CN105007755B - 改善的微藻粉 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有可接受的感官特征的微藻食物产品以及生产这些食物产品的方法。可以通过在可接受的pH和溶解氧的条件下培养一种原壳小球藻株的微藻细胞以产生所希望的量的脂质来生产粉。可以将这些微藻细胞进行裂解、热处理、洗涤和干燥以产生一种微藻粉，该微藻粉可以掺入多种产品中。

Description

改善的微藻粉
相关申请的交叉引用
本申请按35 U.S.C.§119(e)要求2013年1月28日提交的美国临时申请号61/757,534的权益，将其全部内容通过引用特此结合。
技术领域
本发明涉及具有改善的味道的微藻食物产品以及生产该食物产品的方法。
背景
随着人口的不断增长，越来越需要有额外的食物来源，特别是可廉价生产但营养丰富的食物来源。此外，至少在大部分发达国家中，许多主食目前还依赖于肉类，这显著地促进了温室气体的排放。对生产对环境危害较小的新食物原料存在需求。
藻类的生长只需要“水和阳光”，因此其一直被期待作为潜在的食物源。虽然某些藻类(主要是海草)确实为人类消耗提供了重要的食品原料，但以藻类作为食品原料的愿望还没有完全实现。以在户外池塘或光生物反应器中光合生长的藻类制成的藻粉末是可商购的，但其颜色深绿(来自叶绿素)，并具有强烈的、难闻的味道。当将这些藻粉末配制到食品中或作为营养补品时，它们使食品或营养补品产生视觉上没有吸引力的绿颜色，并且具有难闻的鱼味、海草味或其他味道。
目前有用于食物原料中的藻类的若干物种，多数是大型藻，如海带、紫菜(紫菜属，用于海苔片)、红皮藻(红藻)和海莴苣(石莼)。微藻(如螺旋藻(钝项节旋藻(Arthrospiraplatensis)))是在开放池塘中商业化种植的(光合)，用作营养补品或者少量地掺于冰沙或果汁饮料中(通常不到0.5％w/w)。其他微藻(包括小球藻属的一些物种)在亚洲国家中作为营养补品而流行。
欠佳的味道是阻碍在食品中广泛采用微藻的主要原因。WO 2010/12093披露了将微藻生物质制为食品并且将其用作食品的方法。该参考文件披露了在黑暗中微藻生长以产生一种微藻生物质。然而，进一步改善微藻生物质的味道应当会促进进一步的应用。
概述
本发明涉及具有可接受的感官特征的微藻食物产品以及生产这些食物产品的方法。可以通过在可接受的pH和溶解氧的条件下培养一种原壳小球藻株的微藻细胞以产生所希望的量的脂质来生产粉。可以将该微藻细胞进行裂解、热处理、洗涤和干燥以产生一种微藻粉，该微藻粉可以掺入多种产品中。
在本发明的一个实施例中，提供了一种适合用于食品中的微藻粉，该粉包括绿藻门的微藻细胞，其中通过根据实例4的SPME和/或根据实例5的SBSE的分析或其他分析技术来确定实例6的化合物相对于内标物的浓度，随后根据实例9的程序的分析产生了味道描述词(flavor descriptor)，该味道描述词落入实例8的椭圆体内，该椭圆体定义了相对于正味道集群(positive flavor cluster)的3个标准偏差，该正味道集群对应于在实例7的图表中的封闭环。
在本发明的一个实施例中，上述微藻粉是可通过以下方法获得的：在黑暗中，在作为一种固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH为6.8，对原壳小球藻细胞的一种培养液进行培养，同时将溶解氧水平保持在高于30％，使该培养液经历75℃的高温短时处理持续1分钟，通过以一种在水中6.4倍的稀释物进行离心收获这些细胞，通过碾磨来裂解这些细胞，添加一种抗氧化剂，并且使用喷雾干燥喷嘴输出到一条移动带上进行干燥。
附图简要说明
结合参考附图，通过参考以下详细说明，将能更容易理解本发明的特征，其中：
图1示出了描绘根据本发明的一个实施例来生产食物产品的方法的一个流程图。
图2示出了PCA聚类分析，其中这些点代表具有可接受的以及差的味道的微藻粉样品。
本发明实施方案的详细说明
定义
关于培养基，“溶解氧”简称为“DO”，意指与处于大气中的氧平衡中的培养基的氧合量相比较时培养基的相对氧合量。
“微藻粉”是一种干燥的、颗粒组合物，适于人类消费，包括微藻细胞。
如在此使用的，“异味”意指在食品(例如烘焙的食品(如蛋糕))中消费者不期待和/或不希望的味道。异味的实例包括甘蓝或鱼的味道。尽管具体的味道可以通过现代分析技术(例如气相色谱-质谱法(简称为GC-MS))进行测量，但是通常最便利并且最有效的用来测量异味的工具是由人类组成的品尝小组。关于人类对异味的感知，这些可能通过感官小组(例如10人)来确定，其中在10人中的2人或更少的人可以检测出味道时确立不存在该味道或气味；或这些可以通过进行足够的测试以建立统计显著性。
综述
本发明源于以下发现：当在特定的条件下培养和处理某些微藻株时，就味道、气味和颜色而言，这些微藻株可以产生开胃的生物质。改善的味道被认为不仅从不存在异味中得出，还从在培养和/或处理期间所产生的令人希望的味道化合物的存在中得出。在以下实例中，该微藻是在黑暗中异养地培养的原壳小球藻株，但是可以是小球藻属的另一个物种或绿藻门的其他物种，其条件是可以经由异养的培养和缜密处理(例如通过使用以下给出的方法)产生非绿颜色。通过使用这些技术，该产品可以落入在此披露的新鉴定的可接受性标准之内。
关于多批次微藻粉的人类感官小组数据与来自变化的水中溶解度的味道和气味化合物的扩展分析的数据相关，以鉴别在味道/气味空间中的如通过主成分分析所代表的集群。因此，落入鉴别的集群内的微藻粉具有很大的可能性为人类消费所接受的。
根据本发明的实施例，图1是用于生产具有少量异味的微藻粉的方法流程图。产生的粉可以掺入多种食品和饮料中。
图2是示出了代表性PCA聚类分析的图，其中多个点代表具有可接受的以及差的味道的微藻粉样品。
改善的微藻粉的生产
培养微藻(步骤105)。已发现，例如，当微藻粉以10％(w/v)分散在去离子水中，并且通过人类感官小组进行评估时，在黑暗中培养微藻生成具有低水平异味(例如蘑菇味和甘蓝味或鱼味)的微藻生物质。因此，在优选的实施例中，在黑暗中在固定的(即非CO2)碳源上异养培养微藻。在以下实例中使用葡萄糖时，其他固定的碳源(例如果糖、蔗糖/果糖混合物、或乙酸/乙酸盐)可以产生可比的结果。糖浓度可以通过连续补料来控制。以在3和10g/l之间的葡萄糖浓度获得了有利的结果。适合的微藻的属包括小球藻属和无绿藻属。例如，可以使用原壳小球藻、桑椹形无绿藻(Prototheca moriformis)或祖菲无绿藻(Protothecazopfii)。用于人类营养的小球藻属的其他物种，例如原壳小球藻也可以如在此所披露的进行生长和处理。也可以使用微藻物种或株的组合。可任选地，微藻细胞是突变的并且是被选择为色素大为降低的一个株，所述色素可以改变掺入了生物质的食物产品的颜色。在以下实例中，已发现适合的味道和无可观察到的绿颜色可以从原壳小球藻的细胞获得。例如，这种粉可以包含少于200、20、或2ppm的叶绿素。在以下实例中，发现颜色为黄色/金色，但是取决于所使用的株以及培养/处理条件，也可以是例如淡黄色、灰白色、或白色的。
将微藻培养至希望的密度和脂质浓度。通过在营养物限制并且尤其是氮限制的条件下培养来增加脂质浓度。在本发明的实施例中，在限制氮的条件下进行培养，使得微藻达到按干细胞重量测量的10％-20％、20％-30％、40％-50％、40％-60％、30％-70％、35％-75％、50％-60％、60％-70％、或70％-85％脂质。在举例说明的实施例中，微藻包含约50％的脂质。脂质的升高的水平尤其可用于生产具有改善的脂肪和胆固醇谱的食物产品，或改善此类产品的口感。当一种高脂质微藻用来生产该粉时，脂质的粘性可能是形成一种可测量和/或可流动的粉的障碍。可替代地，在氮充足的条件下培养可以给出高蛋白质微藻粉，例如粉可以具有例如按干细胞重量计的5％-20％或10％-18％脂质。如下所述，已经鉴定出干燥方法给出了可流动的粉末同时保留了希望的口味、气味以及颜色特征。
可以在不透明的培养瓶中培养微藻。可以在好氧条件下培养微藻。出人意料地，已经发现在原壳小球藻异养培养期间，增加氧水平至30％DO或更多可以产生具有改善的味道的微藻生物质。考虑到DO的±30％的变化(即，30±9％DO)。此外，在发酵期间提高的氧(例如，＞40％DO、＞50％DO、＞60％DO、或60％-70％DO)可以产生具有白色或灰白色且带有少量异味的微藻生物质。白度可以用Hunter色度计进行测量。在一个实施例中，该白度高于生长在大约30％-40％DO的微藻生物质的对照样品的白度。在一个具体实施例中，氧被提升至大约60％-70％的溶解氧。例如，通过引入纯氧，实现了增加的氧合。
可以通过在希望的pH下培养微藻来改善味道。例如，pH可以是从4至9、或从5至8。可以使用缓冲和/或采用滴定的pH监测来控制pH。如果使用酸性pH，可以通过调节pH至6至8或6.5至7.8、或大约7来中和该pH，例如，在干燥以前以避免涩味。针对在水中粉的1％w/v的溶液，最终的粉可以是以5.5-8.5、6.0-8.0、或6.5-7.5的pH来表征的。
在培养之后，对该微藻进行灭活(步骤110)。灭活条件被选为足以灭活产生异味的酶。这些条件还可以杀死微藻或使微藻及污染物种(如果有的话)的生长停止。已经发现严格的巴氏消毒法(即，在高温下和/或长时间)可以导致不希望的味道/气味，然而不足够严格的处理也可导致不可接受的味道/气味。因此，当使用巴氏消毒法时，必须实现一种微妙的平衡。实验已经显示出高温短时巴氏消毒(“HTST”)处理方案可以用来生产一种可接受的微藻生物质产品。例如，处理温度可以是从70℃至95℃、或72℃至90℃，持续从10至180、30至120、或45至90秒。在一个实施例中，通过使培养的微藻培养液流动通过热交换器进入收集容器中将微藻在75℃下处理1分钟。优选的是，冷却该HTST输出物以避免延长的加热。相似的结果应当是可通过调节时间和温度二者获得的。在灭活之前的延迟应当最小化，以便防止异味的发展，该异味被认为是通过酶活性产生的。因此，在本发明的一个实施例中，灭活酶的步骤是在没有延迟一段时间(该时间足以允许在微藻中产生酶促发展的异味)的情况下进行的。在酸性pH下培养还可以允许使用一种甚至更温和的巴氏消毒法。例如，可以在从5至6.5的pH下培养微藻细胞，随后在从约60℃至约70℃下进行巴氏消毒持续1分钟，并且在干燥之前进行中和。
为了进一步改善味道，可以洗涤微藻细胞(步骤115)。不希望受理论约束的情况下，该洗涤可以去除异味。此外，在洗涤前使用灭活步骤可以透化细胞或以其他方式促进从微藻生物质中去除不希望的味道或气味。洗涤可以通过离心、过滤、渗析或其他本领域已知的方法进行。可任选地，用一定体积的洗液(例如，水或缓冲剂)进行洗涤，该洗液的体积是与微藻细胞体积一样大或更大(例如，按通过离心测量的)。洗液的体积可以是细胞体积的两倍，或优选的是细胞体积的至少3倍。已发现以6.4倍细胞体积的离心给出了具有良好味道的微藻生物质。因此，在本发明的实施例中，用在3和12个体积之间的水洗涤细胞。针对这些目的，通过对这些细胞进行脱水(即，从液体培养基中去除它们)来完成细胞体积的测量。例如，可以通过离心或过滤对这些细胞进行脱水。可任选地，洗涤步骤可以重复一次或多次。
可任选地，洗涤后，可以添加防腐剂(步骤120)。例如，可以添加苯甲酸钠和/或山梨酸钾作为抑细菌剂和抑真菌剂。由于苯甲酸钠在酸性条件下更具活性，可以按照需要降低pH。在那样的情况下，可以在该方法后期提高pH以避免不想要的酸味。
可任选地，然后裂解微藻细胞(步骤125)。该裂解可以是部分的或完全的。例如，可以裂解从5％至95％或大部分(＞50％)的细胞。在高脂质微藻中可以尤其希望的是进行裂解以释放脂质，其中脂质的释放改善了掺入微藻生物质的食物产品的质量和营养价值。可以用珠磨机、或本领域中已知的任何其他适合的方法来完成裂解。可任选地，大多数的细胞可以被裂解。在一个实施例中，约30％-75％的微藻细胞被裂解。在另一个实施例中，约30％-75％的微藻细胞被裂解并且这些微藻细胞按干细胞重量计具有约30％-75％的脂质。在又一个实施例中，60％-90％的微藻细胞被裂解。认为这种参数的组合导致了以下的微藻生物质，该微藻生物质改善了将其整合进去的食物的口感、持空气性或其他功能性参数，同时避免了在干燥或其他可与高度裂解的细胞相关联的处理步骤中的困难。在以下实例3中，细胞被裂解至约80％。
可任选地，可以将生物质进行均质化(步骤130)。例如，包含细胞或裂解细胞的悬浮液可以在升高的压力(即使用高压均质器)下被迫使通过窄通道或孔。还可采用其他类型的均质器例如叶片均质器或超声均质器。
可以添加抗氧化剂以提高生物质的保质期(步骤135)。例如，可以使用生育酚、BHA、BHT、迷迭香提取物、或其他适合的食品级抗氧化剂。除了提高保质期，在该阶段添加抗氧化剂可以防止在干燥步骤中形成不想要的氧化味道。在此阶段，如果在上游过程使用低pH条件，那么添加碱以提高pH可以防止与低pH相关的涩味。
干燥之前(例如，均质化后并且在任选的添加抗氧化剂之前或之后)，将微藻保持在升高的温度持续一段时间(140)。不希望受理论约束，认为此步骤促进了味道的稳定性，确保了酶的失活，并且可以促进正味道的形成。例如，裂解的微藻悬浮液可以保持在70°-85°持续1-6分钟。在以下实例3中，为了在产生的粉中获得可接受的感官特性，在77℃下进行该加热步骤持续3分钟。例如，通过在约87℃下加热约90秒或在67℃下加热约6分钟，可以获得可比的结果。
然后干燥该生物质(步骤145)。在一种实施例中，为了形成一种粉(一种粉末样的)物质，对该生物质进行喷雾干燥。该喷雾干燥可以使用，例如，箱式干燥器、或高型喷雾干燥器、流化床干燥器、或移动流化床干燥器(例如
Figure BPA0000208625890000061
喷雾干燥器，GEA工艺工程公司(GEA Process Engineering，Inc.))。实例3描述了用于用FilterMat干燥器干燥的条件。
即使产生的粉富含脂质(例如，按干细胞重量计30％-70％或40％-60％脂质)，其也是可以测量的或流动的。在一个具体实施例中，该粉具有0.30至0.50的充气密度，0.50至0.65的堆积密度，在2000μm按重量计15％-35％的筛上物(即，％太大而不能通过2000μm筛)、在1400μm时40％-70％的筛上物和在800μm时1％-20％的筛上物，1-25mm的湿度，以及0.1至0.7m2/g的表面积。
测试湿度：
-在20℃将500ml去离子水引入一个600ml的矮宽式烧杯(Fisherbrand FB33114)中，
-将25g微藻粉粉末均匀放在水面上，不混合，
-接触3小时后观察粉末的行为，
-测量已经渗透水面并在烧杯底部沉降的产品的高度。
该充气松密度是使用测量充气松密度的常规方法确定的，即，通过测量一个已知容积的空容器(g)的质量，并测量填充有待测产品的相同容器的质量。
-然后用填充容器的质量和空容器的质量之差除以容积(ml)得出充气松密度的值。
-就本测试而言，该100ml容器、用于填充的勺子和所使用的刮铲是随细川(Hosokawa)公司以商标Powder Tester型PTE出售的装置一起提供的。
-为进行本测量，通过孔径为2000μm的筛网(SAULAS出售的)对产品过筛。密度是在没有留在筛网上的产品上测量的。
在该微藻粉颗粒的整个粒度分布上确定比表面积，例如，采用康塔公司(Quantachrome)比表面积分析仪基于对被分析产品表面上的氮吸收测试，该测试是在来自贝克曼库尔公司(Beckmann Coulter)的SA3100装置上进行的，根据S.布鲁诺尔(BRUNAUER)等人(美国化学学会期刊，60，309，1938)的“通过氮吸收发测定BET表面积(BET SurfaceArea by Nitrogen Absorption)”一文中所描述的技术。
针对可以接受的味道、颜色、气味、和/或口感测试该微藻粉(步骤150)。例如，可以采用人类感官小组和/或分析技术例如顶空GC-MS、SPME、或SBSE。可任选地，可以对味道进行评估以确定它是否归类于或落入与通过现有感官小组和/或分析测试所确定的可接受的味道相关联的边界内。可以使用主成分分析(PCA)来确定这些组群/边界(参见以下实例)。然后可接受的批次可以被选择用于包装和进一步使用。
在干燥和可任选的测试之后，该生物质可经历任何所需的进一步的处理或包装(步骤155)以制作微藻粉或掺有该生物质的食物产品。例如，为了制作微藻粉，可以将生物质搅拌或通过筛网。该微藻粉还可以与其他成分一起混合以制作汤、调味汁、面团、蛋糕、饼干、干烘焙食物混合物，等等。还可以根据以下实例4、5和8进行测试。
根据本发明的实施例，任何两种或更多种的上述技术可以组合以获得在微藻生物质产品(例如微藻粉)中一种迄今史无前例的味道。例如，如上所述的HTST处理随后用液体进行洗涤可以产生具有少异味的微藻粉。在如上所述的培养和其他步骤期间，氧合可以进一步改善味道。
通过选择一种适当的微藻株和使用在此披露的方法，可以得到一种从具有可接受的感官特征的生物质中制得的微藻生物质或微藻粉。当将该微藻粉以1∶2、1∶5、1∶10、1∶20、1∶30、或1∶40的比率(按体积计)稀释于水中时，其可以是非绿色的并且具有不可检测水平的鱼味、蘑菇味或甘蓝味。在一个实施例中，根据通过品尝小组检测的，当按体积计以1∶20稀释于水中时，鱼味和甘蓝味异味是不可检测的。
以下味道/气味化合物是通过实例4或5的方法确定的并且被认为与可接受的感官测试相关。十一内酯(400-1800ppb)，3-甲基-丁醛(0-11,000ppb)，戊醛(160-10,700ppb)，2-甲基-丁醛(0-2500ppb)，2-戊酮(39-10,600ppb)，3-戊烯-2-酮(0-1500ppb)。
可接受的样品还具有少于阈值量的吡咯、吡嗪、或含吡啶的化合物，然而这些化合物发现于从www.nuts.com获得的普通小球藻的样品中，该普通小球藻是绿色并且在味道和气味方面是不可接受的。
在一个实施例中，当将由上述方法所产生的微藻粉储存在黑暗中、室温、在水分和氧气不渗透的包装中(例如
Figure BPA0000208625890000081
食物贮藏袋)时，其保留提到的少量的异味持续了至少2周、1个月、3个月或6个月。
可任选地，较大的颗粒、细粒或粒料可以由干燥的微藻材料制成。例如，可以使用本领域中已知的多种方法来对该粉进行结团、粒化、挤出、或制粒。
实例1.在低pH下并且使用地低色素株生产微藻粉
在从7L至1000L的规模上进行原壳小球藻的多重发酵。使用原壳小球藻的两种株：A株、和B株(一个低色素突变体)。在黑暗中以葡萄糖作为固定的碳源在约5至6的pH下进行发酵。发酵后，将含有微藻的发酵液进行加热处理以灭活微藻，立即用过量的水稀释，离心以洗涤和浓缩该微藻，将细胞通过碾磨来裂解，然后对其进行喷雾干燥以制作微藻粉。从A株制得的微藻粉在颜色上是浅黄色的，并且从B株制得的微藻粉在颜色上是黄褐色的。还在约中性pH下进行B株的发酵。
实例2.使用高氧条件的浅色粉
将B株在高(约60％-70％)和低(约30-40％)的溶解氧中进行培养并且如在实例1中的进行处理以形成微藻粉。针对高氧实验，与在低氧下产生的微藻相比，在培养液、离心的生物质中并且在最终的粉中注意到黄色的减少。
实例3：改善的微藻粉的生产
将原壳小球藻的种子培养物添加至确定成分的培养液中以给出9,000L的培养物。使用加热灭菌的葡萄糖(55％w/w)作为碳源。在发酵罐中通过控制通气、背压和搅拌将溶解氧保持在最低值30％。培养温度为28℃。在培养起始时培养液的pH为6.8并且经培养历程降至约6。将葡萄糖进料至3-10g/L浓度的浓度。经4-5天连续生长至如通过OD750测量的对数中期。得到的产物具有18.5％w/v的干细胞重量(DCW)。在生长培养基中限制氮的水平，以迫使微藻由于延长的糖补料而累积约50％的脂质。
然后将该培养液通过在线HTST在75℃下进行热处理持续1min并且冷却至6.2℃，然后在7℃下储存。然后将经HTST处理的培养液通过6.4倍稀释于脱碳酸水中进行洗涤并且使用Alfa Laval FEUX 510离心机进行离心。
用75％磷酸将pH降低至4.1的pH，并且添加500ppm苯甲酸钠/1000ppm山梨酸钾(基于干的)作为一种防腐剂。
然后在搅拌下在低于10℃贮存该材料。
通过使用0.5mm硅酸锆珠粒在NETZSCH LME500珠磨机中碾磨来完成裂解，以给出88％的细胞破碎。将排出物冷却至6℃。
将抗坏血酸(150ppm，基于干的)和混合的生育酚(500ppm，基于干的)添加至材料中以防止氧化。添加氢氧化钾以中和pH。
然后将该材料加热至77℃持续3分钟。
在具有旋流器的Filtermat FMD125干燥器上完成干燥。喷嘴压力是160-170bar。
实例4：SPME(固相微萃取)
将样品(500mg)加3mL蒸馏水加1gm NaCl加在乙醇中的5uL的0.022ug/uL2-十一烷酮内标物在50℃下孵育10min，并且然后通过SPME在50℃下萃取20min，同时用GerstelMPS2的定轨摇床进行搅动。使用的SPME纤维是DVB/CAR/PDMS(二乙烯基苯/碳分子筛/聚二甲基硅氧烷)df 50/30μm。将该纤维在安捷伦分流/不分流注入器中在260℃下解吸3min。挥发物被解吸到Leco Pegasus GC-TOFMS中并且在DB5-MS柱(30m，0.25mm，0.25um)上随着1.0mL/min的氦载气流进行分离。初始柱温是40℃(持续3min)并且然后以15℃/min增加至270℃并且保持在270℃持续5min。以电子轰击模式(EI)进行质量检测。所有的注入是无分流的峰鉴别是基于样品中的EI质谱与NIST库的EI质谱的比较。数据被报告为与以ppb计的内标物相比的相对浓度。
实例5：SBSE(搅拌棒吸附萃取)
将样品(500mg)加10ml蒸馏水加在乙醇中的5uL 0.022ug/uL 2-十一烷酮内标物萃取1h，同时使用2cm的Gerstel PDMS Twister以1000rpm搅拌。然后添加一克的NaCl至样品并且继续萃取持续再一个小时。该技术称为连续SBSE。然后将Twister从样品中移除，用蒸馏水进行冲洗，用无绒布(lintless cloth)轻拍干并且在以无分流模式使用的GerstelTDU中进行热解吸。使用TDU，解吸的挥发物最初在-100℃下截留；然后将在Twister上捕获的挥发物在280℃下解吸3min。挥发物被解吸到安捷伦GC-MSD中并且在DB5-MS柱(30m，0.25mm，0.25um)上随着1.0mL/min的氦载气流进行分离。初始柱温是40℃(持续3min)并且然后以10℃/min增加至270℃并且保持在270℃持续5min。以电子轰击模式(EI)进行质量检测。所有的注入是无分流的峰鉴别是基于样品中的EI质谱与NIST库的EI质谱的比较。数据被报告为与以ppb计的内标物相比的相对浓度。
实例6：针对实例3的可接受样品的味道/气味数据
将在实例3中产生的样品通过感官小组测试并且如实例4和5中的通过SPME和SBSE进行分析。以十亿分率的单位在下表中报导结果，这些结果是相对于2-十一烷酮内标物进行确定的。在下表中，a用来代表α，d代表δ，g代表γ。化合物的CAS号在实例7中列出。
Figure BPA0000208625890000111
Figure BPA0000208625890000121
Figure BPA0000208625890000131
实例7：PCA分析
根据以上给出的方法生产原壳小球藻微藻粉的多重生产批次。此外，从nuts.com获得小球藻属粉末的商业样品；申请日时的产品信息。http://www.nuts.com/将该粉归为韩国(Korean)来源，以异养生产。使用如在实例4和5中通过SBSE和SPME一式两份地所测量的总共12个的样品。此外，使用一个志愿者小组完成感官测试。用R软件版本2.15.1(针对统计计算的R项目，www.r-project.org)使用prcomp函数进行按比例的主成分分析(使用相关矩阵)。发现三个主成分良好地表征了味道/气味化合物中的变化。定义了这三种主成分且作为PC1、PC2、和PC3的向量连同所使用的针对确定每个化合物的方法一起列于下表中。发现一个集群的样品在这种降维空间中，该降维空间与具有可接受的感官特征的样品相关。
Figure BPA0000208625890000132
Figure BPA0000208625890000141
Figure BPA0000208625890000151
Figure BPA0000208625890000161
Figure BPA0000208625890000171
Figure BPA0000208625890000181
图2显示了PCA分析聚类。每个标绘的点代表了在由主成分PC1、PC2、和PC3(对应地维度1、维度2和维度3)所定义的空间中所标绘的微藻粉末样品。实心环代表具有可接受味道的原壳小球藻粉样品。空心环代表具有差的味道的原壳小球藻粉样品。空心正方形代表从Nuts.com获得的普通小球藻。
实例8：针对可接受味道的界限的确定
基于实例7的PCA分析，使用FactomineR程序包v.1.2.1(哈森(Husson)，等人)以从统计学上定义与可接受的感官测试相关的样品集群。FactomineR分析的结果是在PC1、PC2和PC3的三个维度中的3个椭圆体；这些椭圆体表征了偏离正向人类感官分析相关联的集群的中心点的1、2、和3个标准偏差(实心环来自实例7的图表)。每个3-维椭圆体是通过3个正交2-维椭圆来定义，这些椭圆是由方程Ax2+Bxy+Cy2+Dx+Ey+F＝0使用在下表中针对A、B、C、D、E、和F值的数据来进行定义。因此，落入最小椭圆体内的样品将预期约99.7％的可能性具有由人类小组做出的正向感官分析，仅落入中间大小的椭圆体内的样品将预期约95％的可能性具有由人类小组做出的正向的感官分析，并且仅落入最大的椭圆体内的样品将预期约68％的可能性具有由人类小组做出的正向的感官分析。
置信区间方程：方程：Ax2+Bxy+Cy2+Dx+Ey+F＝0
Figure BPA0000208625890000182
Figure BPA0000208625890000191
实例9：使用PCA分析结果进行QC分析
实例8的椭圆体可以用来确定样品是否落入与正味道(positive flavor)相关联的集群内。例如，可以对根据以上给出的方法生产的微藻粉的一个批次进行质量控制实验。如在实例4和5中的通过SPME和SBSE分析该粉，并且然后技术人员确定数据是否落入实例8的一个或多个椭圆体内。
为此，技术人员可以使用以下步骤(尽管其他的也是可以应用的)。以针对105种化合物的相对浓度开始。从每个浓度中减去其中心因子并且除以其比例因子(在下表中给出)，这使得数据中心化和比例化。采用比例化和中心化数据的点积以及主成分(PC)载荷，这将产生针对每个PC的一个值。将每个值除以其相关联的标绘因子，这将允许数据点在三维的藻类-化学品空间中进行标绘。如果该点落入以置信椭圆体为边界的空间内，那么它是没有统计学差异的(p＜0.05)。例如，如果该点落入以95％置信椭圆体为边界的空间内，那么它是没有统计学差异的(p＜0.05)。
Figure BPA0000208625890000192
Figure BPA0000208625890000201
Figure BPA0000208625890000211
Figure BPA0000208625890000221
Figure BPA0000208625890000231
本发明实施例的进一步讨论
在以下段落中，为了方便起见本发明的某些实施例已经被编号。与每个实施例相关的数字是任意的并且不旨在表明不同实施例的相对重要性。
1.一种适合用于食品中的微藻粉，该粉包括绿藻门的微藻细胞，其中通过根据实例4的SPME和/或根据实例5的SBSE的分析来确定实例6的化合物相对于内标物的浓度，随后根据实例9的程序的分析产生一个味道描述词，该味道描述词落入实例8的椭圆体内，所述实例8的椭圆体定义了相对于正味道集群的3个标准偏差，该正味道集群对应于在实例7的图表中的封闭环(即图2)。
2.如实施例1所述的微藻粉，其中该味道描述词落入实例8的椭圆体内，该椭圆体定义了相对于正味道集群的2个标准偏差，该正味道集群对应于在实例7的图表中的封闭环(即图2)。
3.如前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中该味道描述词落入实例8的椭圆体内，该椭圆体定义了相对于正味道集群的1个标准偏差，该正味道集群对应于在实例7的图表中的封闭环(即图2)。
4.如前述实施例中任一项所述的微藻粉，该微藻粉可以通过以下方法获得：
在黑暗中，在作为一种固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH为6.8，对原壳小球藻细胞的一种培养液进行培养，同时将溶解氧水平保持在高于30％，使该培养液经历75℃的高温短时处理持续1分钟，通过以一种在水中6.4倍的稀释物进行离心收获这些细胞，添加一种抗氧化剂，通过碾磨来裂解这些细胞，并且使用喷雾干燥喷嘴输出到一条移动带上进行干燥。
5.如前述实施例中任一项所述的微藻粉，该微藻粉包括根据由SPME或SBSE确定的十一内酯(400-1800ppb)、3-甲基-丁醛(0-11,000ppb)、戊醛(160-10,700ppb)、2-甲基-丁醛(0-2500ppb)、2-戊酮(39-10,600ppb)、和/或3-戊烯-2-酮(0-1500ppb)。
6.如前述实施例中任一项所述的微藻粉，根据由品尝小组检测的，当该粉以10％(w/v)分散于去离子水中时，该微藻粉具有一种不可检测的鱼味或甘蓝味。
7.如前述实施例中任一项所述的微藻粉，该微藻粉具有以在2000μm按重量计15％-35％的筛上物为特征的流动性。
8.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中该粉在颜色上是白色的、淡黄色的或黄色的。
9.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，该微藻粉不包括明显的绿颜色。
10.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中该粉包括5％-20％脂质。
11.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中该粉包括30％-70％脂质。
12.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中该粉包括40％-60％脂质。
13.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中当该粉以1％(w/v)溶解于水中时，其pH是在5.5和8.5之间。
14.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中当该粉以1％(w/v)溶解于水中时，其pH是在6.0和8.0之间。
15.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中当该粉以1％(w/v)溶解于水中时，其pH是在6.5和7.5之间。
16.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，该微藻粉具有少于2ppm的叶绿素。
17.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，进一步包括添加的抗氧化剂。
18.根据前述实施例中任一项所述的微藻粉，其中该粉中的大部分这些细胞被裂解，并且可任选地在50％和90％之间的这些细胞被裂解。
19.一种可以通过以下方法获得的微藻粉：
在黑暗中，在作为一种固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH为6.8，对原壳小球藻细胞的一种培养液进行培养，同时将溶解氧水平保持在高于30％，使该培养液经历75℃的高温短时处理持续1分钟，通过以一种在水中6.4倍的稀释物进行离心收获这些细胞，通过碾磨来裂解这些细胞，添加一种抗氧化剂，并且使用喷雾干燥喷嘴输出到一条移动带上进行干燥。
20.一种适合用于食品中的微藻粉，该粉包括绿藻门的微藻细胞并且表征为一个落入具有PC1、PC2和PC3维度的味道描述空间中的椭圆体内的味道描述词，该味道描述词是通过使用SPME和/或SBSE分析确定以下化合物的浓度来产生的：
二甲基硫醚
2.3.丁二酮
丁醛
丙醛..2.甲基.
呋喃..3.甲基.
乙酸乙酯
2.丁烯醛...E..
丁醛..3.甲基.
1.丁醇
丁醛..2.甲基.
噻吩
1.戊烯.3.醇
1.戊烯.3.酮
2.戊酮
2.3.戊二酮
戊醛
呋喃..2.乙基.
噻唑
3.戊烯.2.酮
二硫化物..二甲基
2.戊烯醛...E..
吡咯
噁唑..4.5.二甲基.
2.戊烯.1.醇...Z..
噻吩..3.甲基.
己醛
4.甲基噻唑
吡嗪..甲基.
糠醛
噁唑..三甲基.
丁酸..3.甲基.
丁酸..2.甲基.
2.己烯醛
1.己醇
4.庚酮
吡啶..2.6.二甲基.
噻唑..2.4.二甲基.
3.庚酮
2.庚酮
3.庚醇
庚醛
甲硫基丙醛
吡嗪..2.5.二甲基.
吡嗪..2.6.二甲基.
比嗪..乙基.
吡嗪..2.3.二甲基.
吡嗪..乙烯基.
噻唑..4.5.二甲基.
2.庚酮..6.甲基.
己醛..2.乙基.
2.庚烯醛...Z..
5.壬烯.2.酮
2.呋喃甲醛..5.甲基..
苯甲醛
己酸
1.辛烯.3.醇
二甲基.三硫化物
2.5.辛二酮
5.庚烯.2.酮..6.甲基.
呋喃..2.戊基.
2.4.庚二烯醛...E.E..
吡嗪..2.乙基.6.甲基.
辛醛
吡嗪..三甲基.
吡嗪..2.乙基.3.甲基.
2.4.庚二烯醛...E.E...1
吡嗪..2.乙烯基.6.甲基.
1.己醇..2.乙基.
3.辛烯.2.酮...E..
2H.吡喃.2.酮..5.6.二氢.
苯乙醛
3.5.辛二烯.2.酮...E.E..
乙酰苯
1.癸烯.3.酮
吡嗪..3.乙基.2.5.二甲基.
吡嗪..四甲基.
5.甲基.2.噻吩甲醛
g.庚内酯
芳樟醇
壬醛
百里酚
苯基乙基醇
2.3.5.三甲基.6.乙基吡嗪.
乙酸苯基甲基酯
藏花醛
2.癸烯醛...E..
g.辛内酯
o.氨基.乙酰苯
2.4.癸二烯醛
g.壬内酯
紫罗酮
香叶基.丙酮
紫罗烯
g.壬内酯.1
2.4.壬二烯醛...E.E..
2.4.癸二烯醛.1
g.庚内酯.1
紫罗酮.1
香叶基.丙酮.1
a.紫罗酮
桃.内酯.g.十一内酯
d.癸内酯
顺式.香叶基丙酮
d.十二内酯..δ.壬基.δ.十四内酯.
d.十一内酯
所述浓度是相对于一种内标物确定的，
该椭圆体由方程Ax2+Bxy+Cy2+Dx+Ey+F＝0定义并且根据下表参数化：
Figure BPA0000208625890000291
Figure BPA0000208625890000301
其中，通过以下程序确定落入该椭圆体内：
针对每种化合物，确定相关浓度；
针对每种化合物，减去根据下表的中心因子；
针对每种化合物，除以根据下表的这些比例因子；
采用这些比例化和中心化数据的点积以产生用于PC1、PC2和PC3的值；并且
确定由PC1、PC2和PC3所定义的该味道描述词是否落入该椭圆体内：
Figure BPA0000208625890000311
Figure BPA0000208625890000321
Figure BPA0000208625890000331
Figure BPA0000208625890000341
21.如实施例20所述的微藻粉，其中该味道描述词落入由下表参数化的一个较窄的椭圆内：
Figure BPA0000208625890000351
22.如实施例21所述的微藻粉，其中该味道描述词落入由下表参数化的一个还要更窄的椭圆内：
Figure BPA0000208625890000352
23.如实施例20-22中任一项所述的微藻粉，该微藻粉可以通过以下方法获得：
在黑暗中，在作为一种固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH为6.8，对原壳小球藻细胞的一种培养液进行培养，同时将溶解氧水平保持在高于30％，使该培养液经历75℃的高温短时处理持续1分钟，通过以一种在水中6.4倍的稀释物进行离心收获这些细胞，添加一种抗氧化剂，通过碾磨来裂解这些细胞，并且使用喷雾干燥喷嘴输出到一条移动带上进行干燥。
24.如实施例20-23中任一项所述的微藻粉，该微藻粉包括根据由SPME或SBSE确定的十一内酯(400-1800ppb)、3-甲基-丁醛(0-11,000ppb)、戊醛(160-10,700ppb)、2-甲基-丁醛(0-2500ppb)、2-戊酮(39-10,600ppb)、和/或3-戊烯-2-酮(0-1500ppb)。
25.如实施例20-24中任一项所述的微藻粉，根据由品尝小组检测的，当该粉以10％(w/v)分散于去离子水中时，该微藻粉具有一种不可检测的鱼味或甘蓝味。
26.如实施例20-25中任一项所述的微藻粉，该微藻粉具有以在2000μm按重量计15％-35％的筛上物为特征的流动性。
27.如实施例20-26中任一项所述的微藻粉，其中该粉在颜色上是白色的、淡黄色的或黄色的。
28.如实施例20-27中任一项所述的微藻粉，其中该粉包括5％-20％脂质。
29.如实施例20-27中任一项所述的微藻粉，其中该粉包括30％-70％脂质。
30.如实施例20-27中任一项所述的微藻粉，其中该粉包括40％-60％脂质。
31.如实施例20-30中任一项所述的微藻粉，其中当该粉以1％(w/v)溶解于水中时，其pH是在5.5和8.5之间。
32.如实施例20-30中任一项所述的微藻粉，其中当该粉以1％(w/v)溶解于水中时，其pH是在6.0和8.0之间。
33.如实施例20-30中任一项所述的微藻粉，其中当该粉以1％(w/v)溶解于水中时，其pH是在6.5和7.5之间。
34.如实施例20-23中任一项所述的微藻粉，该微藻粉具有少于2ppm的叶绿素。
35.如实施例20-34中任一项所述的微藻粉，进一步包括一种添加的抗氧化剂。
36.如实施例20-35中任一项所述的微藻粉，其中该粉中的大部分这些细胞被裂解，并且可任选地在50％和90％之间的这些细胞被裂解。
本发明所描述的实施例仅旨在示例，并且许多变化以及修改对于本领域技术人员来说应该是清楚的。所有这类变化和修改旨在处于如所附权利要求书中限定的本发明的范围之内。

Claims (21)

1.适用于食品中的微藻粉，该微藻粉包含绿藻门的微藻细胞，所述微藻细胞具有少于200ppm的叶绿素，
其中大于50％的细胞是裂解的，并且该微藻粉包含一种或多种定义微藻粉的味道描述词的化合物，所述一种或多种化合物选自：二甲基硫醚、2,3-丁二酮、丁醛、2-甲基丙醛、3-甲基呋喃、乙酸乙酯、2(E)-丁-2-烯醛、3-甲基-丁醛、1-丁醇、2-甲基丁醛、噻吩、1-戊烯-3-醇、1-戊烯-3-酮、2-戊酮、2,3-戊二酮、戊醛、2-乙基呋喃、噻唑、3-戊烯-2-酮、二甲基二硫化物、(E)-2-戊烯醛、吡咯、4,5-二甲基噁唑、(Z)-2-戊烯-1-醇、3-甲基噻吩、己醛、4-甲基噻唑、甲基吡嗪、糠醛、三甲基噁唑、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸、2-己烯醛、1-己醇、4-庚酮、2,6-二甲基吡啶、2,4-二甲基噻唑、3-庚酮、2-庚酮、3-庚醇、庚醛、甲硫基丙醛、2,5-二甲基吡嗪、2,6-二甲基吡嗪、乙基吡嗪、2,3-二甲基吡嗪、乙烯基吡嗪、4,5-二甲基噻唑、6-甲基-2-庚酮、2-乙基己醛、(Z)-2-庚烯醛、5-壬烯-2-酮、5-甲基糠醛、苯甲醛、己酸、1-辛烯-3-醇、二甲基三硫化物、2,5-辛二酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮、2-戊基呋喃、(2E,4E)-庚-2,4-二烯醛、2-乙基-6-甲基吡嗪、辛醛、三甲基吡嗪、2-乙基-3-甲基吡嗪、2-乙基己醇、(E)-3-辛烯-2-酮、5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮、苯乙醛、(3E,5E)-辛-3,5-二烯-2-酮、乙酰苯、1-癸烯-3-酮、2,5-二甲基-3-乙基吡嗪、四甲基吡嗪、5-甲基-2-噻吩甲醛、γ-庚内酯、芳樟醇、壬醛、百里酚、苯乙醇、2,3,5-三甲基-6-乙基吡嗪、乙酸苄酯、藏花醛、(E)-2-癸烯醛、γ-辛内酯、o-氨基乙酰苯、2,4-癸二烯醛、γ-壬内酯、α-紫罗酮、香叶基丙酮、α-紫罗烯、(2E,4E)-2,4-壬二烯醛、2,4-癸二烯醛、γ-十一内酯、δ-癸内酯、顺式-香叶基丙酮、δ-十二内酯和δ-十一内酯；
其中所述味道描述词落入具有由三个主成分PC1、PC2和PC3定义的维度的味道描述词空间中的三维椭圆体内，所述椭圆体由方程：Ax 2+Bxy+Cy 2+Dx+Ey+F＝0来定义，
其中A、B、C、D、E和F在下表中进行了定义并且表示偏离椭圆体中心点的三个标准偏差：
Figure FDA0002250875180000021
2.权利要求1的微藻粉，其中A、B、C、D、E和F定义如下并且表示偏离椭圆体中心点的两个标准偏差：
Figure FDA0002250875180000022
3.权利要求2的微藻粉，A、B、C、D、E和F定义如下并且表示偏离椭圆体中心点的一个标准偏差：
Figure FDA0002250875180000023
4.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其通过以下方法获得：
在黑暗中，在作为一种固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH为6.8，对原壳小球藻细胞进行培养，同时将溶解氧水平保持在高于30％，
使该培养液经历75℃的高温短时处理持续1分钟，
通过对水中至少2倍的稀释物进行离心收获这些细胞，
添加抗氧化剂，
通过碾磨来裂解这些细胞，并且
干燥。
5.权利要求1～3之任一项的微藻粉，包括根据由SPME或SBSE确定的
400～1800ppb的十一内酯、
0～11,000ppb的3-甲基-丁醛、
160～10,700ppb的戊醛、
0～2500ppb的2-甲基-丁醛、
39～10,600ppb的2-戊酮、和/或
0～1500ppb的3-戊烯-2-酮。
6.权利要求1～3之任一项的微藻粉，根据由品尝小组检测的，当该粉以10％w/v分散于去离子水中时，该微藻粉具有不可检测的鱼味或甘蓝味。
7.权利要求1～3之任一项的微藻粉，该微藻粉具有以在2000μm按重量计15～35％的筛上物为特征的流动性。
8.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中该粉在颜色上是白色的或黄色的。
9.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中该粉在颜色上是淡黄色的。
10.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中该粉包括5～20％脂质。
11.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中该粉包括30～70％脂质。
12.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中该粉包括40～60％脂质。
13.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中当该粉以1％w/v溶解于水中时，其pH是在5.5和8.5之间。
14.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中当该粉以1％w/v溶解于水中时，其pH是在6.0和8.0之间。
15.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中当该粉以1％w/v溶解于水中时，其pH是在6.5和7.5之间。
16.权利要求1～3之任一项的微藻粉，该微藻粉具有少于2ppm的叶绿素。
17.权利要求1～3之任一项的微藻粉，进一步包括添加的抗氧化剂。
18.权利要求1～3之任一项的微藻粉，其中在60％和90％之间的这些细胞被裂解。
19.通过以下方法获得的微藻粉：
在黑暗中，在作为一种固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH为6.8，对原壳小球藻细胞进行培养，同时将溶解氧水平保持在高于30％，
使该培养液经历75℃的高温短时处理持续1分钟，
通过对水中至少2倍的稀释物进行离心收获这些细胞，
通过碾磨来裂解这些细胞，并且
使用箱式干燥器或高型喷雾干燥器进行干燥，
微藻细胞具有少于200ppm的叶绿素，
其中大于50％的细胞是裂解的，并且该微藻粉包括一种或多种定义微藻粉的味道描述词的化合物，所述一种或多种化合物选自：二甲基硫化醚、2,3-丁二酮、丁醛、2-甲基丙醛、3-甲基呋喃、乙酸乙酯、2(E)-丁-2-烯醛、3-甲基-丁醛、1-丁醇、2-甲基丁醛、噻吩、1-戊烯-3-醇、1-戊烯-3-酮、2-戊酮、2,3-戊二酮、戊醛、2-乙基呋喃、噻唑、3-戊烯-2-酮、二甲基二硫化物、(E)-2-戊烯醛、吡咯、4,5-二甲基噁唑、(Z)-2-戊烯-1-醇、3-甲基噻吩、己醛、4-甲基噻唑、甲基吡嗪、糠醛、三甲基噁唑、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸、2-己烯醛、1-己醇、4-庚酮、2,6-二甲基吡啶、2,4-二甲基噻唑、3-庚酮、2-庚酮、3-庚醇、庚醛、甲硫基丙醛、2,5-二甲基吡嗪、2,6-二甲基吡嗪、乙基吡嗪、2,3-二甲基吡嗪、乙烯基吡嗪、4,5-二甲基噻唑、6-甲基-2-庚酮、2-乙基己醛、(Z)-2-庚烯醛、5-壬烯-2-酮、5-甲基糠醛、苯甲醛、己酸、1-辛烯-3-醇、二甲基三硫化物、2,5-辛二酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮、2-戊基呋喃、(2E,4E)-庚-2,4-二烯醛、2-乙基-6-甲基吡嗪、辛醛、三甲基吡嗪、2-乙基-3-甲基吡嗪、2-乙基己醇、(E)-3-辛烯-2-酮、5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮、苯乙醛、(3E,5E)-辛-3,5-二烯-2-酮、乙酰苯、1-癸烯-3-酮、2,5-二甲基-3-乙基吡嗪、四甲基吡嗪、5-甲基-2-噻吩甲醛、γ-庚内酯、芳樟醇、壬醛、百里酚、苯乙醇、2,3,5-三甲基-6-乙基吡嗪、乙酸苄酯、藏花醛、(E)-2-癸烯醛、γ-辛内酯、o-氨基乙酰苯、2,4-癸二烯醛、γ-壬内酯、α-紫罗酮、香叶基丙酮、α-紫罗烯、(2E,4E)-2,4-壬二烯醛、2,4-癸二烯醛、γ-十一内酯、δ-癸内酯、顺式-香叶基丙酮、δ-十二内酯和δ-十一内酯；
其中所述味道描述词落入具有由三个主成分PC1、PC2和PC3定义的维度的味道描述词空间中的三维椭圆体内，所述椭圆体由方程：Ax 2+Bxy+Cy 2+Dx+Ey+F＝0来定义，
其中A、B、C、D、E和F在下表中进行了定义并且表示偏离椭圆体中心点的三个标准偏差：
20.权利要求19的微藻粉，其中以下定义了A、B、C、D、E和F并且表示偏离椭圆体中心点的两个标准偏差：
Figure FDA0002250875180000052
21.权利要求19的微藻粉，其中A、B、C、D、E和F定义如下并且表示偏离椭圆体中心点的一个标准偏差：
Figure FDA0002250875180000061
CN201480006446.3A 2013-01-28 2014-01-28 改善的微藻粉 Active CN105007755B (zh)

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