, что слитый белок с Fc будет высвобождать зрелый rhGDF15 при наблюдаемой скорости.
Такие результаты указывают на то, что mFc-rhGDF15 поддерживает фенотип кахексии путем медленного высвобождения зрелого rhGDF15 в сыворотку. Такие результаты также указывают на то, что устойчивый уровень зрелого rhGDF15 в плазме или сыворотке может быть достигнут у мышей, не несущих опухоли, путем введения мышам mFc-rhGDF15. Таким образом, введение mFc-rhGDF15 мышам, не несущим опухоли, можно, в частности, применять в качестве модели кахексии на мышах с надежной и устойчивой потерей мышечной массы, потерей массы жировой ткани и потерей веса тела (см. фиг. 6А-С).
Пример 6. Антитела к GDF15
В этом примере описано получение моноклональных антител к GDF15. Процедуры иммунизации,
- 29 038645 слияния и первичного скрининга проводили с применением традиционных способов, следуя протоколу многократной иммунизации с использованием нескольких участков (RTMMS). Пять мышей линии AJ и пять мышей линии Balb/c иммунизировали меченным 6XHis (SEQ ID NO: 266) рекомбинантным GDF15 человека (His-rhGDF15) (R&D Systems, Inc., Миннеаполис, Миннесота). Для последующего слияния отбирали двух мышей линии Balb/c, у которых в сыворотке была обнаружена самая высокая активность антител к GDF15 посредством твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Собирали селезенки и лимфатические узлы у соответствующих мышей. Собирали В-клетки и сливали с клетками миеломной линии.
Продукты слияния разводили серийно в сорока 96-луночных планшетах до уровня, близкого к клональному. Для последующего слияния отбирали двух мышей линии AJ, у которых в сыворотке была обнаружена самая высокая активность антител к GDF15 посредством ELISA. Собирали селезенки и лимфатические узлы у соответствующих мышей. Собирали В-клетки и сливали с клетками миеломной линии. Продукты слияния разводили серийно в сорока 96-луночных планшетах до уровня, близкого к клональному.
Приблизительно 3840 образцов надосадочной жидкости культуры слитых клеток подвергали скринингу посредством ELISA в отношении связывания с rhGDF15. В общей сложности для 172 образцов надосадочной жидкости, содержащих антитела к GDF15, дополнительно получали характеристики in vitro. Выбирали, субклонировали и размножали панель гибридом. Антитела выделяли, а затем очищали с помощью аффинной хроматографии на смоле с белком G в стандартных условиях.
Пример 7. Анализ последовательности антител
Изотип легкой цепи и изотип тяжелой цепи каждого моноклонального антитела в примере 6 определяли с применением набора для изотипирования моноклональных антител мышей IsoStrip™ в соответствии с инструкциями разработчика набора (Roche Applied Science, Индианаполис, Индиана). Было установлено, что все антитела содержат легкую каппа-цепь и тяжелую цепь IgG1 или IgG2b.
Вариабельные области тяжелой и легкой цепей моноклональных антител мыши секвенировали с применением 5'-RACE (быстрой амплификации концов кДНК). Общую РНК экстрагировали из каждой линии клеток гибридомы, продуцирующих моноклональные антитела, с применением набора для получения минипрепаратов RNeasy® в соответствии с инструкциями разработчика набора (Qiagen, Валенсия, Калифорния). Получали первую цепь кДНК полной длины, содержащую 5'-концы, с применением набора для RACE-амплификации кДНК SMARTer™ (Clontech, Маунтин-Вью, Калифорния) в соответствии с инструкциями разработчика набора для 5'-RACE.
Вариабельные области легкой (каппа) и тяжелой (IgG1 или IgG2b) цепей амплифицировали с помощью ПЦР с применением KOD-полимеразы для ПЦР с горячим стартом (EMD Chemicals, Г иббстаун, Нью-Джерси) в соответствии с инструкциями разработчика набора. Для амплификации 5'-концов кДНК в сочетании с набором для RACE-амплификации к ДНК SMARTer™ применяли праймер, представляющий собой смесь универсальных праймеров A (Clontech), смесь 5'-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3' (SEQ ID NO: 233) и 5'-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3' (SEQ ID NO: 225), в качестве 5'-праймера. Вариабельные области тяжелой цепи амплифицировали с применением вышеуказанных 5'-праймеров и специфического 3'праймера для константной области IgG1, 5'-TATGCAAGGCTTACAACCACA-3' (SEQ ID NO: 226), или специфического 3'-праймера для константной области IgG2b, 5'-AGGACAGGGGTTGATTGTTGA-3' (SEQ ID NO: 227). Вариабельные области каппа-цепи сначала амплифицировали с вышеуказанными 5'праймерами и специфическим 3'-праймером для константной области каппа-цепи, 5'-CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT-3' (SEQ ID NO: 228). Легкие цепи были подвергнуты второму, гнездовому, раунду ПЦР с применением 5'-праймера, представляющего собой универсальный праймер А для гнездовой ПЦР (Clontech), 5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3' (SEQ ID NO: 229), и специфического 3'-праймера для гнездовой ПЦР для константной области каппа-цепи, 5'-CGACTGAGGCACCTCCAGATGTT-3' (SEQ ID NO: 230). Отдельные продукты ПЦР очищали с применением набора для очистки продуктов ПЦР Qiaquick® либо выделяли с помощью электрофореза в агарозном геле и очищали с применением набора для выделения ДНК из геля Qiaquick® в соответствии с инструкциями разработчика набора (Qiagen). Продукты ПЦР затем клонировали в плазмиду pCR®4Blunt с применением набора для клонирования продуктов ПЦР Zero Blunt® TOPO® в соответствии с инструкциями разработчика набора (Invitrogen) и вводили путем трансформации в бактерию DH5-a (Invitrogen) посредством стандартных методик молекулярной биологии. Плазмидную ДНК, выделенную из трансформированных бактериальных клонов, секвенировали с применением прямого праймера М13 (5'GTaACGACGGCCAGT-3') (SEQ ID NO: 231) и обратного праймера M13 (5'-CAGGaCAGCTATGACC-3') (SEQ ID NO: 232) от Beckman Genomics (Дэнверс, Массачусетс) с применением стандартных способов дидезоксисеквенирования ДНК для идентификации последовательностей вариабельной области. Последовательности анализировали с применением программного обеспечения Vector NTI (Invitrogen) и вебсервера EVIGT/V-Quest (imgt.cines.fr) для идентификации и подтверждения последовательностей вариабельной области.
- 30 038645
Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие, и последовательности белка, определяющие вариабельные области моноклональных антител мыши, приведены ниже (аминоконцевые последовательности сигнальных пептидов не показаны). Последовательности CDR (определение согласно Kabat) в аминокислотных последовательностях выделены жирным шрифтом и подчеркиванием.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 01G06 (SEQ ID NO: 39) gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc
121 catggaaaga gccttgagtg gattggacaa attaatccta acaatggtgg tattttcttc
181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccaa tacagccttc
241 atggaggtcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca
301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 01G06 (SEQ ID NO: 40) evllqqsgpe Ivkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigg inpnnggiff nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антитела 01G06 (SEQ ID NO: 75) gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc atcacatgtc gaacaagtga gaatcttcac aattatttag catggtatca gcagaaacag
121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca
181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct
241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagta gtccttacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaataaa a
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 01G06 (SEQ ID NO: 76) diqmtqspas Isasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps rfsgsgsgtq yslkinslqp edfqsyycqh fwsspytfqq qtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 03G05 (SEQ ID NO: 41) caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga ttcactgggt gaaccagagg
121 cctggacaag gccttgagtg gattggagac attaatccta gcaacggccg tagtaagtat
181 aatgagaagt tcaagaacaa ggccacaatg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac
241 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagaggtt
301 ctggatggtg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 03G05 (SEQ ID NO: 42) qvqlqqpgae Ivkpgasvki sckasgytft sywihwvnqr pgqglewigd inpsngrsky nekfknkatm tadkssntay mqlssltsed savyycarev Idgamdywqq gtsvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антитела 03G05 (SEQ ID NO: 77) gacattgtgt tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gaactggttc
121 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggctcc
181 ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat
241 cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg
301 acgttcggtg gaggctccaa gctggaaatc aaa
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 03G05 (SEQ ID NO: 78) divltqspas lavslgqrat iscrasesyd nygisfmnwf qqkpgqppkl liyaasnqgs gvparfsgsg sgtdfslnih pmeeddtamy fcqqskevpw tfgggsklei k
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 04F08 (SEQ ID NO: 43) caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtgac ctggattcgt
121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc
181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa caaccaggta
241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaacg
301 gggtatagta acttgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 04F08 (SEQ ID NO: 44) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvtwir qpsgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt iskdtsnnqv flkitsvdta dtatyycaqt gysnlfaywq qgtlvtvsa
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антитела 04F08 (SEQ ID NO: 79)
- 31 038645 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaatta
121 ggacaatctc ctaaaacact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat
181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct
241 gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgtacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaataaa a
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 04F08 (SEQ
ID NO: 80) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnyawyqqkl gqspktliys asyrysqvpd rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfegg ynsypytfqq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 06С11 (SEQ ID NO: 45) caggttactc tgaaagagte tggccctggg atattgeage cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgaac acttatggta tgggtgtgag etggattegt
121 cagccttcag gaaagggtet ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc
181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atgcctccaa caaccgggtc
241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaaga
301 ggttatgatg attactgggg ttactggggc caagggactc tggtcactat ctctgca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 06С11 (SEQ ID NO: 46) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisa
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антитела 06С11 (SEQ ID NO: 81) gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtttca acagaaacca
121 ggtcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcttacc ggtacagtgg agtccctgat
181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcattctca ccatcagcaa tgtgcagtct
241 gaagacctgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atcctctcac gtteggtget
301 gggaccaagc tggagctgaa a
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 06С11 (SEQ ID NO: 82) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysqvpd rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfegg ynnypltfga gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 08G01 (SEQ ID NO: 47) gaggteetge tgcaacagtc tggacctgag gtggtgaagc ctggggcttc agtgaagata ccctgcaagg ettetggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc
121 catggaaaga geettgagtg gattggagag attaatccta acaatggtgg tactttctac
181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac
241 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac aetgeagtet attactgtgc aagagaggca
301 attactacgg taggegetat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 08G01 (SEQ ID NO: 48) evllqqsgpe vvkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewige inpnnggtfy nqkfkgkatl tvdkssstay melrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антитела 08G01 (SEQ ID NO: 83) gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc etatetgeat ctgtgggaga aactgtcacc atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag
121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtetataat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca
181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattetetea agatcaacag cctgcagcct
241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagtt ctccttacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaataaa a
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 08G01 (SEQ ID NO: 84) diqmtqspas isasvgetvt itcrasgnih nylawyqqkq gkspqllvyn aktladgvps rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 14F11 (SEQ ID NO: 49) caggttactc tgaaagagte tggccctgga atattgeage cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg etggattegt
121 cagccttcag gaaagggtet agagtggctg gcagacattt ggtgggatga cgataagtac
181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag caatgaggta
241 ttcctcaaga tcgccattgt ggacactgca gatactgcca cttactactg tgetegaaga
301 ggtcactact etgetatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 14F11 (SEQ ID NO: 50) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антите
- 32 038645 ла 14F11 (SEQ ID NO: 85) gacattgtaa tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca
121 gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg ccatcctacc ggtacagtgg agtccctgat
181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct
241 gaagacttgg cagaatattt ctgtcagcaa tataacagct atcctcacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaatgaa a
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 14F11 (SEQ
ID NO: 86) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasgnvg tnyawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfegg ynsyphtfgq gtklemk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела 17В11 (SEQ ID NO: 51) caggttactc tgaaagagte tggccctggg atattgeage cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ttggattcgt
121 cagccttcag gaaagggtet ggagtggctg gcacacaatg actgggatga tgacaagcgc
181 tataagteat ccctgaagag ccggctcaca atatccaagg atacctccag aaaccaggta
241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgetegaaga
301 gttgggggat tagagggeta ttttgattac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc
361 tea
Последовательность белка, определяющая вариабельную область тяжелой цепи антитела 17В11 (SEQ ID NO: 52) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tsgmgvswir qpsgkglewl ahndwdddkr yksslksrlt iskdtsrnqv flkitsvdta dtatyycarr vgglegyfdy wgqgttltvs 121 s
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область каппа-цепи антитела 17В11 (SEQ ID NO: 87) gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc atctcatgca gggccagcca aagtgteagt acatctaggt ttagttatat gcactggttc
121 caacagaaac caggacaggc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct
181 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat
241 cctgtggagg gggaggatac tgcaacatat taetgteage acagttggga gattccgtac
301 aegtteggag gggggaccaa getggaaata aaa
Последовательность белка, определяющая вариабельную область каппа-цепи антитела 17В11 (SEQ ID NO: 88) divltqspas lavslgqrat iscrasgsvs tsrfsymhwf qqkpgqapkl likyasnles gvparfsgsg sgtdftlnih pvegedtaty yeghsweipy tfgggtklei k
Аминокислотные последовательности, определяющие вариабельные области тяжелых цепей иммуноглобулина для антител, полученных в примере 6, выравнены на фиг. 10. Аминоконцевые последовательности сигнальных пептидов (для экспрессии/секреции) не показаны. CDRb CDR2 и CDR3 (определение согласно Kabat) обозначены рамками. На фиг. 11 представлено выравнивание отдельных последовательностей CDRb CDR2 и CDR3 для каждого антитела.
Аминокислотные последовательности, определяющие вариабельные области легких цепей иммуноглобулина для антител в примере 6, выравнены на фиг. 12. Аминоконцевые последовательности сигнальных пептидов (для экспрессии/секреции) не показаны. CDRb CDR2 и CDR3 обозначены рамками. На фиг. 13 представлено выравнивание отдельных последовательностей CDRb CDR2 и CDR3 для каждого антитела.
В табл. 2 приведены SEQ ID NO каждой последовательности, обсуждаемой в этом примере. Таблица 2
SEQ. ID NO. Нуклеиновая кислота или белок
39 01G06 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая кислота
40 01G06 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
75 01G06 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
76 01G06 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
1 01G06 CDRi тяжелой цепи
7 01G06 CDR2 тяжелой цепи
15 01G06 CDR3 тяжелой цепи
21 01G06 CDRi легкой цепи (каппа)
26 01G06 CDR2 легкой цепи (каппа)
32 01G06 CDR3 легкой цепи (каппа)
- 33 038645
SEQ. ID NO. Нуклеиновая кислота или белок
41 03G05 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая кислота
42 03G05 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
77 03G05 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
78 03G05 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
2 03G05 CDRi тяжелой цепи
8 03G05 CDR2 тяжелой цепи
16 03G05 CDR3 тяжелой цепи
22 03G05 CDRi легкой цепи (каппа)
27 03G05 CDR2 легкой цепи (каппа)
33 03G05 CDR3 легкой цепи (каппа)
43 04F08 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая кислота
44 04F08 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
79 04F08 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
80 04F08 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
3 04F08 CDRi тяжелой цепи
9 04F08 CDR2 тяжелой цепи
17 04F08 CDR3 тяжелой цепи
23 04F08 CDRi легкой цепи (каппа)
28 04F08 CDR2 легкой цепи (каппа)
34 04F08 CDR3 легкой цепи (каппа)
45 06С11 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая кислота
46 06С11 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
81 06С11 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
82 06С11 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
4 06С11 CDRi тяжелой цепи
9 06С11 CDR2 тяжелой цепи
18 06С11 CDR3 тяжелой цепи
23 06С11 CDRi легкой цепи (каппа)
28 06С11 CDR2 легкой цепи (каппа)
35 06С11 CDR3 легкой цепи (каппа)
47 08G01 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая кислота
48 08G01 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
83 08G01 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
84 08G01 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
1 08G01 CDRi тяжелой цепи
10 08G01 CDR2 тяжелой цепи
15 08G01 CDR3 тяжелой цепи
24 08G01 CDRi легкой цепи (каппа)
29 08G01 CDR2 легкой цепи (каппа)
32 08G01 CDR3 легкой цепи (каппа)
49 14F11 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая
50 кислота 14F11 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
- 34 038645
SEQ. ID NO. Нуклеиновая кислота или белок
85 14F11 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
86 14F11 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
5 14F11 CDRi тяжелой цепи
11 14F11 CDR2 тяжелой цепи
19 14F11 CDR3 тяжелой цепи
23 14F11 CDRi легкой цепи (каппа)
30 14F11 CDR2 легкой цепи (каппа)
36 14F11 CDR3 легкой цепи (каппа)
51 17В11 Вариабельная область тяжелой цепи—нуклеиновая кислота
52 17В11 Вариабельная область тяжелой цепи—белок
87 17В11 Вариабельная область легкой цепи (каппа)— нуклеиновая кислота
88 17В11 Вариабельная область легкой цепи (каппа)—белок
6 17В11 CDRi тяжелой цепи
12 17В11 CDR2 тяжелой цепи
20 17В11 CDR3 тяжелой цепи
25 17В11 CDRi легкой цепи (каппа)
31 17В11 CDR2 легкой цепи (каппа)
37 17В11 CDR3 легкой цепи (каппа)
Последовательности CDR тяжелых цепей моноклональных антител мыши (определения согласно Kabat, Chothia и IMGT) показаны в табл. 3.
Таблица 3
Kabat
CDRI CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFKG (SEQ ID NO:7) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 40
03G05 SYWIH (SEQ ID NO: 2) DINPSNGRSKYNEKFKN (SEQ ID NO:8) EVLDGAMDY (SEQ ID NO: 16) 42
04F08 TYGMGVT (SEQ ID NO:3) HIYWDDDKRYNPSLKS (SEQ ID NO:9) TGYSNLFAY (SEQ ID NO: 17) 44
06С11 TYGMGVS (SEQ ID NO:4) HIYWDDDKRYNPSLKS (SEQ ID NO:9) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 46
08G01 DYNMD (SEQ ID NO:1) EINPNNGGTFYNQKFKG (SEQ ID NO: 10) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 48
14F11 TYGMGVG (SEQ ID NO: 5) DIWWDDDKYYNPSLKS (SEQ ID NO: 11) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 50
17В11 TSGMGVS (SEQ ID NO: 6) HNDWDDDKRYKSSLKS (SEQ ID NO: 12) RVGGLEGYFDY (SEQ ID NO:20) 52
- 35 038645
Chothia
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 40
03G05 GYTFTSY (SEQ ID NO: 128) NPSNGR (SEQ ID NO: 144) EVLDGAMDY (SEQ ID NO: 16) 42
04F08 GFSLSTYGM (SEQ ID NO: 130) YWDDD (SEQ ID NO: 145) TGYSNLFAY (SEQ ID NO: 17) 44
06С11 GFSLNTYGM (SEQ ID NO: 132) YWDDD (SEQ ID NO: 145) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 46
08G01 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 48
14F11 GFSLSTYGM (SEQ ID NO: 130) WWDDD (SEQ ID NO: 146) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 50
17В11 GFSLSTSGM (SEQ ID NO: 134) DWDDD (SEQ ID NO: 147) RVGGLEGYFDY (SEQ ID NQ:20) 52
IMGT
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 40
03G05 GYTFTSYW (SEQ ID NO: 138) INPSNGRS (SEQ ID NO: 149) AREVLDGAMDY (SEQ ID NO: 155) 42
04F08 GFSLSTYGMG (SEQ ID NO: 140) IYWDDDK (SEQ ID NO: 150) AQTGYSNLFAY (SEQ ID NO: 156) 44
06С11 GFSLNTYGMG (SEQ ID NO: 141) IYWDDDK (SEQ ID NO: 150) AQRGYDDYWGY (SEQ ID NO: 157) 46
08G01 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGT (SEQ ID NO: 151) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 48
14F11 GFSLSTYGMG (SEQ ID NO: 140) IWWDDDK (SEQ ID NO: 152) ARRGHYSAMDY (SEQ ID NO: 158) 50
17В11 GFSLSTSGMG (SEQ ID NO: 142) NDWDDDK (SEQ ID NO: 153) ARRVGGLEGYFDY (SEQ ID NO: 159) 52
Последовательности CDR легких каппа-цепей моноклональных антител мыши (определения согласно Kabat, Chothia и IMGT) показаны в табл. 4.
Таблица 4
Kabat/Chothia
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
01G06 RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSSPYT (SEQ ID NO: 32) 76
03G05 RASES VDNYGISFMN (SEQ ID NO:22) AASNQGS (SEQ ID NO:27) QQSKEVPWT (SEQ ID NO:33) 78
04F08 KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SASYRYS (SEQ ID NO:28) QQYNSYPYT (SEQ ID NO: 34) 80
06C11 KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SASYRYS (SEQ ID NO:28) QQYNNYPLT (SEQ ID NO: 35) 82
08G01 RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:24) NAKTLAD (SEQ ID NO:29) QHFWSSPYT (SEQ ID NO: 32) 84
14F11 KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SPSYRYS (SEQ ID NO:30) QQYNSYPHT (SEQ ID NO: 36) 86
17B11 RASQSVSTSRFSYMH (SEQ ID NO:25) YASNLES (SEQ ID NO:31) QHSWEIPYT (SEQ ID NO: 37) 88
IMGT
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
01G06 ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO: 32) 76
03G05 ESVDNYGISF (SEQ ID NO: 161) AAS QQSKEVPWT (SEQ ID NO:33) 78
04F08 QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SAS QQYNSYPYT (SEQ ID NO: 34) 80
06C11 QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SAS QQYNNYPLT (SEQ ID NO: 35) 82
08G01 GNIHNY (SEQ ID NO: 163) NAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO: 32) 84
14F11 QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SPS QQYNSYPHT (SEQ ID NO: 36) 86
17B11 QSVSTSRFSY (SEQ ID NO: 164) YAS QHSWEIPYT (SEQ ID NO: 37) 88
Для создания последовательностей полной тяжелой или каппа-цепи антитела каждую вышеуказанную последовательность вариабельной области объединяют с соответствующей ей константной областью. Например, полная тяжелая цепь содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, после которой расположена последовательность константной области тяжелой цепи IgG1 или IgG2b мыши, а полная каппа-цепь содержит последовательность вариабельной области каппа-цепи, после кото- 36 038645 рой расположена последовательность константной области легкой каппа-цепи мыши.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая константную область тяжелой цепи IgG1 мыши (SEQ ID NO: 165) дссаааасда cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc
121 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac
181 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc
1241 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg
301 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc
361 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg
421 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag
481 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc
541 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc
601 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg
661 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc
721 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg
781 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct
841 tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc
901 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac
961 tctcctggta aa
Последовательность белка, определяющая константную область тяжелой цепи IgG1 мыши (SEQ ID NO: 166) akttppsvyp lapgsaaqtn smvtlgclvk gyfpepvtvt wnsgslssgv htfpavlqsd 61 lytlsssvtv psstwpsetv tcnvahpass tkvdkkivpr dcgckpcict vpevssvfif 121 ppkpkdvlti tltpkvtcvv vdiskddpev qfswfvddve vhtaqtqpre eqfnstfrsv 181 selpimhqdw Ingkefkcrv nsaafpapie ktisktkgrp kapqvytipp pkeqmakdkv 241 sltcmitdff peditvewqw ngqpaenykn tqpimdtdgs yfvysklnvq ksnweagntf 301 tcsvlheglh nhhtekslsh spgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая константную область тяжелой цепи IgG2b мыши (SEQ ID NO: 167) gccaaaacaa cacccccatc agtctatcca ctggcccctg ggtgtggaga tacaactggt tcctccgtga ctctgggatg cctggtcaag ggctacttcc ctgagtcagt gactgtgact
121 tggaactctg gatccctgtc cagcagtgtg cacaccttcc cagctctcct gcagtctgga
181 ctctacacta tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggccaag tcagaccgtc
1241 acctgcagcg ttgctcaccc agccagcagc accacggtgg acaaaaaact tgagcccagc
301 gggcccattt caacaatcaa cccctgtcct ccatgcaagg agtgtcacaa atgcccagct
361 cctaacctcg agggtggacc atccgtcttc atcttccctc caaatatcaa ggatgtactc
421 atgatctccc tgacacccaa ggtcacgtgt gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca
481 gacgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac gtggaagtac acacagctca gacacaaacc
541 catagagagg attacaacag tactatccgg gtggtcagca ccctccccat ccagcaccag
601 gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc aaggtcaaca acaaagacct cccatcaccc
661 atcgagagaa ccatctcaaa aattaaaggg ctagtcagag ctccacaagt atacatcttg
721 ccgccaccag cagagcagtt gtccaggaaa gatgtcagtc tcacttgcct ggtcgtgggc
781 ttcaaccctg gagacatcag tgtggagtgg accagcaatg ggcatacaga ggagaactac
841 aaggacaccg caccagtcct agactctgac ggttcttact tcatatatag caagctcaat
901 atgaaaacaa gcaagtggga gaaaacagat tccttctcat gcaacgtgag acacgagggt
961 ctgaaaaatt actacctgaa gaagaccatc tcccggtctc cgggtaaa
Последовательность белка, определяющая константную область тяжелой цепи IgG2b мыши (SEQ ID NO: 168) akttppsvyp lapgcgdttg ssvtlgclvk gyfpesvtvt wnsgslsssv htfpallqsg 61 lytmsssvtv psstwpsqtv tcsvahpass ttvdkkleps gpistinpcp pckechkcpa 121 pnleggpsvf ifppnikdvl misltpkvtc vvvdvseddp dvqiswfvnn vevhtaqtqt 181 hredynstir wstlpiqhq dwmsgkefkc kvnnkdlpsp iertiskikg Ivrapqvyil 241 pppaeqlsrk dvsltclvvg fnpgdisvew tsnghteeny kdtapvldsd gsyfiyskln 301 mktskwektd sfscnvrheg Iknyylkkti srspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая константную область легкой каппа-цепи мыши (SEQ ID NO: 169) cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag
121 tggaagattg atggcagtga acgacaaaat ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac
181 agcaaagaca gcacctacag catgagcagc accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa
241 cgacataaca gctatacctg tgaggccact cacaagacat caacttcacc cattgtcaag
301 agcttcaaca ggaatgagtg t
Последовательность белка, определяющая константную область легкой каппа-цепи мыши (SEQ ID NO: 170) radaaptvsi fppsseqlts ggasvvcfln nfypkdinvk wkidgserqn gvlnswtdqd skdstysmss tltltkdeye rhnsytceat hktstspivk sfnrnec
Следующие последовательности представляют действительные или предполагаемые последовательности тяжелых и легких цепей полной длины (т.е. содержащие последовательности как вариабельной, так и константной областей) для каждого антитела, описанного в данном примере. Сигнальные последовательности для надлежащей секреции антител (например, сигнальные последовательности на 5'конце последовательностей ДНК или амино-конце последовательностей белка) не показаны в последова
- 37 038645 тельностях тяжелых и легких цепей полной длины, раскрытых в данном документе, и не включены в конечный секретируемый белок. Также не показаны стоп-кодоны для терминации трансляции, необходимые на 3'-конце последовательностей ДНК. Выбор сигнальной последовательности и/или стоп-кодона для экспрессии раскрытых последовательностей тяжелых цепей и легких цепей иммуноглобулина полной длины находится в пределах компетенции среднего специалиста в данной области. Также предполагается, что последовательности вариабельной области можно лигировать с другими последовательностями константной области с получением активных тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина полной длины.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 01G06 (SEQ ID NO: 99) gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc
121 catggaaaga gccttgagtg gattggacaa attaatccta acaatggtgg tattttcttc
181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccaa tacagccttc
241 atggaggtcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca
301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca
361 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac
421 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc
481 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac
541 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc
601 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg
661 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc
721 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg
781 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag
841 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc
901 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc
961 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg
1021 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc
1081 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg
1141 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct
1201 tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc
1261 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac
1321 tctcctggta aa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 01G06 (SEQ ID NO: 100) evllqqsgpe Ivkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigq inpnnggiff 61 nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss 121 akttppsvyp lapgsaaqtn smvtlgclvk gyfpepvtvt wnsgslssgv htfpavlqsd 181 lytlsssvtv psstwpsetv tcnvahpass tkvdkkivpr dcgckpcict vpevssvfif 241 ppkpkdvlti tltpkvtcvv vdiskddpev qfswfvddve vhtaqtqpre eqfnstfrsv 301 selpimhqdw Ingkefkcrv nsaafpapie ktisktkgrp kapqvytipp pkeqmakdkv 361 sltcmitdff peditvewqw ngqpaenykn tqpimdtdgs yfvysklnvq ksnweagntf 421 tcsvlheglh nhhtekslsh spgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 01G06 (SEQ ID NO: 101) gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc atcacatgtc gaacaagtga gaatcttcac aattatttag catggtatca gcagaaacag
121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca
181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct
241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagta gtccttacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca
361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac
421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg
481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg
541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca
601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 01G06 (SEQ ID NO: 102) diqmtqspas Isasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleikrad aaptvsifpp
121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt
181 Itkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 03G05 (SEQ ID NO: 103)
- 38 038645 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga ttcactgggt gaaccagagg
121 cctggacaag gccttgagtg gattggagac attaatccta gcaacggccg tagtaagtat
181 aatgagaagt tcaagaacaa ggccacaatg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac
241 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagaggtt
301 ctggatggtg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctcagccaaa
361 acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg
421 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac
481 tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac
541 actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc
601 aacgttgccc acccggccag cagcaccaag gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt
661 ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca
721 aagcccaagg atgtgctcac cattactctg actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac
781 atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac
841 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa
901 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt
961 gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct
1021 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg
1081 acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg
1141 cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc
1201 gtctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc
1261 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct
1321 ggtaaa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 03G05 (SEQ ID NO: 104) qvqlqqpgae Ivkpgasvkl sckasgytft sywihwvnqr pgqglewigd inpsngrsky nekfknkatm tadkssntay mqlssltsed savyycarev Idgamdywgq gtsvtvssak
121 ttppsvypla pgsaaqtnsm vtlgclvkgy fpepvtvtwn sgslssgvht fpavlqsdly
181 tlsssvtvps stwpsetvtc nvahpasstk vdkkivprdc gckpcictvp evssvfifpp
241 kpkdvltitl tpkvtcvvvd iskddpevqf swfvddvevh taqtqpreeq fnstfrsvse
301 Ipimhqdwln gkefkcrvns aafpapiekt isktkgrpka pqvytipppk eqmakdkvsl
361 tcmitdffpe ditvewqwng qpaenykntq pimdtdgsyf vysklnvqks nweagntftc
421 svlheglhnh htekslshsp gk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 03G05 (SEQ ID NO: 105) gacattgtgt tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gaactggttc
121 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggctcc
181 ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat
241 cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg
301 acgttcggtg gaggctccaa gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc
361 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg
421 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa
481 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc
541 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc
601 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 03G05 (SEQ ID NO: 106) divltqspas lavslgqrat iscrasesvd nygisfmnwf qqkpgqppkl liyaasnqgs gvparfsgsg sgtdfslnih pmeeddtamy fcqqskevpw tfgggsklei kradaaptvs
121 ifppsseqlt sggasvvcfl nnfypkdinv kwkidgserq ngvlnswtdq dskdstysms
181 stltltkdey erhnsytcea thktstspiv ksfnrnec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 04F08 (SEQ ID NO: 107) caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtgac ctggattcgt
121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc
181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccaa caaccaggta
241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaacg
301 gggtatagta acttgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc
361 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc
421 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg
481 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc
541 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc
601 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat
661 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc
721 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta
781 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg
841 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt
901 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac
961 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag
1021 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt
1081 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat
1141 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac
1201 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc
1261 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct
1321 cctggtaaa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 04F08 (SEQ ID NO: 108)
- 39 038645 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvtwir qpsgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt iskdtsnnqv flkitsvdta dtatyycaqt gysnlfaywg qgtlvtvsaa
121 kttppsvypl apgsaaqtns mvtlgclvkg yfpepvtvtw nsgslssgvh tfpavlqsdl
181 ytlsssvtvp sstwpsetvt cnvahpasst kvdkkivprd cgckpcictv pevssvfifp
241 pkpkdvltit Itpkvtcvvv diskddpevq fswfvddvev htaqtqpree qfnstfrsvs
301 elpimhqdwl ngkefkcrvn saafpapiek tisktkgrpk apqvytippp keqmakdkvs
361 Itcmitdffp editvewqwn gqpaenyknt qpimdtdgsy fvysklnvqk snweagntft
421 csvlheglhn hhtekslshs pgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 04F08 (SEQ ID NO: 109) gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaatta
121 ggacaatctc ctaaaacact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat
181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct
241 gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgtacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca
361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac
421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg
481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg
541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca
601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 04F08 (SEQ ID NO: 110) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkl gqspktliys asyrysgvpd rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsypytfgg gtkleikrad aaptvsifpp
121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt
181 Itkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 06C11 (SEQ ID NO: 111) caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgaac acttatggta tgggtgtgag ctggattcgt
121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc
181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atgcctccaa caaccgggtc
241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcaaaga
301 ggttatgatg attactgggg ttactggggc caagggactc tggtcactat ctctgcagcc
361 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc
421 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg
481 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc
541 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc
601 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat
661 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc
721 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta
781 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg
841 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt
901 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac
961 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag
1021 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt
1081 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat
1141 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac
1201 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc
1261 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct
1321 cctggtaaa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 06С11 (SEQ ID NO: 112) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisaa
121 kttppsvypl apgsaaqtns mvtlgclvkg yfpepvtvtw nsgslssgvh tfpavlqsdl
181 ytlsssvtvp sstwpsetvt cnvahpasst kvdkkivprd cgckpcictv pevssvfifp
241 pkpkdvltit Itpkvtcvvv diskddpevq fswfvddvev htaqtqpree qfnstfrsvs
301 elpimhqdwl ngkefkcrvn saafpapiek tisktkgrpk apqvytippp keqmakdkvs
361 Itcmitdffp editvewqwn gqpaenyknt qpimdtdgsy fvysklnvqk snweagntft
421 csvlheglhn hhtekslshs pgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 06С11 (SEQ ID NO: 113)
- 40 038645 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtttca acagaaacca
121 ggtcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcttacc ggtacagtgg agtccctgat
181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcattctca ccatcagcaa tgtgcagtct
241 gaagacctgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atcctctcac gttcggtgct
301 gggaccaagc tggagctgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca
361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac
421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg
481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg
541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca
601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 06С11 (SEQ ID NO: 114) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfcqq ynnypltfga gtklelkrad aaptvsifpp
121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt
181 Itkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG2b) 08G01 (SEQ ID NO: 115) gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgag gtggtgaagc ctggggcttc agtgaagata ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagagc
121 catggaaaga gccttgagtg gattggagag attaatccta acaatggtgg tactttctac
181 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac
241 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagagaggca
301 attactacgg taggcgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca
361 gccaaaacaa cacccccatc agtctatcca ctggcccctg ggtgtggaga tacaactggt
421 tcctccgtga ctctgggatg cctggtcaag ggctacttcc ctgagtcagt gactgtgact
481 tggaactctg gatccctgtc cagcagtgtg cacaccttcc cagctctcct gcagtctgga
541 ctctacacta tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggccaag tcagaccgtc
601 acctgcagcg ttgctcaccc agccagcagc accacggtgg acaaaaaact tgagcccagc
661 gggcccattt caacaatcaa cccctgtcct ccatgcaagg agtgtcacaa atgcccagct
721 cctaacctcg agggtggacc atccgtcttc atcttccctc caaatatcaa ggatgtactc
781 atgatctccc tgacacccaa ggtcacgtgt gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca
841 gacgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac gtggaagtac acacagctca gacacaaacc
901 catagagagg attacaacag tactatccgg gtggtcagca ccctccccat ccagcaccag
961 gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc aaggtcaaca acaaagacct cccatcaccc
1021 atcgagagaa ccatctcaaa aattaaaggg ctagtcagag ctccacaagt atacatcttg
1081 ccgccaccag cagagcagtt gtccaggaaa gatgtcagtc tcacttgcct ggtcgtgggc
1141 ttcaaccctg gagacatcag tgtggagtgg accagcaatg ggcatacaga ggagaactac
1201 aaggacaccg caccagtcct agactctgac ggttcttact tcatatatag caagctcaat
1261 atgaaaacaa gcaagtggga gaaaacagat tccttctcat gcaacgtgag acacgagggt
1321 ctgaaaaatt actacctgaa gaagaccatc tcccggtctc cgggtaaa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG2b) 08G01 (SEQ ID NO: 116) evllqqsgpe vvkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewige inpnnggtfy nqkfkgkatl tvdkssstay melrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss
121 akttppsvyp lapgcgdttg ssvtlgclvk gyfpesvtvt wnsgslsssv htfpallqsg
181 lytmsssvtv psstwpsqtv tcsvahpass ttvdkkleps gpistinpcp pckechkcpa
241 pnleggpsvf ifppnikdvl misltpkvtc vvvdvseddp dvqiswfvnn vevhtaqtqt
301 hredynstir vvstlpiqhq dwmsgkefkc kvnnkdlpsp iertiskikg Ivrapqvyil
361 pppaeqlsrk dvsltclvvg fnpgdisvew tsnghteeny kdtapvldsd gsyfiyskln
421 mktskwektd sfscnvrheg Iknyylkkti srspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 08G01 (SEQ ID NO: 117) gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag
121 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca
181 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct
241 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagtt ctccttacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca
361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac
421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg
481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg
541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca
601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 08G01 (SEQ ID NO: 118) diqmtqspas Isasvgetvt itcrasgnih nylawyqqkq gkspqllvyn aktladgvps rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleikrad aaptvsifpp
121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt
181 Itkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 14F11 (SEQ ID NO: 119)
- 41 038645 caggttactc tgaaagagtc tggccctgga atattgcagc cctcccagac cctcagtctg acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtagg ctggattcgt
121 cagccttcag gaaagggtct agagtggctg gcagacattt ggtgggatga cgataagtac
181 tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag caatgaggta
241 ttcctcaaga tcgccattgt ggacactgca gatactgcca cttactactg tgctcgaaga
301 ggtcactact ctgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc
361 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc
421 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg
481 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc
541 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc
601 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat
661 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc
721 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta
781 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg
841 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt
901 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac
961 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag
1021 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt
1081 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat
1141 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac
1201 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc
1261 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct
1321 cctggtaaa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 14F11 (SEQ ID NO: 120) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvssa
121 kttppsvypl apgsaaqtns mvtlgclvkg yfpepvtvtw nsgslssgvh tfpavlqsdl
181 ytlsssvtvp sstwpsetvt cnvahpasst kvdkkivprd cgckpcictv pevssvfifp
241 pkpkdvltit Itpkvtcvvv diskddpevq fswfvddvev htaqtqpree qfnstfrsvs
301 elpimhqdwl ngkefkcrvn saafpapiek tisktkgrpk apqvytippp keqmakdkvs
361 Itcmitdffp editvewqwn gqpaenyknt qpimdtdgsy fvysklnvqk snweagntft
421 csvlheglhn hhtekslshs pgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 14F11 (SEQ ID NO: 121) gacattgtaa tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca
121 gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg ccatcctacc ggtacagtgg agtccctgat
181 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct
241 gaagacttgg cagaatattt ctgtcagcaa tataacagct atcctcacac gttcggaggg
301 gggaccaagc tggaaatgaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca
361 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac
421 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg
481 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg
541 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca
601 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 14F11 (SEQ ID NO: 122) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsyphtfgg gtklemkrad aaptvsifpp
121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt
181 Itkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 17B11 (SEQ ID NO: 123)
1 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg
61 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ttggattcgt
121 cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacaatg actgggatga tgacaagcgc
181 tataagtcat ccctgaagag ccggctcaca atatccaagg atacctccag aaaccaggta
241 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaaga
301 gttgggggat tagagggcta ttttgattac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc
361 tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact
421 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg
481 acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct
541 gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc
601 gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc
661 agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc
721 ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt
781 gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg
841 gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca
901 gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg
961 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga
1021 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa
1081 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag
1141 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc
1201 tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact
1261 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc
1321 cactctcctg gtaaa
Последовательность белка, определяющая последовательность тяжелой цепи полной длины (вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1) 17B11 (SEQ ID NO: 124)
- 42 038645 qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tsgmgvswir qpsgkglewl ahndwdddkr yksslksrlt iskdtsrnqv flkitsvdta dtatyycarr vgglegyfdy wgqgttltvs
121 sakttppsvy plapgsaaqt nsmvtlgclv kgyfpepvtv twnsgslssg vhtfpavlqs
181 dlytlsssvt vpsstwpset vtcnvahpas stkvdkkivp rdcgckpcic tvpevssvfi
241 fppkpkdvlt itltpkvtcv vvdiskddpe vqfswfvddv evhtaqtqpr eeqfnstfrs
301 vselpimhqd wlngkefkcr vnsaafpapi ektisktkgr pkapqvytip ppkeqmakdk
361 vsltcmitdf fpeditvewq wngqpaenyk ntqpimdtdg syfvysklnv qksnweagnt
421 ftcsvlhegl hnhhteksls hspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 17В11 (SEQ ID NO: 125) gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctaggt ttagttatat gcactggttc
121 caacagaaac caggacaggc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct
181 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat
241 cctgtggagg gggaggatac tgcaacatat tactgtcagc acagttggga gattccgtac
301 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc
361 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg
421 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa
481 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc
541 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc
601 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgt
Последовательность белка, определяющая последовательность легкой цепи полной длины (вариабельную область и константную область каппа-цепи) 17В11 (SEQ ID NO: 126) divltqspas lavslgqrat iscrasqsvs tsrfsymhwf qqkpgqapkl likyasnles gvparfsgsg sgtdftlnih pvegedtaty ycqhsweipy tfgggtklei kradaaptvs
121 ifppsseqlt sggasvvcfl nnfypkdinv kwkidgserq ngvlnswtdq dskdstysms
181 stltltkdey erhnsytcea thktstspiv ksfnrnec
В табл. 5 показано соответствие между последовательностями полной длины антител, описанных в данном примере, и таковыми, представленными в перечне последовательностей.
Таблица 5
SEQ ID NO. Нуклеиновая кислота или белок
99 01G06: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—нуклеиновая кислота
100 01G06: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—белок
101 01G06: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
102 01G06: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
103 03G05: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—нуклеиновая кислота
104 03G05: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—белок
105 03G05: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
106 03G05: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
107 04F08: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—нуклеиновая кислота
108 04F08: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—белок
109 04F08: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
ПО 04F08: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
111 06С11: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—нуклеиновая кислота
112 06С11: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—белок
113 06С11: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
114 06С11: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
115 08G01: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgG2b—нуклеиновая кислота
116 08G01: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgG2b—белок
117 08G01: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
118 08G01: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
119 14F11: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—нуклеиновая кислота
120 14F11: вариабельная область тяжелой цепи + константная
- 43 038645
область IgGl—белок
121 14F11: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
122 14F11: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
123 17В11: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—нуклеиновая кислота
124 17В11: вариабельная область тяжелой цепи + константная область IgGl—белок
125 17В11: вариабельная область + константная область каппацепи—нуклеиновая кислота
126 17В11: вариабельная область + константная область каппацепи—белок
Пример 8. Аффинность связывания
Аффинность связывания и кинетические параметры связывания антител с меченным 6Х His (SEQ ID NO: 266) рекомбинантным GDF15 человека (His-rhGDF15 (R&D Systems, Inc.)), немеченым рекомбинантным GDF15 человека (rhGDF15 (Peprotech, Роки Хилл, Нью-Джерси) и рекомбинантным GDF15 человека, полученным при слиянии Fc мыши с GDF15 человека (mFc-rhGDF15) либо являющимся вариантом, в котором Fc был ферментативно удален (отщепленным rhGDF15), определяли методом поверхностного плазмонного резонанса с применением прибора Biacore® T100 (GE Healthcare, Пискатауэй, НьюДжерси).
Антитело кролика к IgG мыши (GE Healthcare) иммобилизовали на сенсорных чипах СМ4 со слоем карбоксиметилированного декстрана (GE Healthcare) посредством реакции сочетания с аминами в соответствии со стандартным протоколом. Анализы проводили при 37°С с применением PBS, содержащего 0,05% поверхностно-активного вещества Р20, в качестве подвижного буфера. Антитела захватывались в отдельные проточные ячейки при скорости потока 10 мкл/мин. Время введения варьировали для каждого антитела так, чтобы достичь Rmax от 30 до 60 RU. 250 мкг/мл Fc мыши (Jackson ImmunoResearch, ВестГроув, Пенсильвания) вводили при 30 мкл/мин. в течение 120 с для блокирования неспецифического связывания захваченных антител с частью рекомбинантного белка GDF15, представляющей собой Fc мыши, в случае необходимости. Буфер, mFc-rhGDF15, отщепленный rhGDF15, His-rhGDF15 или rhGDF15, разбавленные подвижным буфером, вводили последовательно на эталонную поверхность (без захваченных антител) и активную поверхность (с антителами, подлежащими испытанию) в течение 240 секунд при 60 мкл/мин. Фазу диссоциации отслеживали в течение периода до 1500 секунд. Поверхность затем регенерировали путем двух 60-секундных введений 10 мМ глицина-HCl, рН 1,7 при скорости потока 30 мкл/мин. Диапазон концентрации GDF15 в испытании составлял от 30 до 0,625 нМ.
Кинетические параметры определяли с использованием кинетической функции программного обеспечения BIAevaluation (GE Healthcare) с вычитанием двух контрольных реакций. Для каждого антитела определяли следующие кинетические параметры: ka (константа скорости ассоциации), kd (константа скорости диссоциации) и KD (равновесная константа диссоциации). Значения кинетических параметров моноклональных антител в комплексе с mFc-rhGDF15, отщепленным rhGDF15, His-rhGDF15 или rhGDF15 обобщены в табл. 6, 7, 8 и 9 соответственно.
Таблица 6. Связывание антител с mFc-rhGDF15
Антитело ка (1/М*с) kd (1/с) KD (М) η
01G06 5,6Е+06 7,0Е-04 2ДЕ-10 7
03G05 1,0Е+07 6,4Е-04 6,9Е-11 3
04F08 3,6Е+06 6,4Е-04 1,9Е-10 3
06С11 4,5Е+06 6,8Е-04 1,7Е-10 5
08G01 6,0Е+06 1 ДЕ-ОЗ 1,9Е-10 4
14F11 1,7Е+06 3,ЗЕ-04 2,2Е-10 4
17В11 3,7Е+06 5ДЕ-04 1,4Е-10 3
Данные в табл. 6 демонстрируют, что KD при связывании антител с mFc-rhGDF15 составляет приблизительно 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, 150 пМ или менее, 100 пМ или менее, 75 пМ или менее или 50 пМ или менее.
Значения кинетических параметров моноклональных антител в комплексе с отщепленным rhGDF15 обобщены в табл. 7.
Таблица 7. Связывание антител с отщепленным rhGDF15
Антитело кд (1/М*с) kd (1/с) KD(M) η
01G06 7,5Е+06 8,6Е-04 1ДЕ-10 1
06С11 1,2Е+07 2,0Е-03 1,7Е-10 2
14F11 5,7Е+06 6,0Е-04 1ДЕ-10 1
Данные в табл. 7 демонстрируют, что KD при связывании антител 01G06, 06С11 и 14F11 с отщепленным rhGDF15 составляет приблизительно 200 пМ или менее, 150 пМ или менее или 100 пМ или менее.
- 44 038645
Значения кинетических параметров моноклональных антител в комплексе с His-rhGDF 15 обобщены в табл. 8.
Таблица 8. Связывание антител с His-rhGDF15
Антитело К (1/М*с) kd (1/с) KD (М) η
01G06 1,4Е+07 1 ДЕ-ОЗ 8ДЕ-11 2
06С11 2,9Е+07 1,5Е-03 5ДЕ-11 2
14F11 4,4Е+06 4,2Е-04 9,6Е-11 1
Данные в табл. 8 демонстрируют, что KD при связывании антител 01G06, 06С11 и 14F11 с HisrhGDF15 составляет приблизительно 150 пМ или менее, 100 пМ или менее, 75 пМ или менее или 50 пМ или менее.
Значения кинетических параметров моноклональных антител в комплексе с rhGDF15 обобщены в табл. 9.
Таблица 9. Связывание антител с rhGDF15
Антитело ка (1/М*с) kd (1/с) KD (М) η
01G06 2ДЕ+07 1,9Е-03 9,ЗЕ-И 1
06С11 2,2Е+07 4,6Е-03 2ДЕ-10 1
14F11 ЗДЕ+07 2,2Е-03 7ДЕ-11 1
Данные в табл. 9 демонстрируют, что KD при связывании антител 01G06, 06С11 и 14F11 с rhGDF15 составляет приблизительно 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, 150 пМ или менее, 100 пМ или менее, 75 пМ или менее или 50 пМ или менее.
Пример 9. Регрессия кахексии в модели с индукцией mFc-rhGDF15
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии (на что указывает потеря веса тела) при применении антител 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 14F11 или 17В11 в модели кахексии, индуцированной mFc-rhGDF15. mFc-rhGDF15 (2 мкг/г) вводили подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 93%, мышей распределяли случайным образом в семь групп по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG мыши в качестве контроля, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 14F11 или 17В11 в дозе 10 мг/кг. Обработку проводили один раз путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителами 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 14F11 или 17В11 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 14 и табл. 10).
Таблица 10
Г руппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mlgG)
Средство мг/кг
1 mlgG 10 77 Д данные отсутствуют
2 01G06 10 94 Д р<0,001
3 03G05 10 95Д р<0,001
4 04F08 10 95,8 р<0,001
5 06С11 10 93,8 р<0,001
7 14F11 10 95,4 р<0,001
8 17В11 10 92,8 р<0,001
Данные на фиг. 14 и в табл. 10 указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии в модели с индукцией mFc-rhGDF15 на мышах (т.е. модели на мышах, не несущих опухоли).
Пример 10. Регрессия кахексии в ксенотрансплантатной модели опухоли НТ-1080
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии (на что указывает потеря веса тела) при применении антител 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080. Клетки НТ-1080 выращивали в культуре при 37°С в атмосфере 5% СО2 с применением минимальной поддерживающей среды Игла (АТСС, № по каталогу 30-2003), содержащей 10% FxBS. Клетки инокулировали подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель в количестве 5х106 клеток на мышь в 50% матригеле. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 93%, мышей распределяли случайным образом в восемь групп по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG мыши в качестве контроля, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 в дозе 10 мг/кг. Обработку проводили каждые три дня путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителами 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 15 и табл. 11).
- 45 038645
Таблица 11
Г руппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mIgG)
Средство мг/кг
1 mIgG 10 81,4 данные отсутствуют
2 01G06 10 103,3 р<0,001
3 03G05 10 106,1 р<0,001
4 04F08 10 104,3 р<0,001
5 06С11 10 106,6 р<0,001
6 08G01 10 105,3 р<0,001
7 14F11 10 99,6 р<0,001
8 17В11 10 103,7 р<0,001
Данные на фиг. 15 и в табл. 11 указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
Проводили дополнительные исследования с антителом 01G06 для демонстрации регрессии кахексии в данной модели на мышах. Клетки НТ-1080 выращивали и инокулировали подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель, как описано выше. Когда вес тела достигал 93%, мышей распределяли случайным образом в две группы по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG мыши в качестве контроля или 01G06 в дозе 10 мг/кг. Обработку проводили один раз путем интраперитонеальной инъекции. Как представлено на фиг. 16А, обработка антителом 01G06 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом до 100% (р<0,001) (фиг. 16А).
Потребление пищи определяли путем взвешивания запасов продовольствия, выдаваемых мышам ежедневно (фиг. 16В). Значительное увеличение потребления пищи наблюдали в группе, обработанной 01G06, в течение первых трех дней после обработки. По истечении этого времени не наблюдали никаких существенных изменений по сравнению с контрольной группой (mIgG).
Потребление воды определяли путем взвешивания запасов воды, выдаваемых мышам ежедневно. Существенных изменений в потреблении воды между группами не наблюдали.
В этом эксперименте умерщвляли группу из десяти мышей в момент введения дозы (исходный уровень или 93% веса тела, без обработки) и в конце исследования (через семь дней после введения дозы mIgG или 01G06). Жировую массу гонад и икроножные мышцы удаляли хирургическим путем и взвешивали, как описано выше в примере 4, и ткани быстро замораживали в жидком азоте. Выделяли РНК из образцов икроножных мышц для определения уровней мРНК mMuRF1 и атрогина мыши с помощью RTPCR, как описано в примере 4.
Как представлено на фиг. 16С, значительное снижение массы жировой ткани гонад наблюдали через семь дней после введения дозы mIgG, но не в группе, обработанной антителом 01G06. Кроме того, у мышей, обработанных mIgG, обнаружили значительную потерю массы икроножных мышц по сравнению с группой на исходном уровне, в то время как у группы мышей, обработанной антителом 01G06, такого не обнаружили (фиг. 16D). Кроме того, уровни маркеров деградации мышц, mMuRF1 и атрогина мыши, были значительно более высокими в группе mIgG по сравнению с группой 01G06 (фиг. 16Е).
Эти результаты указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии, что определяют по потере мышечной массы, потере жировой массы и непреднамеренной потере веса в ксенотрансплантатной модели опухоли НТ-1080.
Пример 11. Регрессия кахексии в ксенотрансплантатной модели опухоли НТ-1080
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии (на что указывает потеря веса тела) при применении антитела 01G06 в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080. Клетки НТ-1080 выращивали в культуре при 37°С в атмосфере 5% СО2 с применением минимальной поддерживающей среды Игла (АТСС, № по каталогу 30-2003), содержащей 10% FBS. Клетки инокулировали подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель в количестве 5х106 клеток на мышь в 50% матригеле. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 80%, мышей распределяли случайным образом в две группы по пять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG мыши в качестве контроля, 01G06 в дозе 2 мг/кг в 1 день и 7 день. Обработку проводили путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителом 01G06 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 17А и табл. 12).
Таблица 12
Группа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mIgG)
Средство мг/кг
1 mIgG 2 66,4 данные отсутствуют
2 01G06 2 97,16 р<0,001
Данные на фиг. 17А-В и в табл. 12 указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
- 46 038645
В этом эксперименте умерщвляли группу из пяти мышей в момент введения доз (исходный уровень или потеря веса тела до 80%, без обработки) и в конце исследования (через семь дней после введения дозы mIgG или 01G06). Печень, сердце, селезенку, почки, жировую массу гонад и икроножные мышцы удаляли хирургическим путем и взвешивали. Как представлено на фиг. 17В, наблюдали значительную потерю массы печени, сердца, селезенки, почек, массы жировой ткани гонад и массы икроножных мышц через семь дней после введения дозы mIgG, но не в группе, обработанной антителом 01G06. Кроме того, у мышей, обработанных антителом 01G06, обнаружили значительный прирост массы печени и гонад по сравнению с группой на исходном уровне (фиг. 17В).
Эти результаты указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии, что определяют по потере массы ключевых органов, потере мышечной массы, потере жировой массы и непреднамеренной потере веса в ксенотрансплантатной модели опухоли НТ-1080.
Пример 12. Регрессия кахексии в ксенотрансплантатной модели опухоли K-562
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии (на что указывает потеря веса тела) при применении антител 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 в ксенотрансплантатной модели лейкоза K-562. Клетки K-562 выращивали в культуре при 37°С в атмосфере 5% СО2 с применением среды Дульбекко, модифицированной по способу Исков (АТСС, № по каталогу 30-2005), содержащей 10% FBS. Клетки инокулировали подкожно в бок самкам мышей CB17SCRFMF в возрасте 8 недель в количестве 2,5 х 106 клеток на мышь в 50% матригеле. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 93%, мышей распределяли случайным образом в восемь групп по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG мыши в качестве контроля, 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 в дозе 10 мг/кг. Обработку проводили каждые три дня путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителами 01G06, 03G05, 04F08, 06С11, 08G01, 14F11 или 17В11 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 18 и табл. 13).
Таблица 13
Г руппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mlgG)
Средство мг/кг
1 mlgG 10 90,4 данные отсутствуют
2 01G06 10 106,5 р<0,001
3 03G05 10 109,8 р<0,001
4 04F08 10 108,9 р<0,001
5 06С11 10 109,5 р<0,001
6 08G01 10 107,2 р<0,001
7 14F11 10 107,0 р<0,001
8 17В11 10 105,3 р<0,001
Данные на фиг. 18 и в табл. 13 указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели опухоли K-562.
Пример 13. Дополнительные ксенотрансплантатные модели опухолей
Антитело 01G06 испытывали в дополнительных ксенотрансплантатных моделях опухолей, в том числе в ксенотрансплантатной модели опухоли яичника TOV-21G и ксенотрансплантатной модели опухоли толстой кишки LS1034. В каждой модели применение антитела 01G06 обращало вспять потерю веса тела по сравнению с контролем с PBS (р <0,001 для модели TOV-21G и р <0,01 для модели LS1034).
Пример 14. Гуманизация антител к GDF15
В данном примере описана гуманизация и химеризация трех мышиных антител, обозначенных как 01G06, 06С11 и 14F11, и характеристика полученных гуманизированных антител. Гуманизированные антитела к GDF15 разрабатывали, подвергали созреванию аффинности посредством направленного мутагенеза CDR и оптимизировали с применением способов, известных в данной области техники. Аминокислотные последовательности преобразовывали в последовательности ДНК с оптимизированными кодонами и синтезировали содержащими (в следующем порядке): 5'-сайт рестрикции для HindIII, консенсусную последовательность Козак, участки, кодирующие аминоконцевую сигнальную последовательность, гуманизированную вариабельную область и константную область IgG1 или каппа-цепи человека, стоп-кодон и 3'-сайт рестрикции для EcoRI.
Также конструировали химерные (вариабельная область от мыши и константная область от человека) тяжелые (IgG1 человека) и легкие (каппа-цепь человека) цепи 01G06, 06С11 и 14F11. Для получения химерных антител вариабельные области от мыши сливали с константной областью от человека и синтезировали последовательности ДНК с оптимизированными кодонами, содержащие (в следующем порядке): 5'-сайт рестрикции для HindIII, консенсусную последовательность Козак, участки, кодирующие аминоконцевую сигнальную последовательность, вариабельную область от мыши и константную область IgG1 или каппа-цепи человека, стоп-кодон и 3'-сайт рестрикции для EcoRI.
Гуманизированные и химерные тяжелые цепи субклонировали в рЕЕ6.4 (Lonza, Базель, Швейцария) по сайтам HindIII и EcoRI с применением набора для клонирования продуктов ПЦР In-Fusion™ (Clontech,
- 47 038645
Маунтин-Вью, Калифорния). Гуманизированные и химерные легкие каппа-цепи субклонировали в рЕЕ14.4 (Lonza) по сайтам HindIII и EcoRI с применением набора для клонирования продуктов ПЦР InFusion™.
Гуманизированные цепи антител или химерные цепи антител вводили в клетки 293Т путем транзиентной трансфекции для продуцирования антитела. Антитело очищали или применяли в надосадочной жидкости среды для культуры клеток для последующего анализа in vitro. Связывание химерных и гуманизированных антител с GDF15 человека определяли, как описано ниже. Результаты обобщены в табл. 24-27.
Каждая из возможных комбинаций вариабельных областей тяжелой цепи иммуноглобулина и легкой цепи иммуноглобулина химерного или гуманизированного 01G06 приведена ниже в табл. 14.
Таблица 14
Название антитела Вариабельная область легкой цепи Вариабельная область тяжелой цепи
Hu01G06-l Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) Химерная тяжелая цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:40)
Hu01G06- 14 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:54)
Hu01G06- 15 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:56)
Hu01G06- 147 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:58)
Hu01G06- 148 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:60)
Название антитела Вариабельная область легкой цепи Вариабельная область тяжелой цепи
Hu01G06- 149 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:62)
- 48 038645
Hu01G06150 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:64)
Hu01G06151 Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:66)
Hu01G06-4 IGKV1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:90) Химерная тяжелая цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:40)
Hu01G06- 46 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:54)
Hu01G06- 52 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:56)
Hu01G06100 IGKV 1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:58)
Hu01G06102 IGKV 1-39 каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:60)
Hu01G06101 IGKV 1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:62)
Hu01G06103 IGKV 1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:64)
Hu01G06104 IGKV 1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:90) IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:66)
Hu01G06152 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) Химерная тяжелая цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:40)
Hu01G06- 71 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) IGHV 1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:54)
Hu01G06- 77 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) IGHV 1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:56)
Hu01G06110 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:58)
Hu01G06112 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:60)
Hu01G06111 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:62)
Hu01G06113 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06(SEQ ID NO:92) IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:64)
HuOl G06114 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:92) IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:66)
Hu01G06122 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06(SEQ ID NO:92) IGHV1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 Fl (SEQ ID NO:246)
Hu01G06119 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06(SEQ ID NO:92) IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:248)
Hu01G06135 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06(SEQ ID NO:92) IGHV 1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl (SEQ ID NO:250)
- 49 038645
Hu01G06- 138 IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06(SEQ ID NO:92) IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:252)
Hu01G06- 153 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) Химерная тяжелая цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:40)
Hu01G06- 69 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:54)
Hu01G06- 75 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:56)
Hu01G06- 105 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:58)
Hu01G06- 107 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:60)
Hu01G06- 106 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:62)
Hu01G06- 108 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:64)
Hu01G06- 109 IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:94) IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:66)
Hu01G06- 154 IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) Химерная тяжелая цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:40)
Hu01G06155 IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV 1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 (SEQ ID NO:54)
Hu01G06- 156 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO:56)
Hu01G06157 IGKV1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:58)
Hu01G06- 158 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:60)
Hu01G06- 159 IGKV 1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:62)
Hu01G06- 160 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV 1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:64)
Hu01G06- 161 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO:66)
Hu01G06- 130 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-18 тяжелой цепи HuO 1G06 Fl (SEQ ID NO:246)
Hu01G06- IGKV 1 -3 9 каппа-цепи HuO 1G06 IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2
127 F2 (SEQ ID NO:254) (SEQ ID NO:248)
Hu01G06- 143 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV 1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl (SEQ ID NO:250)
Hu01G06- 146 IGKV 1-3 9 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:254) IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO:252)
Каждая из возможных комбинаций вариабельных областей тяжелой цепи иммуноглобулина и легкой цепи иммуноглобулина химерного или гуманизированного 06С11 приведена ниже в табл. 15.
- 50 038645
Таблица 15
Название антитела Вариабельная область легкой цепи Вариабельная область тяжелой цепи
НиОбСП-1 Химерная каппа-цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO:82) Химерная тяжелая цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO:46)
НиОбС 11-7 Химерная каппа-цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO:82) IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06С11 (SEQ ID NO:68)
НиОбСП-10 Химерная каппа-цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO:82) IGHV2-5 тяжелой цепи НиОбС 11 (SEQ ID NO:70)
НиО6С11-12 IGKV1-16 каппа-цепи ShO6Cll (SEQ ID NO:96) Химерная тяжелая цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO:46)
НиОбС 11-27 IGKV1-16 каппа-цепи ShO6Cll (SEQ ID NO:96) IGHV2-70 тяжелой цепи HE LM 06C11 (SEQ ID NO:68)
НиОбС 11-30 IGKV1-16 каппа-цепи ShO6Cll (SEQ ID NO:96) IGHV2-5 тяжелой цепи НиОбС 11 (SEQ ID NO:70)
Каждая из возможных комбинаций вариабельных областей тяжелой цепи иммуноглобулина и легкой цепи иммуноглобулина химерного или гуманизированного 14F11 приведена ниже в табл. 16.
Таблица 16
Название антитела Вариабельная область легкой цепи Вариабельная область тяжелой цепи
Hul4Fll-l Химерная каппа-цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO:86) Химерная тяжелая цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO:50)
HU14F11-14 Химерная каппа-цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO:86) IGHV2-5 тяжелой цепи Shl4Fl 1 (SEQ ID NO:72)
Hul4Fll-15 Химерная каппа-цепь Chl4Fll (SEQ ID NO:86) IGHV2-70 тяжелой цепи Shl4Fll (SEQ ID NO:74)
HU14F11-11 IGKV1-16 каппа-це пи Hu 14F11 (SEQ ID NO:98) Химерная тяжелая цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO:50)
Hul4Fll-39 IGKV1-16 каппа-це пи Hu 14F11 IGHV2-5 тяжелой цепи Shl4Fl 1
(SEQ ID NO:98) (SEQ ID NO:72)
Hul4Fll-47 IGKV1-16 каппа-цепи Hu 14F11 (SEQ ID NO:98) IGHV2-70 тяжелой цепи Shl4Fll (SEQ ID NO:74)
Каждая из возможных комбинаций вариабельных областей тяжелой цепи иммуноглобулина и легкой цепи иммуноглобулина химерных 04F08, 06С11 и 14F11 приведена ниже в табл. 17.
Таблица 17
Вариабельная область легкой цепи Вариабельная область тяжелой цепи
Химерная каппа-цепь 04F08 (SEQ ID NO: 80) Химерная тяжелая цепь ChO6C 11 (SEQ ID NO:46)
Химерная каппа-цепь 04F08 (SEQ ID NO: 80) Химерная тяжелая цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO:50)
Химерная каппа-цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO: 82) Химерная тяжелая цепь 04F08 (SEQ ID NO:44)
Химерная каппа-цепь ChO6Cl 1 (SEQ ID NO: 82) Химерная тяжелая цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO:50)
Химерная каппа-цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO: 86) Химерная тяжелая цепь 04F08 (SEQ ID NO:44)
Химерная каппа-цепь Chl4Fl 1 (SEQ ID NO: 86) Химерная тяжелая цепь ChO6C 11 (SEQ ID NO:46)
Каждая из возможных комбинаций вариабельных областей тяжелой цепи иммуноглобулина и легкой цепи иммуноглобулина химерного 01G06 и химерного 08G01 приведена ниже в табл. 18.
Таблица 18
Вариабельная область легкой цепи Вариабельная область тяжелой цепи
Химерная каппа-цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:76) Химерная тяжелая цепь 08G01 (SEQ ID NO:48)
Химерная каппа-цепь 08G01 (SEQ ID NO: 84) Химерная тяжелая цепь Ch01G06 (SEQ ID NO:40)
Последовательности нуклеиновой кислоты и кодируемые последовательности белка, определяющие вариабельные области химерных и гуманизированных антител 01G06, 06С11 и 14F11, обобщены ниже (аминоконцевые последовательности сигнальных пептидов не показаны). Последовательности CDR (определение согласно Kabat) в аминокислотных последовательностях показаны жирным шрифтом и подчеркнуты.
- 51 038645
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область химерной тяжелой цепи Ch01G06 (SEQ ID NO: 127) gaagtgttgt tgcagcagtc agggccggag ttggtaaaac cgggagcgtc ggtgaaaatc ccgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggattgggt gaaacagtcg
121 catgggaaat cgcttgaatg gattggtcag atcaatccga ataatggagg aatcttcttt
181 aatcagaagt ttaaaggaaa agcgacgctt acagtcgata agtcgtcgaa cacggcgttc
241 atggaagtac ggtcgcttac gtcggaagat acggcggtct attactgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggactattgg ggacaaggga cgtcggtcac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область химерной тяжелой цепи Ch01G06 (SEQ ID NO: 40) evllqqsgpe Ivkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewig^ inpnnggiff nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 53) caagtgcaac ttgtgcagtc gggtgcggaa gtcaaaaagc cgggagcgtc ggtgaaagta tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggactgggt acgacaggca
121 ccggggaaat cgttggaatg gatcggacag attaatccga acaatggggg aattttcttt
181 aatcagaaat tcaaaggacg ggcgacgttg acggtcgata catcgacgaa tacggcgtat
241 atggaattga ggtcgcttcg ctcggacgat acggcggtct attactgcgc cagggaggcg
301 atcacgacgg taggggcgat ggattattgg ggacagggga cgcttgtgac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 54) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigg inpnnggiff nqkfkgratl tvdtstntay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 55) caagtccagc ttgtccagtc gggagcggaa gtgaagaaac cggggtcgtc ggtcaaagta tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggattgggt acgacaggct
121 ccgggaaaat cattggaatg gattggacag attaatccga ataatggggg tatcttcttt
181 aatcaaaagt ttaaagggag ggcgacgttg acggtggaca aatcgacaaa tacggcgtat
241 atggaattgt cgtcgcttcg gtcggaggac acggcggtgt attactgcgc gagggaggcg
301 atcacgacgg tcggggcgat ggattattgg ggacagggaa cgcttgtgac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 56) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewig^ inpnnggiff nqkfkgratl tvdkstntay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 57) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt
181 aatcagaaat tcaaaggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-18
M69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 58) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmg^ inpnnggiff 61 nqkfkgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 59) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 60) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgcj inpnnggiff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 61) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой
- 52 038645 цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 62) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgg inpnnggiff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 63) caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc
181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 64) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 65) caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc
181 aatcagaagt ttcaggggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06 (SEQ ID NO: 66) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgg inpnnggiff nqkfqgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F1 (SEQ ID NO: 245) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccgt acaatcacct gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F1 (SEQ ID NO: 246) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgg inpynhliff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO: 247) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggact gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO: 248) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgg inpnngliff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F1 (SEQ ID NO: 249) caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatgggct gatctttttc
181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F1 (SEQ ID NO: 250) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgg inpnngliff nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO: 251)
- 53 038645 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccgt acaatcacct gatctttttc
181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO: 252) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgg inpynhliff nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область химерной тяжелой цепи Ch06C11 (SEQ ID NO: 129) caggtgacac tcaaagaatc aggacccgga atccttcagc ccagccagac cttgtcgctg acttgttcgt tctccggttt cagcctgaat acttatggga tgggtgtgtc atggatcagg
121 caaccgtccg ggaaaggatt ggagtggctc gcgcacatct actgggacga tgacaaacgc
181 tacaatcctt cgctgaagag ccgattgacg atttccaagg atgcctcgaa caaccgggta
241 tttcttaaga tcacgtcggt cgatacggca gacacggcga cctattactg cgcccaaaga
301 gggtacgatg actattgggg atattggggc caggggacac tcgtcacaat ttcagct
Последовательность белка, определяющая вариабельную область химерной тяжелой цепи Ch06C11(SEQ ID NO: 46) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywq qgtlvtisa
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06C11 (SEQ ID NO: 67) caggtgactt tgaaagaatc cggtcccgca ttggtaaagc caacccagac acttacgctc acatgtacat tttccggatt cagcttgaac acttacggga tgggagtgtc gtggattcgg
121 caacctccgg ggaaggctct ggagtggctg gcgcacatct actgggatga tgacaaaagg
181 tataacccct cacttaaaac gagactgacg atctcgaagg acacaagcaa gaatcaggtc
241 gtcctcacga ttacgaatgt agacccggtg gatactgccg tctattactg cgcgcaacgc
301 gggtatgatg actactgggg atattggggt cagggcaccc tcgtgaccat ctcgtca
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06C11 (SEQ ID NO: 68) qvtlkesgpa Ivkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkalewl ahiywdddkr ynpslktrlt iskdtsknqv vltitnvdpv dtavyycaqr gyddywgywq qgtlvtiss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV2-5 тяжелой цепи Hu06C11 (SEQ ID NO: 69) caagtaacgc tcaaggagtc cggacccacc ttggtgaagc cgacgcagac cttgactctt acgtgcactt tctcggggtt ttcactgaat acgtacggga tgggtgtctc atggatcagg
121 caacctccgg ggaaaggatt ggaatggctg gcgcacatct actgggatga cgataagaga
181 tataacccaa gcctcaagtc gcggctcacc attacaaaag atacatcgaa aaatcaggtc
241 gtacttacta tcacgaacat ggaccccgtg gacacagcaa catattactg tgcccagcgc
301 ggctatgacg attattgggg ttactgggga cagggaacac tggtcacggt gtccagc
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV2-5 тяжелой цепи Hu06C11 (SEQ ID NO: 70) qvtlkesgpt Ivkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt itkdtsknqv vltitnmdpv dtatyycaqr gyddywgywq qgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область химерной тяжелой цепи Ch14F11 (SEQ ID NO: 131) caggtcacgc tgaaagagtc aggtcccgga atccttcaac cttcgcagac attgtcactc acatgttcct tctccgggtt ctcgctctcg acttatggca tgggtgtagg atggattcgg
121 cagcccagcg ggaaggggct tgagtggttg gcggatatct ggtgggacga cgacaaatac
181 tacaatccga gcctgaagtc ccgcctcacc atttcgaaag atacgtcatc aaacgaagtc
241 tttttgaaga tcgccatcgt ggacacggcg gatacagcga cgtattactg cgccagaagg
301 ggacactaca gcgcaatgga ttattgggga caggggacct cggtgactgt gtcgtcc
Последовательность белка, определяющая вариабельную область химерной тяжелой цепи Ch14F11 (SEQ ID NO: 50) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV2-5 тяжелой цепи Sh14F11 (SEQ ID NO: 71) cagatcactt tgaaagaaag cggaccgacc ttggtcaagc ccacacaaac cctcacgctc acgtgtacat tttcggggtt ctcgctttca acttacggga tgggagtagg gtggattcgc
121 cagccgcctg gtaaagcgtt ggagtggctt gcagacatct ggtgggacga cgataagtac
181 tataatccct cgctcaagtc cagactgacc atcacgaaag atacgagcaa gaaccaggtc
241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccagtg gatacggcta catattactg cgccaggcgg
301 ggtcactact cagcgatgga ttattggggc cagggaacac tggtaacggt gtcgtcc
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV2-5 тяжелой цепи Sh14F11 (SEQ ID NO: 72)
- 54 038645 qitlkesgpt Ivkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky ynpslksrlt itkdtsknqv vltmtnmdpv dtatyycarr ghysamdywq qgtlvtvss
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGHV2-70 тяжелой цепи Sh14F11 (SEQ ID NO: 73) caagtgactc tcaaggagtc cggacccgcc ctggtcaaac caacgcagac actgacgctc acatgcacct tcagcggatt ttcgttgtca acgtacggca tgggtgtggg gtggattcgc
121 cagcctccgg ggaaagccct tgaatggttg gcggacatct ggtgggatga tgacaagtac
181 tataatccct cacttaagtc acggttgacg atctcgaaag acaccagcaa gaaccaggta
241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccggtc gatacagcgg tctactattg tgctagaagg
301 ggacactact ccgcaatgga ttattggggt caggggacgc tcgtaaccgt gtcgtcg
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGHV2-70 тяжелой цепи Sh14F11 (SEQ ID NO: 74) qvtlkesgpa Ivkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky ynpslksrlt iskdtsknqv vltmtnmdpv dtavyycarr ghysamdywg qgtlvtvss
[00406] Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область химерной каппа-цепи Ch01G06 (SEQ ID NO: 133) gacatccaaa tgacccagtc acccgcgagc ctttcggcgt cggtcggaga aacggtcacg atcacgtgcc ggacatcaga gaatctccat aactacctcg cgtggtatca acagaagcag
121 gggaagtcgc cccagttgct tgtatacgat gcgaaaacgt tggcggatgg ggtgccgtcc
181 agattctcgg gatcgggctc ggggacgcag tactcgctca agatcaattc gctgcagccg
241 gaggactttg ggtcgtacta ttgtcagcat ttttggtcat caccgtatac atttggaggt
301 ggaacgaaac ttgagattaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область химерной каппа-цепи Ch01G06 (SEQ ID NO: 76) diqmtqspas Isasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps rfsgsgsgtq yslkinslqp edfqsyycqh fwsspytfgq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-39 каппацепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 89) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaagtcac cgaaactcct tgtctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 90) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspkllvyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (также упоминаемую в данном документе как вариабельная область IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 F1; SEQ ID NO: 91) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06 (также упоминаемую в данном документе как вариабельная область IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 F1; SEQ ID NO: 92) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 93) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-39 V48I каппа-цепи Hu01G06 (SEQ ID NO: 94) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-39 каппацепи Hu01G06 F1 (также упоминаемую в данном документе как вариабельная область IGKV1-39 S43A V48I каппа-цепи Hu01G06; SEQ ID NO: 91)
- 55 038645 gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 F1 (также упоминаемую в данном документе как вариабельная область IGKV1-39 S43 A V48I каппа-цепи Hu01G06; SEQ ID NO: 92) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfqq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-39 каппацепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO: 253) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgg acccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-39 каппа-цепи Hu01G06 F2 (SEQ ID NO: 254) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsdpytfqq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область химерной каппацепи Ch06C11 (SEQ ID NO: 135) gatatcgtca tgacccagtc ccagaagttc atgtcaactt cagtgggaga cagagtgtcc gtcacatgta aagcctcgca aaatgtggga accaacgtag cgtggttcca gcagaaacct
121 ggccaatcac cgaaggcact gatctactcg gccagctata ggtactcggg agtaccagat
181 cggtttacgg ggtcggggag cgggacggac tttatcctca ctatttccaa tgtccagtcg
241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataacaact atcccctcac gtttggtgct
301 ggtacaaaat tggagttgaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область химерной каппа-цепи Ch06C11 (SEQ ID NO: 82) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfegg ynnypltfqa gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-16 каппацепи Sh06C11 (SEQ ID NO: 95) gacatccaaa tgacccaatc gccctcctcc ctctccgcat cagtagggga ccgcgtcaca attaettgea aagegtegea gaaegtegga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc
121 ggaaaagctc egaagagett gatctactcg gcctcatata ggtattcggg tgtgeegage
181 cggtttagcg ggtcggggtc aggtaetgat ttcacgctca caatttcatc gttgcagcca
241 gaagattteg ccacatatta ctgtcagcag tacaacaatt accctctgac gttcggccag
301 ggaaccaaac ttgagatcaa g
Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-16 каппа-цепи Sh06C11 (SEQ ID NO: 96) diqmtqspss Isasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkapksliys asyrysgvps rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyycqq ynnypltfgq gtkleik
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область химерной каппацепи Ch14F11 (SEQ ID NO: 137) gacatcgtga tgacacagtc acagaaattc atgtccacat ccgtcggtga tagagtatcc gtcacgtgta aggcctcgca aaaegtagga actaatgtgg cgtggtatca acagaagcca
121 ggacagtcac ccaaagcact catctacagc ccctcatatc ggtacagcgg ggtgccggac
181 aggttcacgg gatcggggag cgggaccgat tttacactga ccatttcgaa tgtccagtcg
241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataactcgt accctcacac gtttggaggt
301 ggcactaagt tggagatgaa a
Последовательность белка, определяющая вариабельную область химерной каппа-цепи Ch14F11 (SEQ ID NO: 86) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnyawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfegg ynsyphtfqg gtklemk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область IGKV1-16 каппацепи Hu14F11 (SEQ ID NO: 97) gatatccaga tgacacagtc accctcgtcg ctctcagctt ccgtaggcga cagggtcact attacgtgta aagcatcaca gaaegtegga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc
121 gggaagagee ccaaagcgct tatctactcc ccgtcgtatc ggtattccgg tgtgccaagc
181 agattttcgg ggtcaggttc gggaactgac tttaccctga ccatctcgtc cctccaaccg
241 gaagattteg ccacgtactt ctgccagcag tacaacagct atcctcacac attcggacaa
301 gggacaaagt tggagattaa a
[Последовательность белка, определяющая вариабельную область IGKV1-16 каппа-цепи Hu14F11 (SEQ ID NO: 98)
- 56 038645 diqmtqspss Isasvgdrvt itckasqnvg tnyawfqqkp gkspkaliys psyrysqvps 61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyfegg ynsyphtfqq gtkleik
Аминокислотные последовательности, определяющие вариабельные области тяжелых цепей иммуноглобулина для антител, полученных в примере 13, выравнены на фиг. 19. Аминоконцевые последовательности сигнальных пептидов (для надлежащей экспрессии/секреции) не показаны. CDR1, CDR2 и CDR3 (определение согласно Kabat) обозначены рамками. На фиг. 20 представлено выравнивание отдельных последовательностей CDR1, CDR2 и CDR3 для каждой из последовательностей вариабельных областей, представленных на фиг. 19.
Аминокислотные последовательности, определяющие вариабельные области легких цепей иммуноглобулина для антител в примере 13, выравнены на фиг. 21. Аминоконцевые последовательности сигнальных пептидов (для надлежащей экспрессии/секреции) не показаны. CDR1, CDR2 и CDR3 обозначены рамками. На фиг. 22 представлено выравнивание отдельных последовательностей CDR1, CDR2 и CDR3 для каждой из последовательностей вариабельных областей, представленных на фиг. 21.
Табл. 19 представляет собой карту соответствий, на которой приведены SEQ ID NO каждой последовательности, обсуждаемой в данном примере.
Таблица 19
SEQ ID NO Нуклеиновая кислота или белок
127 Вариабельная область химерной тяжелой цепи Ch01G06—нуклеиновая кислота
40 Вариабельная область химерной тяжелой цепи Ch01G06—белок
1 CDRj химерной тяжелой цепи Ch01G06
7 CDR2 химерной тяжелой цепи Ch01G06
15 CDR3 химерной тяжелой цепи Ch01G06
53 Вариабельная область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06—нуклеиновая кислота
54 Вариабельная область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06—белок
1 CDRj IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06
7 CDR2 IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06
15 CDR3IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06
55 Вариабельная область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06—нуклеиновая кислота
56 Вариабельная область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06—белок
1 CDRj IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06
7 CDR2 IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06
15 CDR3IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06
57 Вариабельная область IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06—нуклеиновая кислота
58 Вариабельная область IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06—белок
1 CDRi IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06
7 CDR2 IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06
15 CDR3IGHV1-18 M69L тяжелой цепи Sh01G06
- 57 038645
SEQ ID NO Нуклеиновая кислота или белок
59 Вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06— нуклеиновая кислота
60 Вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06— белок
1 CDRt IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06
13 CDR2 IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06
15 CDR3IGHV1-18 M69L K64Q G44S тяжелой цепи Sh01G06
61 Вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06— нуклеиновая кислота
62 Вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06—белок
1 CDRj IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06
13 CDR2IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06
15 CDR3IGHV1-18 M69L K64Q тяжелой цепи Sh01G06
63 Вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06— нуклеиновая кислота
64 Вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06—белок
1 CDRt IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06
7 CDR2 IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06
15 CDR3IGHV1-69 T30S I69L тяжелой цепи Sh01G06
65 Вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06— нуклеиновая кислота
66 Вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06—белок
1 CDRj IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06
13 CDR2 IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06
15 CDR3IGHV1-69 T30S K64Q I69L тяжелой цепи Sh01G06
245 Вариабельная область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 Fl—нуклеиновая кислота
246 Вариабельная область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 Fl—белок
1 CDRj IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 Fl
236 CDR2 IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 Fl
15 CDR3IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 Fl
247 Вариабельная область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2—нуклеиновая кислота
248 Вариабельная область IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2—белок
1 CDRj IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2
237 CDR2 IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2
15 CDR3IGHV1-18 тяжелой цепи Hu01G06 F2
259 Вариабельная область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl—нуклеиновая кислота
250 Вариабельная область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl—белок
1 CDRt IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl
238 CDR2 IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl
15 CDR3IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 Fl
251 Вариабельная область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2—нуклеиновая кислота
252 Вариабельная область IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2—белок
1 CDRj IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2
239 CDR2 IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2
15 CDR3IGHV1-69 тяжелой цепи Hu01G06 F2
129 Вариабельная область химерной тяжелой цепи Ch01G06—нуклеиновая кислота
46 Вариабельная область химерной тяжелой цепи Ch01G06—белок
4 CDRj химерной тяжелой цепи ChO6Cl 1
9 CDR2 химерной тяжелой цепи ChO6Cl 1
18 CDR3 химерной тяжелой цепи ChO6Cl 1
- 58 038645
SEQ ID NO Нуклеиновая кислота или белок
67 Вариабельная область IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06С11—нуклеиновая кислота
68 Вариабельная область IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06С11—белок
4 CDRj IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06С11
14 CDR2 IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06С11
18 CDR3IGHV2-70 тяжелой цепи НЕ LM 06С11
69 Вариабельная область IGHV2-5 тяжелой цепи HuO6Cl 1—нуклеиновая кислота
70 Вариабельная область IGHV2-5 тяжелой цепи HuO6Cl 1—белок
4 CDRj IGHV2-5 тяжелой цепи HuO6Cl 1
9 CDR2 IGHV2-5 тяжелой цепи HuO6Cl 1
18 CDR3IGHV2-5 тяжелой цепи HuO6Cl 1
131 Вариабельная область химерной тяжелой цепи Chl4Fl 1—нуклеиновая кислота
50 Вариабельная область химерной тяжелой цепи Chl4Fl 1—белок
5 CDRj химерной тяжелой цепи Chl4Fl 1
11 CDR2 химерной тяжелой цепи Chl4Fl 1
19 CDR3 химерной тяжелой цепи Chl4Fl 1
71 Вариабельная область IGHV2-5 тяжелой цепи Shl4Fl 1—нуклеиновая кислота
72 Вариабельная область IGHV2-5 тяжелой цепи Shl4Fl 1—белок
5 CDRj IGHV2-5 тяжелой цепи Shl4Fl 1
11 CDR2 IGHV2-5 тяжелой цепи Shl4Fl 1
19 CDR3IGHV2-5 тяжелой цепи Sh 14F11
73 Вариабельная область IGHV2-70 тяжелой цепи Shl4Fl 1—нуклеиновая кислота
74 Вариабельная область IGHV2-70 тяжелой цепи Shl4Fl 1—белок
5 CDRt IGHV2-70 тяжелой цепи Sh 14F11
11 CDR2 IGHV2-70 тяжелой цепи Sh 14F11
19 CDR3IGHV2-70 тяжелой цепи Sh 14F11
133 Вариабельная область химерной легкой цепи (каппа) Ch01G06—нуклеиновая кислота
76 Вариабельная область химерной легкой цепи (каппа) Ch01G06—белок
21 CDR] химерной легкой цепи (каппа) Ch01G06
26 CDR2 химерной легкой цепи (каппа) Ch01G06
32 CDR3 химерной легкой цепи (каппа) Ch01G06
89 Вариабельная область IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06—нуклеиновая кислота
90 Вариабельная область IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06—белок
21 CDR, IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06
26 CDR2 IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06
32 CDR3IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06
91 Вариабельная область IGKV1-39 S43A V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06— нуклеиновая кислота
92 Вариабельная область IGKV1-39 S43A V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06— белок
21 CDRt IGKV1-39 S43A V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06
26 CDR2 IGKV1-39 S43A V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06
32 CDR3IGKV1-39 S43A V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06
93 Вариабельная область IGKV1-39 V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06— нуклеиновая кислота
94 Вариабельная область IGKV1-39 V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06—белок
21 CDRj IGKV1-39 V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06
26 CDR2 IGKV1-39 V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06
32 CDR3IGKV1-39 V48I легкой цепи (каппа) Hu01G06
SEQ ID NO Нуклеиновая кислота или белок
91 Вариабельная область IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 Fl—нуклеиновая кислота
92 Вариабельная область IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 Fl—белок
21 CDRj IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 Fl
26 CDR2 IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 Fl
32 CDR3IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 Fl
253 Вариабельная область IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 F2—нуклеиновая кислота
254 Вариабельная область IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 F2—белок
21 CDRi IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 F2
26 CDR2IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 F2
244 CDR3IGKV1-39 легкой цепи (каппа) Hu01G06 F2
135 Вариабельная область химерной легкой цепи (каппа) ChO6Cl 1—нуклеиновая кислота
82 Вариабельная область химерной легкой цепи (каппа) ChO6Cl 1—белок
23 CDR] химерной легкой цепи (каппа) СИ06С11
- 59 038645
28 CDR2 химерной легкой цепи (каппа) СЬОбСП
35 CDR3 химерной легкой цепи (каппа) ChO6C 11
95 Вариабельная область IGKV1-16 легкой цепи (каппа) ShO6Cl 1—нуклеиновая кислота
96 Вариабельная область IGKV1-16 легкой цепи (каппа) ShO6Cl 1—белок
23 CDRj IGKV1-16 легкой цепи (каппа) ShO6Cl 1
28 CDR2IGKV1-16 легкой цепи (каппа) ShO6Cl 1
35 CDR3IGKV1-16 легкой цепи (каппа) ShO6Cl 1
137 Вариабельная область химерной легкой цепи (каппа) Chl4Fl 1—нуклеиновая кислота
86 Вариабельная область химерной легкой цепи (каппа) Chl4Fl 1—белок
23 CDRj химерной легкой цепи (каппа) Ch 14F11
30 CDR2 химерной легкой цепи (каппа) Ch 14F11
36 CDR3 химерной легкой цепи (каппа) Ch 14F11
97 Вариабельная область IGKV1-16 легкой цепи (каппа) Hul4Fl 1—нуклеиновая кислота
98 Вариабельная область IGKV1-16 легкой цепи (каппа) Hul4Fl 1—белок
23 CDR] IGKV1-16 легкой цепи (каппа) Hul4Fl 1
30 CDR2IGKV1-16 легкой цепи (каппа) Hul4Fl 1
36 CDR3IGKV1-16 легкой цепи (каппа) Hul4Fl 1
Последовательности CDR тяжелых цепей гуманизированных моноклональных антител (определения согласно Kabat, Chothia и IMGT) показаны в табл. 20.
Таблица 20
Kabat
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
Химерная Ch01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFKG (SEQ ID NO:7) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 40
IGHV1-18 Hu01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFKG (SEQ ID NO:7) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 54
IGHV1-69 Hu01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFKG (SEQ ID NO:7) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 56
IGHV1-18M69L Sh01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFKG (SEQ ID NO:7) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 58
IGHV1-18M69L K64Q G44S Sh01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFQG (SEQ ID NO: 13) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 60
IGHV1-18M69L K64Q Sh01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFQG (SEQ ID NO: 13) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 62
IGHV1-69 T30S I69L Sh01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFKG (SEQ ID NO:7) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 64
IGHV1-69 T30S K64Q I69L Sh01G06 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGGIFFNQKFQG (SEQ ID NO: 13) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 66
IGHV1-18 Hu01G06 Fl DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPYNHLIFFNQKFQG (SEQ ID NO: 236) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 246
IGHV1-18 Hu01G06 F2 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGLIFFNQKFQG (SEQ ID NO: 237 ) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 248
IGHV1-69 Hu01G06 Fl DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPNNGLIFFNQKFKG (SEQ ID NO: 238) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 250
IGHV1-69 Hu01G06 F2 DYNMD (SEQ ID NO:1) QINPYNHLIFFNQKFKG (SEQ ID NO: 239) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 252
Химерная ChO6Cll TYGMGVS (SEQ ID NO:4) HIYWDDDKRYNPSLKS (SEQ ID NO:9) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 46
IGHV2-70 HE LM 06C11 TYGMGVS (SEQ ID NO:4) HIYWDDDKRYNPSLKT (SEQ ID NO: 14) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 68
IGHV2-5 HuO6Cll TYGMGVS (SEQ ID NO:4) HIYWDDDKRYNPSLKS (SEQ ID NO:9) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 70
Химерная Chl4Fll TYGMGVG (SEQ ID NO:5) DIWWDDDKYYNPSLKS (SEQ ID NO: 11) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 50
IGHV2-5 Shl4Fll TYGMGVG (SEQ ID NO:5) DIWWDDDKYYNPSLKS (SEQ ID NO: 11) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 72
IGHV2-70 Shl4Fll TYGMGVG (SEQ ID NO:5) DIWWDDDKYYNPSLKS (SEQ ID NO: 11) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 74
- 60 038645
Chothia
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
Химерная Ch01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 40
IGHV1-18 Hu01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 54
IGHV1-69 Hu01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 56
IGHV1-18M69L Sh01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 58
IGHV1-18 M69L K64Q G44S Sh01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 60
IGHV1-18 M69L K64Q Sh01G06 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 62
IGHV1-69 T30S I69L Sh01G06 GYTFSDY (SEQ ID NO:234) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 64
IGHV1-69 T30S K64Q I69L Sh01G06 GYTFSDY (SEQ ID NO:234) NPNNGG (SEQ ID NO: 143) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 66
IGHV1-18 Hu01G06 Fl GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPYNHL (SEQ ID NO:240) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 246
IGHV1-18 Hu01G06 F2 GYTFTDY (SEQ ID NO:38) NPNNGL (SEQ ID NO:241) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 248
IGHV1-69 Hu01G06 Fl GYTFSDY (SEQ ID NO:234) NPNNGL (SEQ ID NO:241) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 250
IGHV1-69 Hu01G06 F2 GYTFSDY (SEQ ID NO:234) NPYNHL (SEQ ID NO:240) EAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 15) 252
Химерная ChO6Cll GFSLNTYGM (SEQ ID NO: 132) YWDDD (SEQ ID NO: 145) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 46
IGHV2-70 HE LM 06C11 GFSLNTYGM (SEQ ID NO: 132) YWDDD (SEQ ID NO: 145) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 68
IGHV2-5 HuO6Cll GFSLNTYGM (SEQ ID NO: 132) YWDDD (SEQ ID NO: 145) RGYDDYWGY (SEQ ID NO: 18) 70
Химерная Chl4Fll GFSLSTYGM (SEQ ID NO: 130) WWDDD (SEQ ID NO: 146) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 50
IGHV2-5 Shl4Fll GFSLSTYGM (SEQ ID NO: 130) WWDDD (SEQ ID NO: 146) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 72
IGHV2-70 Shl4Fll GFSLSTYGM (SEQ ID NO: 130) WWDDD (SEQ ID NO: 146) RGHYSAMDY (SEQ ID NO: 19) 74
IMGT
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ID NO
Химерная Ch01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 40
IGHV1-18 Hu01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 54
IGHV1-69 Hu01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 56
IGHV1-18M69L Sh01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 58
IGHV1-18M69L K64Q G44S Sh01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 60
IGHV1-18M69L K64Q Sh01G06 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 62
IGHV1-69 T30S I69L Sh01G06 GYTFSDYN (SEQ ID NO:235) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 64
IGHV1-69 T30S K64Q I69L Sh01G06 GYTFSDYN (SEQ ID NO:235) INPNNGGI (SEQ ID NO: 148) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 66
IGHV1-18 Hu01G06 Fl GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPYNHLI (SEQ ID NO:242) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 246
IGHV1-18 Hu01G06 F2 GYTFTDYN (SEQ ID NO: 136) INPNNGLI (SEQ ID NO:243) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 248
IGHV1-69 Hu01G06 Fl GYTFSDYN (SEQ ID NO:235) INPNNGLI (SEQ ID NO:243) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 250
IGHV1-69 Hu01G06 F2 GYTFSDYN (SEQ ID NO:235) INPYNHLI (SEQ ID NO:242) AREAITTVGAMDY (SEQ ID NO: 154) 252
Химерная ChO6Cll GFSLNTYGMG (SEQ ID NO: 141) IYWDDDK (SEQ ID NO: 150) AQRGYDDYWGY (SEQ ID NO: 157) 46
IGHV2-70 HE LM06C11 GFSLNTYGMG (SEQ ID NO: 141) IYWDDDK (SEQ ID NO: 150) AQRGYDDYWGY (SEQ ID NO: 157) 68
HuO6Cll IGHV2-5 GFSLNTYGMG (SEQ ID NO: 141) IYWDDDK (SEQ ID NO: 150) AQRGYDDYWGY (SEQ ID NO: 157) 70
Химерная Chl4Fll GFSLSTYGMG (SEQ ID NO: 140) IWWDDDK (SEQ ID NO: 152) ARRGHYSAMDY (SEQ ID NO: 158) 50
IGHV2-5 Shl4Fll GFSLSTYGMG (SEQ ID NO: 140) IWWDDDK (SEQ ID NO: 152) ARRGHYSAMDY (SEQ ID NO: 158) 72
IGHV2-70 Shl4Fll GFSLSTYGMG (SEQ ID NO: 140) IWWDDDK (SEQ ID NO: 152) ARRGHYSAMDY (SEQ ID NO: 158) 74
Последовательности CDR легких каппа-цепей гуманизированных моноклональных антител (определения согласно Kabat, Chothia и IMGT) показаны в табл. 21.
- 61 038645
Таблица 21
Kabat/Chothia
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ED NO
Химерная Ch01G06 RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 76
IGKV1-39 Hu01G06 RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 90
IGKV1-39 S43AV48I Hu01G06 (также известная как IGKV1 39 Hu01G06 Fl) RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 92
IGKV1-39 V48I Hu01G06 RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 94
IGKV1-39 Hu01G06 Fl (также известная какК1КУ1-39 S43A V48I Hu01G06) RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 92
IGKV1-39 Hu01G06 F2 RTSENLHNYLA (SEQ ID NO:21) DAKTLAD (SEQ ID NO:26) QHFWSDPYT (SEQ ID NO:244) 254
Химерная ChO6Cll KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SASYRYS (SEQ ID NO:28) QQYNNYPLT (SEQ ID NO:35) 82
IGKV1-16 ShO6Cll KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SASYRYS (SEQ ID NO:28) QQYNNYPLT (SEQ ID NO:35) 96
Химерная Chl4Fll KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SPSYRYS (SEQ ID NO:30) QQYNSYPHT (SEQ ID NO:36) 86
IGKV1-16 Hul4Fll KASQNVGTNVA (SEQ ID NO:23) SPSYRYS (SEQ ID NO:30) QQYNSYPHT (SEQ ID NO:36) 98
IMGT
CDR1 CDR2 CDR3 Вариабельная область, SEQ ED NO
Химерная Ch01G06 ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 76
IGKV1-39 Hu01G06 ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 90
IGKV1-39 S43AV48I Hu01G06 (также известная как IGKV1 39 Hu01G06 Fl) ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 92
IGKV1-39 V48I Hu01G06 ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 94
IGKV1-39 Hu01G06 Fl (также известная какК1КУ1-39 S43A V48I Hu01G06) ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSSPYT (SEQ ID NO:32) 92
IGKV1-39 Hu01G06 F2 ENLHNY (SEQ ID NO: 160) DAK QHFWSDPYT (SEQ ID NO:244) 254
Химерная ChO6Cll QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SAS QQYNNYPLT (SEQ ID NO:35) 82
IGKV1-16 ShO6Cll QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SAS QQYNNYPLT (SEQ ID NO:35) 96
Химерная Chl4Fll QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SPS QQYNSYPHT (SEQ ID NO:36) 86
IGKV1-16 Hul4Fll QNVGTN (SEQ ID NO: 162) SPS QQYNSYPHT (SEQ ID NO:36) 98
Для создания последовательностей полных химерных и гуманизированных тяжелых или каппацепей антител каждую вышеуказанную последовательность вариабельной области объединяют с соответствующей ей константной областью от человека. Например, полная тяжелая цепь содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, после которой расположена последовательность константной области тяжелой цепи IgG1 человека. Полная каппа-цепь содержит последовательность вариабельной области каппа-цепи, после которой расположена последовательность константной области легкой каппа-цепи человека.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая константную область тяжелой цепи IgG1 человека (SEQ ID NO: 171) gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
121 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
181 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
1241 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
301 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
361 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
421 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
481 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
541 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
601 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
661 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
721 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
781 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
841 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
901 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
961 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
- 62 038645
Последовательность белка, определяющая константную область тяжелой цепи IgG1 человека (SEQ
ID NO: 172) astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
121 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
181 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
241 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
301 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая константную область легкой каппа-цепи человека (SEQ ID NO: 173) cgcacagttg ctgcccccag cgtgttcatt ttcccaccta gcgatgagca gctgaaaagc ggtactgcct ctgtcgtatg cttgctcaac aacttttacc cacgtgaggc taaggtgcag
121 tggaaagtgg ataatgcact tcaatctgga aacagtcaag agtccgtgac agaacaggac
181 agcaaagact caacttattc actctcttcc accctgactc tgtccaaggc agactatgaa
241 aaacacaagg tatacgcctg cgaggttaca caccagggtt tgtctagtcc tgtcaccaag
301 tccttcaata ggggcgaatg t
Последовательность белка, определяющая константную область легкой каппа-цепи человека (SEQ ID NO: 174) rtvaapsvfi fppsdeqlks gtasvvclln nfypreakvq wkvdnalqsg nsqesvteqd 61 skdstyslss tltlskadye khkvyacevt hqglsspvtk sfnrgec
Следующие последовательности представляют действительные или предполагаемые последовательности тяжелых и легких цепей полной длины (т.е. содержащие последовательности как вариабельной, так и константной областей) для каждого антитела, описанного в данном примере. Сигнальные последовательности для надлежащей секреции антител (например, сигнальные последовательности на 5'конце последовательностей ДНК или аминоконце последовательностей белка) не показаны в последовательностях тяжелых и легких цепей полной длины, раскрытых в данном документе, и не включены в конечный секретируемый белок. Также не показаны стоп-кодоны для терминации трансляции, необходимые на 3'-конце последовательностей ДНК. Выбор сигнальной последовательности и/или стоп-кодона для экспрессии раскрытых последовательностей тяжелых цепей и легких цепей иммуноглобулина полной длины находится в пределах компетенции среднего специалиста в данной области. Также предполагается, что последовательности вариабельной области можно лигировать с другими последовательностями константной области с получением активных тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина полной длины.
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерную тяжелую цепь полной длины Ch01G06 (вариабельную область тяжелой цепи мыши и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 175) gaagtgttgt tgcagcagtc agggccggag ttggtaaaac cgggagcgtc ggtgaaaatc ccgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggattgggt gaaacagtcg
121 catgggaaat cgcttgaatg gattggtcag atcaatccga ataatggagg aatcttcttt
181 aatcagaagt ttaaaggaaa agcgacgctt acagtcgata agtcgtcgaa cacggcgttc
241 atggaagtac ggtcgcttac gtcggaagat acggcggtct attactgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggactattgg ggacaaggga cgtcggtcac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
L021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
L081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
L141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая химерную тяжелую цепь полной длины Ch01G06 (вариабельную область тяжелой цепи мыши и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 176) evllqqsgpe Ivkpgasvki pckasgytft dynmdwvkqs hgkslewigq inpnnggiff nqkfkgkatl tvdkssntaf mevrsltsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtsvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 с
- 63 038645
IGHV1-18 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 177) caagtgcaac ttgtgcagtc gggtgcggaa gtcaaaaagc cgggagcgtc ggtgaaagta tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggactgggt acgacaggca
121 ccggggaaat cgttggaatg gatcggacag attaatccga acaatggggg aattttcttt
181 aatcagaaat tcaaaggacg ggcgacgttg acggtcgata catcgacgaa tacggcgtat
241 atggaattga ggtcgcttcg ctcggacgat acggcggtct attactgcgc cagggaggcg
301 atcacgacgg taggggcgat ggattattgg ggacagggga cgcttgtgac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 с IGHV1-18 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 178) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigq inpnnggiff nqkfkgratl tvdtstntay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 с IGHV1-69 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 179) caagtccagc ttgtccagtc gggagcggaa gtgaagaaac cggggtcgtc ggtcaaagta tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttacg gactataaca tggattgggt acgacaggct
121 ccgggaaaat cattggaatg gattggacag attaatccga ataatggggg tatcttcttt
181 aatcaaaagt ttaaagggag ggcgacgttg acggtggaca aatcgacaaa tacggcgtat
241 atggaattgt cgtcgcttcg gtcggaggac acggcggtgt attactgcgc gagggaggcg
301 atcacgacgg tcggggcgat ggattattgg ggacagggaa cgcttgtgac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 с IGHV1-69 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 180) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgkslewigq inpnnggiff nqkfkgratl tvdkstntay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 181)
- 64 038645 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt
181 aatcagaaat tcaaaggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 182) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff nqkfkgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L K64Q G44S (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 183) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L K64Q G44S (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 184) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpnnggiff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L K64Q (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 185)
- 65 038645 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacagg gtcttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggagg gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L K64Q (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 186) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-69 T30S I69L (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 187) caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc
181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-69 T30S I69L (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 188) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-69 T30S K64Q I69L (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 189)
- 66 038645 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatggggg aatctttttc
181 aatcagaagt ttcaggggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-69 T30S K64Q I69L (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 190) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnnggiff nqkfqgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGHV1-18 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 255) caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccgt acaatcacct gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGHV1-18 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 256) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpynhliff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-18 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 257)
- 67 038645 caggtccagc ttgtgcaatc gggagcggaa gtgaagaaac cgggagcgtc ggtaaaagtc tcgtgcaaag cgtcggggta tacgtttacg gactataaca tggactgggt gcgccaagcg
121 cctggacaga gccttgaatg gatggggcag attaatccga ataatggact gatcttcttt
181 aatcagaaat tccagggaag ggtaacgctg acgacagaca cgtcaacatc gacggcctat
241 atggaattgc ggtcgttgcg atcagatgat acggcggtct actattgtgc gagggaggcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg ggacagggga cgttggtaac ggtatcgtcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-18 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 258) qvqlvqsgae vkkpgasvkv sckasgytft dynmdwvrqa pgqslewmgq inpnngliff nqkfqgrvtl ttdtststay melrslrsdd tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGHV1-69 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 259) caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc gactataaca tggattgggt gcgacaagcg
121 cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag atcaatccga ataatgggct gatctttttc
181 aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat
241 atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac acggcggtct attactgcgc gagggaagcg
301 attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg
361 gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg
421 ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag gattattttc cagagccagt aaccgtgagc
481 tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct
541 ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc gtgccatctt catctctggg cactcagacc
601 tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc
661 aagagctgcg acaagactca cacttgtccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt
721 cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct aaagatactc tgatgataag tagaacaccc
781 gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg
841 tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct aagaccaagc ctagagagga gcagtataat
901 agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa
961 gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt
1021 aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa
1081 atgacaaaga accaagtctc attgacctgc ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc
1141 gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg
1201 ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg
1261 cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
1321 cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGHV1-69 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 260) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpnngliff nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-69 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 261)
- 68 038645 i
121
181
241
301
361
421
481
541
601
661
721
781
841
901
961
1021
1081
1141
1201
1261
1321 caagtacagc ttgtacagtc gggagcggaa tcgtgtaaag cgtcgggata tacgtttagc cctgggcagg gacttgaatg gatgggtcag aatcagaagt ttaaagggag ggtaacgctg atggagttgt cgtcgttgcg gtcggaggac attacgacgg tgggagcgat ggattattgg gcctcaacaa aaggaccaag tgtgttccca ggcactgcag cactcggctg cctcgtcaag tggaacagtg gagcactcac ttctggtgtc ggcctgtact cactcagctc cgtcgtgacc tacatctgta atgtaaacca caagcctagc aagagctgcg acaagactca cacttgtccc cccagcgtct ttttgttccc accaaagcct gaggtgacat gtgttgttgt agacgtttcc tacgttgatg gagtcgaagt acataatgct agtacatacc gtgtagtcag tgttctcaca gaatacaaat gcaaagtgtc caacaaagca aaggcaaagg ggcagcctcg tgaaccacag atgacaaaga accaagtctc attgacctgc gccgttgagt gggagagtaa cggtcagcct ctggatagtg acgggtcttt ctttctgtac cagcagggta acgtcttcag ctgttccgtg cagaagtcac tgagcctgag cccagggaag gtcaagaaac cgggatcgtc ggtcaaagtg gactataaca tggattgggt gcgacaagcg atcaatccgt acaatcacct gatctttttc acggcggata aaagcacgtc aacggcgtat acggcggtct attactgcgc gagggaagcg gggcagggaa cgcttgtaac ggtgtcatcg ctcgccccta gcagcaagag tacatccggg gattattttc cagagccagt aaccgtgagc catacttttc ctgctgtcct gcaaagctct gtgccatctt catctctggg cactcagacc aatactaagg tcgataagcg ggtggaaccc ccatgccctg cccctgaact tctgggcggt aaagatactc tgatgataag tagaacaccc cacgaggacc cagaggttaa gttcaactgg aagaccaagc ctagagagga gcagtataat gtgctgcacc aagactggct caacggcaaa ctcccagccc ctatcgagaa gactattagt gtgtacactc tgccacccag tagagaggaa ctggtgaaag gcttctaccc cagcgacatc gagaacaatt acaagacaac ccccccagtg agtaagctga ctgtggacaa gtcccgctgg atgcacgagg cattgcacaa ccactacacc
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-69 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 262) qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgytfs dynmdwvrqa pgqglewmgq inpynhliff nqkfkgrvtl tadkststay melsslrsed tavyycarea ittvgamdyw gqgtlvtvss
121 astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss
181 glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg
241 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn
301 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka Ipapiektis kakgqprepq vytlppsree
361 mtknqvsltc Ivkgfypsdi avewesngqp ennykttppv Idsdgsffly skltvdksrw
421 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерную тяжелую цепь полной длины Ch06C11 (вариабельную область тяжелой цепи мыши и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 191) caggtgacac tcaaagaatc aggacccgga atccttcagc ccagccagac cttgtcgctg acttgttcgt tctccggttt cagcctgaat acttatggga tgggtgtgtc atggatcagg
121 caaccgtccg ggaaaggatt ggagtggctc gcgcacatct actgggacga tgacaaacgc
181 tacaatcctt cgctgaagag ccgattgacg atttccaagg atgcctcgaa caaccgggta
241 tttcttaaga tcacgtcggt cgatacggca gacacggcga cctattactg cgcccaaaga
301 gggtacgatg actattgggg atattggggc caggggacac tcgtcacaat ttcagctgcc
361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc
421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg
481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc
541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac
601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag
661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc
721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag
781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac
841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt
901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa
961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag
1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg
1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc
1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg
1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag
1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag
1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag
Последовательность белка, определяющая химерную тяжелую цепь полной длины Ch06C11 (вариабельную область тяжелой цепи мыши и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 192) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsln tygmgvswir qpsgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt iskdasnnrv flkitsvdta dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtisaa
121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg
181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp
241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns
301 tyrvvsvltv Ihqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem
361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq
421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины НЕ LM 06C11 с IGHV2-70 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 193)
- 69 038645 caggtgactt tgaaagaatc cggtcccgca ttggtaaagc caacccagac acttacgctc acatgtacat tttccggatt cagcttgaac acttacggga tgggagtgtc gtggattcgg
121 caacctccgg ggaaggctct ggagtggctg gcgcacatct actgggatga tgacaaaagg
181 tataacccct cacttaaaac gagactgacg atctcgaagg acacaagcaa gaatcaggtc
241 gtcctcacga ttacgaatgt agacccggtg gatactgccg tctattactg cgcgcaacgc
301 gggtatgatg actactgggg atattggggt cagggcaccc tcgtgaccat ctcgtcagcc
361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc
421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg
481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc
541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac
601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag
661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc
721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag
781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac
841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt
901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa
961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag
1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg
1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc
1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg
1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag
1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag
1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины НЕ LM 06C11 с IGHV2-70 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 194) qvtlkesgpa Ivkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkalewl ahiywdddkr ynpslktrlt iskdtsknqv vltitnvdpv dtavyycaqr gyddywgywg qgtlvtissa
121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg
181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp
241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns
301 tyrvvsvltv Ihqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem
361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq
421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины HuO6C11 с IGHV2-5 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 195) caagtaacgc tcaaggagtc cggacccacc ttggtgaagc cgacgcagac cttgactctt acgtgcactt tctcggggtt ttcactgaat acgtacggga tgggtgtctc atggatcagg
121 caacctccgg ggaaaggatt ggaatggctg gcgcacatct actgggatga cgataagaga
181 tataacccaa gcctcaagtc gcggctcacc attacaaaag atacatcgaa aaatcaggtc
241 gtacttacta tcacgaacat ggaccccgtg gacacagcaa catattactg tgcccagcgc
301 ggctatgacg attattgggg ttactgggga cagggaacac tggtcacggt gtccagcgcc
361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc
421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg
481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc
541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac
601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag
661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc
721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag
781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac
841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt
901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa
961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag
1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg
1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc
1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg
1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag
1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag
1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Hu06C11 с IGHV2-5 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 196) qvtlkesgpt Ivkptqtltl tctfsgfsln tygmgvswir qppgkglewl ahiywdddkr ynpslksrlt itkdtsknqv vltitnmdpv dtatyycaqr gyddywgywg qgtlvtvssa
121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg
181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp
241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns
301 tyrvvsvltv Ihqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem
361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq
421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерную тяжелую цепь полной длины Ch14F11 (вариабельную область тяжелой цепи мыши и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 197)
- 70 038645 caggtcacgc tgaaagagte aggtcccgga atccttcaac cttcgcagac attgtcactc acatgttcct tctccgggtt ctcgctctcg aettatggea tgggtgtagg atggattegg
121 cagcccagcg ggaaggggct tgagtggttg geggatatet ggtgggacga cgacaaatac
181 tacaatccga geetgaagte ccgcctcacc atttegaaag ataegteate aaaegaagte
241 tttttgaaga tcgccatcgt ggacacggcg gatacagcga cgtattactg cgccagaagg
301 ggacactaca gcgcaatgga ttattgggga caggggacct eggtgaetgt gtcgtccgcc
361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc
421 actgcagcac tcggctgcct egteaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg
481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagetetgge
541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac
601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag
661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc etgaaettet gggcggtccc
721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag
781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac
841 gttgatggag tcgaagtaca taatgetaag accaagccta gagaggagca gtataatagt
901 acataccgtg tagteagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa
961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag
1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg
1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaagget tctaccccag cgacatcgcc
1141 gttgagtggg agagtaaegg teageetgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg
1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagetgaetg tggacaagtc ccgctggcag
1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag
1321 aagteaetga gcctgagccc agggaag
Последовательность белка, определяющая химерную тяжелую цепь полной длины Ch14F11 (вариабельную область тяжелой цепи мыши и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 198) qvtlkesgpg ilqpsqtlsl tcsfsgfsls tygmgvgwir qpsgkglewl adiwwdddky ynpslksrlt iskdtssnev flkiaivdta dtatyycarr ghysamdywg qgtsvtvssa
121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg
181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk sedkthtepp cpapellggp
241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns
301 tyrvvsvltv Ihqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem
361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq
421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh14F11 с IGHV2-5 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 199) cagatcactt tgaaagaaag cggaccgacc ttggtcaagc ccacacaaac cctcacgctc acgtgtacat tttcggggtt ctcgctttca aettaeggga tgggagtagg gtggattcgc
121 cagccgcctg gtaaagcgtt ggagtggctt gcagacatct ggtgggacga cgataagtac
181 tataatccct cgctcaagtc cagactgacc atcacgaaag atacgagcaa gaaccaggtc
241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccagtg gataeggeta catattactg cgccaggcgg
301 ggtcactact cagcgatgga ttattggggc cagggaacac tggtaacggt gtcgtccgcc
361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc
421 actgcagcac tcggctgcct egteaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg
481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagetetgge
541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac
601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag
661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc etgaaettet gggcggtccc
721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag
781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac
841 gttgatggag tcgaagtaca taatgetaag accaagccta gagaggagca gtataatagt
901 acataccgtg tagteagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa
961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag
1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg
1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaagget tctaccccag cgacatcgcc
1141 gttgagtggg agagtaaegg teageetgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg
1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagetgaetg tggacaagtc ccgctggcag
1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag
1321 aagteaetga gcctgagccc agggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh14F11 с IGHV2-5 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 200) qitlkesgpt Ivkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky ynpslksrlt itkdtsknqv vltmtnmdpv dtatyycarr ghysamdywg qgtlvtvssa
121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg
181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk sedkthtepp cpapellggp
241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns
301 tyrvvsvltv Ihqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem
361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq
421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь полной длины Sh14F11 с IGHV2-70 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 201)
- 71 038645 caagtgactc tcaaggagtc cggacccgcc ctggtcaaac caacgcagac actgacgctc acatgcacct tcagcggatt ttcgttgtca acgtacggca tgggtgtggg gtggattcgc
121 cagcctccgg ggaaagccct tgaatggttg gcggacatct ggtgggatga tgacaagtac
181 tataatccct cacttaagtc acggttgacg atctcgaaag acaccagcaa gaaccaggta
241 gtgctgacaa tgactaacat ggacccggtc gatacagcgg tctactattg tgctagaagg
301 ggacactact ccgcaatgga ttattggggt caggggacgc tcgtaaccgt gtcgtcggcc
361 tcaacaaaag gaccaagtgt gttcccactc gcccctagca gcaagagtac atccgggggc
421 actgcagcac tcggctgcct cgtcaaggat tattttccag agccagtaac cgtgagctgg
481 aacagtggag cactcacttc tggtgtccat acttttcctg ctgtcctgca aagctctggc
541 ctgtactcac tcagctccgt cgtgaccgtg ccatcttcat ctctgggcac tcagacctac
601 atctgtaatg taaaccacaa gcctagcaat actaaggtcg ataagcgggt ggaacccaag
661 agctgcgaca agactcacac ttgtccccca tgccctgccc ctgaacttct gggcggtccc
721 agcgtctttt tgttcccacc aaagcctaaa gatactctga tgataagtag aacacccgag
781 gtgacatgtg ttgttgtaga cgtttcccac gaggacccag aggttaagtt caactggtac
841 gttgatggag tcgaagtaca taatgctaag accaagccta gagaggagca gtataatagt
901 acataccgtg tagtcagtgt tctcacagtg ctgcaccaag actggctcaa cggcaaagaa
961 tacaaatgca aagtgtccaa caaagcactc ccagccccta tcgagaagac tattagtaag
1021 gcaaaggggc agcctcgtga accacaggtg tacactctgc cacccagtag agaggaaatg
1081 acaaagaacc aagtctcatt gacctgcctg gtgaaaggct tctaccccag cgacatcgcc
1141 gttgagtggg agagtaacgg tcagcctgag aacaattaca agacaacccc cccagtgctg
1201 gatagtgacg ggtctttctt tctgtacagt aagctgactg tggacaagtc ccgctggcag
1261 cagggtaacg tcttcagctg ttccgtgatg cacgaggcat tgcacaacca ctacacccag
1321 aagtcactga gcctgagccc agggaag
Последовательность белка, определяющая тяжелую цепь полной длины Sh14F11 с IGHV2-70 (гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи и константную область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 202) qvtlkesgpa Ivkptqtltl tctfsgfsls tygmgvgwir qppgkalewl adiwwdddky ynpslksrlt iskdtsknqv vltmtnmdpv dtavyycarr ghysamdywg qgtlvtvssa
121 stkgpsvfpl apsskstsgg taalgclvkd yfpepvtvsw nsgaltsgvh tfpavlqssg
181 lyslssvvtv pssslgtqty icnvnhkpsn tkvdkrvepk scdkthtcpp cpapellggp
241 svflfppkpk dtlmisrtpe vtcvvvdvsh edpevkfnwy vdgvevhnak tkpreeqyns
301 tyrvvsvltv Ihqdwlngke ykckvsnkal papiektisk akgqprepqv ytlppsreem
361 tknqvsltcl vkgfypsdia vewesngqpe nnykttppvl dsdgsfflys kltvdksrwq
421 qgnvfscsvm healhnhytq kslslspgk
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерную легкую цепь полной длины Ch01G06 (вариабельную область каппа-цепи мыши и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 203) gacatccaaa tgacccagtc acccgcgagc ctttcggcgt cggtcggaga aacggtcacg atcacgtgcc ggacatcaga gaatctccat aactacctcg cgtggtatca acagaagcag
121 gggaagtcgc cccagttgct tgtatacgat gcgaaaacgt tggcggatgg ggtgccgtcc
181 agattctcgg gatcgggctc ggggacgcag tactcgctca agatcaattc gctgcagccg
241 gaggactttg ggtcgtacta ttgtcagcat ttttggtcat caccgtatac atttggaggt
301 ggaacgaaac ttgagattaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
[00474] Последовательность белка, определяющая химерную легкую цепь полной длины Ch01G06 (вариабельную область каппа-цепи мыши и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 204) diqmtqspas Isasvgetvt itcrtsenlh nylawyqqkq gkspqllvyd aktladgvps rfsgsgsgtq yslkinslqp edfgsyycqh fwsspytfgg gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 205) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaagtcac cgaaactcct tgtctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 206)
- 72 038645 diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn nylawyqqkp gkspkllvyd aktladgvps fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 S43A V48I (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (также упоминаемую в данном документе как легкая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGFV1-39; SEQ ID NO: 207) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 S43A V48I (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (также упоминаемую в данном документе как легкая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGFV1-39; SEQ ID NO: 208) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 V48I (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппацепи человека) (SEQ ID NO: 209) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 V48I (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 210) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGKV1-39 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (также упоминаемую в данном документе как легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 S43A V48I; SEQ ID NO: 207) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaaggccc cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgt cgccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGKV1-39 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (также упоминаемую в данном документе как легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 S43A V48I; SEQ ID NO: 208) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkapklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsspytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Hu01G06 F2 с
- 73 038645
IGKV1-39 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 263) gacatccaaa tgacccagtc gccgtcgtcg ctttcagcgt cggtagggga tcgggtcaca attacgtgcc gaacgtcaga gaatttgcat aactacctcg cgtggtatca gcagaagccc
121 gggaagtcac cgaaactcct tatctacgat gcgaaaacgc tggcggatgg agtgccgtcg
181 agattctcgg gaagcggatc cggtacggac tatacgctta cgatctcatc gctccagccc
241 gaggactttg cgacgtacta ttgtcagcat ttttggtcgg acccctacac atttgggcag
301 gggaccaagt tggaaatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGKV1-39 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 264) diqmtqspss Isasvgdrvt itcrtsenlh nylawyqqkp gkspklliyd aktladgvps rfsgsgsgtd ytltisslqp edfatyycqh fwsdpytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерную легкую цепь полной длины
Ch06C11 (вариабельную область каппа-цепи мыши и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 211) gatatcgtca tgacccagtc ccagaagttc atgtcaactt cagtgggaga cagagtgtcc gtcacatgta aagcctcgca aaatgtggga accaacgtag cgtggttcca gcagaaacct
121 ggccaatcac cgaaggcact gatctactcg gccagctata ggtactcggg agtaccagat
181 cggtttacgg ggtcggggag cgggacggac tttatcctca ctatttccaa tgtccagtcg
241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataacaact atcccctcac gtttggtgct
301 ggtacaaaat tggagttgaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая химерную легкую цепь полной длины Ch06C11 (вариабельную область каппа-цепи мыши и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 212) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawfqqkp gqspkaliys asyrysgvpd rftgsgsgtd filtisnvqs edlaeyfcqq ynnypltfga gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Sh06C11 с IGKV1-16 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 213) gacatccaaa tgacccaatc gccctcctcc ctctccgcat cagtagggga ccgcgtcaca attacttgca aagcgtcgca gaacgtcgga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc
121 ggaaaagctc cgaagagctt gatctactcg gcctcatata ggtattcggg tgtgccgagc
181 cggtttagcg ggtcggggtc aggtactgat ttcacgctca caatttcatc gttgcagcca
241 gaagatttcg ccacatatta ctgtcagcag tacaacaatt accctctgac gttcggccag
301 ggaaccaaac ttgagatcaa gcgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Sh06C11 c IGKV1-16 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 214) diqmtqspss Isasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkapksliys asyrysgvps rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyycqq ynnypltfgq gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерную легкую цепь полной длины Ch14F11 (вариабельную область каппа-цепи мыши и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 215)
- 74 038645 gacatcgtga tgacacagtc acagaaattc atgtccacat ccgtcggtga tagagtatcc gtcacgtgta aggcctcgca aaacgtagga actaatgtgg cgtggtatca acagaagcca
121 ggacagtcac ccaaagcact catctacagc ccctcatatc ggtacagcgg ggtgccggac
181 aggttcacgg gatcggggag cgggaccgat tttacactga ccatttcgaa tgtccagtcg
241 gaggaccttg cggaatactt ctgccagcag tataactcgt accctcacac gtttggaggt
301 ggcactaagt tggagatgaa acgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая химерную легкую цепь полной длины Ch14F11 (вариабельную область каппа-цепи мыши и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 216) divmtqsqkf mstsvgdrvs vtckasqnvg tnvawyqqkp gqspkaliys psyrysgvpd rftgsgsgtd ftltisnvqs edlaeyfcqq ynsyphtfgg gtklemkrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь полной длины Hu14F11 с IGKV1-16 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 217) gatatccaga tgacacagtc accctcgtcg ctctcagctt ccgtaggcga cagggtcact attacgtgta aagcatcaca gaacgtcgga acgaatgtgg cgtggtttca gcagaagccc
121 gggaagagcc ccaaagcgct tatctactcc ccgtcgtatc ggtattccgg tgtgccaagc
181 agattttcgg ggtcaggttc gggaactgac tttaccctga ccatctcgtc cctccaaccg
241 gaagatttcg ccacgtactt ctgccagcag tacaacagct atcctcacac attcggacaa
301 gggacaaagt tggagattaa acgcacagtt gctgccccca gcgtgttcat tttcccacct
361 agcgatgagc agctgaaaag cggtactgcc tctgtcgtat gcttgctcaa caacttttac
421 ccacgtgagg ctaaggtgca gtggaaagtg gataatgcac ttcaatctgg aaacagtcaa
481 gagtccgtga cagaacagga cagcaaagac tcaacttatt cactctcttc caccctgact
541 ctgtccaagg cagactatga aaaacacaag gtatacgcct gcgaggttac acaccagggt
601 ttgtctagtc ctgtcaccaa gtccttcaat aggggcgaat gt
Последовательность белка, определяющая легкую цепь полной длины Hu14F11 с IGKV1-16 (гуманизированную вариабельную область каппа-цепи и константную область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 218) diqmtqspss Isasvgdrvt itckasqnvg tnvawfqqkp gkspkaliys psyrysgvps rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyfcqq ynsyphtfgq gtkleikrtv aapsvfifpp
121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt
181 Iskadyekhk vyacevthqg Isspvtksfn rgec
Табл. 22 представляет собой карту соответствий, на которой приведены SEQ ID NO каждой после довательности, обсуждаемой в данном примере.
Таблица 22
SEQID NO. Нуклеиновая кислота или белок
171 Константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
172 Константная область IgGl человека—белок
173 Константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
174 Константная область каппа-цепи человека—белок
175 Гуманизированная химерная тяжелая цепь Ch01G06: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
176 Гуманизированная химерная тяжелая цепь Ch01G06: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека—белок
177 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
178 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека—белок
179 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
180 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека—белок
181 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
182 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L от человека + константная область IgGl человека—белок
183 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
184 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S от человека + константная область IgGl человека—белок
185 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
186 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q от человека + константная область IgGl человека—белок
187 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
188 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L от человека + константная область IgGl человека—белок
189 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
- 75 038645
SEQ ID NO. Нуклеиновая кислота или белок
190 Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L от человека + константная область IgGl человека—белок
255 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
256 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека—белок
257 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
258 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека—белок
259 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
260 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека—белок
261 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
262 Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека—белок
191 Гуманизированная химерная тяжелая цепь ChO6Cll: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
192 Гуманизированная химерная тяжелая цепь ChO6Cll: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека—белок
193 Гуманизированная тяжелая цепь НЕ LM 06С11: вариабельная область IGHV2-70 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
194 Гуманизированная тяжелая цепь НЕ LM 06С11: вариабельная область IGHV2-70 от человека + константная область IgGl человека—белок
195 Гуманизированная тяжелая цепь HuO6Cl 1: вариабельная область IGHV2-5 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
196 Гуманизированная тяжелая цепь HuO6Cl 1: вариабельная область IGHV2-5 от человека + константная область IgGl человека—белок
197 Гуманизированная химерная тяжелая цепь Chl4F 11: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
198 Гуманизированная химерная тяжелая цепь Chl4F 11: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека—белок
199 Гуманизированная тяжелая цепь Shl4F 11: вариабельная область IGHV2-5 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
200 Гуманизированная тяжелая цепь Shl4F 11: вариабельная область IGHV2-5 от человека + константная область IgGl человека—белок
201 Гуманизированная тяжелая цепь Shl4F 11: вариабельная область IGHV2-70 от человека + константная область IgGl человека—нуклеиновая кислота
202 Гуманизированная тяжелая цепь Shl4F 11: вариабельная область IGHV2-70 от человека + константная область IgGl человека—белок
203 Гуманизированная химерная цепь Ch01G06: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
204 Гуманизированная химерная цепь Ch01G06: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
205 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
206 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
207 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
208 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
- 76 038645
SEQID NO. Нуклеиновая кислота или белок
209 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
210 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
207 Гуманизированная цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
208 Гуманизированная цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
263 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 F2 от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
264 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 F2 от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
211 Гуманизированная химерная цепь ChO6Cl 1: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
212 Гуманизированная химерная цепь ChO6Cl 1: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
213 Гуманизированная цепь ShO6Cl 1: вариабельная область IGKV1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
214 Гуманизированная цепь ShO6Cl 1: вариабельная область IGKV1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
215 Гуманизированная химерная цепь Chl4F 11: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
216 Гуманизированная химерная цепь Chl4F 11: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
217 Гуманизированная цепь Hul4Fl 1: вариабельная область IGKV1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека—нуклеиновая кислота
218 Гуманизированная цепь Hul4Fl 1: вариабельная область IGKV1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека—белок
В табл. 23 ниже представлены антитела, содержащие химерные тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина и иллюстративные комбинации химерных или гуманизированных тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина полной длины.
Таблица 23
Название антитела Легкая цепь Тяжелая цепь
Hu01G06-l Гуманизированная химерная цепь Ch01G06: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:204) Гуманизированная химерная тяжелая цепь Ch01G06: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 176)
Hu01G06-46 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06: вариабельная область IGHV1 -18 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 178)
Hu01G06-52 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06: вариабельная область IGHV 1 -69 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 180)
Hu01G06-100 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь ShO 1G06: вариабельная область IGHV 1-18 M69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:182)
- 77 038645
Название антитела Легкая цепь Тяжелая цепь
Hu01G06-101 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:186)
Hu01G06-102 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1-39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:184)
Hu01G06-103 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:188)
Hu01G06-104 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:206) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:190)
Hu01G06-105 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:210) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV 1-18 M69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:182)
Hu01G06-106 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:210) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV 1-18 M69L K64Q от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:186)
Hu01G06-107 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:210) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:184)
Hu01G06-108 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:210) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:188)
Hu01G06-109 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1-39 V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:210) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:190)
Hu01G06-110 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV 1-18 M69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:182)
Hu01G06-lll Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:186)
- 78 038645
Название антитела Легкая цепь Тяжелая цепь
Hu01G06-112 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV1 -39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-18 M69L K64Q G44S от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 184)
Hu01G06-113 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S I69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:188)
Hu01G06-114 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 S43A V48I от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Sh01G06: вариабельная область IGHV1-69 T30S K64Q I69L от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:190)
Hu01G06-122 Гуманизированная цепь Hu01G06 F1: вариабельная область IGKV 1 39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:256)
Hu01G06-127 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 F2 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:264) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-18 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:258)
Hu01G06-135 Гуманизированная цепь Hu01G06 F1: вариабельная область IGKV 1 39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 Fl: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:260)
Hu01G06-138 Гуманизированная цепь Hu01G06 F1: вариабельная область IGKV 1 39 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:208) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:262)
Hu01G06-146 Гуманизированная цепь Hu01G06: вариабельная область IGKV 1 -39 F2 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:264) Гуманизированная тяжелая цепь Hu01G06 F2: вариабельная область IGHV1-69 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:262)
Hu06Cll-l Гуманизированная химерная цепь ChO6Cl 1: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:212) Гуманизированная химерная тяжелая цепь ChO6Cll: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:176)
HuO6Cll-27 Гуманизированная цепь ShO6Cl 1: вариабельная область IGKV 1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:214) Гуманизированная тяжелая цепь НЕ LM 06С11: вариабельная область IGHV2-70 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:194)
Название антитела Легкая цепь Тяжелая цепь
Hu06C 11-30 Гуманизированная цепь ShO6Cl 1: вариабельная область IGKV 1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:214) Гуманизированная тяжелая цепь НиОбС 11: вариабельная область IGHV2-5 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 196)
- 79 038645
Название антитела Легкая цепь Тяжелая цепь
Hul4Fll-l Гуманизированная химерная цепь Chl4F 11: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:216) Гуманизированная химерная тяжелая цепь Chl4Fl 1: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 198)
HU14F11-23 Гуманизированная химерная цепь Chl4F 11: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:216) Гуманизированная химерная тяжелая цепь ChO6Cl 1: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 192)
HU14F11-24 Гуманизированная химерная цепь ChO6Cl 1: вариабельная область от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:212) Гуманизированная химерная тяжелая цепь Chl4Fl 1: вариабельная область от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO: 198)
HU14F11-39 Гуманизированная цепь Hul4Fl 1: вариабельная область IGKV1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:218) Гуманизированная тяжелая цепь Shl4Fll: вариабельная область IGHV2-5 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:200)
HU14F11-47 Гуманизированная цепь Hul4Fl 1: вариабельная область IGKV1-16 от человека + константная область каппа-цепи человека (SEQ ID NO:218) Гуманизированная тяжелая цепь Shl4Fll: вариабельная область IGHV2-70 от человека + константная область IgGl человека (SEQ ID NO:202)
Конструкции антител, содержащие химерные тяжелую и легкую цепи полной длины, указаны ниже.
Химерное 01G06 (Hu01G06-1) = химерная тяжелая цепь полной длины Ch01G06 (вариабельная область тяжелой цепи мыши и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 176) и химерная легкая цепь полной длины Ch01G06 (вариабельная область каппа-цепи мыши и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 204)
Химерное 06C11 (HuO6C11-1) = химерная тяжелая цепь полной длины Ch06C11 (вариабельная область тяжелой цепи мыши и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 192) и химерная легкая цепь полной длины Ch06C11 (вариабельная область каппа-цепи мыши и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 212)
Химерное 14F11 (Hu14F11-1) = химерная тяжелая цепь полной длины Ch14F11 (вариабельная область тяжелой цепи мыши и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 198) и химерная легкая цепь полной длины Ch14F11 (вариабельная область каппа-цепи мыши и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 216)
Пятнадцать возможных конструкций антител, содержащих тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина полной длины, содержащие гуманизированные вариабельные области, указаны ниже.
Hu01G06-46 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 с IGHV1-18 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 178) и легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 206)
Hu01G06-52 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 с IGHV1-69 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 180) и легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 206)
Hu01G06-107 = тяжелая цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L K64Q G44S (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 184) и легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 V48I (гуманизированная вариабельная область каппацепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 210)
Hu01G06-108 = тяжелая цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-69 T30S I69L (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 188) и легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 V48I (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 210)
Hu01G06-112 = тяжелая цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-18 M69L K64Q G44S (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 184) и легкая цепь полной длины
Hu01G06 с IGKV1-39 S43A V48I (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 208)
Hu01G06-113 = тяжелая цепь полной длины Sh01G06 с IGHV1-69 T30S I69L (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 188) и легкая цепь полной длины Hu01G06 с IGKV1-39 S43A V48I (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 208)
- 80 038645
Hu01G06-122 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGHV1-18 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 256) и легкая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 208)
Hu01G06-127 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-18 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 258) и легкая цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 264)
Hu01G06-135 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGHV1-69 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 260) и легкая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 208)
Hu01G06-138 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-69 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 262) и легкая цепь полной длины Hu01G06 F1 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 208)
Hu01G06-146 = тяжелая цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGHV1-69 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 262) и легкая цепь полной длины Hu01G06 F2 с IGKV1-39 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 264)
Hu06C11-27 = тяжелая цепь полной длины НЕ LM 06C11 с IGHV2-70 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 194) и легкая цепь полной длины Sh06C11 с IGKV1-16 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 214)
Hu06C11-30 = тяжелая цепь полной длины Hu06C11 с IGHV2-5 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 196) и легкая цепь полной длины Sh06C11 с IGKV1-16 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 214)
Hu14F11-39 = тяжелая цепь полной длины Sh14F11 с IGHV2-5 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 200) и легкая цепь полной длины Hu14F11 с IGKV1-16 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппацепи человека) (SEQ ID NO: 218)
Hu14F11-47 = тяжелая цепь полной длины Sh14F11 с IGHV2-70 (гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи и константная область IgG1 человека) (SEQ ID NO: 202) и легкая цепь полной длины Hu14F11 с IGKV1-16 (гуманизированная вариабельная область каппа-цепи и константная область каппа-цепи человека) (SEQ ID NO: 218)
Пример 15. Аффинность связывания гуманизированных и химерных моноклональных антител к GDF15
Аффинность связывания и кинетические параметры связывания химерных и гуманизированных антител с mFc-rhGDF15 определяли методом поверхностного плазмонного резонанса с применением прибора BIAcore® T100 (GE Healthcare, Пискатауэй, Нью-Джерси).
Антитело козы к IgG человека (специфичное к Fc-фрагменту, Jackson ImmunoResearch, Вест-Гроув, Пенсильвания) иммобилизовали на сенсорных чипах СМ4 со слоем карбоксиметилированного декстрана посредством реакции сочетания с аминами в соответствии со стандартным протоколом. Анализы проводили при 37°С с применением PBS, содержащего 0,05% поверхностно-активного вещества Р20, в качестве подвижного буфера. Антитела захватывались в отдельные проточные ячейки при скорости потока 10 мкл/мин. Время введения варьировали для каждого антитела так, чтобы достичь Rmax от 30 до 60 RU. Буфер или mFc-rhGDF15, разбавленный подвижным буфером, вводили последовательно на эталонную поверхность (без захваченных антител) и активную поверхность (с антителами, подлежащими испытанию) в течение 240 с при 60 мкл/мин. Фазу диссоциации отслеживали в течение периода до 1200 с. Поверхность затем регенерировали путем двух 60-секундных введений 10 мМ глицина-HCl, рН 2,25 при скорости потока 30 мкл/мин. Диапазон концентрации GDF15 в испытании составлял от 20 до 0,625 нМ.
Кинетические параметры определяли с использованием кинетической функции программного обеспечения BIAevaluation (GE Healthcare) с вычитанием двух контрольных реакций. Для каждого антитела определяли следующие кинетические параметры: ka (константа скорости ассоциации), kd (константа скорости диссоциации) и KD (равновесная константа диссоциации). Значения кинетических параметров очищенных моноклональных антител в комплексе с mFc-rhGDF15 обобщены в табл. 24.
- 81 038645
Таблица 24
Антитело ка(1/М*с) kd(l/c) KD(M) η
Hu01G06-l 4,2Е+06 6,4Е-04 Е6Е-10 8
Hu01G06-46 3,6Е+06 3,8Е-04 1ДЕ-10 И
Hu01G06-52 3,6Е+06 3,6Е-04 9,9Е-11 10
НиОбСИ-1 5,ЗЕ+06 8,4Е-04 Е8Е-10 2
НиОбС 11-27 4,7Е+06 8,2Е-04 Е8Е-10 2
НиОбС 11-30 4,8Е+06 8,7Е-04 Е8Е-10 2
HU14F11-1 3,0Е+06 4,6Е-04 1,6Е-10 2
Hul4Fll-39 3,0Е+06 Е9Е-04 6,6Е-11 2
HU14F11-47 3,ЗЕ+06 1,8Е-04 6,5Е-11 2
Результаты в табл. 24 демонстрируют, что химерное и каждое из гуманизированных антител характеризуются высокой скоростью ассоциации (ka), очень низкой скоростью диссоциации (kd) и очень высокой аффинностью (KD). В частности, антитела характеризуются аффинностью, варьирующей в диапазоне от приблизительно 65 до приблизительно 200 пМ.
Значения кинетических параметров химерного 01G06 (Hu01G06-1), двух исходных лидерных гуманизированных моноклональных антител 01G06 (Hu01G06-46 и -52) и вариантов гуманизированного моноклонального антитела 01G06 с оптимизированной последовательностью Hu01G06 100-114 (в надосадочной жидкости) в комплексе с mFc-rhGDF15 обобщены в табл. 25.
Таблица 25
Антитело ka(l/M*c) kd (1/c) KD(M) n
Hu01G06-l 4,9E+06 7ДЕ-04 l,4E-10 3
Hu01G06-46 4ДЕ+06 4,3E-04 l,0E-10 3
Hu01G06-52 5,0E+06 4,4E-04 8,9E-11 3
Hu01G06-100 4ДЕ+06 6,2E-04 l,5E-10 3
Hu01G06-101 4,4E+06 6,3E-04 l,4E-10 3
Hu01G06-102 4,4E+06 4,6E-04 1ДЕ-10 3
Hu01G06-103 4,4E+06 4,7E-04 1ДЕ-10 3
Hu01G06-104 4,5E+06 5,2E-04 l,2E-10 3
Hu01G06-105 4,3E+06 5,6E-04 E3E-10 3
Hu01G06-106 4,3E+06 7,0E-04 E6E-10 3
Hu01G06-107 4ДЕ+06 4,7E-04 l,2E-10 3
Hu01G06-108 4,2E+06 4,6E-04 l,2E-10 3
Hu01G06-109 4,6E+06 5,6E-04 E3E-10 4
Hu01G06-110 4,3E+06 5,8E-04 l,4E-10 4
Hu01G06-lll 4,3E+06 6,6E-04 E6E-10 3
Hu01G06-112 4,7E+06 5,3E-04 l,2E-10 3
Hu01G06-113 4,5E+06 4,8E-04 1ДЕ-10 3
Hu01G06-114 4,5E+06 5,4E-04 E3E-10 3
Результаты в табл. 25 демонстрируют, что антитела с оптимизированной последовательностью, Hu01G06 100-114, характеризуются аффинностью связывания, варьирующей в диапазоне от приблизительно 89 до приблизительного пМ.
Аффинность связывания и кинетические параметры связывания mFc-rhGDF15 с вариантами моноклональных антител с тяжелой цепью - химерным антителом 14F11 (Hu14F11-1), антителом с химерной легкой цепью 14F11 и химерной тяжелой цепью 06C11 (Hu14F11-23), а также антителом с химерной легкой цепью 06С11 и химерной тяжелой цепью 14F11 (Hu14F11-24) (в надосадочной жидкости) - определяли с помощью биослойной интерферометрии (BLI) на приборе Octet™ QK (ForteBio, Inc., Менло-Парк, Калифорния). Анализ на Octet проводили при 30°С с применением 1X буфера для кинетического анализа (ForteBio, Inc.) в качестве аналитического буфера. Применяли биодатчики для захвата антител к Fc IgG человека (АНС) (ForteBio, Inc.) для захвата антител человека датчиками. Датчики насыщали в аналитическом буфере в течение 300 с перед анализом. Антитела загружали на датчики путем погружения датчиков в раствор надосадочной жидкости с антителами на 220 с, что обычно приводило к уровню захвата 1,5-2 нм. Исходный уровень устанавливали путем погружения датчиков в 1X аналитический буфер на 200 с. Затем отслеживали ассоциацию в 400 нМ растворе белка mFc-rhGDF15 в течение 220 с с последующей диссоциацией в течение 600 с в буфере в отдельности.
Кинетические параметры для Hu14F11-1, Hu14F11-23 и Hu14F11-24 определяли с помощью кинетической функции программного обеспечения для анализа ForteBio версии 7.0. Определяли кинетические параметры антитела, ka, kd и KD.
Значения кинетических параметров вариантов моноклональных антител с тяжелой цепью Hu14F11-1, Hu14F11-23 и Hu14F11-24 (в надосадочной жидкости) в комплексе с mFc-rhGDF15 обобщены в табл. 26.
Таблица 26
Антитело ka(l/M*c) kd (1/c) KD(M) n
Hul4Fll-l 6,3E+05 l,9E-05 3,2E-11 3
Hul4Fll-23 3,4E+05 6,2E-05 l,8E-10 1
Hul4Fll-24 7ДЕ+05 2,2E-04 ЗДЕ-10 1
Результаты в табл. 26 демонстрируют, что Hu14F11-23 и Hu14F11-24 (т.е. антитела, которые состо- 82 038645 ят из одной химерной цепи 06С11 (тяжелой или легкой) в комбинации с одной химерной цепью 14F11 (тяжелой или легкой)), сохраняют связывание с GDF15. В частности, эти антитела характеризуются высокой аффинностью, варьирующей в диапазоне от приблизительно 180 до приблизительно 310 пМ.
Пример 16. Аффинность связывания гуманизированных моноклональных антител к GDF15, подвергшихся созреванию аффинности
Аффинность связывания и кинетические параметры связывания химерных и гуманизированных антител с mFc-rhGDF15, отщепленным rhGDF15, зрелым рекомбинантным GDF15 мыши, слитым с Fc кролика (rFc-rmGDF15), и зрелым рекомбинантным GDF15 яванского макака, слитым с Fc мыши (mFcrcGDF15), определяли методом поверхностного плазмонного резонанса с применением прибора BIAcore® T100 (GE Healthcare, Пискатауэй, Нью-Джерси).
Антитело козы к IgG человека (специфичное к Fc-фрагменту, Jackson ImmunoResearch, Вест-Гроув, Пенсильвания) иммобилизовали на сенсорных чипах СМ4 со слоем карбоксиметилированного декстрана посредством реакции сочетания с аминами в соответствии со стандартным протоколом. Анализы проводили при 37°С с применением PBS, содержащего 0,05% поверхностно-активного вещества Р20, в качестве подвижного буфера. Антитела захватывались в отдельные проточные ячейки при скорости потока 10 мкл/мин. Время введения варьировали для каждого антитела так, чтобы достичь Rmax от 30 до 60 RU. Буфер, mFc-rhGDF15, отщепленный rhGDF15, rFc-rmGDF15 или mFc-rcGDF15, разбавленные подвижным буфером, вводили последовательно на эталонную поверхность (без захваченных антител) и активную поверхность (с антителами, подлежащими испытанию) в течение 240 с при 60 мкл/мин. Фазу диссоциации отслеживали в течение периода до 1500 с. Поверхность затем регенерировали путем двух 60секундных введений 10 мМ глицина-HCl, рН 2,25 при скорости потока 30 мкл/мин. Диапазон концентрации GDF15 в испытании для каждого белка GDF15 составлял от 5 до 0,3125 нМ (двукратные разведения).
Кинетические параметры определяли с использованием кинетической функции программного обеспечения BIAevaluation (GE Healthcare) с вычитанием двух контрольных реакций. Для каждого антитела определяли следующие кинетические параметры: ka (константа скорости ассоциации), kd (константа скорости диссоциации) и KD (равновесная константа диссоциации). Значения кинетических параметров очищенных моноклональных антител в комплексе с mFc-rhGDF15, зрелым GDF15 человека, rFcrmGDF15 и mFc-rcGDF15 обобщены в табл. 27.
Таблица 27
Белок Антитело ka(l/M*c) kd (1/c) KD (M) n
mFc-rhGDF15 Hu01G06-122 5,9E+06 2ДЕ-05 6,5E-12 5
Hu01G06-127 4,6E+06 4,2E-05 1,8E-11 4
Hu01G06-135 5,3E+06 4,4E-05 1,4E-11 5
Hu01G06-138 5,9E+06 4ДЕ-05 1ДЕ-11 5
Hu01G06-146 5,3E+06 2,6E-05 9,3E-12 5
Отщепленный rhGDF15 Hu01G06-122 7,9E+06 3,4E-05 7,9E-12 4
Hu01G06-127 6ДЕ+06 3,6E-05 l,0E-ll 4
Hu01G06-135 7,3E+06 6,2E-05 l,0E-ll 4
Hu01G06-138 7,9E+06 2,5E-05 4,5E-12 4
Hu01G06-146 6,5E+06 5,2E-05 1ДЕ-11 4
mFc-rcGDF15 Hu01G06-122 2,3E+06 2,4E-05 l,0E-ll 4
Hu01G06-127 1.8E+06 1.6E-05 9,5E-12 4
Hu01G06-135 2,2E+06 7,9E-05 3,8E-11 4
Hu01G06-138 2,3E+06 5,3E-05 2,5E-11 4
Hu01G06-146 2,0E+06 l,5E-05 8,0E-12 4
rFc-rmGDF15 Hu01G06-122 2,2E+07 l,4E-03 6,3E-11 2
Hu01G06-127 3,9E+07 2ДЕ-03 5ДЕ-11 2
Hu01G06-135 3,7E+07 l,9E-03 5,5E-11 2
Hu01G06-138 l,9E+07 8,0E-04 4,4E-11 2
Hu01G06-146 1ДЕ+07 7,2E-04 6,3E-11 2
Результаты в табл. 27 демонстрируют, что химерное и каждое из гуманизированных антител характеризуются высокой скоростью ассоциации (ka), очень низкой скоростью диссоциации (kd) и очень высокой аффинностью (KD). В частности, антитела характеризуются аффинностью, варьирующей в диапазоне от менее 5 пМ (например, приблизительно 4,5 пМ) до приблизительно 65 пМ.
Пример 17. Регрессия кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080
В данном примере демонстрируется регрессию кахексии (на что указывает потеря веса тела) при применении гуманизированных антител 01G06, 06С11, 14F11 в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080. Клетки НТ-1080 выращивали в культуре при 37°С и инокулировали подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель, как описано выше в примере 10. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 93%, мышей разделяли случайным образом на группы по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG мыши в качестве контроля, 01G06, 06С11, 14F11 и их соответствующие гуманизированные варианты в дозе 2 мг/кг. Обработку проводили один раз в день путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителами 01G06, Hu01G0646 и Hu01G06-52 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом до 100% (р<0,001)
- 83 038645 (фиг. 23). Статистический анализ проводили с применением ANOVA. Результаты, демонстрирующие обращение вспять потери веса тела за день в модели НТ-1080, показаны на фиг. 23 и в табл. 28 соответственно.
Таблица 28
Группа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mlgG)
Средство мг/кг
1 mlgG 2 79,5 данные отсутствуют
2 01G06 2 87,6 р<0,001
3 Hu01G06-46 2 95,4 р<0,001
4 Hu01G06-52 2 87,8 р<0,001
Данные на фиг. 23 и в табл. 28 указывают на то, что антитела 01G06, Hu01G06-46 и Hu01G06-52 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
Обработка антителами 06С11, Hu06C11-27 и Hu06C11-30 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 24). Статистический анализ проводили с применением ANOVA. Результаты, демонстрирующие обращение вспять потери веса тела в модели НТ-1080, показаны на фиг. 24 и в табл. 29.
Таблица 29
Группа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mlgG)
Средство мг/кг
1 mlgG 2 87,7 данные отсутствуют
2 06С11 2 93,6 р<0,001
3 HuO6Cll-27 2 93,2 р<0,001
4 HuO6C 11-30 2 89,8 р<0,01
Данные на фиг. 24 и в табл. 29 указывают на то, что антитела 06С11, Hu06C11-27 и Hu06C11-30 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
Обработка антителами 14F11, Hu14F11-39 и Hu14F11-47 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 25). Статистический анализ проводили с применением ANOVA.
Результаты, демонстрирующие обращение вспять потери веса тела в модели НТ-1080, показаны на фиг. 25 и в табл. 30.
Таблица 30
Г руппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с mlgG)
Средство мг/кг
1 mlgG 2 87,7 данные отсутствуют
2 14F11 2 96,6 р<0,001
3 Hul4Fll-39 2 90,5 р<0,001
4 Hul4Fll-47 2 90,7 р<0,001
Данные на фиг. 25 и в табл. 30 указывают на то, что антитела 14F11, Hu14F11-39 и Hu14F11-47 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
Обработка гуманизированными антителами 01G06 (т.е. антителами Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 и Hu01G06-146) приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 26). Статистический анализ проводили с применением ANOVA. Обработку с помощью IgG человека (hIgG) применяли в качестве контроля. Результаты, демонстрирующие обращение вспять потери веса тела в модели НТ-1080, показаны на фиг. 26 и в табл. 31.
Таблица 31
Г руппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с hlgG)
Средство мг/кг
1 hlgG 2 84,2 данные отсутствуют
2 Hu01G06-122 2 96,3 р<0,001
3 Hu01G06-127 2 96,1 р<0,001
4 Hu01G06-135 2 93,5 р<0,001
5 Hu01G06-138 2 91,9 р<0,001
6 Hu01G06-146 2 92,7 р<0,001
Данные на фиг. 26 и в табл. 31 указывают на то, что гуманизированные антитела к GDF15 Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 и Hu01G06-146 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
Пример 18. Регрессия кахексии в модели с индукцией mFc-rhGDF15
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии (на что указывает потеря веса тела) при применении гуманизированных антител 01G06 (т.е. антител Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135,
- 84 038645
Hu01G06-138 или Hu01G06-146) в модели кахексии, индуцированной mFc-rhGDF15. mFc-rhGDF15 (1 мкг/г) вводили подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 93%, мышей разделяли случайным образом на шесть групп по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG человека (hIgG) в качестве контроля, Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 или Hu01G06-146 в дозе 2 мг/кг. Обработку проводили один раз путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителами Hu01G06-122, Hu01G06-127, Hu01G06-135, Hu01G06-138 или Hu01G06-146 приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом или приблизительно 100% (р<0,001) (фиг. 27 и табл. 32).
Таблица 32
Г руппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с hIgG)
Средство мг/кг
1 hIgG 2 70,6 данные отсутствуют
2 Hu01G06-122 2 101,7 р<0,001
3 Hu01G06-127 2 103,2 р<0,001
4 Hu01G06-135 2 102,5 р<0,001
5 Hu01G06-138 2 101,8 р<0,001
6 Hu01G06-146 2 102,5 р<0,001
Данные на фиг. 27 и в табл. 32 указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии в модели с индукцией mFc-rhGDF15 на мышах (т.е. модели на мышах, не несущих опухоли).
Эти результаты указывают на то, что гуманизированные антитела к GDF15 могут способствовать регрессии кахексии в модели кахексии, индуцированной mFc-rhGDF15.
Пример 19. Регрессия кахексии с зависимостью доза-ответ в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии с зависимостью доза-ответ (на что указывает потеря веса тела) при применении гуманизированных антител Hu01G06-127 и Hu01G06-135 в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080. Клетки НТ-1080 выращивали в культуре при 37°С и инокулировали подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель, как описано выше в примере 10. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела достигал 93%, мышей разделяли случайным образом на группы по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG человека в качестве контроля (hIgG; 20 мг/кг), Hu01G06-127 (20, 2 или 0,2 мг/кг) и Hu01G06-135 (20, 2 или 0,2 мг/кг). Обработку проводили один раз в день путем внутривенной инъекции. Обработка антителами Hu01G06-127 и Hu01G06-135 в дозе 20 мг/кг приводила к увеличению веса тела по сравнению с начальным весом до 108% (р<0,001) (фиг. 28). Обработка антителами Hu01G06-127 и Hu01G06-135 в дозе 2 мг/кг приводила к незначительному снижению веса тела по сравнению с контролем (hIgG) относительно начального веса до 88-85% (р<0,001) (фиг. 28). Статистический анализ проводили с применением ANOVA. Результаты, демонстрирующие изменения веса тела в конце исследования в модели НТ-1080, показаны на фиг. 28 и в табл. 33.
Таблица 33
Группа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с hIgG)
Средство мг/кг
1 hIgG 20 75,2 данные отсутствуют
2 Hu01G06-127 20 108,9 р<0,001
3 Hu01G06-127 2,0 88,1 р<0,001
4 Hu01G06-127 0,2 80,0 незначимо
5 Hu01G06-135 20 108,6 р<0,001
6 Hu01G06-135 2,0 85,2 р<0,01
7 Hu01G06-135 0,2 77,3 незначимо
Данные на фиг. 28 и в табл. 33 указывают на то, что антитела Hu01G06-127 и Hu01G06-135 могут способствовать регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080 в зависимости от дозы.
Пример 20. Обращение вспять потери мышечной и жировой массы в ксенотрансплантатной модели опухоли НТ-1080
В данном примере демонстрируется регрессия кахексии (на что указывают потеря веса тела, потеря мышечной массы и потеря массы жировой ткани) при применении антитела 01G06 в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080. Клетки НТ-1080 выращивали в культуре при 37°С в атмосфере 5% СО2 с применением минимальной поддерживающей среды Игла (АТСС, № по каталогу 30-2003), содержащей 10% FBS. Клетки инокулировали подкожно в бок самкам мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель в количестве 5x106 клеток на мышь в 50% матригеле. В качестве контрольной группы без опухоли (имитация инокуляции) отбирали когорту из десяти самок мышей ICR-SCID в возрасте 8 недель с одинаковым
- 85 038645 весом тела для подкожной инокуляции в бок матригеля. Вес тела измеряли ежедневно. Когда вес тела у мышей, несущих опухоль, достигал 91%, мышей разделяли случайным образом на две группы по десять мышей в каждой. Каждая группа получала один из следующих видов обработки: IgG человека (hIgG) в качестве контроля или Hu01G06-127 в дозе 10 мг/кг в 1, 3 и 6 день. Обработку проводили путем интраперитонеальной инъекции. Обработка антителом Hu01G06-127 приводила к увеличению веса тела до 105% от исходного веса по сравнению с мышами контрольной группы, не несущими опухоли (имитация инокуляции, р <0,001) (фиг. 29А и табл. 34).
Таблица 34
Гру ппа Обработка % веса тела Анализ ANOVA (по сравнению с hlgG)
Средство мг/кг
1 hlgG 10 84,3 данные отсутствуют
2 Hu01G06-127 10 105,4 р<0,001
2 Контрольная группа без опухоли, имитация инокуляции Отсутс твует 101,9 р <0,001
Данные на фиг. 29А и в табл. 34 указывают на то, что раскрытое антитело к GDF15 может способствовать полной регрессии кахексии в ксенотрансплантатной модели фибросаркомы НТ-1080.
В этом эксперименте умерщвляли группу из десяти мышей в момент введения дозы (исходный уровень или потеря веса тела до 91%, без обработки) и в конце исследования (через восемь дней после введения дозы hIgG или Hu01G06-127, а также в случае мышей из контрольной группы без опухоли с имитацией инокуляции). Жировую массу гонад и икроножные мышцы удаляли хирургическим путем и взвешивали. Как представлено на фиг. 29В, наблюдали значительную потерю массы жировой ткани гонад через семь дней после введения дозы hIgG, но не в группе, обработанной антителом Hu01G06-127, по сравнению с контрольной группой на исходном уровне (потеря веса тела до 91%). Более того, обработка с помощью Hu01G06-127 не только предотвращала дальнейшую потерю жировой массы (по сравнению с группой на исходном уровне), но также способствовала восстановлению нормальных уровней массы жировой ткани гонад (по сравнению с контрольной группой без опухоли с имитацией инокуляции) (фиг. 29В).
Кроме того, наблюдали значительную потерю массы икроножных мышц через семь дней после введения дозы hIgG, но не в группе, обработанной антителом Hu01G06-127, по сравнению с контрольной группой на исходном уровне (потеря веса тела до 91%) (фиг. 29С). Обработка с помощью Hu01G06-127 не только предотвращала дальнейшую потерю мышечной массы (по сравнению с группой на исходном уровне), но также способствовала восстановлению нормальных уровней массы икроножных мышц (по сравнению с контрольной группой без опухоли с имитацией инокуляции) (фиг. 29С).
Эти результаты указывают на то, что раскрытые антитела к GDF15 могут способствовать полной регрессии кахексии, что определяют по потере мышечной массы, потере жировой массы и непреднамеренной потере веса в ксенотрансплантатной модели опухоли НТ-1080.
Включение посредством ссылки
Полные раскрытия всех патентных документов и научных статей, на которые ссылаются в данном документе, включены посредством ссылки во всех отношениях.
Эквиваленты
Настоящее изобретение может осуществляться в других конкретных формах без отступления от его сущности или важнейших характеристик. Вышеуказанные варианты осуществления, следовательно, рассматриваются во всех отношениях скорее как иллюстративные, нежели как ограничивающие настоящее изобретение, описанное в данном документе. Объем настоящего изобретения, таким образом, определяется прилагаемой формулой изобретения, а не вышеуказанным описанием, и подразумевается, что все изменения, которые происходят в пределах значения и диапазона эквивалентности формулы изобретения, охватываются ею.

Claims (54)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с GDF15 человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, выбранные из группы, состоящей из:
    (a) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 234 (нумерация по Chothia), и SEQ ID NO: 235 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 238 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 241 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 243 (нуме- 86 038645 рация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
    SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRLi, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (b) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 38 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 136,
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 237 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 241 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 243 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (c) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 38 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 136 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 143 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 148 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (d) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 38 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 136 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 13 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 143 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 148 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (e) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 38 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 136 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
    - 87 038645
    SEQ ID NO: 236 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 240 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 242 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
    SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRLi, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (f) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 234 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 235 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 239 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 240 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 242 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (g) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 234 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 235 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 239 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 240 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 242 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (h) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 234 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 235 (нумерация по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 143 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 148 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
    (i) (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 234 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 235 (нумера- 88 038645 ция по IMGT),
    CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
    SEQ ID NO: 13 (нумерация по Kabat), SEQ ID NO: 143 (нумерация по Chothia) и SEQ ID NO: 148 (нумерация по IMGT), и
    CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 154 (нумерация по IMGT); и (ii ) вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей
    CDRLi, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21 (нумерация по Kabat и Chothia) и SEQ ID NO: 160 (нумерация по IMGT),
    CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26 (нумерация по Kabat и Chothia) и DAK (нумерация по IMGT), и
    CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 (нумерация по Kabat, Chothia и IMGT);
  2. 2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где последовательности CDR расположены между человеческими или гуманизированными каркасными последовательностями.
  3. 3. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина по п.1.
  4. 4. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина по п.1.
  5. 5. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.3.
  6. 6. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.4.
  7. 7. Вектор экспрессии по п.6, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту по п.3.
  8. 8. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.5.
  9. 9. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.6.
  10. 10. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.7.
  11. 11. Клетка-хозяин по п.9, дополнительно содержащая вектор экспрессии по п.5.
  12. 12. Способ получения полипептида, содержащего вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, где способ включает:
    (a) выращивание клетки-хозяина по п.8 или 9 в таких условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина; и (b) очистку полипептида, содержащего вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина.
  13. 13. Способ получения антитела, которое связывается с GDF15 человека, или антигенсвязывающего фрагмента антитела, при этом способ включает:
    (a) выращивание клетки-хозяина по п.10 или 11 в таких условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует полипептид или полипептиды, содержащие вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина и/или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, таким образом получая антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела; и (b) очистку антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела.
  14. 14. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с GDF15 человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, выбранные из группы, состоящей из:
    (a) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 250, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (b) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 248, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254;
    (c) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76;
    (d) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (e) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (f) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (g) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последо-
    - 89 038645 вательность SEQ ID NO: 60, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (h) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (i) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (j) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
    (k) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (l) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (m) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (n) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (о) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (р) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;
    (q) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;
    (r) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;
    (s) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;
    (t) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;
    (u) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 246, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;
    (v) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92; и (w) вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252, и вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254.
  15. 15. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с GDF15 человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 250, и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92.
  16. 16. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина по п.14 или 15.
  17. 17. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина по п.14 или 15.
  18. 18. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.16.
  19. 19. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.17.
  20. 20. Вектор экспрессии по п.19, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту по п.16.
  21. 21. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.18.
    - 90 038645
  22. 22. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.19.
  23. 23. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.20.
  24. 24. Клетка-хозяин по п.22, дополнительно содержащая вектор экспрессии по п.18.
  25. 25. Способ получения полипептида, содержащего вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, где способ включает:
    (a) выращивание клетки-хозяина по п.21 или 22 в таких условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, и (b) очистку полипептида, содержащего вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина.
  26. 26. Способ получения антитела, которое связывается с GDF15 человека, или антигенсвязывающего фрагмента антитела, при этом способ включает:
    (a) выращивание клетки-хозяина по п.23 или 24 в таких условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует полипептид или полипептиды, содержащие вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина и/или вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, таким образом получая антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, и (b) очистку антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела.
  27. 27. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с GDF15 человека, содержащее тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, выбранные из группы, состоящей из:
    (a) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 260, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
    (b) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 258, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264;
    (c) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204;
    (d) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (e) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (f) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210;
    (g) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210;
    (h) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
    (i) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
    (j) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
    (k) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 262, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
    (l) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 262, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264;
    (m) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (n) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 186, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (о) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (р) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (q) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
    (r) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210;
    (s) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 186, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210;
    (t) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210;
    (u) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182,
    - 91 038645 и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
    (v) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:
    186, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:
    208; и (w) тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190, и легкой цепи иммуноглобулина, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208.
  28. 28. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь иммуноглобулина по п.27.
  29. 29. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь иммуноглобулина по п.27.
  30. 30. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.28.
  31. 31. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.29.
  32. 32. Вектор экспрессии по п.31, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту по п.28.
  33. 33. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.30.
  34. 34. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.31.
  35. 35. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.32.
  36. 36. Клетка-хозяин по п.34, дополнительно содержащая вектор экспрессии по п.30.
  37. 37. Способ получения полипептида, содержащего тяжелую цепь иммуноглобулина или легкую цепь иммуноглобулина, где способ включает:
    (a) выращивание клетки-хозяина по п.33 или 34 в таких условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина или легкую цепь иммуноглобулина; и (b) очистку полипептида, содержащего тяжелую цепь иммуноглобулина или легкую цепь иммуноглобулина.
  38. 38. Способ получения антитела, которое связывается с GDF15 человека, или антигенсвязывающего фрагмента антитела, при этом способ включает:
    (а) выращивание клетки-хозяина по п.35 или 36 в таких условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует полипептид или полипептиды, содержащие тяжелую цепь иммуноглобулина и/или легкую цепь иммуноглобулина, таким образом получая антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела; и (b) очистку антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела.
  39. 39. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1, 2, 14, 15 или 27, где антитело представляет собой одно или более из:
    (a) моноклональное антитело;
    (b) химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело человека;
    (c) антитело человека изотипа IgG1, IgG2 или IgG4 или (d) Fab, Fab', F(ab')2, Fv, одноцепочечное антитело, мини-тело или диатело.
  40. 40. Антитело по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27 или 39, где антитело имеет KD 300 пМ или ниже, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса или биослойной интерферометрии.
  41. 41. Антитело по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27 или 39, где антитело имеет KD 150 пМ или ниже, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса или биослойной интерферометрии.
  42. 42. Антитело по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27 или 39, где антитело имеет KD 100 пМ или ниже, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса или биослойной интерферометрии.
  43. 43. Способ лечения кахексии у млекопитающего, включающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 млекопитающему.
  44. 44. Способ ингибирования потери мышечной массы, связанной с основным заболеванием, включающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 для предотвращения или снижения потери мышечной массы.
  45. 45. Способ по п.44, отличающийся тем, что основное заболевание выбрано из группы, состоящей из рака, хронической сердечной недостаточности, хронического заболевания почек, COPD, AIDS, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, сепсиса и туберкулеза.
  46. 46. Способ по п.44, отличающийся тем, что потеря мышечной массы сопровождается потерей массы жировой ткани.
  47. 47. Способ ингибирования или снижения непреднамеренной потери веса у млекопитающего, включающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 млекопитающему.
  48. 48. Способ ингибирования потери массы почек, печени, сердца или селезенки, связанной с основным заболеванием, включающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 для предотвращения или снижения потери массы органа.
  49. 49. Способ по п.48, отличающийся тем, что основное заболевание выбрано из группы, состоящей из
    - 92 038645 рака, хронической сердечной недостаточности, хронического заболевания почек, COPD, AIDS, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, сепсиса и туберкулеза.
  50. 50. Способ по п.48, отличающийся тем, что потеря массы органа сопровождается потерей мышечной массы, потерей массы жировой ткани или непреднамеренной потерей веса.
  51. 51. Способ по п.43, дополнительно включающий введение второго средства млекопитающему, отличающийся тем, что второе средство выбрано из группы, состоящей из ингибитора активина А, ингибитора ActRIIB, ингибитора IL-6, ингибитора IL-6R, ингибитора пептида меланокортина, ингибитора меланокортинового рецептора, грелина, миметика грелина, агониста GHS-R1a, SARM, ингибитора TNFa, ингибитора IL-1a, ингибитора миостатина, бета-блокатора и противоопухолевого средства.
  52. 52. Способ лечения саркопении у млекопитающего, включающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 млекопитающему.
  53. 53. Способ повышения максимальной переносимой дозы противоопухолевого средства, которая приводит к кахексии у млекопитающего, где способ включает введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 в комбинации с противоопухолевым средством млекопитающему.
  54. 54. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1, 2, 14, 15, 27, 39, 40, 41 или 42 и фармацевтически приемлемый носитель.
EA201591198A 2012-12-21 2013-12-20 Антитела к gdf15 EA038645B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261745508P 2012-12-21 2012-12-21
US201361827325P 2013-05-24 2013-05-24
PCT/US2013/077139 WO2014100689A1 (en) 2012-12-21 2013-12-20 Anti-gdf15 antibodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201591198A1 EA201591198A1 (ru) 2015-11-30
EA038645B1 true EA038645B1 (ru) 2021-09-28

Family

ID=50069279

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201591198A EA038645B1 (ru) 2012-12-21 2013-12-20 Антитела к gdf15

Country Status (14)

Country Link
US (5) US9175076B2 (ru)
EP (2) EP3689370A1 (ru)
JP (3) JP6758832B2 (ru)
KR (1) KR102208861B1 (ru)
CN (1) CN105073133B (ru)
AR (1) AR094271A1 (ru)
AU (1) AU2013364133B2 (ru)
CA (1) CA2896076C (ru)
DK (1) DK2934584T3 (ru)
EA (1) EA038645B1 (ru)
ES (1) ES2791183T3 (ru)
HK (1) HK1215670A1 (ru)
MX (1) MX370720B (ru)
WO (1) WO2014100689A1 (ru)

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
MX369784B (es) 2007-09-26 2019-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo de modificacion del punto isoelectrico de anticuerpos mediante la sustitucion de aminoacidos en region de determinacion de complementariedad (cdr).
DK2708559T3 (en) 2008-04-11 2018-06-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of repeatedly binding two or more antigen molecules
CN108715614A (zh) 2010-11-30 2018-10-30 中外制药株式会社 与多分子的抗原重复结合的抗原结合分子
JP5977814B2 (ja) 2011-04-08 2016-08-24 アムジエン・インコーポレーテツド 増殖分化因子１５（ｇｄｆ−１５）を使用して代謝障害を治療または改善する方法
US9714276B2 (en) 2012-01-26 2017-07-25 Amgen Inc. Growth differentiation factor 15 (GDF-15) polypeptides
US9550819B2 (en) 2012-03-27 2017-01-24 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
EP3597747B1 (en) 2012-08-24 2023-03-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Mouse fcgammarii-specific fc antibody
CA2882272C (en) 2012-08-24 2023-08-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc.gamma.riib-specific fc region variant
EP3590537A1 (en) 2012-09-26 2020-01-08 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Monoclonal antibodies to growth and differentiation factor 15 (gdf-15)
AR094271A1 (es) 2012-12-21 2015-07-22 Aveo Pharmaceuticals Inc Anticuerpos anti-gdf15
JP6272907B2 (ja) 2013-01-30 2018-01-31 エヌジーエム バイオファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 代謝障害の処置における組成物及び使用方法
US9161966B2 (en) 2013-01-30 2015-10-20 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. GDF15 mutein polypeptides
AU2014250434B2 (en) 2013-04-02 2019-08-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc region variant
NZ754961A (en) 2013-07-31 2022-04-29 Amgen Inc Growth differentiation factor 15 (gdf-15) constructs
AU2014342316B2 (en) * 2013-10-31 2019-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Competitive ligand binding assay for detecting neutralizing antibodies
CN105934249A (zh) 2013-11-21 2016-09-07 布里格姆及妇女医院股份有限公司 用于治疗肺高压的组合物和方法
CA2943334A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Mackay Medical Foundation The Presbyterian Church In Taiwan Mackay Memorial Hospital Immunogenic glycopeptides, composition comprising the glycopeptides and use thereof
GB2524552B (en) * 2014-03-26 2017-07-12 Julius-Maximilians-Universitãt Wurzburg Monoclonal antibodies to growth and differentiation factor 15 (GDF-15), and use thereof for treating cancer
GB2524553C (en) * 2014-03-26 2017-07-19 Julius-Maximilians-Universitãt Würzburg Monoclonal antibodies to growth and differentiation factor 15 (GDF-15), and uses thereof for treating cancer cachexia
HRP20231514T1 (hr) 2014-03-26 2024-03-01 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Monoklonska antitijela za faktor rasta i diferencijacije 15 (gdf-15), te njihova uporaba za liječenje tumorske kaheksije i raka
WO2015196142A1 (en) * 2014-06-20 2015-12-23 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Treatment of congestive heart failure and other cardiac dysfunction using a gdf15 modulator
EA201790051A1 (ru) * 2014-06-20 2017-04-28 Авео Фармасьютикалз, Инк. Лечение хронического заболевания почек и другого нарушения функции почек при помощи модулятора gdf15
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
JP6704358B2 (ja) 2014-07-30 2020-06-03 エヌジーエム バイオファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 代謝障害を治療するための組成物および使用方法
CN114470207B (zh) * 2014-08-01 2023-09-19 布里格姆及妇女医院股份有限公司 与肺动脉高压的治疗有关的组合物和方法
US20170306008A1 (en) 2014-09-25 2017-10-26 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Methods of reversing cachexia and prolonging survival comprising administering a gdf15 modulator and an anti-cancer agent
CA2962859A1 (en) * 2014-09-30 2016-04-07 Universiteit Gent A method of treating joint disease
EP3212213B1 (en) 2014-10-30 2021-04-28 Acceleron Pharma Inc. Methods and compositions using gdf15 polypeptides for increasing red blood cells
US9920118B2 (en) 2014-10-31 2018-03-20 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
JP6227191B1 (ja) 2014-12-19 2017-11-08 中外製薬株式会社 抗ミオスタチン抗体、変異Ｆｃ領域を含むポリペプチド、および使用方法
KR102605798B1 (ko) 2015-02-05 2023-11-23 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이온 농도 의존적 항원 결합 도메인을 포함하는 항체, Fc 영역 개변체, IL-8에 결합하는 항체, 및 그들의 사용
JP7229768B2 (ja) 2015-04-23 2023-02-28 ヒーマロジックス プロプライエタリー リミテッド カッパ骨髄腫抗原キメラ抗原受容体およびその使用
CN106349388B (zh) * 2015-07-17 2021-04-02 上海佳文英莉生物技术有限公司 一种促细胞程序性坏死抗体及其应用
GB201512733D0 (en) * 2015-07-20 2015-08-26 Genagon Therapeutics Ab Therapeutic agents for treating conditions associated with elevated GDF15
PL3355919T3 (pl) 2015-10-02 2023-03-20 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Terapia skojarzona z użyciem inhibitorów ludzkiego czynnika wzrostu i różnicowania 15 (gdf-15) oraz blokerów punktów kontrolnych układu odpornościowego
FI3356827T3 (fi) 2015-10-02 2024-01-03 Univ Wuerzburg J Maximilians GDF-15 diagnostisena markkerina immuunivasteen vapauttajilla annetun hoidon hoitovasteen ennustamiseksi
RU2018119317A (ru) * 2015-10-28 2019-12-04 Йейл Юниверсити Гуманизированное антитело к dkk2 и его применение
JP7141336B2 (ja) 2015-12-25 2022-09-22 中外製薬株式会社 抗ミオスタチン抗体および使用方法
US11492386B2 (en) * 2016-02-01 2022-11-08 Eli Lilly And Company Parathyroid hormone-anti-RANKL antibody fusion compounds
EP3423094A4 (en) * 2016-02-29 2019-11-06 Eli Lilly and Company GFRAL RECEPTOR THERAPIES
WO2017152105A1 (en) * 2016-03-04 2017-09-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating body weight
JP7021099B2 (ja) * 2016-03-31 2022-02-18 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 結合タンパク質及びその使用方法
US11312766B2 (en) 2016-04-27 2022-04-26 Novartis Ag Antibodies against growth differentiation factor 15 and uses thereof
US10336812B2 (en) * 2016-05-10 2019-07-02 Janssen Biotech, Inc. GDF15 fusion proteins and uses thereof
NL2017267B1 (en) * 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
KR20190035863A (ko) * 2016-08-05 2019-04-03 알라코스 인크. 암 치료를 위한 항Siglec-7 항체
JP6527643B2 (ja) 2016-08-05 2019-06-05 中外製薬株式会社 Ｉｌ−８関連疾患の治療用又は予防用組成物
EP3551214B1 (en) * 2016-12-06 2024-03-13 St Vincent's Hospital Sydney Limited Treatment of obesity and eating disorders
GB201700567D0 (en) 2017-01-12 2017-03-01 Genagon Therapeutics Ab Therapeutic agents
US11161897B2 (en) 2017-07-17 2021-11-02 Janssen Biotech, Inc. Antigen binding regions against fibronectin type III domains and methods of using the same
JP7342005B2 (ja) 2018-01-11 2023-09-11 アラコス，インコーポレイティド エフェクター機能が減少した抗ｓｉｇｌｅｃ－７抗体
TWI724392B (zh) * 2018-04-06 2021-04-11 美商美國禮來大藥廠 生長分化因子15促效劑化合物及其使用方法
MX2020010659A (es) 2018-04-09 2020-10-28 Amgen Inc Proteinas de fusion del factor de diferenciacion de crecimiento 15.
US20210340263A1 (en) * 2018-08-09 2021-11-04 The Wistar Institute Anti-Follicule Stimulating Hormone Receptor Antibodies
TWI803682B (zh) 2018-08-20 2023-06-01 美商輝瑞股份有限公司 抗－ｇｄｆ１５抗體、組成物及使用方法
KR102238927B1 (ko) * 2018-08-30 2021-04-12 서울대학교산학협력단 세포 내에서 nag-1 단백질의 이동을 조절하는 펩티드 및 이의 용도
WO2020053147A1 (en) * 2018-09-10 2020-03-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of an inhibitor of ntsr1 activation or expression for preventing weight loss, muscle loss, and protein blood level decrease in subjects in need thereof
WO2021111636A1 (ja) * 2019-12-06 2021-06-10 大塚製薬株式会社 抗ｇｄｆ１５抗体
CN114560938B (zh) * 2020-03-30 2023-05-23 中国人民解放军第四军医大学 抗gdf15中和性单克隆抗体及其应用
WO2021246773A1 (ko) * 2020-06-04 2021-12-09 재단법인대구경북과학기술원 Gfral 길항 항체 및 이의 용도
WO2022189936A1 (en) * 2021-03-08 2022-09-15 Medimmune, Llc Antibodies directed against gdf-15
MX2023011655A (es) 2021-03-31 2023-10-11 Cambridge Entpr Ltd Inhibidores terapeuticos de la se?alizacion de gdf15.
EP4384545A1 (en) 2021-08-10 2024-06-19 BYOMass Inc. Anti-gdf15 antibodies, compositions and uses thereof
WO2023079430A1 (en) 2021-11-02 2023-05-11 Pfizer Inc. Methods of treating mitochondrial myopathies using anti-gdf15 antibodies
WO2023122213A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Byomass Inc. Targeting gdf15-gfral pathway cross-reference to related applications
WO2023141815A1 (zh) * 2022-01-26 2023-08-03 康源博创生物科技(北京)有限公司 抗生长分化因子15的抗体分子及其应用
WO2023217068A1 (zh) * 2022-05-09 2023-11-16 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别gdf15的抗体及其应用
CN116444667B (zh) * 2023-06-13 2023-09-01 上海驯鹿生物技术有限公司 一种靶向gdf15的全人源抗体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009021293A1 (en) * 2007-08-16 2009-02-19 St Vincent's Hospital Sydney Limited Agents and methods for modulating macrophage inhibitory cytokine (mic-1) activity
US20110262444A1 (en) * 2010-03-03 2011-10-27 Detroit R&D, Inc. Form-specific antibodies for nag-1 (mic-1, gdf-15), h6d and other tgf-beta subfamily and heart disease and cancer diagnoses

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US5766886A (en) 1991-12-13 1998-06-16 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6180602B1 (en) 1992-08-04 2001-01-30 Sagami Chemical Research Center Human novel cDNA, TGF-beta superfamily protein encoded thereby and the use of immunosuppressive agent
WO1994003599A1 (en) 1992-08-04 1994-02-17 Sagami Chemical Research Center HUMAN cDNA AND PROTEIN WHICH SAID cDNA CODES FOR
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US6066718A (en) 1992-09-25 2000-05-23 Novartis Corporation Reshaped monoclonal antibodies against an immunoglobulin isotype
US5994102A (en) 1994-12-15 1999-11-30 Human Genome Sciences, Inc. Polynucleotides encoding prostatic growth factor and process for producing prostatic growth factor polypeptides
AU1830195A (en) 1994-12-15 1996-07-03 Human Genome Sciences, Inc. Prostatic growth factor
US6521227B1 (en) 1999-11-18 2003-02-18 Peter L. Hudson Polynucleotides encoding prostatic growth factor and process for producing prostatic growth factor polypeptides
ATE423788T1 (de) 1995-06-22 2009-03-15 St Vincents Hosp Sydney Neues tgf-beta-ahnliches cytokin
AU8591198A (en) 1997-07-31 1999-02-22 Johns Hopkins University School Of Medicine, The Growth differentiation factor-15
US6872518B2 (en) 1997-09-22 2005-03-29 University Of Rochester Methods for selecting polynucleotides encoding T cell epitopes
WO2000020449A2 (en) 1998-10-07 2000-04-13 Stryker Corporation MODIFIED TGF-β SUPERFAMILY PROTEINS
US6465181B2 (en) 1999-03-25 2002-10-15 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
EP1179067B1 (en) 1999-05-17 2006-12-13 BIOPHARM Gesellschaft zur biotechnologischen Entwicklung und zum Vertrieb von Pharmaka mbH Neuroprotective properties of gdf-15, a member of the tgf-beta superfamily
US7514221B2 (en) 2000-04-20 2009-04-07 St. Vincent's Hospital Sydney Limited Diagnostic assay and method of treatment involving macrophage inhibitory cytokine-1 (MIC-1)
US7141661B2 (en) 2000-09-08 2006-11-28 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Non-steroidal anti-inflammatory drug activated gene with anti-tumorigenic properties
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US7157235B2 (en) 2002-06-17 2007-01-02 St. Vincent's Hospital Sydney Limited Methods of diagnosis, prognosis and treatment of cardiovascular disease
US7919084B2 (en) 2002-06-17 2011-04-05 St. Vincent's Hospital Sydney Limited Methods of diagnosis, prognosis and treatment of cardiovascular disease
JP2006515747A (ja) 2002-11-01 2006-06-08 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫関連疾患の治療のための組成物と方法
AU2003295424A1 (en) 2002-11-08 2004-06-03 Barnes-Jewish Hospital Methods and compositions for prostate epithelial cell differentiation
US20060188889A1 (en) 2003-11-04 2006-08-24 Christopher Burgess Use of differentially expressed nucleic acid sequences as biomarkers for cancer
WO2005036608A2 (en) 2003-10-10 2005-04-21 That Corporation Low-power integrated-circuit signal processor with wide dynamic range
US7981598B2 (en) 2004-03-26 2011-07-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Preventive/remedy for respiratory diseases
EP2441466B1 (en) * 2004-04-13 2014-07-23 St Vincent's Hospital Sydney Limited MIC-1 inhibiting agent
CA2534871C (en) 2006-02-15 2015-08-04 The Ohio State University Research Foundation Three-gene test to differentiate malignant from benign thyroid nodules
US20070237713A1 (en) 2006-04-04 2007-10-11 Fan Rong A PCan065 Antibody Compositions and Methods of Use
EP1884777A1 (en) 2006-08-04 2008-02-06 Medizinische Hochschule Hannover Means and methods for assessing the risk of cardiac interventions based on GDF-15
KR101245877B1 (ko) 2006-08-04 2013-03-20 메디치니쉐 호흐슐레 하노버 Ｇｄｆ-15 를 바탕으로 한, 심장 중재의 위험도를 평가하는수단 및 방법
AU2008310310A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 St Vincent's Hospital Sydney Limited A method of treating cachexia with the removal or inactivation of macrophage inhibitory cytokine-1
EP2103943A1 (en) 2008-03-20 2009-09-23 F. Hoffman-la Roche AG GDF-15 for assessing a cardiovascular risk with respect to the administration of antiinflammatory drugs
JP2011523051A (ja) 2008-05-20 2011-08-04 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー １型糖尿病におけるバイオマーカーとしてのｇｄｆ−１５
GB0902793D0 (en) * 2009-02-20 2009-04-08 Univ Gent GDF15 as molecular tool to monitor and enhance phenotypic stability of articular chondrocytes
GB201004739D0 (en) 2010-03-22 2010-05-05 Prosidion Ltd Receptor modulators
WO2012113103A1 (en) 2011-02-25 2012-08-30 Helsinn Healthcare S.A. Asymmetric ureas and medical uses thereof
AR094271A1 (es) 2012-12-21 2015-07-22 Aveo Pharmaceuticals Inc Anticuerpos anti-gdf15
WO2015196142A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Treatment of congestive heart failure and other cardiac dysfunction using a gdf15 modulator
EA201790051A1 (ru) 2014-06-20 2017-04-28 Авео Фармасьютикалз, Инк. Лечение хронического заболевания почек и другого нарушения функции почек при помощи модулятора gdf15

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009021293A1 (en) * 2007-08-16 2009-02-19 St Vincent's Hospital Sydney Limited Agents and methods for modulating macrophage inhibitory cytokine (mic-1) activity
US20110262444A1 (en) * 2010-03-03 2011-10-27 Detroit R&D, Inc. Form-specific antibodies for nag-1 (mic-1, gdf-15), h6d and other tgf-beta subfamily and heart disease and cancer diagnoses

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BREIT SAMUEL N ET AL: "The TGF-[beta] superfamily cytokine, MIC-1/GDF15: a pleotrophic cytokine with roles in inflammation, cancer and metabolism.", GROWTH FACTORS., HARWOOD ACADEMIC PUBLISHERS GMBH., XX, vol. 29, no. 5, 1 October 2011 (2011-10-01), XX, pages 187 - 195, XP008152690, ISSN: 0897-7194, DOI: 10.3109/08977194.2011.607137 *
EIICHI HINOI, HIROKI OCHI, TAKESHI TAKARADA, ERI NAKATANI, TAKASHI IEZAKI, HIROKO NAKAJIMA, HIROYUKI FUJITA, YOSHIFUMI TAKAHATA, S: "Positive regulation of osteoclastic differentiation by growth differentiation factor 15 upregulated in osteocytic cells under hypoxia", JOURNAL OF BONE AND MINERAL RESEARCH, BLACKWELL SCIENCE, INC., vol. 27, no. 4, 1 April 2012 (2012-04-01), pages 938 - 949, XP055106394, ISSN: 08840431, DOI: 10.1002/jbmr.1538 *
P. ROTH, M. JUNKER, I. TRITSCHLER, M. MITTELBRONN, Y. DOMBROWSKI, S. N. BREIT, G. TABATABAI, W. WICK, M. WELLER, J. WISCHHUSEN: "GDF-15 Contributes to Proliferation and Immune Escape of Malignant Gliomas", CLINICAL CANCER RESEARCH, ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, vol. 16, no. 15, 1 August 2010 (2010-08-01), pages 3851 - 3859, XP055106395, ISSN: 10780432, DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-10-0705 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021061864A (ja) 2021-04-22
CN105073133A (zh) 2015-11-18
EP2934584A1 (en) 2015-10-28
US10597444B2 (en) 2020-03-24
US9725505B2 (en) 2017-08-08
US20180142013A1 (en) 2018-05-24
US20160083465A1 (en) 2016-03-24
AU2013364133B2 (en) 2018-10-11
HK1215670A1 (zh) 2016-09-09
US20210101968A1 (en) 2021-04-08
ES2791183T3 (es) 2020-11-03
KR20150100837A (ko) 2015-09-02
US20140193427A1 (en) 2014-07-10
BR112015014768A2 (pt) 2017-10-10
MX2015007751A (es) 2015-11-30
US20240166734A1 (en) 2024-05-23
EA201591198A1 (ru) 2015-11-30
US9175076B2 (en) 2015-11-03
CA2896076C (en) 2022-12-06
WO2014100689A1 (en) 2014-06-26
JP6758832B2 (ja) 2020-09-30
CN105073133B (zh) 2021-04-20
MX370720B (es) 2019-12-20
DK2934584T3 (da) 2020-05-18
KR102208861B1 (ko) 2021-01-27
US11725047B2 (en) 2023-08-15
JP2019056018A (ja) 2019-04-11
AR094271A1 (es) 2015-07-22
CA2896076A1 (en) 2014-06-26
EP2934584B1 (en) 2020-02-19
AU2013364133A1 (en) 2015-07-16
EP3689370A1 (en) 2020-08-05
JP2016508984A (ja) 2016-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11725047B2 (en) Anti-GDF-15 antibodies
US8481688B2 (en) Anti-FGFR2 antibodies
AU2011245636B2 (en) Anti-ErbB3 antibodies
US8829164B2 (en) Anti-ron antibodies
AU2011245636A1 (en) Anti-ErbB3 antibodies
WO2011156617A2 (en) Anti-egfr antibodies
WO2012003472A1 (en) Anti-notch1 antibodies
BR112015014768B1 (pt) Anticorpos anti-gdf15, seu método de produção, seu uso, e composição farmacêutica compreendendo os mesmos